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FECUNDACIÓN A BLASTULACIÓN ETAPAS TEMPRANAS DEL DESARROLLO Etapas del desarrollo embrionario • Fecundación • Segmentación • Gastrulación • Organogénesis IMPORTANCIA INTERPRETAR PATOLOGÍAS DERIVADAS DE MALFORMACIONES GENÉTICAS Y CONGÉNITAS. APLICACIÓN DE TÉCNICAS REPRODUCTIVAS PARA LA PRODUCCIÓN ANIMAL MANIPULACIÓN DE EMBRIONES TEMPRANOS PROGRAMAS DE MEJORAMIENTO ANIMAL, DE REPRODUCCIÓN ASISTIDA EMBRIOLOGÍA ESTUDIO DEL DESARROLLO EMBRIONARIO (ONTOGENIA) GAMETOGÉNESIS Gametogénesis • Diferenciación y división meiotica formación de células haploides • Control hormonal • Cooperación de las células somáticas Cels de Sertoli Cels foliculares del ovario i Falsa albugínea Epitelio germinal Folículos primordiales • Ovario (H/E): • Folículo primario • Y • folículos primordiales o • Ovario (H/E): • Detalle de la • pared de un folículo antral en la región del cumulus oophorus OVOGÉNESIS ESPERMATOGÉNESIS DIFERENCIACIÓN ESPERMATOZOIDES INMADUROS DIFERENCIACIÓN DETENIDO EN METAFASE II FECUNDACIÓN OVULACIÓN Caida de AMPc y aumento de LH Espermatogénesis • -Espermatocitogénesis • Proceso meiótico • Espermiogénesis Testículo (H/E) 4X: se observan los túbulos seminíferos contorneados y el tejido central con vasos Túbulos seminíferos Espermiogenesis • Aplanamiento y condensación de la cromatina • Generación del acrosoma a partir del Golgi • Formación del flagelo a partir de los centríolos • Relocalizacion de las mitocondrias • Eliminación del citoplasma residual ESPERMATOZOIDE: ESTRUCTURA Protaminas Corte transversal a nivel de la pieza intermedia Al abandonar los testículos los espermatozoides no están preparados para fertilizar el ovocito II y deben experimentar dos procesos: maduración En el epidídimo capacitación reacción acrosómica En el tracto genital femenino MADURACIÓN EPIDIDIMARIA Adquisición de motilidad Cambios en la membrana estabilidad de la cromatina z MADURACIÓN DE LAS GAMETAS O La maduración, productos segregados por el epitelio epididimario, se agregan factores discapacitantes como glicerilfosforilcolina, la carnitina y otros, que modifican su metabolismo haciendo variar la carga negativa de su superficie. Se desarrollan microvesículas y microtúbulos entre la membrana plasmática y el acrosoma, adquieren una motilidad característica, además glucoproteinas de origen epididimario se integran a la membrana plasmática de espermatozoide, formando una cubierta superficial. LAS GAMETAS FORMADAS EN LAS GONADAS NO TIENEN CAPACIDAD FECUNDANTE = DEBEN MADURAR TESTÍCULO ESPERMATOGÉNESIS EPIDÍDIMO MADURACIÓN OVARIO OVOGÉNESIS OVIDUCTO (ISTMO) REACCIÓN ACROSÓMICA tgf CAPACITACIÓN OVULACIÓN CAPACITACIÓN ESPERMÁTICA Cambios en la fluidez de la membrana pérdida de glicoproteínas de la membrana fosforilación de las pro- teínas de la membrana cambios en la motilidad +PK Gránulos corticales Células del cumulus Meiosis II 1er cuerpo polar oolema Reserva de RNAm MADURACIÓN DE LAS GAMETAS O reanudación de la meiosis I y detención de la meiosis II (metafase) crecimiento del ovocito Sintesis y reserva de RNAm Sintesis de ARNt,proteinas, ribosomas síntesis de gránulos corticales síntesis de la ZP culminación de la meiosis II (fecundación) Gránulos de vitelo: lipoproteinas y glucogeno Granulos corticales Gags,E proteolicas y glucop adhesivas Zona pelucida • ZP: membrana primaria fundamental para el reconocimiento específico de