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Sociedad Argentina de Infectología 
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Infecciones del Sistema Nervioso Central 
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Módulo Nro. 2: Diagnóstico microbiológico en ME virales 
Dr. Diego Arrigo 
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Diagnóstico microbiológico de la Meningitis y Encefalitis virales 
 
Introducción 
La mayoría de las meningitis linfocitarias (ML), principalmente las de evolución 
aguda y benigna, están producidas por virus. Las meningitis en general producen 
un gran impacto sanitario. Aunque la tasa de mortalidad asociada a las meningitis 
virales es baja, la morbilidad que producen estos cuadros es elevada. 
Importancia del diagnóstico virológico 
En la actualidad no se cuestiona la importancia del diagnóstico virológico en 
numerosas situaciones clínico-epidemiológicas. El diagnóstico de certeza es 
fundamental para decidir una intervención terapéutica, establecer el pronóstico en 
la evolución de un paciente, monitorear la respuesta a los tratamientos antivirales 
específicos, indicar la necesidad de una vacunación, y desde un punto de vista 
epidemiológico, adoptar medidas de sanitarias en una comunidad. Actualmente 
se dispone de numerosos procedimientos diagnósticos rápidos y eficaces, de 
técnicas moleculares de exquisita sensibilidad y de drogas antivirales específicas 
que deben ser administradas tempranamente en el curso de algunas infecciones 
virales. Por estas razones, la afirmación de que el diagnóstico virológico se 
obtiene tardíamente y resulta inútil, resulta como mínimo, relativa. 
Por otro lado el diagnóstico virológico permite disminuir costos innecesarios en 
antibióticos y en otros procedimientos diagnósticos, realizar el aislamiento en 
cohortes de pacientes con la misma infección para evitar la diseminación 
 
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intrahospitalaria, determinar el estado inmune para indicar la vacunación sólo a 
los pacientes susceptibles y adoptar medidas epidemiológicas para evitar la 
diseminación de ciertos virus. 
Fundamento de la utilización de métodos directos e indirectos 
Para obtener las muestras adecuadas para el diagnóstico virológico es necesario 
conocer la patogenia de cada enfermedad. Si bien existen variaciones, el período 
de incubación de la mayoría de las enfermedades virales es de alrededor de 7 
días. Luego de un período prodrómico, aparecen los síntomas (período de 
estado). En esta etapa, el virus se encuentra replicando activamente y por esta 
razón pueden emplearse para detectarlo métodos directos (aislamiento en cultivos 
y métodos moleculares) para el caso de las meningitis y encefalitis (ME) virales. 
Durante las últimas etapas del período de estado y en la convalecencia temprana 
aparecen los anticuerpos específicos antivirales, siendo la IgM la primer 
Inmunoglobulina detectable y la que permitirá hacer el diagnóstico de infección 
reciente. La seroconversión (o conversión serológica), se estudia en dos 
muestras, la primera obtenida en período de estado y la segunda a los 14 - 21 
días. 
 
 
 
 
 
 
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Tabla 1: Agentes causales de las meningoencefalitis (ME) virales, muestras 
de elección y técnicas de detección utilizadas 
Obtención de las muestras para diagnóstico de las ME virales 
Para el caso de las ME de origen viral, el liquido cefalorraquideo (LCR) constituye 
la muestra de elección, debiéndose obtener en forma estéril para evitar 
contaminación con microorganismos de la piel. 
Se debe recolectar al menos 1 mL de LCR por punción lumbar y luego enviar la 
muestra rápidamente al laboratorio. 
Como se puede observar en la tabla 1, a las muestras de LCR con sospecha de 
ME de origen viral, se les podrá detectar Enterovirus (Echovirus y Coxsackie), 
 
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Herpes virus I y II, Varicela-Zoster, Epstein Barr, Citomegalovirus, Herpes VI, 
Parotiditis, Arbovirus, virus de la Coriomeningitis linfocitaria y Rabia . 
En determinadas situaciones es importante remitir al laboratorio suero o sangre 
entera. La sangre debe obtenerse mediante una venopuntura realizada en una 
superficie cutánea luego de efectuada la asepsia de la zona, utilizando aguja y 
jeringa esterilizados. La sangre se colocará en tubos con anticoagulante (plasma) 
o sin anticoagulante (suero). Luego se enviarán al laboratorio. En ningún caso se 
deberán congelar las muestras. 
Conservación y transporte al laboratorio 
a) Muestras para estudios de biología molecular en ME virales 
En muestras para estudios con RNA (ejemplo: enterovirus, virus del Nilo 
occidental, VIH, etc.) se debe tener en cuenta la significativa labilidad del mismo 
en condiciones ambientales, así como su fácil degradación por ribonucleasas (que 
pueden estar presentes en las manos del operador). El envío del LCR al 
laboratorio debe ser inmediato y preferiblemente, el médico solicitante debe avisar 
de esta circunstancia al sector microbiología. 
Si no se puede enviar el LCR rápidamente al laboratorio, el mismo puede 
conservarse a 4 °C, si se va a procesar en un tiempo inferior a 48 horas. Si fuera 
a procesarse en períodos de tiempo mayores, se recomienda conservarlo 
congelado a –80 °C. No deben conservarse a –20 °C para el estudio viral, ya que 
esta temperatura puede tener un efecto deletéreo para los virus ARN. 
Si bien el DNA es bastante estable en condiciones ambientales, se recomienda el 
transporte inmediatamente después de ser obtenida, de toda muestra clínica para 
estudios de biología molecular. 
 
