Analisis-proteomico-de-factores-de-transcripcion-de-Entamoeba-histolytica-durante-la-interaccion-con-celulas-MDCK

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Aprendiendo Biologia

20/7/2022

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Biología

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UNIVERSIDAD
NACIONAL
AUTÓNOMA
DE
MÉXICO

FACULTAD
DE
CIENCIAS

Análisis
Proteómico
de
factores
de
transcripción
de
Entamoeba
histolytica
durante
la
interacción
con
células
MDCK

T
E
S
I
S

QUE
PARA
OBTENER
EL
TÍTULO
DE:

B
I
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L
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G
A

P
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:

KAREN
RIOS
REYES

DIRECTOR
DE
TESIS:
DRA.
ELISA
IRENE
AZUARA
LICEAGA

2013

UNAM – Dirección General de Bibliotecas
Tesis Digitales
Restricciones de uso

DERECHOS RESERVADOS ©
PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL

Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal
del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México).
El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea
objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para
fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo
mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro,
reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el
respectivo titular de los Derechos de Autor.

UNAM – Dirección General de Bibliotecas
Tesis Digitales
Restricciones de uso

DERECHOS RESERVADOS ©
PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL

1. Datos del alumno
Ríos
Reyes
Karen
55694671
Universidad Nacional Autónoma de México
Facultad de Ciencias
Biología
304037432

2. Datos del tutor
Dra
Elisa Irene
Azuara
Liceaga

3. Datos del sinodal 1
Dr
Victor Manuel
Valdés
López

4. Datos del sinodal 2
Dra
María Elizbeth
Álvarez
Sánchez

5. Datos del sinodal 3
Dra
Abigail
Betanzos
Fernández

6. Datos del sinodal 4
Dra
Claudia
Cervantes
Rebolledo

7. Datos del trabajo escrito
Análisis Proteómico de factores de transcripción de Entamoeba
histolytica durante la interacción con células MDCK
147 p
2013

Este proyecto se realizó en el Posgrado de Ciencias
Genómicas, en la Universidad Autónoma de la Ciudad de
México, bajo la dirección de la Dra. Elisa Irene Azuara Liceaga
con el apoyo del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología CB-
2007-01-79293, UACM-ICyT PI2010-17 e ICyTDF/328/2011.

III

Agradecimientos

Agradezco en forma muy especial a la Dra. Elisa Irene Azuara Liceaga por la
dirección de este trabajo, por el apoyo y la confianza depositada en mí para
alcanzar esta meta.
A la Dra. María Elizbeth Álvarez Sánchez por su apoyo y sugerencias para la
tesis.
A la Dra. Ma. Esther Orozco Orozco por permitirnos hacer uso de su
laboratorio.
A la Dra. Guillermina García Rivera por su ayuda en las inmunodetecciones, su
apoyo y disponibilidad.
A la Dra. Abigail Betanzos Fernández por la donación de las células MDCK, su
apoyo, disponibilidad y sugerencias.
Al Dr. José de Jesús Olivares Trejo y el Dr. Cesar López Camarillo por el
préstamo de los anticuerpos.
Al Dr. Víctor Manuel Valdés López, al Dr. Ángel Iván Orlando Rubio Gayosso y
la Dra. Claudia Cervantes Rebolledo por su apoyo, disponibilidad y sugerencias
en la revisión y comentarios para esta tesis.
Al M. en C. Eduardo Carrllo Tapia por su ayuda para visualizar las
preparaciones en el microscopio confocal.
A la M. en C. Laura Vázquez por su ayuda para la estandarización de la 2-D.
A mis compañeros y amigos de Laboratorio Itzel López, Helios Cárdenas, Olga
Hernández, Alí Flores, Jacqueline Castañeda, José L. Villalpando, Miguel
Fonseca, Michael Del Moral, Alma Villalobos, Carlos Galicia y Brenda Herrera,
por su apoyo, disponibilidad, confianza, sugerencias y amistad.

Dedicatoria

“Dedico esta tesis a mi gran amiga Raquel Ríos Reyes, que es lo que más
amo en este mundo, sin ella nada de esto sería posible, sin su
incondicional apoyo, paciencia, preocupación y consejos constantes que
siempre me han impulsado a continuar; la vida me hizo muy afortunada
de tenerla como madre”

A mis abuelos, Yolanda Reyes y Silviano Ríos, por su amor, apoyo y confianza
en todas mis metas.

A mis tíos y mis primos que en todo momento me han apoyado y me brindan
en todo momento confianza.

A todos mis amigos por su apoyo, confianza y gran amistad.

A esas personas especiales que han estado conmigo cuando más lo he
necesitado.

INDICE

Agradecimientos
Dedicatoria
Abreviaturas
Lista de figuras
Lista de tablas
Resumen
Introducción
1. Entamoeba histolytica
1.1. Historia.
1.2. Taxonomía
1.3. Morfología
1.3.1. Trofozoito
1.3.2. Quiste
1.4. Ciclo de vida
2. Amebiasis
2.1. Epidemiología
2.2. Cuadro clínico
2.2.1. Amebiasis intestinal
2.2.2. Absceso hepático amebiano (AHA)
2.3. Diagnóstico
2.4. Tratamiento
3. Genoma de E. histolytica
3.1. Transcripción en E. histolytica
4. Mecanismos de Virulencia
4.1. Adhesión
4.2. Citólisis
4.3. Fagocitosis
4.4. Resistencia al estrés oxidativo
Pág.

II
III
VII
X
XII
1
2
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4
5
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18
19
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33
36
40
42
VI

5. Estado del arte
5.1. Antecedentes particulares del proyecto
5.1.1. Proteómica organelar
6. Hipótesis
7. Objetivos
1) General
2) Particulares
8. Justificación
9. Estrategia experimental
10. Materiales y métodos
A) Cultivos de trofozoítos de E. histolytica
B) Cultivo de células MDCK
C) Efecto citopático de los trofozoítos sobre células MDCK
D) Cinética de interacción de E. histolytica con células
MDCK
E) Extracción de proteínas totales de los trofozoítos de E.
histolytica.
F) Determinación de la concentración de proteínas
G) Electroforesis de proteínas en condiciones
desnaturalizantes
H) Transferencia de proteínas a membranas de
nitrocelulosa
I) Ensayos de inmunodetección
J) Obtención de extractos nucleares de E. histolytica
K) Purificación de proteínas
L) Electroforesis de proteínas en doble dimensión (2-D)
M) Tinción de los geles
N) Análisis PD-Quest
O) Identificación por MALDI-TOF
P) Análisis in silico de las proteínas identificadas
Q) Inmunofluorescencia
Pág.

45
49
49
52
53

54
55
56
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58
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60
60
61
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63
63
64
64
65
VII

11. Resultados
I. Estandarización de las condiciones de interacción de
trofozoítos de Entamoeba histolytica con células MDCK
II. Determinación del tiempo de interacción de E.
histolytica-MDCK dondese observan cambios en la
expresión de proteínas
III. Obtención de extractos nucleares de E. histolytica en
condiciones basales y durante la interacción de 30
minutos con células MDCK
IV. Análisis del proteoma nuclear en condiciones basales
V. Análisis comparativo del proteoma nuclear de E.
histolytica antes y después de la interacción con células
MDCK
VI. Identificación de proteínas de E. histolytica con
expresión diferencial después de la interacción con
células MDCK
VII. Análisis in silico de las proteínas identificadas
VIII. Inmunodetección de la proteína Hsp60 en E. histolytica
IX. Inmunolocalización de la proteína Hsp60 en E.
histolytica
12. Discusión
13. Conclusiones
14. Referencias bibliográficas
15. Apéndice 1
16. Apéndice 2
Pág.

66
66

73
75

82
86
88

90
101
102
122
128

VIII

Lista de abreviaturas

° C Grados centígrados
3’ UTR Región 3’ no traducida
5’ UTR Región 5’ no traducida
aa Aminoácidos
AHA Absceso hepático amebiano
RNAt Ácido ribonucleico de transferencia
BLAST Herramienta de Búsqueda de Alineación Local Básica (Por
sus siglas en inglés, Basic Local Alignment Search Tool)
BSA Albúmina sérica de bovino
CHAPS 3 - [(3-colamidopropil) dimetillamonio] propanosulfanato
CO2 Dióxido de carbono
DAPI 4’6-diamidino-2-fenilindole
DMEM Medio de Águila Modificado de Dulbecco (del inglés,
Dulbecco's Modified Eagle Medium)
DNA Ácido desoxirribonucleico
DTT Dithiotreitol
E64 L–trans–epoxisuccinil–leucil–amido (4–guanidino) butano
EDTA Ácido etilendiaminotetraacético

EGTA Ácido tetracético etileno glicol
EC Extractos citoplásmicos
EM Espectrofotometría de masas
EN Extractos nucleares
ET Extractos totales
Fe-SOD Fe-superóxido dismutasa
h Horas
HCl Ácido clorhídrico
H2O2 Peróxido de hidrógeno
IX

HRP Peroxidasa de rábano
HEPES Ácido 4-(2-hydroxietil)-1-piperazinaetanosulfónico
Inr Elemento iniciador
IPG Gradiente de pH inmovilizado (del inglés, immobilized pH
gradient)
Kb Kilopares de bases
KCl Cloruro de potasio
MDCK Línea celular de epitelio de riñón canino Madin-Darby
mRNA Ácido ribonucleico mensajero
NaCl Cloruro de sodio
ng Nanogramo
NP40 Tergitol NP-40
O/N Toda la noche (del inglés, over night)
O2- Radical superóxido
ONOO Peroxinitrito
PAGE Electroforesis en geles de poliacrilamida
pb Pares de bases
PBS Solución salina amortiguada por fosfatos
PCR Reacción en Cadena de la Polimerasa
pHMB p-hidroximercuribenzoato
pH Potencial Hidrógeno
Prxs Peroxirredoxinas
PFOR Piruvato ferredoxin oxidorreductasa
PIP2 Fosfoinosítidosfosfatidilinositol-4.5-difosfato
PMSF Floruro de fenilmetilsulfonilo
PSA Persulfáto de amonio
rDNA Ácido desoxiribonucleico ribosomal
SDS Dodecil Sulfato de Sodio
X

seg Segundo
sIgA Inmunoglobulinas A
TCA Ácido tricloroacético
TEMED Del inglés,N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine
TER Resistencia eléctrica transepitelial
TJs Uniones estrechas
TOF Tiempo de Vuelo (del ingles, Time Of Flight)
V Volts
xg Fuerza centrifuga

Lista de figuras

Figura 1.

