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INGENÍERÍA BIOQUÍMICA INGENIERIA DE BIORREACTORES IBQA 7A Actividad I Presentan Aguilar Cruz Patricia Hernández Gonzales Andie Alejandra Gutiérrez Pérez Juan José Martínez Gómez Carolina Martinez Guillen Mauricio Antonio Méndez Domínguez Jairo Antonio Docente Ing. Rosa Isela Cruz Rodríguez Instituto Tecnológico de Tuxtla Gutiérrez 1. Describa, ¿qué son los microorganismos? Son seres vivos pequeños que no pueden ser observados a simple vista y por ello se utilizan equipos especializados como los microscopios, típicamente son organismos unicelulares, son considerados esenciales para la vida debido a su amplia diversidad y distribución en el planeta. Algunos de los organismos más estudiados pertenecen a grupos biológicos como lo son los protozoarios, algas, hongos y bacterias. 2. ¿Donde habitan los microorganismos?, cite 5 diferentes hábitats y 3 ejemplos de microorganismos que viven en esos respectivos hábitats. ➢ Microorganismos del agua: Cianobacterias Arqueas Bacterias ➢ Microorganismos de las plantas: Bacterias Hongos Rizofericos ➢ Microorganismos del cuerpo: Bacterias Eucariotas Virus ➢ Microorganismos del suelo: Hongos Bacterias Virus ➢ Microorganismos en el aire: Bacterias Esporas 3. Describa, ¿qué es un medio de cultivo? ¿cuál es la función de cada uno de los constituyentes básicos de un medio de cultivo? Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos. Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición química definida cualitativamente y cuantitativa. De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en: Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los que se quieren cultivar. Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos específicos. Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningún tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar características fisiológicas de los microorganismos. 4. Apoyado de figuras describa los diferentes mecanismos mediante los cuales se incorporan los nutrientes al interior de los microorganismos. Difusión simple Depende de la diferencia de gradiente de concentración entre exterior y el interior de la célula y la permeabilidad de la membrana. La concentración externa del nutriente debe ser alta, solo moléculas pequeñas pueden atravesar la membrana, algunas son: H2O, O2, CO2, glicerol Difusión facilitada Intervienen proteínas transportadoras integrada a la membrana que son las permeasas, estas tienen una afinidad especifica para la sustancia que transportan, su movimiento depende del gradiente de concentración sin gasto de energía Transporte activo Permite el transporte de moléculas encontrar de un gradiente de concentración con gasto de energía. El complejo proteico membrana tiene varias sub unidades pero la fuente de energía pueden ser ATP, compuestos de fosfato o fuerza de protón motriz CO2 El anhídrido carbónico es requerido por todo tipo de bacterias, las autótrofas lo requieren como fuente de carbono y lo reducen utilizando energía solar. Las arqueobacterias utilizan el CO2 como receptor de electrones del H2 para su proceso de obtención de energía N2 Es la toma del nitrógeno atmosférico para su reducción en compuestos del nitrógeno utilizables en las plantas y seres humanos, este proceso se lleva a cabo dentro de nódulos en las plantas, donde bacterias procariotas que habitan en simbiosis con la planta realizan esta degradación tomando el nitrógeno atmosférico como una fuente de nutrición 5. Cite el concepto de MONOCULTIVO, COCULTIVO y CULTIVO MIXTO. Describa claramente 2 ejemplos de su respectivo empleo en la producción de metabolitos de importancia biotecnológica. Monocultivo es “medio donde se realiza la siembra de un solo tipo de microorganismo” (National Agricultural Library, s.f., pag.62) Cocultivo se refiere a “técnica de cultivo que consiste en mezclar varios tipos de células in vitro para permitir interacciones sinérgicas o antagonistas, como en la diferenciación celular o apoptosis “(National Agricultural Library, s.f., pag.64) Cultivo mixto se refiere a “cultivos de varios productos simultáneamente en el mismo medio” (National Agricultural Library, s.f., pag.64) 6. La producción de metabolitos por vía microbiana comparada con la vía de