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Resumen Biologia pdf

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Este resumen esta hecho con informacion toda sacada del Cooper 6ta edicion y algunas 
cosas que agragamos de seminarios de biologia . 
 
Seminario de Integracion Nº1 
“Replicación, mantenimiento, y reorganización del ADN genómico” 
Cada vez una celula se divide es necesario que duplique su genoma, por lo que se requiere 
de una maquinaria compleja para copiar las grandes moléculas de ADN, tanto de 
procariotas como eucariotas. Las células han desarrollado mecanismos para corregir los 
fallos que pueden darse durante la REPLICACION, y también para REPARAR daños que 
puedan surgir por agentes ambientales. Cabe destacar que para que las especies 
evolucionen son necesarias las mutaciones y la REORGANIZACION para mantener la 
variabilidad genética entre los individuos. 
1) REPLICACION DEL ADN 
La replicación del ADN es un proceso semiconservativo, en el que cada hebra parental 
sirve como molde para la síntesis de una nueva hebra hija. La enzima principal en este 
proceso es la ADN POLIMERASA, la cual cataliza la unión de los desoxirribonucleosidos 
5`-trifosfato (dntp) para formar la cadena de ADN en crecimiento. Igualmente para el 
proceso de replicación se encuentran involucradas otras proteínas y mecanismos de lectura, 
los cuales se van a mencionar a continuación. 
1A) ADN POLIMERASAS 
Encargada de catalizar la unión de los desoxirribonucleosidos 5`-trifosfato (dntp) para 
formar la cadena de ADN en crecimiento. Las células eucariontes posee tres ADN 
polimerasas ( ), que funcionan en la replicación del ADN nuclear. L ADN 
polimerasa Y se localiza en las mitocondrias y es la responsable de la replicación del ADN 
mitocondrial. Todas las ADN polimerasas comparten las siguientes propiedades: 
 -Sintetizan ADN solo en la dirección 5’ a 3´, 
añadiendo un DNTP al grupo 3´ hidroxilo de una cadena creciente. 
 -Pueden añadir un nuevo desoxirribonucleotido 
solo a una hebra cebadora ya existente que se encuentre unida a una hebra molde. 
Las ADN POLIMERASAS difieren de las ARN POLIMERASAS, en que las segundas 
pueden iniciar la síntesis de una nueva hebra de ARN en ausencia de un cebador. 
1B) HORQUILLA DE REPLICACION 
Están contenidas dentro de moléculas d ADN, y son regiones de la síntesis activa de ADN. 
En cada horquilla las hebras parentales se separan y son sintetizadas dos nuevas hebras 
hijas. Las dos hebras de la doble hélice de ADN se disponen de manera ANTIPARALELA, 
por lo que una de las hebras debe sintetizarse en sentido 5` a 3`, y va a ser sintetizada por la 
ADN POLIMERASA. En cambio la otra hebra, no podrá ser sintetizada por esta enzima, ya 
que la ADN polimerasa cataliza la polimerización solo en sentido 5` a 3`; por lo tanto, esta 
segunda hebra va a ser sintetizada por fragmentos de ARN y por fragmentos de 
ADN( FRAGMENTOS DE OKASAKI), estos son pequeñas piezas que sintetizan en 
sentido opuesto al movimiento de la horquilla de replicación, y se van uniendo por acción 
de la ADN LIGASA, formando una nueva hebra intacta de ADN. 
Dicho esto podemos dividir a las hebras en: 
 -Una HEBRA CONDUCTORA 
 -Una HEBRA TARDIA 
La ADN polimerasa de la hebra conductora necesita un cebador. En el caso de la hebra 
tardía, los fragmentos de okasaki utilizan como cebadores a fragmentos cortos de ARN. 
Para formar una hebra tardía continua es necesario eliminar a los fragmentos cortos de 
ARN (cebadores) y ser sustituidos con ADN. En los procariotas estos ARN son eliminados 
mediante la polimerasa I, mientras que en las células eucariotas hay tres ADN polimerasas 
implicadas, estas son ( ) La polimerasa A(alfa) se encuentra formando un complejo 
con las primasas y funciona con ellas para sintetizar fragmentos cortos de ARN-ADN 
durante la síntesis de la hebra tardía y en los orígenes de replicación. Las polimerasas & y E 
actúan como las principales polimerasas en la replicación que se ocupan de la síntesis de las 
hebras conductora y tardía. Estas últimas están asociadas a proteínas de enganche 
deslizante que sitúan a la polimerasa en el cebador y mantienen su asociación estable con el 
molde. 
Hay otras proteínas que desenrollan la hebra molde de ADN y estabilizan regiones de una 
sola hebra. Las HELICASAS, son enzimas que catalizan el desenrollamiento del ADN 
parental, emparejadas con la hidrólisis de ATP. Hay también proteínas que se unen al ADN 
monocatenario y estabilizan la hebra molde de ADN desenrolladla, manteniéndola en un 
estado de hebra única extendida para que sea copiada por la polimerasa. A medida que las 
hebras parentales se desenrollan, el ADN a la cabeza de la horquilla de replicación está 
siendo forzado a girar. Esto es resulto por las TOPOISOMERASAS, enzimas encargadas 
de catalizar la rotura reversible y la unión de las hebras de ADN. Hay dos tipos: 
 -Topoisomerasa I: Rompe solo una hebra de ADN. 
 -Topoisomerasa II: Induce la rotura simultánea de las dos hebras. Esta es 
necesaria para desenrollar el ADN, para separar las nuevas moléculas de ADN circular, e 
interviene en la condensación mitótica de los cromosomas. 
Todas las enzimas mencionadas, actúan de manera coordinada para sintetizar las hebras 
conductora y tardía de manera simultánea. 
C) FIDELIDAD DE REPLICACION Aquí es necesario nombrar a la ADN 
POLIMERASA, esta enzima aumenta la fidelidad de a replicación por varios motivos: 
 -Ayuda a seleccionar la base correcta para la inserción en el nuevo ADN sintetizado, 
discrimina en contra de la incorporación de una base desapareada. 
 - Al poseer actividad exonucleasa, puede hidrolizar el ADN en dirección 3` a 5`, es 
decir en sentido contrario a la síntesis de ADN, por lo que participa en la doble lectura del 
ADN sintetizado, aumentando la exactitud de la replicación. 
 -Si una base incorrecta es incorporada, la exonucleasa la va a eliminar antes de 
continuar con la síntesis. 
D) ORIGENES E INICIACION DE LA REPLICACION 
La replicación en procariotas como en eucariotas comienza en una única secuencia llamada 
ORIGEN DE REPLICACION, que sirve como un sitio especifico de unión para las 
proteínas que inician el proceso de replicación. 
En procariotas, en E.Coli, una proteína iniciadora se una a secuencias especifica de ADN, 
esta proteína comienza a desenrollar el origen del ADN y junto con la HELICASA 
continúan desenrollando y presentando al ADN molde. 
En eucariotas, se necesitan múltiples orígenes de replicación para replicar los genomas que 
en estas células son mucho más largos. 
E) TELOMEROS Y TELOMERASA: EL MANTENIMIENTO DE LOS 
EXTREMOS DE LOS CROMOSOMAS 
 
Debido a que la ADN POLIMERASA, es incapaz de 
copiar los extremos 5` de las moléculas lineales de 
ADN, estas secuencias (TELOMEROS) deben 
entonces ser replicados por la acción de la 
TELOMERASA, la cual es capaz de mantener a los 
telómeros catalizando de su síntesis en ausencia de una hebra molde de ADN. 
Algunas células tienen la capacidad de revertir el acortamiento de los telómeros por la 
expresión de la telomerasa, una enzima que extiende los telómeros de los cromosomas. La 
telomerasa es una ADN polimerasa dependiente de ARN, lo que significa que es una 
enzima que puede producir ADN usando un molde de ARN. 
 Esta telomerasa es denominada como “transcriptasa inversa” 
La transcriptasa inversa, transcriptasa reversa o retrotranscriptasa es una enzima de tipo 
ADN-polimerasa, que tiene como función sintetizar ADN de doble cadena utilizando como 
molde ARN monocatenario, es decir, catalizar la retrotranscripción o transcripción inversa. 
Los telómeros se van acortando a medida que las células envejecen, este acortamiento 
desencadena la muerte celular. Hay muchos síndromes de envejecimiento prematuro que se 
caracterizan por la perdida telomérica y por mutaciones de la telomerasa. 
La ARN telomerasa extiende a la cadena mas larga y no solo eso ,al extenderla la 
telomerasa la usa a ella como cebador y extiende la que estabacorta.Y la cadena larga 
tambien sigue siendo sitetizada usando como molde a la ARN telomerasa ademas ella no 
presenta problema porque esta en direccion `5 a 
`3. 
 
