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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES IZTACALA EFECTO DE LA FRACCIÓN DE ALCALOIDES LIBERADOS Y ERISOPINA ALCALOIDE AISLADO DE Erythrina americana, SOBRE UNA TAREA DE LABERINTO T ELEVADO T E S I S Que para obtener el título de BIÓLOGO P R E S E N T A Clyo Xunaxi Ruiz López Directora de tesis M. en C. María Eugenia Garín Aguilar Los Reyes Iztacala, Edo. De México, 2012 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página ii JURADO ASIGNADO PRESIDENTE Dr. Guillermo Ávila Acevedo VOCAL M. en C. María Edith López Villafranco SECRETARIO M. en C. María Eugenia Garín Aguilar SUPLENTE Dr. Gustavo Valencia del Toro SUPLENTE Biol. José Luis Muñoz López Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página iii Este trabajo de investigación se realizó en el Laboratorio de Farmacobiología (L-514) de la Facultad de Estudios Superiores Iztacala, bajo la dirección de la Mtra. María Eugenia Garín Aguilar y con el apoyo del Programa de Apoyo a Profesores de Carrera para la Formación de Grupos de Investigación (PAPCA 2006-2007 y 2007-2008 FES-Iztacala, UNAM) Proyecto No. 42 y 78; así como por el Programa de Apoyo a Proyectos de Investigación e Innovación Tecnológica (PAPIIT-DGAPA, UNAM) IN212906-3. Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página iv AGRADECIMIENTOS A la M. en C. María Eugenia Garín Aguilar Por haberme dado la oportunidad de realizar este proyecto de investigación. Gracias por la asesoría y la dedicación brindada que hicieron de este un maravilloso proyecto, pero sobretodo le agradezco por enseñarme que con paciencia, esfuerzo, constancia y perseverancia se pueden lograr todas las metas; por su amistad y por sus gratos consejos que llevo y guardo con cariño; por su ejemplo de profesionalismo, dedicación y pasión que imprime día a día en su que hacer como docente e investigador, que inspiraron y aumentaron en mi, el amor a la ciencia y a mi profesión desde mis primeros años en la universidad, cuando la conocí. Al Dr. Gustavo Valencia del Toro Por el apoyo brindado desde el inicio de este proyecto de investigación, por las recomendaciones y conocimientos aportados, que permitieron mejorar este proyecto, gracias. Al Dr. Mariano Martínez Vázquez Por la colaboración, atención, tiempo y aportes brindados en este proyecto de investigación. Al Dr. Guillermo Ávila Acevedo, a la M. en C. María Edith López Villafranco y al Biol. José Luis Muñoz López Por las observaciones realizada y atinadas sugerencias en la revisión de este trabajo. Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página v A mis amigos: Mayra, Hichel, Sara, Katia, Mariana, Alberto, Antonio, Victor, Frank y Hugo Por su amistad y compañía a lo largo de la carrera y por sus consejos que bien o mal al final siempre terminan sobresaliendo las bromas y las risas. Los quiero. A Ximena y mis compañeros del laboratorio Abraham, Stephanie y Diego No solo por el apoyo en la parte experimental de este proyecto sino también por su compañía y amistad brindad. Gracias. A mi alma mater, la Universidad Nacional Autónoma de México Quien fue mi proveedora de alimento intelectual. Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página vi DEDICATORIA A mis padres Con cariño, porque han sido mi punto de apoyo para mover el mundo, porque este logro es más suyo que mio. No tengo palabras para expresar lo mucho que los amo y lo agradecida que estoy por tenerlos a mi lado. Por la dedicación, el esfuerzo, el cariños y los consejos. A mi padre quien me enseño que “los grandes logros también requieren grandes esfuerzos”. A mi madre por enseñarme nobles valores: el amor, la rectitud, la justicia y el perdón. Complementos que hoy hacen de mí una persona con principios y valores, con capacidades y fortalezas para enfrentar el día a día. Gracias. A mi hermano Eros Por esas palabras de aliento en mis momentos más tristes, por su compañía a lo largo de mi vida, mi confidente, el mejor amigo y hermano que Dios me pudo dar, por esos conflictos y momentos de alegría compartidos que no han hecho más que agrandar el amor que nos tenemos. Gracias. A mi hermana Ada Por el apoyo incondicional brindado desde que decidimos iniciar este sueño, por tus consejos, porque eres mí ejemplo a seguir como mujer. Te amo. Gracias. A mi familia En especial a mis tías: Concepción, Esperanza y Urania, y a mi prima Esmeralda; mujeres que admiro y que han sido también un ejemplo para mi; por su apoyo brindado en todos los sentidos. A mis abuelos, quienes han formado parte fundamental en mi formación como persona Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página vii desde mis primeros años de vida, agradezco sus sabios consejos. Los amo. Gracias. A Dios Porque todo te lo debo a ti. “Todo hombre puede ser, si se lo propone, escultor de su propio cerebro” Santiago Ramón Y Cajal Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página viii ÍNDICE DE CONTENIDO Índice de figuras .................................................................................................... ix Índice de cuadros .................................................................................................. ix Índice de gráficas .................................................................................................. x Índice de cromatogramas ..................................................................................... x AVREVIATURAS .................................................................................................... xi RESUMEN ............................................................................................................ xiii INTRODUCCIÓN .................................................................................................... 1 ANSIEDAD .................................................................................................... 4 PRINCIPALES CLASES DE TRASTORNOS DE ANSIEDAD .................. 5 FARMACOS ÚTILES EN EL TRATAMIENTO DE LA ANSIEDAD .......... 6 BASES BIOLÓGICAS DE LA ANSIEDAD.................................................... 9 NEUROTRANSMISORES ....................................................................... 11 LAANSIEDAD Y LOS RECEPTORES NICOTÍNICOS NEURONALES 14 NICOTINA Y ANSIEDAD ........................................................................ 16 APRENDIZAJE Y MEMORIA ...................................................................... 17 MEMORIA Y LOS RECEPTORES NICOTÍNICOS NEURONALES ........ 17 TIPOS DE MEMORIA .............................................................................. 18 MODELOS ANIMALES EN EL ESTUDIO DE LA ANSIEDAD ................... 21 LABERINTO T ELEVADO ...................................................................... 23 Género Erythrina ........................................................................................ 25 Erythrina americana .............................................................................. 26 a) Información Taxonómica .............................................................. 26 b) Nombres comunes ........................................................................ 26 c) Descripción botánica .................................................................... 27 ANTECEDENTES ................................................................................................. 29 a) Uso medicinal del género Erythrina ..................................................... 29 b) Fitoquímica del género Erythrina ......................................................... 30 c) Actividad de extractos y alcaloides del género Erythrina sobre el SNC .......................................................................................................... 33 JUSTIFICACIÓN ................................................................................................... 37 HIPÓTESIS ........................................................................................................... 37 OBJETIVO GENERAL .......................................................................................... 38 MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................. 39 A. Material vegetal ..................................................................................... 39 B. Estudio fitoquímico ............................................................................... 39 C. Evaluación farmacológica .................................................................... 41 RESULTADOS ...................................................................................................... 44 DISCUSIÓN .......................................................................................................... 52 CONCLUSIONES ................................................................................................. 63 GLOSARIO ........................................................................................................... 