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CCaarrrreerraa ddee TTééccnniiccooss PPaarraa BBiiootteerriioo Técnicas para Bioterio V El Pez como Reactivo Biológico AAuuttoorr:: HHeerrnnáánn JJuulliinn TTééccnniiccoo ppaarraa BBiiootteerriioo CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 2 INTRODUCCIÓN Los peces son animales de laboratorio importantes y han servido como modelos en todas las disciplinas de la s ciencias bio lógicas y biomédicas. Aunque resulta difíc il contar el número de especies animales ut ilizadas en invest igación, está claro que lo s peces const ituyen uno de lo s grupos de vertebrados más comúnmente usados. El término peces incluye más de 20.000 especies con una diversidad bio lógica, rango de hábit ats y est rategias adaptat ivas enormes. Const ituyen además la clase más ant igua de lo s vertebrados, con más especies representat ivas que en todas las restantes clases en conjunto. Por esta razón son extremadamente importantes como modelos vertebrados básicos. Aunque hay una gran var iedad de peces disponibles, só lo un pequeño número son comúnmente ut ilizados para invest igac ión. Como en el caso de otros vertebrados ut ilizadas como animales de laboratorio , las especies de peces pueden seleccionarse sobre la base de una var iedad de caracter íst icas. Algunas especies son ut ilizadas por su gran tamaño, permit iendo la manipulación de órganos y tejidos, toma de muestras, y procedimientos quirúrgicos (t ruchas, t ilapia, carpas, raya y anguila eléct r ica). En cambio, ot ras especies son eleg idas por su pequeño tamaño, fácil manipulac ión genét ica, y t iempo generaciona l chico (zebrafish, medaka, fathead minnow, platys, mo llie s y swordfish). Otras especies son elegidas por su importancia como productoras de alimentos con proteínas de alt a calidad, con ensayos e invest igaciones en campos relacionados con la nutr ición, genét ica, fisio logía, sistemas de producción (acuicultura), y prevenc ión de enfermedades (t ruchas, salmones, cat fish, carpas y t ilap ias). Por últ imo, algunas especies son ut ilizadas por poseer alguna caracter íst ica bio lóg ica o patológica dist int iva (modelos). Algunos ejemplos incluyen estudios de melanomas en platyfish y swordtail híbr idos como modelos de factores relacionados con carcinogénesis, uso de lo s axones de la raya eléctr ica en neurobiología, y modelos de genét ica de l desarro llo en zebrafish y medaka que están asociados a la tecno logía t ransgénica(Tabla 1). Las ventajas de los peces como modelos exper imentales incluyen: Gran diversidad entre las especies Alta fecundidad Poseen, en la mayor ía de los casos, huevos relat ivamente grandes con fecundación externa Actualmente, en Europa, los peces const ituyen el tercer grupo de animales de laboratorio ut ilizados. Sus usos pr inc ipales también inc luyen los ensayos de toxicidad rut inar ios que son requer idos por la ley. Por t res razones pr incipales lo s peces serán cada vez más ut ilizados como animales de laboratorio: Existe una tendencia gradual hacia el uso de vertebrados infer iores La legis lación apunta hacia el uso de animales con bajo grado de neurosensibilidad Las regulaciones ambientales son cada vez más est r ictas en cuanto al uso de químicos que puedan afectar al ambiente CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 3 Nombre común Especie Usos comunes Goldfish Carassius auratus Neurociencia Carpa común Cyprinus carpio Acuicultura Zebrafish Danio rerio Biología del desarrollo Toxicología acuática Ensayos de carcinogénesis Anguila eléctrica Electrophorus electricus Neurociencia Killifish Fundulus heteroclitus Biología del desarrollo Endocrinología Channel catfish Ictalurus puntactus Acuicultura Trucha arcoíris Oncorhynchus mykiss Acuicultura Fisiología comparada Salmón del atlántico y otros Salmo salar Oncorhynchus spp. Acuicultura Fisiología comparada Tilapia Tilapia spp. Oreochromis spp. Acuicultura Medaka Oryzias latipes Biología del desarrollo Ensayos de carcinogénesis Fathead minnow Pimephales promelas Ensayos de carcinogénesis Toxicología acuática Raya eléctrica Torpedo califórnica Neurociencia Swordtail Xiphophorus helleri Carcinogénesis Platyfish Xiphophorus maculatus Carcinogénesis Tabla 1. Especies de peces comúnmente utilizadas en investigación. Tomado de Caselbolt et al. (1998). Care and use of fish as laboratory animals: Current state of knowledge. Laboratory Animal Science, 48 (2):124-136. Nota: el término acuicultura indica múltiples disciplinas relacionadas, incluyendo producción, genética, nutrición, fisiología y control de enfermedades. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 4 ANATOMÍA DE PECES OSEOS Los peces óseos son un grupo muy diversificado; por lo tanto es imposible presentar todas las var iantes encontradas. No obstante se t ratará de presentar las caracter íst icas más importantes. Los peces óseos generalmente están bien representados por especies como la perca amar illa (Perca f lavescens) la cual es bastante abundante y de fáci l mantenimiento para los estudios. No todos los peces t ienen la forma corporal fusiforme de la perca; por esta razón Bond (1979) realizó estudios combinando la vista lateral con un corte t ransversal, dando como resultado la presente clasificación: fusiforme anguiliforme o alargado ovalado o t runcado comprimido depr imido globular o subcircular. En cuanto a las aletas lo s peces generalmente t ienen aletas pares: pectorales y pélvicas; y aletas impares: dorsal, caudal, anal y algunos con adiposa (Figura 1). La ubicación de las aletas pélvicas también var ía considerablemente entre lo s peces óseos y provee información acerca de su posic ión filogenét ica y de la maniobrabilidad del cuerpo del pez. En peces más pr imit ivos las a letas pélvicas están en posición abdomina l, mientras en peces más avanzados estas son torácicas o yugulares; en el últ imo caso están por debajo de la cavidad branquial (Figura 3). En algunos casos extremos las aletas pueden estar por debajo del mentón o de los ojos; esta posición es llamada mentoniana. La aleta caudal difiere en cuanto a forma y est ructura entre los peces óseos, estando relacionada directamente con la función que cumple en los hábitos de l pez. Las formas más comunes son: heterocerca, dificerca y homocerca. Otras est ructuras están asociadas, en algunos peces pr imit ivos, con la aleta caudal. Es e l caso de la aleta adiposa (aleta dorsal pequeña sin elementos óseos). En peces de nado rápido, como los atunes, aparecen pequeñas aletas ( llamadas a let illas o pínulas) dorsales y ventrales que se cont inúan hasta la caudal. En estas especies también pueden aparecer a lo