los espermatozoides, inducción de la reacción acrosómica, bloqueo de la poliespermia y protección del ovocito/embrión Glucoproteínas ZP1, ZP2 y ZP3 con oligosacáridos Unidos al O o al N de la cadena de aminoácidos ZP • Un spz debe penetrar la corona radiante y luego la zona pelúcida. • Capa compuesta de tres gligoproteinas: ZP1 ZP2 ZP3 MEMBRANA PELÚCIDA (ZP) Los oligosacáridos de ZP3 son los receptores especie-específicos de los espermatozoides La cadena peptídica actúa enzimáticamente para provocar la reacción acrosómica Etapas del desarrollo embrionario • Fecundación • Segmentación • Gastrulación • Organogénesis Fecundación • Contacto y reconocimiento entre las gametas • Entrada del espermatozoide en el ovocito • Fusión del material genético • Activación del desarrollo Las fases de la fecundación son las siguientes: Fase 1: Penetración de la corona radiada Fase 2: Penetración de la zona pelúcida Fase 3: Fusión de las membranas celulares del ovocito y el espermatozoide FECUNDACIÓN ISTMO ll Los ovocitos conservan su capacidad para ser fecundados hasta 24 hs. después de la ovulación, y el espermatozoide, entre 24 y 72 hs. Con el eyaculado se depositan en la vagina unos 8.000.000 de espermatozoides, en el bovino, muchos quedan en el camino atrapados por barreras físicas, como el cuello uterino y la unión uterotubárica, o destruidos por la acidez vaginal, alcanzando el óvulo muy pocos. Los espermatozoides son atraídos hacia el ovocito II mediante quimiotaxis Los mecanismos quimiotácticos varían entre especies (Ward y Kopf ,1993) Fase 1 La penetración de la corona radiada, se produce por acción de la enzima hialuronidasa, que desprende las células de la corona radiada, Se produce después de al unión a la zona pelúcida, inducida por proteínas de la zona, culminando con la liberación de enzimas necesarias para penetrar la zona pelúcida, que incluyen a la hialuronidasa y la acrosina, almacenadas en el interior del acrosoma. i Proteinas ligandos del zoide a ZP3: SP56 ZRK Galactosiltransferasa Fase 2 La penetración de la zona pelúcida, esta capa glucoproteica facilita y mantiene la unión con el espermatozoide, esta unión es mediada por el ligando ZP3 de la zona pelúcida y receptores ubicados en la membrana plasmática del espermatozoide (SP56,ZRK y galactosiltransferasa. Con la liberación de la acrosina, penetra la zona pelúcida y entra en contacto con la membrana plasmática del ovocito. EVENTOS DE LA FECUNDACIÓN disgregación de las células de la corona radiata unión de los espermatozoides a la ZP reacción acrosómica fusión de las membranas del ovocito y del espermatozoide entrada del núcleo del espermatozoide El espermatozoide reconoce a ZP3. ZP3 inicia la reacción acrosómica REACCIÓN ACROSÓMICA pérdida de la membrana acrosómica externa liberación de las enzimas acrosomales persistencia de la membrana acrosómica interna utilización de la región post-acrosómica de la membrana espermática para el reconocimiento del ovocito. ? El ingreso de Ca+2 extracelular provoca la fusión de las membranas y la liberación de las enzimas acrosomales Fase 3 La adhesión inicial del ovocito Al zoide es mediada por integrinas. Se fusionan las membranas plasmáticas PREVENCIÓN DE LA POLISPERMIA Cambio del potencial electrico de la M ovocito de -70mv a +20 mv ,entrada de Na REACCIÓN CORTICAL Las enzimas de los gránulos corticales modifican la composición de la ZP, eliminando los