65 PERSPECTIVAS ................................................................................................... 64 REFERENCIAS ..................................................................................................... 67 Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página ix Índice de figuras Figura 1. Control de la respuesta al estrés por la amígdala 9 Figura 2. Eje Hipotálamo-Pituitaria-Adrenal 10 Figura 3. Receptor GABAA 12 Figura 4. Organización de la subunidad de los receptores nicotínicos de acetilcolina (a) y distribución regional (b) 15 Figura 5. Esquema del Laberinto T elevado 24 Figura 6. Distribución de Erythrina en el mundo (A) y en México (B) 25 Figura 7. Erythrina americana 27 Figura 8. Árbol, flor, hojas y semillas de Erythrina americana Miller 28 Figura 9. Esqueleto eritrinano 32 Figura10. Estructura de los alcaloides diénicos 32 Figura 11. Estructura del alcaloide Erisopina 33 Figura 12. Esquema del Laberinto T elevado 42 Figura 13. Estructura química de los alcaloides erisopina, erisoninda y erisolina 46 Figura 14. Estructura química del alcaloide erisopina elucidada, a partir de la asignación de protones 47 Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página x Índice de cuadros Cuadro 1. Modelos animales utilizados en el estudio de la ansiedad 21 Cuadro 2. Señales químicas del alcaloide erisopina 47 Índice de gráficas Gráfica 1. Efecto de los grupos intacto (n=9), salina 1 mL/kg (n=8), vehículo 1 mL/kg (n=9), nicotina 0.3 mg/kg (n=8), diazepam (DZ) 2 mg/kg (n=8), fracción de alcaloides liberados (FALH) 2 mg/kg (n=9) y erisopina 0.5 mg/kg (n=12) en las latencias de evitación 50 Gráfica 2. Efecto de los grupos intacto (n=9), salina 1 mL/kg (n=8), vehículo 1 mL/kg (n=9), nicotina 0.3 mg/kg (n=8), diazepam (DZ) 2 mg/kg (n=8), fracción de alcaloides liberados (FALH) 2 mg/kg (n=9) y erisopina 0.5 mg/kg (n=12) en las latencias de escape 52 Índice de cromatogramas Cromatograma 1. Espectro de HPLC/ EM de la fracción de alcaloides hidrolizados (FALH) del extracto metanólico de semillas de Erythrina americana. Instituto de Química, UNAM 44 Cromatograma 2. Espectro de HPLC/EM del alcaloide erisopina obtenido, a partir del extracto metanólico de semillas de Erythrina americana. Instituto de Química, UNAM 46 Cromatograma 3. Espectro de RMN-H1 y fórmula desarrollada del alcaloide erisopina obtenido, a partir del extracto metanólico de semillas de Erythrina americana. Instituto de Química, UNAM 48 Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página xi AVREVIATURAS ACh ACTH ANOVA ba bc BZD CCF CL CRF CRH DA DHβE DZ EM ESC EV FALH GABA GC HCl H2SO4 HPA HPLC/EM Acetilcolina Hormono adrenocorticotropa Análisis de varianza Brazo abierto Brazo cerrado Benzodiazepina Cromatografía en capa fina Locus ceruleus Factor liberador de corticotropina Hormona liberadora de corticotropina Dopamina Dihidro beta eritroidina Diazepam Espectro de masas Escape Evitación Fracción de alcaloides liberados Gama amino butírico Glucocorticoide Ácido clohídrico Ácido sulfúrico Eje Hipotálamo pituitaria adrenal Cromatografía de líquidos de alta resolución acoplado a masas Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página xii i.p. ISRSs LB MAO NA NaHCO3 NMDA NRD NRM pH PM PVN RMN-H1 RnACh RT SNC sp o ssp TAG TEPT TOC UV v.o. 5-HT Intreperitoneal Inhibidores selectivos de la recaptura de serotonina Línea base Monoamino oxidasa Noradrenalina Hidróxido de sodio N-Metil-D-Aspartato Núcleo del rafe dorsal Núcleo del rafe medial Potencial de hidrógeno Peso molecular Núcleo parvoventricular Resonancia magnética nuclear de hidrogeno Receptores colinérgicos nicotínicos neuronales Tiempo de retención Sistema nervioso central Sin especie Trastorno de ansiedad generalizada Trastorno de estrés postraumático Trastorno obsesivo compulsivo Ultravioleta Vía oral Serotonina Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página xiii RESUMEN En la región Huasteca de México, las inflorescencias de E. americana son utilizadas empíricamente, para combatir el insomnio y como “tranquilizante de los nervios” y se ha encontrado, que la administración intraperitoneal (i.p.) de fracciones alcaloideas de las semillas de esta especie, disminuyeron la conducta agresiva de ratas. También, se ha reportado que tratamientos agudos y crónicoscon extractos alcohólicos de E. mulungu y E. velutina, producen efectos ansiolíticos. Por lo que este trabajo tuvo como objetivo: evaluar la actividad de la fracción de alcaloides liberados y el alcaloide erisopina, obtenidos de semillas de E. americana, sobre la ansiedad y la memoria en una tarea de laberinto T elevado. Se utilizaron ratas macho Wistar (250-300 g) que se distribuyeron al azar en grupos independientes, para recibir por vía i.p. diazepam (DZ) 2 mg/kg, nicotina 0.3 mg/kg, fracción de alcaloides liberados (FALH) 2 mg/kg o erisopina 0.5 mg/kg. Un grupo de animales no recibió tratamiento (intacto) y a otro se le administró salina al 0.9% 1 mL/kg o vehículo (salina, propilenglicol y etanol) 1 mL/kg. Treinta minutos después de la inyección de los tratamientos, cada animal se colocó al inicio del brazo cerrado del laberinto y se registró el tiempo en segundos que tardó en llegar a uno de los brazos abiertos (LB) posteriormente fueron registradas dos evitaciones (EV1 y EV2) a alguno de los brazos abiertos, colocando nuevamente al animal por 2 ocasiones consecutivas al inicio del brazo cerrado; inmediatamente, un escape (ESC1) fue registrado (tiempo que gastó la rata para desplazarse ahora desde el brazo abierto al brazo cerrado). Para evaluar la memoria, la evitación (EV3) y el escape (ESC2) se midieron un día después, reexponiendo a los animales al laberinto T sin la administración de tratamientos. Los resultados mostraron que DZ (2 mg/kg) deterioró la evitación inhibitoria (EV1 y EV2) y aumentó la latencia de escape (ESC1), lo que se interpretó como un efecto ansiolítico sobre la ansiedad generalizada y el trastorno de pánico. Las latencias bajas EV3 con este mismo fármaco evidenciaron un deterioro en la memoria de la conducta de evitación al brazo abierto, lo que sugirió amnesia anterógrada. La administración de 0.3 mg/kg de nicotina, no tuvo un efecto ansiolítico sobre la ansiedad generalizada (EV1 y EV2), pero sí mostró un incremento significativo sobre las latencias de ESC1 o miedo incondicionado; además la memoria del miedo aprendido o condicionado (EV3) no se vio deteriorado con la administración de nicotina. Los efectos de deterioro en la memoria de la evitación al brazo abierto (EV3), así como el incremento significativo en las latencias de ESC1 (relacionada al trastorno de pánico) ocasionados con la administración de FALH (2 mg/kg) y erisopina (0.5 mg/kg), permiten proponerlas como antagonistas de receptores colinérgicos nicotínicos neuronales, que modulan los procesos de memoria y ansiedad. Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 1 INTRODUCCIÓN La ansiedad, es un trastorno que compromete al funcionamiento del sistema nervioso central, con importantes repercusiones cognitivas, conductuales y emocionales sobre el individuo. El acelerado ritmo de vida de las grandes ciudades ha agravado este trastorno considerado, ahora como problema de salud pública de importancia mundial (Estrada, 2005), de hecho la ansiedad afecta a una octava parte de la población en todo el mundo (Hwa et al., 2005) y en México los trastornos de ansiedad son las formas de psicopatología más frecuente (Virgen, Lara, Morales & Villaseñor, 2005). Para atender estos padecimientos se han sintetizado fármacos con potentes propiedades hipnóticas y vidas medias reducidas. Sin embargo, su uso en este trastorno resulta inconveniente debido a los efectos secundarios que presentan (Estrada, 2005). En la medicina tradicional mexicana se cuenta con un gran número de plantas que se usan en padecimientos del sistema nervioso. Específicamente para "calmar los nervios" es común la administración oral de tisanas de toronjil morado (Agastache mexicana ssp. mexicana), toronjil blanco (Agastache mexicana ssp. xolocotziana), toronjil azul o chino (Dracocephalum moldavica), canela (Cinnamomum sp.), tila (Ternstroemia sp.), azahar (flores de especies de Citrus), hinojo (Foeniculum vulgare) y otras. (Biblioteca de la Medicina Tradicional Mexicana, 2009). También a plantas del género Erythrina se les ha atribuido un efecto sobre el sistema nervioso. Se menciona que desde tiempos antiguos la corteza del colorín la usaba como narcótico y calmante, a las semillas de E. coralloides también se les atribuía un efecto sobre el cerebro y propiedades narcóticas (Lozoya & Lozoya, 1982). Los mayas huastecos del noreste de México toman una infusión de las flores inmaduras de E. americana para combatir el insomnio (Alcorn, 1984). Los Teenek de San Luis Potosí usan las infloresencias de E. herbacea (Garín-Aguilar & Ramírez, 1997) o de E. americana (Garín-Aguilar, Ramírez, Soto-Hernández, Valencia & Martínez, 2000) como tranquilizante de los nervios. http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/termino.php?l=3&t=Agastache%20mexicana http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/termino.php?l=3&t=Agastache%20mexicana http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/termino.php?l=3&t=toronjil http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/termino.php?l=3&t=canela http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/termino.php?l=3&t=tila http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/termino.php?l=3&t=Foeniculum%20vulgare http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/termino.php?l=3&t=Foeniculum%20vulgare Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 2 Interesados en las propiedades que las especies del género Erythrina tienen sobre el sistema nervioso, usamos el modelo de aislamiento visual, encontrando que la administración intraperitoneal (i.p.) de las fracciones alcaloideas o del alcaloide β- eritroidina, obtenidos de semillas de E. americana y su derivado dihidro-β- eritroidina (DHβE) disminuyeron la conducta agresiva de ratas (Garín-Aguilar et al., 2000; García-Mateos, Garín-Aguilar, Soto-Hernández & Martínez-Vázquez, 2000). Posteriormente, se evidenció que erisodina (i.p.) deterioró la memoria de largo plazo de ratas entrenadas en el laberinto T elevado (Flores, 2004), modelo útil para estudiar la ansiedad y la memoria de manera simultánea (Viana, Tomaz & Graeff, 1994). La inyección de este alcaloide en el hipocampo dorsal, también deterioró la consolidación de la memoria de una tarea de evitación inhibitoria (Garín-Aguilar et al., 2009). Continuando con la caracterización química, se reportó la presencia de los alcaloides erisodina, erisovina y erisopina en semillas de E. herbacea (Garín-Aguilar, Valencia del Toro, Soto-Hernández & Kite, 2005). Otros grupos de investigación demostraron que la administración oral (crónica y aguda) del extracto hidroalcohólico de corteza de E. velutina tuvo efecto ansiolítico sobre conductas defensivas de ratas sometidas al laberinto T, particularmente aquellas que han sido relacionadas en términos clínicos a ansiedad generalizada (Ribeiro, Onusic, Poltrionieri & Viana, 2006). En estudios realizados con E. mulungu, se evidenció que el extracto alcohólico y tres alcaloides aislados de sus inflorescencias, también atenuaron la ansiedad generada en ratones cuando se usó el modelo de laberinto T (Flausino et al., 2007). La evidencia experimental indica que las estructuras cerebrales implicadas en la ansiedad y en la modulación de la memoria, sobre todo memoria emocional, se superponen (Tomaz, Brandao & Garcia-Cairasco, 1992). Por lo tanto, existen razones para el estudio de la ansiedad y la memoria juntas. El laberinto T, representa un intento para superar esta limitación. En efecto, este modelo fue seleccionado en nuestro estudio por su capacidad de producir subtipos de Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevadoRuiz López Clyo Xunaxi Página 3 desórdenes de ansiedad reconocidos en la práctica clínica: la evitación ha sido relacionada con la ansiedad generalizada y el escape con el trastorno de pánico. Con base en los usos empíricos y en las evidencias experimentales vertidas con anterioridad, en este estudio, se emplearon semillas de Erythrina americana, para obtener la fracción de alcaloides liberados y purificar el alcaloide erisopina y así evaluar su efecto sobre la ansiedad y la memoria de manera simultánea, cuando se entrenan ratas en el laberinto T elevado. Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 4 ANSIEDAD La ansiedad, se puede definir como un estado no placentero, caracterizado por intranquilidad, expectación aprehensiva y aumento de la vigilia, en la que se desencadenan una serie de reacciones vegetativas como la sudoración, taquicardia, tensión muscular, insomnio, temor, etc. (American Psychiatric Association, 1994). El estado de ansiedad se presenta, cuando el individuo presiente un peligro, por lo tanto, la ansiedad no es por sí sola una enfermedad ni es exclusivamente un síntoma de enfermedad, sino que es más bien una respuesta instintiva y fundamental que proporciona al organismo un mecanismo de alerta o alarma, que lo prepara para enfrentarse a un peligro inminente (Tallaman, Paul, Skolnick & Gallager, 1980). Por lo tanto, se puede considerar a la ansiedad, como una función adaptativa del mismo organismo. Se ha propuesto, que la ansiedad, representa un proceso cerebral con una función crucial de sobrevivencia en diferentes especies animales (Panksepp, 1990). Por lo tanto, un estado de ansiedad es normal cuando el ser humano siente que es agredido o cuando está asociada a un evento adaptativo. Sin embargo, existen otras condiciones que hacen que persista un estado de ansiedad, lo que se traduce en una mala adaptación constituyéndose así en un desorden psiquiátrico (Grillon, 2009). La ansiedad excesiva o sostenida se considera patológica (que deberá persistir por lo menos durante 6 meses). En la actualidad es el desorden psiquiátrico más común, que afecta cerca del 10% de la población en general y su frecuencia aparentemente va en aumento sobre todo en las grandes ciudades, donde la tensión y el estrés son mayores, debido a todo esto se considera actualmente como un problema de salud pública con importancia mundial siendo más frecuente en mujeres que en hombres con una proporción de 2 a 1, respectivamente (Virgen et al., 2005; Hwa et al., 2005, American Psychiatric Association,1994). Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 5 PRINCIPALES CLASES DE TRASTORNOS DE ANSIEDAD (American Psychiatric Association, 1994) TRASTORNO SÍNTOMAS CARACTERÍSTICOS Ansiedad generalizada (TAG) Aumento de la frecuencia cardiaca y respiratoria, exploración y vigilancia, aprehensión, impaciencia, micción frecuente, malestar gástrico, boca reseca y preocupación de carácter excesivo y persistente durante al menos seis meses. Pánico Pánico espontáneo en forma de crisis, que suele durar minutos con miedo intenso a morir, perder el control, volverse loco. Agarofobia Crisis de angustia y agarofobia (miedo a salir solo o a las multitudes) de carácter recurrente e inesperado, que causan síntomas similares a los que se presentan en la ansiedad generalizada. Fobia específica Similares a los de la ansiedad generalizada, surgen como respuestas a la exposición a situaciones u objetos específicos temidos, que conllevan a comportamientos de evitación. Fobia social Similares a los de la ansiedad generalizada, surgen como respuestas a situaciones sociales o actuaciones en público, que conllevan a comportamientos de evitación. Obsesivo compulsivo (TOC) Obsesiones que causan los mismos síntomas que se presentan en la ansiedad generalizada, malestar y compulsiones, cuyo propósito es neutralizar dicha ansiedad. Estrés postraumático (TEPT) Similares a los de la ansiedad generalizada, se originan ante la reexperimentación de eventos traumáticos y comportamientos de evitación hacia estímulos relacionados con el trauma. Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 6 FARMACOS ÚTILES EN EL TRATAMIENTO DE LA ANSIEDAD En general, para el tratamiento de los trastornos de ansiedad se han utilizado diferentes clases de fármacos, que actúan en el SNC. Entre ellos se encuentran antidepresivos, medicamentos ansiolíticos y bloqueadores beta. Antidepresivos Si bien los antidepresivos se desarrollaron para tratar la depresión, también son efectivos para los trastornos de ansiedad. a) Inhibidores selectivos de la recaptura de serotonina (ISRSs) Este grupo de fármacos está representado por la fluoxetina (Prozac), que reducen de manera significativa los síntomas de la ansiedad generalizada y de los trastornos obsesivos-compulsivos (Coplan, Gorman & Klein, 1992), así como del ataque de pánico (Pecknold, Luthe, Iny & Ramdoyal, 1995). Otros ISRSs que se prescriben usualmente para el trastorno de pánico, TOC (trastorno obsesivo compulsivo), TEPT (trastorno de estrés postraumático); y la fobia social, son sertralina (Zoloft), escitalopram (Lexapro), paroxetina (Paxil) y citalopram (Celexa). Los ISRSs producen menos efectos secundarios, que los antidepresivos antiguos, pero en ocasiones producen un poco de náuseas o nerviosismo cuando las personas comienzan a tomarlos. b) Antidepresivos tricíclicos Los tricíclicos son más antiguos que los inhibidores selectivos de la recaptura de serotonina y funcionan, también para los trastornos de ansiedad con excepción al TOC. Éstos ocasionalmente producen mareos, sueño, sequedad en la boca y Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 7 aumento de peso. Los tricíclicos incluyen la imipramina (Tofranil), la cual se prescribe, para disminuir las crisis de angustia y para el trastorno de pánico, mientras que la clomipramina (Anafranil) que inhibe la recaptura de noradrenalina y serotonina, es el único