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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE QUÍMICA ÁCIDO PERFÓRMICO COMO DESINFECTANTE PARA EL TRATAMIENTO DE AGUA CON DISTINTA CALIDAD MICROBIOLÓGICA: COMPARACIÓN CON CLORO Y ÁCIDO PERACÉTICO. T E S I S QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: INGENIERO QUÍMICO P R E S E N T A : MARÍA JOSÉ CÓRDOVA CERVANTES México, D.F. 2012 http://depa.pquim.unam.mx/logos/images/fullsize/fq.JPG UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. JURADO ASIGNADO Presidente: RODOLFO TORRES BARRERA. Vocal: VÍCTOR MANUEL LUNA PABELLO. Secretario: ALMA CONCEPCIÓN CHÁVEZ MEJÍA. 1 er. Suplente: MARÍA RAFAELA GUTIÉRREZ LARA. 2 do. Suplente: ALFONSO DURAN MORENO. Lugar donde se realizó la tesis: INSTITUTO DE INGENIERÍA ASESORA DE TESIS: DRA. ALMA CONCEPCIÓN CHÁVEZ MEJÍA. _____________________________ SUPERVISORA TÉCNICA: M. EN C. CATALINA MAYA RENDÓN. _____________________________ SUSTENTANTE: MARÍA JOSÉ CÓRDOVA CERVANTES. _____________________________ i Índice. Resumen ........................................................................................................................................................ 1 Introducción. ................................................................................................................................................. 3 Hipótesis ........................................................................................................................................................ 6 Objetivo. ........................................................................................................................................................ 6 1 Antecedentes. ....................................................................................................................................... 7 2 Marco teórico ........................................................................................................................................ 9 2.1 Legislación. ....................................................................................................................................... 9 2.1.1 Agua Residual ........................................................................................................................ 9 2.2 Microorganismos seleccionados para el estudio. .......................................................................... 14 2.2.1 Coliformes Fecales............................................................................................................... 15 2.2.2 Salmonella spp. ................................................................................................................... 16 2.2.3 Clostridium perfringens. ...................................................................................................... 17 2.3 Oxidantes químicos. ....................................................................................................................... 18 2.3.1 Cloro. ................................................................................................................................... 19 2.3.2 Ácido peracético (APA). ....................................................................................................... 23 2.3.3 Ácido Perfórmico. ................................................................................................................ 28 2.4 Reacciones de oxido reducción. ..................................................................................................... 34 3 Metodología. ....................................................................................................................................... 38 3.1 Puntos de muestreo y colección de muestras. .............................................................................. 39 3.2 Preparación del efluente fisicoquímico tipo primario avanzado (TPA). ......................................... 42 3.3 Caracterización de muestras. ......................................................................................................... 44 3.4 Preparación de Ácido Perfórmico al 10%. ...................................................................................... 47 3.5 Pruebas de desinfección. ................................................................................................................ 48 3.5.1 Primera etapa: eficiencia en la disminución de la densidad bacteriana a distintas dosis de desinfectante. ...................................................................................................................................... 49 3.5.2 Segunda etapa: Efecto del tiempo de contacto durante la desinfección con ácido perfórmico. .......................................................................................................................................... 50 3.5.3 Tercera etapa: Recrecimiento bacteriano. .......................................................................... 51 3.6 Determinación de los residuales de la desinfección. ..................................................................... 52 3.6.1 Cloro .................................................................................................................................... 52 ii 3.6.2 Perácidos orgánicos. ............................................................................................................ 53 4 Resultados. .......................................................................................................................................... 57 4.1 Primera etapa: Efecto de la dosis de desinfectante sobre la disminución de la población bacteriana. .................................................................................................................................................. 57 4.1.1 Caracterización fisicoquímica y bacteriológica previa a la desinfección. ........................... 57 4.1.2 Pruebas de desinfección ..................................................................................................... 59 Tabla 21. Datos de reducción de microorganismos obtenidos de la literatura. ................................ 68 4.1.3 Residuales de la desinfección. ............................................................................................. 69 4.1.4 Potencial de oxidorreducción.............................................................................................. 71 4.2 Segunda etapa: Efecto del tiempo de contacto durante la desinfección con ácido perfórmico. .. 72 4.2.1 Caracterización microbiológica y fisicoquímica previa a la desinfección. ........................... 72 4.2.2 Pruebas de desinfección. .................................................................................................... 73 4.2.3 Subproductos de desinfección, segunda etapa. ................................................................. 76 4.3 Tercera etapa: recrecimiento bacteriano.......................................................................................78 4.3.1 Caracterización microbiológica y fisicoquímica previa a desinfección. .............................. 79 4.3.2 Resultados microbiológicos de reactivación en presencia y ausencia de luz. .................... 80 4.3.3 Subproductos de desinfección de perácidos orgánicos y cloro. ......................................... 88 5 Conclusiones........................................................................................................................................ 91 6 Referencias. ......................................................................................................................................... 92 Anexo I .......................................................................................................................................................... 1 Anexo II......................................................................................................................................................... 8 Anexo III ..................................................................................................................................................... 13 iii Índice de tablas. Tabla 1. Normas Oficiales Mexicanas (NOM) y sus límites máximos permisibles microbiológicos en cuanto al tipo de descarga. .............................................................................................................. 13 Tabla 2. Ventajas y desventajas de la desinfección con cloro. Adaptado: USEPA, 1999a. ........................... 22 Tabla 3. Características fisicoquímicas del ácido peracético al 5%. .............................................................. 24 Tabla 4. Propiedades del ácido perfórmico. ................................................................................................. 29 Tabla 5. Potenciales redox ordenados (Harris, 2007). .................................................................................. 36 Tabla 6. Volúmenes muestreados para cada etapa. ..................................................................................... 42 Tabla 7. Métodos analíticos empleados para la caracterización fisicoquímica. ........................................... 45 Tabla 8. Métodos analíticos empleados para la caracterización biológica. .................................................. 