s costados de l pedúnculo caudal quillas que sirven, probablemente, para estabilizar lo s movimientos natatorios. Como los peces óseos ocupan los más diversos hábitats y consumen los más var iados alimentos, han evo lucionados con dist intos t ipos de bocas (Figura 4) . Las ubicaciones son usualmente refer idas como: terminal ( las dos mandíbulas son iguales), super ior ó súpera (t iene la mand íbula infer ior prominente), infer ior ó ínfera ( la mandíbula super ior o el hocico es prominente) y prot ráct il (si se ext iende para comer). Algunos peces t ienen est ructuras especializadas asociadas con la cabeza. Esto incluye espinas en el hueso del preopérculo, en el cráneo cerca del ojo, y enfrente de la nar iz y los cirros, o en las aletas. Var ias Familias del Orden Silur iforme t ienen barbillas alrededor de la boca, que son usadas para CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 5 encontrar comida por contacto y como quimiorreceptores (Moyle y Chech, 1982). Ventralmente en el piso de la cabeza del pez hay una membrana que cierra la cavidad branquia l y está sostenida por una ser ie de huesos llamados radios branquiostegos. El número de radios branqu iostegos sirven para dist ingu ir lo s grupos taxonómicos. Dentro de la cavidad branquial de la mayoría de lo s peces óseos hay cuatro arcos branquiales. Cada uno sost iene lo s filamentos branquiales en el borde posterior, y en el anter ior y lateral poseen unas est ructuras llamadas branquispinas que son pro longaciones dérmicas y sirven para retener e l alimento y que este no escape por entre las branquias. Las escamas de lo s peces más avanzados son elasmoideas, que pueden ser ciclo ideas o cteno ideas (Figura 5). Estudios en morfo logía de escamas han revelado algunas caracter íst icas interesantes de uso taxonómico (Bat ts, 1964, Delamater y Courtenay, 1974). No todas las escamas en un mismo pez son iguales, las escamas que cubren la línea lateral difieren de las del resto de l cuerpo por poseer surcos o canales, estos permit en el pasaje de agua hacia lo s neuromastos. Cuando el pez pierde una escama ésta es reemplazada por escamas regeneradas, las cuales carecen de detalles en el centro a causa de su rápido llenado del espacio vacante. Las escamas sirven, también, para conocer la edad del pez, ya que éstas adicionan anillo s a medida que crecen. De la boca al ano, la pr imera cavidad en el t racto digest ivo es la bucofar íngea. Es amplia y se pueden diferenciar dos partes: la bucal, y e l aparato branquial. Detrás de esta cavidad, el esó fago, un tubo corto y derecho ; se cont inúa con el estómago que frecuentemente está dividido en t res partes: la cardíaca, la ciega y la p ilór ica. Presenta forma de “Y” acostada con la abertura hacia la parte anter ior del cuerpo. El int est ino, que es de disposición simple y replegado sobre sí mismo, difiere en largo y forma entre las dist intas especies. E l hígado, de posición anter ior en la cavidad abdominal y dorsal a l estómago, está dividido en dos lóbulos laterales grandes y uno pequeño de posición mediana. La vesícula biliar es de co lor verdosa, t iene aspecto alargado, con su extremo ciego en forma de gancho, y se sitúa por detrás de l int est ino anter ior. E l páncreas, debajo del intest ino, es visible en algunas especies y en otras es difuso (const ituyendo nódulos adher idos al mesenter io int est inal) o embebido en el hígado. Recostado en la superficie dorsal poster ior del estómago está el bazo, una est ructura alargada que ayuda a mantener y producir las células sanguíneas. Las gónadas, el r iñón y a menudo la vejiga natatoria, ocupan la parte dorsa l de la cavidad general del cuerpo, por arr iba del intest ino y por detrás de l estómago. El r iñón y las gónadas están relac ionados formando el aparato urogenital. Los r iñones son dos est ructuras longitudinales que se encuentran por encima de la cavidad abdominal, ventrales a la co lumna. Son de co lores rojo oscuro, globosos y muy irr igados. Están compuestos por muchos túbulos que hacia anter ior se expanden en la cabeza del r iñón, consist iendo pr imordia lmente en senos venosos. Aquí la masa de capilares filt ra las part ículas de desechos para su excreción. En la parte posterior del r iñón, estos túbulos desc ienden uniéndose como largos conductos (conducto de Wolf), lo s cuales vierten los desechos provenientes del r iñón dentro de la vejiga ur inar ia en lo s machos o en el seno urogenital en las hembras. Así la vejiga ur inar ia en CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 6 lo s machos es una est ructura ubicada en la parte dorsal del t racto digest ivo, mientras en las hembras se vuelven parte de lo s oviductos y forman el seno urogenital. En los machos, la proyección externa de la vejiga ur inar ia es llamada papila ur inar ia y los productos de desecho son eliminados a t ravés de ésta. En las hembras estos mater iales de desecho son excretados a través de l poro urogenital. E l aparato reproductor en los machos consiste en un par de test ículo s localizados detrás del estómago y e l duodeno, debajo de la vejiga natatoria y justo encima del intest ino. Los test ículos son lobulados y t ienen pliegues a lo largo del eje pr inc ipal. Dentro de estos pliegues lo s vasos deferentes vierten a l exter ior sus productos entre la papila ur inar ia y el ano. En las hembras, los ovar ios se hallan ubicados dorsoventralmente dentro de la cavidad general del cuerpo, en sent ido longitudina l. Los extremos anter iores se hallan en contacto con la parte ciega del estómago. Ambas gónadas derecha e izquierda se fusionan en su extremo posterior; el gonoducto es impar. Se mant ienen fijas a la parte dorsal de la cavidad per itoneal por medio de membranas, los mesovar ios, que alcanzan el borde dorsolateral int erno de cada una de las gónadas y se ext ienden a lo largo de toda su longitud. El oviducto, que (excepto en salmónidos) son cont inuación de los ovar ios, reciben óvulos maduros o fert ilizados. Los óvulos son usualmente expulsados por un poro abdomina l exactamente detrás del ano. Así el oviducto forma un canal desde e l ovar io hasta el poro abdominal. La vejiga natatoria es un órgano globifo rme usado por la mayor ía de lo s peces óseos para regular la flotabilidad. Está localizada entre el t racto int est inal y el r iñón y las gónadas. Los peces fisostomos t ienen una conexió n tubular entre la vejiga natatoria y el canal alimentar io (esta es siempre dorsal), de esta manera se provee el aire para la vejiga, aumentando así la flotabilidad. Por el contrar io , los peces fisoc listos t ienen una vejiga cerrada sin ningún t ipo de conexión; t ienen un