Figura 2.

Figura 3.

Figura 4.

Figura 5.

Figura 6.

Figura 7.

Figura 8.

Figura 9.

Figura 10.

Figura 11.

Figura 12.

Figura 13.

Figura 14.

Figura 15.

Diferentes representaciones de la etapa trofozoíto de E.
histolytica

Procesos de transformación de E. histolytica de su
forma trofozoíto, pre-quiste y quiste

Eritrofagocitosis de E. histolytica

Diferentes representaciones de la etapa quiste de E.
histolytica

Ciclo de vida de Entamoeba histolytica

Casos e incidencia de amebiasis en México 2003-2008

Incidencia de amebiasis intestinal en México 2008

Porcentaje de amebiasis intestinal por sexo en México
durante el 2008

Casos e incidencia de amebiasis intestinal por grupo de
edad en México (2008)

Proteínas de adhesión y secreción presentes en la
superficie celular de E. histolytica

Modelo de expresión de cistein proteasas durante la
infección por E. histolytica

Representación esquemática de los eventos que
ocurren durante la fagocitosis de E. histolytica

Factores de patogenicidad de E. histolytica que han
sido identificados utilizando herramientas genómicas y
proteómicas

Técnicas que permiten el estudio de proteínas

Efecto citopático de los trofozoítos de E. histolytica
después de adhesión a células MDCK

Pág.

XII

Figura 16.

Figura 17.

Figura 18.

Figura 19.

Figura 20.

Figura 21.

Figura 22.

Figura 23.

Figura 24.

Figura 25.

Análisis de la expresión de proteínas amebianas
durante la interacción con células MDCK

Fraccionamiento de proteínas nucleares y citoplásmicas
de E. histolytica

Proteoma nuclear de E. histolytica en condiciones
basales

Proteoma nuclear de E. histolytica antes y después de
la interacción con células MDCK

Expresión diferencial de proteínas visualizados con la
herramienta Scatter plot

Análisis de los spots seleccionados para su
identificación

Análisis de la secuencia de la proteína profilina de E.
histolytica identificada

Análisis de la secuencia de la proteína Hsp60 de E.
histolytica identificada

Inmunodetección de la proteína Hsp60 de E. histolytica

Inmunolocalización de la proteína Hsp60 de E.
histolytica
Pág.

XIII

Lista de tablas

Tabla 1.

Tabla 2.

Tabla 3.

Tabla 4.

Tabla 5.

Tabla 6.

Comparación de métodos diagnósticos

Pruebas diagnóstico de laboratorio más sensibles para
identificar E. histolytica

Resumen estadístico del genoma para determinados
organismos unicelulares con genomas secuenciados

Dominios más abundantes en el proteóma de E.
histolytica determinados por Pfam

Factores de transcripción representativos de E.
histolytica, su correspondiente motivo de unión a DNA y
los enfoques moleculares utilizados para caracterizarlos

Proteínas identificadas por espectometría de masas
MALDI-TOF

Pág.

Resumen
Entamoeba histolytica es el protozoario agente causal de la amebiasis humana.
Durante la interacción de este parásito con su huésped se activan diferentes
mecanismos moleculares que favorecen el establecimiento de la infección y la
invasión, tales como la adhesión, citólisis y fagocitosis de células blanco. Estos
procesos son mediados por diferentes proteínas consideradas como factores
de virulencia como son las adhesinas, proteasas, proteínas relacionadas con
transporte vesicular, etcétera. Estas proteínas presentan una expresión
diferencial en respuesta a diversos estímulos microambientales, los cuales
dependen de la interacción del parásito con receptores de las células blanco,
desencadenando una serie de cascadas de señalización que culminan en el
núcleo. Tomando en cuenta que en el núcleo residen diferentes proteínas
como los factores de transcripción, polimerasas y proteínas involucradas en la
arquitectura nuclear, las cuales participan en la regulación de la expresión de
los genes involucrados en la virulencia, el objetivo de este trabajo fue analizar
el proteoma nuclear de E. histolytica. Para ello se hizo uso de la proteómica
organelar, la cual tiene como ventaja que al analizar un extracto proteico deun
determinado organelo se reduce la complejidad del proteoma, además de
permitir la identificación de proteínas poco abundantes como los factores de
transcripción. En este trabajo empleamos como modelo las células epiteliales
MDCK, como un tipo de células blanco como las que conforman el epitelio.
Después de establecer el mejor tiempo de interacción parásito-huésped,
analizamos los proteomas nucleares antes (condiciones de cultivo basales) y
después de la interacción. La relevancia funcional de estos cambios deberán
analizarse con más detalle en estudios posteriores para determinar su
participación durante la virulencia de este patógeno.

Introducción

1. Entamoeba histolytica

La amebiasis es la infección del tracto gastrointestinal del humano, causada
por el protozoario parásito Entamoeba histolytica (Espinosa-Cantellano y
Martínez-Palomo, 2000). Los trofozoítos de E. histolytica pueden penetrar a
través de la mucosa intestinal y causar inflamación, lo que origina colitis
amebiana. Además, los trofozoítos pueden diseminarse a través de la
circulación hacia otros órganos, causando amebiasis extraintestinal (Hughes y
Petri, 2000). Afecta principalmente el hígado, donde induce la formación de
abscesos, conocido como absceso hepático amebiano (AHA) (Stanley, 2003).
En menor frecuencia los trofozoítos se diseminan hacia pulmón, cerebro, piel y
riñón (Espinosa-Cantellano y Martínez-Palomo, 2000; Haque y col., 2003).
Aunque las formas intestinales de la enfermedad son más frecuentes, la
infección extraintestinal causa la principal morbilidad y mortalidad por este
organismo. La infección por E. histolytica puede ser asintomática o sintomática,
sin embargo los factores que lo determinan no se conocen en su totalidad,
aunque, se han propuesto algunos, entre los que destacan: los factores
genéticos del hospedero o del parásito, así como la naturaleza de la respuesta
inmune, infecciones concomitantes e incluso la dieta (Davis y col., 2006;
González y col., 2008; Lejeune, 2009; Mendoza-Macías, 2009; Anaya-
Velázquez y Padilla-Vaca, 2011). Existen múltiples especies de protozoarios
parásitos del género Entamoeba que infectan a los humanos, sin embargo E.
histolytica es la única especie conocida que causa enfermedad (López, 2008).

1.1. Historia

El término amiba proviene del griego amoibe que significa cambio (morfología
y gran movilidad), de ahí el nombre de la enfermedad conocida como
“amebiasis”. Así, la humanidad ha padecido desde tiempos inmemorables el
3

azote de la disentería descrita por Celso e Hipócrates con el nombre de “flujo
de vientre”. Hipócrates (460 a 377 a.C.) reconoció la amebiasis en un paciente
con disentería y fiebre. Posteriormente, en el Antiguo Testamento y en el libro
“Medicina Interna Clásica” de Hung Ti (140 a 87 a.C.) se describe a la
disentería (Pinilla y col., 2008). E. histolytica fue descrita por primera ves en
Rusia por Friedrich Lösch en 1873, quién la aisló de un joven paciente
campesino del puerto de Azkhanglsk con disentería e incluso, estableció la
relación existente entre la enfermedad y el protozoario (Lesh, 1975).

Sin embargo fue hasta principios del siglo XX, que Shaudinn en 1903 propuso
el nombre de Entamoeba histolytica, para designar a la especie patógena.
Después, Emile Brumpt en 1925, se basó en las observaciones clínicas,
epidemiológicas y en estudios experimentales en gatos, para señalar la
existencia de dos especies distintas Entamoeba dispar y Entamoeba
dysenteriae, morfológicamente idénticas, pero con la particularidad de que la
primera especie actuaba únicamente como comensal en el intestino humano y
la segunda especie presentaba un potencial patógeno. Sin embargo, este
planteamiento fue rechazado por la comunidad científica internacional. En
1928, la Comisión Internacional de Nomenclatura Zoológica dictaminó que
Entamoeba fuese sinónimo de Endamoeba; aunque en 1954 se legitimó el uso
de Entamoeba como nombre genérico.

En los años sesenta, Louis Diamond y colaboradores desarrollaron un medio
de cultivo axénico para E. histolytica denominado medio monofásico TPS-1 que
comenzó a tener amplio uso; sin embargo, posteriormente fue reemplazado por
el medio TYI-S-33 que aún se encuentra en uso. Robinson, ese mismo año
describió el medio bifásico como un medio mixto para el cultivo de amibas a
partir de heces. En 1978, Sareaunt y sus colaboradores, confirmaron que E.
histolytica está constituida por cepas patógenas y no patógenas, utilizando
estudios electroforéticos de isoenzimas en cepas de E. histolytica aisladas de
pacientes con manifestaciones clínicas de amebiasis y de portadores
asintomáticos (López, 2008).

En 1933, Diamond y Clark reafirman la hipótesis de Brumpt de 1925 sobre la
evidencia de la existencia de dos especies morfológicamente idénticas pero
una patógena (E. histolytica) y otra no patógena (E. dispar), a través de
estudios bioquímicos, inmunológicos y genéticos. Sin embargo, fue hasta 1997
que la OMS aceptó esta hipótesis, cuando el comité de expertos, reunidos en la
Ciudad de México, reglamentó la existencia de dos especies morfológicamente
idénticas, pero con patrones isoenzimáticos diferentes. De manera que si en
pacientes sintomáticos se detecta la presencia de quistes y trofozoítos de E.
histolytica con glóbulos rojos en el citoplasma a través de exámenes por
microscopía de luz, se recomienda iniciar tratamiento (Pinilla y col., 2008).