46 Tabla 9. Dosis aplicadas de los desinfectantes de acuerdo al tipo de matriz. .............................................. 50 Tabla 10. Tiempo de contacto consignado a cada matriz. .............................................................................. 50 Tabla 11. Condiciones del proceso para pruebas de recrecimiento. Dosis y tiempo de contacto. ................ 51 Tabla 12. Caracterización microbiológica de las matrices previa a la desinfección, comparación con E.U. .. 58 Tabla 13. Caracterización fisicoquímica. ......................................................................................................... 58 Tabla 14. Dosis optima de desinfectante para ARC para producir un efluente con 3 U log de coliformes fecales .............................................................................................................................................. 61 Tabla 15. Dosis para inactivación de cF, S.spp. y C. perfringens. .................................................................... 62 Tabla 16. Dosis de desinfectante necesaria para alcanzar 3 U log de Coliformes Fecales en EF-FQ. ............ 64 Tabla 17. Dosis para inactivación de CF, Salmonella spp. y Clostridium perfringens. .................................... 64 Tabla 18. Dosis de desinfectante necesaria para alcanzar 3 U log de coliformes fecales en EF-SEC. ........... 66 Tabla 19. Dosis de desinfectante necesaria para alcanzar 3 U log de coliformes fecales en EF-SEC. ........... 67 Tabla 20. Datos de reducción de microorganismos obtenidos de la literatura. ............................................ 68 Tabla 21. Caracterización fisicoquímica de los efluentes estudiados. ............................................................ 73 iv Tabla 22. Caracterización microbiológica de las tres matrices. ...................................................................... 73 Tabla 23. Resultados referidos la segunda etapa experimental. .................................................................... 77 Tabla 24 Dosis de desinfectante. .................................................................................................................... 78 Tabla 25. Caracterización fisicoquímica y concentración de coliformes fecales en ARC y EF-SEC. ................ 79 Tabla 26. Reducción de la concentración de subproductos de perácidos y cloro en efluente secundarios. . 88 Tabla 27. Concentración de subproductos específicos para cada desinfectante en las tres matrices. ......... 90 v Índice de figuras. Figura 1. Escherichia coli: Mountain Laboratories, NIAID, NIH Source....................................................... 15 Figura 2. Salmonella typhimurium: Max Planck Institute for Infection Biology. ........................................ 16 Figura 3. Clostridium perfringens: eye of science/science photo library ................................................... 17 Figura 4. Estructura molecular del ácido peracético. ................................................................................. 23 Figura 5. Mecanismos de acción del ácido peracético sobre las bacterias (Kemper, 2010). ..................... 26 Figura 6. Reacción entre la membrana bacteriana y una molécula de APA (adaptado de Lehninger, 2006). ........................................................................................................................................... 27 Figura 7. Estructura molecular del ácido perfórmico. ................................................................................ 28 Figura 8. Mecanismo de peroxidación lipídica (Adaptado de Lehninger, 2006)........................................ 32 Figura 9. Mecanismos de acción del APF sobre membranas biológicas (Armstrong y Bennett, 1982). ........................................................................................................................................... 33 Figura 10. Metodología empleada durante las tres etapas. ....................................................................... 39 Figura 11. a) sitio de muestreo del influente (lado sur) b) sitio de muestreo del efluente ....................... 40 Figura 12. Localización de los puntos de muestreo dentro de la planta. ................................................... 41 Figura 13. Preparación del efluente fisicoquímico (EF-FQ) mediante pruebas de jarras. ........................ 43 Figura 14. Sension pH/ISWE ........................................................................................................................ 44 Figura 15. Espectrofotómetro DR-5000 ...................................................................................................... 44 Figura 16. Síntesis de ácido perfórmico (APF) ............................................................................................ 47 Figura 17. Pruebas de desinfección, Flocculator 2000. .............................................................................. 48 Figura 18. Pocket colorimeter, HACH. ........................................................................................................ 52 Figura 19. Vire de indicador de ferroína. .................................................................................................... 54 Figura 20. Vire de indicador, de marrón a rojo. .......................................................................................... 55 Figura 21. Variación de la DQO y COD. ......................................................................................................59 file:///C:\Users\MCordovaC\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary%20Internet%20Files\Low\Content.IE5\RYSQ6R20\Tesis%5b1%5d%5b1%5d%5b1%5d.docx%23_Toc320273309 file:///C:\Users\MCordovaC\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary%20Internet%20Files\Low\Content.IE5\RYSQ6R20\Tesis%5b1%5d%5b1%5d%5b1%5d.docx%23_Toc320273310 file:///C:\Users\MCordovaC\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary%20Internet%20Files\Low\Content.IE5\RYSQ6R20\Tesis%5b1%5d%5b1%5d%5b1%5d.docx%23_Toc320273311 file:///C:\Users\MCordovaC\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary%20Internet%20Files\Low\Content.IE5\RYSQ6R20\Tesis%5b1%5d%5b1%5d%5b1%5d.docx%23_Toc320273314 file:///C:\Users\MCordovaC\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary%20Internet%20Files\Low\Content.IE5\RYSQ6R20\Tesis%5b1%5d%5b1%5d%5b1%5d.docx%23_Toc320273314 file:///C:\Users\MCordovaC\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary%20Internet%20Files\Low\Content.IE5\RYSQ6R20\Tesis%5b1%5d%5b1%5d%5b1%5d.docx%23_Toc320273316 file:///C:\Users\MCordovaC\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary%20Internet%20Files\Low\Content.IE5\RYSQ6R20\Tesis%5b1%5d%5b1%5d%5b1%5d.docx%23_Toc320273321 file:///C:\Users\MCordovaC\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary%20Internet%20Files\Low\Content.IE5\RYSQ6R20\Tesis%5b1%5d%5b1%5d%5b1%5d.docx%23_Toc320273322 file:///C:\Users\MCordovaC\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary%20Internet%20Files\Low\Content.IE5\RYSQ6R20\Tesis%5b1%5d%5b1%5d%5b1%5d.docx%23_Toc320273323 file:///C:\Users\MCordovaC\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary%20Internet%20Files\Low\Content.IE5\RYSQ6R20\Tesis%5b1%5d%5b1%5d%5b1%5d.docx%23_Toc320273326 file:///C:\Users\MCordovaC\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary%20Internet%20Files\Low\Content.IE5\RYSQ6R20\Tesis%5b1%5d%5b1%5d%5b1%5d.docx%23_Toc320273327 file:///C:\Users\MCordovaC\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary%20Internet%20Files\Low\Content.IE5\RYSQ6R20\Tesis%5b1%5d%5b1%5d%5b1%5d.docx%23_Toc320273328 vi Figura 22. Decaimiento de microorganismos vs dosis de desinfectante. (ARC) ........................................ 61 Figura 23. Decaimiento de microorganismos vs dosis de desinfectante (EF-FQ) ....................................... 63 Figura 24. Decaimiento de microorganismos vs dosis de desinfectante (EF-SEC) ..................................... 65 Figura 25. Residuales de perácidos orgánicos. ........................................................................................... 69 Figura 26. Residuales de cloración. ............................................................................................................. 70 Figura 27. Variación del potencial redox. ................................................................................................... 71 Figura 28. Efecto del tiempo de contacto en la remoción de microorganismos en ARC. .......................... 74 Figura 29. Residuales de perácidos orgánicos. ........................................................................................... 76 Figura 30. Recrecimiento en presencia de luz solar para APF en EF-SEC. .................................................. 81 Figura 31. Recrecimiento en ausencia de luz solar para APF en EF-SEC ..................................................... 82 Figura 32. Recrecimiento en presencia de luz solar para APA en EF-SEC. .................................................. 84 Figura 33. Recrecimiento en ausencia de luz solar para APA en EF-SEC. ................................................... 85 Figura 34. Recrecimiento en presencia de luz solar para Cloro en EF-SEC. ................................................ 86 Figura 35. Recrecimiento en ausencia de luz solar para Cloro en EF-SEC. ................................................. 