Aseguramiento-de-la-calidad-en-las-mediciones-por-cromatografia-de-liquidos

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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO 
FACULTAD DE QUÍMICA 
ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD EN LAS MEDICIONES POR 
CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS 
TESIS 
 
QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE 
 
QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO 
 
PRESENTA 
 
ARTEMIO ROMERO FLORES 
 
 
 
 
 
 
 
 MÉXICO, D.F. 2013 
 
 
UNAM – Dirección General de Bibliotecas 
Tesis Digitales 
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JURADO ASIGNADO: 
 
PRESIDENTE: Q.F.B. CAROLINA MUÑOZ PADILLA 
VOCAL: DRA NORMA TRINIDAD GONZÁLEZ MONZÓN 
SECRETARIO: Q.F.B. PEDRO SALVADOR VALÁDEZ ESLAVA 
1er. SUPLENTE: Q.F.B. JOSÉ DE JESÚS MATEO VILLACAMPA RAMOS 
2° SUPLENTE: M. EN C. ANGEL AVILA VILLAGRÁN 
 
 
SITIO DONDE SE DESARROLLÓ EL TEMA: 
FACULTAD DE QUIMICA DE LA UNAM 
 
ASESOR DEL TEMA: 
DRA NORMA TRINIDAD GONZÁLEZ MONZÓN 
SUSTENTANTE (S): 
ARTEMIO ROMERO FLORES 
 
 
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Aseguramiento de la calidad en las mediciones por cromatografía de 
líquidos. 
 
INDICE 
1.0 INTRODUCCION 
2.0 OBJETIVO 
3.0 SISTEMA DE CALIDAD 
4.0 BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO 
5.0 REQUISITOS TECNICOS 
6.0 CALIFICACION DE SIWSTEMAS CROMATOGRAFICOS… 
7.0 VALIDACION DE PROCEDIMIENTOS ANALITICOS 
8.0 DISCUSION 
9.0 CONCLUSIONES 
10.0 BIBLIOGRAFIA 
11.0 DIAGRAMAS DE FLUJO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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1.0 INTRODUCCION 
La salud es uno de los bienes más preciados de la humanidad y para conservarla, 
los medicamentos son una de las herramientas más importantes. 
Por su efecto en la salud, los productos de la industria farmacéutica, los 
medicamentos, alcanzan una importancia social mayor que los productos de otras 
industrias. 
En México contamos con la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos que es 
el documento instituido por la Ley General de Salud, expedido y reconocido por la 
Secretaría de Salud, donde se consignan los métodos generales de análisis y los 
requisitos sobre la identidad, pureza y calidad que garantice que los fármacos, 
aditivos, medicamentos, productos biológicos y dispositivos médicos sean 
funcionales, eficaces y seguros. Es de carácter obligatorio para los 
establecimientos que se destinen al proceso de los medicamentos y demás 
insumos para la salud. 
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la industria farmacéutica global se divide en tres sectores que son: 
1. Farmaceútica 
2. Biotecnológica 
3. Dispositivos médicos 
El sector farmacéutico está enfocado al desarrollo, producción y suministro de 
productos medicinales y sus insumos, utilizados para el tratamiento, prevención de 
enfermedades, cuidado e higiene, para uso humano y veterinario, se encuentran 
contemplados, los productos elaborados tanto por síntesis química como por 
procesos biotecnológicos. El sector de los dispositivos médicos se compone de los 
fabricantes y diseñadores de estos productos para los cuidados de la salud, 
igualmente para uso humano y veterinario. La figura 1 muestra el porcentaje de 
cada segmento a nivel mundial. 
Figura 1 
Segmentación industrial, en porcentaje para el mercado farmacéutico 
 
Fuente. Data Monitor Diciembre 2009 
 
Herramientas 
en ciencias de 
la vida y 
servicios, 1.70%
Biotecnología, 
27.70%
Farmacéutico, 
75.60%
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México representa una gran oportunidad para las empresas dedicadas a esta 
industria farmacéutica, gracias a que: 
 Tiene una población de aproximadamente 110 millones de habitantes. 
 En 2012, la población mayor de 65 años rebasó los 7 millones de personas. 
 En 2050, los adultos mayores serán 32 millones y representarán más del 24 
por ciento de la población. 
 El número de personas de 65 años de edad y más está creciendo a una 
tasa anual de 2 por ciento, mientras que el ritmo de crecimiento anual de los 
mayores de 85 años se ubica entre 3 y 5 por ciento. 
 El gasto en salud de las personas de 65 años o más se incrementó cinco 
veces en el periodo de 1991 a 2005. 
 Uno de los efectos del envejecimiento de la población es el incremento de 
las necesidades de salud, que se asocian con una mayor demanda y 
utilización de servicios, productos farmacéuticos y dispositivos médicos 
 
Ahora bien y entrando al tema de este estudio, durante el proceso de manufactura 
de los fármacos y formas farmacéuticas, se requiere asegurar la calidad de las 
mediciones analíticas, mediante las Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL), que 
son el conjunto de normas y procedimientos que nos permiten asegurar la calidad 
de los desarrollos experimentales que se realizan en el laboratorio. En otras 
palabras el seguimiento a las BPL nos permite garantizar que los resulados de la 
experimentación realizados son exactos, trazables, seguros, precisos y han sido 
documentados correctamente. 
Por otra parte tenemos que dado el ambiente regulatorio actual, ya no es necesario 
tener una planta dentro del territorio nacional para poder fabricar, vender, distribuir 
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medicamentos para uso humano, esto nos lleva a que solo se requiere contar con 
un almacén de medicamentos, sin embargo el control de calidad se debe de llevar 
a cabo dentro del territorio nacional lo cual debe de ser un detonante para aumentar 
el número de laboratorios terceros autorizados que puedan cubrir las demandas 
que son ya una realidad para el mercado mexicano. 
De lo expuesto en los párrafos anteriores, y enfocandonos hacia la obtención de 
resultados de calidad, tenemos tres componentes que son parte fundamental y 
quedan expresados en la siguiente figura: 
 
 
Figura 2.0 
La importancia de la calidad en los resultados analíticos, radica en tres aspectos 
fundamentales, el usuario, el método analítico y el equipo. 
De donde se desprenden los siguientes conceptos: 
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Usuario. Debe de tener los estudios, capacitación y experiencia que le permita 
realizar las actividades asignadas, asi mismo deberá de seguir las medidas de 
higiene y seguridad establecidas para evitar la contaminación de los productos. 
Método analítico. Este debe de ser reproducible, confiable, seguro, preciso y 
exacto. 
Equipo. Debe de ser confiable, robusto y contar con su plan de mantenimiento, 
calibración o calificación, fácil de usar y seguro. 
Dado todo lo anterior y debido a que un gran número de fármacos se identifican y 
cuantifican por Cromatografía de Líquidos, este trabajo tiene como: 
 
Durante los procesos de desarrollo y de manufactura de los medicamentos y 
fármacos, se requiere asegurar la calidad de las mediciones analíticas. 
La calidad hoy en día es un recurso estratégico para la competitividad, con una 
gran incidencia en numerosos ámbitos productivos y sociales, Los laboratorios 
analíticos no son una excepción, la calidad de las medidas derivado del concepto 
de aseguramiento de la calidad, catalizado por la expansión que ha experimentado 
la gestión de la calidad bajo el impulso de los sistemas de certificación basados en 
la familia de normas ISO 9000, han plasmado la necesidad de involucrar la calidad 
en los laboratorios analíticos. 
Las Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL), que son el conjunto de normas y 
procedimientos que nos permiten asegurar la calidad de los métodos analíticos 
que se realizan en el laboratorio, son la piedra angular sobre la que sedesarrolla 
el presente trabajo, se estructura en cuatro temas fundamentales: aspectos 
básicos del aseguramiento de la calidad, buenas prácticas de laboratorio con base 
en la Norma Voluntaria Mexicana NMX-EC-17025 (ISO-IEC 17025), validación de 
métodos analíticos y calificación de instrumentos cromatográficos. En la primera 
parte se introducen conceptos de calidad y se identifican en el caso de los 
laboratorios analíticos los elementos básicos que le dan soporte, en el segundo 
bloque de este documento se aborda el tema de las Buenas Prácticas de 
Laboratorio Analítico, así se han considerado las referencias normativas y los 
aspectos de documentación, infraestructura y personal, se plantean los diagramas 
de flujo para cada uno de los apartados de la Norma de Buenas Prácticas de 
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Laboratorio. Se dedica un apartado a la validación de métodos analíticos, como 
herramienta esencial para llevar a cabo los análisis químicos. La validación 
comienza con la selección del método adecuado para cada aplicación concreta. 
(La validación de los métodos de medición realizada para poner de manifiesto que 
un método analítico posee las características de funcionamiento adecuadas). 
También se dedica un capítulo a la calificación de sistemas para Cromatografía de 
Líquidos de Alta Resolución (CLAR), en virtud de que en el ámbito de la industria 
farmacéutica es necesario cumplir con este requisito para comprobar que las 
mediciones analíticas por CLAR se encuentran bajo control, es decir se pone de 
manifiesto que los instrumentos son apropiados para la utilización requerida y que 
además se encuentran en un estado de mantenimiento y calibración adecuado 
para dicha utilización. 
Las distintas partes del equipo, experimentan desgastes debido al funcionamiento, 
a la influencia de las condiciones ambientales, a manipulaciones no siempre 
correctas por parte de los usuarios, a movimientos de lugar de los equipos, con el 
objeto de minimizar las influencias de este desgaste sobre la calidad de las 
medidas y garantizar el funcionamiento correcto de los equipos durante el máximo 
tiempo posible, es preciso llevar acciones de mantenimiento y calificación 
(calibración y/o verificación). La calibración atribuye valores o corrige los valores 
indicados por un instrumento. En este sentido afecta primordialmente a la exactitud 
de las medidas. 
En este sentido el mantenimiento de los instrumentos de Cromatografía tiene por 
objeto garantizar el buen funcionamiento y prevenir o reparar las averías, mientras 
que la calificación del sistema cromatográfico consiste en un número de pruebas 
que se ejecutan en un orden específico, tales como la precisión del sistema , la 
exactitud de longitud de onda, la linealidad y la sensibilidad del detector o 
respuesta del detector, linealidad del inyector y exactitud, el ruido entre otras. 
Las especificaciones de calificación para un sistema específico se encuentran en 
los manuales específicos de cada fabricante y se comparan con estos. 
El concepto de calificación de equipos se plasma con protocolos experimentales 
que forman parte de la experiencia profesional y práctica en el ámbito de la 
Cromatografía de Líquidos de alta Resolución. 
Dado todo lo anterior y debido a que un gran número de fármacos se identifican y 
cuantifican por Cromatografía de Líquidos de Alta Eficiencia, este trabajo tiene 
como: 
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2.0 OBJETIVO 
Proponer un sistema de calidad para asegurar las mediciones analíticas por 
Cromatografía de Líquidos, tomando como marco de referencia las Buenas 
Prácticas de Laboratorio. 
Objetivos Particulares 
Establecer este trabajo como una guía rápida de los elementos involucrados en el 
análisis por cromatografía de líquidos para asegurar la calidad de los resultados 
en el análisis de medicamentes, enfocándonos en la calificación de los sistemas 
cromatograficos como apoyo en el aseguramiento de la calidad de las mediciones 
analíticas. 
Dar a conocer la importancia de que la documentación ha de seguirse conforme a 
procedimientos establecidos y que todo lo que engloba el análisis de un 
medicamento quede por escrito y sea que dicha información sea trazable. 
2.1 VOCABULARIO 
 