1.2. Taxonomía

El género Entamoeba son amebas que se caracterizan por la presencia de un
núcleo vesicular, con un cariosoma comparativamente pequeño, localizado en
su centro y con unos números variables de gránulos de cromatina periféricos
adosados a la membrana nuclear. Todas las especies pueden distinguirse por
diferencias morfológicas, excepto E. histolytica y E. hartmanni, que se
diferenciaron en un principio por sus tamaños (Ponce-Gordo y Martínez-Dáz,
2010). En los últimos años se ha impuesto la tendencia a diferenciarlos por
características serológicas y patogénicas.

La sistemática de los eucariontes ameboides sigue en constante estudio. No
existen características fenotípicas que unan al grupo más que la forma de
locomoción (Hinkle y col., 1994). A diferencia de los eucariontes típicos, la
amiba no posee mitocondrias, por lo que se ha ubicado en el infraphilum
Archamoebae (Cavalier-Smith, 1993). Los avances más recientes en la
secuenciación del genoma de E. histolytica han permitido la identificación de
genes que codifican para proteínas putativas típicas de la mitocondria
(Maralikova y col., 2010; Miichi y col., 2011). Sin embargo, se ha encontrado un
organelo derivado mitocondrial llamado “crypton”, que aunque no contiene
enzimas de fosforilación oxidativa (como la mitocondria), se han encontrado
5

remanentes de proteínas mitocondriales como Hsp60, Hsp70, PNT y
mitosomas (Mai y col., 1998; M van der Giezen y col., 2004). Estudios
filogenéticos basados en la subunidad pequeña del DNA ribosomal (rDNA)
(Sogin y Silberman, 1998) y en factores de alargamiento (Shirakura y col.,
1994; Baldauf, 1996), muestran que la divergencia entre las especies de
Entamoeba, es relativamente posterior. Estos resultados sugieren que las
especies de Entamoeba no representan un linaje de divergencia temprana, sino
que su falta de mitocondria se debe a una pérdida secundaria. Sin embargo, se
requieren de más estudios para conocer la posición evolutiva correcta de la
especie Entamoeba en la filogenia eucariota. E. histolytica es un parásito que
se ha clasificado taxonómicamente de la siguiente manera (según
Systemanaturae 2000, http://sn2000.taxonomy.nl/main/classification/1078.htm):

Biota
Dominio Eukaryota– eucariontes
Reino Protozoa (Goldfuss, 1818; R. Owen, 1858) – protozoa
Subreino SarcomastigotaFilum Amoebozoa (Lühe, 1913; Corliss, 1984)
Subfilum Conosa (Cavalier-Smith, 1998)
Infrafilum Archamoebea (Cavalier-Smith, 1983; Cavalier-Smith y col., 1998)
Clase Archamoebea (Cavalier-Smith, 1983; Cavalier-Smith y col., 2004)
Orden Pelobiontida (Page, 1976)
Familia Entamoebidae (Chatton, 1925)
Género Entamoeba (Casagrandi y Barbagallo, 1895)
Especie Entamoeba histolytica (Schaudnn, 1903)

1.3. Morfología

El ciclo de vida de E. histolytica es monoxeno con dos etapas
morfológicamente distinguibles, el quiste y el trofozoíto.

1.3.1. Trofozoíto

El trofozoíto es la forma invasiva (vegetativa) de E. histolytica. Es un organismo
anaerobio facultativo, con un tamaño de apenas 4 a 5 veces mayor que un
glóbulo rojo. Tiene un diámetro de 12 a 40 µm, con un valor medio de 20 µm
de diámetro. Es móvil gracias a su ectoplasma que le permite formar un
pseudópodo, el cual es una extension citoplasmática que puede formarse en
cualquier punto de la superficie del protozoario. En el extremo posterior del
organismo se encuentra el uroide. Su citoesqueleto es relativamente simple,
constituido por microfilamentos de actina, microtúbulos de tubulina y filamentos
intermedios. En el genoma de este protozoario no han sido identificados genes
codificantes para proteínas de filamentos intermedios, incluyendo keratinas y
vimentina, lo cual revela que estos elementos, en particular se encuentran poco
conservados a lo largo de la escala evolutiva. Por el contrario, los genes
correspondientes a componentes de microfilamentos, actina y proteínas
asociadas, se encuentran ampliamente representados, lo cual supone que el
citoesqueleto rico en actina es muy dinámico en este protozoario (Archibald y
col., 2003).

Su citoplasma carece de algunos organelos que se encuentran en la mayoría
de los eucariontes como son: citoesqueleto estructurado, microtúbulos
citoplasmáticos, mitocondrias y sistema de lisosomas primarios y secundarios.
Sin embargo, se le han detectado estructuras subcelulares membranosas que
podrían corresponder al retículo endoplásmico y al aparato de Golgi (Ghosh y
col., 2000). E. histolytica se alimenta por fagocitosis y digestión intracelular de
nutrientes, se diferencia de los procariontes por tener un núcleo organizado,
genoma complejo y superficie constituida por una sola membrana plasmática
(Riquelme y Uribe, 2004; Tannich, 1989).

Visto al microscopio electrónico de transmisión (Fig. 1), este parásito tiene
citoplasma hialino, aparece como un conjunto de vacuolas dispuestas en una
matriz granular. Muchas veces estas vacuolas contienen glóbulos rojos (más
7

en casos de disentería). Otras veces se encuentran llenas de almidón o de
fragmentos de bacterias.

Figura 1. Diferentes representaciones de la etapa trofozoíto de E. histolytica. A
la izquierda, dibujo; central, en microscopio de luz sin teñir (fresco) y derecha, con
azul de metileno (teñido). Se observa el núcleo, el citoplasma hialino y aparece un
conjunto de vacuolas dispuestas en una matriz granular. Tomado de
http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/Default.htm, 2013.

Cuando los trofozoítos se transforman en formas quísticas de resistencia,
expulsan todo el material ingerido y se redondean, a esta fase se le denomina
forma prequística y puede reconocerse por la presencia de uno a dos únicos
núcleos redondeados, la ausencia de materiales fagocitados y la ausencia de
pared quística (Montoya, 2008). Por mitosis se forma el quiste maduro de 4
núcleos, el cual se elimina por deposición formada, no en las diarreicas, las
cuales eliminan predominantemente trofozoítos (Fig. 2).

Las amibas pueden fagocitar eritrocitos (Fig. 3), pero suelen hacerlo cuando se
trata de afecciones crónicas. El eritrocito recién fagocitado, aparece en el
citoplasma amebiano como un cuerpo retráctil de color gris pálido. Aunque la
fagocitosis de eritrocitos ha sido descrita en otras amibas, es tan rara que, para
8

efectos prácticos, debe considerarse exclusiva de E. histolytica (Huston, 2003;
Aslam, 2012).

Figura 2. Procesos de transformación de E. histolytica de su forma trofozoíto,
pre-quiste y quiste. En el esquema se ilustran los cambios morfológicos de E.
histolytica. Fila superior: la forma pre quiste tiene de 1 a 2 núcleos (1 y 2) y por
mitosis forman el quiste maduro de 4 núcleos (3 y 4). Fila inferior: forma trofozoíto
(1), forma pre quiste (2 y 3) y quiste maduro (4). Tomado
dehttp://www.dpd.cdc.gov/dpdx/Default.htm, 2013.

Figura 3. Eritrofagocitosis de E. histolytica. Trofozoítos de la cepa HM-1:IMSS
incubados con eritrocitos en cajas Petri. 1) Interacción entre trofozoítos y eritrocitos. 2)
Eritrocitos fagocitados dentro de los trofozoítos. Tomada de Trissl y col., 1978.

1.3.2. Quiste

Los quistes se reconocen por la presencia de una pared quística hialina.
Generalmente son esféricos, pero pueden ser ovoides o irregulares (Fig. 4),
variando mucho en tamaño (entre 10 y 20 µm de diámetro). Presentan una
cubierta gruesa, poseen una membrana bilaminar y en su interior de 1 a 4
núcleos, según su grado de madurez. En algunas cepas de E. histolytica los
cariosomas son excéntricos y en otras la cromátina periférica forma finas
láminas sobre la membrana nuclear, en lugar de gránulos. Otra variante, en
cuanto a estructura nuclear, es la acumulación de toda la cromatina periférica
en forma semilunar, hacia un lado de la membrana nuclear. En el citoplasma
pueden encontrarse una o más barras cromatoidales de una longitud casi igual
al diámetro del quiste o mucho más cortas (Ash y Orihel, 2010). Su citoplasma
es incoloro permitiendo la visualización de cuerpos cromatoides y nucléolos,
además de poseer vacuolas de glicógeno.

Figura 4. Diferentes representaciones de la etapa quiste de E. histolytica.
Derecha, Dibujo; central, microscopio de luz (fresco) y derecha, una tinción con azul
de metileno (teñido), donde se muestra su forma esférica, la pared hialina, una
cubierta gruesa, membrana bilaminar y la presencia de 1 a 4 núcleos. Tomado de
http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/Default.htm, 2013.

Los quistes son relativamente resistentes, aunque no soportan la desecación,
las temperaturas superiores a 55°C, ni la supercloración o yodación de las
aguas potables. Pueden sobrevivir fuera del huésped por semanas o meses en
un ambiente húmedo (Jones y Newton, 1950; Mitsuru Nakamura, 1953). Los
quistes son resistentes a la degradación en el estómago y pasan al intestino
delgado, donde ocurre la exquistación y la liberación del trofozoíto (Espinoza-
Castellano, 2000; Hughes, 2000). Hasta la fecha, dicho evento es poco
entendido por la incacidad de reproducir el fenómeno de enquistamiento in
vitro; sin embargo, se ha encontrado que una especie que infecta a reptiles en
E. invadens la quitina (polímero de N-acetilglucosamina unida por enlaces α 1-
4) tiene un rol importante en la transformación in vitro del trofozoítos a quiste.
Ésto se ha comprobado utilizando inhibidores específicos de quitina, los cuales
disminuyen notablemente el número de quistes formados en cultivo (Caballero-
Salcedo, 1994).