antidepresivo tricíclico útil para el tratamiento del TOC. c) Inhibidores de la monoamino-oxidasa Los inhibidores de la enzima monoamino oxidasa (MAO), son la clase más antigua de medicamentos antidepresivos. Los inhibidores de la MAO que se prescriben comúnmente son: tranilcipromina (Parnate) y elisocarboxazid (Marplan); los cuales son utilizados para el tratamiento del trastorno de pánico y la fobia social. La MAO es la enzima responsable de la degradación de la dopamina (DA), la noradrenalina (NA) y la serotonina (5-HT); es por ello que estos fármacos incrementan los niveles disponibles de los tres neurotransmisores en la sinapsis, ejerciendo así sus efectos terapéuticos (Goodman & Gilman, 2006). Medicamentos ansiolíticos a) Benzodiazepinas Actualmente, el tratamiento de primera elección, para los trastornos de ansiedad se basa en fármacos del grupo de las benzodiazepinas (BZD), como el diazepam (DZ), porque a pesar de que causan efectos secundarios como letargo, somnolencia, amnesia anterógrada (es decir, eliminan el recuerdo de los acontecimientos que tienen lugar mientras dura su acción), fatiga pasajera, mareo, sequedad de boca, taquicardia y ataxia, se conocen bien sus acciones clínicas debido a su facilidad de absorción y su cinética de distribución (Goodman & Gilman, 2006). LasBZD actúan de manera selectiva sobre los receptores GABAA, que interviene en la transmisión sináptica inhibidora rápida de todo el SNC. Las BZD potencian la respuesta de estos receptores al GABA, facilitando la apertura Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 8 de los canales de cloro activados por este. Las BDZ se unen de manera específica al lugar regulador del receptor, que es distinto del lugar de unión de GABA y actúan de forma alostérica, produciendo un aumento de la afinidad del GABA por su receptor (Rang, Dale, Ritter & Flower, 2008). El clonazepam (Klonopin) se usa para la fobia social y el TAG, el lorazepam (Ativan) es utilizado para el trastorno de pánico y el alprazolam (Xanax) es utilizado tanto para el trastorno de pánico, como para el TAG. a) Agonistas selectivos a los receptores serotoninérgicos 1A (5-HT1A) La gepirona, la ipsapirona y la buspirona, son fármacos relativamente nuevos que ejercen acciones antidepresivas y ansiolíticas; a diferencia de las benzodiazepinas no producen sedación ni relajación muscular, dado que actúan como agonistas selectivos a nivel de los receptores 5-HT1A (Goodman & Gilman, 2006; Trulson & Arastek, 1985). La buspirona, es el fármaco prototipo de este grupo de sustancias y ha demostrado ser eficaz en el tratamiento de la ansiedad generalizada y del ataque de pánico (Coplan et al., 1992). Los estudios clínicos ilustran que la buspirona (Buspar) es un ansiolítico selectivo que no provoca sedación y al parecer las probabilidades para desarrollar tolerancia o dependencia farmacológica son escasas (Rosenstein, 1994). Sin embargo, entre los posibles efectos secundarios de estos fármacos se incluyen mareos, dolores de cabeza y náuseas. b) Bloqueadores beta-adrenérgicos Los bloqueadores beta, tales como el propranolol (Inderal), que se utiliza para enfermedad cardiacas, pueden prevenir los síntomas físicos que se presentan con ciertos trastornos de ansiedad, particularmente con la fobia social. Estos fármacos atraviesan la barrera hematoencefálica y ejercen efectos secundarios graves, como: depresión, cefalea, insomnio y sedación. También producen vómito, Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 9 broncoespasmo, bradicardia e hipotensión arterial y en algunos casos alteraciones cutáneas (Petrie, Mafucci & Wossley, 1982). BASES BIOLÓGICAS DE LA ANSIEDAD En vista de la importancia de garantizar una apropiada respuesta emocional a los acontecimientos aversivos, no es de extrañar que una diversidad de mecanismos estén implicados en la inducción y la inhibición de los estados de ansiedad. Neurotransmisores como ácido gama amino butírico (GABA) y glutamato, muchos otros moduladores (cannabinoides, neuropéptidos, hormonas, neurotrofinas y citoquinas), así como varios mediadores celulares están implicados en este fenómeno. Entre las estructuras cerebrales que son de suma importancia en la modulación de miedo y ansiedad se encuentra la amígdala (Figura 1). Figura 1. Control de la respuesta al estrés por la amígdala. La amígdala recibe información sensorial ascendente del tálamo y descendente de la neocorteza. Esta información es integrada por el núcleo basolateral y es retransmitida al núcleo central. La activación del núcleo central conduce a la respuesta al estrés (Bear, Connors y Paradiso, 2007). La exposición a estímulos estresantes se asocia con una mayor liberación de noradrenalina (NA), a través del Locus Ceruleus (LC), el hipotálamo, el hipocampo, y el núcleo basolateral de la amígdala (Galvin, 1995). Warnock, Prickaerts y Steckler (2006) reportaron que las neuronas noradrenérgicas Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 10 provenientes del LC, estimulan la liberación de la hormona adrenocorticotropina en el núcleo parvoventricular (PVN). Produciendo de esta manera una reacción en cadena a través de la activación del eje hipotálamo-pituitaria-adrenal (HPA) (Figura 2), ya que las neuronas del factor liberador de corticotropina (CRF) localizadas en la región parvocelular del núcleo parvo ventricular (PVN), regulan la liberación de hormona adrenocorticotropa (ACTH) por la hipófisis o glándula pituitaria, y la secreción de glucocorticoides (GC) por la glándula adrenal. La ACTH viaja por el torrente sanguíneo a la glándula adrenal que se encuentra sobre el riñón, donde es estimulada la liberación del cortisol (principal glucocorticoide liberado) (Bear, Connors & Paradiso, 2007). Figura 2. Eje Hipotálamo-Pituitaria-Adrenal. El eje HPA regula la secreción de cortisol de la glándula adrenal como respuesta al estrés (Bear, Connors & Paradiso, 2007). Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 11 Se ha sugerido que los glucocorticoides pueden potenciar la ansiedad; ya que la liberación prolongada de glucocorticoides se ha asociado a la ansiedad patológica (Berger, 1980; Levitt, Persky, Brady & Fitzgerald, 1963; Sachar, 1970). Esta posibilidad es consistente con la observación de que la inyección crónica de corticosterona produce respuestas de sobresalto (Lee, Schulkin & Davis, 1994) y los tratamientos que bloquean la síntesis de glucocorticoides alivian la ansiedad. Por lo tanto, la administración de un inhibidor de la síntesis de esteroides reduce tanto la ansiedad sostenida en ratas expuestas a los olores del gato (Cohen, Benjamin, Kaplan & Kotler, 2000) y la tensión inducida por el comportamiento ansiogénico como en el laberinto más elevado (Calvo, Martijena, Molina & Volosin, 1998). NEUROTRANSMISORES Los procesos cerebrales que subyacen al proceso ansioso no son del todo conocidos, pero pueden ser resultado de múltiples interacciones entre varios neurotransmisores, incluyendo el ácido gamma-aminobutírico (GABA), la serotonina (5HT), el glutamato y la noradrenalina (NA). Ácido gama amino butírico (GABA) El ácido gama aminobutírico (GABA), es uno de los principales neurotransmisores involucrados en la regulación de la ansiedad. Su principal receptor se conoce como GABA/Benzodiazepínico de tipo A, ya que este complejo molecular contiene sitios de acoplamiento para GABA y para benzodiazepinas (BZD), además también tiene sitios de reconocimiento para barbitúricos, fármacos convulsivantes y esteroides (Haefely, 1989; Majewska, 1992). Las subunidades de este receptor conforman el canal de cloro, por lo que la unión a benzodiazepinas, barbitúricos y esteroides a los sitios moleculares específicos señalados, provocan una modulación alostérica del complejo, favoreciendo la afinidad entre GABA y el Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 12 receptor, lo cual permite la apertura del canal de cloro (Figura 3), que hiperpolariza la neurona e inhibe la transmisión de los impulsos nerviosos (Haefely, 1990) produciendo un efecto ansiolítico. Por otra parte, cuando un antagonista benzodiacepínico ocupa el lugar del receptor, reduce la sensibilidad del lugar de unión del GABA y aumenta la ansiedad. Figura 3. Receptor GABAA. La mayoría de la inhibición sináptica en el SNC está mediado por la unión del neurotransmisor GABA al receptores GABA tipo A de 5 subunidades (de hasta 17 diferentes subunidades) que permiten la entrada del ión Cl- (Jacob, Moss & Jurd, 2008). Serotonina (5-HT) Variosestudios señalan la participación de serotonina (5-HT) en el estado de ánimo y la ansiedad. La evidencia de si los niveles de serotonina disminuyen o aumentan en la ansiedad es contradictoria, pero ahora se piensa que hay dos vías de modulación serotoninérgica diferentes, la del núcleo del rafe medial (NRM) y la del núcleo del rafe dorsal (NRD), que se considera modulan el miedo y la ansiedad anticipatoria y los procesos cognitivos asociados