87 Figura 36. Residuales de perácidos orgánicos. ........................................................................................... 89 Agradecimientos. A la UNAM Por proporcionar las herramientas suficientes para el desarrollo académico, profesional y científico de los estudiantes que sabemos aprovechar la valiosa oportunidad que tenemos de formar parte ti. A la Facultad de Química Por exigirnos excelencia otorgándonos profesores excelentes. Al IINGEN Por acogerme estos meses facilitándome sus instalaciones y recursos para culminar con éxito mi tesis. A Kemira Por el apoyo económico que recibí durante el desarrollo de mi tesis através dos proyectos en conjunto: 1. Estudio de desinfección con ácido perfórmico en tres tipos de agua con diferentes calidades. 2. Nuevos procesos de desinfección para generar agua segura en términos microbiológicos. A mi asesora, Dra. Alma Chávez Mejía. Por ser mi directriz durante todo este tiempo. Por confiar en mí y darme la oportunidad de formar parte del GTR. Trabajar a su lado ha sido una grandiosa experiencia. A mis amigos Por hacerme reír cuando era necesario, por enojarte conmigo, por escucharme, por confiar en mí, gracias querida Adriana, espero seguir sumando años a nuestra amistad. Porque nunca es tarde para comenzar una linda amistad, sin ti los detalles finales de mi tesis me hubieran sacado canas verdes; gracias por tu apoyo incondicional, te quiero Elena. Por darme una segunda oportunidad, la primera impresión no siempre es la que cuenta ¿verdad Rodolfo? Gracias Andrea, César, Enrique, Gabriel, Josele, Polett, porque por ustedes fui protagonista de bellos momentos desde el principio de la carrera. Gracias a todos por las tareas y prácticas en las que me ayudaron, gracias por recomendarme maestros y por confiar en mí en los trabajos escolares. Dedicatorias. A mis padres, Virginia y Arturo Gracias a ellos he forjado mi carácter; siempre indispensable para culminar una carrera universitaria y vencer cualquier obstáculo que se presente en la vida. Me guiaron con éxito en este arduo camino como estudiante y como ser humano, me enseñaron a nunca darme por vencida y siempre esforzarme al máximo. Me demostraron que en la vida, lo importante es herrar para aprender y sembrar para cosechar a su debido tiempo. Hoy pongo ante ustedes el primer fruto de nuestro esfuerzo, sin ustedes jamás lo hubiera logrado. Muchas gracias por todo, los amo. A mis hermanos, Fernanda y Sebastián Por quererme y tolerarme en los momentos difíciles, reconozco que no soy fácil de soportar. Gracias hermanos, este logro, también es de ustedes. Los amo. Facultad de Química UNAM | Resumen 1 Resumen Dada la creciente demanda de recursos hídricos, se ha hecho inevitable el reúso de agua residual. Para reutilizar las aguas restauradas de manera segura, es importante que estén desinfectadas, pues previene la contaminación bacteriana al reducir, en el mejor de los casos inactivar, organismos contenidos en ellas. La cloración es la práctica más antigua y común, sin embargo, actualmente su uso está siendo cuestionado, ya que la materia orgánica presente en aguas residuales y tratadas favorece la formación de subproductos carcinogénicos. A razón de este inconveniente, es menester enfocar recursos en la investigación de alternativas para la desinfección. En la presente tesis de licenciatura, se propone el empleo de ácido perfórmico (APF), como desinfectante de uso seguro y eficiente, para la reducción del contenido bacteriano. El estudio consistió en comparar el desempeño del APF en la desinfección de tres matrices de agua de distinta calidad fisicoquímica y bacteriológica, a temperatura y presión constante; frente a cloro y ácido peracético (APA), este último es un ácido carboxílico con propiedades bactericidas empleado en la industria alimenticia, farmacéutica y cosmética y de uso relativamente emergente en la desinfección del agua. La experimentación fue dividida en tres etapas. En las cuales se determinóla dosis óptima del APF, APA y Cl2 (etapa 1); influencia del tiempo de contacto con la dosis identificada en la etapa 2 y se evaluó la permanencia de la acción desinfectante después de 24, 48 y 72 horas después de aplicación de sendo desinfectante, mediante la cuantificación del recrecimiento de coliformes fecales, en presencia y ausencia de luz solar (etapa 3). Facultad de Química UNAM | Resumen 2 Los resultados obtenidos de las tres etapas, reflejan la gran dependencia que existe entre las necesidades de desinfección (dosis y tiempo de contacto) con la calidad del agua a desinfectar. Lo que ocasiona que las dosis necesarias de APF para las tres matrices fluctúen de 0.5 a 10 mg/L con un tiempo de contacto inferior a los 15 min. Valores considerablemente menores en comparación con el Cl2, cuya dosis y tiempo de contacto fueron superiores a 10 mg/L y 30 min para alcanzar los requerimientos establecidos por la normatividad mexicana vigente en materia de reúso agrícola, que establece 3 U Log de Coliformes fecales. Por lo antes expuesto y aunado a que no se detectaron residuales tóxicos, muestra que el APF es una opción factible para la etapa de desinfección y un excelente sustituto del cloro. Facultad de Química UNAM | Introducción. 3 Introducción. El desarrollo económico suele implicar la necesidad de disponer de recursos hídricos adicionales. Esta creciente demanda, aunada a los grandes volúmenes de agua residual generados por la actividad humana y a la escasez de agua potable, hacen inevitable el reúso de agua residual, que mediante tratamientos específicos, logra recuperar su calidad en distintos grados, haciéndola apta para el reúso seguro en otros sectores. Sin embargo, estudios epidemiológicos han demostrado que el reúso de agua residual manifiesta un importante incremento en los casos de personas infectadas por patógenos de origen entérico. En consecuencia, para reutilizar las aguas residuales es estrictamente necesario garantizar una calidad establecida de agua en el punto de reutilización, en todo momento y cualquier condición. Por ello, la desinfección juega el papel más importante dentro del proceso de tratamiento de agua residual; pues previene la contaminación bacteriana al reducir o en el mejor de los casos, inactivar los microorganismos contenidos en ella. La desinfección con cloro es la práctica más antigua y común debido a su bajo costo; además de que las condiciones de diseño y operación son ampliamente conocidas, tanto para las plantas potabilizadoras como para las de aguas residuales (Haas, 1986; Levine et al., 1990). No obstante, hoy en día se cuestiona su empleo, por la formación de subproductos como los trihalometanos (THM), los ácidos haloacéticos (HAA) y las cloraminas, todos ellos carcinogénicos, al entrar en contacto con la materia orgánica presente en el agua (Fayyad and Al-Sheikh, 2001; Jiménez et al., 2006). Como consecuencia el efluente clorado debe ser tratado químicamente para remover estos subproductos, lo que aumenta la complejidad y costo del proceso. Por ambas razones, es imperativo realizar estudios para determinar la viabilidad de nuevos métodos de desinfección, entre los que se Facultad de Química UNAM | Introducción. 4 encuentran el empleo de ácidos orgánicos, como es el caso del ácido peracético, el cual posee importantes ventajas: ser biodegradable, no generar residuales tóxicos, es buen desinfectante con amplio espectro de actividad antimicrobiana, presenta poca dependencia con respecto al pH, requiere de corto tiempo de contacto en comparación con la cloración y presenta buen desempeño durante el proceso de desinfección a bajas temperaturas (Kitis, 2003). El objetivo del presente proyecto de tesis fue proponer el empleo de un ácido orgánico fuerte, ácido perfórmico (COOOH2). Como desinfectante de amplio espectro; que dada su estructura molecular, promete mejores resultados en la reducción de microorganismos que el cloro (Cl2) y su homólogo, el ácido peracético (C2OOOH4); considerando la calidad alcanzada en diversos procesos de tratamiento con el objetivo de optimizar el proceso de desinfección en términos de eficiencia, la mínima concentración de subproductos y la máxima remoción lograda de coliformes fecales, Salmonella spp. y Clostridium perfringens. El desarrollo y resultados obtenidos de este trabajo experimental, se exponen en 5 capítulos de la siguiente forma: El origen e importancia de la desinfección, así como la situación actual de la cloración del agua; se ven reflejadas en el Capítulo 1. En el cual se expone además, la razón principal por la cual la cloración es una tecnología que presenta grandes inconvenientes. En el Capítulo 2, se explican los fundamentos teóricos en referencia a la oxidación química con cloro, ácido peracético y ácido perfórmico; entre los puntos mencionados están sus propiedades fisicoquímicas, sus ventajas y desventajas, así como sus respectivas reacciones en medio acuoso y su reactividad frente a la materia orgánica. Adicionalmente se incluye la legislación Mexicana en materia de agua, así como las características de los microorganismos estudiados. Facultad de Química UNAM | Introducción. 