1.4. Ciclo de vida

El ciclo de vida de E. histolytica involucra las fases quiste y trofozoíto. Este
ciclo se inicia con la ingestión de quistes maduros al consumir alimentos
contaminados. Los seres humanos son la única fuente directa o indirecta de
transmisión del parásito, ya sea por medio de las manos, alimentos y las
bebidas contaminadas con heces humanas (Hughes, 2000). Los quistes pasan
por el estómago, donde debido a su dura cubierta no son dañados aunque si
reblandecidos por la acción de los jugos gástricos y pancreáticos.Ésto permite
su exquistación en el intestino delgado, donde el aumento de pH y la tripsina
favorecen la liberación de los trofozoítos, los cuales se multiplican por fisión
binaria y pueden desarrollar infección asintomática si permanecen formando
agregados en la capa de mucina, donde no producen invasión (Biller, 2009). Si
los trofozoítos permanecen en el intestino se deshidratan, excretando parte de
sus reservas alimenticias de las vacuolas digestivas, toman forma esférica y
pierden su movilidad, estadio conocido como prequiste. Posteriormente, éstos
producen una pared de quitina y forman pilas de ribosomas que, a su vez,
11

constituyen los cuerpos cromidiales y se transforman en quistes uninucleados
inmaduros y recubiertos (Haque, 2003).

Si los prequistes continuan avanzando por el colón, inicia un proceso de
división celular que da lugar a un quiste tetranuclear, en el cual termina el
proceso de formación de la pared del quiste. Posteriormente, el quiste es
expulsado con la materia fecal cerrándose el ciclo (Haque, 2003). En algunas
ocasiones los trofozoítos en el colon penetran al torrente sanguíneo llegando a
otros órganos e invadiéndolos (amebiasis extraintestinal) dando lugar a la
formación de absesos en hígado, pulmones y cerebro (Fig. 5) (Tanyksel, 2003;
Gómez, 2007). Los trofozoítos pueden también ser infectantes en la práctica de
sexo anal, causando lesiones en la piel (Hughes, 2000).

Figura 5. Ciclo de vida de E. histolytica. Los quistes y los trofozoítos se transfieren
en las heces (1). La infección por E. histolytica ocurre al ingerir quistes (2) en la
comida contaminada con materia fecal, agua o en las manos. La exquistación (3)
ocurre en el intestino delgado y los trofozoítos (4) liberados migran al intestino grueso.
Los trofozoítos se multiplican por fisión binaria y producen quistes (5), los cuales son
expulsados en las heces (1). En muchos casos, los trofozoítos se limitan
exclusivamente al lumen intestinal (A: infección no invasiva) de individuos que son
portadores asintomáticos y expulsan quistes en las heces. En algunos pacientes los
trofozoítos invaden la mucosa intestinal (B: enfermedad intestinal) o a través del
torrente sanguíneo, invaden órganos como hígado, cerebro y pulmones (C:
enfermedad extraintestinal), con resultantes de manifestaciones patológicas. Tomado
del URL http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/ImageLibrary/Amebiasis_il.htm.
13

2. Amebiasis

La sintomatología de la amebiasis depende en gran medida de la extensión de
la invasión tisular y de si está confinada al tubo intestinal o se ha extendido a
otros órganos. La amebiasis intestinal es la forma más frecuente, siendo a
menudo asintomática; algunos pacientes con amebiasis intestinal muestran una
sintomatología vaga e inespecífica. Si bien estos síntomas pueden desaparecer
o disminuir tras un tratamiento anti-amebiano, no pueden relacionarse
directamente con la infección. Aunque también se pueden presentar síntomas
más definidos, tales como diarrea o disentería, calambres, dolores
abdominales, flatulencia, anorexia, pérdida de peso y fatiga crónica (Gómez y
col., 2007; Hughes y Petri, 2000).

E. histolytica vive usualmente como comensal en el lumen del intestino grueso
del hombre, provocando una amebiasis luminal benigna. Sin embargo, bajo
ciertas condiciones del huésped como la desnutrición, la presencia de un
estado inmunológico débil y otras causas no bien estudiadas aún, el parásito es
capaz de invadir la mucosa intestinal y provocar disentería amebiana. De
manera interesante, estos eventos correlacionan con cambios en la expresión
de genes de virulencia de los trofozoítos invasivos (Hughes y Petri, 2000).

La amebiasis prevalece principalmente en los países en vías de desarrollo, en
donde las condiciones socioeconómicas, de sanidad e higiene son deficientes.
Estas condiciones propician un estado de inmunosupresión en los individuos,
los cuales adquieren predisposición y riesgos importantes frente a las
infecciones, en especial a aquellas producidas por protozoarios parásitos que
habitan en el tracto gastrointestinal, como lo es E. histolytica (Martinez-Palomo,
1987; Ravdin y col., 1988).

2.1. Epidemiología

La infección por E. histolytica tiene una alta incidencia, siendo la amebiasis
uno de los problemas más serios de salud mundial. Es importante desde el
punto de vista epidemiológico, diferenciar 3 estados de la infección: agudos,
crónicos y asintomáticos (portadores). Los casos agudos de disentería
amebiana tienen poca importancia en la transmisión de la enfermedad, ya que
los trofozoítos sobreviven poco tiempo fuera del hospedador. La infección
crónica tiene más importancia, ya que pueden expulsarse tanto trofozoítos
como quistes. Por otra parte, los enfermos asintomáticos son los de mayor
importancia en la transmisión de la enfermedad, pues generalmente solo
eliminan quistes (Marco, 1992; Caballero-Salcedo, 1994). Las personas
infectadas se dividen en dos grupos de acuerdo con sus manifestaciones
clínicas: 90% son asintomáticos (portadores sanos) y 10% son sintomáticos
principalmente a nivel intestinal (disentería amebiana, rectocolitis aguda, colitis
no disentérica crónica y ameboma) y extraintestinal AHA, absceso cerebral,
enfermedad genitourinaria y cutánea. Sin embargo, el 1% de las personas
infectadas pueden desarrollar patologías potencialmente fatales la como colitis
amebiana fulminante e inclusive el AHA (López, 2008).

La amebiasis es la segunda causa de muerte en el mundo debido a una
infección por protozoarios seguida del paludismo, la enfermedad de Chagas y
la leishmaniasis, y es la tercera causa de morbilidad después del paludismo y
la tricomoniasis (Stanley, 2003; Petri WA Jr, 2000). Centro, Sudamérica, África
y Asia se consideran zonas endémicas para la amebiasis (Gómez, 2007).
Aproximadamente, el 10% de la población mundial es portador del parásito E.
histolytica, aunque sólo un bajo porcentaje sufre la enfermedad (WHO, 1997).

En México, en el Boletín Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiológica
número 49 del año 2009, se reportó mediante estudios serológicos que más del
5% de la población se infecta con E. histolytica. En México a pesar de que las
enfermedades diarreicas han ido disminuyendo, y que esta patología ha
presentado una baja en el número de casos e incidencia en los últimos años,
15

continúa manteniéndose entre las primeras veinte causas de morbilidad. Así, la
amebiasis pasó del quinto lugar en 2003 al sexto lugar en el 2008, con una
incidencia nacional de 972.6 a una de 498.5 nuevos casos por 100 000
habitantes, respectivamente (Fig. 6).

Figura 6. Casos e incidencia de amebiasis en México 2003-2008. El gráfico
muestra que la amebiasis en México ha ido disminuyendo, y que esta patología
presenta una baja en el número de casos e incidencia en los últimos años por cada
100 000 habitantes. Tomado deI enforme epidemiológico SUIVE/DGAE/ Secretaría de
Salud, 2009.

De acuerdo a la distribución geográfica de la amebiasis en el país, los estados
del sur y sureste son los que presentan la mayor incidencia. El estado de
Tabasco presentó la incidencia más elevada con 1 457.2, seguida de Oaxaca
con 1 278.0, Campeche con 1 187.0 y Guerrero con 1 149.7, por 100 000
habitantes. Estos cuatro estados en conjunto constituyen el 22.12% de la
totalidad de los casos presentados durante este periodo. A pesar de que
Veracruz, Puebla y Colima se encuentran agrupados dentro de los estados con
menor número de casos estos presentaron una incidencia por arriba del
promedio nacional. Los estados con menor incidencia fueron: Nuevo León,
Sonora y Baja California (Fig. 7).
16

Figura 7. Incidencia de amebiasis intestinal en México 2008. Se muestra la
distribucióngeográfica de la amebiasis en el país durante el año 2008, por cada 100,
000 habitantes. Tomado de Informe epidemiológico SUIVE/DGAE/ Secretaría de
Salud, 2009.

Con respecto al sexo de los individuos afectados, en el año 2008 el mayor
porcentaje de casos correspondió a las mujeres con 56.03% e incidencia de
549.6, en los hombres fue de 43.97% e incidencia de 445.6 ambas por 100 000
habitantes (Fig. 8).

Figura 8. Porcentaje de amebiasis intestinal por sexo en México durante el año
2008. La gráfica muestra a la amebiasis intestinal como la más prevalente en las
mujeres que los hombres, por 100 000 habitantes. Informe epidemiológico
SUIVE/DGAE/ Secretaría de Salud, 2009.