receptores y bloqueando la entrada de otro espermatozoide proteasas glicosidasas peroxidasas REACCIÓN DE ZONA remoción de carbo- hidratos de ZP3 proteólisis de ZP2 La cabeza y la cola penetran en el ovocito, quedando la membrana plasmática sobre la superficie del ovocito. ACTIVACIÓNDEL OVOCITO Na+ pH síntesis de proteínas Síntesis de DNA IP3 IP-R G PLC H+ IP3 DAG PKC EXOCITOSIS NAD NADP O2 H2O Terminación de la meiosis Biosíntesis lipídica membranas REL Eventos tempranos reducción de O2 aumento de NADP Eventos tardíos replicación del DNA aumento de la síntesis de proteínas Ca2 ANFIMIXIS Descondensación del núcleo del Z – final meiosis II en ovocito Replicación del DNA en cada pronúcleo y fusión ANFIMIXIS Pronúcleos Activación de los Pronúcleos masculino y femenino ANFIMIXIS Se establece el número diploide de cromosomas de la primera célula embrionaria. En mamíferos se requiere el genoma de ambas células parentales para el normal desarrollo ( los pronúcleos no son equivalentes) Las primeras células se llaman BLASTÓMERAS Fusión de pro-núcleos: 12 hs. post-fecundación Las consecuencias de la fecundación son: • Restablecimiento del numero diploide de cromosomas • Inicio de la segmentación • Cigoto es el ovocito fecundado ESTADO DE PRONUCLEO • El núcleo de la cabeza del spz se convierte en el pronúcleo masculino y del óvulo fecundado, en el pronúcleo femenino. • Se fusionan y se produce un solo núcleo diploide, el nombre de óvulo fecundado cambia a cigoto. PRONUCLEO (OVOCITO FEC) RECREO mailto:ceip.virxedabarca@edu.xunta.es CROMOSOMAS 2 BLASTOMERAS (3 h) 4 BLASTOMERAS (12-15 h) 8 BLASTOMERAS (20-30 h) MORULA (72 h) ETAPAS DEL DESARROLLO EMBRIONARIO SEGMENTACIÓN PROCESO QUE CREA LA MULTICELULARIDAD Y PREPARA AL EMBRIÓN PARA LA ORGANOGÉNESIS SERIE DE DIVISIONES MITÓTICAS QUE ORIGINAN CÉLULAS CADA VEZ MÁS PEQUEÑAS DENOMINADAS BLASTÓMERAS RECUPERACIÓN DEL ÍNDICE NÚCLEO-CITOPLASMA DEBIDO A LOS CONTROLES DEL CICLO CELULAR, PARTICULAR DE ESTE PROCESO. La primera segmentación es de dos (2) células, ocurre entre las 2 o 3 horas de la fecundación. El plano de segmentación pasa por el polo animal y vegetativo divide al huevo en dos blastómeros iguales. La segmentación se efectúa según la cantidad de vítelo y por lo tanto según el huevo considerado, por lo general la segmentación se efectúa mas rápidamente cuanto menos vítelo tenga. La segmentación puede ser total o parcial. NO COMPACTADO COMPACTADO en 8 cels PLANOS DE SEGMENTACION 1, 2 Y 3 1 1 1 3 2 1-Cantidad y distribución del vitelo en el citoplasma del ovocito 2)Factores del citoplasma Clasificación de los huevos Primero se clasifican de acuerdo con la cantidad del material de reserva presente, siendo: Huevos alecíticos u oligolecíticos, con vítelo muy pequeño, por ejemplo, mamíferos en general. Huevos heterolecíticos o mediolecíticos, incluyen reserva y vítelo medianamente abundante, por ejemplo anfibios. Huevos polileciticos o megaleciticos, con gran cantidad de vítelo o deutoplasma, encontramos en aves, reptiles y peces. Huevos centrolecíticos, con un deutoplasma central, con núcleos y citoplasma periférico, por ejemplo en los insectos. CLASIFICACIÓN DE HUEVOS Según la cantidad de vitelo Macrolecíticos Oligolecítico Mesolecítico Según la Distribución del vitelo Isolecíticos (son generalmente oligo y mesolecíticos) Anisolecíticos Centrolecíticos (generalmente mesolecíticos) Telolecíticos (generalmente