con la ansiedad, respectivamente. Se postula que un exceso de 5-HT puede ser ansiogénico en Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 13 una vía y ansiolítico en la otra, quizá a través de las acciones en diferentes subtipos de receptores serotoninérgicos (Nutt & Ballenger, 2003). Glutamato Por otro lado, el glutamato, estimuló la producción del factor liberador de corticotropina (CRF) en cultivos de neuronas de rata a partir de la amígdala, efecto que fue bloqueado por un antagonista del NMDA (Cratty & Birkle, 1999). Además, la extinción del miedo condicionado en roedores se ha encontrado que puede ser bloqueado por antagonistas de los receptores NMDA y por tratamientos que promueven la activación de receptores NMDA, después de la administración sistémica o intra-cerebral en la amígdala (Walker, Ressler, Lu & Davis, 2002). Por lo tanto, el reporte preclínicos (y clínico) sugiere que la ansiolisis con los antagonistas de los receptores NMDA, podría ser una función de la inhibición de la liberación del CRF en las regiones del cerebro como la amígdala (Kent, Mathew & Gorman, 2002). Acetilcolina (ACh) Otro de los neurotransmisores que participa en la fisiopatología de la ansiedad es la acetililcolina. Estudios realizados por Okada y colaboradores en el 2003 propusieron una interacción, entre el factor liberador de corticotropina y la acetilcolina a nivel del HPA, por la participación de las neuronas noradrenérgicas que inervan el PVN, provenientes del LC. Los estudios demuestran que la administración de acetilcolina intracerebroventricularmente, eleva los niveles de corticosterona plasmática de ratas, a través de los efectos sobre la liberación de noradrenalina en el PVN (Warnock et al., 2006). Por otro lado, inervaciones colinérgicas en el hipocampo estimulan la expresión de receptores a glucocorticoides en ésta estructura, lo que en consecuencia produce una Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 14 respuesta inhibición en la liberación de corticotropina (Han, Bizon, Chun, Maus & Gallagher, 2002). LA ANSIEDAD Y LOS RECEPTORES NICOTÍNICOS NEURONALES Los receptores colinérgicos nicotínicos neuronales (RnACh), pertenecen a una familia de canales iónicos activados por ligando como el neurotransmisor endógeno acetilcolina (ACh) o ligandos exógenos como nicotina. Los RnACh son proteínas que tienen una estructura pentamérica constituida de 5 subunidades, alrededor de un canal central permeable a cationes. Estas subunidades son codificadas por nueve genes del subtipo α (α2-α10) y tres del subtipo β (β2-β4), que se expresan en el sistema nervioso y en varios tejidos no neuronales. Dos subfamilias de receptores nicotínicos neuronales de acetilcolina han sido identificados hasta el momento: receptores homopentaméricos, constituidos por algún subtipo α (α7, α8 y α9) y receptores heteropentaméricos constituidos por alguna combinación de subtipos α (α2-α6) y β (β2-β4). Se piensa que los receptores homoméricos tienen cinco sitios idénticos de unión-ACh (uno entre cada subunidad), mientras que los receptores heteroméricos tienen dos sitios de unión localizados entre una subunidad α y una subunidad β (Figura 4a). En el SNC los RnACh se localizan preferentemente en la presinápsis, modulando la liberación de neurotransmisores como dopamina, GABA, adrenalina, ACh y glutamato (García-Colunga & López-Valdés, 2003). Estudios de hibridación in vitro muestran que los receptores α4β2 y α7 son los subtipos más expresados (Figura 4b) y su expresión regional varía en diferentes especies de vertebrados (Gotti, Zoli & Clementi, 2006). Los diferentes subtipos de RnACh muestran diferentes propiedades, dependiendo de las subunidades que los forman y cada subtipo puede presentar una distribución regional, celular y subcelular distinta, lo cual podría contribuir a explicar la participación de los RnACh en una diversidad de procesos fisiológicos como: la contracción muscular, la memoria, el aprendizaje; así como en ciertas patologías como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 15 de Parkinson, la esquizofrenia, la ansiedad y la depresión, entre otros (Gotti & Clementi, 2004). a b Figura 4. Organización de la subunidad de los receptores nicotínicos de acetilcolina (a) y distribución regional (b). (a) Organización y estructuras de los subtipos de receptores heteropentaméricos y homopentaméricos. El componente del sitio de unión-ACh está localizado entre dos subunidades adyacentes, uno que lleva el primario (P) y el otro componente que lleva el complementario (C) (b) Distribución regional de los principales subtipos de receptores nicotínicos en el SNC en roedores (Gotti et al., 2006). Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 16 En la actualidad el empleo de técnicas de manipulación genética, así como el desarrollo y el empleo de ligandos a RnACh, proporcionan una herramienta para el conocimiento de la importancia funcional de la gran diversidad de RnACh. En consecuencia, el desarrollo de nuevos ligandos selectivos para los RnACh permite ser una opción para el tratamiento de múltiples trastornos neurológicos y psiquiátricos (Vázquez-Palacio & Bonilla, 2004). NICOTINA Y ANSIEDAD Estudios que han utilizado modelos conductuales de ansiedad en roedores, también sugieren que la nicotina puede tener efectos similares a los ansiolíticos y que los receptores colinérgicos nicotínicos neuronales (nAChR) aparentemente se asocian en la patofisiología de la ansiedad, en particular las subunidades α7 y α4/β2 (Tucci, Genn & File, 2003). Resultados recientes en ratones knock-out para la subunidad α4 del nAChR, demuestran que ésta influye en la respuesta conductual en pruebas que evalúan ansiedad según el tipo de experiencia que la induce (Salas, Pieri, Fung, Dani & De Biasi, 2003). Los efectos ansiolíticos de la nicotina se han demostrado en diversas pruebas que evalúan ansiedad. Éstas incluyen el laberinto más elevado (Brioni, O´Neill, Kim & Decker, 1993), la cámara de luz-oscuridad (Costall, Kelly, Naylor & Onaivi, 1989), la prueba de interacción social (File, Kenny & Ougazzal, 1998), entre otros (Cao, Burkholder, Wilkins & Collins, 1993; Vale & Green, 1996). El sistema colinérgico septohipocampal se ha implicado en el control de la ansiedad (Gray, 1988). Estudios previos mostraron que las lesiones septales medial y lateral reduce la ansiedad en el laberinto más elevado y en la prueba de enterramiento (Menard & Treit, 1996; Treit & Menard, 1997). La nicotina administrada directamente en el hipocampo produce efectos ansiolíticos en las pruebas del laberinto elevado (Ouagazzal, Kenny & File, 1999) y de interacción social (File et al., 1998). Los efectos ansiolíticos de la nicotina se bloquean por la administración del antagonista de los nAChR, mecamilamina, y por la benzodiazepinaflumazilo (Pomerleau, 1986; Decker, Brioni, Bannon & Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 17 Arneric, 1995). Estas observaciones sugieren que la acción ansiolítica de la nicotina se produce por un incremento en la liberación del neurotransmisor inhibidor GABA, al actuar sobre el complejo benzodiazepina-receptor-GABAA (Vázquez-Palacio & Bonilla, 2004). APRENDIZAJE Y MEMORIA MEMORIA Y LOS RECEPTORES NICOTÍNICOS NEURONALES La participación de los RnACh en los procesos cognoscitivos, tales como la memoria también ha sido ampliamente estudiada. Estudios histológicos post mortem en personas que presentaron enfermedad de Alzheimer han, revelado que hay pérdida tanto de la inervación colinérgica de la corteza cerebral y el hipocampo, así como en el número de receptores nicotínicos. El receptor nicotínico que más se pierde es el α4β2 y la subunidad α4 es la más afectada (Aubert et al., 1992). Con respecto a la función del agonista nicotina en los procesos de aprendizaje, en sujetos humanos fumadores y no fumadores a quienes les fue colocado un parche de nicotina, se observó que nicotina mejoró el rendimiento de una tarea que requiere la identificación de cadenas de tres consonantes (McClernon, Gilbert & Radtke, 2003). En estudios con monos jóvenes y adultos, se observó que la administración de nicotina intramuscular (gastrocnemio), mejoró el rendimiento de la tarea de demora en la elección de la muestra, lo mismo que a las 24 horas, ya que durante la prueba los monos adultos no demoraron mucho con respecto a los monos jóvenes (Buccafusco & Jackson, 1991). Así mismo, se encontró que nicotina restauró el aprendizaje y la memoria de rata seniles o con lesiones en la vía septohipocampal (Levin, 1992). Por otro lado, la administración de mecamilamina, (antagonista de receptores α3β2) y DHβE (antagonista del receptor α4β2) en la región CA1 del hipocampo dorsal, deterioraron la recuperación de la memoria a corto y a largo plazo (Barros, Ramirez, Dos Reis & Izquierdo, 2004); mientras que la administración intrahipocampal de DHβE y metilicaconitina destacaron el papel del bloqueo de los Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 