Practica 3

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Universidad Autónoma De Baja California 
Facultad de Ciencias Químicas e Ingeniería 
Laboratorio de Microbiología General 
 
Practica 3: 
Técnicas de Inoculación. 
Alumna: 
Flores Zapotl Gladiz Berenisse 
 
Grupo: 
452 
 
Fecha de entrega: 
22-Abril-2022 
 
Docente: 
Dra. Bertha Landeros Sánchez 
 
 
 
COMPETENCIA 
Utilizar las diferentes técnicas de inoculación microbiana en medios de cultivo, a través de la práctica 
de las diversas técnicas de sembrado, para la correcta selección de estas técnicas según se 
requiera en los estudios microbiológicos, así como conocer e identificar la morfología colonial de los 
microorganismos, cuidando su propia seguridad y la del entorno. 
FUNDAMENTO TÉORICO 
En el laboratorio de Microbiología la técnica más usada es la inoculación de los medios de cultivo, 
o sea, la transferencia de microorganismos de un medio ambiente a otro con el propósito de 
cultivarlos y aislarlos de otros, para poder estudiarlos debida y posteriormente identificarlos. 
Un inóculo corresponde a una cantidad suficiente y representativa de un microorganismo problema. 
Así pues, se debe partir de un cultivo puro en una concentración adecuada. 
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN 
El paso de una muestra microbiana a un medio de cultivo ya sea sólido o líquido, se denomina 
siembra o inoculación o inoculación. Los medios de cultivo, ya sea en placa o en tubo, se pueden 
inocular con la muestra mediante varios métodos. 
 
 
 
PLACAS DE AGAR (CAJA PETRI) 
 
1. TÉCNICA DE SEMBRADO EN ESTRÍA. El inóculo primario efectúa mediante un asa, Una vez hecho el inóculo 
primario se puede emplear un asa o alambre de picadura para diseminar la muestra en los cuatro cuadrantes 
de la placa de agar. El inóculo se disemina sucesivamente en estrías con un movimiento de arriba hacia abajo 
en cada cuadrante, dando vuela a la caja en ángulos de 90o. El asa se debe esterilizar con fuego entre las 
sucesivas estrías. El objetivo de esta técnica es diluir el inóculo suficientemente sobre la superficie del agar 
para así poder obtener colonias bacterianas bien aisladas a partir de unidades formadoras de colonias. 
Existen varios métodos para inocular con estría, como son: técnica de los cuatro cuadrantes, por 
agotamiento (estría múltiple), por aislamiento en estría y técnica de los tres giros. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
2. TÉCNICA DE SEMBRADO CON UN APLICADOR DE ALGODÓN (HISOPO) : Es un técnica muy usada en 
medicina, la cual consiste en obtener una muestra con un hisopo estéril de un cultivo mixto, y trazar en la 
placa de agar unas cuantas estrías inoculando una pequeña zona en el borde de la placa. Posteriormente 
se pasa con un asa estéril la zona inoculada, y se procede como la anterior técnica. 
 
3. TÉCNICA PARA RECUENTO SEMICUANTITATIVO DE COLONIAS: Para esta técnica se utiliza un asa de 
platino, calibrada para inocular 0.01 o 0.001 ml. de líquido, se sumerge en la muestra y se practica una sola 
estría que cruce el centro de la placa de agar. Posteriormente el inóculo se disemina uniformemente en ángulo 
recto respecto de la estría primaria, luego la placa se gira en 90o y se disemina el inóculo hasta cubrir 
toda la placa de agar. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
4. TÉCNICA DE LA VARILLA ACODADA DE VIDRIO. Otro método de aislar microorganismos y cultivarlos 
requiere el uso de una varilla doblada en ángulo. Con un asa o pipeta Pasteur colocar una gota del cultivo 
bacteriano y depositarla cerca del borde de la superficie del agar, y con la varilla estéril dispersar uniformemente 
la gota de microorganismos sobre toda la superficie de la placa de agar. Este procedimiento sirve para que 
en algunas partes de la superficie de agar se aíslen organismos individuales que formarán colonias 
puras. 
 
 
 
5. TÉCNICA DE SIEMBRA POR DILUCIÓN. Se dispondrá de un grupo de tubos con agua ésteril, enumerados, 
al primer tubo se le adicionará una cantidad conocida de muestra microbiana, se homogeniza, y se pasa 
una cantidad específica al segundo tubo, se repite el proceso anterior para el tercer tubo, y así sucesivamente 
hasta obtener la dilución deseada. Dicha dilución se inocula 1 mililitro en las placas de agar, y se extiende 
con varilla acodada.
TUBOS CON CALDO Y AGAR. 
 