Curiosamente, muchas células cancerosas tienen telómeros acortados y telomerasa activa. 
Si se pudiera inhibir la telomerasa con fármacos como parte del tratamiento de un cáncer, 
su división excesiva (y por lo tanto, el crecimiento del tumor canceroso) potencialmente 
podrían detenerse. 
2) REPARACION DEL ADN 
Los daños en el ADN pueden bloquear la transcripción o la replicación, pudiendo dar lugar 
a una gran cantidad de mutaciones. Es por eso que existen dos tipos de reparación, que 
actúan antes que el ADN sea replicado, estos son: 
 Inversión directa del ADN dañado: Es el camino mas eficiente a la hora de tratar 
con tipos específicos de daños al ADN, solo determinados tipos de ADN se 
logran reparar de esta forma. Por ejemplo los dímeros de pirimidina que resultan 
de la exposición a la luz ultravioleta y los residuos de guanina alquilada que se 
han modificado por la adición de grupos metilos y etilos en la posición O6 del 
anillo de purina. Otra reparación es la del daño producido por la reacción entre 
los agentes alquilantes y el ADN. 
 Escisión de bases dañadas seguida por su reposición con ADN recién sintetizado: 
Abarca la reparación de gran variedad de alteraciones químicas del ADN. El 
ADN dañado es reconocido y eliminado, el espacio vacio es rellenado con la 
síntesis de una nueva hebra de ADN, utilizando la hebra complementaria no 
dañada como molde. De este, hay tres tipos de reparación: 
-A) Reparación por escisión de base: En esta, la base dañada es 
reconocida y eliminada. Un ejemplo, puede ser el del Uracilo, el cual 
su escisión es catalizada por la ADN GLICOSILASA, enzima que 
rompe el enlace de unión entre el uracilo y el esqueleto de 
desoxirribosa del ADN; el resultado es la formación de un sitio 
apurínico o apirimidínico (un azúcar sin base) en el ADN. La 
desoxirribosa es eliminada y el espacio es rellenado por una por la 
ADN polimerasa y ligasa. 
-B) Reparación por escisión de nucleótidos: Reconoce a una gran 
variedad de bases dañadas, las cuales son eliminadas como parte de 
un oligonucleótido que contiene la lesión. En humanos ocurre 
generalmente en casos de enfermedades hereditarias, en las cuales 
hay dificultades para reparar al ADN. En los eucariotas actúan las 
proteínas XPF1/ERCC1 y XPG, las cuales son endonucleasas que 
cortan al ADN en los extremos 5` y 3` de la región dañada. Se 
escinde el oligonucleótido que consiste en aproximadamente 30 bases. 
El hueco resultante es luego, rellenado por la ADN polimerasa & (en 
asociación con RFC y PCNA) y sellado mediante una ligasa. 
-B1) Reparación acoplada a la transcripción: Esta es una alternativa a 
la reparación por escisión de nucleótidos, repara genes que son 
transcriptos activamente. Implica el reconocimiento de la ARN 
polimerasa detenida en una lesión de la hebra de ADN que se esta 
transcribiendo. En mamíferos las proteínas que reconocen la lesión 
son la CSA y CSB, luego del reconocimiento y de la detención de la 
ARN polimerasa, las CSA y CSB recluta XPA, RPA y TFIIH hacia 
la lesión del ADN y se produce una reparación por escisión de 
nucleótidos como se nombro anteriormente. 
-C) Reparación por desapareamiento/no complementaria: Este 
sistema barre al nuevo ADN replicado, si se encuentra una no 
complementariedad, las enzimas son capaces de reconocer, 
identificar y escindir la base no complementaria específicamente de 
la hebra de ADN recién replicada, permitiendo que se corrija el error 
y la secuencia original sea reemplazada. En mamíferos las enzimas 
que actúan uniéndose a la base no complementaria son MutS y MulT. 
 
D) SINTESIS DE LA TRANSLESION 
Los sistemas de reversión directa y la reparación por escisión, actúan para corregir daños 
del ADN antes de la replicación de dicha zona dañada ,para que la síntesis de ADN 
replicativo pueda proceder empleando una hebra de ADN no dañada como molde.Si sucede 
que estos mecanismos fallan la celula posee mecanismos alternativos para tratar el adn 
dañado en la horquilla de replicaion. 
Aquí actúan ADN polimerasas especializadas. Estas sustituyen a la ADN polimerasa 
normal que ha quedado detenida frente a una lesión del ADN. Son capaces de hacer 
proseguir la síntesis en el lugar de la lesión, y luego ser sustituidas nuevamente por una 
ADN polimerasa replicativa normal. Las ADN polimerasas especializadas tienen una baja 
fidelidad cuando copian ADN no dañado y carecen de la actividad correctora 3`--5` . 
E) REPARACION DE ROTURAS DE DOBLE HEBRA 
Esta variante de daños al ADN es una de las más peligrosas, ya que roturas en ambas 
hebras interrumpe la continuidad de dicha molécula. Son roturas que se producen de 
manera natural. Y no pueden repararse por los medios mencionado anteriormente donde se 
eliminaba el fragmento dañado y se volvía a producir la síntesis. En esta, se da un 
mecanismo especial denominado REPARACION RECOMBINATORIA, es muy simple 
y se vuelven a unir los extremos rotos de una sola molécula de ADN sin embargo esto 
puede dar una delecion de bases en la zona alterada es decir perdida de nucleótidos. Por 
otro lado, hay otro mecanismo especial que se denomina RECOMBINACION 
HOMOLOGA, en la cual se rompen y se vuelven a unir dos moléculas de ADN parentales, 
esto da la posibilidad de una reorganización de la información genética de los dos 
cromosomas parentales. Sucede que se rompen las dos hebras por la acción de nucleasas 
que digieren el ADN en sentido 5` a 3`, produciendo extremos 3` monocatenarios colgantes. 
Estas hebras únicas invaden la otra molécula parental mediante el emparejamiento de bases 
homologas. Por ultimo los huecos son rellenados por la síntesis reparadora, y las hebras se 
ligan para producir una molécula recombinante. En procariotas la proteína que actúa es la 
RecA y en eucariotas la RAD51 .Este tipo de reparación como bien dice su nombre permite 
mayor variabilidad genética. 
 
 
3) REORGANIZACION DEL ADN 
La recombinación homologa mencionada anteriormente da lugar a la reorganización de 
genes entre pares de cromosomas sin alterar la disposición de los genes en el genoma. 
 -Recombinación especifica de sitio: Se da entre secuencias específicas de ADN que 
contienen al menos un pequeño centro homologo, da lugar a reordenamientos programados 
del mismo, lo que puede jugar un papel importante en el desarrollo y regulación de la 
expresión genética. En los vertebrados, el desarrollo del sistema inmune reconoce las 
sustancias extrañas (antígenos) y proporciona protección frente a agentes infecciosos. Un 
ejemplo, son los linfocitos T y B. 
 Los linfocitos B secretan anticuerpos 
(INMUNOGLOBULINAS) que reaccionan con antígenos solubles. Estas 
inmunoglobulinas consisten en pares de cadenas de nucleótidos pesadas y ligeras idénticas; 
estas cadenas están compuestas de regiones variables. Las regiones variables son 
responsables de la unión con e antígeno, y es la diversidad de las secuencias de los 
aminoácidos de las regiones variables las que permiten a los anticuerpos de un individuo 
reconocer a antígenos únicos. Cada linfocito B produce un solo tipo de anticuerpo. 
 Los linfocitos T expresan proteínas de la división 
celular, que se denominan RECEPTORES DE CELULAS T, las cuales reaccionan con 
antígenos expresados en la superficie de otras células. Estos también están compuestos de 
dos cadenas, y cada una presenta regiones variables y constantes. 
 La característica fundamentas de las inmunoglobulinas 
y de los receptores de las células T es su enorme diversidad, que permite que diferentes 
anticuerpos o moléculas receptoras de células T reconozcan una amplia gama de antígenos 
extraños. La recombinación especifica de sitio durante el desarrollo de los linfocitos 
conduce a la reorganización delgen en la que una sola región V se recombina con una sola 
región J para generar un gen de cadena ligera funcional. Esta recombinación se encuentra 
mediada por un complejo de proteínas RAG1 y RAG2; las cuales reconocen las secuencias 
de señal de recombinación adyacentes a las secuencias codificadoras de cada segmento, e 
inician las reorganizaciones de ADN introduciendo una rotura de doble hebra entre las 
secuencias RS y las secuencias codificantes. A continuación, se unen los extremos 
codificantes de los segmentos génicos para dar lugar a un gen reorganizado de 
inmunoglobulina o receptor de células T. 
 Incluso se genera más diversidad gracias a dos 
procesos: RECOMBINACION DE CAMBIO DE CLASE, el cual resulta en la asociación 
de regiones reordenadas con diferentes regiones constantes de cadenas pesadas, generando 
la producción de anticuerpos con distintos papeles funcionales en la respuesta inmune. 
Ejemplo de esto son los distintos tipos de Inmunoglobulinas que encontramos en 
mamíferos: IgM, IgG, IgE, IgA. El otro proceso es HIPERMUTACION SOMATICA, el 
cual incrementa la diversidad de las inmunoglobulinas produciendo múltiples mutaciones 
dentro de las regiones variables reordenadas tanto de las cadenas ligeras como de las 
cadenas pesadas. 
A) AMPLIFICACION GENICA 
Es un tipo diferente de alteración en la estructura del genoma. Incrementa el número de 
copias de un gen dentro una célula. Es el resultado de la repetición de la replicación del 
ADN produciendo múltiples copias de una región en particular.La amplificación, es un 
proceso relativamente infrecuente que ocurre en tipos de células altamente especializadas, y 
ocurre también como un proceso anormal en las celular cancerígenas. Esta puede traer 
consecuencias beneficiosas o desfavorables para la célula o el organismo en el que tenga 
lugar.LEER COPPER pagina 127 a 129. 
Importante saber que que en la PCR aumentar la temperatura y disminuirla replaza a la 
accion de la ligasa y la ADN pol es remplazada por la ADN Taq que no se desnaturaliza 
como las demas enzimas ante el aumento de temperatura.Tambien el gen de interes se 
obtiene a partir del 3 ciclo ver video de youtube si no me acuerdo como es la PCR.Para leer 
la electrtoforesis voy a tener el control postivo y negativo averiguar para q sirven. 
 