18 receptores nicotínicos α4β2 y α7 respectivamente, al observar un aumento en los errores de la memoria de trabajo o memoria de referencia (Felix & Levin, 1997; Nott & Levin, 2006). TIPOS DE MEMORIA El aprendizaje y la memoria son dos procesos cerebrales estrechamente ligados, que originan cambios adaptativos en el comportamiento de los organismos. El aprendizaje, es el proceso mediante el cual adquirimos el conocimiento sobre el mundo; mientras que la memoria es el proceso por el que el conocimiento es codificado, almacenado y posteriormente recuperado. Todas las experiencias de aprendizaje se procesan en la memoria activa, a corto plazo antes de ser transformados por procesos de consolidación, en un almacenamiento más permanente (a largo plazo) en donde los recuerdos son más estables; procesos que a su vez dependen de la activación de genes específicos que contienen la codificación necesaria para la síntesis de proteínas, así como los cambios en la estructura y metabolismo neuronales (Kandel, 2001) y en donde también participan diversos sistemas de neurotransmisores como acetilcolina, dopamina, serotonina, glutamato, etc. (Myhrer, 2003). Memoria a corto plazo. Estímulos leves producen memoria a corto plazo. Es una memoria temporal, se olvida o se consolida. El primer almacenaje es en la corteza prefrontal, luego se transforma en memoria a largo plazo en el hipocampo. La memoria a corto plazo es transitoria, no requiere cambios anatómicos, sólo pequeños cambios subcelulares como movimientos de las vesículas sinápticas, y no requiere de la síntesis de nuevas proteínas (Krivoy, 2009). La memoria a corto plazo se divide en: Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 19 Memoria inmediata: se refiere a un tipo de memoria que tiene una capacidad limitada, de corta duración (30 segundos) y puede pasar a durar varios minutos si se utiliza la información activamente. Memoria de trabajo: la memoria de trabajo es como la pizarra de la mente, permite la manipulación de la información, sacar la información almacenada y trasladarla a una actividad motora controlada. Es un intermediario entre la memoria y la acción. Memoria a largo plazo. El estímulo percibido se procesa en diferentes áreas de asociación (lugar, color, posición en el espacio, relación con otros objetos) que se activan simultáneamente. Esa misma información puede pasar a la memoria a largo plazo, para lo que es crucial el lóbulo temporal medial, que no es el depósito definitivo, sino donde se da la transformación. El almacenaje se realiza en las mismas estructuras empleadas en la percepción, procesamiento y análisis de lo que es recordado. Así, diferentes zonas están involucradas para diferentes tipos de memoria. La memoria a largo plazo es estable porque implica cambios anatómicos (nuevas conexiones), requiere de síntesis de nuevas proteínas (Krivoy, 2009). De acuerdo a cómo se almacena y se recuerda la información, la memoria a largo plazo se puede clasificar en: memoria implícita y explicita. Las definiciones de memoria implícita y explícita que a continuación se mostrarán están basadas en la clasificación que realizaron, Kandel (2001) y Squire (2004). La memoria implícita o no declarativa, se refiere a la información de cómo realizar algo que se recuerda de manera inconsciente, este tipo de memoria se almacena en circuitos perceptivos, motores y emocionales. La memoria implícita puede subdividirse en dos tipos de memoria: asociativa y no asociativa. La memoria asociativa implica relacionar dos estímulos, los principales tipos de aprendizaje Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 20 asociativo son: el condicionamiento clásico, como por ejemplo, cuando a un perro se le da comida, éste produce una respuesta refleja de salivación, pero si se asocia la comida con un sonido varias veces, el animal seguirá salivando por la presencia de la comida, sin embargo llegará un momento en que ante la sola presencia del sonido (antes que aparezca la comida) el animal salivará. El condicionamiento operante es el aprendizaje que relaciona una conducta y la consecuencia de dicha conducta, como cuando un niño hace una “gracia” (cantar o bailar) e inmediatamente recibe la aprobación de sus familiares en forma de abrazos, caricias u otros premios, es muy probable de que el niño repita la gracia. Por otra parte la memoria no asociativa es la que tiene lugar cuando el sujeto aprende sobre las propiedades de un solo estímulo, los ejemplos más conocidos son: la habituación, como cuando dejamos de oír el tic-tac del reloj o dejamos de prestar atención a los ruidos cotidianos (aprendizaje que permite eliminar patrones de respuesta que no son útiles) y la sensibilización (respuesta potencial a una amplia variedad de estímulos después de la presentación de un estímulo intenso o nocivo) por ejemplo, cuando un animal responde más energéticamente a un estímulo táctil leve después de haber recibido un pellizco doloroso. La memoria explícita o declarativa es la base del aprendizaje de hechos y experiencias, que se recuerda mediante un esfuerzo consciente y deliberado, y se almacena en la corteza asociativa, ademáspuede clasificarse en: episódica, memoria de acontecimientos y experiencia personales; y semántica (la memoria para los hechos), es el tipo de conocimiento que adquirimos en la escuela y en los libros. Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 21 MODELOS ANIMALES EN EL ESTUDIO DE LA ANSIEDAD Los modelos animales para el estudio de la ansiedad se pueden clasificar en: modelos condicionados y modelos no condicionados. Los modelos condicionados se fundamentan en los estudios de Skinner, a partir de paradigmas en los que se incluyen procedimientos de castigos, a estos también se les conoce como modelos de conflicto. La mayoría son modificaciones de paradigmas de aprendizaje. El castigo consiste en la aplicación de un estímulo aversivo, generalmente un choque eléctrico leve; aplicado a un animal entrenado, condicionado para emitir una respuesta determinada. Mientras que en los modelos no condicionados, el paradigma revela más variabilidad en los valores conductuales basales, estos modelos tienen un nivel más alto de validez neurobiológica, no requieren entrenamiento y son menos susceptibles a la interferencia de procesos mnemónicos o motivacionales (Gómez, Saldivar- González & Rodríguez, 2002) (Cuadro 1). Los modelos animales en el estudio de la ansiedad Respuestas condicionadas Respuestas no condicionadas 1. Pruebas de conflicto: a) Prueba de Geller-Seifter b) Prueba de Vogel 2. Otras: a) Evitación activa/pasiva b) Supresión condicionada a la ingesta de líquidos c) Respuesta emocional condicionada d) Vocalizaciones ultrasónicas condicionadas 1. Pruebas exploratorias: a) Laberinto elevado en cruz b) Transiciones luz/oscuridad c) A campo abierto 2. Pruebas sociales: a) Vocalizaciones ultrasónicas inducidas por separación b) Interacción social 3. Otras: a) Hiponeofagia b) Conducta defensiva de enterramiento Cuadro 1. Modelos animales utilizados en el estudio de la ansiedad (Rordgers, 1997 en: Gómez, Saldivar-González & Rodríguez, 2002). Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 22 Los modelos animales de ansiedad se han desarrollado tanto para detectar nuevas drogas contra la ansiedad, así como para estudiar los mecanismos cerebrales que subyacen a los trastornos de ansiedad (Viana et al., 1994). Hasta hace poco el principal criterio para la validación de un modelo animal de ansiedad ha sido su sensibilidad a las BZD ansiolíticos. Como resultado, muchos de los modelos existentes no detectan fácilmente los ansiolíticos no BZD (File, 1987; Handley & McBlane 1993). La evidencia clínica sugiere que los trastornos de ansiedad no sólo son heterogéneos en sus manifestaciones, sino que también tienen diferentes sustratos neuronales (Nutt, 1991). Por lo tanto, existe una clara necesidad de nuevos modelos animales que sean sensibles a los ansiolíticos no BZD y/o que se dirijan a determinados tipos de trastornos de ansiedad, incluyendo aquellos resistentes a las BZD (Viana et al., 1994). Los modelos animales de ansiedad implican necesariamente la interferencia con procesos psicobiológicos, tales como la capacidad motora, la motivación (privación de alimentos y/o agua), la percepción (frecuentemente de estímulos dolorosos), el aprendizaje y la memoria (Handley & McBlane 1993). La interferencia de la privación y el dolor se pueden eliminar utilizando situaciones aversivas con base etológica, tal como los modelos de laberinto más elevado (Pellow, Chopin, File & Briley, 1985) y el de transición luz oscuridad (Crawley & Goodwin, 1980). Sin embargo, hay que destacar que los factores cognitivos no suelen ser evaluados. En particular, modelos de castigo o de conflicto y pruebas de evitación inhibitoria (pasiva) claramente implican aprendizaje y memoria. De hecho, la evitación inhibitoria es una tarea