Acción correctiva. Actividad planeada y ejecutada, con el fin de corregir una 
desviación o una no conformidad.Tomada para eliminar las causas de una no 
conformidad, defecto o cualquier situación indeseable existente, para evitar su 
repetición. (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
Acción preventiva. Actividad planeada y ejecutada, para eliminar la causa de una 
desviación o una no conformidad u otra situación potencialmente indeseable y 
evitar su recurrencia.Tomada para eliminar las causas de una no conformidad, 
defecto o cualquier situación indeseable potencial, con el fin de evitar que se 
produzca. (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
Acreditación. Atestación de tercera parte relativa a un organismo de evaluación 
de la conformidad que manifiesta la demostración formal de su competencia para 
llevar a cabo tareas específicas de evaluación de la conformidad. 
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Evaluación de la Conformidad –Vocabulario y principios generales-, ISO/IEC 
17000:2004, 
Aprobación. Permiso para comercializar o utilizar un producto o un proceso, para 
fines establecidos o bajo condiciones establecidas. 
Evaluación de la Conformidad –Vocabulario y principios generales-, ISO/IEC 
17000:2004, Instituto de Normas Técnicas, pág. 13. 
Aseguramiento de la calidad: "Es un conjunto de actividades preestablecidas y 
sistematizadas, aplicadas al sistema de calidad, que ha sido demostrado que son 
necesarias para dar confianza adecuada de que un producto o servicio satisfará 
los requisitos para la calidad" (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
Auditoria de la Calidad: Examen sistemático e independiente con el fin de 
determinar si las actividades y los resultados relativos a la Calidad satisfacen las 
disposiciones preestablecidas, y si éstas disposiciones son aplicadas en forma 
efectiva y son apropiadas para alcanzar los objetivos (NMX-EC-17025-IMNC-
2006). 
Autorización: acto administrativo mediante el cual la autoridad sanitaria 
competente permite a una persona pública o privada, la realización de actividades 
relacionadas con la salud humana, en los casos y con los requisitos y modalidades 
que determina la Ley General de Salud y demás disposiciones aplicables (NMX-
EC-17025-IMNC-2000). 
Buenas Prácticas de Fabricación: conjunto de lineamientos y actividades 
relacionadas entre sí, destinadas a asegurar que los productos farmacéuticos 
elaborados tengan y mantengan la identidad, pureza, concentración, potencia e 
inocuidad, requeridas para su uso. 
Buenas prácticas de laboratorio: Es un conjunto de reglas, de procedimientos 
operacionales y prácticas establecidas y promulgadas por determinados 
organismos como la (Organization for Economic Cooperation and Development 
(OCDE), o la Food and Drug Administration (FDA), etc.), que se consideran de 
obligado cumplimiento para asegurar la calidad e integridad de los datos 
producidos en determinados tipos de investigaciones o estudios 
Calidad: Conjunto de propiedades y características de un producto o servicio que 
le confieren su aptitud para satisfacer unas necesidades explicitas o implícitas” 
(NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
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Calificación de la instalación: Establece que el equipo es recibido de acuerdo a 
las especificaciones en el diseño, que esta propiamente instalado, en el ambiente 
adecuado, 
para uso y operación del instrumento. 
 
Calificación de la operación: Es el proceso que demuestra que un equipo 
funcionará de acuerdo a las especificaciones operacionales en el ambiente 
seleccionado. Se deberá de probar cada módulo de manera individual cuando cada 
módulo afecte el resultado del análisis. 
 
Calificación del desempeño: Es el proceso que demuestra que un equipo se 
desempeña de manera consiste de acuerdoa especificaciones apropiadas durante 
el uso rutinario. 
 
Calificación del diseño (CD): Define las especificaciones funcionales y 
operacionales de un instrumento. Deberá asegurar que el instrumento tiene todas 
las funciones y criterios de desempeño necesarias para cumplir con la aplicación 
para la cual se va a destinar y asegurar el éxito para cumplir con la expectativas 
de la aplicación y de negocio. 
 
Cliente: Destinatario de un producto provisto por el proveedor (NMX-EC-17025-
IMNC-2006). 
Control de calidad: Conjunto de técnicas y actividades de carácter operativo, 
utilizadas para verificar los requerimientos relativos a la calidad del producto o 
servicio” (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
Control de cambios: evaluación y documentación de cualquier cambio que 
pudiera impactar en la calidad del producto. 
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Criterio de aceptación: especificaciones, estándares o intervalos predefinidos 
que deben cumplirse bajo condiciones de prueba preestablecidas. 
Especificación Documento que establece los requisitos que un producto o servicio 
debe cumplir. (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
Especificidad: Habilidad de evaluar inequívocamente el analito en presencia de 
componentes que se puede esperar que estén presentes. Típicamente éstos 
pueden incluir impurezas, productos de degradación, la matriz, entre otros. 
Exactitud: (veracidad): Expresa la cercanía entre el valor que es aceptado, sea 
como un valor convencional verdadero (material de referencia interno de la firma), 
sea como un valor de referencia aceptado (material de referencia certificado o 
estándar de una farmacopea) y el valor encontrado (valor promedio) obtenido al 
aplicar el procedimiento de análisis un cierto número de veces. 
 
Gestión de la Calidad: Actividades de la función empresaria que determinan la 
política de la calidad, los objetivos y las responsabilidades, y que se implementan 
a través de la planificación de la calidad, el control de la calidad, el aseguramiento 
de la calidad y el mejoramiento de la calidad, en el marco del sistema de la calidad 
(NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
Intervalo de linealidad: Ámbito entre la menor y la mayor concentración de analito 
en la muestra (incluyendo éstas concentraciones) para las cuales se ha 
demostrado que el procedimiento analítico tiene el nivel adecuado de precisión, 
exactitud y linealidad. 
 
Libros oficiales: Los aprobados mediante el decreto 28466-S y sus 
modificaciones. 
 
Límite de cuantificación: Cantidad más pequeña del analito en una muestra que 
puede ser cuantitativamente determinada con exactitud aceptable. Es un 
parámetro del análisis cuantitativo para niveles bajos de compuestos en matrices 
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de muestra y se usa particularmente para impurezas y productos de degradación. 
Se expresa como concentración del analito. 
Límite de detección. Valor medido, obtenido mediante un procedimiento de 
medición dado, con una probabilidad β de declarar erróneamente la ausencia de 
un constituyente en un material, dada una probabilidad α de declarar erróneamente 
su presencia. 
NOTA 1 La IUPAC recomienda por defecto los valores de α y β iguales a 
0,05.NOTA 2 En inglés algunas veces se usa la abreviatura LOD.NOTA 3 No debe 
utilizarse el término “sensibilidad” en lugar de “límite de detección”. 
Vocabulario Internacional de Metrología. Conceptos Fundamentales y generales, 
y términos asociados (VIM), JCGM 200:2008, pp. 67. 
 
Linealidad: Habilidad (dentro de un ámbito dado) del procedimiento analítico de 
obtener resultados de prueba que sean directamente proporcionales a la 
concentración de analito en la muestra. 
 