Seminario de Integración Nº2: 
Ciclo celular, control de la proliferación celular y regulación de la muerte celular 
programada. 
 Poblaciones celulares, proliferación celular, mantenimiento de los tejidos. 
Formas de estudio del ciclo celular: citometría de flujo. Índice mitótico 
La capacidad de autorreproducirse probablemente sea la característica fundamental 
de las células. Todas las células se reproducen mediante su división en dos, cada 
célula prenatal dando lugar a dos células hijas al final de cada ciclo de división 
celular. Estas células hijas a su vez pueden crecer y dividirse, dando lugar a una 
población celular. La división de todas las células ha de ser finalmente regulada y 
coordinada con el crecimiento celular y con la replicación del ADN, para asegurar 
la formación de una progenie de células que contengan sus genomas completos. La 
progresión de la maquinaria del ciclo celular es regulada por los factores de 
crecimiento que controlan la proliferación celular. Las alteraciones en la regulación 
son una causa frecuente de la proliferación anormal de las células cancerosas. 
El ciclo de la división de la mayoría de las células consiste en 4 procesos 
coordinados: crecimiento celular, replicación del ADN, distribución de los 
cromosomas duplicados de las células hijas y división celular. La progresión del 
ciclo celular está controlada mediante un sistema regulador conservado, que no solo 
coordina los diferentes procesos del ciclo celular sino que también acopla el ciclo 
celular con señales extracelulares que controlan la proliferación celular. 
Fases del ciclo celular: visto al microscopio, el ciclo celular se divide en 2 etapas: 
mitosis e interfase. La mitosis corresponde a la separación de los cromosomas hijos 
y termina, generalmente, en la división celular (citocinesis). Durante la interfase, los 
cromosomas se descondensan y se distribuyen por el núcleo, por lo que el núcleo 
representa un aspecto uniforme. El ADN solo se sintetiza durante la interfase, por 
ende esta síntesis divide el ciclo de las células eucariotas en 4 fases diferenciadas: 
M, G1, S y G2. 
El análisis del ciclo celular requiere que las células se identifiquen en las diferentes 
etapas indicadas anteriormente. Aunque las células mitóticas se pueden distinguir al 
microscopio, las células en las otras fases del ciclo celular se diferencian por su 
cantidad de ADN. Para ello, se utiliza la citometría de flujo, donde una población de 
células se marca con una tinción fluorescente que se une al ADN, pudiendo así 
medir la intensidad de la fluorescencia de las células individuales. Estos datos 
proporcionan la cantidad de ADN: la distribución muestra dos picos, que 
corresponden a las células con un contenido de ADN de 2n y de 4n; estas células 
están en G1 y G2/M. Las células en la fase S tienen una cantidad de ADN entre 2n y 
4n y se distribuyen entre los dos picos. 
Las células animales en G1 son diploides (contienen dos copias de cada 
cromosoma), por lo que se dice que su cantidad de ADN de la célula es 2n. Durante 
la fase S, mediante la replicación se aumenta la cantidad de ADN de la célula de 2n 
a 4n, por lo que las células en fase S tendrán una cantidad de ADN entre 2n y 4n. El 
contenido de AND se mantiene en 4n en las células en G2 y en M, que se reduce a 
2n tras la citocinesis. Osea que en G1 voy a tener 2n es decir 2x23 46 moleculas de 
ADN en G2 y M voy a tener 4n 4x23 osea 92 moleculas de ADN. 
 
Núcleo en contacto con Fase 
Membrana basal Mitosis (M) 
Luz, zona apical S 
Nada (en el medio) G1, G2 
 Regulación del ciclo celular: regulación de la síntesis, degradación y actividad 
de los complejos ciclinas-quinasas 
La progresión de las células a través del ciclo de división celular se regula por 
señales extracelulares del medio, así como por señales internas que supervisan y 
coordinan los diversos procesos que tienen lugar el ciclo celular. En los animales, la 
proliferación se regula en la fase G1 y G2. Concretamente, en G1 se denomina 
punto de restricción y en este caso, el paso de las células animales a través del ciclo 
celular se regula, principalmente, por factores de crecimiento extracelulares que son 
señales de proliferación celular. En presencia de los factores de crecimiento 
apropiados, las células a traviesan el punto de restricción y entran en la fase S. Por 
otro lado, si los factores de crecimiento adecuados no están disponibles en G1, la 
progresión a través del ciclo celular se para en el punto de restricción. La célula 
entra en un estado de reposo, denominado G0, en el que puede permanecer 
indefinidamente sin proliferar. Las células en G0 son metabólicamente activas 
aunque cesa su crecimiento y su ritmo de síntesis de las proteínas es menor. En 
cambio, cuando la regulación se da en G2, el ejemplo más característico de control 
del ciclo celular a esta altura lo proporcionan los oocitos. Estos pueden permanecer 
detenidos en G2 durante largos periodos de tiempo hasta que se activa su paso a la 
fase M, por la estimulación hormonal. De esta manera, las señales extracelulares 
pueden controlar la proliferación celular regulando el paso de las fases G2 a M así 
como de G1 a S. Por ende, estos mecanismos de control regulan la progresión del 
ciclo celular en respuesta al tamaño celular y a señales extracelulares. 
Existen por otro lado, reguladores de la progresión del ciclo celular. Estos son 
mecanismos moleculares que controlan la progresión de las células eucariotas a 
través del ciclo celular (estos conocimientos se deben a resultados obtenidos 
mediante experimentos). Factor promotor de la maduración (MPF): induce la entrada a la fase M del ciclo 
mitótico (regulador general del paso de G2 a M). Está compuesto por 2 
subunidades fundamentales: Cdk y ciclina. Esta última es una proteína inductora 
de la mitosis ya que su acumulación y degradación periódica controla la entrada 
y la salida de la fase M. La transición de G2 a M se produce a continuación 
mediante la activación del complejo Cdk 1/ciclina B, y una vez activado este 
complejo la proteína quinasa Cdk fosforila varias proteínas que inician la fase M. 
La actividad de Cdk provoca la degradación de la ciclina, que se produce por 
una proteólisis mediada por ubiquitina. Esta destrucción proteolica de la ciclina 
inactiva a Cdk, lo que lleva a la célula a salir de mitosis, a sufrir citocinesis, y a 
volver a la interfase. 
(Apunte de mi carpeta): Las ciclinas son proteínas reguladoras de la duración de cada una 
de las etapas del ciclo. Van cambiando su síntesis y degradacion a medida que avanza en la 
etapa. Cuando aumenta la concentración de ciclina se unen a una proteína quinasa y se 
forma así el complejo proteico denominado factor promotor. Existen dos tipos de estos: 
 
FPS De G1 a S Ciclina E + proteína 
quinasa Cdk 2 
La duplicación del ADN 
FPM De G2 a 
M 
Ciclina B+ proteína 
quinasa Cdk 1 
La división celular. Ejemplo: en la profase la 
cromatina se condensa para pasar a ser cromosoma, 
para ello el FPM fosforila a una de las histonas y hace 
que se enrolle (indicio de que empieza la división 
celular). 
 
 
ACTIVIDAD DE CDK 
Se regula por lo menos por cuatro mecanismos el primer nivel de regulación implica la 
asociason de Cdk con las ciclinas correspondientes. 
Cdk 4 y Cdk 6 con ciclina D controlan el paso del punto de restriccion en G1. 
Cdk 2/ciclina E controlan el paso al final de G1 Se requiere `para el paso de G1 a S. 
Cdk 2/ciclina A se requiere para la progresion a traves de la fase S. 
Cdk 1/ciclina A regulan la progresion hasta G2. 
Cdk 1 /ciclina B se requiere para el paso de G2 a M. 
Dato Cdk1 es la unica quinasa que puede remplazar a las demas ,en cambio a ella no la 
remplaza nadie. 
Cuando los complejos se activan se prosigue con el ciclo. 
 
El segundo la activacion de complejos Cdk/ciclina requiere de la fosoforilacion de una 
residuo de trionina conservado alrededor de la posicion 160.Esta fosforilacion activa a Cdk 
y es llevada a cabo por CAK(Cdk 7 unida a ciclina h) 
El tercer mecanismo de regulacion de Cdk implica la desfoforilacion de tirosina 15,wee1 
ya si estas se encuentran activadas inactivan a Cdk por ende debo desorillarla para activas 
Cdk. 
Tambien existen inhibidores de las Cdk como por ejemplo Ink inhibe a Cdk 4 y Cdk 6 de 
modo que inhibe la progresion en la fase G1.La familia Cip/Kip inhibe a Cdk 2 y eso inhibe 
la progresion a de G1 A S y S. 
Puntos de control del ciclo celular 
Los sucesos que tienen lugar durante las diferentes etapas del ciclo celular deben 
coordinarse entre sí de tal manera que ocurran en el orden adecuado, esta 
coordinación depende de un sistema llamado puntos de control, el cual previene la 
entrada en la siguiente fase del ciclo celular hasta que los eventos de la fase 
precedente hayan sido completados. Estos diversos puntos de control funcionan a lo 
largo del ciclo celular para asegurar que los genomas completos se transmitan a las 
células hijas. 
Los puntos de control de daños al ADN funcionan en las fases G1, G2 y S del ciclo 
celular, y garantizan que el ADN dañado no se replicara ni se transmitirá a las 
células hijas. 
- El punto de control de G2 impide el comienzo de la mitosis en tanto en cuanto la 
célula no haya completado la replicación o reparado las lesiones existentes. El ADN 
dañado activa una vía de señalización que da lugar a la detención del ciclo celular. 
- El punto de control de G1 hace posible la reparación de cualquier lesión en el 
ADN con anterioridad al inicio de la fase S, en la que tendría lugar la replicación 
del ADN dañado. Este punto asegura tanto la monitorización continua de la 
integridad del ADN para asegurar su reparación en caso de daño, como también 
representa a su vez un mecanismo de control de calidad que favorece la reparación 
de cualquier error. 
- El punto de control al final de la mitosis es muy importante ya que mantiene la 
integridad del genoma, ya que supervisa que los cromosomas se alineen de manera 
correcta en el huso mitótico. Esto asegura que se distribuya un juego completo de 
cromosomas a cada célula hija. La alineación incorrecta de uno o más cromosomas 
en el huso mitótico provoca que la mitosis se detenga en la metafase, antes de la 
segregación de los cromosomas recién replicados a los núcleos de sus células hijas. 
Gracias a este punto de control, los cromosomas no se segregan hasta que se 
disponga de un juego completo de cromosomas para ser distribuido a cada célula 
hija. 
-Disponibilidad de factores tróficos: lo estimulan (protooncogenes),estos son del 
tipo de regulación positiva hacen que el cilco siga 
-Limitación por contacto 
-Integridad del ADN: su alteración lo detiene (proteínas supresoras de tumores: 
retinoblastoma, p53, p21 son del tipo de regulacion negativa detienen el ciclo). 
Restringir la replicación del ADN una vez por ciclo celular: 
El punto de control de G2 impide la iniciación de la mitosis antes de la compleción 
de la fase S ,asegurando asi que el ADN replicado incompletamente no se tranmita a 
las células hijas.Tambien es importante asegurar que el genomas solo se replica una 
vez por ciclo celular.Las células de mamíferos emplean miles de orígenes para 
replicar su ADN,de modo que la iniciación de la replicación de cada uno de estos 
orígenes debe ser cuidadosamente controlada.El mecanismo que restringe la 
replicación del ADN una vez por ciclo implica la acción de una familia de proteínas 
denominadas MCM que se unen a los orígenes de replicación junto con las 
proteínas del complejo del origen de replicación.Dichas proteínas MCM solo son 
capaces de unirse a los orígenes de replicación durante G1,están inactivadas cuando 
se incorporan al ADN y solo se activan cuando la celula pasa a la fase S .Despues 
las proteínas MCM se alejan del origen y la replicación no puede volver a iniciarse 
hasta que la celula complete la mitosis y pase a la fase G1 ,del siguiente cilo celular. 
 