Hombres
Mujeres
17

Según la edad, los grupos que presentaron el mayor número de casos
estuvieron distribuidos de la siguiente forma: <1 año de edad con una
incidencia de 1, 421.5, de 1-4 años 1, 280.8 y de 5-9 años 707.2. El grupo de
edad que resultó menos afectado estuvo dentro de la población
económicamente activa que se encuentra entre los 25-44 años (Fig. 9).
Durante la infancia y muy marcadamente de 1 a 4 años de edad es cuando la
amebiasis se desarrolla más frecuentemente, ya que los niños pequeños son
los más propensos a desarrollarla y presentar las formas invasivas. La
amebiasis aparece también en adultos jóvenes, aunque con manifestaciones
menos severas que en los infantes.
En México, la amebiasis es una enfermedad endémica considerada como un
serio problema de salud pública, ya que se ha estimado que existe una
proporción de un paciente con amebiasis invasiva por cada 4 ó 5 portadores
asintomáticos (Sepulveda, 1982). La seroprevalencia es de 8.4%, pero los
estudios moleculares muestran cifras de infección asintomática por E.
histolytica de 13.8 y de 9.6% para E. dispar (Ramos, 2005); así que se
desconoce la verdadera incidencia y prevalencia de esta enfermedad (Gómez,
2007).

Figura 9. Casos e incidencia de amebiasis intestinal por grupo de edad en
México (2008). Se muestra el número de casos de amebiasis intestinal según la edad,
por cada 100, 000 habitantes. SUIVE/DGAE/ Secretaría de Salud.
18

2.2. Cuadro clínico

2.2.1. Amebiasis intestinal

A menudo, los pacientes con amebiasis intestinal sintomática, se dice que
tienen disentería amebiana; sin embargo, este término debe reservarse para
aquellos pacientes que presentan sangre o mucus en heces. Es probable que
la invasión tisular, pueda deberse tanto a la diferencia en la virulencia de las
cepas, como a una variación en la susceptibilidad del hospedador (Hughes y
Petri, 2000). Puede establecerse un paralelismo entre la vigilancia
inmunológica, que impide y previene la multiplicación incontrolada de células
malignas en un individuo normal y la barrera inmunológica creada por el
intestino; se ha de producir una destrucción de esta barrera inmunológica, en
aquellas personas en las que va a producirse la invasión tisular (Mortimer y
Chadee, 2010; Ralstony Petri, 2010).

Microscópicamente, cuando los trofozoítos penetran la pared intestinal se logra
visualizar una alteración en la mucosa y submucosa (Hughes, 2000). Una vez
que las amibas se han multiplicado lo suficiente se produce una lesión
puntiforme que se observa como una pequeña prominencia, en el centro de la
cual hay una solución de continuidad que es el origen de la laceración. Los
trofozoítos se dividen en la parte más profunda de la lesión, con tendencia a
destruir los tejidos de manera horizontal, por debajo de la mucosa intestinal.
Cuando E. histolytica logra entrar en la mucosa intestinal, la penetración suele
acompañarse de una respuesta inflamatoria; aunque al ser mínima la respuesta
local, la respuesta del sistema inmunológico del huesped tampoco es muy
notable. Las amibas secretan enzimas proteolíticas que producen la necrosis
de los tejidos circundantes, lo más frecuente es que se localicen en el área
cecal, pero tampoco es rara una invasión primaria en zonas como el colon
ascendente, la región rectosigmoidea o en todo el colón en general (Mortimer y
Chadee; Hughes y Petri, 2000).

En ocasiones, los trofozoítos invaden las criptas de la mucosa, donde se
alimentan de eritrocitos y pueden producir úlceras. La ulceración de la pared
intestinal, puede dar lugar a una disentería amebiana, o bien provocar un daño
bastante extenso sin ningún síntoma aparente de enfermedad (Bruchhaus,
2002). Una vez invadida la mucosa, las amibas tienen la posibilidad de seguir
su camino hacia el interior de los capilares, transportándose mediante el
torrente sanguíneo hasta el hígado u otros órganos, en los que producen
abscesos. Las amibas que permanecen o retornan a la luz intestinal pueden, si
la motilidad intestinal es rápida, salir al exterior como trofozoítos en heces
líquidas o semilíquidas; pero si la motilidad es normal, se redondean,
expulsando todo alimento ingerido y dan lugar a las formas de resistencia o
quísticas (Hughes y Petri, 2000).

2.2.2. Absceso hepático amebiano (AHA)

El AHA se debe a la presencia de grandes cantidades de amibas en el hígado,
que llegaron ahí a partir de ulceraciones intestinales donde aparentemente
inducen una pobre respuesta inmune celular. El AHA es 13 veces más
frecuente en hombres que en mujeres y 10 veces más frecuente en adultos que
en niños (Riquelme y Uribe, 2004). Aún sin signos de infección hepática, es
posible la aparición de hepatomegalia y dolor a la palpitación; esta inflamación
se cree debida a una respuesta tóxica a la infección amebiana, no a la
presencia directa de amibas en el hígado. Se han postulado las condiciones
que debe reunir la hepatitis amebiana, pero su definición como estado
temprano de infección hepática difusa, sin formación de absceso, sigue siendo
una hipótesis. De cualquier modo, lo que está claramente establecido es que la
infección hepática sólo aparece en casos en los que se desarrolla la afección
intestinal (Markell, 2006). La infección hepática se caracteriza por inflamación y
dolor a la palpación del hígado, fiebre, pérdida de peso y a veces tos, con
síntomas de neumonía que afecta a la zona inferior de pulmón derecho
(Markell, 2006).

2.3. Diagnóstico

La confirmación parasitológica del diagnóstico se realizaba por estudios
microscópicos de materia fecal, para visualizar la morfología del protozoario.
Por lo regular, los pacientes con colitis amebiana aguda poseen sangre oculta
en las heces, de modo que el examen de ésta suele emplearse como prueba
de tamizaje (Tanyuksel y Petri Jr., 2003). Pero con el descubrimiento de E.
dispar, al ser morfológicamente idéntica a E. histolytica fue evidente la
deficiencia del método diagnóstico. Prácticamente, en el 90% de los casos se
requiere hasta tres análisis sucesivos de heces para obtener un diagnóstico
certero del agente causal de la infección. Pruebas basadas en la detección de
antígenos y anticuerpos diferencian entre las dos especies. La ausencia de
anticuerpos contra proteínas de E. histolytica en el suero de los pacientes,
después de una semana de presentar síntomas, es una evidencia contundente
para el diagnóstico de amebiasis intestinal invasora o hepática (Hughes y col.,
2000; Gómez y col., 2007; López y col., 2008). En la tabla 1 se compara la
sensibilidad y la especificidad de los diversos métodos. Por utilidad, tal vez la
prueba de detección de antígenos en heces sería de las más recomendada
pues diferencia a E. histolytica de E. dispar; además, es fácil de realizar y de
bajo costo. La serología podría utilizarse para determinar la prevalencia, pues
las otras técnicas son más costosas o complicadas (Tanyuksel, 2003).

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR), desde inicios de los años 90,
se ha venido utilizando como método de diferenciación entre ambas especies(Sánchez-Guillen y col., 2002), debido al creciente número de secuencias
disponibles que han aportado datos epidemiológicos más precisos. Además, el
uso de la PCR dá un excelente rendimiento, una alta sensibilidad (Ramos,
2005), y ha permitido el establecimiento de diferencias genéticas,
principalmente en secuencias altamente repetitivas de DNA circular
extracromosomal, así como en los genes codificantes para la actina, la cisteín
proteinasa y la superóxido dismutasa (Zaki y col., 2002). La habilidad de la
PCR para amplificar, de manera específica grandes cantidades de DNA
patógeno, ha revolucionado el diagnóstico de muchas enfermedades
21

infecciosas. Pero, a pesar de ser muy eficaz en la discriminación entre ambas
especies, su empleo se limita fundamentalmente a estudios epidemiológicos o
experimentales, y no a nivel del diagnóstico rutinario.

Tabla 1. Comparación de métodos diagnósticos. En la tabla se compara la
sensibilidad y la especificidad de los diversos métodos diagnósticos para E. histolytica.
PRUEBA COLITIS Distingue a E.
histolytica de E.
dispar Sensibilidad Especificidad
Microscopia (heces) <60% 10% a 50% No
Cultivo y
determinación de
isoenzimas
Menor que
detección de
antígenos y PCR
Estándar de oro Si
ELISA detección de
antígenos (heces)
>95% >95% Si
ELISA detección de
antígenos (suero)
65%, >90% Si
PCR (heces) >70% >90% Si
ELISA detección de
anticuerpos (suero)
>90% >85% Si
Tomado de López y col., 2008.

El hallazgo anatomopatológico típico son las úlceras localizadas en el colón,
predominantemente en el ciego, el sigmoide y el recto. Estas úlceras presentan
dos patrones claramente definidos: nodular e irregular. Las úlceras nodulares
son redondas, de un diámetro entre 1 y 5 mm, con áreas de mucosa
ligeramente elevadas y áreas necróticas, deprimidas o hemorrágicas, rodeadas
por un borde de tejido edematoso. A menudo estas áreas están llenas de un
material mucoso y amarillento denominadas “úlceras en botón de camisa”, en
las cuales pueden verse trofozoítos. En ocasiones, estas lesiones pueden
llegar a cubrir la mayor parte de la mucosa del colón, causando edema y
eritema en las áreas mucosas que no se encuentran comprometidas. Las
úlceras irregulares o serpiginosas tienen 1 a 5 cm de longitud y se encuentran
habitualmente en el ciego y en el colon ascendente. Sus márgenes suelen ser
elevados y edematosos, y la úlcera se llena de fibrina. Cuando las úlceras son
grandes, las áreas de mucosa sin compromiso se encuentran cognitivas y
22

edematosas, ambos cambios morfológicos pueden encontrarse en un mismo
paciente, con extensas áreas de denudación superficial (Gómez, 2007;
Espinosa-Castellano, 2000). Los hallazgos microscópicos se describen en
cinco etapas: lesión inespecífica, depresión mucopénica, lesión invasiva
temprana con ulceración superficial, lesión invasiva tardía con ulceración
profunda y la úlcera en granulación (Gómez, 2007).