Manual de la Calidad: Documento que enuncia la política de la calidad y que 
describe el sistema de la calidad de un organismo. (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
 
Material de referencia (patrón terciario): Material o sustancia, en el cual una o 
más de sus propiedades están suficientemente bien establecidas para que sea 
usado en la calibración de un aparato, la estimación de un método de medición o 
para asignar valores a los materiales. 
Material de referencia certificado (patrón secundario): Material en el que los 
valores de una o más de sus propiedades están certificados por un procedimiento 
técnicamente validado, bien sea que este acompañado de, o pueda obtenerse, un 
certificado u otra documentación emitida por un ente certificador. 
Material estándar de referencia (patrón primario): Material emitido por la 
oficina Nacional de Normas de Estados Unidos (U.S National Bureau of Standars) 
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cuyo nombre fue cambiado recientemente a Instituto Nacional para Normas y 
Tecnología (National Institute for Standards and Technology, NIST.) 
 
Método analítico: Adaptación específica de una técnica analítica para un 
propósito de medición seleccionado. 
 
Organización Responsabilidades, autoridades y relaciones, ordenadas según una 
estructura jerárquica, a través de la cual un organismo cumple sus funciones. 
(NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
Parámetros de desempeño analítico: Características de validación que 
necesitan ser evaluadas y que típicamente corresponden a la siguiente lista: 
exactitud, precisión, especificidad, límite de detección, límite de Cuantificación, 
linealidad, intervalo de linealidad y robustez. 
 
Plan de la Calidad Documento que enuncia las prácticas, los medios y la 
secuencia de las actividades ligadas a la calidad, ya sean específicas de un 
producto, proyecto o contrato particular (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
Política de la Calidad Orientaciones y objetivos generales de organismos 
concernientes a la calidad, expresados formalmente por el nivel más alto de 
dirección. (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
 
Precisión intermedia: Precisión obtenida dentro del laboratorio por diferentes 
analistas, diferentes equipos, días distintos con la misma muestra homogénea. 
 
Precisión: Expresa la cercanía de coincidencia (grado de dispersión) entre una 
serie de mediciones obtenidas de múltiples muestreos de una misma muestra 
homogénea bajo condiciones establecidas. Puede considerarse a tres niveles: 
repetitividad, precisión intermedia y reproducibilidad. Debe determinarse utilizando 
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muestras originales y homogéneas. Sin embargo, si no es posible obtener una 
muestra homogénea puede ser determinada usando muestras preparadas o una 
disolución de la muestra. 
 
Prestación del Servicio Aquellas actividades del proveedor que son necesarias 
para proveer el servicio. (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
 
Procedimiento analítico oficial: Procedimiento analítico estandarizado contenido 
en una farmacopea oficial o libros oficiales. Se les supone validados y los 
laboratorios que los utilizan no están obligados a validar la exactitud de los mismos, 
solamente demostrar su aptitud para aplicarlos, validando la linealidad y precisión 
del sistema. 
 
Procedimiento analítico: Forma en que se realiza el análisis. Debe describir en 
detalle los pasos necesarios para realizar cada prueba analítica. Puede incluir, 
pero no necesariamente los siguientes conocimientos: características de la 
muestra, preparación de los estándares de referencia y reactivos, uso de los 
aparatos o instrumentos, generación de la curva de calibración, uso de fórmulas 
para los cálculos. 
 
Proceso Conjunto de recursos y actividades relacionadas entre sí que transforman 
elementos entrantes (input) en elementos salientes (output). (NMX-EC-17025-
IMNC-2006). 
 
Producto Resultado de actividades o de procesos. (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
 
Queja. Expresión de insatisfacción, diferente de la apelación, presentada por una 
persona u organización a un organismo de evaluación de la conformidad o a un 
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organismo de acreditación, relacionada con las actividades de dicho organismo, 
para la que se espera una respuesta.(Evaluación de la Conformidad –Vocabulario 
y principios generales-, ISO/IEC 17000:2004, Institutode Normas Técnicas, pág. 
13.). 
 
Registro Documento que provee evidencias objetivas de las actividades 
efectuadas o de los resultados obtenidos. (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
 
Repetibilidad (repetitividad): Precisión obtenida bajo las mismas condiciones de 
operación en un intervalo corto de tiempo (mismo día), por un mismo analista, en 
la misma muestra homogénea y en el mismo equipo. 
 
Reproducibilidad: Expresa la precisión entre laboratorios como resultado de 
estudios interlaboratoriales diseñados para estandarizar la metodología. 
 
Robustez: Medida de la capacidad de un procedimiento analítico de permanecer 
inafectado por pequeñas pero deliberadas variaciones en los parámetros del 
método y provee una indicación de su fiabilidad en condiciones de uso normales. 
Selectividad: Describe la habilidad de un procedimiento analítico para 
diferenciar entre varias sustancias en la muestra y es aplicable a métodos en los 
que dos o más componentes son separados y cuantificados en una matriz 
compleja. 
 
Servicio: Resultado generado por actividades en la interfaz entre el proveedor y 
el cliente, y por actividades internas del proveedor, con el fin de responder a las 
necesidades del cliente (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
 
Sesgo: Se usa en el sentido de exactitud de un promedio a largo plazo (valor 
esperado) de una serie de promedios. Es la diferencia en el valor esperado 
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(teóricamente igual al promedio de un número infinito de valores individuales 
independientes) del valor verdadero, correcto o asumido. 
 
Sistema analítico: Está compuesto por: equipos, reactivos, materiales, 
documentos, patrones, materiales de referencia, analistas y variables operativas, 
que se utilizan en un método de análisis. 
 
Sistema de la Calidad Organización, procedimientos, procesos y recursos 
necesarios para implementar la gestión de la calidad (NMX-EC-17025-IMNC-
2006). 
 
Técnica analítica: Principio científico que se ha encontrado útil para proveer 
información sobre la composición de un determinado producto o material. 
 
Trazabilidad Aptitud de reconstruir la historia, la utilización o la localización de un 
producto por medio de identificaciones registradas (NMX-EC-17025-IMNC-2006). 
 
Validación de un procedimiento analítico: Procedimiento para establecer por 
medio de estudios laboratoriales una base de datos que demuestren 
científicamente que un método analítico tiene las características de desempeño 
que son adecuadas para cumplir los requerimientos de las aplicaciones analíticas 
pretendidas. Implica la demostración de la determinación de las fuentes de 
variabilidad y del error sistemático y al azar de un procedimiento, no solo dentro de 
la calibración sino en el análisis de muestras reales. 
 
Validación Confirmación por examen y aporte de evidencias objetivas de que los 
requisitos particulares para un uso específico previsto han sido satisfechos. 
3.0 SISTEMA DE CALIDAD 
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Calidad 
No es fácil dar una definición general de calidad porque dependiendo del contexto 
en el que se aplica, se presentan definiciones diferentes, incluso en un mismo 
ámbito. 
Dado que la norma ISO 9000 está orientada a la definición de los procesos, la 
definición de calidad se puede entender cómo. 
Grado en que un conjunto de rasgos diferenciadores inherentes a un proceso 
cumple con unas necesidades o expectativas establecidas generalmente implícitas 
u obligatorias. 
Conjunto de propiedades y características de un producto o servicio que le 
confieren su aptitud para satisfacer unas necesidades explicitas o implícitas” 
(NMX-EC-17025-IMNC-2006) 
Sistema de Calidad 
Sistema para establecer la política y los objetivos de la calidad y para la 
consecución de dichos objetivos. 
Es decir es un vehículo para implantar la gestión de la calidad, estos sistemas 
permiten el establecimiento de la garantía o aseguramiento de la calidad, se 
reconocen internacionalmente varios sistemas de calidad relacionados con las 
norma internacionales, de acuerdo con esta definición el sistema de calidad esta 
formado por la estructura organizativa, los procedimientos, los procesos y los 
recursos necesarios para llevar a cabo la gestión de la calidad. Dicha gestión tiene 
por objeto alcanzar los objetivos definidos en la política de calidad. 
3.1 Características de un sistema de calidad 
Apropiado al tipo y volumen de las actividades de la organización 
Diseñado implantado y mantenido por la dirección del organismo 
Explicado entendido y aceptado por el personal 
Revisado periódicamente 
Estimular la mejora continua 
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Satisfacer los requerimientos legales normativos o contractuales 
El modelo ISO 9000 es aplicable a cualquier tipo de organización, el modelo ISO 
17025, específico para laboratorios de ensayo y calibración. Es obvio que los 
laboratorios de ensayo de ensayo y en particular los laboratorios analíticos, pueden 
optar por una certificación respecto a las normas de la serie ISO 9000, sin embargo 
dicha certificación no supondría el reconocimiento de la competencia técnica del 
laboratorio en su campo específico de actividad, la evaluación de dicha 
competencia técnica es el objetivo de la norma UNE-EN ISO/IEC 17025, Norma 
Voluntaria Mexicana NMX-EC-17025 IMNC 2006 (ISO-IEC 17025, mediante la 
cuál y motivo del presente trabajo. 
3.2 Organización e infraestructura de los laboratorios en los sistemas de calidad 
Las Buenas Prácticas de Laboratorio se definen como el Conjunto de reglas, 
procedimientos operativos y prácticas adecuadas para garantizar que los datos 
generados por los laboratorios de control de medicamentos sean confiables. 
La Norma Voluntaria Mexicana NMX-EC-17025 IMNC 2006 (ISO-IEC 17025), 
Requisitos Generales para la Competencia de los Laboratorios de Ensayo y 
calibración. La norma define en uno de sus objetivos, el establecimiento de un 
sistema de gestión de la calidad sin necesidad de reconocimiento externo, está 
estructurada en dos bloques: el apartado 4, Requisitos de gestión y 5, requisitos 
técnicos, los cuáles constituyen un modelo organizativo para el aseguramiento de 
la calidad y en especial en los laboratorios que realizan estudios por CLAR en la 
industria farmacéutica. En esta norma se plantean los lineamientos de cada uno 
de los apartados y se definen los diagramas de flujo para el mejor entendimiento 
de la forma en que se puede implementar un sistema de aseguramiento de la 
calidad. 
Nota: del 4.0 al 5.10 se respeta la numeración indicada en la NNX17025 
4.0 BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO 
REQUISITOS ADMINISTRATIVOS QUE SE REFIEREN AL SISTEMA DE 
CALIDAD. 
 