Regulación de los mecanismos moleculares de la división celular (fase M) 
 
En la fase M se produce la reorganización de casi todos los componentes de la 
célula. Durante la mitosis, los cromosomas se condensan, la envoltura nuclear de la 
mayoría de las células se desintegra, el citoesqueleto se reorganiza para formar el 
huso mitótico, y los cromosomas migran a polos opuestos. Tras la segregación 
(migracion) de los cromosomas se suele producir la división de la célula 
(citocinesis). Por ende, podemos decir que la mitosis se divide en 4 etapas: profase, 
metafase, anafase y telofase. Todos los procesos llevados a cabo en la mitosis son 
iniciados mediante la activación de la proteína quinasa Cdk 1 / ciclina B (MPF). En 
particular, las proteína-cinasas de las familias cinasas Aurora (A y B) y cinasas tipo 
Polo se activan coordinadamente con Cdk para señalizar el paso a la fase M. Estas 
actúa en un bucle de retroalimentación positiva: Cdk activa a las cinasas Aurora, 
que activan a las cinasas tipo Polo, que a su vez activan a la Cdk. Todas estas 
proteína-cinasas tienen múltiples funciones en la mitosis. Son responsables (junto 
con la activación de Cdk/ciclina B) de la condensación de la cromatina, rotura de la 
cubierta nuclear, fragmentación del aparato de Golgi, y reorganización de los 
microtúbulos para formar el huso mitótico. 
Descripcion de las profase,metafase,telofase y anafase: 
El comienzo de la profase queda determinado por la aparicion de los cromosomas 
condensados ,cada uno de los cuales esta constituidopor dos cromatides 
hermanas(las moleculas de ADN hija que se producieron en la fase S) que se 
mantienen unidas a traves del centromero que es una region cromosomica a la que 
se unen proteinas dando lugar al cinetocoro –el lugar de anclaje de los microtubulos 
del huso-.Ademas de la condensacion de los cromosomas durante la profase se 
producen cambios en el citoplasma que conducen ald esarollo del huso mitotico.Los 
centrosomas que se duplicaron en la interfase se separan y migran a lados opuestos 
del nucelo.En los eucariotas superiores el final de la profase corresponde con la 
rotura de la envoltura nuclear.Una vez terminada la profase,la celula entra en la 
prometafase (un periodo de transicion entre la profase y metafase ) donde los 
microtubulos del huso mitotico se anclan a los cinetocoros de los cromosomas 
condensados.Los cromosomas se alinean en la placa metafisica en la mitad del 
huso.Llegando a este punto la celula ha alcanzado la metafase.La mayoria de las 
celulas permanecen en metafase poco tiempo ,la transicion a anafase se produce por 
la rutura de la union entre las cromatides hermanas,las cuales se separan y migran a 
polos opuestos del huso. La mitosis finaliza con la telofase,durante la cual los 
nucleos se regeneran y los cromosomas se descondensan.La citocineses conmienza 
normalmente duran la anafase tardia y se completa al final de la telofase,dando 
lugar a dos celulas hijas en interfase. 
 
 Pérdida del control del crecimiento normal. Mutaciones oncogénicas en los 
genes que codifican para las proteínas que promueven y que inhiben la 
proliferación celular (pérdida de control del ciclo celular) 
La principal alteración que causa el desarrollo del cáncer es la proliferación 
continua e incontrolada de células cancerosas. En vez de responder apropiadamente 
a las señales que controlan el comportamiento celular normal, las células cancerosas 
crecen y se dividen de manera incontrolada, invadiendo los tejidos y los órganos 
sanos y, finalmente, diseminándose por todo el cuerpo. La pérdida generalizada del 
control del crecimiento que muestran las células cancerosas es el resultado neto de 
la acumulación de alteraciones en múltiples sistemas reguladores de la célula, y se 
refleja en varios aspectos del comportamiento celular que diferencian a las células 
cancerosas de sus equivalentes sanas. 
Entonces, el crecimiento incontrolado de las células cancerosas se debe a la 
acumulación de alteraciones que afectan a muchos de los mecanismos de regulación 
celular. Esta relación se observa en muchos de los aspectos del comportamiento 
celular que diferencian a las células cancerosas de las células normales. Las células 
cancerosas manifiestan alteraciones en los mecanismos que regulan la proliferación, 
diferenciación y supervivencia celular normal. En conjunto, estas propiedades 
características de las células cancerosas permiten una descripción a nivel celular de 
carácter maligno. 
Diferencias entre las células cancerosas y las células normales en cultivo: 
- Las células normales muestran una inhibición de la proliferación dependiente de la 
densidad. Las normales proliferan hasta alcanzar una densidad celular determinada, 
en cambio las células tumorales siguen creciendo hasta alcanzar una densidad 
elevada de células en cultivo. 
- Las células normales muestran inhibición dependiente de la densidad e inhibición 
por contacto de su crecimiento y movilidad. Las células normales proliferan hasta 
que alcanzan una densidad celular finita, determinada por la presencia de factores 
de crecimiento en el medio de cultivo y por la inhibición resultante de los contactos 
con células adyacentes, y luego quedan detenidas en G0. En cambio la proliferación 
de la mayor parte de las células cancerosas no está restringida, como es normal, por 
la presencia de los factores de crecimiento ni por los contactos entre células. 
- En algunos casos, las células cancerosas producen factores de crecimiento que 
estimulan su propia proliferación. Esta producción anormal de un factor de 
crecimiento por parte de la célula conduce a la autoestimulación continua de la 
división celular (estimulación autocrina del crecimiento), por lo que las células 
cancerosas dependen en menor medida de los factores de crecimiento que 
provengan de otras fuentes fisiológicas normales. 
- La mayoría de las células cancerosas tiene menos capacidad de adhesión que las 
células normales, lo que es debido, generalmente, a una expresión reducida de las 
moléculas de adhesión de la superficie celular. 
- Las células transformadas en cancerosas suelen secretar proteasas(rompen enlaces 
peptidicos) que digieren los componentes de la matriz extracelular, lo que permite a 
las células cancerosas invadir los tejidos normales adyacentes. 
- La mayoria de las celulas diferenciadas o se dividen con muy poca frecuencia o no 
se dividen y las células cancerosas en vez de llevar a cabo su programa de 
diferenciación normal, se bloquean en un estado temprano de diferenciación,lo que 
concuerda con su proliferacion activa continua. 
- Muchas células cancerosas no sufren apoptosis, por lo que tienen ciclos vitales 
más largos en comparación con las células normales. Esta incapacidad de sufrir la 
muerte celular programada contribuye de una manera sustancial al desarrollo del 
tumor. Esto se da en parte debido a que las células cancerosas son resistentes a la 
radiación y a muchas drogas quimioterapéuticas, que actúan dañando el ADN. Por 
lo tanto ,la supervivencia celular anomala asi como la proliferacion celulas 
desempeñan un papel fundamental en el crecimiento incontrolable de las celulas 
cancerosas. 
Retrovirus: 
Tipo de virus que emplea el ARN como su material genético. Después de infectar 
una célula, un retrovirus emplea una enzima llamada transcriptasa inversa para 
convertir el ARN en ADN. Luego, el retrovirus integra su ADN en el ADN de la 
célula huésped, que le permite multiplicarse. El VIH, causante del SIDA, es un 
retrovirus. Los retrovirus causan cáncer en una diversidad de especies animales, 
incluyendo al humano. Los distintos retrovirus difieren de manera sustancial en su 
potencial oncogénico. La mayoría de los retrovirus solo contienen 3 genes que son 
necesarios para la replicación del virus, pero que no desempeñan ningún papel en la 
transformación celular.Este tipo de retrovirus raramente induce tumores como 
consecuencia de las mutaciones debidas a la integracion del ADN provirico dentro 
de los genes celulares-Sin embargo, otros retrovirus contienen genes específicos que 
inducen la transformación celular y son potentes carcinógenos. El prototipo de estos 
retrovirus altamente oncogénicos es el virus del sarcoma de Rous (RSV). 
Oncogenes: el cáncer se debe a las alteraciones en determinados genes reguladores 
que controlan la proliferación, la diferenciación y la supervivencia celular. Existen 
algunos genes específicos, denominados oncogenes, capaces de inducir la 
transformación celular. Sin embargo, la mayoría de los canceres humanos no son 
inducidos por virus y surgen debido a otras causas (radiación, carcinógenos 
químicos). 
 Oncogenes retroviricos: la transformación celular puede ocurrir por RSV (virus 
del sarcoma de Rous) pero no por AVL (virus de la leucosis Aviar) que si bien 
esta emparentado con el anterior y se replica en las mismas celulas no induce la 
transformacion. Las células en ambos casos se infectan y se replican en los 
fibroblastos, pero solo el RSV induce la transformación celular. Esta diferencia 
en el potencial transformador sugería que el RSV podía contener información 
genética específica responsable de la transformación de las células infectadas. El 
RSV contiene información genética necesaria para la transformación pero no 
para la replicación del virus. Una característica inesperada de los oncogenes 
retroviricos es que no están involucrados en la replicacióndel virus y esto se 
debe ya que los oncogenes retroviricos derivan de genes similares de células 
normales.Se sugirio la hipotesis de que los oncogenes retroviricos procedian de 
genes de la celula huesped y que ocasionalmente este gen se incorporaba al 
genoma virico ,dando lugar a un nuevo virus altamente oncogenico como 
resultado de un porceso de recombinación virus-huesped. 
Proto-oncogenes: los genes de las células normales a partir de los cuales se 
originan los oncogenes retro víricos se denominan proto-oncogenes.Es decir que si 
estos genes se expresan e manera anormal o han mutado dan lugar a ser llamados 
oncogenes y inducen una proliferación anormal y el desarrollo del tumor. Son genes 
reguladores importantes ya que en muchos casos codifican proteínas que intervienen 
en las vías de las transducción de señales que controlan la proliferación celular 
normal. Los oncogenes son formas de sus correspondientes proto-oncogenes que se 
expresan de manera anormal o que han mutado. Debido a estas alteraciones, los 
oncogenes inducen una proliferación celular anormal y el desarrollo del tumor. Un 
gen que se incorpora en un genoma retrovirico difiere en varios aspectos de su 
correspondiente proto-oncogén. 
Genes supresores de tumores: a diferencia de los oncogenes, los genes supresores 
de tumores inhiben el desarrollo del tumor. El prototipo de un gen supresor de 
tumores es el Rb. La pérdida o la inactivación por mutación de Rb y de otros genes 
supresores de tumores, contribuye a que se desarrollen diversos tipos de cáncer en el 
hombre. Las proteínas codificadas por la mayoría de los genes supresores de 
tumores intervienen como inhibidores de la proliferación o de la supervivencia 
celular. Rb es un prototipo de gen supresosr de tumores que funciona como freno 
que realentiza la progresion del ciclo celular.Rb es forforilada por los complejos 
Cdk 4 ,6/ciclina D a medida que las celulas rebasan el punto de restriccion en 
G1,cuando es forforilada Rb se inactiva y se desune a E2F.E2F una vez disociado 
de Rb se une a secuencias diana y activa la transcripción de genes 
 