El diagnóstico de amibiasis extraintestinal es más difícil porque en general el
examen de las heces es negativo y rara vez puede demostrarse la presencia
de trofozoítos en material purulento. Existen pruebas de laboratorio más
sensibles para casos especiales de investigación o diagnóstico (Tabla 2).

Tabla 2. Pruebas diagnóstico de laboratorio más sensibles para identificar E.
histolytica. La tabla 2 muestra las pruebas de diagnóstico más modernas. Estas
pruebas dan resultados positivos en casi todos los enfermos con AHA y en más del
80% de los que tienen disentería amebiana aguda.

Estudios de serodiagnóstico de
mayor grado de sensibilidad
Hemaglutinación indirecta
Inmunofluorescencia
Inmunofluorescencia indirecta
Inmunodetección de proteínas
Radioinmunoensayo
Métodos modernos de
identificación

Reacción en cadena de la polimerasa
(PCR)
Sondas genéticas
Tomado de Ankriy Mirelman, 2006.

2.4. Tratamiento

A pesar de que las enfermedades causadas por protozoarios son fuente de
morbilidad y mortalidad significativas en el mundo entero, y aún conociendo las
medidas para su prevención con múltiples campañas y programas de salud,
estas disposiciones no han resultado eficientes en el control de las parasitosis
23

humanas; por lo cual se ha tenido que recurrir al empleo de agentes
quimioterapéuticos (Hughes y Petri, 2000).

El tratamiento de la infección depende del diagnóstico clínico. No es lo mismo
el tratamiento de un paciente con colitis amebiana que el tratamiento de un
portador asintomático, debido a los sitios y mecanismos de acción de los
medicamentos empleados (Gómez y col., 2007). Es necesario conocer a
profundidad las diferencias moleculares entre E. histolytica y su huésped, con
el propósito de desarrollar fármacos dirigidos, exclusivamente, contra el
microorganismo agresor. La infección intestinal asintomática no precisa
necesariamente tratamiento, sin embargo no dar importancia a estas
infecciones pueden transformarlas en sintomáticas o constituir focos de
implantación extraintestinal (Merkell, 2006). Por lo que el tratamiento para una
infección asintomática y el de la colitis amebiana es esencialmente el mismo.

Los tratamientos se dividen en 1) luminales, como las 8-hidroxiquinolinas
halogenadas (yodoquinol) y las amidas (teclozán, etofamida, quinfamida, etc),
2) tisulares, como los nitromidazoles (metronidazol, secnidazol, ornidazol). Sin
embargo, el metronidazol presenta una acción luminal y tisular (Hughes y Petri,
2000; Guerrant, 2001; Haque, 2003; Gómez, 2007). Aún en casos
asintomáticos, el metronidazol es altamente recomendado por su efecto
profiláctico sobre posibles localizaciones extraintestinales. Además, de que es
sólo efectivo frente a organismos anaerobios o microaerófilos, inhibiendo la
producción de hidrógeno, liberado normalmente en las reacciones en las que
interviene la piruvato fosfoquinasa (Markell, 2006). El tratamiento para la
amebiasis intestinal siempre debe hacerse, pues aún en las personas
asintomáticas es necesario eliminar los parásitos del intestino con la finalidad
de evitar que en algún momento haya invasión a los tejidos y así eliminar que
sea una fuente de infección.

3. Genoma de Entamoeba histolytica

Uno de los primeros genomas de protistas en ser secuenciados fue el de E.
histolytica. El proyecto inició en el año 2000 y culminó en el 2005 cuando se
publicó el primer “borrador” del genoma completo de este protozoario (Loftus y
col., 2005). Este genoma fue revisado y reanotado a partir de su publicación
inicial (Lorenzi y col., 2010). La publicación inicial describe las secuencias de
familias de genes involucradas en el metabolismo y en la transferencia
horizontal en genes (Clarck y col., 2007); sin embargo, publicaciones
posteriores describen a las familias de proteínas más abundantes. La
secuenciación se realizó a partir de la cepa HM-1:IMSS, usando el método
Shotgun. La secuenciación del genoma de E. histolytica fue un paso importante
en la comprensión de la biología del organismo y una aportación para redefinir
las características genómicas del parásito (Loftus y col., 2005). La información
del genoma se mantiene en el sitio Pathema-Entamoeba
(http://pathema.tigr.org/pathema/entamoeba) y el sitio EuPathDB
(http://eupathdb.org/eupathdb/), siendo esta ultima la base de datos más
actualizada y novedosa.

El tamaño del genoma se ha estimado por diferentes métodos y ha sido
complicado establecer con precisión, debido a las inherentes complejidades de
este microorganismo. En E. histolytica la división nuclear se lleva a cabo sin
degradación de la membrana, por lo que la condensación de los cromosomas
no es evidente (Edman y col., 1990). A diferencia de muchos eucariontes, las
células de E. histolytica pueden duplicar su genoma varias veces antes de que
ladivisión celular ocurra, y como consecuencia, aproximadamente entre el 5-
20% de los trofozoítos en cultivos axénicos (dependiendo de la fase de
crecimiento) son multinucleados. Además, puede presentar DNA duplicado en
ausencia de división nuclear, lo que provoca que un solo núcleo pueda
presentar un contenido genómico 1X a 6X é incluso más. Por tales razones, los
cultivos de trofozoítos presentan una heterogeneidad en su contenido
genómico (Clarck y col., 2007). Aparte de cromosomas lineares, E. histolytica
presenta varias moléculas de DNA circular tipo plásmidos (Bhattacharya y col.,
25

1998). En este sentido, se ha estimado que las células de E. histolytica
presentan una posible ploidía de 4 y que su genoma está constituido por 2 079
972 pares de bases (pb), distribuidos en 14 cromosomas de tamaño variable
que van de 0.3 a 2.2 millones de pares de bases. El genoma de E. histolytica
presenta un bajo contenido en G-C (24.2%). Se ha calculado que contiene
aproximadamente 8201 genes, aunque el número ha sido ajustado (Lorenzi y
col., 2010). En comparación con otros parásitos el número de genes es
relativamente grande y refleja la complejidad de E. histolytica a pesar de la
pérdida de ciertos genes, como consecuencia del parasitismo, tal vez como
una respuesta adaptativa en el huésped humano. La pérdida de genes se
asocia más en la reconstrucción de vías metabólicas, que muestran un patrón
consistente de pérdida de capacidad de síntesis, como consecuencia de su
adaptación a un ambiente rico en fuentes de nutrientes complejos (Clarck y
col., 2007).

El número de genes en E. histolytica es relativamente grande, comparado con
otros parásitos como Plasmodium falciparum y con la levadura Sacharomyces
cerevisie, muy cercano al del protista Dictyostelum discoideum (12500 genes),
esto refleja una relativa complejidad a pesar de la pérdida de ciertos genes
(Tabla 3), siendo más evidente en las reconstrucciones de las rutas
metabólicas donde muestran un consistente patrón de pérdida de la capacidad
sintética como consecuencia de su vida parasitaria en un ambiente rico en
nutrientes (Clarck y col., 2007). Los genes que codifican para proteínas tienen
un tamaño promedio de 1 260.9 pb, relativamente pequeños cuando se
comparan con el promedio de los genes de D. discoideum y P. falciparum. De
éstos el 24.4% presenta intrones. Las regiones codificantes para proteínas
fueron inferidas mediante dos aproximaciones, GliMM y Pat y se estimó que
alrededor del 49.7 del DNA es codificante. Las funciones de los genes han sido
generadas automáticamente por homología y al 46% de las proteínas
predichas se les ha asignado una función (Loftus y col., 2005).

Las regiones intergénicas son pequeñas, de alrededor de 0.8 kb; así como las
secuencias 5’ y 3’ no traducibles de los mRNA, los cuales son relativamente
26

cortas, en comparación con el genoma de los eucariontes superiores. De forma
similar, las secuencia reguladoras del comienzo y término de la transcripción,
así como la secuencia de la caja TATA (localizada frecuentemente 30 pb antes
del ATG de inicio de la traducción), difieren de las secuencias consenso de los
genes eucariontes (Brachhaus y col., 1993).

Tabla 3. Resumen estadístico del genoma para determinados organismos
unicelulares con genomas secuenciados.
Entamoeba
histolytica
Plasmodium
falciparum
Dictyostelium
discoideum
Saccharomyces
cerevisiae
Encephalitozoon
cuniculi
Tamaño del
genoma (Mpb)
20.7 22.8 33.8 12.5 2.5
Contenido
%G+C
24.2 19.4 22.5 38 45.5
Número de
genes
8201 5268 12,500 5538 1997
Tamaño
promedio de
genes (pb)
1260.9 2534 1756 1428 1077
% DNA
codificante
49.7 52.6 ND 70.5 ND
Tamaño
promedio de
proteínas (aa)
389 761 518 475 359
Distancia
promedio
intergénica (kb)
0.8 1.7 0.8 0.6 0.1
Densidad de
genes (kb por
gen)
1.9 4.3 2.5 2.2 1.1
% de genes con
intrones
24.4 54 69 5 <1
Tamaño
promedio del
intrón (pb)
100 179 146 ND –
Número
promedio de
intrones /gen
1.5 2.6 1.9 1 1
Abreviaturas: Mpb: millones de pares de bases; kb: pares de kilobases, pb: pares de bases, aa:
aminoácidos, ND: no determinado. Tomado de Clark y col., 2007; Lorenzi y col., 2010.