4.1 Organización: El laboratorio debe contar con personal para desempeñar sus 
tareas, incluidas implementación, mantenimiento y mejora del sistema de gestión, 
para identificar desvíos e iniciar acciones preventivas para dicha desviación. Debe 
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tener también políticas y procedimientos que aseguren la protección de la 
información (almacenamiento y transmisión electrónica). Designar personal 
substituto para el personal directivo clave. 
4.2 Sistema de calidad: el laboratorio debe implementar un sistema de gestión 
apropiado para el alcance de sus actividades. Documentar sus políticas, 
programas, procedimientos e instrucciones para asegurar la calidad de los 
resultados de los ensayos o calibraciones. La política de calidad debe incluir. 
El compromiso del laboratorio con la buena práctica profesional y con la calidad de 
sus ensayos durante el servicio a sus clientes; la declaración de la dirección con 
respecto al tipo de servicio ofrecido por el laboratorio; el propósito del sistema de 
gestión de calidad. La dirección debe proporcionar evidencias del compromiso con 
el desarrollo y la implementación del sistema de gestión y con mejorar 
continuamente su eficacia, así como comunicar a la organización la importanciade satisfacer los requisitos del cliente como los legales y reglamentarios. 
4.3 Control de los documentos: Especificar la clase de documentos que deben 
ser controlados, elaborar una lista maestra para evitar el uso de documentos 
obsoletos o no válidos, los documentos deben identificarse con elementos 
específicos. 
Los cambios a los documentos deben ser revisados y aprobados por quien realizó 
la revisión original. Las modificaciones deben estar claramente identificadas, 
firmadas y fechadas. Se deben establecer procedimientos para describir cómo se 
realizan y controlan los cambios en los documentos conservados en los sistemas 
informáticos. 
4.4 Revisión de solicitudes y ofertas y contratos: el laboratorio debe establecer 
y mantener procedimientos para la revisión de los pedidos, las ofertas y los 
contratos. Resolver las diferencias entre la solicitud y el contrato antes de iniciar el 
trabajo. 
Se deben conservar los registros de las revisiones, incluidas todas las 
modificaciones significativas. 
La revisión del contrato se repite cuando hay modificaciones después de haber 
iniciado los trabajos. 
 Página 22 
 
4.5 Subcontratación de ensayos y de calibraciones: encargar este trabajo a un 
subcontratista competente. 
El laboratorio es responsable frente al cliente del trabajo realizado por el 
subcontratista, excepto en el caso que el cliente o una autoridad reglamentaria 
especifique el subcontratista a utilizar. 
Mantener un registro de todos los subcontratistas que utiliza. 
4.6 Adquisición de servicios y de suministros 
El laboratorio debe tener un procedimiento para la selección, recepción, 
almacenamiento y la compra de los servicios y suministros que utiliza y que afectan 
a la calidad de los ensayos o de las calibraciones. 
El laboratorio debe asegurarse de que los suministros no sean utilizados hasta que 
no hayan sido inspeccionados o verificados. Evaluar a los proveedores de los 
productos consumibles, suministros y servicios críticos que afectan a la calidad de 
los ensayos y de las calibraciones, y mantener los registros de las evaluaciones. 
4.7 Servicio al cliente: el laboratorio debe cooperar con los clientes para aclarar 
sus solicitudes. 
El laboratorio puede permitir al cliente acceso razonable a las zonas pertinentes 
del laboratorio para presenciar los ensayos o calibraciones efectuados para el 
cliente; 
4.8 Quejas 
El laboratorio debe tener una política y un procedimiento para la resolución de las 
quejas y mantener los registros. 
4.9 Control de trabajos de ensayos o de calibraciones no conformes 
El laboratorio debe tener procedimientos que se deben implementar cuando 
existen no conformidades, evaluara importancia del trabajo no conforme. 
Cuando la evaluación indique que el trabajo no conforme podría volver a ocurrir o 
existan dudas sobre el cumplimiento de las operaciones del laboratorio con sus 
propias políticas y procedimientos, se deben seguir rápidamente los 
procedimientos de acciones correctivas. 
4.10 Acción correctiva 
El laboratorio debe establecer una política y un procedimiento para la 
implementación de acciones correctivas, que incluya la investigación para 
determinar la o las causas raíz del problema y la investigación para determinar las 
causas. 
 Página 23 
 
Las acciones correctivas deben corresponder a la magnitud del problema. 
 El laboratorio debe realizar el seguimiento de los resultados para asegurarse de 
la eficacia de las acciones correctivas implementadas. 
4.11 Acciones preventiva: Iidentificar las potenciales fuentes de no 
conformidades. 
Elaborar procedimientos con aplicación de controles para asegurar la efectividad. 
4.12 Control de los registros: el laboratorio debe establecer procedimientos para 
la identificación, acceso, y mantenimiento de registros técnicos y administrativos. 
Y tener procedimientos para el respaldo de registros almacenados 
electrónicamente. Contar con requisitos específicos para el control de registros 
técnicos y para corregir errores durante el registro. 
4.13 Auditorías internas 
El laboratorio debe efectuar periódicamente auditorías internas de sus actividades 
para verificar que las operaciones continúan cumpliendo con los requisitos del 
sistema de calidad, estas deben dirigirse a todos los elementos del sistema de 
calidad, incluyendo las actividades de ensayo y de preferencia con personal 
independiente de la actividad a ser auditada. 
También se registran y verifican las acciones correctivas aplicadas y se le da 
seguimiento a la auditoría. 
4.14 Revisiones por la dirección: la dirección del laboratorio debe efectuar 
periódicamente una revisión del sistema de calidad. 
Se deben registrar los hallazgos de las revisiones por la dirección y las acciones 
que surjan de ellos. 
 
5.0 REQUISITOS TECNICOS 
 
Se refieren a los factores que determinan el desarrollo de las actividades de 
laboratorio y a los factores que deben tomarse en cuenta para desarrollar métodos 
y procedimientos relacionados con la competencia del laboratori 
5.2 Personal 
 Página 24 
 
La dirección del laboratorio debe asegurar la competencia de todos los que operan 
equipos específicos, realizan ensayos y evalúan los resultados. 
Identificar políticas y procedimientos para identificar las necesidades de 
capacitación. 
Autorizar al personal específico para tipos de actividades especiales. 
5.3 Instalaciones y condiciones ambientales 
Las condiciones ambientales no deben afectar de forma negativa la calidad de los 
servicios, en caso de que estas comprometan los resultados, se deben detener las 
actividades. 
En aquellos casos en los que el laboratorio necesite utilizar equipos que estén 
fuera de su control permanente, debe asegurarse de que se cumplan los requisitos 
de esta Norma Internacional. 
5.4 Métodos de ensayo y calibración 
Los procedimientos de ensayo y o calibración deben incluir, las instrucciones para 
uso y operación de equipo y en su caso, satisfacer las necesidades del cliente 
utilizando métodos oficiales, normas, publicaciones científicas. Cuando se requiera 
de métodos no considerados por un método normalizado, validar estos métodos 
 
 Los parámetros obtenidos de la validación, deben ser relevantes con las 
necesidades del cliente. Cualquier laboratorio que realice calibraciones propias, 
debe tener un procedimiento para el cálculo de la incertidumbre· Los laboratorios 
de ensayo también deben calcular la incertidumbre. 
Si se emplean computadoras, deben existir requisitos explícitos para el 
procesamiento de la información. 
 
5.5 Equipo 
Antes de ser puesto en servicio, el equipo utilizado debe ser calibrado o verificado 
de acuerdo a los requisitos específicos para el registro de cada uno y su software. 
Para equipos que presentan resultados dudosos, examinar el efecto de las 
desviaciones e iniciar la aplicación del procedimiento, para control de trabajo no 
conforme, proteger el equipo de ajustes que puedan invalidar los resultados. (Ver 
calificación de sistemas cromatográficos) 
 
5.6 Trazabilidad de la medición 
 Página 25 
 
Todos los equipos utilizados para los ensayos o las calibraciones, incluidos los 
equipos para mediciones auxiliares (por ejemplo, de las condiciones ambientales) 
deben ser calibrados. 
Para los laboratorios de calibración, el programa de calibración de los equipos 
debe ser diseñado y operado de modo que se asegure que las calibraciones y las 
mediciones hechas por el laboratorio sean trazables al Sistema Internacional de 
Unidades (SI).Un laboratorio de calibración establece la trazabilidad de sus propios 
patrones de medición e instrumentos de medición al sistema SI por medio de una 
cadena ininterrumpida de calibraciones o de comparaciones que los vinculen a los 
pertinentes patrones primarios de las unidades de medida SI. La vinculación a las 
unidades SI se puede lograr por referencia a los patrones de medición nacionales. 
Los patronesde medición nacionales pueden ser patrones primarios, que son 
realizaciones primarias de las unidades SI o representaciones acordadas de las 
unidades SI, basadas en constantes físicas fundamentales, o pueden ser patrones 
secundarios, que son patrones calibrados por otro instituto nacional de metrología. 
Cuando se utilicen servicios de calibración externos, se debe asegurar la trazabilidad 
de la medición mediante el uso de servicios de calibración provistos por laboratorios 
que puedan demostrar su competencia y su capacidad de medición y trazabilidad. 
Los certificados de calibración emitidos por estos laboratorios deben contener los 
resultados de la medición, incluida la incertidumbre de la medición o una declaración 
sobre la conformidad con una especificación metrológica identificada 
Los patrones de referencia deben ser calibrados por un organismo que pueda 
proveer la trazabilidad y ser utilizados sólo para la calibración y para ningún otro 
propósito: 
Cada vez que sea posible se debe establecer la trazabilidad de los materiales de 
referencia a las unidades de medida SI o a materiales de referencia certificados. 
Los materiales de referencia internos deben ser verificados en la medida que sea 
técnica y económicamente posible. 
 