Los medios de cultivo se pueden distribuir también en tubos, ya sea en caldo o en agar, estos últimos 
sólidos o semisólidos. 
 
1. TÉCNICA PARA INOCULAR CALDOS DE CULTIVO: Los tubos con caldo se inoculan 
inclinando el tubo y acercar el asa con la muestra a la superficie del vidrio justo sobre 
el punto donde hace ángulo el caldo, así cuando se regresa a su posición original el 
inóculo queda sumergido debajo de la superficie del medio. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
2. TÉCNICA PARA INOCULAR TUBOS CON AGAR EN “PICO DE FLAUTA”: Se puede 
inocular sola la superficie con asa desde abajo hacia arriba con movimiento en “S”. O 
bien se inocula primero atravesando el agar en profundidad con un alambre de 
picadura, y se continúa sembrando por estrías la parte inclinada desde abajo hacia 
arriba con un movimiento en “S”. 
 
3. TÉCNICA PARA INOCULAR TUBOS CON MEDIO SEMISÓLIDO: Por lo general 
este tipo de medios se utilizan para pruebas de movilidad, por lo que se inoculan en 
forma recta, atravesando en profundidad al medio, es importante que el alambre de 
picadura se retire siguiendo el mismo trayecto utilizado para atravesar el medio ya que si 
se hacen movimientos en abanico durante la inoculación se desarrollaría un crecimiento 
sobre este dando un resultado falso positivo sobre movilidad. 
 
 
 
INTERPRETACIÓN DE LOS CULTIVOS. 
 
La interpretación de los cultivos después de una incubación de 24 a 48 horas requiere de tres 
procedimientos importantes: 
 
 
a. MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA O COLONIAL. 
 
b. TINCIÓN DE GRAM Y MORFOLOGÍA MICROSCÓPICA. 
 
c. CARACTERÍSTICAS METABÓLICAS. 
 
MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA O COLONIAL. 
 
La evaluación de los resultados en las placas de agar, se hacen primeramente 
mediante la observación directa de los cultivos, generalmente los tubos con 
cultivo no se utilizan para observar la morfología colonial, más bien son para 
enriquecer el desarrollo de las bacterias, para que se puedan aislar mayor 
cantidad de colonias. 
Para su examen las placas de agar se deben inclinar en distintas direcciones 
con iluminación brillante directa, de modo que la luz sea reflejada desde diversos 
ángulos. 
 
 
CARACTERÍSTICAS DE LAS COLONIAS USADAS EN LA IDENTIFICACIÓN 
DE BACTERIAS 
 
1TAMAÑO. Diámetro en mm. 
2.FORMA. Puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide, fusiforme. 
3.ELEVACIÓN. Plana, elevada, convexa, monticular, umbeliforme, umbilicada. 
4.MARGEN. (Borde de colonia). Entero, ondulado, lobulado, aserrado, 
filamentoso, rizado. 
5.COLOR. Blanco, amarillo, negro, naranja, etc. 
6.SUPERFICIE. Brillante, mate, etc. 
7.DENSIDAD. Opaca, translúcida, transparente, etc. 
8.CONSISTENCIA. Butirosa, viscosa, membranosa, quebradiza, etc. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
REACCIONES EN MEDIOS DE AGAR USADOS EN LA IDENTIFICACIÓN DE 
BACTERIAS. 
 
1. HEMÓLISIS EN AGAR SANGRE. 
Alfa (α). Aclaramiento parcial de la sangre alrededor de las colonias con coloración 
verde del medio. 
Beta (β). Aclaramiento completo de la sangre alrededor de las colonias debida a la 
lisis de los glóbulos rojos. 
Gamma (γ ). No hay cambio en el medio. 
 
2. PRODUCCIÓN DE PIGMENTOS EN MEDIOS DE AGAR. 
A). Pigmentos hidrosolubles, que colorean el medio. 
B). Piocianina. 
C). Pigmentos fluorocrómicos (fluoresceína). 
D). Pigmentos no difusibles confinados a las colonias. 
 
3. OLOR. 
Es difícil describir esta característica, pero algunos ejemplos de bacterias con 
olores característicos son: 
Pseudomonas spp. Olor a zumo de uvas. 
Proteus spp. Olor a chocolate quemado. 
Streptomyces spp. Olor a sótano enmohecido. 
Clostridium spp. Olor fétido, nauseabundo. 
 
 
PARTE EXPERIMENTAL. 
 
MATERIAL. 
 