5 La metodología se presenta en el Capítulo 3. En ella se incluyen los puntos de muestreo y la colección de muestras; la preparación del efluente primario avanzado, la caracterización fisicoquímica y bacteriológica de los efluentes antes y después de la desinfección, la preparación de los reactivos y las medidas concernientes a cada etapa de la experimentación. Además, se presentan las técnicas utilizadas para la cuantificación de residuales de desinfección. Los resultados y su correspondiente análisis son detallados en el Capítulo 4 para una mayor compresión se dividen por etapas, en las cuales se presentan los resultados de la caracterización bacteriológica y fisicoquímica de los efluentes, previos a la desinfección. Los resultados bacteriológicos de cada efluente para los tres desinfectantes y la concentración de los residuales de desinfección obtenidos. Por último, las conclusiones obtenidas después del trabajo bibliográfico, experimental y del análisis de los resultados, son expuestas en el Capítulo 5. Facultad de Química UNAM | Hipótesis 6 Hipótesis Es posible que el ácido perfórmico (APF), al ser este un ácido orgánico fuerte, sea capaz de reducir la materia orgánica y que dada su estructura molecular, logre mejores resultados en la reducción de la actividad bacteriana presente en aguas de distinta calidad frente al cloro y su homólogo, el ácido peracético. Objetivo. Objetivo general Evaluar el efecto desinfectante del ácido perfórmico frente al ácido peracético y cloro en la depuración de agua residual cruda, efluente fisicoquímico y efluente secundario, a partir de la cuantificación de la remoción de coliformes fecales, Salmonella spp. y Clostridium perfringens. Objetivos particulares 1. Comparar la concentración de residuales de desinfección de los tres agentes desinfectantes. 2. Establecer las variables de operación: Dosis óptima de sendo desinfectante. Tiempo de contacto a la dosis establecida. 3. Permanencia de la acción desinfectante después de 24, 48 y 72 hrs de aplicación, en presencia y ausencia de luz solar. Facultad de Química UNAM | Antecedentes. 7 1 Antecedentes. En tiempos remotos, las pestes e infecciones eran atribuidas a demonios y espíritus malignos. Sin embargo, gracias a la perspicacia y a la experiencia, la humanidad logró controlarlas moderadamente; como es caso de los Persas, 450 a. C., ya que sabían que el agua debía ser almacenada en recipientes de cobre o plata y no en barro, pues perdía su condición de potabilidad.Así mismo, Aristóteles recomendó a Alejandro Magno hervir el agua antes de beberla para evitar que la tropa enfermera (Apao, 2009). Con la formación de ciudades, el incremento demográfico y una inadecuada higiene, viene la aparición de enfermedades de transmisión hídrica que desencadenaron pandemias, como es el caso de la epidemia de cólera en Londres, en el año de 1854; donde gracias a las investigaciones de John Snow y John York se demostró que los organismos causantes eran transmitidos por el agua. Para remediar este problema, los sistemas de abastecimiento fueron tratados con cloro en forma de hipoclorito (Cerda y Valdivi, 2007). Al resultar efectivo, se optó por la cloración continua, la cual se hizo presente desde los primeros años del siglo XX en Gran Bretaña, donde su aplicación redujo considerablemente las muertes por tifoidea. En 1908, la cloración también comenzó a emplearse en los Estados Unidos, dicha acción logró reducir los casos de cólera, tifoidea, disentería y hepatitis A. Un año después, en New Jersey, con el interés de mejorar la salud pública, la cloración se vuelve una etapa obligada en las plantas de tratamiento de aguas para consumo humano (Vázquez, 2011). Actualmente, la desinfección es la última operación unitaria del tratamiento de agua residual y potable; tiene como objetivo la inactivación de microorganismos presentes en el medio para minimizar la probabilidad de transmisión hídrica de enfermedades (Haas, 1990), garantiza la calidad de la misma y asegura que sea inocua para la salud del consumidor, ya que genera un residual con Facultad de Química UNAM | Antecedentes. 8 alto poder desinfectante, cloro libre, el cual mantiene la asepsia del agua hasta el punto de consumo. Además de ser la más antigua, la desinfección con cloro resulta ser la más frecuente debido a su bajo costo y fácil manejo durante el proceso. Usualmente es utilizado cloro gas (Cl2) y dióxido de cloro (ClO2). Sin embargo, en la actualidad su empleo es cuestionado debido a que algunas de las reacciones de cloro con el material orgánico generan compuestos orgánicos malolientes y de carácter cancerígeno, entre ellos destacan los trihalometanos, los cuales causan tumores malignos en el colon y vejiga, así como también daños en el hígado y a los riñones (Vázquez, 2011). A su vez, el residual de cloro da origen a otros subproductos perjudiciales como son los compuestos orgánicos volátiles, ácidos cloroacéticos, cloritos y cloruro de cianógeno. Por lo que el efluente desinfectado debe ser tratado químicamente para remover los subproductos dañinos generados, lo que aumenta la complejidad y costo del proceso. Lo anterior da origen a la necesidad de estudiar tecnologías innovadoras que permitan la máxima remoción de patógenos pero con la mínima toxicidad residual. Este proyecto de tesis, precisamente refleja esta necesidad al proponer el empleo de un ácido orgánico fuerte, el ácido perfórmico (COOOH2), como desinfectante de amplio espectro; que dada su estructura molecular, promete mejores resultados de inactivación de microorganismos que el cloro y su homólogo, el ácido peracético (C2OOOH4), ácido orgánico fuertemente oxidante que ha sido aprovechado como desinfectante de amplio espectro, ya que acaba con bacterias, virus, hongos y esporas (Kitis, 2004); en la industria alimenticia y como sanitizante de instrumental médico y superficies en clínicas y hospitales. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 9 2 Marco teórico 2.1 Legislación. La calidad del agua no es un criterio completamente objetivo, pero está socialmente definido y depende del uso final, por lo que para cada caso, se requiere una determinada norma de calidad. Además, está afectada por diversos factores como los usos del suelo, la producción industrial y agrícola, el tratamiento que se le da antes de ser vertida nuevamente a los cuerpos de agua y la cantidad misma de agua de los ríos y lagos, ya que de ésta depende su capacidad de purificación (SEMARNAT, 2002). La mayoría de los cuerpos de agua superficiales del país reciben descargas de aguas residuales sin tratamiento, lo que ocasiona distintos niveles de contaminación (SEMARNAT, 2002). Por esta razón, surge la necesidad de regular la calidad de las descargas, así como las especificaciones sanitarias de agua potable para consumo humano. 2.1.1 Agua Residual Las aguas restauradas constituyen un recurso no convencional de agua que se ha desarrollado en años recientes; no obstante, para poder reusar este recurso, son necesarias tecnologías de desinfección adecuadas y estudios previos detallados que aseguren que el empleo de agua residual tratada no represente ningún riesgo para la salud (Salgot y Folch, 1996). La descarga de agua residual es clasificada en industrial y municipal. La primera es descargada directamente a los cuerpos receptores de propiedad nacional, como es el caso de la industria autoabastecida; mientras que la segunda es manejada en los sistemas de alcantarillado municipal y urbano. Para asegurar la calidad del agua en nuestro país, se han implantado dentro de la legislación mexicana dos normas, NOM-001-SEMARNAT-1996 y Facultad de Química UNAM | Marco teórico 10 NOM-002-SEMARNAT-1996, donde se establece los límites máximos permisibles de contaminantes en la descarga de agua residual en aguas y bienes nacionales, y sistemas de alcantarillado urbano y municipal, respectivamente. Mientras que en una tercera norma, NOM-003-SEMARNAT- 1997, se establece los límites máximos permisibles de contaminantes para aguas residuales tratadas que se reusen en servicios al público. - NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-001-SEMARNAT-1996. En ella se establecen los límites máximos permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales. Objetivo y campo de aplicación: Proteger la calidad del agua y posibilitar su uso, siendo de observancia obligatoria para los responsables de dichas descargas. No se aplica a las descargas de aguas provenientes de drenajes separados de aguas pluviales. Especificaciones: La concentración de contaminantes básicos, metales pesados y cianuros, no debe exceder el límite máximo permisible indicado en la Norma Oficial Mexicana. Además, el rango aceptable de potencial de hidrógeno (pH) es de 5 a 10 unidades. Como indicador de contaminación fecal se toma a los coliformes fecales. Siendo el límite máximo para las descargas de agua residual vertidas en aguas y bienes nacionales, y suelo (riego agrícola), de 1000 y 2000 como número más probable (NMP) de coliformes fecales por cada 100 mL, para el promedio mensual y diario respectivamente. Los huevos de helmintos fungen como indicador de contaminación por parásitos. El límite máximo permisible para las descargas vertidas a suelo (riego agrícola), es de un huevo de helminto por litro para riego no restringido y de cinco huevos por litro para riego restringido. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 11 - NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-002-SEMARNAT-1996. En ella se establecen los límites máximos permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales a los sistemas de alcantarillado urbano o municipal. Objetivo y campo de aplicación. Prevenir y controlar la contaminación de las aguas y bienes nacionales, así como proteger la infraestructura de dichos sistemas, es de observancia obligatoria para los responsables de dichas descargas. No es aplicable a la descarga de las aguas residuales domésticas, pluviales ni a las generadas por la industria que sean distintas a las aguas residuales de proceso y conducidas por drenaje separado. Especificaciones. La concentración de contaminantes no debe superar a la indicada en la Tabla 1 de la norma. Para las grasas y aceites, es el promedioponderado en función del caudal, resultante de los análisis practicados a cada una de las muestras simples. El rango permisible de potencial de hidrógeno en las descargas de aguas residuales es de 5.5 a 10 unidades. El límite máximo permisible de temperatura es de 40°C, medida instantáneamente a cada una de las muestras simples. Se permitirá descargar con una temperatura mayor sólo si se demuestra su inocuidad. - NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-003-SEMARNAT-1997. En ella se establecen los límites máximos permisibles de contaminantes para las aguas residuales tratadas que se reúsen en servicios al público. Objetivo y campo de aplicación. Proteger el medio ambiente y la salud humana, es de observancia obligatoria para las entidades públicas responsables de su tratamiento y Facultad de Química UNAM | Marco teórico 12 reúso. En el caso de terceros que presten el servicio, estos serán responsables de dicho cumplimiento, desde la producción hasta su reúso o entrega, incluyendo la conducción o transporte. Especificaciones. La concentración de contaminantes no debe superar a la indicada en la Tabla 1 de la norma. El agua residual tratada debe carecer de materia flotante, mientras que la concentración de metales pesados y cianuros no debe sobrepasar la establecida en la columna que corresponde a embalses naturales y artificiales con uso en riego agrícola de la tabla 3 de la Norma Oficial Mexicana NOM-001-ECOL-1996. Toda entidad del Estado que reúse el servicio, estará obligado a monitorear las aguas tratadas en los términos establecidos por esta Norma Oficial Mexicana y de conservar los registros de por lo menos tres años. En la Tabla 1 se expone un resumen de los límites máximos permisibles microbiológicos estipulados por la Legislación Mexicana, en cuanto el tipo de descarga. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 13 Tabla 1. Normas Oficiales Mexicanas (NOM) y sus límites máximos permisibles microbiológicos en cuanto al tipo de descarga. Norma Oficial Mexicana Tipo de Descarga Límites Máximos Permisibles Microbiológicos Especificaciones NOM-001-SEMARNAT-1996 Nomenclatura anterior: NOM-001-ECOL-1996 Año de publicación en el DOF: 06/Enero/1997 Descarga residuales en aguas (río y lagos) y bienes nacionales (suelo). No se aplica a las descargas de aguas proveniente de drenajes separados de aguas pluviales, con el objeto de proteger su calidad y posibilitar sus usos (aclaración 30-abril- 1997) Coliformes fecales * 1000, promedio mensual 2000, promedio diario Huevos de helmintos ** 1 para riego no restringidoa 5 para riego restringido b NOM-002-SEMARNAT-1996** Nomenclatura anterior: NOM-002-ECOL-1996 Año de publicación en el DOF: 03/Junio/1998 Descargas de aguas residuales provenientes de la industria, actividades agroindustriales, de servicios y el tratamiento de aguas residuales a los sistemas de alcantarillado urbano o municipal Coliformes fecales * No aplica Huevos de helmintos ** No aplica NOM-003-SEMARNAT-1997 Nomenclatura anterior: NOM-001-ECOL-1997 Año de publicación en el DOF: 21/Septiembre/1998 Aguas residuales tratadas que se reúsen en servicios al público. Coliformes fecales *** 240, servicios al público con contacto directo 1000, servicios al público con contacto indirecto u ocasional Huevos de helmintos ** < 1, servicios al público con contacto directoc < 5, servicios al público con contacto indirecto u ocasionald CF: Número Más Probable NMP/100 mL, **HH/ L, *** Para el caso de la NOM-003 las unidades reportadas de CF pueden ser en NMP o Unidades Formadoras de Colonia UFC/ 100 mL a: actividad de siembra, cultivo y cosecha de productos agrícolas, excepto legumbres y verduras que se consumen crudas b: actividad de siembra, cultivo y cosecha de productos agrícolas en forma ilimitada como forrajes, granos, frutas legumbres y verduras. c: actividades tales como llenado de lagos y canales artificiales recreativos con paseos en lancha, remo, canotaje y esquí; fuentes de ornato, lavado de vehículos, riego de parques y jardines. d: actividades como riego de jardines y camellones en autopistas, camellones en avenidas, fuentes de ornato, campos de golf, abastecimiento de hidrantes de sistemas contra incendio, lagos artificiales no recreativos, barreras hidráulicas de seguridad y panteones. **La NOM-002-SEMARNAT-1996 no incluye los parámetros microbiológicos, esta norma se basa en determinaciones fisicoquímicas, cuyos valores corresponden a los incluidos en la NOM-001-SEMARNAT-1996. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 14 2.2 Microorganismos seleccionados para el estudio. La extensa variedad de microorganismos de un agua, es tan elevada, que hace prácticamente imposible el verificar mediante análisis rutinarios y rápidos la ausencia de toda esta potencial flora microbiana. Por ello, se recurre a la investigación de organismos comúnmente presentes en las deyecciones humanas y animales. La presencia de estos microorganismos indicará fiablemente la “probable” presencia de otros claramente patógenos. El empleo de organismos intestinales como indicadores de contaminación fecal está mundialmente admitido desde hace bastantes años. En general, su elección se basa en que siempre están presentes en gran cantidad en el residuo fecal humano o animal; su periodo de supervivencia es de al menos el mismo que el de los organismos biológicos claramente patógenos; así como ser fáciles de detectar utilizando métodos analíticos simples y rápidos. Todos estos requerimientos son cumplidos por las bacterias entéricas. Durante la toma de decisión con respecto al tipo de microorganismo a considerar en la presente tesis, se tomaron criterios como: Parámetro de calidad en la normatividad mexicana para el caso de coliformes fecales. Técnicas de laboratorio bien establecidas. Común acuerdo con proyectos paralelos. Como resultado de ello, se optó por analizar sólo el grupo perteneciente a bacterias: coliformes fecales, Salmonella spp. y esporas de Clostridium perfringens. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 15 2.2.1 Coliformes Fecales. El vocablo coliforme significa con forma de coli, refiriéndose a la bacteria principal del grupo, Escherichia coli; descubierta por el bacteriólogo alemán Theodor von Escherich en 1860. Es un grupo de bacterias que comparten ciertas características bioquímicas; son empleadas como indicadores de contaminación fecal en agua y alimentos debido a su frecuencia en heces, su fácil detección y su semejanza con los miembros de la familia las Enterobacteriaceae (Martínez et al., 2002). Los coliformes fecales (Figura 1) son bacilos Gram negativos, anaerobios; poseen una delgada capa de peptidoglucanos que se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior por medio de lipoproteínas. Las bacterias de este género se encuentran principalmente en seres homeotermos, se introducen en gran número al medio por las heces de estos, por tal motivo, suele deducirse que la mayoría de los coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal (Romero, 2007). Sin embargo, algunos géneros son autóctonos de aguas con residuos vegetales. También pueden reproducirse en las biopelículas que se forman en las tuberías de distribución de agua potable. La capacidad de reproducción de los coliformes fecales fuera del intestino de los seres homeotérmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgánica, pH, humedad, etc. Figura 1. Escherichia coli: Mountain Laboratories, NIAID, NIH Source. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 16 2.2.2 Salmonella spp. Es un género de bacterias patógenas capaces de desencadenarfiebre tifoidea. Fue descubierta por el veterinario estadounidense Daniel Elmer Salmon en el año de 1885. La fiebre tifoidea, fue descrita por primera vez por el médico inglés Thomas Willis de Wiltshire en 1659. Este género ha sido una de las causas más frecuentes de epidemias; se encuentra asociado a brotes de enfermedades de origen hídrico y de alimentos contaminados (Cifuentes et al., 1994). El género Salmonella, se ubica dentro de la familia Enterobacteriaceae. Se trata de bacilos Gram negativos, generalmente móviles por flagelos peritrícos (excepto S. gallianrum); son anaerobios facultativos no encapsulados y no esporulados (Figura 2) .Son capaces de sobrevivir bajo estrés por largo periodos, resisten deshidratación, sobreviven en el suelo y el agua, así como en salmuera con 20% de sal (Adelantado, 2008). La diferencia entre las especies y subespecies, se realiza tomando en cuenta sus propiedades bioquímicas. Son aerobios o anaerobios facultativos, fermentan glucosa, maltosa y manitol. Reducen nitratos a nitritos, utilizan citrato como única fuente de carbono, producen sulfuro de hidrógeno (H2S) y son tetrationato reductasas. La Salmonella se encuentra en todo el mundo; en los países en vías de desarrollo, la incidencia de S. typhi se estima entre 10-500 casos por cada 100 mil habitantes, siendo más vulnerables niños menores de 5 años y personas mayores a los 70 años (Chen et al., 1996). Figura 2. Salmonella typhimurium: Max Planck Institute for Infection Biology. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 17 2.2.3 Clostridium perfringens. El género Clostridium engloba a bacilos gram positivos, anaerobios estrictos y sulfito reductores; son bacilos rectos o curvos de distintos tamaños (Figura 3). Producen esporas resistentes a las condiciones desfavorables en medio acuático, radiación ultravioleta, temperaturas y pH extremos así como a la cloración (Sanabria, 2005). Se encuentran distribuidos en suelo, polvo y son parte de la flora normal del tracto intestinal del hombre, comportándose como patógeno oportunista. Desde el punto de vista del agua, suelen estar presentes en las heces fecales, siempre, en número apreciablemente menor que los correspondientes a coliformes o estreptococos fecales. Sus esporas, pueden resistir en el agua mayor tiempo que coliformes, así como también, resultan ser más resistentes a la desinfección que ellos. Debido a esto, se investigan para comprobar si el agua de consumo humano ha sufrido contaminación fecal junto con Escherichia coli (Pumarola, 1995). Clostridium perfringens es la especie aislada más frecuente en muestras clínicas, puede causar colonización simple o enfermedad grave que pone en peligro la vida del paciente. Se trata de una bacteria Gram positiva, inmóvil y formadora de esporas que se encuentra en el intestino de seres homeotermos, en el agua y en el suelo. Por ser una bacteria esporulada, tolera temperaturas y desecación, pH extremo y falta de nutrientes. Esta resistencia la convierte en un indicador apropiado de contaminación fecal antigua. Un bacilo Gram positivo, anaerobio estricto, esporulado de forma Figura 3. Clostridium perfringens: eye of science/science photo library Facultad de Química UNAM | Marco teórico 18 rectangular. A pesar de no poseer movilidad, se entiende con rapidez en los medios de laboratorio; crece rápidamente tanto en los tejidos como en los cultivos, tiene carácter hemolítico y posee gran actividad metabólica, lo que facilita su identificación (Sanabria, 2005). 2.3 Oxidantes químicos. La desinfección del agua es un paso crítico para minimizar la transmisión hídrica de enfermedades; es el último proceso unitario del tratamiento de agua residual, tiene como objetivo la inactivación de microorganismos patógenos presentes en el medio (Haas, 1990), garantiza la calidad de la misma y asegura que sea inocua para la salud del consumidor. Es posible dividir a los desinfectantes en químicos y físicos, pero en ambos casos, un desinfectante ideal debe inactivar todos los patógenos, incluso dentro de los sólidos suspendidos; mostrar inmutabilidad frente a la variación de parámetros fisicoquímicos del agua, no producir subproductos tóxicos así como ser de fácil incorporación a un proceso de desinfección y ser rentable (Cairns, 1993). La eficacia de un desinfectante dependerá, no sólo de su naturaleza y condiciones de operación, sino también de la concentración y resistencia de los microorganismos, es decir, a la reactividad y permeabilidad de la membrana celular frente a este. Los compuestos mayormente empleados para este fin son oxidantes fuertes que por lo general producen residuales, que en algunas ocasiones resultan ser tóxicos para salud humana y el ambiente. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 19 2.3.1 Cloro. El Cloro, del griego (verdoso); fue descubierto por el químico sueco Carl Wilhelm Secheele en 1774. Aisló el Cl2, producto de una reacción de dióxido de manganeso con ácido clorhídrico; el resultado fue un gas de color amarillo verdoso, de fuerte olor sofocante y muy tóxico. Esta toxicidad se debe a su gran poder oxidante, ya que destruye la materia orgánica; al ser inhalado, reacciona con los líquidos orgánicos formando ácidos. El cloro es un elemento al cual, el hombre le ha dado una amplia variedad de usos; por ejemplo, en la industria del papel y textil lo utilizan como decolorante; en la industria química, se emplea en síntesis orgánica e inorgánica. Pero quizá la más conocida es su aplicación como poderoso desinfectante de agua potable, residual y de piscinas (Jiménez et al., 2006). Desde hace casi 150 años, la cloración desempeña una función trascendental en la protección de los sistemas de abastecimiento de agua potable contra enfermedades infecciosas. Esta práctica comenzó en 1854 en Londres; cuando John Snow logró detener un brote de cólera, desinfectando el agua del sistema de abastecimiento (Cerda y Valdivia, 2007). La cloración continua empezó en los primeros años del siglo XX en Gran Bretaña, donde su aplicación redujo considerablemente las muertes por tifoidea. Poco después, en 1908, Estados Unidos adoptó esta práctica en Nueva Jersey. Lo que dio lugar a la eliminación de enfermedades transmitidas por el agua, tales como el cólera, la tifoidea, la disentería y hepatitis A (White, 1986). La capacidad germicida del cloro se basa en que puede penetrar la pared celular, alterar funciones específicas de las proteínas e inhibir procesos metabólicos de bacterias. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 20 2.3.1.1 Reacciones de cloro en medio acuoso. La siguiente reacción ilustra la formación de ácido hipocloroso y ácido clorhídrico al adicionar cloro gas (Cl2) en agua (H2O). (Ec.1) A su vez, el ácido hipocloroso, que resulta ser un desinfectante más eficaz que el ácido clorhídrico, se disocia conforme a la siguiente ecuación: (Ec. 2) Esta reacción es reversible, su equilibrio está íntimamente relacionado con el pH de la solución. Dada la sucesiva disociación de ambas especies, en conjunto se denomina cloro libre, acidifica el medio; lo que proporciona las condiciones adecuadas para que, el ácido hipocloroso (HOCl) predomine sobre el ión hipoclorito (OCl-). Cuando el agua clorada contiene impurezas, es posible la formación de subproductos, algunos con cierto poder desinfectante, otros resultan ser tóxicos e incluso malolientes. Entre estos subproductos, se encuentran las cloraminas, las cuales se forman a partir de la reacción de cloro (Cl2) con amoniaco (NH3). Se pueden formar mono, di y tricloraminassegún la relación de cloro y amoniaco, el pH y temperatura del agua; a estos compuestos clorados, se les denomina cloro residual combinado. Las reacciones sucesivas son: Compuesto Reacción de formación Relación Cl2/NH3 pH Monocloramina 1:1 ≥6 Dicloramina < 1:1 ≤5 Tricloramina Facultad de Química UNAM | Marco teórico 21 Además del amoniaco, también presenta afinidad con otras sustancias con las que forma compuestos llamados cloro combinado no utilizable, estos se subdividen en seis grupos: los trihalometanos, los ácidos acéticos halogenados, los acetonitrilos halogenados, los aldehídos halogenados (formaldehído), las cetonas halogenadas (cloroacetonas) y los fenoles clorados. También se encuentran entre otros: el hidrato de cloral, la furanona clorada, la cloropicrina, y el cloruro de cianógeno. El fenómeno de la formación de trihalometanos se puede representar a través de la siguiente reacción: (Ec. 3) Y una hidrólisis posterior: (Ec. 4) Los ácidos acéticos halogenados se forman a partir de la materia orgánica durante la cloración del agua, son probablemente los principales subproductos de esta, han sido detectados en agua potable, la concentración de los ácidos acéticos trihalogenados aumenta al disminuir el pH, mientras que la de los dihalogenados permanece constante. En agua potable, sus valores típicos varían de 0.03 a 0.15 mg/L (Romero, 2005). Mientras que los acetonitrilos halogenados sólo son subproductos de la cloración de aguas superficiales y subterráneas; los hidratos de cloral (tricloroacetaldehídos) se forman como subproducto del tratamiento de descargas industriales. Los clorofenoles son subproductos de la reacción de cloro con compuestos fenólicos, como los biocidas o productos de la degradación de herbicidas del grupo fenoxi. Los clorofenoles más probables de encontrar después de la cloración son 2-clorofenol, 2.4-dicloroenol y 2,4,6-triclorofenol. