Práctica 13 Cadena Respiratoria

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PRÁCTICA 13. CADENA RESPIRATORIA
Equipo 5. 
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COMPETENCIA
Identificar en qué consiste la cadena respiratoria y saber qué sucede en cada uno de los procesos de esta cadena
INTRODUCCIÓN. LA CADENA RESPIRATORIA 
La cadena respiratoria es el conjunto de proteínas transportadoras de electrones en la membrana interna mitocondrial, con grupos prosteicos capaces de aceptar y donar uno o dos electrones.
La cadena respiratoria está constituida por cinco complejos multienzimáticos y dos transportadores de electrones móviles
FUNDAMENTO
La principal función de la cadena respiratoria o cadena de transporte de electrones el transporte coordinado de  electrones,para producir energía en form a de ATP apartir de ADP  y fosfato inorgánico. El transporte de electrones genera energía que es utilizada para transportar protones de la matriz mitocondrial al espacio intermembrana situado entre las membranas mitocondriales externa e interna.
COMPONENTES DE LA CADENA 
COMPLEJO I 
COMPLEO II
COMPLEJO III
 COMPLEJO IV
FLAVOPROTEINAS 
COENZIMA Q
CITOCROMOS: b, c, c1, a y a3
PROTEINAS CON GRUPOS Fe-S
Complejo I O NADH-Q oxidorreductasa 
La función del complejo  NADH-Q oxidorreductasa  comienza con la unión del NADH a dicho complejo por el lado de la matriz de la membrana mitocondrial interna. Los electrones son luego transportados desde NADH hasta la FMN. Posteriormente, los electrones pasan desde la flavina reducida (FMNH2) hasta las proteínas con Fe-S.
COMPLEJO II O Succinato-Q reductasa
Es el único complejo de la cadena de transporte de electrones incapaz de proveer energía para la síntesis de ATP. Sin embargo, dicho complejo es clave en el proceso, puesto que transfiere los electrones desde FADH2 al resto de la cadena.
COMPLEJO III  O Q-citocromo c óxidorreductasa
Transfiere los electrones desde la coenzima Q reducida hasta el citocromo c. Dicha transferencia ocurre a través de una única vía redox, que se conoce como el ciclo Q.
COMPLEJO IV  O Citocromo c oxidasa
El citocromo c y el O2 son los receptores finales de los electrones derivados de la oxidación de material orgánico, por lo que el complejo IV o citocromo c oxidasa es la enzima terminal en el proceso de transporte electrónico. Este acepta los electrones desde el citocromo c y los transfiere hacia la reducción de O2.
Secuencia del transporte de electrones
Los electrones se transfieren desde los complejos I y II hasta el complejo III gracias a la coenzima Q, y desde allí pasan al complejo IV por medio del citocromo c. Al pasar los electrones por estos cuatro complejos aumentan el potencial de reducción, liberando energía, que es luego usada para la síntesis de ATP
Los complejos de la cadena son independientes
Los complejos I y II se desplazan en la membrana transfiriendo sus electrones a CoQ que se difunde también en la membrana y los transfiere hasta el complejo III, desde donde pasan los electrones al citocromo c que también resulta móvil en la membrana y deposita los electrones en el complejo IV
Inhibidores de la cadena de transporte de electrones
Los barbitúricos, como el amobarbital, inhiben el transporte de electrones a través del complejo I, bloqueando la transferencia de Fe-S a Q. En dosis suficientes, son fatales.
 La antimicina A y el dimercaprol inhiben la cadena respiratoria en el complejo III.
 Los venenos clásicos H2S, el monóxido de carbono y el cianuro inhiben el complejo IV y, por consiguiente, pueden detener por completo la respiración.
 El malonato es un inhibidor competitivo del complejo II. 
METODOLOGÍA
Este procedimiento consta de 3 fases:
	MATERIALES​	REACTIVOS​
	Vasos de precipitado​	Tiras de pH​
	Pipetas de 5 y 10 ml.​	Levadura​
	​	Solución glucosada al 10%​
	​	Solución de dinitrofinol​
	​	Solución azida de sodio​
	​	Agua destilada​
FASE 1. CONTROL
a. Diluir 5 g de levadura en 40 ml de agua destilada. 
b. Medir el pH de la solución. 
c. Repetir la medición de pH cada 3 min dos veces. 
d. Adicionar 5 ml de glucosa al 10%, agitar y medir el pH. 
e. Homogenizar. 
f. Repetir la medición de pH cada 5 min 4 veces. 
g. Homogenizar. 
h. Repetir la medición de pH cada 10 min 2 veces. 
SEGUNDA FASE
a. Diluir 5 g de levadura en 40 ml de agua destilada. 
b. Añadir por decantación (no pipetear) 0.2 ml de la solución de dinitrofenol. 
c. Homogenizar con precaución. 
d. Medir el pH de la solución. 
e. Repetir la medición de pH cada 3 min dos veces. 
f. Esperar 5 minutos. 
g. Adicionar 5 ml de glucosa al 10%, agitar y medir el pH. 
h. Homogenizar. 
i. Repetir la medición de pH cada 5 min 4 veces. 
j. Homogenizar. 
k. Repetir la medición de pH cada 10 min 2 veces. 
TERCERA FASE
a. Diluir 5 g de levadura en 40 ml de agua destilada. 
b. Añadir por decantación (no pipetear) 0.5 ml de la solución de azida de sodio. 
c. Homogenizar con precaución. 
d. Medir el pH de la solución. 
e. Repetir la medición de pH cada 3 min dos veces. 
f. Esperar 5minutos. 
g. Adicionar 5 ml de glucosa al 10%, agitar y medir el pH. 
h. Homogenizar. 
i. Repetir la medición de pH cada 5 min 4 veces. 
j. Homogenizar. k. Repetir la medición de pH cada 10 min 2 veces
Resultados
VIDEOS
VIDEO CADENA TRANSPORTADORA DE ELECTRONES
https://www.youtube.com/watch?v=gHX3kWHUuiU
VIDEO PRÁCTICA RESPIRACIÓN CELULAR 
https://youtu.be/aq3ysb0BaSY