 
 
 Página 26 
 
5.7 Muestreo 
Siempre que sea razonable, utilizar planes de muestreo basados en métodos 
estadísticos apropiados. 
Registrar cualquier desviación que el cliente solicite. 
Requisitos específicos para los registros durante el muestreo. 
5.8 Manejo y transporte de los elementos de ensayo y calibración 
Elaborar procedimientos para el manejo y transporte de los elementos de ensayo 
y calibración durante todo el proceso. 
Contar con un sistema para identificar los elementos. 
5.9 Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayo y de calibración 
El laboratorio debe tener procedimientos de control de la calidad para realizar el 
seguimiento de la validez de los ensayos y las calibraciones llevados a cabo. Los 
datos resultantes deben ser registrados en forma tal que se puedan detectar las 
tendencias y, cuando sea posible, se deben aplicar técnicas estadísticas para la 
revisión de los resultados. Dicho seguimiento debe ser planificado y revisado y 
puede incluir, entre otros, los elementos siguientes: 
a) el uso regular de materiales de referencia certificados o un control de la calidad 
interno utilizando materiales de referencia secundarios; 
b) la participación en comparaciones interlaboratorios o programas de ensayos 
de aptitud; 
c) la repetición de ensayos o calibraciones utilizando el mismo método o métodos 
diferentes; 
d) la repetición del ensayo o de la calibración de los objetos retenidos; 
e) la correlación de los resultados para diferentes características de un ítem. 
Los datos de control de la calidad deben ser analizados y, si no satisfacen los 
criterios predefinidos, se deben tomar las acciones planificadas para corregir el 
problema y evitar consignar resultados incorrectos. 
 
5.10 Informe de resultados 
 Página 27 
 
Definir los elementos mínimos que deben contener los informes de ensayo y 
calibración y los elementos adicionales para los informes de ensayos y de 
calibración. Tomar en cuenta la incertidumbre de la medición para hacer cualquier 
declaración de conformidad. 
 
 
 
6.0 CALIFICACION DE SISTEMAS CROMATOGRAFICOS 
CALIFICACIÓN. 
Es la acción de evaluar y documentar que las cualidades o características de los 
sistemas, equipos e instalaciones funcionen correctamente y que se obtienen los 
resultados esperados. 
 
 Calificación de Diseño (CD).Es la evidencia documentada de que el diseño 
propuesto de las instalaciones, sistemas y equipo es conveniente para el 
propósito proyectado. 
 
 Calificación de la Instalación (CI). Es la evidencia documentada de que las 
instalaciones, sistemas y equipo; instalados o modificados, cumplen con el 
diseño aprobado y con las recomendaciones del fabricante. 
 
 Calificación de Operación (CO). Es la evidencia documentada de que las 
instalaciones, sistemas y equipos operan de acuerdo con los límites de 
operación especificados por el fabricante. 
 
6.1 MANUAL DE CALIFICACIÓN 
 
El proceso de calificación se lleva a cabo para asegurar que los sistemas 
cromatográficos operan de acuerdo a las Buenas Prácticas de Manufactura y de 
Laboratorio. Este proceso garantiza que los módulos del sistema cromatográfico 
por separado y en conjunto operan de la forma esperada en función de su 
linearidad, precisión y exactitud, y satisface los criterios de desempeño 
establecidos. Para el proceso de calificación, se emplea un manual que describe 
los procedimientos, se incluyen los formatos para el registro de los instrumentos 
 Página 28 
 
que componen el sistema, los resultados y la firma autógrafa de quiénes ejecutan 
la calificación 
La calificación puede realizarse, Pre-Uso, en el momento en que el equipo se 
instala o Post-Uso, posterior a la realización de un mantenimiento donde se 
reemplazan componentes (mayores) que afectan parámetros críticos de la 
operación del sistema. 
Pre instalación 
Se revisa que el lugar donde se instalará el sistema cumpla con los requerimientos 
para la instalación, así como que se cuente con las refacciones y manuales 
necesarios para realizar la instalación del sistema. 
Instalación física 
Se registran los números de serie de los instrumentos y las conexiones eléctricas 
de cada componente del sistema. Se elabora un reporte donde consta lo anterior 
con el nombre y la firma de la persona que llevo a cabo la instalación. 
 
Calificación de operación 
 Asegura que cada uno de los módulos por separado; bomba, inyector y detector, 
están operando de acuerdo a especificaciones de linealidad, precisión (de la 
inyección o velocidad de flujo) y exactitud, (exactitud de la longitud de onda en el 
detector). 
 Calificación del desempeño 
 Página 29 
 
Asegura que el desempeño completo del sistema, se lleva a cabo en el laboratorio 
analítico, bajo condiciones reales de operación, con un método bien caracterizado, 
en donde se precise la columna, fase móvil, y la muestra. . 
 
 
 
 
Proceso de calificación de instalación. 
 
Lineamientos de Re-Calificación 
Se califica el sistema cromatográfico cada 12 a 15 meses posteriores a la 
instalación o. 
Introducción 
Leer y entender la Introducción a la 
calificación de Sistemas Cromatográficos. 
Introducción 
Leer y entender la Introducción a la 
calificación de Sistemas Cromatográficos. 
Calificación de la Instalación 
Para cada instrumento del Sistema 
Cromatográfico, se completan los 
procedimientos y se llenan los formatos de la 
sección correspondiente. 
Procedimientos del Mantenimiento 
La sección de Procedimientos de 
Mantenimiento deben ser mantenidos en la 
Carpeta para acciones futuras de 
mantenimiento con el fin de: 
*Proporcionar un registro de los 
procedimientos de mantenimiento realizados 
posteriormente. 
*Disponer de un procedimiento de operación 
normalizado para los mantenimientos. 
Procedimientos del Mantenimiento 
Para cada módulo del sistema cromatográfico 
se realizan los procedimientos y se registran 
los resultados en los formatos 
correspondientes. 
Calificación de la Operación 
Para cada módulo del sistema cromatográfico 
se realizan los procedimientos y se registran 
los resultados en los formatos 
correspondientes. 
Calificación de la Operación 
Para cada módulo del sistema cromatográfico 
se realizan los procedimientos y se registran los 
resultados en los formatos correspondientes. 
Calificación del Desempeño 
Para el sistema cromatográfico completo se 
realizan los procedimientos y se registran los 
resultados en los formatos correspondientes. 
Calificación del Desempeño 
Para el sistema cromatográfico completo se 
realizan los procedimientos y se registran los 
resultados en los formatos correspondientes. 
Calificación Pre-Uso CalificaciónPost-Uso 
 Página 30 
 
se califica únicamente el módulo específico cada vez que un componente mayor 
se cambie 
Se verifica la calificación del sistema cromatográfico al realizar una reparación 
mayor. No es necesario volver a verificar la calificación del sistema al reemplazar 
partes menores, mantenimientos de rutina o desgaste normal 
La tabla 1-1 es una guía para determinar en qué consiste una reparación menor o 
mayor. 
 Página 31 
 
 
 
 
 
Formatos de Calificación 
 Página 32 
 
El proceso de calificación requiere que el ejecutante y el que revisa complete los 
formatos del manual de calificación para: 
Identificar y verificar las credenciales del ejecutante y revisor que verificarán el 
sistema cromatográfico 
Verificar que el ejecutante y revisor entienden la información presentada 
Identificar los componentes del sistema que serán calificados 
Registrar los datos y resultados de las pruebas 
Verificar la terminación exitosa de los procedimientos 
Verificar la aprobación de los procedimientos de calificación por el propietario y 
personal designado por el propietario 
Llenado de los Formatos 
Hacer todos los ingresos de información con tinta permanente negra o azul 
Completar todos los espacios del formato, con excepción de las secciones 
opcionales de comentarios 
Colocar iniciales o firma y fecha en el formato basado en los procedimientos 
estándar de operación para verificar la ejecución de cada procedimiento aplicable 
en el proceso de calificación 
Documentar cualquier desviación del protocolo definido y resultado esperado. La 
aprobación de desviaciones al protocolo por personal designado por el propietario 
(revisor) debe ser documentada previo a la firma de aprobación final. 
Escribir comentarios adicionales en una página de adición cuando no haya 
espacio suficiente en un formato para recibir todos los comentarios. Entonces: 
o Numerar las paginas alfanuméricamente (por ejemplo: 16A, 16B) 
 Página 33 
 
o Colocar las iniciales y fecha en las adiciones 
o Insertar la página después de la página original 
Corrigiendo registros cortos 
Para corregir registros cortos (tales como una sola palabra o el resultado de una 
prueba) en una forma: 
1. Dibujar una línea diagonal, de la esquina inferior izquierda a la esquina superior 
derecha, a lo largo de la información incorrecta. 
2. Escribir la corrección en la esquina superior derecha de la información original 
3. Colocar las iniciales y la fecha del cambio 
Corrigiendo registros largos 
Para corregir un registro largo o un bloque de información en el formato: 
1. Dibujar una línea diagonal, de la esquina inferior izquierda a la esquina superior 
derecha, a lo largo de la información incorrecta. 
2. Escribir la corrección en una página separada 
3. Numerar las paginas alfanuméricamente (por ejemplo: 16A, 16B) 
4. Colocar las iniciales y la fecha del cambio 
5. Insertar la página después de la página principal 
Identificando Elementos que no son Requeridos 
Estos elementos que no son requeridos pueden ser un procedimiento o parte de 
un procedimiento y/o parte de un formato. Estos deben ser marcados 
cuidadosamente de acuerdo con alguna de las siguientes instrucciones para hacer 
evidente que el elemento es innecesario y que no fue olvidado u omitido. 
* Dibujar una línea diagonal, de la esquina inferior izquierda a la esquina superior 
derecha, a lo largo del elemento que no es necesario. Se recomienda colocar las 
iniciales y la fecha de la cancelación. Incluir comentarios arriba de la línea o en el 
formato para registrar porque el elemento no es necesario. 
 Página 34 
 