macrolecíticos) La segmentación es total cuando todas las células del cigoto sufren división, segmentación holoblástica, y puede ser: Igual, en huevos alecíticos de anfioxos y mamíferos, dando origen a una celuloblástula igual, con la cavidad blastular en el centro. Desigual, en huevos heterolecíticos de anfibios, dando origen a una celuloblástula desigual, que se produce por que la mayor proporción de vítelo conduce a un retardo en las divisiones celulares en el polo vegetativo. TIPOS DE SEGMENTACIÓN EL PATRÓN DE CLIVAJE DEPENDE DE LA CANTIDAD Y DISTRIBUCIÓN DEL VITELO PATRÓN POSICIÓN DEL VITELO SIMETRÍA EJEMPLOS RADIAL EQUINODERMOS HOLOBLÁSTICO ISOLECÍTICO ESPIRAL MOLUSCOS completa ROTACIONAL MAMÍFEROS MESOLECÍTICO RADIAL ANFIBIOS MEROBLÁSTICO TELOLECÍTICO DISCOIDAL REPTILES, PECES AVES CENTROLECÍTICO SUPERFICIAL INSECTOS SEGMENTACIÓN EN MAMÍFEROS CARACTERÍSTICAS Inicio más tardío Divisiones más lentas (1 división cada 12- 24 hs.) Patrón de clivaje holoblástico rotacional Asincronía de las divisiones celulares El genoma es activado en las primeras divisiones (2 células) COMPACTACIÓN COMPACTACION • Mecanismos de la COMPACTACION • -Expresión de proteínas de adhesión: • CADHERINAS. • - Formación de uniones ocluyentes entre las células externas. • -Formación de unión gap entre células internas Consecuencias de la COMPACTACION -Regionalización de la morula: -MACIZO CELULAR INTERNO - derivan el embrión, saco vitelino, alantoides y amnios. Las células expresen Oct4 y Foxd3 (factores de trascripción asociados con pluripotencialidad), y FGF4 que promueve mitosis de trofoblasto. -CELULAS EXTERNAS – deriva el trofoblasto que formara el corion (parte fetal de placenta). PRIMER PASO DE DIFERENCIACION (necesario para implantación) SEGMENTACIÓN EN MAMÍFEROS MÓRULA BLASTULACIÓN BLASTOCISTO MCI O EMBRIOBLASTO TROFOBLASTO UNIONES ESTRECHAS CÉLULAS INTERNAS CÉLULAS EXTERNAS ZP COMPACTACIÓN Expresión de proteínas de adhesión: CADHERINAS Formación de uniones ocluyentes entre las céls. externas. Formación de uniones comunicantes (gap) entre las céls.internas A partir de la tercera o cuarta división se denomina mórula en los mamíferos superiores, más o menos al tercer día, y coincide con el ingreso al útero. CICLO CELULAR EMBRIONARIO vs CICLO CELULAR SOMÁTICO BIFÁSICO EMBRIONARIO SOMÁTICO Factor promotor de la mitosis(ciclina B y kinasa cdc2) Blástula • Blastómeros – micrómeros – macrómeros • Blastocele • Polo vegetal • Polo animal • Una capa de células Blástula • La blástula es un estado temprano del desarrollo embrionario en los animales; en los mamíferos recibe el nombre de blastocisto. La blástula sigue a la mórula y precede a la gástrula en la secuencia de desarrollo. Una blástula tiene más de 64 células, con una gran cavidad central, denominada blastocele. • La formación de la blástula es el final del proceso llamado segmentación, en el que el cigoto fecundado se divide por mitosis en numerosas células unidas llamadas blastómeros. http://es.wikipedia.org/wiki/Embrionario http://es.wikipedia.org/wiki/Animal http://es.wikipedia.org/wiki/Mam%C3%ADferos http://es.wikipedia.org/wiki/Blastocito http://es.wikipedia.org/wiki/M%C3%B3rula http://es.wikipedia.org/wiki/G%C3%A1strula http://es.wikipedia.org/wiki/Blastocele http://es.wikipedia.org/wiki/Segmentaci%C3%B3n_(zoolog%C3%ADa) http://es.wikipedia.org/wiki/Cigotohttp://es.wikipedia.org/wiki/Fecundaci%C3%B3n