Además del genoma de E. histolytica también se secuenció el genoma de E.
dispar y E. invadens, que es un parásito reptiliano causante de la enfermedad
invasiva, principalmente en serpientes y lagartijas (Clarck y col., 2007). La
información obtenida de E. dispar puede ser empleada para identificar
secuencias vinculadas a virulencia, y de E. invadens para estudiar patrones de
expresión génica durante el enquistamiento y extrapolar a E. histolytica.
27

No hay información actual en relación con el tamaño y la naturaleza de las
secuencias de los centrómeros y telómeros. Se propone que estas secuencias
podrian no estar presentes dentro del genoma; que no estan dentro de los
contigs analizados, o bien que divergieron lo suficiente como para ser imposible
su identificación. Adicionalmente, en los extremos de los cromosomas se
identificaron regiones ricas en genes de RNA de transferencia (tRNA), más del
10% de la secuencia contiene genes de tRNA, y éstos están (con algunas
excepciones) organizados en conjuntos lineales; es por ello que se proponen
como como regiones teloméricas (Clarck y col., 2007).
La organización estructural de los genes de RNA ribosomal en E. histolytica es
inusual, con alrededor de 24 kb episomas circulares (Bhattacharya y col.,
1998), que tienen dos unidades de transcripción en una repetición invertida.
Estos episomas se cree que representan alrededor del 20% del DNA celular
total (Clark y col., 2007; Lorenzi y col., 2010).

Como se describió anteriormente los genes en E. histolytica son relativamente
cortos, no sólo por la pérdida de intrones, sino también por la longitud de las
proteínas que ellos codifican. En promedio de la longitud predicha de una
proteína en E. histolytica es de 389 aa, que es 129 aa y 372 aa más corto que
en D. discoideum y P. falciparum, respectivamente (Clark y col., 2007). De
acuerdo a la base de datos Pfam, la familia de dominios de proteínas más
comunes en E. histolytica se muestra en la tabla 4. Las familias de proteínas
con dominios Rab y Rho son inusualmente grandes en E. histolytica y se
encuentran entre los dominios más abundantes en este parásito. Reflejan
algunos de los aspectos menos conocidos de su biología, pues están
involucrados en la señalización y el tráfico de vesículas, posiblemente debido a
su estilo de vida "depredador". Estos dominios están íntimamente implicados
en la detección de su medio ambiente, la endocitosis y la entrega de los
lisosomas al fagosoma. Otros dominios importantes son los implicados en la
dinámica de la actina y la reorganización del citoesqueleto. Los dominios de
unión a DNA Myb, son los reguladores de la transcripción más abundantes.
También hay proteínas multidominio, entre las que se incluyen cinco proteínas
28

que contienen tanto dominios RhoGEF (Rho GTPasa factor de intercambio de
nucleótidos guanina) y Arf-GAP (factor ribosilación ADP proteína de activación
de la GTPasa), lo que sugiere una comunicación entre reguladores vesículares
y el reordenamiento de citoesqueleto. Además, se han identificado más de 80
receptores de cinasas, cada uno contiene un dominio cinasa y un dominio
extracelular rico en serinas, lo cual hace sorprendente que un organismo
unicelular tenga tantos receptores relacionados con transducción de señales
(Clarky col., 2007).

Tabla 4. Dominios más abundantes en el proteoma de de E. histolytica
determinados por Pfam.
Nombre del
dominio Función del dominio
Número total de proteínas
con ese dominio
WD40 Dominio WD , Repetido G-b 249
LRR_1 Repetido rico en Leucina 131
Pkinase Dominio proteínacinasa 95
HEAT Repetido HEAT 70
efhand Mano EF 58
RRM_1 Motivo de reconocimiento a RNA 57
Ras Familia Ras 46
TPR_1 Repetido tetratricopeptido 42
Ank Repetido ankyrin 34
PUF Familia Pumiliorepetido de unión a RNA 33
RhoGAP Dominio RhoGAP 27
Myb_DNAbinding
Dominio Myb de unión a DNA 22
RhoGEF Dominio RhoGEF 22
Helicase_C Helicasa conservada Dominio C-terminal 20
DEAD Caja DEAD/DEAH helicasa 20
PH Dominio PH 19
Metallophos Fosfoesterasa calcineurin 19
Gelsolin Repetido gelsolin 18
LIM Dominio LIM 17
CH Dominio homólogo Calponin (CH) 16
Filamin Repetido filamin/ABP280 16
Tomado de Clark, y col., 2007.

3.1. Transcripción en E. histolytica

E. histolytica tiene una RNA polimerasa II α- amanitina resistente (Lioutas y
Tannich, 1995), debido a que su subunidad RPB1, la cual es muy divergente.
Curiosamente, también es bastante diferente de la secuencia RPB1 del
protozoario Trichomonas vaginalis. Así mismo el heptapéptido (TSPTSPS) de
la subunidad grande de la RNA polimerasa II contenido en el dominio C-
terminal (CTD), y que es común en otros eucariontes, no se encuentra en la
RNApolI de E. histolytica. De hecho todo el CTD no guarda homología con
cualquier otro dominio de RNA polimerasa II en la base de datos actual. El
dominio CTD de E. histolytica es rico en prolina/serina, contiene 24 serinas, 6
treoninas y 3 tirosinas presentes de las cuales es susceptible a ser fosforilado
en 9 serinas, 3 treoninas y 1 tirosina. Estas modificaciones postraduccionales
por cinasas y fosfatasas en el dominio CTD podrían modular las interacciones
proteína-proteína, como ocurre en otras RNA polimerasas. En E. histolytica se
se han identificado 10 subunidades de la RNA, sin embargo los homólogos de
las subunidades 4 y 12 están ausentes; mientras que el homólogo de la
subunidad 9 carece del primero de los dos motivos de unión a zinc y del motivo
DPTLPR (Yeo y col., 2003).

El núcleo del promotor de los genes de E. histolytica tiene una estructura
tripartita inusual que consta de las secuencias TATA, GAAC y el elemento
iniciador (Inr) (Purdy y col, 1996; Singh y Rogers, 1998; Singh y col, 1997,
2002). Se especula que en el motivo GAAC se une a una proteína que se
asocia al complejo de preiniciación. Además de ser una proteína de unión a la
caja TATA, TBP es una subunidad del factor de transcripción general TFIID,
que en otros organismos es requerido para el reconocimiento del promotor
TATA (Hernández y col., 1997).

Los factores de transcripción identificados en este parásito son escasos,
algunos se han identificado en base a su homología en Homo sapiens, D.
discoideum, y en otros organismos unicelulares (Tabla 5).

Tabla 5. Factores de transcripción representativos de E. histolytica, su
correspondiente motivo de unión DNA y los enfoques moleculares utilizados
para caracterizarlos.
Factor de
Transcripción
Motivo de unión al
DNA
Ensayo realizado Información
obtenida
Referencia
URE3-BP TATTCTATT
(URE3)
Análisis
deleción/sustitución

Híbrido en levadura

Microarreglo

EMSA

ChIP
Identificación de
motivos de unión
al ADN
Identificación de
URE3_BP
Identificación de
genes diana
Prueba de unión
específica in vitro
Prueba de unión
in vivo
Purdy y col.,
1996

Gilchrist y col.,
2001
Gilchrist y col.,
2008
Gilchrist y
col.,2001
Gilchrist y col.,
2003
EhEBP1 y2 AAAAATGAATGG
AAAAATGAA
(URE4)
Análisis
deleción/sustitución
Cromatografía de
afinidad a DNA
EMSA
Identificación de
motivos ADN
Identificación de
EhEBP1 y 2
Prueba de unión
específica in vitro
Schaenman y
col., 1998
Schaenman y
col.,2001
Schaenman y
col., 1998; 2001
EhMyb10 TAACGG (motivo
consenso Myb)
Búsqueda de genoma

EMSA
Identificación de
32 dominios de la
proteína MYB
Prueba de unión
específica in vitro
Meneses y col.,
2010

EhMyb-dr CCCCCC (EhMyb-
dr)
Microarreglo-
conversión de fase
Microarreglo-
sobreexpresión Myb-
dr

MEME y Mast

EMSA

ChIP
Identificación de
MYB-dr
Identificación de
genes co-
reguladores de
genes Myb-dr
Identificación de
motivos DNA
Prueba de unión
específica in vitro
Prueba de unión
in vivo
Ehrenkaufer y
col.,2007a
Ehrenkaufer y
col.,2009
ECudA AGAATTTTCT Búsqueda de genoma
EMSA
Identificación de
CudA homólogo
Prueba de unión
específica in vitro
Yamada y col.,
2008
C/EBP TGTTTGGTAGTTG
AATTGGAAAGAA
(motivos consenso
C/EBP1 y C/EBPIII)
Análisis
deleción/sustitución

Purificación DNA de
afinidad

EMSA
Identificación de
motivos de unión
al DNA
Purificación
parcial de
proteínas
Prueba de unión
específica in vitro
Marchat y col.,
2002
Ehp53 GGACATGCCCGG
GCATGTCC
(motivo consenso
p53 )
EMSA Prueba de unión
específica in vitro
Mendoza y col.
(2003)
HMGB1 Estructura DNA

Por ejemplo lazos
madre

Palindromes

Microarreglo

Ensayo de
circularización ligase
mediada

EMSA

Identificación de
HMGB1

Prueba de unión
DNA

HMGB1 mejorada
de unión a ADN
de p53
Gilchrist y col.,
2006
Abhyankar y
col., 2008
31

DNA
monocatenario
DNA cruciforme
Microarreglo Identificación de
genes modulados
por HMGB1
EhTBP

EhTRF1
TATTTAAA (caja
canonical TATA
para
E. histolytica)
EMSA

Búsqueda de genoma
EMSA
Prueba de unión
específica in vitro
Rango
determinado de
valores de KD
para las variantes
de caja TATA
EhTBP es más
promiscuo que los
PDD humanos y
de levadura
Identificación de
dos factores TBP
adicionales
relacionados
(EhTRF)

Prueba de unión
específica in vitro
de Dios-Bravo y
col., 2005

Castanon-
Sanchez y col.,
2010
Tomado de Pearson y Singh, 2010.