sistema especializado que consta de un gran desarro llo de la vascular ización y del tejido glandular, que regulan el vo lumen del gas. La vejiga natatoria t iene al menos t res capas dist intas de tejidos que le proveen de la elast icidad requer ida para llenarse de gas. Algunos peces ut ilizan la vejiga natatoria para respirar aire atmosfér ico, tal es el caso del lepisosteus y amia ; en aguas de poca profundidad y con baja concentración de oxígeno, estos peces van a la superfic ie y toman aire por la boca que, por med io del esó fago pasa a la vejiga natatoria y así luego por difusión al sistema sanguíneo. También func iona como receptor de sonido en otras especies; las ondas sonoras son percibidas por la ve jiga y t ransmit idas por el aparato de Weber hacia el o ído ; la emisión de sonido (tr illa, corvina) es producida por músculos que se encuentran a lo s laterales de la vejiga que la hacen vibrar dando como resultado un tambor illeo. Generalmente, el s istema circulatorio está formado por cuatro componentes pr incipales: el corazón, el sistema branqu ial, la circulación visceral, y e l suminist ro de sangre somát ica. En el corazón la sangre pasa a t ravés de cuatro cámaras (de anter ior a poster ior): seno venoso, el at r io , el ventr ículo, y e l bulbo arter ial. E l seno venoso vierte la sangre proveniente de las venas cardinales pr incipales (conducto de Cuvier) directamente dentro del at r io . No hay aparentemente vá lvulas entre estas dos cámaras, pero sí existe una entre e l at rio y el ventr ículo. El ventr ículo es una est ructura gruesa y musculosa que CARRERADE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 7 bombea sangre dentro del bu lbo arter ial, que es la base ensanchada de la aorta ventral. Una vez que la sangre ha s ido bombeada fuera del corazón es llevada por la aorta ventral hacia las branquias y los capilares branquiales, donde es oxigenada por difusión con el oxígeno del agua. Desde las branquias la sangre es dist r ibuida a todo el cuerpo a t ravés de la aorta dorsal. Tres pares de vasos entregan sangre desde la aorta ventral a las branquias: el pr imer y segundo arco branquial aferente, pero el tercero y cuarto dejan la aorta como un só lo vaso o rama desde su t ronco común. Estas arter ias branquia les aferentes at raviesan el arco branquia l y envían ramas capilares alrededor de lo s márgenes de lo s filamentos, donde luego se unen a las ramas opuestas de la s arterias branquia les eferentes por todo el largo inter ior del filamento. Es a t ravés del epite lio de estas lamelas donde ocurre el cambio respirator io (O2 por CO2) entre la sangre desoxigenada y el agua oxigenada que baña la superfic ie branquial (Figura 6). Así la sangre oxigenada es llevada fuera de las branquias y reco lectada por un par de aortas dorsales. La aorta dorsal t ransporta sangre oxigenada al resto del cuerpo ( inc luyendo la circulac ión visceral donde la sangre es suminist rada al sistema int est inal, a l r iñón, el hígado, el páncreas, la vejiga natatoria y a las gónadas), y a la circulación somát ica donde la sangre es t ransportada a las aletas y al t ronco del cuerpo. El sistema venoso es generalmente parale lo al sistema arter ial y lleva la sangre, la cual ahora es desoxigenada y cont iene productos metabólicos, tal como dióxido de carbono, devuelt a hacia las branquias para un nuevo proceso de circulación. El sistema nervioso de los peces óseos es t ípico de lo s vertebrados. Sólo nos refer iremos al sistema especializado de órganos sensit ivos: la línea lateral, e l o lfato, el o ído, y el o jo. Todos estos órganos sensit ivos están conectados con el sistema nervioso central por medio de los pares de nervios craneanos. E l sistema de la línea lateral en lo s peces óseos es una ser ie de canales superficia les int erconectados localizados en el hueso, las escamas, y la pie l de la cabeza (parte cefálica) y usualmente a lo largo de la región medio lateral de lo s flancos (de aquí el nombre de acoustico lateralis), pero a menudo se encuentra por encima o por debajo de la región medio lateral. Estos canales se abren al exter ior a través de poros en las escamas. Dentro de los canales se encuentran una ser ie de célu las sensor iales ciliadas, usualmente sostenidas por est ructuras en forma de cúpulas, las cuales se mueven en respuesta a l movimiento del agua. En algunos peces, a menudo, las cé lulas sensor iales ( llamadas neuromastos) no están sostenidas por estas cúpulas, respondiendo directamente al movimiento del agua dentro del canal. De esta manera un cana l está lleno de “veletas” que son sensit ivas a los cambios de la presió n hidrodinámica t ransmit idos desde afuera del pez. Los neuromastos están inervados en el t ronco por la rama de la línea lateral del nervio vago, y por los nervios facial y gloso far íngeo en la cabeza (Figura 7). En lo s peces el agua circula a t ravés de cada nar ina gracias a dos aberturas; el agua entra por la abertura anter ior, pasa por el epitelio del saco o lfatorio y sus compart imentos, y sale por la apertura poster ior. El desarro llo de la sensibilidad del o lfato depende de las necesidades de cada pez; as í, lo s peces que viven en aguas turbias t ienden a tener un buen desarro llo del o lfato, por el contrar io aquellos peces que viven en aguas claras t ienen un desarro llo visua l bueno y un o lfato pobre. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 8 E l o ído interno de los peces óseos es muy complejo, t iene t res canales semicirculares arreglados en t res planos. Los canales hor izontal y vert ica l están embebidos en el neurocráneo, específicamente en lo s huesos proót ico, opistót ico, y epiót ico, mientras en canal vert ical anter ior y las cámaras restantes (ut r ícu lo y lagena) están dentro de la cavidad craneal del cerebro. Aunque el o jo de lo s peces óseos es de est ructura var iable, generalmente se asemeja al o jo de los vertebrados. El nervio ópt ico cubre la ret ina; éste recibe rayos de luz enfocados formando imágenes luego de haber pasado la cornea y el cr istalino. El aspecto y la est ructura del o jo son controlados por una ser ie de complejos músculos ret ractores y lent iculares. Var ias especia lizaciones dist inguen los o jos de lo s peces óseos, algunos t ienen más de un cr istalino ; ot ros t ienen más ovalado el globo ocular. Los peces que viven en aguas oscuras t ienen mayormente células con forma de vara conteniendo pigmentos especiales en la ret ina que sirven para dar sensibilidad blanco-negro con luz débil. Otros t ienen células cónicas para agudizar la visión al co lor en aguas claras. Figura 1. Anatomía externa de un pez óseo. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 9 Figura 2. Anatomía interna de un pez óseo. Ref: a. orific io nasal; b. branquia; c. ojo ; d. aleta dorsal ósea; e . aleta dorsal cart ilaginosa; f. línea lateral; g. aleta caudal; h. aleta anal; i. a leta abdomina l; j. corazón; k. hígado ; l. estómago; m. vejiga natatoria; n. ovar io . Figura 3. Posiciones de la a leta pélvica. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 10 Figura 4. Posiciones y forma de la boca. Figura 5. Tipos de escamas cteno ides en un pez óseo. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 11 Figura 6. Esquema de la respiración en un pez óseo. Detalle de un filamento de las branquias. Figura 7. Esquema de la línea lateral. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 12 E lección de la especie Cuando elegimos t rabajar con peces en nuestro laboratorio debemos considerar pr imeramente que espec ie de pez vamos a ut ilizar. Dependiendo de l t ipo de exper iencia la elección se reduce a t res t ipos pr incipales: mar inos, agua dulce o salobre. La facilidad de mantenimiento también es un punto importante a considerar. Factores como la dieta, requer imientos de temperatura, resistencia a la s enfermedades, compat ibilidad social, requer imiento de espacio deben ser considerados antes de la e lección de nuestra especie de t rabajo. Mantenimiento de los peces Debe considerarse un buen acceso y calidad del agua; si ésta es de red debe ser declorada por aireación o mediant e filt rado con carbón act ivado, o mediante algún compuesto de precipitación del cloro como el t r isulfato de sodio. Toda el agua debe ser analizada antes de ser ut ilizada, poniendo especia l cuidado en el ph, y contenido de amonio, nit ratos y ca lcio (dureza). Los sistemas más ut ilizados en los laboratorios son: acuar ios, sistemas de recirculación (racks) y piletas. También se ut ilizan para acuicultura piletonesal aire libre y jau las co locadas dentro de lo s cuerpos de agua. En la construcción de tanques los mater iales deben estar exentos de cobre, níquel, cadmio o bronce. Cualquier mater ial que sea impermeable, no tóxico para la vida acuát ica y suficientemente resistente para soportar el peso de l agua y del equipo que se va a ut ilizar puede emplearse para hacer los tanques o peceras. El tamaño y la forma responderán a los requer imientos. El tanque de cr istal consiste en paneles de vidr io pegados con selladores a base de silicona. El espesor del vidr io dependerá del vo lumen de líquido que alo jaremos y ést e será proporcional, es decir que a mayor volumen de líquido mayor espesor de l cr istal (estos serán un poco menor en el caso de tener armazón, el cual es recomendable que sea de acero inoxidable) ; estos tanques poseen defectos como ser frágiles, requer ir de una base sólida y aislada mediante una plancha de po liest ireno expandido o algún mater ial similar, y además contener hasta un cierto volumen. Como ventaja se t rata de un mater ial que, sin contar las juntas, es de superfic ie lisa, lo que permit e una mejor limpieza y mejo r observación del inter ior. Los sistemas más ut ilizados en la actualidad para el mantenimiento de lo s peces son los sistemas cerrados que consisten en un rack de acero inoxidable en donde se ubican las cajas que son de policarbonato (tanto transparentes o co loreadas, permiten ver a lo s peces en su int er ior ; Figura 8) ; con filt ració n mecánica y bio lógica, y sistema de ester ilización integrado en la rec irculació n (Figuras 9 y 10). CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 13 Figura 8. Modelos de cajas. Figura 9. Rack. Sala de peces. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 14 Figura 10. Sistema int egrado de t ratamiento de agua. Figura 11. Sistema de rebosadero (sump) . Extraído de “Dynamic Aquar ia. Building Living Ecosystems” (1998). CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 15 Calidad y mantenimiento del agua El mantenimiento del agua consiste en la incorporación al sistema cerrado de filt ros mecánicos, bio lógicos, químicos y la desinfección. Filtros Mecánicos : consisten en e l pasaje del agua por diferentes medio s filt rantes que capturan y eliminan las part ículas indiso lubles y orgánicas por efecto mecánico. Estos filt ros deben tener mantenimiento regular para asegurar el correcto pasaje del agua por el mismo, asegurando la eliminación de lo s detritos (Figura 11). Filtros Biológicos: lo s compuestos nit rogenados juegan un pape l comple jo en el acuar io. Los animales al alimentarse t ransforman, por acción de su metabo lismo, compuestos por son excretados al medio y pueden ser dañinos. E l amoníaco (NH3) y ot ros productos de desechos similares como la urea se disuelven en el agua y llegan a lo s sedimentos; algunos son ut ilizados por las plantas para la obtención de proteínas (en el medio natural). Pero los pr incipales consumidores de desechos son las bacter ias que viven sobre lo s sedimentos y dentro de ellos. Las bacter ias heterótrofas son las que descomponen la urea, las heces y lo s detritos produciendo más amoníaco además de sulfatos y fosfatos. El amoníaco es tomado entonces por las bacter ias del t ipo de las Nit rosomas que lo convierten en nit r itos (NO2). Los desechos de estas son aprovechados por las bacter ias del t ipo Nit robacter, que liberan nit ratos (NO3). Estos nit ratos ya pueden ser ut ilizados por las plantas, pero también por ot ras bacter ias anaerobias que r inden nit rógeno libre (N2) y ácido sulfhídr ico (H2S). Todas las bacterias citadas consumen oxígeno y liberan d ióxido de carbono, excepto las últ imas que viven en ausencia de oxígeno (Figura 12). Este complejo sistema es el que explo tan los filt ros bio lógicos; éstos pueden estar debajo del sust rato en acuar ios, o más recomendado es la ut ilizac ión externa que nos garant iza un rendimiento mayor (Figura 13). Los filt ros externos pueden ser de dos t ipos: lo s llamados filt ros secos-húmedos o wet-dry (Figura 14), que cuentan con un sust rato en donde se asientan las bacter ias (grava o bioesferas) y su sistema de aireación consiste en dejar e l medio en contacto con el aire por breves momentos para el intercambio gaseoso, luego son inundados nuevamente con el agua proveniente del acuar io ; y los llamados filt ros de lecho fluido (Figura 15), consisten en mantener en constante movimiento la arena fina en su inter ior por un constante flujo invert ido que logra una gran oxigenación de la co lonia bacter iana y evitando que se ensuc ie debido al cont inuo rozamiento entre sí de la arena. E l agua la provee una bomba o un filt ro mecánico previo (recomendable para sacar las impurezas