Aprobación del Protocolo de Calificación del Sistema Cromatográfico 
Para aprobar todos los protocolos que serán empleados en la calificación de la 
instalación, operación y mantenimiento del sistema cromatográfico, el responsable 
del instrumento debe: 
1. Revisar todos los protocolos de calificación del manual de calificación 
2. Completar el Formato 1-1. En caso de que este formato se 
encuentre duplicado en el resto del manual de calificación, podrán 
indicar que “las firmas se encuentran en la Parte 1” en la sección de 
comentarios e invalidar la sección de firmas como se describe en la 
sección. 
FORMATO 1-1 Aprobaciòn de Protocolo de Calificacion del Sistema Cromatografico. 
 
Calificación de operación 
 Página 35 
 
Se realizan una serie de mediciones, tales como las que se mencionarán 
posteriormente, por tres días consecutivos para demostrar que el sistema es capaz 
de operar consistentemente, de acuerdo a las especificaciones de diseño 
establecidas. 
Las mediciones realizadas son: 
Verificación del Diagnóstico de Encendido y Rutinas de Calibración del Sistema de 
Separación 
Preparación del Sistema de Separación W-2690/2695 para las Pruebas de 
Calificación 
Limpieza del Sistema 
Prueba del Carrousel de Muestras 
Prueba de Exactitud del Rango de Flujo 
Prueba de la Válvula Proporcionadora de Gradiente 
Prueba de Exactitud de la Toma de Muestra 
Prueba de Exactitud de la Temperatura de la Unidad de 
Enfriamiento/Calentamiento de Muestra 
Prueba de Exactitud de la Temperatura del Horno de Columna (Primera 
Generación) 
Prueba de Exactitud de la Temperatura del Sistema de Calentamiento o 
enfriamiento/Calentamiento de Columna (segunda generación) 
Todas estas pruebas deben registrarse de acuerdo a los procedimientos; e indicar 
las condiciones a las que se llevaron a cabo dichas pruebas. 
Formatos de Pre-Calificación 
Identificación del Ejecutante y Revisor 
 Página 36 
 
1.- Llene el formato 1-1 para identificar al Ejecutante y al Revisor, quien llevará 
cabo los procedimientos de Calificación 
Formato 1-1, Identificaciòn de los Ejecutante y Revisor. 
 
2.- Identificar el equipo a ser verificado. La identificación del fabricante (El 
número de revisión del fabricante) será mostrado sobre el Display del 
panel frontal del Detector de Longitud de Onda cuando la unidad es 
encendida 
3.- Llene el formato para documentar la información de calibración del 
Dispositivo de Medición /Prueba usado para Verificar la operación del 
Detector de Longitud de Onda 
 Página 37 
 
 
 
4.- Aviso de Seguridad de la Operación del Detector de Longitud de Onda 
 
Calificación de Instalación. 
Procedimientos Iniciales: 
Asegúrese que el Ejecutante y el Revisor han entendido la Calificación de Sistemas 
Cromatográficos, el proceso de Calificación así como sus fases, guías de 
reverificación, cómo usar el Manual de Trabajo y cómo llenar los formatos. 
Contar con el Manual de Trabajo de Calificación. 
 Página 38 
 
Para el llenado de Formatos tener disponible el Manual de Instalación del Sistema. 
 
Después de llenar cada parte del Manual de Calificación el Ejecutante debe: 
Registrar los resultados del procedimiento realizado en el formato correspondiente. 
Firmar y fechar el formato correspondiente. 
Asegurarse de que el Revisor designado por el propietario firme y ponga la fecha 
en el formato correspondiente. 
 
Formatos de Pre-calificación: 
Se identifican a los ejecutantes y Revisores a cargo de los procedimientos de 
calificación de la Instalación y se llena el formato indicado para su identificación. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Procedimientos de Calificación de la Instalación del Sistema Cromatográfico 
. 
 Página 39 
 
Identificación del Sistema Cromatográfico __________________________________________ 
Fabricante: 
 Modelo de los módulos Modelo, Versión Número de Serie 
 Computadora (CPU) 
 Sistema de Datos 
 Sistema de Separación (2690/2695) 
 Automuestreador 
 Módulo Bus LAC/E 
 Módulo LAC/CE 
 Módulo Bus SAT/IN 
 Sistema de Bombeo 1 (600) 
 Controlador de Sistema de Bombeo 
(600) 
 
 Módulo de control de bomba (PCM) 
 Bomba 1 (510, 515, 590, 1515, 1525) 
 Bomba 2 (510, 515, 590, 1515, 1525) 
 DegasificadorDetector 1 
 Detector 2 
 
Lugar de Instalación 
 
Realizó / / 
 Firma Fecha dd/mm/aaaa 
Revisó / / 
 Firma Fecha dd/mm/aaaa 
Formato de Identificación de los Componentes del Sistema Cromatográfico 
Procedimientos de Calificación de la Instalación del Sistema Cromatográfico: 
Inspeccionar los tipos de conexiones entre cada dispositivo del Sistema 
Cromatográfico. 
 
 
 Página 40 
 
 
Dispositivos conectados 
Conexión Iniciales del 
Ejecutante 
Bomba, Automuestreador , Detector, 
Degasificador y Horno de Columna 
Tubería 
 
Software, Sistema de Cómputo,Bomba, 
Automuestreador, Detector, Horno de Columna 
Eléctrica 
 
Software de Control, Bomba, 
Automuestreador, Detector y Horno de 
Columna 
Comunicación 
Inter-módulos 
 
Comentarios 
Realizó Firma Fecha 
Revisó Firma Fecha 
 
Formato de identificación de procedimientos de calificación de la instalación del 
sistema cromatogáfico. 
 
Certificación de la Calificación de la Instalación del Sistema Cromatográfico: 
Llenado del formato para Certificar que los procedimientos de calificación del 
mantenimiento preventivo se han llevado a cabo conforme al Manual de Trabajo. 
 
 
 Iniciales del 
ejecutante 
Sección 1.2 Llenado de formato de Pre-calificación de instalación 
Sección 2.1 Llenado de procedimientos de de Calificación de Instalación del Sistema 
Cromatográfico 
Comentarios__________________________________________________ 
Realizó ____________________________________________________ 
 Firma Fecha 
Revisó ____________________________________________________ 
 Firma Fecha 
 
 
Formato de Certificación de la Calificación de la Instalación del Sistema 
Cromatográfico 
 Página 41 
 
 
Calificación del Desempeño: 
El objetivo es documentar y avalar el funcionamiento Sistema Cromatográfico. Los 
criterios de aceptación de las pruebas de desempeño están de acuerdo a las 
especificaciones descritas por el fabricante. 
El Manual de Calificación del Desempeño está diseñado para personal entrenado 
y calificado, quienes verificaran que el Sistema opera bajo las especificaciones 
establecidas. 
Los procedimientos deben realizarse después de que los protocolos de Calificación 
de la operación de los módulos se completen ó cuando se reemplaza un 
componente mayor del Sistema, el ejecutante registra los resultados del 
procedimiento realizado en el formato correspondiente, firma y fecha el formato 
correspondiente y solicita la firma del responsable del laboratorio. El ejecutante 
debe seguir las buenas prácticas de laboratorio. 
Términos y condiciones 
La letra usada, el texto en letra negrita se utiliza para puntualizar las entradas que 
tienen que ser hechas por el ejecutante, la fuente Itálica indica advertencia, 
precaución o aviso al ejecutante para que preste atención antes del proceder. 
Si Existen resultados fuera de Especificación, el Ejecutante debe seguir en 
procedimiento establecido en el Manual de Trabajo. 
Formatos de Pre-calificación, se debe identificar a Ejecutantes y Revisores de los 
procedimientos de Calificación del Desempeño del Sistema Cromatográfico y 
llenado del formato. 
Identificación del Sistema Cromatográfico, el Sistema debe ser verificado y 
completar el formato con el número de revisión del fabricante, mostrado sobre el 
Display del panel frontal de los módulos al ser encendidos, y la asignación interna 
 Página 42 
 
de la empresa indicándose en el renglón de Identificación de Sistema 
Cromatográfico. 
Llenar el formato con la información de Equipo y Materiales Requeridos para la 
Calificación del Desempeño, documentar la información de calibración de los 
Dispositivos de Medición ó Materiales de Prueba usados para Verificar el 
Desempeño del Sistema Cromatográfico. 
 