 Muerte celular programada como destino celular (apoptosis), mecanismos 
moleculares y rol de las caspasas 
La muerte celular y la proliferación celular están equilibradas durante la vida de los 
organismos multicelulares. La mayoría de las muertes celulares en estos organismos 
ocurren como consecuencia de un proceso fisiológico normal de muerte celular 
programada. En los organismos adultos, la muerte celular debe estar equilibrada con 
la renovación celular, y la mayoría de los tejidos contienen células madre que son 
capaces de reemplazar las células que se han perdido. La muerte celular programada 
es estrechamente regulada de modo que el destino de las células individuales 
cumple las necesidades del organismo completo. La muerte celular es responsable 
del equilibrio entre proliferación celular y mantenimiento de números celulares 
constantes en los tejidos que sufren renovación ulular. Además, proporciona un 
mecanismo de defensa por el cual las células dañadas y potencialmente peligrosas 
pueden ser eliminadas por el bien del organismo. 
En contraste con la muerte accidental de las células que resulta de una lesión aguda 
(necrosis), la muerte celular programada es un proceso activo, que tiene lugar 
generalmente mediante una serie concreta de cambios celulares conocidos como 
apoptosis. Durante la apoptosis, el ADN cromosómico generalmente es 
fragmentado como resultado de la escisión entre nucleosomas. La cromatina se 
condensa y a continuación el núcleo se disgrega en pequeños fragmentos. 
Finalmente, la célula se encoge y se rompe en fragmentos envueltos de membrana 
denominada cuerpos apoptoticos. Las células que mueren por apoptosis son 
rápidamente retiradas de los tejidos, en cambio las células que mueren debido a 
necrosis como resultado de una lesión aguda se hinchan y se lisan, liberando su 
contenido al espacio extracelular y causando una inflamación. 
Luego de muchas investigaciones se llegó a la conclusión de que existen 3 genes 
que juegan papeles clave en la regulación y ejecución de la apoptosis: por un lado 
los genes Ced-3 y Ced-4, quienes si eran inactivados mediante una mutación, la 
muerte celular programada no tenía lugar. Y un tercer gen llamado Ced-9, quien 
actuaba como regulador negativo de la apoptosis. Si este era inactivado mediante 
una mutación, las células que normalmente sobrevivirían no lo hacían, sino que 
sufrían apoptosis. Por el contrario, si este gen era expresado a niveles muy elevados, 
la muerte celular programada normal no ocurría. 
La clonación molecular y la secuenciación nucleotidica del gen Ced-3 indicaron que 
codificaba una proteasa, proporcionando la primera señal sobre el mecanismo 
molecular de la apoptosis. Actualmente se sabe que Ced-3 es un prototipo de una 
familia conocida como caspasas. Estas son los últimos efectores o ejecutores de la 
muerte celular programada, desencadenando los procesos de la apoptosis mediante 
la escisión de más de 100 proteínas celulares diana diferentes. Las caspasas 
escinden ambas laminas nucleares, dando lugar a la fragmentación del núcleo, y las 
proteínas citoesqueléticas, desencadenando la desorganización del citoesqueleto, la 
vesiculizacion de la membrana y la fragmentación celular; y las proteínas de matriz 
del Golgi, lo que induce a la fragmentación de este aparato. 
Por ende, las caspasas son una familia de proteasas(rompe uniones fosfodiester) que 
son las efectoras de la apoptosis. Se clasifican como caspasas iniciadoras o efectoras, 
y ambas funcionan en una cascada que lleva hacia la muerte celular. En las células 
de mamífero, la principal caspasa iniciadora es activada en un complejo 
denominado apoptosoma. 
Regulador de la apoptosis: el tercer gen identificado como un regulador clave de la 
muerte celular programada, Ced-9, se encontró que estaba estrechamente 
relacionado con un gen mamífero denominado bcl-2, el cual inhibe la apoptosis. 
Ced-9 y bcl-2 eran por tanto similares en cuanto a función, y el papel de la bcl-2 
como regulador de la apoptosis centro primero la atención sobre la importancia de 
la supervivencia celular en el desarrollo del cáncer. 
Meiosis 
Es un tipo de ciclo celular especializado que reduce el numero de cromosomas a la 
mitad dando lugar a células hijas haploides.Mientras que en las celulas somaticas 
realizan la mitosis para proliferar ,en las células germinales tiene lugar la meiosis 
para producir gametos haploides. 
Esta reduccion se realiza mediante dos rondas consecutivas de división nuclear y 
celular (denominadas meiosis I y meiosis II).La meiosis I comienza despues que 
finalice la fase S ,durante ella los cromosomas homologs primero se emparejan unos 
con otros y luego segregan a celulas hijas diferentes.Las cromatides hermanas 
permanecen unidas.Tras la meiosis I se produce la meiosis II ,que se asemeja a la 
mitosis en que la cromatides hermanas se separan y segregan a diferentes celulas 
hijas. La meiosis II da como resultado cuatro celulas hijas haploides. 
El apareamiento de los cromosomas homologos no solo subyace en la segregacion a 
los cromosomas en la meiosis,sino que permite la recombinacion entre 
loscromosomas de origen materno y paterno.Este emparejamiento tiene lugar en la 
profase de la meiosis I,que se divide en cinco 
etapas(leptoteno,zigoteno,pzquiteno,diploteno y diacinesis) en funcion de la 
morfologia cromosomica. 
La recombinacion se inicia por roturas de doble hebra que se inducen en la profase 
temprana meiotica(leptoteno) por la accion de una endonucleasa.La formacion de 
roturas de doble hebra lleva a la formacion de regiones de hebra sencilla que 
invaden un cromosoma homologo mediante el apareamiento de bases .La asociacion 
estrecha de los cromosomas homologos (sinapsis)comienza durante la etapa de 
zigoteno ,la recombinacionse completa en la etapa paquiteno permaneciendo los 
cromosomas unidos en lugares de sobrentrecruzamiento finalmente en la etapa de 
doploteno los cromosomas homologos se separan.Y en la diacinesis que es la etapa 
final que supone la transicion a la metafase es donde los cromosomas se condensan 
por completo. 
La union quiasma que mantiene unidos a los cromosomas homologos se rompe en 
la anafase I,y la union de los centromeros de las cromatides hermanas se rompe en 
la anfase II. 
Seminadio de Integracion Nº 3 
Regulación de la expresión génica en eucariontes 1: regulación de la 
transcripción. 
 