http://es.wikipedia.org/wiki/Mitosis http://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lula http://es.wikipedia.org/wiki/Blast%C3%B3mero http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Blastulation.png En los mamíferos, a partir del estadio de 16 a 32 células, las células inferiores de la mórula se aplanan, se produce una deslaminación entre los blastómeros inferiores y superiores, formándose una cavidad, equivalente es el blastocele primario en las aves. La blástula primaria, denominada blastocisto en los mamíferos, se ensancha y ocupa el mayor espacio debajo de la membrana pelúcida. Los blastómeros periféricos del blastocisto se multiplican más rápidamente que los blastómeros superiores y forman una capa celular bien definida denominada trofectodermo, trofodermo o trofoblasto. En las aves el proceso de segmentación conduce la formación de una discoblástula, las celulas del polo animal son las que se segmentan y no las del polo vegetativo, segmentación meroblástica, los planos de segmentación no logran llegar al vitelo, quedando las celulas comunicadas entre si por el vitelo. BLÁSTULA DE MAMÍFERO ZONA PELÚCIDA O M.C.I. Movimiento del blastocisto hacia el interior del útero • 1) Proliferación del trofoblasto. • 2)Trofoblasto digiere un camino a través del tejido • uterino. Secreta enzimas digestivas (colagenasas, • estromalisina, plasmina) • 3)Trofoblasto cambia población de integrinas a • medida que avanza y se implanta. • 4)“Reacción decidual”: útero aporta sangre al • embrión. Incremento de la permeabilidad de vasos • uterinos y angiogénesis. • • BLASTOCISTO: parcialmente incluído. • • TROFOBLASTO: citotrofoblasto • sincitiotrofoblasto (hCG) • • Macizo Celular Interno: hipoblasto • epiblasto (cav. amniótica) • • ENDOMETRIO: edema, muy vascularizado, • glándulas voluminosas, glucógeno y moco. • Días 7-8 EXPANSIÓN Y LIBERACIÓN DE LA ZONA PELÚCIDA ECLOSIÓN LISIS DE LA ZP POR LA ESTRIPSINA (PROTEASA DE LA MEMBRANA PLASMÁTICA DEL TROFOBLASTO) Y SALIDA DEL TROFOBLASTO ADHESION UTERO- TROFOBLASTO • • A) interacciones débiles: proteoglicanos tipo • heparan-sulfato y sus receptores. • • B) interacciones fuertes: cadherinas, integrinas, • complejo trofinina-tastina-bistina. • • C) Heparin Binding-EGF: une receptores de • EGF y a PG heparan-sulfato. • • D) Integrina avb3 (trofoblasto y útero) une • fibronectina, PG perlecano. • • E) Integrina a7b1, “invasiva”, se une a laminina • dentro del estroma uterino. • Días 6-7 IMPLANTACIÓN Capas que envuelven al huevo o cigoto MAMIFEROS Membrana primaria Membrana secundaria Oolema o membrana ovular Membrana o zona pelúcida Corona radiante AVES Membrana primaria Membrana secundaria Membranas terciarias Membrana vitelina u oolema Zona radiata – membrana perivitelina Membrana continua Membranas extravitelinas Membrana chalazifera Chalazas Albumina Membranas testáceas Cáscara APARATO REPRODUCTOR FEMENINO EL HUEVO DE AVES SEGMENTACIÓN EN AVES Patrón de segmentación es discoidal y meroblastica Disco germinal blastocele o cavidad de segmentación, las celulas en division constituyen un disco, el blastodisco o blastómero, : El área que tiene debajo el blastocele se llama área pelucida. El área que limita con el vitelo se denomina área marginal u opaca. BLASTULACIÓN EN AVES BLASTODERMO CAVIDAD SUBGERMINAL VITELO BLÁSTULA DE AVE (DISCOBLÁSTULA) VISTA LATERAL CONTINUARÁ…
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