 
 
Dispositivo de Prueba Número de 
Serie 
Datos del peso y 
calibración 
Datos del 
vencimiento de la 
siguiente 
calibración 
Comentarios__________________________________________________ 
Realizó ____________________________________________________ 
 Firma Fecha 
Revisó ____________________________________________________ 
 Firma Fecha 
 
 
Formato de Información de Equipo y Materiales Requeridos para la Calificación del 
Desempeño 
 
 
Preparación del Sistema Cromatográfico para las Pruebas de Calificación del 
Desempeño: 
 Página 43 
 
Limpieza del Sistema Cromatográfico. Se debe contar con los procedimientos para lavar 
las tuberías conductoras del sistema, para la preparación de la fase móvil. Purgar y 
asegurase que hay flujo constante en las líneas. En sistemas binarios, ternarios ó 
cuaternarios la mezcla de los disolventes que componen la fase móvil puede ser realizada 
por el sistema de bombeo. Se emplea un sistema de desgasificación en línea, flujo de un 
gas inerte y seco, Nitrógeno ó Helio a través del disolvente, sonicar y aplicar vacio. 
Se emplea un Software cromatográfico, y se registran la velocidad de flujo, fase móvil, 
temperatura ambiente, el volumen de inyección el tiempo de corrida y el detector. 
 
 
 
Comentarios Nombre y firma del revisor (responsable) 
Realizo, firma y fecha Firma y fecha 
Formato de Preparación del Sistema Cromatográfico para la Pruebas de Calificación del 
Desempeño 
 
Pruebas de Calificación de Desempeño del Sistema Cromatográfico 
1.0 Pruebas de Resolución Cromatográfica. Dos inyecciones de prueba de la solución de 
calificación del sistema, para verificar fase móvil adecuada y desempeño adecuado de la 
columna: 
o Acondicionamiento del sistema. 
o Equilibrar el sistema a una velocidad de flujo. 
o Colocar la Solución de calificación del sistema 
o Realizar dos inyecciones de solución de Calificación del Sistema 
o Obtener el cromatograma, integrando y verificar que los picos cumplan con 
los parámetros de adaptación del sistema indicados en el formato, las áreas 
 Página 44 
 
y tiempos de retención de los picos de ambas inyecciones sean similares 
entre sí. 
o Completar el formato y anexarlo a los reportes. 
o Asegurarse de la reproducibilidad para proceder con la Calificación del 
Desempeño. 
 
Registrar los resultados obtenidos para la cafeína (Pico # 3) 
Parámetro 
Valores 
medidos 
para Cafeína 
Valores 
Especificados 
Resultado 
Pasa Falla 
Eficiencia USP 
(Tangentes ó Altura 
media) ≥ 3000 Platos teóricos 
Resolución antes del pico ≥ 2 
Resolución después del 
pico ≥ 2 
Tiempo de Retención 4 a 5.5 Minutos 
Comentarios ____________________________________________________________ 
Realizó ____________________________________________________ 
 Firma Fecha 
Revisó ____________________________________________________ 
 Firma Fecha 
 
Formato de Registro de Resultados de la Prueba de Adecuabilidad del Sistema 
Cromatográfico. 
2.0 Prueba de Reproducibilidad y Linealidad del Sistema Cromatográfico. Prueba con seis 
inyecciones consecutivas de la Solución de Calificación del sistema cromatográfico 
con el fin de comprobar la Reproducibilidad del Sistema y calcular la linealidad. 
o Crear una secuencia de inyecciones. 
o Salvar la secuencia.o Correr la secuencia. 
 Página 45 
 
o Reprocesar los resultados. 
o Registrar los promedios de los Tiempos de retención en el Formato. 
o Con ayuda del software, realizar los cálculos.. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Certificación de la Calificación del Desempeño del Sistema Cromatográfico: 
Llenar el formato para verificar que los procedimientos de calificación del desempeño del 
sistema cromatográfico se llevaron a cabo conforme al manual de trabajo. 
 
Iniciales del 
Ejecutante 
Sección 1.2 Llenado de Formatos de Pre-Calificación 
 
 Página 46 
 
Sección 2.1 Preparación del Sistema Cromatográfico para la Pruebas de Calificación 
del Desempeño 
 
Sección 2.2 Pruebas de Calificación de Desempeño del Sistema Cromatográfico 
Sección 2.2.1 Pruebas de Resolución Cromatográfica 
 
Sección 2.2.2 Prueba de Reproducibilidad y Linealidad del sistema Cromatográfico 
 
 
Comentarios 
 
 
 
Realizó / / 
 Firma Fecha dd/mm/aaaa 
 
Revisó / / 
 Firma Fecha dd/mm/aaaa 
 
 
Formato de Certificación de la Calificación del Desempeño del Sistema 
Cromatográfico 
 
Aprobación final: 
Para certificar que los responsables han revisado la documentación completa, los 
protocolos de calificación del sistema cromatográfico y para confirmar la adecuada 
ejecución de la Calificación del sistema cromatográfico.se llena el siguiente 
formato: 
Nosotros, los responsables, hemos revisado los protocolo de Calificación del Sistema y por nuestro 
conocimiento, creemos que estos representan un exacto registro de la Calificación de la Instalación, 
Mantenimiento, Operación y/o Desempeño del Sistema Cromatográfico siendo comisionado para su uso 
por: 
 Página 47 
 
Nombre de la Compañía: 
 
Ejecución y Aprobación 
 
 Si No No Aplica 
Fecha 
Calificación de 
Instalación 
 
Calificación de 
Mantenimiento 
 
Calificación de 
Operación 
 
 
Calificación de 
Desempeño 
 
 
 
Cualquier desviación de los procedimientos recomendados han sido identificados en las áreas de 
comentarios y han sido aprobados por cualquier persona responsable. 
 
Comentarios 
 
 
 
Responsable 
 Nombre y Firma 
 
Cargo / / 
 Persona designada por el Propietario Fecha dd/mm/aaaa 
 
Formato de Aprobación Final Calificación del Sistema 
 
6.2 PROGRAMA DE CALIFICACIÓN 
Cada laboratorio debe establecer un calendario para el mantenimiento y 
calificación de los instrumentos de acuerdo a su experiencia, en función 
de los reactivos empleados, la frecuencia de uso, la rotación de personal 
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y en comunicación con el fabricante del equipo, se establecerán periodos 
anuales o bianuales. 
7.0 VALIDACIÓN DE PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS 
Todos los métodos utilizados para el desarrollo de fármacos en medicamentos y 
para la determinación de su calidad tienen que ser validados. Los parámetros 
ejecutados a través de la validación de métodos están definidos en la FEUM, en 
las guías ICH, FDA, la USP, y son: especificidad o selectividad, precisión 
(receptibilidad, precisión intermedia, reproducibilidad o robustez), exactitud, 
intervalo lineal, límite de detección, límite de cuantificación y robustez. La 
validación de un procedimiento analítico se realiza para establecer por medio de 
estudios de laboratorio, una base de datos que demuestren científicamente que un 
método analítico tiene las características de desempeño que son adecuadas para 
cumplir los requerimientos de las aplicaciones analíticas pretendidas. 
Exactitud 
Comparación con un método oficial, validado o estandarizado: 
Verificación 
La muestra debe ser analizada, utilizando el método a validar y un segundo método 
bien caracterizado, el cual debe tener una exactitud bien definida y establecida. Se 
analizan 6 muestras por replicado a la concentración normal de trabajo por ambos 
métodos. 
C r i t e rio de aceptación: 
Se lleva a cabo un análisis de varianza (ANOVA), del porcentaje de recuperación 
o del error relativo en porcentaje, para determinar si hay o no diferencia 
significativa entre la exactitud de los métodos comparados. 
 
Adición de estándar: 
Verificación 
Se puede llevar a cabo de dos maneras diferentes: 
 Con placebo 
Se utiliza una mezcla preparada en el laboratorio de todos los componentes de 
la matriz de la muestra sin el principio activo a determinar, luego el placebo se 
enriquece con estándar. 
 Con muestra 
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Se analiza la muestra para conocer el contenido del analito y se procede a 
enriquecer las muestras con cantidades variables del estándar. 
 
Se preparan soluciones de placebo o de muestras enriquecidas a tres niveles 
de concentración diferentes, por triplicado 80, 100 y 120 % de la concentración 
normal de trabajo del método. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Criterios de aceptación 
Tabla 1 
Concentración del analito Criterio de aceptación 
Ensayo 
 Página 50 
 
 1. Placebo enriquecido 
Porcentaje de recuperación 
98%-102%, 2 % de error 
relativo. 
Al graficar la cantidad 
recuperada contra la cantidad 
adicionada, coeficiente de 
correlación de 1.00, pendiente de 
1.00 y el intercepto debe ser 
0.00. 
 
2. Muestra enriquecida 
 
Los porcentajes de 
recuperación obtenidos, deben 
encontrarse dentro del 100% 
4S, donde S es la mayor 
desviación estándar obtenida 
en la determinación de la 
precisión del método o del 
sistema. 
 Página 51 
 
 
 
Al graficar la respuesta del 
ensayo (cantidad total 
encontrada), contra la cantidad 
de analito adicionada, la 
pendiente debe ser mayor o 
igual a 0.95 y el intercepto 
debe ser igual a la 
concentración inicial. 
Trazas 
Sobre 100 ppb (ng/ L) 80%-100% de recuperación 
Menos de 100 ppb (ng/ L ) 60%-110 % de recuperación 
Menos 1 ppb 70%-120% de recuperación 
 
 
 
 Comparación de las curvas de regresión lineal de estándares con curvas de 
regresión lineal de placebos enriquecidos (métodos de curvas de respuesta 
relativa): 
 
 
Verificación 
 
Se preparan soluciones a diferentes niveles de concentración de placebo 
enriquecido ( 80, 100, 120%) y soluciones de estándares a los mismos niveles de 
concentración. Separadamente se evalúa la regresión lineal de ambos grupos y se 
lleva a cabo la comparación de las pendientes y los interceptos. 
 