síntesis química tiene ventajas y desventajas, describa 3 ventajas y 3 desventajas. Ventajas: • La exploración de la diversidad microbiana y la cantidad de metabolitos secundarios producidos por bacterias ha llevado a considerarlos como una fuente importante de productos naturales con propiedades biológicas como antibacterianos, antifúngicos, antitumorales, hipocolesterolémicos, inmunosupresores, antiparasitarios, herbicidas e insecticidas, entre otros. • Los metabolitos secundarios son moléculas sintetizadas por determinados microorganismos, que se producen en la fase estacionaria y aunque no son imprescindibles para el microorganismo, juegan papeles como la protección y supervivencia propia en el ambiente que lo rodea • A diferencia de lo que sucede con los metabolitos primarios, la ausencia de algún metabolito secundario no le impide la supervivencia y son producidos en la fase exponencial de crecimiento Desventajas: • La producción puede perderse fácilmente por mutación espontánea (degeneración de la raza), por lo que son muy importantes las técnicas de conservación de estos microorganismos. • En estado natural, sus funciones se hallan ordenadas a la supervivencia de la especie, pero cuando los microorganismos que los producen se desarrollan en cultivo puro, los metabolitos secundarios no desempeñan esa misión. • Cada uno de estos productos es producido por un grupo muy reducido de organismos. Métodos para evaluar el crecimiento microbiano Método Descripción del método Unidades que se reporta Desventajas Ventajas Información adicional Peso seco Retención de las células del cultivo y posterior desecación hacia peso constante Peso BMI Incluye microorganismo muertos, materia orgánica polímeros extra celular Útil para grandes volúmenes de muestra. Las medidas de peso seco suelen representar el 10- 15% de los valores de peso húmedo. 1 mg de peso seco equivale aproximadamente a unas 5x109 bacterias. Cuenta viable Cada célula viable forma una colonia. Se cuantifica el número de células a través del conteo de colonias 𝑈𝐹𝐶 𝑚𝑙 ⁄ 𝑈𝐹𝐶 𝑔 ⁄ Algunas bacterias no crecen en medios de cultivo. Solo se cuneta las células viables, las que pueden reproducirse; hay dos técnicas Otra metodología que se usa es espectrofotometría, donde se detecta el incremento de la densidad óptica. Cuenta del microscopio Conteo de células totales con cámaras especiales para conteo 𝐹𝐷 = 𝑁𝑢𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑐𝑚3 No sedistinguen las células muertas de las vivas. Mal método para suspensiones muy diluidas Conteo rápido de microorganismos Células pequeñas son difíciles de distinguir; requiere experiencia. Turbidez La medida de a turbidez de los medios de cultivo de microorganismos unicelulares Unidades de absorbancia; Unidades nefelométrica de turbidez (NTU) Problemas asociados al medio de cultivo y a la presencia de partículas. No hay datos cuantitativos Es una forma práctica de monitorizar el crecimiento bacteriano. Es un tipo de medición óptica basada en la medición de la pérdida de transparencia que tienen las disoluciones al aparecer partículas suspendidas. Fuentes de consulta • Crueger, W.; Crueger A. Biotecnología: Manual de microbiología industrial. Editorial Acribia, 1993. • Atkinson, B. (2002). Reactores bioquímicos (3rd ed.). Editorial Reverté Consumo de sustrato Sustituye el suelo, permitiendo el anclaje y adecuado crecimiento del sistema; Proporcionan nutrientes, el aire y el agua que precisan 𝑈𝐹𝐶 𝑚𝑙 ⁄ 𝑈𝐹𝐶 𝑔 ⁄ El uso de la temperatura es muy delicado Son seguros de usar, además que ofrecen algunas protecciones contra contaminación También se usa de gran en el campo y control de organismos en el suelo de las plantas Formación del producto Esta asociada al metabolismo energético, el producto se forma siempre que exista crecimiento y velocidad en un cultivo celular Requiere ATP para el crecimiento y mantenimiento celular, por lo tanto, la velocidad formación del producto siempre debe considerar ambos Los productos finales que se forman son mas baratos y sencillos de producir Existen 3 tipos de formación de productos, productos finales del metabolismo energético, productos intermedios y productos no asociados al metabolismo energético
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