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En el laboratorio, las muestras clínicas que no son procesadas inmediatamente 
para estudios de biología molecular, son habitualmente guardadas en 
congeladoras que mantienen el frío entre -70°C y -80°C. 
b) Muestras para estudios serológicos en ME virales 
Con el objeto de reducir la pérdida por degradación del RNA viral en las muestras 
para suero y plasma, es recomendable que estas muestras lleguen al laboratorio 
dentro de las 3 horas de realizada la extracción. 
Es importante considerar que si la muestra ha sido obtenida adecuadamente pero 
es conservada y/o transportada en condiciones inadecuadas, la posibilidad de 
obtener el diagnóstico etiológico puede perderse. 
El envío al laboratorio debe realizarse siempre en condiciones de bioseguridad. 
Esto implica el uso de tubos tapados herméticamente y el transporte en gradillas o 
recipientes rígidos. Cada muestra debe enviarse debidamente rotulada con los 
datos del paciente dentro de una bolsa plástica herméticamente cerrada. Por fuera 
debe adjuntarse una orden que indique el estudio que se solicita, el tipo demuestra enviada, y la ficha epidemiológica con datos de viajes, vacunas recientes, 
fecha de comienzo de síntomas y fecha de toma de la muestra. Recordar enviar 
siempre los datos del médico remitente dado que en muchas situaciones es 
necesaria una comunicación directa con el mismo. 
Diagnóstico de laboratorio en ME virales 
Hasta hace muy poco, el diagnóstico de laboratorio de las ME virales se realizaba 
mediante técnicas serológicas o cultivo celular. Sin embargo, el cultivo celular en 
muchos casos tiene muy pobre sensibilidad u ofrece un resultado demasiado 
tardío para la mayoría de los virus en consideración. Además, la muestra idónea 
 
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para diagnosticar la etiología viral de las ME mediante cultivo celular, es el LCR, 
en el cual las cargas virales no suelen ser elevadas. Una demora en el transporte 
o en el procesamiento de la muestra disminuye aún más el número mínimo de 
virus viables necesarios para replicarse en líneas celulares. La serología, por otra 
parte, es un método indirecto que no permite establecer un diagnóstico de certeza. 
Por todo ello, las técnicas de amplificación de ácidos nucleicos (TAAN) son, hoy 
en día, el método de referencia para el diagnóstico de laboratorio de estas 
infecciones. 
El uso de métodos automáticos de extracción de ácidos nucleicos y de formatos 
de PCR en tiempo real y PCR Multiplex simplifica enormemente todo el proceso. 
Es fundamental la participación de los laboratorios en controles de calidad tanto 
externos como internos, porque que permite asegurar la validez y la 
reproducibilidad de los métodos diagnósticos. 
Gráfico 1: Infección viral aguda: métodos directos e indirectos de diagnóstico (el 
día 0 indica el comienzo de los síntomas) 
 
 
 
 
 
 
 
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Métodos directos 
Se denominan métodos directos de diagnóstico virológico a aquellos que detectan 
la presencia del virus (o alguno de sus componentes) en muestras clínicas, lo que 
puede realizarse a través de diversas técnicas. En muestras con con sospecha de 
ME de origen viral, se investiga la presencia del agente viral (aislamiento viral) o 
de su genoma. 
1) Investigación de la presencia del agente viral (mediante la observación de su 
replicación en cultivos celulares) 
El aislamiento viral es la técnica clásica y fue una de las primeras utilizadas en 
virología. Permite la obtención de la cepa viral, lo que presenta gran importancia 
no solo para el diagnóstico de un caso individual sino para estudios 
epidemiológicos. Sus desventajas son: el tiempo de espera de los resultados 
(días o semanas), su alto costo y la compleja realización. 
2) Investigación del genomas viral (PCR real time, PCR multiplex , etc) 
Son procedimientos rápidos de diagnóstico virológico que permiten obtener un 
resultados a pocas horas de obtenida la muestra, lo que resulta de gran valor 
clínico. Estos procedimientos son de mas fácil ejecución y no requieren 
infraestructura para aislamiento del virus en cultivos celulares. 
PCR en tiempo real 
Es una variante de la PCR convencional con extrema importancia en el 
diagnóstico virológico. Su utilidad se funda en la rápida amplificación, detección y 
cuantificación simultaneas del DNA mediante fluorescencia durante el evento de la 
 