Asa de nicromo 
Alambre para picadura 
Hisopos 
Varilla acodadaMechero Meker 
Mechero Bunsen 
Solución de Alcohol isopropílico 70% 
Placas de Agar 
Tubos con caldo, agar, y agar semisólido 
Cepas de Bacterias. 
 
 
TÉCNICA 
 
1. TÉCNICA DE SEMBRADO EN ESTRÍA POR AGOTAMIENTO. 
 
A). Tomar una muestra del caldo con un asa de siembra estéril y depositarla en 
una extrema de la placa de agar EMB. 
B). Realizar estriado con movimientos de zig zag de un extremo al otro de la 
placa. 
C). Cuidar de no levantar el asa de la placa hasta con concluir. 
D). Rotular la caja e incubarla a 37 o C por 24 a 48 horas. 
 
2. TÉCNICA DE SEMBRADO EN ESTRÍA MULTIPLE. 
 
A). Tomar una muestra con asa estéril y depositarla en un extremo de la placa de 
agar Nutritivo. 
B). Extender la muestra de un extremo al otro de ésta, solo en la parte superior. 
C). Flamear el asa, y girar un poco la caja y repetir el estriado. 
D). Repetir est proceso una 4 a 5 veces. 
E). Rotular e incubar a 37oC por 24 a 48 horas. 
 
3. TÉCNICA DE SEMBRADO EN ESTRÍA DE LOS TRES GIROS. 
 
A). Tomar una muestra con asa estéril del cultivo y depositarla en un extremo de la 
paca de agar sangre. 
B). Extender la muestra hasta la mitad superior de la caja. 
C). Sin flamear el asa girar la caja 90o y volver a sembrar en estría. 
D). Girar la placa nuevamente y repetir hasta completar toda la caja. 
E). Rotular la caja e incubar a 37o por 24 a 48 horas. 
 
4. TÉCNICA DE SEMBRADO CON HISOPO. 
 
A). Impregnar el hisopo estéril en la muestra y en condiciones asépticas 
colocarla en un extremo de la caja de agar MSA. 
B). Estriar con asa estéril por el método de estría múltiple. 
C). Rotular e incubar a 37o C por 24 a 48 horas. 
 
5. TÉCNICA DE SEMBRADO CON VARILLA ACODADA. 
 
A). Colocar 0.1 ml. de la muestra con una pipeta estéril en un extremo de la 
placa de agar de Mac Conkey . 
B). Con una varilla previamente flameada con alcohol y enfriada, distribuir la 
muestra en toda la placa, según las indicaciones de su maestro. 
C). Reposar por 15 minutos la caja con tapa hacia arriba e incubar a 37oC por 
24 a 48 horas. 
 
 
 
6. TÉCNICA DE SEMBRADO SEMICUANTITATIVO. 
 
A). Con un asa estéril tomar una muestra del cultivo y sembrar en una sola estría a 
lo largo de la caja de agar SS. 
B). El inóculo se disemina en ángulo recto respecto a la estría primaria. 
C). Se gira la caja en ángulo de 90o y se disemina el inóculo hasta cubrir toda la 
caja. 
D). Rotular e incubar a 37o C por 24 a 48 horas. 
 
7. TÉCNICA DE SEMBRADO EN TUBO CON MEDIO LÍQUIDO. 
 
A). Inclinar el tubo con caldo en un ángulo de aproximadamente 30°. 
B). Tomar con asa estéril una muestra del cultivo y depositarla justo en donde 
hacen ángulo el caldo y la pared del 
 
D). Regresar el tubo a su posición original y mezclar el inóculo con movimientos 
ligeros. E). Rotular e incubar en posición recta a 37oC por 24 a 48 horas. 
 
 
8. TÉCNICA DE SEMBRADO EN TUBO CON MEDIO SEMISÓLIDO. 
 
A). Tomar una muestra del cultivo con alambre para picadura. 
B). Inocular el tubo atravesando en profundidad el medio semisólido, cuidando 
de seguir el mismo trayecto al retirar el alambre, para evitar falsos positivos. 
C). Rotular e incubar a 37o C por 24 a 48 horas. Incubar en posición recta. 
 
9. TÉCNICA DE SEMBRADO PARA TUBOS EN “PICO DE FLAUTA”. 
 
A). Tomar una muestra del cultivo con asa estéril. 
B). Estriar en forma de zig zag sobre el pico de flauta. 
C). Rotular e incubar a 37oC por 24 a 48 horas. Incubar en forma horizontal. 
 