 
Regulación prestranscripcional mediada por la remodelación de la cromatina: 
En el ADN de todas las células eucariticas se encuentra fuertemente unido a las histonas. La 
unidad estructural básica de la cromatina es el nucleosoma, que consiste en 147 pares de bases de 
ADN enrollado en torno a dos moléculas compuestas cada una por las histonas H2B, H2A,H3 Y H4, 
con una molécula de h1 que está unida al ADN donde entra a la partícula del nucleosoma. La 
cromatina se condensa enrollándose en estructuras de orden superior organizadas en grandes 
bucles de ADN. Consecuencia, la cromatina va a poseer cierta disponibilidad como molde para la 
transcripción. Es un punto crítico para la expresión génica en las células. 
La estructura de la cromatina puede verse alterada por modificaciones de las histonas y 
reorganización de los nucleosomas. Las histonas tienen dos dominios: un dominio plegado, que 
interviene en las interacciones con las histonas y en el enrollamiento del ADN alrededor del núcleo 
del nucleosoma, y un dominio o extremo amino-terminal. El extremo amino-terminal es rico en 
lisina y puede ser modificado por acetilación. La activación de la transcripción resulta 
directamente de la acetilación de las histonas. 
Las histonas no solo se modifican por acetilación, también pueden sufrir metilación de residuos de 
lisina y arginina y la adición de péptidos pequeños ( ubiquitina y SUMO) a los residuos de lisina. 
Estas modificaciones se asocian a combos de la actividad transcripcional aportando lugares de 
unión para otras proteínas que activan o reprimen la transcripción. La activación de transcripción 
se da cuando la estructura de la cromatina se relaja. 
Las histonas modificadas actúan como sitio de unión de proteínas que introducen cambios en 
otras histonas, las modificaciones de las histonas representa un mecanismo de herencia 
epigenetica. 
Los nucleosomas parentales se distribuyen entre las hebras hijas durante la replicación del ADN 
cromosómico. Las histonas modificadas pasan de los cromosomas paternales a los cromosomas 
hijos. Estas histonas modificadas pueden dirigir otras modificaciones similares de histonas recién 
sintetizadas, dando lugar al mantenimiento de un patrón de modificaciones de histonas 
característico de la cromatina activa o inactiva. 
Los factores remodeladores de la cromatina son complejos proteicos que aprovechan energía 
generada por hidrolisis de moléculas de atp para alterar los contactos del ADN con las histonas. 
Una de las funciones de los factores remodeladores es el desplazamiento de los octomeros de las 
histonas a lo largo de la molécula de ADN. Otra función, pueden inducir cambios conformacionales 
en los nucleosomas, pueden expulsar a las histonas del ADN dejando regiones libres de 
nucleosomas. 
Otros factores de la modificación de histonas, las enzimas modificadoras de 
histonas( ACETILTRANSFERASA Y METILTRANSFERASA) y factores remodeladores de la cromatina 
que desplazan temporalmente a los nucleosomas en el transcurso de la transcripción. 
Regulación de la transcripción por arn no codificantes 
La expresión génica puede regularse también por moléculas de arn reguladoras no codificantes, 
como moleculas pequeñas de arn de interferencia (ARNsi) y microARN(ARNmi). Suelen inhibir la 
traducción o inducir la degradación de ARNm homologos por medio de la interferencia de arn. 
 Los ARNsi y los ARN no codificantes largos pueden regular la expresión génica a nivel de la 
transcripción. 
Los ARNsi reprimen la transcripción produciendo modificación en las histonas, provocando la 
condensación de la cromatina y formación de la heterocromatina. También dirigen la formación de 
los centrómeros. Los ARNsi se asocian con un complejo proteico denominado COMPLEJO 
SILENCIADOR DE LA TRANSCRIPCION INDUCIDO POR ARN(RISTS). El complejo RITS contiene 
proteínas que inducen la condensación de la cromatina y metilación de la lisina en histona h3, 
dando lugar a la formación de heterocromatina. 
Los ARN no codificantes largos ( más de 200 nucleótidos) son importantes en la expresión génica. 
Un ejemplo claro es el CROMOSOMA X contiene 1000 genes que no están presentes en el Y. 
RECORDEMOS QUE LA MUJER TIENE CROMOSOMA XX, EL VARON XY. El mecanismo de 
compensación de dosis por el que se inactiva la mayoría de los genes de uno de los cromosomas X 
de las células de las hembras mediante su conversión a heterocromatina en fases precoces del 
desarrollo. Por consiguiente, en la célula de las hembras y los machos solo hay una copia 
disponible para la transcripción de la mayoría de los genes situados en el cromosoma X. Los ARN 
no codificantes largos ( ARNinc) son reguladores de la expresión génica. 
Metilación del adn 
hay una adicion de grupos metilo en la posición del carbono-5. El adn es metilado específicamente 
en las citosinas(C), esta metilación se correlaciona con la represión transcripcional. 
la metilación del ADN representa el mecanismo mejor conocido de herencia epigenetica, los 
patrones de metilación del adn se mantienen de forma estable tras la replicación del ADN por 
acción de una enzima. Un gen metilado y reprimido en una célula parental continuara estándolo 
en las células hijas. 
Regulación de la transcripción mediado por factores de transcripción generales y específicos. 
La síntesis de ARN se realiza sobre un molde de ADN, denominado unidad transcripcional. Esta 
unidad transcripcional es el conjunto de todas las secuencias de ADN en un segmento 
determinado utilizadas en la transcripción. Comienza en el promotor (5´) y termina en la secuencia 
de finalización (3´). 
La unidad de transcripción esta constituida por elementos: 
 
1)sitio promotor: es la secuencia de inicio de la transcripción. Es la región donde se abre las hebras 
de ADN. Esta constituido por varias regiones según el tipo de arn a sintetizar, ejemplo una región 
de control que es el sitio de unión de hormonas reguladoras( ej hormonas tiroideas), otro ejemplo 
región TATA BOX que es la secuencia de unión a los ARNpol. 
2) exones: secuencias codificantes. 
3) intrones: secuencias no codificantes. 
4) AATAAA: sitio de terminación y de poliadenilacion. 
5) para que comience la síntesis del arn deben actuar primero una serie de proteínas denominadas, 
factores de transcripción, estos interactúan con secuencias especificas presente en el sitio 
promotor, y en el regulado. 
6) los factores de transcripción se dividen en especificios y basales; los específicos tienen afinidad 
por el represor y pueden activar o inhibir la síntesis del ARN; los basales tienen afinidad por el sitio 
promotor, siendo necesaria su presencia para que comience la síntesis. 
Para que comience la síntesis del ARN deben actuar primero una serie de proteínas denominadas 
factores de trascripción, estos interactúan con secuencias específicas presentes en el sitio 
promotor, y en el regulador. 
Los factores de trascripción se dividen en específicos y basales; los específicos tienen afinidad por 
el represor y pueden activar o inhibir la síntesis del ARN; los basales tienen afinidad por el sitio 
promotor, siendo necesaria su presencia para que comience la síntesis. 
 