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 22 2.3.1.2 Ventajas y desventajas El cloro es un desinfectante que tiene ciertas limitantes en términos de salud y seguridad, pero al mismo tiempo su mayor ventaja es la amplitud en su uso. En la Tabla 2 se resumen las ventajas y desventajas del proceso de cloración. Tabla 2. Ventajas y desventajas de la desinfección con cloro. Adaptado: USEPA, 1999a. Ventajas Desventajas Tecnología bien establecida En ocasiones es necesario utilizar una decloración para reducir la toxicidad residual. Muy eficiente Forma trihalometanos (THM) y otros hidrocarburos clorados Capacidad de mantener efectos residuales Todas las formas de cloro son muy corrosivas y tóxicas por lo que se incrementan las medidas de seguridad. Efectivo para un amplio espectro de organismos patógenos. El pH del agua residual puede ser reducido si la alcalinidad es insuficiente por la generación del ácido HOCl Efecto germicida durante un largo período. Libera compuestos orgánicos volátiles Es muy flexible para la dosificación No es efectivo si el agua contiene sólidos suspendidos y materia orgánica. Elimina olores Reacciona con un gran número de compuestos que aumentan la demanda de cloro para la desinfección Facultad de Química UNAM | Marco teórico 23 2.3.2 Ácido peracético (APA). El ácido peracético (C2H4O3, Figura 4), es un compuesto orgánico en fase líquida de característico olor, que ha sido empleado como desinfectante, principalmente en la industria alimentaria, cosmética y farmacéutica, además de ser un importante precursor en la síntesis orgánica (Gehr, 2009). Puede obtenerse por oxidación a partir de acetaldehído y oxígeno en presencia de acetato de cobalto o bien, tratando anhídrido acético con peróxido de hidrógeno, en presencia de ácido sulfúrico. Además de ser soluble en agua, también lo es en alcohol, éter y ácido sulfúrico. Explota violentamente si es agitado a temperaturas superiores a los 100°C (Liberti et al, 1999). El primer trabajo de investigación que permitió identificar las propiedades biocidas de las soluciones de ácido peracético, datan de 1902 y fueron realizadas por Freer y Novy (Kemper, 2010). Su empleo a nivel industrial en una planta de tratamiento de agua residual es ciertamente de notable interés; esto debido a su naturaleza, ya que puede resolver algunos problemas de gestión como: la reducción de la carga bacteriana en un corto período de tiempo a temperatura ambiente así como la disminución de residuales de desinfección. Figura 4. Estructura molecular del ácido peracético. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 24 2.3.2.1 Características fisicoquímicas Desde el punto de vista químico, el ácido perfórmico pertenece a la familia de los peróxidos, se caracteriza por un elevado potencial de oxidación, el cual es el responsable de su poder biocida. La estructura molecular está constituida por ácido acético, el cual se une al grupo carboxílico –COOH y a un átomo de oxígeno para convertirse en –COOOH. En consecuencia, en solución acuosa, la molécula de ácido peracético es muy reactiva ya que tiende a romper los enlaces químicos para restaurar el ácido acético y formar peróxido de hidrógeno, dicha reacción de hidrólisis se presenta a continuación. (Ec.5) Esta reacción se lleva a cabo en medio acuoso y es favorecida en pH alcalino y altas temperaturas. El peróxido de hidrógeno generado, se descompone a su vez en agua y oxígeno. En la Tabla 3, se muestran sus características fisicoquímicas. Tabla 3. Características fisicoquímicas del ácido peracético al 5%. Parámetro Valor Peso específico @ 20°C 1.15 Masa molecular 76.05 g/mol Masa equivalente 38.03 g/eq Presión de vapor @ 20°C 27 mbar Tensión superficial (ac) @ 5°C 66 dyn/cm Punto de ebullición 120°C (248°F) Presión de vapor 19mm Hg, 25°C Punto de fusión -56°C (-49°F) pH solución 1% 2.9 Potencial redox 1.81 Adaptación de NOSBTAP materiales database compiled by OMRI,2000 y Kemper, 2010. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 25 2.3.2.2 Mecanismo de acción del APA. Al descomponerse el APA, produce radicales libres H+ y –OH, los cuales, al entrar en contacto con las estructuras de revestimiento de las bacterias, cápsula, la membrana externa, la pared y la membrana celular; son capaces de pasar fácilmente a través de ellas con excepción de las esporas, donde la transición es mucho más lenta. Una vez penetrado en el interior, su fuerte poder oxidante afecta principalmente a las proteínas de la membrana, las enzimas metabólicas y el genoma. Su actividad se reduce ligeramente en presencia de materia orgánica pero se eleva a pH bajo (Veschett et al, 2003). En la Figura 5 se muestra el mecanismo de acción del APA sobre las bacterias. Por otro lado, en la Figura 6 muestra un ejemplo de la reacción entre una porción de proteína que compone la membrana en la que la metionina está presente y una molécula de APA. Aquí puede observarse que el ácido peracético conduce a la formación de dos enlaces dativos con el azufre y el oxígeno que produce una alteración de su estructura cuaternaria (Lehninger, 2006). Facultad de Química UNAM | Marco teórico 26 Figura 5. Mecanismos de acción del ácido peracético sobre las bacterias (Kemper, 2010). Estructurade revestimientode una célula gram negativa Desnaturalización de las proteínas de la membrana con alteraciones de la permeabilidad Desactivación del citocromo e de las enzimas, seguida de alteraciones metabólicas Peptidoglicano Membrana interna Protoplasto deshidratado Desnaturalización de proteínas y alteración del genoma. Membrana externa Pared celular Membrana citoplasmática Citoplasma Estructurade revestimiento de una célula gram negativa Desnaturalización de las proteínas de la membrana con alteraciones de la permeabilidad Desactivación del citocromo e de las enzimas, seguida de alteraciones metabólicas Peptidoglicano Membrana interna Protoplasto deshidratado Desnaturalización de proteínas y alteración del genoma. Membrana externa Pared celular Membrana citoplasmática Citoplasma Facultad de Química UNAM | Marco teórico 27 Las consecuencias son irreversibles, se bloquea actividad enzimática y modifica la permeabilidad de la membrana. En el caso de las esporas, el proceso se ve favorecido por altas temperaturas, ya que altera la estructura compacta de peptidoglicano de la corteza (Kemper, 2010; Lehninger, 2006). 2.3.2.3 Efectos adversos. El ácido peracético es biodegradable pero a la vez, corrosivo y tóxico a concentraciones elevadas. Sin embargo, a las concentraciones empleadas para la desinfección, pierde toda toxicidad y no daña a la fauna acuática. A Figura 6. Reacción entre la membrana bacteriana y una molécula de APA (adaptado de Lehninger, 2006). Facultad de Química UNAM | Marco teórico 28 partir de 25 mg/L comienza a dañar a las algas, a los peces desde 46 mg/L y al delfines desde 120 mg/L (Gehr, 2009). El contacto con este perácido puede ulcerar tejidos e irritar la piel, mucosas, ojos, tracto respiratorio y tracto gastrointestinal; si el contacto es con los ojos puede producir ceguera; pero si la exposición es a sus vapores, puede generar irritaciones oculares y nasales. Es corrosivo sobre metales; este efecto puede disminuirse con el pH y añadiendo inhibidores de la corrosión. Si se asocia con peróxido de hidrógeno aumenta la acción corrosiva (FMC, 2009). 2.3.3 Ácido Perfórmico. El ácido perfórmico, Figura 7, APF (COOOH2) es un ácido orgánico ampliamente utilizado como agente desinfectante en la industria alimenticia y para desinfectar superficies e instrumental médico en clínica y hospitales, pues resulta ser eficaz contra virus, bacterias, esporas, algas y hongos (Gehr, 2009). Dado que es altamente oxidante, es aprovechado como iniciador en la síntesis orgánica y para romper los enlaces disulfuro en el mapeo de proteínas. Figura 7. Estructura molecular del ácido perfórmico. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 29 2.3.3.1 Propiedades. El ácido perfórmico (APF) es un líquido incoloro polar, lo que significa que es soluble en agua, alcohol, éter, benceno, cloroformo y otros solventes orgánicos, en la Tabla 4 se resumen las propiedades fisicoquímicas el APF. Dada su estructura molecular, presenta baja estabilidad, razón por la cual debe ser utilizado inmediatamente después de su síntesis (Carrol, 2010). Esta inestabilidad, es la que le permite oxidar la materia orgánica, y los microorganismos asociados a ella. Tabla 4. Propiedades del ácido perfórmico. Propiedades del ácido perfórmico Masa molecular 62.03 g/mol Punto de fusión -18°C Punto de ebullición 50°C (90% de pureza) Potencial redox (10%-w) 453.4 mV* pKa 13.3 (90% de pureza) Densidad (10%-w) 1.18 g/cm3 (Carrol, 2010; Elvers et al., 1991; *experimental) 2.3.3.2 Reactividad con las membranas bacterianas a través de radicales libres. Un radical libre es cualquier especie atómica o molecular con un electrón desapareado en un orbital exterior y por lo tanto muy reactivo, el cual puede iniciar reacciones en cadena por eliminación de un electrón de otra molécula para completar su propio orbital. Por su alta reactividad, los radicales libres son los responsables de la destrucción de los microorganismos después del proceso de desinfección con ácido perfórmico de agua residual mediante la Facultad de Química UNAM | Marco teórico 30 reacción de peroxidación lipídica y oxidación de proteínas por rompimiento de enlaces disulfuro (Devlin, 2004). La formación de un radical libre se debe a que los pares de electrones de cada orbital tienen un giro o spin sobre su eje, opuesto entre sí llamado antiparalelo. El spin electrónico, puede verse como un vector que representa el campo magnético inducido por la traslación, de tal manera que un par de electrones con spin opuesto anulan recíprocamente su campo magnético. Un aporte de energía química, luminosa o térmica puede recuperar este comportamiento electrónico, dando lugar a la formación de un radical que tendrá un momento magnético neto igual al del electrón no apareado (Melo y Cuamatzi, 2006). - Peroxidación lipídica. Todas las células están rodeadas por una membrana celular que las separa del medio extracelular. La membrana celular contiene enzimas, canales, receptores y antígenos que juegan papeles vitales en la interacción de la célula con otras células, hormonas y otros agentes reguladores del liquido extracelular. La estructura básica de todas las membranas biológicas es la bicapa lipídica, que funciona como una barrera de permeabilidad selectiva. Éstas son ricas en ácidos grasos poliinsaturados (PUFAs) y por lo tanto vulnerables al ataque de radicales libres (Lehninger, 2006). Los enlaces dobles de las cadenas de los ácidos grasos son muy vulnerables a las reacciones con agentes oxidantes fuertes, como el peróxido de hidrógeno, ácido perfórmico, el radical aniónico superóxido (O2 -) o el radical hidroxilo (-OH) (Melo y Cuamatzi, 2006). Todo proceso de peroxidación de macromoléculas ocurre en tres etapas bien definidas: iniciación, propagación y terminación (Lehninger, 2006). Facultad de Química UNAM | Marco teórico 31 1. La iniciación es el paso en donde el radical de ácido graso es producido. Consiste en la extracción de un electrón del carbono contiguo a un doble enlace por parte de un iniciador como el – OH, el cual combina con un hidrógeno para dar lugar a agua y a un ácido graso radical (Lehninger, 2006). 