NOTA: Todas las cajas se incuban invertidas 
Entre cada siembra siempre flamear el asa o alambre para picadura. 
Todo material desechable se depositará en bolsa para material contaminado para 
su posterior esterilización y destrucción. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
CEPA. Escherichia coli 
MEDIO DE CULTIVO: Selectivo Agar “Mac Conkey” 
TÉCNICA DE INOCULACIÓN: Técnica de Sembrado en Estrías 
RESULTADOS. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
CARACTERÍSTICA 
 
RESULTADO 
 
TAMAÑO 
10 mm aproximadamente 
 
FORMA 
Circular 
 
ELEVACIÓN 
Convexo 
 
MARGEN 
Ondulado 
 
COLOR 
Rosado 
 
SUPERFICIE 
Mate 
 
DENSIDAD 
Opaca 
 
CONSISTENCIA 
Membranosa 
 
OLOR 
Fétido 
 
HEMÓLISIS 
------- 
 
PIGMENTACIÓN 
Hidrosoluble 
Escherichia coli 
CEPA. Salmonella 
MEDIO DE CULTIVO: Selectivo Agar “Mac Conkey” 
TÉCNICA DE INOCULACIÓN: Técnica de Sembrado en Estrías 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
CARACTERÍSTICA 
 
RESULTADO 
 
TAMAÑO 
10 mm aproximadamente 
 
FORMA 
Circular 
 
ELEVACIÓN 
Convexo 
 
MARGEN 
Ondulado 
 
COLOR 
Beige 
 
SUPERFICIE 
Mate 
 
DENSIDAD 
Opaca 
 
CONSISTENCIA 
Membranosa 
 
OLOR 
Fétido 
 
HEMÓLISIS 
------- 
 
PIGMENTACIÓN 
Hidrosoluble 
Salmonella 
TUBOS CON MEDIO DE CULTIVO INOCULADOS. 
 
CEPA. Escherichia coli MEDIO DE CULTIVO: Selectivo Agar “Mac Conkey” 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
CEPA: Escherichia coli MEDIO DE CULTIVO: Selectivo Agar “EMB” 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TAMAÑO: 3mm aproximadamente 
 
FORMA: Irregular 
 
ELEVACIÓN: Plano 
 
MARGEN: Ondulado 
 
COLOR: Rosado 
 
SUPERFICIE : Mate 
 
DENSIDAD: Opaca 
 
CONSISTENCIA: Quebradiza 
 
 
PIGMENTACIÓN: Hidrosoluble 
 
TAMAÑO: 3mm aproximadamente 
 
FORMA: Puntiforme 
 
ELEVACIÓN: Convexo 
 
MARGEN: Entero 
 
COLOR: Verdoso 
 
SUPERFICIE : Brillante 
 
DENSIDAD: Translúcida 
 
CONSISTENCIA: Membranosa 
 
CEPA. Salmonella MEDIO DE CULTIVO: Selectivo Agar “Mac Conkey” 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
CEPA: Salmonella MEDIO DE CULTIVO: Selectivo Agar “EMB” 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TAMAÑO: Muy pequeño 
 
FORMA: Irregular 
 
ELEVACIÓN: Plano 
 
MARGEN: Ondulado 
 
COLOR: Beige 
 
SUPERFICIE : Mate 
 
DENSIDAD: Opaca 
 
CONSISTENCIA: Quebradiza 
 
 
PIGMENTACIÓN: No difusible confinados a las colonias 
 
TAMAÑO: 5 mm aproximadamente 
 
FORMA: Irregular 
 
ELEVACIÓN: Plano 
 
MARGEN: Lobulado 
 
COLOR: Beige 
 
SUPERFICIE : Mate 
 
DENSIDAD: Opaca 
 
CONSISTENCIA: Quebradiza 
 
OLOR: Fétido 
 
PIGMENTACIÓN: Hidrosoluble 
OBSERVACIONES 
 
*Nuestra muestra de cultivo no dio crecimiento bacteriano, debió a que utilizamos 
orina; por lo tanto, un equipo nos cedió una nuestra de crecimiento bacteriano de 
aguas residuales. 
 
*No todos nuestros tubos logro formar el pico de flauta 
 
 
CONCLUSIÓN 
 
Se inoculo mediante la técnica de sembrado en estría, en agares selectivos como 
EMB y Mac Conkey; el cual transcurridas 48 horas de incubar; se observo e 
identifico la morfología colonial de cada de las cepas; que nos permiten describir 
las características que tiene cada una de las colonias y de esta forma inferir el 
microorganismo que a crecido en nuestro cultivo. 
 