Seminario de Integración Nº 4 
Regulación Postranscripcional 
 
Maduración y renovación del ARN 
La maduración de ARNt y ARNr es similartanto en procariotas como en eucariotas. 
Los procariotas poseen tres ARNr equivalentes a los ARNr 28S, 18S y 5,8S de los eucariotas, 
los cuales provienen de un mismo pre-ARNr. El único ARNr eucariota de origen diferente 
es el ARNr5S. En ambos organismos los pre-ARN sufren escisiones para dar lugar a sus 
productos finales. 
En eucariotas, la maduración ocurre en el nucléolo y comienza con una escisión en el 
extremo 5’ del pre-ARNr común dando lugar a los tres ARNr nombrados anteriormente. 
También se agregan grupos metilo a las bases y residuos de azúcares de nucleótidos y se 
convierten algunas uridinas en pseudouridinas. 
En la maduración del ARNt, la ARNasaP (ribozima = enzima formada por ARN y no por 
proteínas) realiza una escisión en el extremo 5' de los pre-ARNt y se agrega una secuencia 
terminal CCA (sitio de unión para aminoácidos) al extremo 3' para formar el ARNt maduro. 
Esta secuencia CCA puede venir ya codificada en el ADN que dará lugar al ARNt como 
también puede ser agregada durante la maduración, como recién nombramos. También 
se altera el 10% de las bases del ARNt para dar lugar a nucleótidos modificados en 
posiciones específicas de este. 
*Algunos pre-ARNt y pre-ARNr pueden sufrir splicing. 
En procariotas, no hay una maduración del ARNm previa a la traducción sino que esta 
comienza cuando aún no ha terminado la transcripción (son simultáneas). 
En cambio, en eucariotas, el ARNm sintetizado es transportado al citoplasma desde el 
núcleo para ser utilizado como molde en la síntesis de proteínas. El dominio C-terminal 
(CTD) de la ARN polimerasa ll sirve como sitio de unión para moléculas involucradas en 
esta maduración. 
La maduración del ARNm en eucariotas sigue los siguientes pasos: 
1) Se agrega, por adición de una molécula de GTP, una caperuza (nucleótido llamado 7-
metil guanosina) al extremo 5' que estabiliza a los ARNm, los protege de las fosfatasas y 
los alinea en los ribosomas gracias a que es reconocida por la subunidad menor del 
ribosoma (40s). 
2) Poliadenilación (NO ocurre en todos los ARNm, por ejemplo, en los ARNm de las 
histonas no ocurre): se sintetiza la secuencia AAUAAA que será reconocida por factores 
(entre estos, una endonucleasa) que cortan la cadena y por una Poli A polimerasa que 
añade una secuencia de nucleótidos de adenina conocida como “cola de Poli A”, que 
regula la traducción y estabiliza al ARNm según su longitud (mientras más larga, mejor), al 
extremo 3' y se degrada el ARN sintetizado por delante del punto de adición de Poli-A. 
3) Splicing: a.- Corte del extremo 5’ del intrón, este extremo se une a un nucleótido de 
adenina (punto de ramificación) en el mismo intrón formando un bucle. b.- Corte en el 
extremo 3’ del intrón y empalme de exones. c.- Intrones son degradados por nucleasas. 
El splicing tiene lugar en los espliceosomas que son complejos compuestos de proteínas y 
ARN (ARNsn) que dan lugar a partículas de ribonucleoproteínas nucleares (RNPsn -> U1, 
U2 etc.). 
-Formación spliceosomas: RNPsn U1 se une al sitio de corte 5’ y U2 al punto de 
ramificación. Se incorpora el complejo U4-U6 y U5, el cual se une corriente arriba del sitio 
de corte 5’, U4-U6 se separan y se desplaza U1 y U4, U6 se une con U2 formando la 
estructura de lazo y U5 se une al sitio de corte 3’. 
*Algunos ARN son capaces de autoempalmarse, es decir, de eliminar sus propios intrones 
sin necesidad de otras proteínas o ARN; el mismo intrón actúa como ribozima para dirigir 
su escisión. 
-Splicing alternativo: Como los pre-ARNm contienen múltiples intrones, se pueden 
producir diferentes ARNm maduros partiendo de un mismo pre-ARNm combinando los 
sitios de corte (combinando exones). 
Este proceso está controlado por activadores que reclutan factores de corte y empalme a 
sitios específicos. Los activadores más conocidos son las proteínas SR. 
Casi todos los genes humanos se someten a estos cortes y empalmes alternativos. Un 
ejemplo son las neuronas. 
-Transporte ARN: La salida de ARN desde el núcleo es un proceso selectivo mediado por 
receptores de transporte que interactúan con el complejo de poro nuclear (CPN) y los ARN 
se transportan en forma de complejos de ribonucleoproteínas (RNP). 
Las importinas y exportinas transportan la mayoría de los ARNt, ARNr y ARNmi y los 
precursores de ARNt y ARNmi son transportados mediante exportinas que se unen 
directamente a estos. 
Los pre-ARNm se asocian a 20 o más proteínas durante su procesamiento y transporte, el 
cual está mediado por un complejo exportador de ARNm diferenciado que se une a los 
pre-ARNm en el núcleo cuando finaliza la maduración de estos. La dirección de este 
transporte se establece por una ARN-Helicasa situada en el CPN que remodela al complejo 
ARNm/exportador para liberar al ARNm al citoplasma. 
Otros ARN pequeños (ARNsn y ARNsno) se transportan al citoplasma mediante Crm1 para 
asociarse con proteínas y formar RNPsn funcionales para regresar al núcleo. 
Regulación de la traducción 
La regulación puede controlarse mediante proteínas represoras y micro ARN (ARNmi) no 
codificantes, además de estar moderada en respuesta al estrés celular, la disponibilidad 
de nutrientes y la estimulación por factores de crecimiento. 
Las proteínas represoras se unen a secuencias específicas de ARNm para bloquear su 
traducción. Un ejemplo es la síntesis de ferritina cuya traducción está regulada por la 
cantidad de hierro (mientras más hierro haya, más ferritina se sintetizará ya que la 
presencia de hierro inhibe la acción de las proteínas represoras a unirse a la secuencia, 
dando por resultado la traducción). 
La traducción también puede ser regulada por proteínas que se unen a secuencias de la 
región 3’ no traducidas de algún ARNm. Estas proteínas represoras se unen al factor de 
iniciación eIF4E interfiriendo en la interacción de este con eIF4G, inhibiendo la traducción. 
Estas proteínas son responsables de la localización del ARNm en regiones específicas de la 
célula lo que es importante ya que las proteínas que se traducen son sintetizadas una vez 
que el ARNm se encuentra localizado adecuadamente. 
Existe una regulación vía interferencia de ARN (iARN) mediada por moléculas pequeñas de 
ARN bicatenarias que 1) inducen la formación de heterocromatina, 2) inhiben la 
traducción y 3) inducen la degradación de ARNm. 
Los dos ARN principales en este proceso son el ARN de interferencia pequeños (ARNsi) y el 
microARN (ARNmi), ambos de distinto origen: el primero se origina por escisión de un ARN 
largo a partir de nucleasas Dicer y el segundo es, en primer lugar, transcrito por la ARN 
polimerasa ll y luego sufre escisiones por parte de Dicer y Drosha para llegar a ARNmi. 
Ambos ARN se incorporan a un complejo de silenciamiento RISC y lo dirigen hacia los 
ARNm complementarios para ser degradados. Luego es esta degradación, el complejo se 
separa y es reciclado para ser utilizado en otro ciclo de degradación. 
Otro mecanismo de regulación a nivel traduccional es a nivel de factores de iniciación 
como eIF-2 y eIF-4E: 
-El complejo eIF-2/GTP se une al metionil ARNt iniciador para dirigirlo hacia el ribosoma y 
se genera una hidrólisis de GTP que lleva a la liberación de un complejo eIF-2/GDP que 
puede ser reutilizado en otro ciclo si se sustituye GDP por GTP. 
-Los factores de crecimiento que estimulan la síntesis de proteínas activan quinasas que 
fosforilan a proteínas reguladoras que se unen a eIF-4E. Sin estos factores de crecimiento, 
la unión de proteínas SIN FOSFORILAR inhiben la traducción. 
En el caso de ARN, se puede introducir directamente una cadena antisentido o introducir 
ADN diseñado para expresarlo. 
Regulación de la estabilidad de los ARNs : degradación del ARN 
La mayoría de las secuencias transcritas a partir de pre-ARNm son degradas al interior del 
núcleo, esto porque el 90% de las secuencias son intrones inservibles para el ARNm 
maduro. La enzima responsablereconoce el enlace 2’-5’ formado en el punto de 
ramificación (adenina en el intrón) y otras involucradas reconocen extremos de ARN 
degradándolo en cualquier dirección : al realizar splicing, quedan los exones empalmados 
entre sí y protegidos de esta degradación por ambos extremos gracias a la caperuza y a la 
cola de Poli A agregados anteriormente a los extremos 5’ y 3’, respectivamente. Los 
intrones, en cambio, quedan desprotegidos y, por ende, son degradados. 
La célula, además, posee un sistema de control de calidad que detecta y degrada ARNm 
erróneos, lo que previene la mala síntesis de proteínas y posteriores mutaciones. 
Un ejemplo de este sistema es el « decaimiento de ARNm mediado sin sentido » que 
provoca la degradación de ARNm que carecen de marcos completos de lectura abierta 
(región entre codones de inicio y terminación). Esto ocurre durante la traducción (en el 
citoplasma) y comienza una vez que los ribosomas detectan codones de terminación 
prematuros. 
Los ARNt y ARNr son estables, a diferencia de los ARNm que pueden vivir entre 30 
minutos a 20 horas. Los más inestables suelen codificar proteínas reguladoras y los más 
estables proteínas estructurales. 
Los ARNm contienen secuencias ricas en AU cerca de sus extremos 3’ que pueden servir 
como sitios de unión a proteínas para ser estabilizados, o bien para ser marcados y 
posteriormente degradados. 
La degradación en el citoplasma de la mayoría de los ARNm comienza con el acortamiento 
de sus colas de Poli A para proseguir con la degradación de este ARNm, por parte de 
nucleasas, desde el extremo 3’. 
Regulación de la función de las proteína 
-Regulación por pequeñas moléculas : La mayoría de las enzimas son reguladas por 
cambios en su conformación (mediante la unión de moléculas como aminoácidos o 
nucleótidos) que modifican su actividad. A esto le llamamos regulación alostérica y un 
ejemplo sería la retroalimentación negativa, feed-back o retroinhibición, donde el 
producto final se une a un sitio de la enzima distinto del sitio activo modificando su 
conformación y, por lo tanto, afectando a este sitio. 
-Forforilación de proteínas : Catalizada por proteínas quinasas que transfieren un grupo 
fosfato proveniente del ATP a un grupo hidroxilo de la cadena lateral de serina, treonina o 
tirosina. 
Esta fosforilación se revierte gracias a enzimas fosfatasas que catalizan la hidrólisis de un 
grupo fosfato de un aminoácido fosforilado. 
Tanto quinasas como fosfatasas son específicas para serina-treonina y para tirosina, 
aunque algunas fosfatasas reconocen cualquiera de los tres fosfoaminoácidos. 
En general, las quinasas actúan como cadena, una sobre otra. Es decir, una quinasa A 
fosforila una quinasa B que, a su vez, fosforila una C, y así sucesivamente. 
-Interacciones proteína-proteína: La unión de una molécula reguladora a la proteína altera 
su conformación mediante cambios en las interacciones entre sus subunidades 
(polipéptidos que pueden ser iguales o distintos en una misma proteína), es decir, en las 
uniones peptídicas. 
Ejemplo : proteína quinasa dependiente de AMPc está constituída por dos subunidades 
reguladoras y dos catalíticas, siendo la actividad de estas últimas inhibida por las primeras, 
por lo cual la proteína se encuentra inactiva. 
Esta se activa al unirse a AMPc mediante sus subunidades reguladoras generándose un 
cambio conformacional de la proteína que disocia al complejo : ahora las dos subunidades 
catalíticas son libres y están activas. 
El AMPc actúa entonces como regulador alostérico que altera interacciones proteína-
proteína. 
Regulación de la vida media de las proteínas 
La vida media de una proteína varía desde pocos minutos a varios días. 
-Vía de la ubiquitina-proteasoma : Las proteínas quedan marcadas para su degradación 
por proteasomas mediante la unión de ubiquitina al grupo amino de la cadena lateral de 
lisina. Estas ubiquitinas son recicladas para utilizarse en un nuevo ciclo. El proceso es el 
siguiente : 
 1) Ubiquitina activada por la unión a E1 (enzima activadora). 
 2) Ubiquitina es transferida a E2 (enzima conjugante). 
 3) E3 (enzima ligasa) transfiere a ubiquitina a la proteína diana. Distintos miembros de la 
familia de E3 reconocen distintos sustratos de proteínas : son responsables del 
reconocimiento selectivo. 
*La estabilidad de algunas proteínas depende de su capacidad para ubiquitinarse. 
-Proteólisis lisosómica : Proteínas entran por endocitosis en los lisosomas, los cuales 
albergan enzimas digestivas (incluyendo proteasas) que degradan a estas proteínas. 
Autofagia : se forman vesículas que capturan a las proteínas y se fusionan con los 
lisosomas (proceso NO selectivo). Esto es responde según la disponibilidad de nutrientes 
en la célula ; bajo ausencia de nutrientes, se degradan proteínas no esenciales y organelas 
para ser reutilizados sus componentes. 
 
TECNICAS: SEMINARIO 5 
OBJETIVO DE LAS TECNICAS: cuantificar la expresión de una determina proteína o de ARN, 
si se expresa (sus niveles de expresión) o no. 
Determinar la localización en un compartimiento celular especifico, también puedo saber si una 
proteína se expresa homogéneamente en un tejido. 
Para comprender: 
Inmunoglobinas: proteínas producidas específicamente por un subgrupo de células del sistema 
inmune que participan en un proceso inmunitario conocido como “Respuesta inmunitaria” 
 Un grupo de células del sistema inmune posee en su membrana proteínas denominadas 
inmunoglobulinas o anticuerpos que pueden reconocer ciertas macromoléculas que pueden estar 
presentes en bacterias. Este reconocimiento especifico se produce porque el sistema inmune a lo 
largo de nuestra maduración, genera millones de clones diferentes de inmunoproteina que 
difieren los unos de los otros levemente en cuál es el motivo molecular que reconocen sus 
anticuerpos y que en función desea maduración prácticamente cualquier macromolecula exógena 
que entre en nuestro organismo será reconocida por un subgrupo particular de linfocitos B que 
tendrán anticuerpos que puedan unirse a esa macromolecula. (Por mas que sea la primera vez que 
esa molecula entre a nustro cuerpo) Diverso reconocimiento de moléculas, es un proceso genético 
denominado “RECOMBINACION SOMATICA” 
Es decir, en los anticuerpos al tener esta capacidad de reconocer específicamente otras proteínas, 
puede ser utilizado como una herramienta para identificar una proteína que sea de interés 
Entonces ¿cómo genero anticuerpos para estudiar una proteína que 
es de interés? 
 