Criterio de aceptación: 
 
Los efectos de la interacción entre la matriz y el analito, se encuentran ausentes si 
los interceptos del placebo enriquecido y los estándares son estadísticamente 
iguales a cero, 
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El error sistemático proporcional se encuentra ausente si la razón de las pendientes 
de las curvas de respuesta para el placebo y los estándares es estadísticamente 
equivalente a 1. 
Comparación de los resultados obtenidos de un estándar o material de 
referencia certificado: 
 
Verificación 
 
Se emplea un estándar y se analiza por replicado, conel método a validar y se 
compara el resultado obtenido con el valor verdadero declarado. 
 
Criterio de aceptación 
 
98%-102% de recuperación o 2% de error relativo 
 
1 Precisión 
 
Verificación 
 
Existen diferentes formas de evaluar la precisión: repetibilidad, precisión intermedia, 
reproducibilidad 
 
En términos generales la precisión, debe determinarse, analizando un número 
suficiente de alícuotas, que permitan calcular estadísticamente la desviación 
estándar y la desviación estándar relativa. La ICH, recomienda llevar a cabo un totalde nueve determinaciones, que cubran el intervalo especificado en el 
procedimiento. Para ello se pueden trabajar tres niveles diferentes de concentración 
( 80, 100, 120 %), con tres muestras independientes de cada nivel. Datos con los 
que se cuenta si al evaluar la exactitud, se llevó a cabo por el método de Adición 
estándar. Otra forma de evaluarlo es, analizando por lo menos seis muestras 
independientes a la concentración normal de trabajo. 
 
Criterios de aceptación: 
 Página 53 
 
 
Existen diferentes criterios de aceptación, sin embargo se puede generalizar que en 
el caso de la repetibilidad y la precisión intermedia la desviación estándar relativa, 
para evaluar la precisión del sistema o del método debe ser menor o igual al 2 %, y 
en algunos casos puede ser igual o menor del 3%, la reproducibilidad, puede ser 2 
o 3 veces la repetibilidad. 
Linealidad e intervalo 
 
Verificación 
 
El comportamiento lineal de un método, debe ser demostrado dentro del intervalo 
en el cual es probable que se trabaje. Este intervalo varía dependiendo del tipo de 
determinación a realizar. Por esta razón se establece los intervalos dentro de los 
cuales deben llevarse a cabo las pruebas para cada análisis: 
Tabla 2 
 
Análisis Intervalo de trabajo 
Ensayo del principio activo 80-120 % de la concentración de trabajo 
Determinación de impurezas 50-120% de la especificación 
Ensayo de Uniformidad de contenido 70-130% de la concentración de trabajo, o 
alguna modificación del mismo, 
dependiendo de la naturaleza de la forma 
dosificada 
 
Prueba de disolución 20 % sobre la especificación, en el caso 
de la liberación controlada, en que existe 
una especificación mínima al inicio de la 
prueba y una máxima al finalizar, el intervalo 
debe ser menos un 20% de la 
especificación mínima y más 20% de la 
especificación máxima. 
 
Para llevar a cabo la determinación de la linealidad y el intervalo, se deben seguir 
los siguientes pasos: 
 
3.1 Linealidad e intervalo del sistema: 
 
 
Verificación 
 Página 54 
 
 
1. Preparar en forma independiente soluciones de estándar al menos 5 niveles de 
concentración, las cuales deben encontrarse dentro de los intervalos establecidos 
para cada tipo de análisis. 
Este procedimiento debe repetirse en forma independiente por lo menos 3 veces, 
para evaluar estadísticamente la regresión lineal del sistema. 
Con estos datos se grafica la respuesta de la medición, contra la concentración 
del analito. Se verifican datos con comportamiento atípico mediante mediciones 
adicionales. 
Realizar un análisis de varianza de la regresión lineal 
Calcular el coeficiente de regresión (calcular por lo menos tres curvas 
independientes) 
Calcular y graficar los residuos (valor real de la concentración – el calculo por la 
ecuación de regresión para cada valor de X) 
 
 
 
3.2 Linealidad e intervalo del método 
 
 
Verificación 
 
Preparar soluciones de muestra o placebo enriquecidos a cinco niveles de 
concentración, los cuales deben encontrarse dentro de los intervalos establecidos 
por la USP para cada tipo de análisis, y que fueron verificados previamente al 
llevar a cabo la determinación de la linealidad del sistema. 
Este procedimiento debe repetirse en forma independiente por lo menos 3 veces, 
para evaluar estadísticamente la regresión lineal del método 
3. Con estos datos se grafica la respuesta de la medición, contra la concentración 
del analito. Se verifican datos con comportamiento atípico mediante mediciones 
adicionales. 
4. Realizar un análisis de varianza de la regresión lineal 
Calcular el coeficiente de regresión con la totalidad de los datos (por los menos 
tres curvas independientes) 
Calcular y graficar los residuos (valor real de la concentración – el calculado por 
la ecuación de regresión para cada valor de X) 
 
Criterios de aceptación 
 
Se confirma linealidad si se cumplen los siguientes criterios: 
 
 Página 55 
 
1. Homocedasticidad (la varianza es constante para todas las concentraciones) 
El Análisis de varianza de la regresión lineal debe demostrar: 
paso del intercepto por cero, mediante un test de t o mediante el intervalo de 
 
desviación no significativa con respecto a la regresión 
Distribución aleatoria de los residuos (Tendencias sistemáticas son indicativas de 
no linealidad 
El coeficiente de correlación de la regresión lineal debe encontrarse entre 0.98 y 
1.00, el coeficiente de correlación al cuadrado debe ser mayor de 0.995 
 
 
4 Límite de detección 
 
El límite de detección puede ser establecido de diferentes maneras dependiendo 
del tipo de método: 
 
 
 
4.1 Métodos no instrumentales 
 
 
 
4.1.1 Por comparación de blanco y blanco enriquecido a una sola 
concentración. 
 
 
Verificación 
 
El límite de detección se determina por medio del análisis comparativo de un 
blanco y de muestras independientes de blanco enriquecido con diferentes niveles de 
concentraciones conocidas del analito. Se compara el comportamiento de las muestras 
con el blanco y se establece el nivel mínimo al cual el analito puede ser realmente 
detectado. En el caso del límite de detección del sistema, el blanco está constituido por los 
solventes utilizados en el análisis. En el caso del método, el blanco está constituido por los 
solventes y por la matriz de la muestra. 
 
 
 
 Página 56 
 
4.2 Métodos instrumentales 
 
En el caso de métodos establecidos como oficiales casi nunca es necesario 
determinar el límite actual de detección. Preferiblemente el límite de detección de trabajo 
debe ser más bajo del nivel de detección requerido por la especificación. Por ejemplo, si se 
requiere detectar una impureza al nivel del 0.1%, se debe demostrar que el procedimiento 
realmente detecta la impureza a este nivel. 
 
Existen diferentes formas de determinar el límite de detección, cualquiera que sea 
el método utilizado, se requiere del análisis de un número adecuado de muestras conocidas 
que deben estar cercanas o preparadas a la concentración del límite de detección requerido 
para el tipo de ensayo a realizar. 
 
 
4.2.1 Por comparación de blanco y blanco enriquecido a una sola 
concentración. 
 
 
 
Determinación 
 
Se utiliza cuando la desviación estándar del blanco es diferente de 0. Se preparan 
no menos de 10 blancos independientes y 10 blancos enriquecidos a la concentración más 
baja aceptada. Una vez preparadas las soluciones, se llevan a cabo las mediciones de cada 
una y posteriormente se calcula la desviación estándar de cada grupo de datos. 
 
Con estos datos se puede calcular el límite de detección 
LD= Valor promedio del blanco + 3S 
Donde S es la desviación estándar de la muestra enriquecida 
 
 
 
4.2.2 Blanco enriquecido a una sola concentración 
 
 
 Página 57 
 
Determinación 
 
En este caso se analizan y cuantifican no menos de 10 soluciones de blanco 
enriquecidas o muestras enriquecidas preparadas a la concentración menor para la que se 
puede obtener un grado aceptable de incertidumbre. Se lleva a cabo la cuantificación para 
cada una de las soluciones, se calcula el valor promedio de las concentraciones obtenidas 
y la desviación estándar. 
 
LD= Concentración promedio obtenida para el blanco o la muestra enriquecida + 4.65 S 
 
 
 
 
4.2.3 Comparación del comportamiento de blanco con blanco 
enriquecido a diferentes concentraciones 
 
 
Determinación 
 
Se preparan soluciones independientes de blanco y de blanco enriquecido a 
diferentes niveles de concentración bajos, cercanos al límite de detección esperado. Se 
determina aquella concentración a la cual la señal del analito es igual a la señal del blanco 
(Ca). Se calcula el límite de detección. Puede calcularse de dos maneras. 
 
 
1. LD = Ca + 2 S 
 
Donde: 
 
 Ca es la concentración del analito determinada 
 S la desviación estándar del blanco 
 
2. Se debe construir la regresión lineal de