2. La propagación explica el carácter de reacción en cadena, mediante la cual una sola iniciación puede dañar a un gran número de moléculas. El radical alquil no es una molécula muy estable, de modo que reacciona rápidamente con oxígeno molecular, creando de este modo un ácido graso peroxil radical. El mismo también es una especie muy inestable por lo cual reacciona con otro ácido graso dando lugar a un ácido graso radical diferente y a un peróxido lípido o un peróxido cíclico si ha reaccionado consigo mismo. Este ciclo continúa ya que el nuevo ácido graso radical se comporta de la misma manera (Barja, 2003; Melo y Cuamatzi, 2006 y Lehninger, 2006). 3. La reacción radical se detendrá cuando dos radicales reaccionan y producen una especie no radical. Esto ocurre solamente cuando la concentración de especies radicales es lo suficientemente alta como para que exista la probabilidad de que se encuentren dos radicales (Lehninger, 2006). Los productos de la lipoperoxidación son aldehídos, cetonas, esteres, alcoholes. Este proceso repetitivo conduce a la membrana a perder sus propiedades fisicoquímicas y culmina con la muerte de la célula (Lehninger, 2006). A continuación se presenta el mecanismo de la peroxidación lipídica esquematizado en la Figura 8. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 32 - Oxidación de proteínas: rompimientode enlaces disulfuro. Los agentes oxidantes producen la oxidación irreversible de moléculas esenciales para la célula como es el caso de las proteínas, que pueden ser atacadas incluso a nivel de estructura primaria. Todas las cadenas de aminoácidos que forman parte de las proteínas son susceptibles de ser atacadas por el radical hidroxilo, incluso los enlaces disulfuro que se establecen entre los átomos de azufre del aminoácido cisteína (Lehninger, 2006), únicos enlaces covalentes dentro de la estructura proteica; y en consecuencia hay modificaciones en la estructura terciaria, que puede de Figura 8. Mecanismo de peroxidación lipídica (Adaptado de Lehninger, 2006). Facultad de Química UNAM | Marco teórico 33 una fragmentación química, un incremento en la susceptibilidad al ataque proteolítico y a la inactivación de enzimas, lo que ocasiona la pérdida de la función biológica. La ruptura de los enlaces disulfuro (Figura 9) entre los átomos de azufre de la cisteína da como residuo ácido cisteico, su reacción es la siguiente: Figura 9. Mecanismos de acción del APF sobre membranas biológicas (Armstrong y Bennett, 1982). 2.3.3.3 Ventajas y desventajas. Investigaciones recientes han demostrado que el ácido perfórmico es biodegradable, lo que significa que no presenta residuales dañinos a la salud (Gehr, 2009), por ello, su popularidad como agente desinfectante se ha visto incrementado. Por otro lado, presenta algunas desventajas, pues su manejo es altamente peligroso, ya que presenta alta reactividad y explosividad, sobre todo a temperaturas que sobrepasen los 20°C. Al ser inestable, sólo permite ser utilizado durante las primeras cinco horas después de ser sintetizado. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 34 2.4 Reacciones de oxido reducción. En una reacción de oxidorreducción (redox) se lleva a cabo una transferencia de electrones de una especie a otra, se dice que una especie se oxida cuando pierde electrones y se reduce cuando gana electrones. Así mismo, un agente oxidante es el que toma electrones de otra especie y se reduce; mientras que un agente reductor, dona electrones a otra y se oxida. La reacción redox va acompañada por un intercambio de energía química. La forma fácil de analizar la espontaneidad de una reacción química es utilizando la energía libre de Gibbs como criterio y descrita en la ecuación 1 (Smith & Van Ness, 1997). (Ec.6) Donde: G es la energía libre de Gibbs, S es la entropía, T es la temperatura, V es el volumen, P es la presión, k es el potencial químico de la k-ésima especie química y nk es el número de moles de la k-ésima especie química. El último término corresponde a la energía química. Como el análisis de las reacciones químicas se hace en condiciones de temperatura y presión constantes, se concluye que la energía libre de Gibbs corresponde exactamente a la energía química. Facultad de Química UNAM | Marco teórico 35 Dado que es muy difícil medir la energía intercambiada durante una reacción química, se ha optado por conectarla con la carga eléctrica transportada por los electrones cuando estos se mueven desde una sustancia que se oxida hacia una sustancia que se reduce. Esto se hace sustituyendo la energía química por una energía potencial eléctrica imaginaria referida específicamente al transporte de los electrones. Esta diferencia de potencial eléctrico imaginaria corresponde exactamente con la diferencia de potencial redox denotada por E (Huheey, 1981): (Ec.7) Por lo anterior, se establece que la diferencia en la energía libre de Gibbs de una reacción química se calcula como el producto de la diferencia de potencial redox E multiplicada por la carga eléctrica q transportada por los electrones. Un aspecto importante de mencionar, es que las reacciones electroquímicas siempre tratarán de liberar energía en forma análoga al comportamiento del potencial gravitacional y de potencial eléctrico, por lo que los electrones siempre se moverán espontáneamente desde un potencial redox menor hacia un potencial redox mayor. En el caso de los electrones, estos se comportan de la misma forma bajo la acción de un potencial eléctrico que bajo la acción de un potencial redox. Proceso espontáneo G < 0 Proceso no espontáneo G > 0 Se debe mencionar, que el potencial redox depende de las condiciones de concentración y de temperatura para una especie química dada, si se alteran estas condiciones el valor del potencial redox, también se verá alterado: razón por la que es necesario definir un potencial redox estándar (E°). Así Facultad de Química UNAM | Marco teórico 36 mismo, es necesario que la actividad termodinámica ak de cada una de las especies químicas sea igual a la unidad, ak =1 (Huheey, 1981). El potencial redox estándar (E°) es un valor relativo medido en condiciones estándar de temperatura y presión (STP), esto es a 25°C y a 1 bar de presión, con un electrodo de referencia, el electrodo de hidrógeno. Para cualquier sistema que acepte electrones de un electrodo normal de hidrógeno es una media celda con un potencial redox positivo. Por el contrario, cuando un sistema dona electrones al electrodo normal de hidrógeno se define como una media celda con un potencial redox negativo. Un valor de E° positivo y de alta magnitud es indicativo de un ambiente que favorece las reacciones de oxidación. Del otro lado, un valor E° negativo y de baja magnitud es indicativo de un ambiente altamente reductor (Tabla 5). Tabla 5. Potenciales redox ordenados (Harris, 2007). Agente Oxidante Agente Reductor E° A u m en ta e l p o d er o xi d an te A u m e n ta e l p o d er r ed u ct o r 2.890 2.075 1.507 0.339 0.000 -0.402 -2.936 -3.040 Facultad de Química UNAM | Marco teórico 37 Esta magnitud mide la capacidad global del agua, de proceder por sí misma a la oxidación de sustancias. Es decir, un agua con un elevado potencial redox contendrá apreciable cantidad de oxígeno. Esta es rica en compuestos en estado oxidado como: Fe y Mn en sus estados superiores de oxidación, Sulfatos, nitratos, fosfatos y materia orgánica (Marín, 2003). Las reacciones de oxidorreducción regulan el comportamiento de muchos compuestos químicos presentes en cuerpos de agua naturales. La reactividad, solubilidad y movilidad cíclica de elementos esenciales para los sistemas biológicos, como son el azufre, el nitrógeno, el carbono, el fósforo y otros elementos metálicos; son afectadas por cambios en el potencial redox. Al mismo tiempo, el potencial redox afecta la distribución y la actividad metabólica de microorganismos. Esto es, la distribución espacial de microorganismos aerobios y anaerobios está determinada principalmente por el potencial redox del ambiente. Los microorganismos aerobios estrictos son metabólicamente activos a potenciales redox positivos, mientras que los anaerobios estrictos demuestran actividad metabólica, solo a potenciales redox negativos. Variaciones pequeñas en el potencial redox pueden ocasionar cambios en la nutrición y fisiología de determinados microorganismos (Lynch y Poole, 1979). El uso del potencial redox en aguas residuales y en
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