ESTRUCTURA ANTICUERPOS: 4 cadenas polipeptidicas 
2 cadenas “pesadas” internas 
2 cadenas “livianas” externas 
Todos los AA producidos por un individuo son iguales en las cadenas pesadas: FRACCION 
CRISTALIZADA. 
REGION VARIABLE de un clon de llifoncito B: se halla en los otros extremos de la molécula, 
compuestos por N terminal de la cadena pesada y la cadena liviana: Permite el 
reconocimiento de esa proteína exógena “antígeno” 
La proteína de interés probablemente tenga distintos sitios estructurales y cada uno de ellos 
reconocidos por diversos Linfocitos B y esta particularidad de que una proteína tenga distintas 
superficies que puedan ser reconocidas por distintos clones de linfocitos B y pueda generarse una 
diversidad de anticuerpos que reconozcan distintos sectores de esta proteína: “Anticuerpos 
policlonales” provienen de distintos clones de linfocitos B y cada uno de ellos reconociendo una 
superficie tridimensional diferente de la misma proteína. A cada una de estas superficies 
diferentes que fueron reconocidas por este anticuerpo la denominamos Epitopes (motivos 
estructurales) 
A.C Monoclonares: Reconocen únicamente un único etipote de la proteína de interés. Anticuerpos 
derivados de una única línea de células de LB y solo reconocen un etipote del Antigeno. 
ANTICUERPOS… Celulas productoras de anticuerpos + células del cuerpo, generanHIBRIDOMAS 
(hibrido celular) heredan de las células productoras de AA la capacidad de de generar AA 
específicos y heredan de las células tumorales su amplia capacidad mitótica 
Técnicas 
1. Inmunofluorescencia/ Inmunohistoquimica 
Técnica que utiliza anticuerpos. Permite determinar la localización de determinadas 
proteínas en un tejido o población celular. Puede aplicarse como: 
DIRECTA: Utilizar AA que reconozcan una proteína de interés. Para ser observable ese 
reconocimiento se ha unido al AA, a la fracción cristalizante, moléculas de fluorofenos 
(moléculas portadoras de florescencia), al ser iluminadas por una determinada longitud de 
onda pueden emitir fluorescencia. En vez de fluorofenos en la fracción cristlizante, 
colocamos una enzima capaz de generar un producto coloreado natural cuando se le 
agrega un sustrato incoloro(INMUNOHISTO) 
INDIRECTA: Anticuerpo que reconoce nuestra proteína de interés. Ese AA lo llamamos 
“PRIMARIO” NO tendrá en si mismo conjugado en si mismo el Fluorgeno o la enzima, se 
utilizara un AA SECUNDARIO que reconoce la F.C del anticuerpo PRIMARIO 
El aa Secundario (policlonales) tiene unido de manera directa el F o La E. A un único AA 
Primario se unen varios AA secundarios, en promedio entre 5 y 10 AA secundarios pueden 
unirse a la FC de un mismo AA Primario. Por cada proteína de interés, yo tendré asociado 
mucho más Fluorofeno que en el caso de la manera DIRECTA. 
En contraste con la DIRECTA, nos da mayor sensibilidad, es decir como concentra mayor 
cantidad de florescencia puede “Operar” mas fácilmente 
Podemos determinar la localización intracelular de 2 proteinas, pero también la 
localización puede referirse a un subconjunto de células en un determinado tejido 
Para comparar: se lo puede relativizar al área o al numero de células todas. El numero de 
células coloreadas es el dato principal. 
2. Fracción subcelular: 
Objetivo: Obtener fracciones puras de un determinado componente celular 
ETAPA I: Ruptura mecánica del tejido (hay diversas rupturas mecánicas) para poder 
generar una solución en un medio isotomico, que no haga que las células exploten por 
diferencias de presión osmótica, si no que la ruptura este dada por estas fuerzas 
Se genera una solución HOMOGENATO. Hay derivados celulares de: Núcleos, 
mitocondrias, ribosomas, sector soluble de la célula (citosol), microsomas (pequeñas 
vesículas membranosas) 
ETAPA II: Centrifugación: Estrategia para separar los diversos componentes. Va a permitir 
que diversas partículas precipiten hacia el fondo del tubo. Al aplicar esto estamos 
logrando que aumente mediante la aceleración centrifuga la fuerzas gravitatorias efectiva 
de estas partículas. Mayor sea la densidad de las partículas más fácil será el poder 
precipitar hacia el fondo del tubo mediante aumente estas fuerzas gravitatorias. 
Secuencias cada vez más veloces por más tiempo. 
En cada una de estas centrifugaciones el HOMOGENATO se divide en 2 pares: aquellos 
componentes que van hacia el fondo (“Pellet”) y aquello que quedo en suspensión 
(“sobrenadante”) 
 
Voy pasando el sobrenadante hacia el siguiente tubo.. y realizo una nueva centrifugación, 
a más tiempo y a más velocidad. Tiene que ver fundamentalmente con la densidad. 
Como se evalúa si un fraccionamiento ha tenido éxito? Delimir una enzima marcadora, 
una enzima que tenga una localización subcelular particular, y determinar en cuál de esas 
fracciones esta presente la actividad enzimática de la enzima marcadora. Por ejemplo la 
enzima citocromo oxidasa tiene lugar solo en las mitocondrias, o la glucosa G fosforilasa 
tiene lugar en los microsomas. Si observo citocromo oxidasa en el núcleo mi región del 
núcleo está contaminada con mitocondrias. (Función alternativa de la comprobación del 
tejido) 
3. Western Blot. Técnica que utilizara anticuerpos para determinar la presencia 
de una proteína de interés. Nos va a permitir determinar la presencia o niveles de 
expresión de una proteína en particular en una fracción subcelular u homogenato 
1era etapa: separación por tamaño 
Todas las proteínas que están presentes en una molécula van a ser separadas de 
acuerdo a su tamaño. Se logra mediante una electroforesis en gel, utilizara la 
presencia de un campo eléctrico para permitir la migración de ciertas moléculas esto 
implica que las únicas moléculas que podrán migrar serán aquellas que tenga una 
carga eléctrica (ya que migraran por atracción o repulsión a un polo positivo o 
negativo) 
La técnica comienza con tratar a la muestra biológica con un detergente denominado 
“SDS” (..Sulfato de sodio). Este tiene una carga eléctrica negativa que puede unirse en 
altas concentraciones, puede rodear la superficie de todas las cargas polipeptidicas. 
Todas las proteínas se desnaturalizan por acción del gel y pierden su estructura axial y 
además quedan recubiertas por las moléculas de SDS, es decir, quedan rodeadas de 
cargas negativas. Esto las hará apropiadas a todas las moléculas de poder migrar hacia 
el polo contrario 
Esta migración de las moléculas se da en un gel (constituido por una fuerte red de 
fibras, componentes del gel) las moléculas que van a migrar tienen que atravesar una 
serie de diversos poros. Esto implica una dificultad mayor para migrar a aquellas 
moléculas más grandes. Los péptidos más pequeños migran más al mismo tiempo que 
las moléculas grandes migraran menos. 
2da etapa: transferencia a un soporte sólido 
Todas las proteínas que estaban separadas según su tamaño en el gen, transferirlas en 
ese formato ordenado a una membrana más resistente. 
Y una vez que la tenemos en esa membrana resistente vamos a intentar determinar la 
presencia o ausencia de la proteína de interés incumbando esta membrana con AA 
específicos que permitan unirse a esa proteína de interés, si es que esta. 
3era etapa: visualización mediante la marcación de proteínas con el uso 
de anticuerpos primarios o secundarios apropiados 
LEER WB: Poner la misma cantidad del producto que pueda tener nuestra proteína de interés. 
Para comprobar que pusimos la misma cantidad podemos hacer un WB para una proteína 
estructural, por ejemplo la actina, la intensidad nos diría si hemos puesto la misma cantidad total 
del producto. 
Podemos tener AA que no reconozcan la proteína de interés. Un AA que no sea especifico 
implica que reconoce un etipote de nuestra proteína que es lo suficientemente similar al etipote 
de otras proteínas diferentes que también van a ser reconocidas por ese mismo AA. El problema 
frecuente son los AA primarios. 
4. PCR PUNTO FINAL. CONVENCIONAL 
(más que nada para entender la diferencia con la pcr en tiempo real) 
Objetivo: 
Permite la amplificación de un fragmento de ADN en una reacción in vitro. Como consecuencia de 
la aplicación de esta técnica pueden generarse millones de copias del fragmento de ADN 
amplificado a partir de un número muy bajo de copias iniciales. Permite generar un diagnóstico 
https://es.wikipedia.org/wiki/Anticuerpo
temprano de algunas enfermedades. Es un aumento especifico del sector del ADN que quiero 
obtener, un segmento especifico. La PCR es específica. 
 
-Necesito: 
 ADN primer especifico de la secuencia de nucleótidos que queremos reproducir (ARN primer no 
porque se desnaturaliza por la temperatura), ADN-TACpolimeraza (obtenida de una bacteria 
habitante de aguas termales) con característica termoestable, termocicladoras (maquinas), agua, 
magnesio, cadena de ADN molde completa y nucleótidos trifosfatados. Tambien necesito un 
Buffer porque otorga condiciones salimas para el funcionamiento de la enzima. El magnecio 
cataliza la estabilidad de la reacion y co-factor de la TAC 
 
-Funcionamiento: 
Coloco la molécula de ADN en la termocicladora a temperatura normal. Selecciono un primer de 
ADN específico para la secuencia de nucleótidos donde quiero que comience a sintetizar la ADN-
TAC polimerasa la cadena complementaria de nucleótidos.

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