ampliamente utilizada para el estudio de mecanismos de la memoria (Bures, Buresova & Huston, 1983). Además, una gran cantidad de evidencia experimental indica que las estructuras cerebrales implicadas en la ansiedad y en la modulación de la memoria, sobre todo memoria emocional, se superponen (Tomaz et al., 1992). Por lo tanto, hay buenas razones para el estudio de la ansiedad y la memoria juntas y el modelo de laberinto T elevado, representa un intento para superar varias de las limitaciones anteriores, ya que permite Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 23 evaluar en el mismo procedimiento los efectos de los fármacos sobre la ansiedad y la memoria. LABERINTO T ELEVADO El laberinto T elevado, es una modificación del laberinto más elevado (Pellow et al., 1985). Sin embargo, este último modelo al parecer, genera diferentes tipos de miedo/ansiedad, lo que resulta en una variabilidad compleja de efectos de las drogas (Handley & McBlane, 1993); el aparato fue modificado cerrando la entrada a uno de sus brazos cerrados, dando lugar a un laberinto T elevado. El modelo de laberinto T elevado, representa un intento de superar éstas limitaciones, ya que permite evaluar en el mismo procedimiento los efectos de los fármacos sobre la ansiedad y la memoria. El laberinto T elevado, es una modificación del laberinto más elevado (Pellow et al., 1985). Sin embargo, este último modelo al parecer, genera diferentes tipos de miedo/ansiedad, lo que resulta en una variabilidad compleja de efectos de las drogas (Handley & McBlane, 1993); el aparato fue modificado cerrando la entrada a uno de sus brazos cerrados, dando lugar a un laberinto T elevado. El laberinto T elevado consta de 3 brazos de dimensiones iguales y se encuentra elevado a 50 cm del piso (Figura 5) Uno de los brazos se encuentra cerrado por paredes y es perpendicular a los dos brazos abiertos. Cuando la rata es colocada en el extremo del brazo cerrado, los brazos abiertos no se alcanzan a ver hasta que el animal asoma la cabeza más allá de las paredes del brazo cerrado. Colocar al animal en uno de los brazos abiertos, parece ser una experiencia desagradable, porque las ratas presentan miedo innato a los espacios abiertos y elevados. Esto permite que el animal aprenda a evitar los brazos abiertos al ser colocado en repetidas ocasiones en el interior del brazo cerrado; y cuando la rata sea colocada al final de uno de los brazos abiertos, probablemente ésta se moverá hacia el Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 24 brazo cerrado, realizando una respuesta de escape. Mientras la evitación inhibitoria de los brazos abiertos representa el miedo aprendido o condicionado, la respuesta de escape desde uno de los brazos abiertos representa el miedo innato o incondicionado; miedos que han sido relacionados clínicamente con ansiedad generalizada y trastornos de pánico, respectivamente (Zangrossi & Graeff, 1996). Para la evaluación de la memoria, las conductas de evitación inhibitoria y el escape de una vía son medidos 24 horas después de la primera exposición al laberinto. El procedimiento deja evidente que este modelo no requiere de privar a los sujetos de alimento o agua, ni precisa la administración de estímulos aversivos como en la prevención pasiva o evitación inhibitoria y tiene la ventaja de evaluar en la misma prueba los efectos de los fármacos sobre la ansiedad y la memoria (Viana et al., 1994). Figura 5. Esquema del Laberinto T elevado (Zangrossi & Graeff, 1996). Efecto de erisopina y de lafracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 25 Género Erythrina Distribución El género Erythrina (del griego Erythros que hace referencia al color rojo), pertenece a la subfamilia Papilionidae de la familia de las leguminosas (Fabaceae), consta de 113 especies de árboles, arbustos y hierbas, con inflorescencias y semillas rojas o naranjas. El género se distribuye en regiones tropicales y semitropicales del planeta (Musalem, 1992). Neill (1993) indica que 31 especies corresponden a África, 12 Asia y Oceanía, y aproximadamente 70 se encuentran en el continente Americano (Figura 6A); de estas últimas se han identificado 27 en México, aunque es probable que existan especies sin identificar. Dado que este género es susceptible de crecer en varios tipos de clima, además de que se propaga fácilmente por el método de estaca, se le puede encontrar distribuido en varios estados de la república Mexicana, entre los que destacan Puebla, Morelos, Guerrero, Chiapas, Tabasco, Oaxaca, San Luis Potosí, Veracruz, Estado de México y el Distrito Federal (Figura 6B). Figura 6. Distribución de Erythrina en el mundo (A) y en México (B) (Neill, 1993). Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 26 Erythrina americana a) Información Taxonómica (Instituto de Biología, 2010) Reino: Plantae Phylum: Magnoliophyta Clase: Magnoliopsida Orden: Fabales Familia: Leguminosae (Faboideae) Género: Erythrina Especie: Erythrina americana Mill. b) Nombres comunes El nombre popular más importante es el de colorín; aunque también es conocido como: alcaparra, madera coral, madera brava, madre cacao, madre manza, madre chontal (Tabasco); majañu (chinanteco, Tabasco); árbol de garbanzo café, árbol de los corales, colorín (Puebla, Tlaxcala); lakatola, lakatilo (totonaca, Puebla); equimite, frijolillo, iquimite, jiquemite (Puebla); chocolín (Baja california); cosquelite, chakmolché (maya, Yucatán); purechecua, quemite, chocolín (Hidalgo); chotza, demti (otomí, Hidalgo); lipashcua (chontal, Oaxaca); parencsumi (purépecha, Michoacán; patol, pichoco, pito (Veracruz); tabano, tlalni (totonaco, Veracruz); puregne (Michoacán); sompatle, somplantle, sompatlé (Estado de México, Guerrero, Oaxaca); trizch, tsich, tsompanquáhuitl, pipal (Chiapas); tzinacancuáhuitl, tzompantle (Guerrero); zumpatle, tzompatli, tzopomitl (Morelos); xoyo (maya, Yucatán); zompatli (Nahuatl) (Lozoya & Lozoya, 1982). Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 27 c) Descripción botánica E. americana (Figura 7 y Figura 8). Árbol con espinas gruesas, foliolos cartáceas, ampliamente ovados a suborbiculares o deltoide-ovados, 4-13 cm largo, acuminado o agudo, al principio tomentoso y luego glabro; cáliz cartácea, campanulado, de 8-12 mm de largo; estandarte rojo, angostamente elíptico, 3.5- 6.5 cm de largo y 8.12 mm de ancho, redondeado u obtuso en el ápice; alas 7-12 mm de largo, mas largo que la quilla; vaina de 9-20 cm de largo, 11-14 mm de espesor, muy constreñida entre las semillas, las semillas son de color rojo escarlata con una línea negra (Standley & Steyermark, 1946). Figura 7. Erythrina americana (Schultes, 1976). Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 28 Figura 8. Árbol, flor, hojas y semillas de Erythrina americana Miller (Lawrence & Delgado, 2011). Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 29 ANTECEDENTES a) Uso medicinal del género Erythrina Especies de Erythrina contienen propiedades medicinales, por lo que han sido utilizadas en diversas regiones y etnias del mundo. En el caso de E. variegata, los indígenas usan los extractos de diferentes partes de la planta y los emplean para varios propósitos: por ejemplo la corteza es usada como astringente, antipirético, para problemas de hígado y epilepsia, así como sedativo de nervios, antiasmático y como gotas oftálmicas; las hojas son usadas para problemas gástricos, como diuréticos y contra el dolor en coyunturas (Ghosal, Dutta & Battacharya, 1972). Mientras que en la región sur de la India, E. variegata es comúnmente utilizada para tratar enfermedades mentales (Pitchaiah et al., 2010). E. americana se ha empleado como antifebril (hoja y corteza), emenagogo (raíces), tratamiento de picaduras de alacrán (jugos de los tallos), diurético (semillas, corteza y hojas), afecciones de tórax (flor), para inmovilizar peces (corteza y tallos) y como comestible (flores) (Nakawa, 1991). Hastings (1990) reporta algunos usos medicinales para diversas especies del género entre los que destacan los siguientes: en Veracruz, las hojas de E. americana son aplicadas en úlceras o abscesos y utilizadas de manera interna para curar enfermedades causadas por picaduras de diversos insectos; los frutos son aplicados en inflamaciones de brazos, piernas, cabeza y ojos; en la región Huasteca del noreste de México, la corteza es hervida y tomada 40 días después del nacimiento de los niños como anticonceptivo; la infusión de las flores inmaduras contra el insomnio; en el Estado de Guerrero, consideran a la planta como antimalárico. En Durango, las semillas de E. flabelliformis son utilizadas como un remedio contra el dolor de muelas; en los mercados de Chihuahua se vende como planta medicinal, y se cree que la semilla es utilizada como Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 30 anticonceptivo; la infusión de las hojas es usada por los indios Seri de Sonora para curar la diarrea, en tanto que la raíz de