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amplificación. Básicamente, consiste en una PCR acoplada a un lector de 
fluorescencia. 
Ventajas: 
1) Menor tiempo requerido para la amplificación, por la tanto brinda un resultado 
rápido. 
2) Utilización de un sistema cerrado con menor chance de contaminación, 
evitando así resultados falsos positivos. 
3) Mayor precisión y mayor rango dinámico. 
4) Simultaneidad de ensayos cuali-cuantitativos, múltiples y de detección de 
mutaciones. 
Film-Array Meningitis/Encephalitis Panel ® 
Este panel es una prueba de diagnóstico multiplexada y cualitativa de ácido 
nucléico in vitro, prevista para utilizarse con los sistemas Film-Array®. Permite la 
detección e identificación simultáneas de múltiples ácidos nucleicos de bacterias, 
virus y levaduras directamente de especímenes de líquido cefalorraquídeo (LCR) 
obtenidos a través de una punción lumbar procedente de individuos con signos o 
síntomas de meningitis o encefalitis. Mediante este panel se han identificado los 
siguientes organismos: 
 Bacterias: 
 Escherichia coli K1 
 Haemophilus influenzae 
 Listeria monocytogenes 
 
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 Neisseria meningitidis 
 Streptococcus agalactiae 
 Streptococcus pneumoniae 
 
Virus: 
 Cytomegalovirus 
 Enterovirus 
 Herpes simplex virus 1 
 Herpes simplex virus 2 
 Herpes virus humano 6 
 Parechovirus humano 
 Virus varicella-zoster virus 
 
Levaduras: 
 Cryptococcus neoformans/gattii 
 
El panel está indicado como una ayuda en el diagnóstico de agentes específicos 
de meningitis o encefalitis y sus resultados deberán utilizarse, junto con otros 
datos clínicos, epidemiológicos y de laboratorio. Los resultados del panel no se 
deberán usar como la base exclusiva del diagnóstico, del tratamiento o de otras 
decisiones de gestión que afecten al paciente. Los resultados positivos no 
 
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descartan la infección simultánea con organismos no incluidos en el FilmArray ME 
Panel®. El agente detectado puede que no sea la causa definitiva de la 
enfermedad. 
El FilmArray ME Panel® está diseñado para su uso junto con cultivos estándar 
para recuperar el organismo, determinar el serotipo y realizar pruebas de 
susceptibilidad a los antibióticos. 
Métodos Indirectos 
Se denominan métodos indirectos o serológicos a aquellos que investigan la 
respuesta inmune humoral mediada por anticuerpos específicos antivirales en el 
suero o plasma del paciente. Por ende no detectan la presencia del agente 
etiológico. Para realizar un diagnóstico virológico sustentado en la virología es 
necesario determinar la conversión serológica o bien la presencia de IgM 
específica antiviral. 
Se define a la conversión serológica como la aparición o aumento de 4 o más 
veces del título de anticuerpos de tipo IgG entre dos muestras pareadas de suero, 
la primera obtenida en período agudo y la segunda en la convalecencia (14-21 
días después del comienzo de los síntomas) y procesadas simultáneamente. Esta 
técnica permite un diagnóstico de certeza, aunque habitualmente es tardío 
(retrospectivo). Esta característica le resta utilidad como método de diagnóstico 
clínico, si bien es de suma utilidad para obtener datos epidemiológicos. 
La detección de IgM específica antiviral en una única muestra de suero obtenida 
en el período agudo o en la convalecencia temprana, permite realizar un 
diagnóstico de certeza en muchas infecciones virales, conla enorme ventaja sobre 
 
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el procedimiento anterior de que el resultado estará disponible en tiempos 
clínicamente relevantes (procedimiento rápido). 
Las técnicas de ELISA comerciales son generalmente las preferidas para el 
diagnóstico serológico por su buena sensibilidad y capacidad de analizar un gran 
volumen de muestras. Otros métodos serológicos que se utilizan para la detección 
de anticuerpos específicos son, la reacción de fijación de complemento, el 
immunoblot y la inmunofluorescencia indirecta. Hay que tener en cuenta la 
posibilidad de que se produzcan reacciones cruzadas cuando se trata de la 
detección de anticuerpos frente a virus de la misma familia. 
 
Lecturas recomendadas: 
1) Libro de G. Oubiña, J.R Carballal (2014), Virología Médica, 4ta Edición 
2) J.M-Navarro Martí ,(2010) Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica 
28(Supl1):56-61 
3) Kimberly E. Hanson,(2016) The first Automated Molecular Diagnostic Panel for 
Meningitis and Encephalitis: How well does It perform, and when should It be 
used? J.Clin Microbiol 54:2222-2224 USA. 
4) Leber AL, Everhart K, Balada-Llasat J-M, Cullison J, Daly J, Bourzac KM. 
(2016). evaluation of BioFire FilmArray Meningitis/Encephalitis Panel for detection 
of bacteria, viruses, and yeast in cerebrospinal fluid specimens. J Clin Microbiol 
54:2251–2261.