 
CUESTIONARIO 
 
1. ¿Por qué las cajas se deben incubar en forma invertida? 
Para evitar contaminaciones y que el agua de condensación caiga sobre el 
medio. 
 
 
2. ¿Por qué se debe quemar el asa entre cada grupo de estrías en 
aislamiento por estría múltiple? 
Para esterilizar el asa y de esta forma obtener colonias de bacterias aisladas. 
 
 
3. De las técnicas de inoculación utilizadas en las placas de agar, ¿Con 
cuál de ellas cree usted que obtendría mejor aislamiento de 
microorganismos? ¿Por qué? 
Con la técnica de sembrado en estría múltiple; ya que permite aislar bacteria 
a partir de unidades formadoras de colonias. 
 
 
4. ¿Con que fin se inocula atravesando el medio semisólido, y que prueba 
es? 
Para determinar la movilidad de un microorganismo; esta técnica es la 
inocular tubos con medio sólido. 
 
 
5. En la técnica de sembrado con hisopo, solo la muestra se coloca con el 
hisopo, pero se estría con asa. ¿Por qué? 
 
Para lograr separar colonias individuales de la cepa de interés 
 
6. ¿Cuáles son los procedimientos para analizar los resultados del 
cultivo? 
Primeramente, la observación directa de la muestra, el cual podremos 
obtener la informaciónde la morfología macroscópica o colonias, por 
siguiente Tinción Gram y Morfología Microscópica; finalmente identificación 
de características metabólicas 
 
 
7. ¿Para qué es necesario revisar la morfología colonial de todas las 
colonias que crecieron en el medio de cultivo? 
Para identificar y diferencias las colonias; para posteriormente clasificar a los 
microorganismos dentro de grupos taxonómicos. 
 
 
8. ¿Por qué no es recomendable revisar la morfología colonial de un 
crecimiento en tubo? 
Debido a que los tubos tienen espacios reducidos y no se puede apreciar 
adecuadamente las características de las colonias que hayan crecido. 
 
 
 
9. ¿Cuál es la diferencia en cuanto al crecimiento colonial entre un agar 
inclinado en tubo y una placa de agar? 
 
Agar inclinado en tubo: Las células bacterianas se dividirán rápidamente y en 
varias horas habrán producido suficientes células que pueden ser examinadas 
en el microscopio. En la siembra se debe tener cuidado, debido a contaminarse 
por aire puede superar en crecimiento al microorganismo de estudio. 
 
Placa de Agar: Actúan como indicadores, el cual los organismos no son 
seleccionados en base al crecimiento, sino por un cambio de color en algunas 
colonias, generalmente causada por la acción de una enzima del 
microorganismo, sobre un componente del medio. 
 
 
10. Después de revisar y describir sus observaciones en los cultivos, ¿Qué 
haría para identificar de que bacteria se trata? 
 
Investigar que bacterias crecen en los agares selectivos de EMB y Mac 
Conkey, posteriormente en base a las características identificadas 
morfológicamente ir descartando las bacterias que no cumplan con las 
características morfológicas descritas por las colonias obtenidas. Para 
confirmar que es realmente la bacteria que se considera aplicar Tinción 
Gram y observar al microscopio. 
 
 
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
 
[1]Métodos. (s/f). Ugr.es. Recuperado el 12 de abril de 2022, de 
https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iv/pb-iv-3-metodos.htm 
[2]Unam.mx. Recuperado el 13 de abril de 2022, de 
http://www.ete.enp.unam.mx/IntroAnaBacter.pdf 
[3]MORFOLOGÍA DE LAS COLONIAS BACTERIANAS. (s/f). Slideplayer.es. 
Recuperado el 22 de abril de 2022, de https://slideplayer.es/slide/12997412/ 
 
[4]Www.bd.com. Recuperado el 22 de abril de 2022, de 
https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=31333#:~:text=El%20crecimiento%20en%
20el%20medio,de%20fermentaci%C3%B3n%20de%20la%20lactosa. 
 
 
[5] Sciencedirect.com. Recuperado el 22 de abril de 2022, de 
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0716864014700720 
 
[6] Patrones de crecimiento en agar inclinad. (s/f). scientist-site. Recuperado el 22 
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de-crecimiento-en-agar-inclinad 
 
 
 
 
 
 
 
 
https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iv/pb-iv-3-metodos.htm
http://www.ete.enp.unam.mx/IntroAnaBacter.pdf
https://slideplayer.es/slide/12997412/
https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=31333#:~:text=El%20crecimiento%20en%20el%20medio,de%20fermentaci%C3%B3n%20de%20la%20lactosa
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https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0716864014700720