E. standleyana (o E. americana) (Standley & Steyermark, 1946) es utilizada por los mayas de la Huasteca del norte de México para detener hemorragias nasales y contra el dolor de muelas. En Guatemala, una cocción de retoños de E. berteroana es bebida como narcótico y la cocción de sus flores es un remedio contra el nerviosismo, hemorragias y disenterías. En los Estados Unidos, la medicina tradicional de los indios cherokee, ha reportado el uso de E. herbacea como diurético, narcótico y purgante (Huxley, 1992). Una infusión fría de la raíz ha sido utilizada para el tratamiento del dolor abdominal en mujeres, la decocción de las raíces o las vainas ha sido utilizada para tratar náuseas, constipación y bloqueo de vías urinarias, la decocción de las hojas como tónico general (Moerman, 1998). En el noreste de México E. herbacea y E. americana son utilizada por los indígenas Teenek como tranquilizante de los nervios (Garín-Aguilar & Ramírez, 1997). En la región semiárida del noreste de Brasil, E. velutina y E. mulungu, son usadas popularmente como agentes tranquilizantes, así como para tratar el insomnio y las convulsiones (Ribeiro et al., 2006; Teixeira-Silva et al., 2008). b) Fitoquímica del género Erythrina Las familias químicas reportadas con mayor frecuencia para el género Erythrina son los alcaloides (38%), flavonoides (38%) y los proteoides (aminoácidos, proteínas y lectinas (9%); para este propósito los principales órganos analizados fueron las semillas, corteza, raíz, hojas y flores (Pino, Prieto, Pérez & Molina., 2004). Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidosde Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 31 Los estudios químicos han demostrado, que diversas especies del género Erythrina biosintetizan una gran variedad de alcaloides los cuales presentan acción paralizante semejante a la del curare (Folkers & Koniusky, 1940a; 1940b). Sin embargo, los primeros que describieron el efecto curare de los extractos alcaloideos de semillas de E. americana fueron Altamirano y Domínguez en 1888 (Folkers & Major, 1937). Algunos de los alcaloides aislados del género Erythrina son erythralina, erythramina y erythratina (Folkers & Koniouszy, 1940a), erisodina, erisopina, erisocina y erisovina (Folkers & Koniouszy, 1940b). Es evidente que los alcaloides son metabolitos secundarios característicos de este género. Para la especie E. americana se han identificado alcaloides en diversas partes de la planta por ejemplo, en cáliz y corola: erisodina, eritralina, eritrinina, cristamidina, α- eritroidina, β-eritroidina y 8-oxo-α-eritroidina (Sánchez-Herrera, Soto-Hernández, Kite, García-Mateos, 2000), en flores: eritristemina N-óxico, α-eritroidina y β- eritroidina, en corteza: eritratidina y en hojas: erisotina y α-eritroidina (García- Mateos, 1996). En un trabajo realizado por Abdullah y colaboradores (1979) se usó cromatografía de gases acoplada a masas para caracterizar el contenido de alcaloides totales (libres y como glucósidos) de las semillas de catorce especies de Erythrina. Los alcaloides presentes en semillas de E. americana fueron -eritroidina, -eritroidina, erisovina y erisopina; se ha señalado que las semillas de este especie presentan un alto contenido de alcaloides que oscila entre 0.05 a 0.1% (Sotelo, Soto, Lucas & Giral, 1993). Los alcaloides de Erythrina son de tipo isoquinolínicos, caracterizados por una única estructura conocida como espiroamina tetracíclica (Reiman, 2007) que es un esqueleto eritrinano (Figura 9). Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 32 N C D A B Figura 9. Esqueleto eritrinano Los alcaloides de Erythrina, se clasifican de acuerdo a su estructura en 3 grupos: diénicos, alquénicos y lactónicos. Los de interés en este estudio son los alcaloides diénicos debido a que erisopina se encuentra en esta clasificación. Estos alcaloides contienen un sistema diénico conjugado en los anillos A y B (Figura 10). N R1O R2O R3O C D A B Figura10. Estructura de los alcaloides diénicos (Chawla, Redha & Jackson, 1985). Alcaloides R1 R2 R3 Erisodina Erisopina Erisovina Erisotrina H H Me Me Me H H Me Me Me Me Me Eritralina -CH2- -CH2- Me Eritravina Erisonina Erisolina Me H Me Me Me H H H H Eritrocarina -CH2- -CH2- H Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 33 N OH OH O C D A B CH3 Figura 11. Estructura del alcaloide Erisopina. Soto (1989) reportó que la conformación de los alcaloides de Erythrina es la requerida para establecer una interacción entre los alcaloides de tipo antagonista nicotínico y el receptor nicotina-acetilcolina. Tal conclusión se deriva de la estereoquímica de los alcaloides, determinada mediante el análisis de difracción de rayos X y esto sirvió para correlacionar la actividad biológica de tales compuestos. c) Actividad de extractos y alcaloides del género Erythrina sobre el SNC Onusic, Nogueira, Pereira y Viana (2002) determinaron que el extracto hidroalcohólico de inflorescencias de E. mulungu en una dosis aguda de 200 mg/kg y administrada crónicamente a 50, 100 y 200 mg/kg, por vía oral (Onusic, Nogueira, Pereira, Flausino & Viana, 2003), presentaron un efecto ansiolítico en ratas entrenadas en el laberinto T, al observar un deterioro en la respuesta de evitación al brazo abierto (lo cual es un índice del efecto ansiolítico) en forma similar a como ocurrió con diazepam (4 mg/kg). Por lo que respecta a las latencias de escape 1, únicamente los tratamientos crónicos mostraron latencias significativamente altas comparadas con el grupo control, lo que también evidenció un efecto ansiolítico. Adicionalmente, estos autores reportaron un efecto Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 34 antiansiedad con la dosis aguda de 100 mg/kg (Onusic et al., 2002) y con la dosis crónica de 50 mg/kg (Onusic et al., 2003) del mismo extracto en el modelo de transición luz-oscuridad, pues los sujetos de estos grupos incrementaron el número de transiciones, entre los compartimientos (claro y oscuro) y el tiempo gastado en el área iluminada. Ribeiro y colaboradores en el 2006, evaluaron el efecto del extracto alcohólico de E. velutina, en ratas sometidas al laberinto T elevado. Los resultados mostraron que E. velutina ejerció un efecto ansiolítico con la administración aguda y crónica, vía oral (v.o.) del extracto alcohólico, las latencias de evitación fueron similares a las del ansiolítico benzodiacepínico diazepam; con estos resultados los autores apoyan el uso popular de los extractos para tratar desórdenes del sistema nervioso como la ansiedad. Estudios realizados por Flausino y colaboradores (2007) evidenciaron que la administración oral aguda (3 y 10 mg/kg) del alcaloide eritriniano 11- hidroxieritravina, eritravina o -hidroxierisotrina, son en parte responsables de los efectos ansiolíticos observados con los extractos hidroalcohólicos de inflorescencias frescas de E. mulungu en ratones expuestos al laberinto T elevado, donde estos tratamientos deterioraron la evitación al brazo abierto, de forma similar a lo observado con diazepam. Teixeira-Silva y colaboradores (2008) evaluaron el efecto de extractos alcohólicos de hojas de E. velutina en ratas, con el modelo de laberinto más elevado, y observaron que la administración de 20 mg/kg vía oral produjeron un incremento del porcentaje de entradas al brazo abierto así, como un incremento del tiempo de permanecía en este brazo, lo que sugirió una acción ansiolítica. También en este estudio, usando la prueba de evitación inhibitoria para evaluar su efecto en los procesos de memoria, observaron que la dosis de 10 mg/kg del extracto inhibió la adquisición, pero no la consolidación ni la evocación de la memoria. Con base en Efecto de erisopina y de la fracción de alcaloides liberados obtenidos de Erythrina americana, sobre una tarea de laberinto T elevado Ruiz López Clyo Xunaxi Página 35 el conocimiento de que el hipocampo es una estructura cerebral clave en los procesos de memoria, estos investigadores mostraron en otro estudio que el extracto hidroalcóholico de hojas de E velutina bloqueó los potenciales potsinápticos excitatorios (EPSPs) registrados en cortes hipocampales de ratas (Sarasqueta, Araujo & Marchioro, 2002). Recientemente, Pitchaiah y colaboradores (2010) usaron tres modelos de ansiedad, para evaluar el efecto de extractos acuosos de la corteza de E. variegata y observaron un efecto ansiolítico en ratones sometidos a estos tres modelos de ansiedad. En el laberinto más elevado, el número de entradas y el tiempo en los brazos abiertos se vio aumentado; mientras que en el modelo de luz-oscuridad se observó un aumento del tiempo transcurrido en la zona clara y del número de transiciones entre las zonas claras y oscuras; y en el modelo del campo abierto también se vio aumentado el tiempo dedicado a la deambulación central. En 1995 Decker y colaboradores mostraron que la administración i.p. de erisodina (alcaloide
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