no solubles). Filtración y fraccionamiento f ísico-químico: c iertas sustancias, y en especial las moléculas orgánicas son at raídas por determinadas int er faces agua- aire y agua-só lido. En este proceso de adsorción pueden int ervenir fuerzas tanto de t ipo fís ico como químico. Esta es la base de los t ratamientos fís ico- CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 16 químicos del agua, que comprenden la filt ración a t ravés de carbón act ivado o resinas intercambiadoras de iones y el fraccionamiento de espuma. Carbón activado: e l carbón act ivo se emplea en determinados filt ros pr incipalmente para que elimine sustancias por adsorción. Su efecto se debe a la gran porosidad de las est ructura del carbón act ivo, y por tanto su gran superficie de contacto. Los dist intos carbones difieren en el tamaño de sus part ículas y en su capacidad y selección de adsorción. La co lumna de carbón act ivado se gasta pasado cierto t iempo ( los mater iales absorbidos ocupan todo el espac io disponible, dependiendo de la concentración de sustancias absorbibles). E l carbón act ivado no es eficaz en presencia de mater iales orgánicos. Intercambio de iones: Diversos mater iales naturales y sintét icos son capaces de extraer iones de una so lución por un procedimiento que combina lo s fenómenos de adsorción y absorción. Dichos iones son sust ituidos por ot ros con una carga eléctrica total parecida, que son liberados al medio por e l int ercambiador. Las resinas ácidas o intercambiadores de cat iones están cargadas con iones de sodio (Na+) o hidrógeno (H+). Pueden emplearse en el tanque para eliminar cat iones del medio pr incipalmente amonio (NH4 +), iones metálicos (como e l cobre, Cu+ y zinc, Zn+) potencia lmente tóxicos e iones de calcio (Ca+) y magnesio (Mg+), responsable de la dureza del agua. Las resinas int ercambiadoras de aniones son menos ut ilizadas y también menos conocidas, existen clases especiales de resinas para retener los nit ratos (NO3 -), nit r itos (NO2 -), fosfatos (PO4 -), sulfatos (SO4 +) y bicarbonatos (HCO3 - ), a cambio de iones oxidr ilo (OH -) o cloruro (Cl-). Son co locadas en ser ie por detrás del filt ro mecánico que eliminará la s part ículas orgánicas. Las resinas se gastan con el uso y se pueden regenerar ut ilizando una concentración del ion que se ha consumido. Fraccionamiento de espuma: las superficies de las burbujas de aire en e l agua at raen a las moléculas disuelt as y a las part ículas ensuspensión. Las burbu jas ascendentes se mezclan con e l agua del acuar io, prefer iblemente en un cilindro vert ical con corr iente descendente (pr incipio de contracorr iente). Al salir las burbujas lo s mater iales absorbidos a su superficie quedan en la capa super ior, formando una delgada capa de mater ia espumosa, que puede eliminarse con un s imple lavado (Figura 16). Este proceso resulta especialmente út il para concentrar y eliminar moléculas orgánicas, incluyendo co lorantes, ácidos producidos por el humus o la turba, proteínas y lípidos excretados, etc. La filt ración de espuma elimina también fosfatos inorgánicos y lo s iones metálicos, que son at raídos por los compuestos orgánicos disueltos y eliminados con ellos. E l fraccionamiento de espuma es muy út il en sistemas cerrados mu y superpoblados para mantener los compuestos orgánicos disueltos a nive les razonables sin tener que cambiar e l agua cont inuamente. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 17 Figura 11. Filt ro mecánico. Figura 12. Cic lo del nit rógeno dentro del acuar io. Tomado de “El acuario vivo. Agua salada y dulce”. Hunnam, P. et al. (1982). CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 18 Figura 13. Esquema de filt ro bio lóg ico. Figura 14. Filt ros wet-dry. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 19 Figura 15. Filt ro de lecho flu ido (flu idized bed). Figura 16. Esquema de fraccionador por espuma (protein skimmer). Tomado de “Guía completa del acuario”. Scott, P. W. (1991). CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 20 Regulación de la temperatura La salud, requer imientos nutr icionales, comportamiento, reproducción y en casos extremos la supervivencia del pez depende de la temperatura del agua. Las concentraciones de los gases disueltos dependen inversamente de la temperatura, es decir que una mayor temperatura habrá menos oxígeno accesible para la respiración de los peces. Hay dos aspectos importantes a tener en cuenta en el contro l de la temperatura: uno es que la temperatura debe mantenerse dentro del margen ópt imo de las temperaturas requer idas po r el pez dependiendo de la especie, y ot ra es que los cambios deben realizarse lo más lento posible (de ser necesar ios 1ºC/h). Cuando la temperatura ambiente sufre grandes var iaciones o cuando es muy dist inta de la que se necesit a, debe ut ilizarse algún sistema de calentamiento o enfr iamiento, un buen aislamiento térmico y un sistema regulador muy sensible para eliminar las var iaciones bruscas. Todos estos pr incipios son aplicables en pr imer lugar a sistemas cerrados, pero también a lo s abiertos cuando la temperatura del agua de entrada difiere de la que se necesita en el acuar io. La necesidad de calentar o enfr iar el acuar io disminuye al mantener una temperatura adecuada en la habit ación donde está montado. Las habitaciones y los edificios deben ser ais lados y las corr ientes deben eliminarse o bien emplearse para retener o dispersar ca lor: es lo que se llama el ahorro básico de energía. En un sistema de acuicu ltura int ensiva se observa un fenómeno similar, subordinándose la comodidad de lo s operar ios a una regulación eficaz de la temperatura. Así, es posible mantener a una temperatura constante gran número de tanques separados, simplemente instalándo los en una habitac ión o edific io bien aislado y con un sistema de calefacción o refr igeración central. La pérdida de calo r por evaporación puede llegar a ser muy elevada, esto se reduce al cubr ir el acuar io con un doble cr istal a una distancia de 12 a 20 mm. El termostato es un interruptor sensible al calor, normalmente gracias a un bimetal que a determinada temperatura se dobla lo sufic iente para abr ir o cerrar un circuito eléctr ico de refr igeración o calefacción. Éste debe ser muy sensible no debiendo permit ir que la temperatura del agua suba o baje más de 1ºC. Los calentadores de inmersión para acuar ios constan normal-mente de una resistencia eléct rica (espiral de hilo cromo-níquel enro llada generalmente en una matr iz de cerámica y met ida en un tubo sellado de vidr io o plást ico termoestable). Las potencias van de 25 a 300 vat ios, debiendo calcularse a razón de 1w/l de agua de l tanque. El tubo calienta e l agua que lo rodea y esta se ale ja movida por corrientes de convección, burbujeo, etc. Otro método para calentar el agua consist e en hacer pasar agua o aire caliente, vapor de agua o resistencias eléct r icas por canales o tubos bajo el tanque del acuar io para calentar el aire de la base y lo s laterales, este sistema es muy adecuado y resulta barato en sistemas de tanques múlt ip les, en que se precisan temperaturas uniformes y no muy elevadas (el único accesor io que necesita ir dentro del tanque es el termostato). Los nuevos sistemas cerrados ut ilizados cuentan con un regulador integrado de la temperatura de las peceras. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 21 I luminación Tanto el fotoper íodo como la int ensidad lumínica son importantes en e l mantenimiento de lo s peces, var iando sus condiciones entre diferentes especies. E l agua absorbe y dispersa la luz, debido pr incipalmente a las part ículas en suspensión. Esto disminuye con un método tan senc illo como la filt ración. Las superficies del acuar io también alteran la luz, cualquier superfic ie refleja parte de la radiación que incide sobre ella, y altera o refracta las radiaciones que la at raviesan en sent ido oblicuo, al t iempo que absorbe el resto de energía radiante. La luz es un factor importante para el normal desarro llo de sus funciones de orientación, movimiento, coloración, alimentación, huida de lo s predadores y relaciones sociales; diversas funciones fis io lóg icas, como la síntesis de vit aminas, requieren también de c ierta cant idad de luz. En lo s peces, la maduración de las gónadas y todo el ciclo reproductor están ajustados a la int ensidad y duración de la luz natural y, por ot ro lado, muchos peces t ropicales de agua dulce muestran mayor act ividad sexual en pr imavera. La norma general es que debemos imit ar, cuando sea posible, las condic iones naturales del pez en su medio. Ut ilizando luz art ific ial esto se puede lograr con un regulador de vo ltaje y un int er ruptor tempor izador para conseguir efectos similares. El uso de tubos fluorescentes es más adecuado ( las lámparas de incandescencia producen mucha pérdida en calor además de tener baja calidad lumínica). Existen en comercios espec ializados tubos fluorescentes que reproducen muy bien la luz so lar, de temperatura co lor 5000-7000 ºK y de longitud de onda 475-650 mm, Debemos procurar una int ensidad de 10-12000 lx sobre la superficie del agua. El fotoper íodo puede considerarse de 12 h de luz y 12 h de oscur idad. Aunque de 8 a 10 hs de luz es adecuada para la mayor ía de lo s peces, en peces t ropicales es apropiado 12-14 hs de luz. Dureza (dH) La dureza se mide por el contenido mineral de ca lcio, magnesio y otros cat iones bivalentes; cuanto mayor sea la concentración tanto más serála dureza. Los responsables pr incipales son lo s bicarbonatos y sulfatos de calcio y magnesio, aunque también co laboran los cloruros y nit ratos. La dureza producida por las sales de calc io y magnesio, recibe el nombre de dureza temporar ia, pues var ía con el tenor exist ente de CO2 ( la presencia de este gas torna so luble a estas sales). En contraposición tenemos una dureza permanente ; también en este caso interviene el tenor de sales de calc io y magnesio, pero ya no en forma de carbonatos sino de sulfatos, cloruros y nit ratos. Si sumamos la dureza permanente con la temporar ia tendremos la dureza total. Para realizar la medición se cuenta hoy en día con simples equipos de testeo. El grado de dureza dependerá de la especie a alo jar ; en general en tanques de agua dulce se ut iliza una dureza media. Para ablandar el agua un método senc illo consiste en el agregado de agua dest ilada (proveniente de droguer ías, ya que el agua que se expende en estaciones de servicio automotriz cont iene vest igios de cobre). El ablandamiento por ebullic ión es recomendable só lo s i CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 22 luego se le agrega agua dest ila para bajar la concentración de sales y se la agita para oxigenar la. E l método más recomendable es e l uso de resinas sintét icas orgánicas; éstas intercambian iones de hidrógeno por iones de Ca -2 y Mg -2 (aniones) e iones oxidr ilo s (OH -) por iones sulfato y carbonato (SO4 - y COH3 -). Estas res inas permiten ser regeneradas, dependiendo el método según la marca ut ilizada. E l procedimiento más sencillo para aumentar la dureza consiste en e l agregado de c loruro de sodio, en proporción de 5 gr. por cada 10 lit ros. En verdad el cloruro de sodio no aumenta la dureza del agua, sino que obra en forma similar, e levando el poder osmót ico del líquido. En lugar de c loruro de sodio puede emplearse cloruro de calcio, agregando al agua tantos miligramo s por lit ro como partes por millón se desea aumentar la dureza. Otro método para aumentar la dureza consiste en d iso lver sulfato de calcio en un poco de agua y agregar de a poco al agua del tanque hasta obtener la dureza deseada. Acidez y alcalinidad E l agua pura es una mezcla de part ículas cargadas eléctr icamente, o iones, de hidronios (cat ión) e hidroxilos (anión). La concentración de iones de hidronios en el agua determina su grado de acidez. Si la concentración de hidronios es igual a la de hidroxilos la solución se considera neutra; si la concentración de hidronios es mayor que la de hidroxilos la so lución es ácida, por el contrar io si la concentración de hidronios es menor que la de hidroxilo s se denomina a la so lución básica o alcalina. Las concentraciones se miden en pH ( logar itmo negat ivo de la concentración de hidronios). La so lución neutra se expresa con pH=7, pH mayor a 7 la so lución es alcalina y pH menor es ácida. El pH t iene efectos en la diso lución de gases, metales y diferentes compuestos. Niveles de pH entre 6.5 a 9 pueden ser considerados adecuados, aunque la tolerancia de lo s peces var ía según la espec ie y dent ro de la misma en lo s diferentes estados de su vida. Para aumentar e l pH del agua, cuando ésta es muy ácida, lo pr imero que debe hacerse es aver iguar cuál es la causa que ha producido esa situación. Una vez que se ha eliminado la causa que ha producido la acidez, un método para alcalinizar el agua cons iste en agregar le bicarbonato de sodio, una cucharadit a por cada 5 lit ros de agua. No debe excederse en la dosis pues esta so lución es ligeramente cáust ica, reblandece la epidermis y excita su desprendimiento, y además puede producir diarrea. Otro método puede ser agregar t rozos desmenuzados de conchas, cáscara molida de huevo y otros elementos calcáreos (un cucharadita por cada 5 lit ros de agua del tanque). Para la reducción ut ilizaremos un agente acidificante como el ácido fosfór ico o bifosfato ácido de sodio en so lución al 10% gota a gota, con int ervalo de var ias horas entre ellas. Por ningún concepto se agregará directamente bifosfato ácido de sodio en forma cr istalina, sino que se debe mezclar con agua caliente y diso lver lo . Después de cada agregado deberá medirse el pH, para un adecuado control de la acidificación. Preferentemente se ut ilizará el ácido fosfór ico en proporción de 1 parte de ácido por cada 9 partes de agua dest ilada. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 23 La a lcalinidad es una medida de la capacidad de neutralizar ácidos del agua. Intervienen bicarbonatos, boratos, fosfatos y ot ros aniones. Se expresa en miliequiva lentes por lit ro (mEq/l) ; una alcalinidad adecuada para los peces está alrededor de 0.2-10 mEq/l0; para acuar ios mar inos 2.5 mEq/l. Esto nos asegura un efecto buffer de lo s metales ácidos y un buen funcionamiento del filt rado bio lógico. Para la medic ión se emplean lo s tests comerciales con una metodología de uso que consiste generalmente en tomar una muestra del agua del tanque o acuar io , co locar la en un tubo de ensayo y agregar le unas gotas de una so lució n hasta conseguir determinado co lor y luego otra y esperar unos minutos; luego ver ificar el co lor obtenido con una tabla comparat iva para saber el pH; también se encuentran en el mercado papeles indicadores y medidores electrónicos. Oxigeno disuelto (DO) Para mantener a los peces sa ludables el DO deber ía estar cercano a la saturación en cualquier cond ición de temperatura y salinidad. Bajas concentraciones producen est rés en los peces. La U.S. Environmenta l Protect ion Agency (EPA 1976) recomienda 5 mg/L como la mínima concentración de DO para mantener saludables a los peces. Si se agit a la superfic ie del agua mediante burbujas de aire o turbulencias, se favorecen los intercambios de oxígeno y d ióxido de carbono entre el agua y el aire. Las bombas de aire son muy ut ilizadas con estos fines. Existen de var ios t ipos y con diferentes caudales; la giratoria o de turbina que mueve grandes cant idades de aire pero siempre a baja presión, si se ut iliza un compresor a hélice ó con una bomba de diafragma obtenemos el efecto contrar io bastante pres ión y muy poco vo lumen de oxígeno. Hoy en d ía la tendencia es a ut ilizar aparatos con mayores presiones, tales como un compresor que alcanzará más de 5 atmósferas. También existen bombas de agua, ut ilizándose mayormente la centr ífuga; aunque para crear una co lumna de agua dentro de un tubo se emplea aire ut ilizando el efecto de la co lumna de aspiración (al elevarse las burbujas acarrean consigo el agua) ; este sistema además de mover en agua también la airea. Las bombas de agua y de aire pueden llegar a ser muy ruidosas, por lo tanto deberán montarse sobre un soporte firme a t ravés de un mater ial insonorizante como la goma; las bombas pequeñas pueden co lgarse para evit ar que las vibraciones se t ransmit an a l acuar io ; prefer iblemente se co locarán lejos del mismo. El cont inuo incremento en la acumulación de sustancias tóxicas en la atmósfera determina la liberación de las mismas en el agua a t ravés de la acción de los compresores o bombas de aire; para evit ar este inconveniente es oportuno recurr ir al lavado del aire mediante un frasco lavador, dejando gran cant idad de sustancias tóxicas en el agua del frasco. Nit rógeno El nit rógeno está presente en el agua como gas, nit r ito , nit rato , y amoníaco. El amoníaco es el más tóxico de los productos inorgánicos producidos por los peces y por las bacter ias heterótrofas de lo s filt ros bio lógicos.La EPA considera 0.02 mg/l de amoníaco no ionizado como segura para la vida de lo s CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 24 peces. Deben medirse las concentraciones de amoníaco y nit r itos en lo s sistemas cerrados para evitar est rés en los peces y muertes repent inas. E l nit r ito puede causar metahemoglobinemia e hipoxia, excesos en lo s niveles de amoníaco y nit r itos son los responsables del síndrome del tanque nuevo. Sistemas de desinfección Calentamiento: el agua mantenida a alt a temperatura durante un per íodo de t iempo determinado es ut ilizada como método desinfectante. Un t ratamiento de 60º C durante 30 minutos, o de 70º C durante 30 segundos. El t ratamiento con calor es el adecuado para ester ilizar pequeñas cant idades de agua, para su empleo en tanques de cuarentena o para rellenar el acuar io. Irradiación ult ravio leta: los rayos de luz ult ravio leta (UV), de longitud de onda entre 2000-2800 Ǻ, dest ruyen las moléculas de l ácido nucle ico del núcleo de las células, produciendo rápidamente la muerte de las bacter ias. Este método es muy ut ilizado en cr iaderos de peces y piscifactorías. E l método más conveniente es hacer pasar el agua por un tubo colocado cerca de una lámpara de UV. La efect ividad del proceso depende de la turbidez del agua, de la int ensidad de irradiación y del t iempo que actúa, así como también del tamaño del organismo a eliminar. Es conveniente que el agua a desinfectar sea filt rada por métodos mecánicos y bio lógicos. La dosis efect iva de rayos UV se obt ienen mult iplicando su intensidad (potencia) por el t iempo de exposición (este se consigue con la regulación de l flujo de agua; Figura 17). Desinfección con ozono: el ozono (O3) es un gas inestable y, al igual que muchos desinfectantes, un poderoso oxidante. Es venenoso para la mayor ía de lo s seres vivos por cuanto debe emplearse en pocas cant idades. Debe realizarse un filt rado bio lógico y mecánico antes de proceder a ozonizar el agua. Se ut ilizan generadores de descargas eléctr icas para producir ozono (Figura 17). Figura 17. De izquierda a derecha. Filt ro UV, ozonizador. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 25 Alimentación Los peces son unos de lo s animales más efic ientes en convert ir en tejido corporal a los nutr ientes del alimento. Esta efic iencia se debe a que son ectodermos, excretan lo s desperdicios con eficiencia, y requ ieren poca energía para sostenerse y moverse en el medio donde están. En el mercado existe gran var iedad en cuanto a los porcentajes de cada nutr iente y las presentaciones, debiendo buscar nuestros requer imientos en cada caso. De no encontrar un alimento adecuado, éste se puede llegar a realizar en forma casera, para tal fin hay que analizar el contenido estomacal y así obtener datos para elaborar una dieta bastante apropiada. Los porcentajes var ían, también, si se t rata de una dieta de mantenimiento o de una dieta de engorde en acuicu ltura. En general los animales acuát icos requieren ciertos aminoácidos esenciales como: arginina, hist idina, iso leucina, leucina, lisina, met ionina, fenila lanina, alanina, t r ionina, t r istofáno, valina, ser ina, glic ina, c isteína y t irosina. E n general requieren entre un 30 a 60% de proteínas en su dieta. La fracción lip ídica t iene una importancia principal en la a limentación de las especies carnívoras. Además de la importante misión que a nive l genera l cumplen en lo s procesos energét icos, facilit an la absorción de otros nutrientes, siendo mayores en los peces mar inos lo s requer imientos en ácidos grasos de la ser ie ω3. La mayor ía de lo s peces requ ieren de un 20 a un 30% de grasas. Los hidratos de carbono van desde azúcares simples, como la glucosa, a polímeros complejos entre los que se encuentran el almidón y la celulosa. Ninguno de ello s es específicamente esenc ial para los peces. Los peces carnívoros no pueden metabo lizar grandes cant idades, y el exceso se almacena en forma de glucógeno en el hígado y en la sangre, donde puede causar enfermedades y muerte. Un 40% suele ser apropiado. El componente fibroso, en forma de fibras no diger ibles de celulosa, puede ser importante y puede const ituir sin r iesgo aproximadamente el 4% de la dieta. Las vitaminas son importantes en pequeñas cant idades para el normal metabo lismo de lo s animales, actuando en muchos casos como coenzimas y produciendo su defic ienc ia en las dietas t rastornos patológicos diversos. Los minerales destacan por su importancia en lo s peces el calcio, fósforo, magnesio, azufre, hierro, iodo, manganeso y cinc. Captura y t ransporte Para reducir la tensión que sufren los animales al ser capturados, es esencial reducir al mínimo la duración de la persecuc ión y captura. Para la captura deben emplearse mater iales inocuos y evitar las redes abrasivas. Los ejemplares deben manipularse lo menos posible; de no poder ser así deben ut ilizarse guantes de goma suaves para no last imar su delicada piel. Hay que tener precaución con las espinas agudas de algunos peces que suelen ser venenosas o irr itantes. Los ejemplares no deben subirse de aguas profundas con rapidez sin dar les t iempo para el ajuste fis io lógico a la menor presión; si muestra signos de flotabilidad o desequilibr io hay que recomprimir lo bajándo lo ligeramente. No CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 26 conviene sacar a lo s ejemplares fuera del agua; esto puede evitarse sumergiendo el recip iente de t ransporte u ot ro en el agua. Para el t ransporte suele ut ilizarse, para peces de gran tamaño, piletones o contenedores de po liet ileno de alta densidad alimentados con aireadores a bater ía. Con animales pequeños el t ratamiento es completamente dist into, se ut ilizan bo lsas plást icas de po liet ileno de espesor adecuado y fondo cuadrado (Figura 18). Para efectuar el t ransporte conviene insertar una bo lsa vacía en e l int er ior de otra de igua les dimensiones. La cant idad de agua en el int er ior de l saco no debe superar el tercio de su volumen; el espacio sobrante, una vez evacuado el aire, debe llenarse con oxígeno puro (Figura 19). En ausencia de una fuente adecuada de oxígeno gaseoso puede recurr irse a preparados comercia les en tabletas que liberan oxígeno al contacto con el agua. Las bo lsas separadas deben aislarse para evit ar la pérdida térmica, deben ubicarse en un contenedor bien rotulado. Durante el via je suelen ut ilizarse concentraciones t ranquilizantes de anestésicos, desinfectantes y ant ibiót icos; tales como el M.S.222 (en concentraciones de 1:45000) o quinald ina como anestésicos; azul de met ileno (1 gota por lit ro de so lución al 5%) como desinfectante; y oxitet raciclina (disuelt a en agua en proporción de 25-125 mg por lit ro). Es importante que lo s peces se int roduzcan en el agua luego de que los fármacos estén completamente disueltos. También puede hasta cierta medida bajar la temperatura del agua, as í bajaremos el metabo lismo en genera l, e l consumo de oxígeno y la excreta de desechos. La aclimatac ión comienza con el arr ibo de lo s peces a la dependencia de l laboratorio Es recomendable conocer las caracter íst icas del agua en el que e l pez fue t ransportado para ajustar los parámetros de nuestra instalación. Pr imeramente alo jaremos lo s peces en el acuar io de cuarentena. Disponemos la bo lsa cerrada dentro delacuar io para aclimatar la a la temperatura del agua de l acuar io, tomamos muestras del agua de la bo lsa para rea lizar los últ imo s ajustes al agua de dest ino. Luego de aproximadamente 30 minutos pasamos e l pez a la pecera. Es recomendable que la cuarentena dure aproximadamente 30 días , especialmente cuando el pez va a ser int roducido a un sistema funcionando con una población sana. No debe ubicarse la pecera de cuarentena cerca de la población sana para evit ar cualquier contaminación. Durante este per íodo deberán realizarse observaciones diar ias para ver la salud y buscar posibles ectoparásitos. CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 27 Figura 18. Caja y bo lsa de t ransporte de peces de tamaño pequeño. Figura 19. Esquema de t ransporte de peces de tamaño pequeño. Tomado de “Transporte de peces vivos”. Vollman-Schipper, F. (1978). CARRERA DE TÉCNICOS PARA BIOTERIO Hernán Julin Técnico para Bioterio E L P E Z C O M O R E A C T IV O B IO L O G IC O 28 BIBLIOGRAFÍA - Adey, W. y K. Loveland. Dynamic aquaria. Building living ecosystems. 2° Edición. 1998. Academic Press. Estados Unidos. - Bautista, C. 1991. Peces marinos. Tecnología de cultivo. Ed. Mundi Prensa. Madrid, España. - Caillet, G. M. et al. 1986. Fishes: a field and laboratory manual on their structure, identification and natural history. Wodsworth Publishing Co. California, Estados Unidos. - Caselbolt et al. (1998). Care and use of fish as laboratory animals: Current state of knowledge. Laboratory Animal Science, 48 (2):124-136. - Guide lines for use of fishes in field research. 1988. American Society of Ictiology and Herpetology. AFS. AIFRB. Fisheries, 13 (2): 16-23. - Hunnam, P. et al. 1982. El acuario vivo. Agua salada y dulce. Ed. Libros del Caballo. Madrid, España. - Masser, M. 1997. Cage culture. Site selection and water quality. SRAC Publication. N° 161. - Scott, P. W. 1991. Guía completa del acuario. Ed. Blume. Vincenza, Italia. - Sorin, S. 1989. Instalación y mantenimiento de acuarios. Ed. Albatros. Vol. 1 y 2. Buenos Aires, Argentina. - Vollman-Schipper, F. 1978. Transporte de peces vivos. Ed. Acribia. Zaragoza, España.
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