4. Mecanismos de patogenicidad

Debido a la aparición de los medios sintéticos para el cultivo de E. histolytica y
su perfeccionamiento a través del tiempo, se han logrado grandes avances
sobre la biología de este parásito. Sin embargo, no se ha establecido
completamente el papel de la respuesta inmune del hospedero en su intento
por controlar la enfermedad. Tampoco se sabe que ocasiona que el parásito en
algunos casos se comporte como comensal y en otros como invasor. Como
explicación hacia estas diferentes conductas se propone la existencia de
distintas especies de Entamoeba morfológicamente idénticas; como es el caso
de E. dispar que es una especie morfológicamente idéntica a E. histolytica
(Brumpt, 1925), pero su patogenicidad es menos agresiva. También puede
tratarse de las características virulentas solo bajo ciertas circunstancias del
medio o del huésped; esto se apoya en las diferencias en virulencia
encontradas en distintas cepas de E. histolytica (Davis, 2006).

La patogenicidad de E. histolytica frecuentemente es multifactorial e involucra
un complejo rol entré parásito y hospedero. Las amibas son capaces de
realizar una serie de diferentes actividades biológicas celulares a fin de dañar
32

las células del huésped y sobrevivir; para lo cual utiliza principalmente tres
eventos: 1) adhesión, 2) citólisis y 3) fagocitosis. Adicionalmente, se debe
considerar la immuno-evasion, la colonización y la invasión, que en conjunto
son los responsables de causar la enfermedad. Por su parte, las células del
huésped, también presentan sistemas de defensa no específicos, tales como el
estrés oxidativo. Para sobrevivir, la amiba utiliza varios mecanismos para
manejar la alta concentración de especies reactivas de oxígeno y un sistema
de metabolitos con alta plasticidad, determinantes para su virulencia; los cuales
junto con los factores de virulencia pueden establecer una ventaja para el
parásito y dañar seriamente al hospedero (Anaya-Velázquez y Padilla-Vaca,
2011).

El mecanismo patogénico de E. histolytica depende de las sustancias tóxicas
que libera como son lasadhesinas, toxinas, amebaporos y las diferentes
proteasas. Por ejemplo, se facilita la invasión de los trofozoítos si se asocia con
otras bacterias del intestino o con el sistema inmune del hospedero e incluso
con algunos factores del huésped como el hierro (De la Garza y Vaca-Pacheco,
2010), los lipofosfopeptidoglicanos, peroxiredoxinas, fosfolipasas,
esfingomielinasas, arginasas, lisinas y proteínas ricas en ácido glutámico
(Orozco y col., Martinez-Palomo, 1989, 1983; Anaya-Velazquez y Padilla-Vaca,
2011). La actividad de la peroxidasa y su capacidad de reducir O2 a H2O2, así
como la activación de la piruvato ferredoxina oxidorreductasa, participan en la
protección del parásito durante el proceso de invasión al hospedero (Mai,
1999). Todos estos factores de patogenicidad conducen a la lisis, muerte y
destrucción de una variedad de células y tejidos en el hospedero.

Una de las características distintivas de la patogenicidad de E. histolytica es su
dependencia de contacto directo con la célula blanco de su huésped; siendo
capaz de matar a una gran variedad de tipos de células como las del epitelio
intestinal, los eritrocitos, los neutrófilos y los linfocitos (Guerrant y col., 1981;
Ravdin y Guerrant, 1981; Burchard y Bilke, 1992; Burchard y col., 1992a, b).

4.1. Adhesión

Los trofozoítos de E. histolytica se adhieren a las monocapas de células
epiteliales en cultivo y a superficies como plástico y vidrio. Esta adhesión de los
trofozoítos a las células epiteliales es esencial para la acción lítica de los
trofozoítos y requiere de un mecanismo específico en el que están involucradas
moléculas de superficie del parásito (adhesinas) y receptores de la célula
blanco (Fig. 10) (García-Rivera y col., 1999). Para la sucesión de los siguientes
eventos como la fagocitosis y la destrucción celular, la adhesión es
indispensable (Serrano-Luna y col., 2012). La colonización y la invasión de la
mucosa del colon implican la adhesión de trofozoítos a mucinas y a las células
epiteliales del huésped (Teixeira, 2002). En el ciego, el parásito es capaz de
evadir las defensas inmunitarias del huésped en parte por proteasas secretoras
de cisteína que degradan inmunoglobulinas y las proteínas del sistema del
complemento y por otra parte matando las células anfitrión de defensa tales
como los linfocitos y los neutrófilos.

La muerte celular que induce E. histolytica es dependiente de contacto y está
mediada por una lectina amebiana específica para galactosa y N-acetil-D-
galactosamina de superficie (Gal /GalNAc) (Ravdin y col, 1980; McCoy y col,
1994). La cual se une a residuos expuestos de galactosa y Gal/GalNAc en las
glicoproteínas de las células blanco (Petri y col., 1987; Ravdin y Guerrant,
1981). Esta lectina es una glicoproteína heterodimérica, con 3 subunidades; la
subunidad de 170 kDa (HgI), está ligado a un glucosilfosfatidilinositol (GPI)
(McCoy y col., 1993; Cheng y col, 2001), su dominio citoplasmático reconoce
específicamente a la galactosa/N-acetil-D galactosamina y su secuencia
presenta homología con las integrinas ß2 y ß7 (Laughlin, 2005). Este complejo
se une mediante puentes disulfuro a la subunidad liviana (Lgl) de 31 ó 35 kDa.
Hgl-Lgl se une por enlaces no covalentes a la subunidad intermedia (Igl) de 150
kDa (Petri y col, 1989; Cheng y col, 2001; Laughlin, 2005; Clarck y col., 2007).
En la adhesión también participan moléculas como la lectina de 220 kDa (Meza
y col, 1987), una proteína rica en serinas (SREHP) de 52 kDa (Stanley y col.,
1992), proteínas de 90, 70, 50 y 24 kDa (Rodríguez y col., 1989) y el complejo
34

EhCPADH de 112 kDa (Arroyo y Orozco, 1987; Garcia-Rivera y col., 1999).
Este complejo está formado por una cistein proteasa (EhCP112) y una
adhesina (EhADH112), codificados por dos genes adyacentes separados por
188 pb. EhDH112 tiene 687 aa, presenta un peso molecular de 75 kDa.
Contiene un dominio de adherencia, localizado en los aminoácidos 444-601
(García-Rivera y col., 1999; Martínez-López y col, 2004). Por su parte, la
EhCP112 también participa en la virulencia del parásito (Ocadiz y col., 2005).

Figura 10. Proteínas de adhesión y secreción presentes en la superficie celular
de E. histolytica. El proceso de adhesión de los trofozoítos a su célula blanco
requiere de un mecanismo específico en el que están involucradas moléculas de
superficie del parásito (adhesinas) y receptores de la célula blanco. Este evento ocurre
gracias a la participaciónde una lectina de superficie que une residuos expuestos de
galactosa y Gal/GalNAc en las glicoproteínas de las célula blanco y otras moléculas
como la lectina de 220 kDa, la proteína SREHP de 52 kDa, proteínas de 90, 70, 50 y
24 kDa y el complejo EhCPADH de 112 kDa. Tomado de Expert Reviews in Molecular
Medicine. 2005 Cambridge University Press.

4.2. Citólisis

Cuando el trofozoíto penetra la capa de moco intestinal, previo al contacto con
la célula blanco, que actúa como una barrera frente a la invasión, se genera la
colitis (Chadee y col., 1987). La invasión es medida por la muerte de células
epiteliales, neutrófilos y linfocitos, que ocurre solo después de que la lectina del
parásito se involucra con los residuos Gal/GalNAc de las proteínas del
hospedero (Petri y col., 2002). La interacción de la lectina con los
glicoconjugados es estéreo-específica y multivalente (Yi y col., 1998).

• Amebaporos: En las vesículas granulares del lisosoma de E. histolytica
se encuentra una familia de pequeñas proteínas formadoras de poros llamadas
amebaporos. Su actividad se detectó desde hace más de 20 años (Lynch y
col., 1982; Young y col., 1982) pero se aisló hace 12 años y ahora ya se
conoce hasta su estructura primaria (Leippe y col., 1991; Leippe y col., 1992).
Los amebaporos tienen un papel fundamental en la patogenicidad de este
parásito protozoario. Son péptidos pequeños de 77 aa y un peso molecular de
4.5 kDa (Espinosa-Castellano y Martinez-Palomo, 2000); se concentran en
vesículas amebianas requiriendo un pH ácido (≈5). La principal función de
estas proteínas es lisar a las células blanco ingeridas formando poros en sus
mebranas (Ravdin y col., 1986), los cuales actuan como canales iónicos,
similares al componente C9 del complemento y a la perforina de los linfocitos T
citotóxicos (Leippe y col., 1991).

Leippe y colaboradores (Leippe y col., 1994) aislaron de gránulos
citoplasmáticos tres péptidos con actividad formadora de poro, los cuales
clasificaron como A, B y C, estos tienen el mismo peso molecular, pero difieren
en su estructura primaria, encontrándose en una porción de 35:10:1,
respectivamente. Los amebaporos de la clase C son más efectivos, mientras
que los amebaporos clase A no son eficientes en la lisis de los eritrocitos. En
los últimos años se identificaron tres nuevos amebaporos, asi como 16
proteínas que tienen dominios similares a saponinas (SAPLIPS), los cuales se
conservan en los amebaporos (Loftus y col, 2005; Clarky col., 2007). Los
37

dominios transmembranales en estas saponinas no son evidentes,
posiblemente son productos de secreción almacenados en las vesículas
citoplasmáticas y actúan sinérgicamente con los amebaporos.

Recientemente, Hecht y colaboradores (Hecht y col., 2004) han descrito la
estructura terciaria del amebaporo A, encontrando que un lado de su superficie
es hidrófoboico. Según el modelo propuesto de dimerización antiparalela, esta
región hidrofóbica se extiende sin ninguna interrupción, puede ser seguido por
adición de otros dímeros, dando lugar a una estructura de anillo con una
superficie exterior hidrófobica y un interior predominantemente hidrofílico. El
modelo hexadimérico tiene un diámetro interior de ~2 nm, que concuerda con
los datos derivados de las mediciones