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23/7/2022

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Biología

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UNIVERSIDAD NACIONAL
AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE QUÍMICA

EFECTO VASODILATADOR INDUCIDO POR LA
TESTOSTERONA Y PARTICIPACIÓN DE LA FUNCIÓN
TESTICULAR EN EL DESARROLLO DE LA HIPERTENSIÓN
ARTERIAL EN LA RATA

T E S I S
QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE:
QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO

P R E S E N T A :
OSCAR DAVID GARCÍA HERNÁNDEZ

DIRECTORA DE TESIS:
DRA. MARÍA MERCEDES PERUSQUÍA NAVA

CIUDAD UNIVERSITARIA, CD. MX., 2016

UNAM – Dirección General de Bibliotecas
Tesis Digitales
Restricciones de uso

DERECHOS RESERVADOS ©
PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL

Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal
del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México).
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fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo
mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro,
reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el
respectivo titular de los Derechos de Autor.

JURADO ASIGNADO:

PRESIDENTE: Q.F.B. Martha Leticia Jiménez Pardo
VOCAL: Dra. María Eva González Trujano
SECRETARIO: Dra. María Mercedes Perusquía Nava
1er. SUPLENTE: M. en C. Miguel Ángel Peña Ortiz
2° SUPLENTE: M. en C. Alberto Hernández León

SITIO DONDE SE DESARROLLÓ EL TEMA: Laboratorio de Endocrinología de
la Reproducción, perteneciente al Departamento de Biología Celular y
Fisiología del Instituto de Investigaciones Biomédicas, Universidad Nacional
Autónoma de México.
ASESOR DEL TEMA:
Dra. María Mercedes Perusquía Nava

SUSTENTANTE:
Oscar David García Hernández
II

EFECTO VASODILATADOR INDUCIDO POR LA TESTOSTERONA Y
PARTICIPACIÓN DE LA FUNCIÓN TESTICULAR EN EL DESARROLLO DE LA
HIPERTENSIÓN ARTERIAL EN LA RATA. Esta tesis fue dirigida y
supervisada por la Dra. María Mercedes Perusquía Nava, el trabajo
experimental, el análisis de los datos y la escritura fueron realizados en el
laboratorio a su cargo: Endocrinología de la Reproducción, perteneciente al
Departamento de Biología Celular y Fisiología del Instituto de
Investigaciones Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México y
desarrollado con financiamiento de PAPIIT/DGAPA (Programa de Apoyo a
Proyectos de Investigación e Innovación Tecnológica/Dirección General de
Asuntos del Personal Académico), proyecto No. IN203815: “Respuesta
hipotensora producida por esteroides sexuales masculinos (andrógenos)
sobre la hipertensión arterial sistémica y gestacional (preeclampsia)”,
otorgado a la Dra. Perusquía.

III

INDICE GENERAL
Páginas
INDICE DE FIGURAS V
LISTA DE ABREVIATURAS VI
RESUMEN 1
1. INTRODUCCIÓN 2
1.1. Generalidades 2
1.2. Andrógenos y envejecimiento 3
1.3. Andrógenos y su relación con el sistema cardiovascular 6
2. JUSTIFICACIÓN 9
3. HIPÓTESIS 10
4. OBJETIVOS 11
4.1 Objetivo General 11
4.2 Objetivos Particulares 11
5. MATERIALES Y MÉTODOS 12
5.1. Animales 12
5.2. Influencia de la orquidectomía sobre la presión arterial de
ratas normotensas

12
5.3. Orquidectomía Bilateral 15
5.4. Tratamiento de reemplazo de testosterona 17
5.5. Evaluación de la acción directa de testosterona sobre la
presión arterial por el método invasivo

18
5.6. Experimentos de reactividad vascular para evaluar el efecto
vasodilatador de la testosterona

21
5.7. Presentación de los datos y análisis estadístico 27
5.8. Compuestos utilizados 29
6. RESULTADOS 30
6.1. Evaluación de la presión arterial en ratas macho
orquidectomizadas
30
6.2. Respuesta producida por testosterona sobre la presión
arterial de ratas conscientes.

34
6.3. Efecto vasodilatador de la testosterona 37
IV

7. DISCUSIÓN 41
8. CONCLUSIONES 45
9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 46
V

INDICE DE FIGURAS
FIGURA 1. Ciclopentanoperhidrofenantreno 3
FIGURA 2. Sistema de registro pletismográfico para evaluar la presión
arterial en roedores

14
FIGURA 3. Técnica quirúrgica para orquidectomía 16
FIGURA 4. Sistema para registrar parámetros hemodinámicos en el animal
consciente

20
FIGURA 5. Aorta torácica de rata disecada en una caja de Petri 22
FIGURA 6. Sistema de registro isométrico para tejido aislado 24
FIGURA 7. Comparación del aumento de la PAM (mmHg) entre el grupo de
ratas WKY ORQ respecto al grupo de ratas WKY ORQ + TES

31
FIGURA 8. Comparación del aumento de la PAM (mmHg) entre el grupo de
ratas WKY ORQ respecto al grupo de ratas W ORQ

32
FIGURA 9. Monitoreo de PAM (mmHg) hasta la semana 15 para las ratas de
la cepa W ORQ

33
FIGURA 10. Registro invasivo típico 35
FIGURA 11. Respuesta antihipertensiva de testosterona sobre la presión
arterial de la rata Wistar orquidectomizada

36
FIGURA 12. Registro isométrico típico 38
FIGURA 13. Porcentaje de relajación de la respuesta de testosterona 39
FIGURA 14. Comparación de la relajación de cada concentración de
testosterona en aorta sin endotelio y con endotelio

40
VI

LISTA DE ABREVIATURAS

~ Aproximadamente
ACh Acetilcolina
ADAM Androgen Deficiency in the Aging Male
(Deficiencia de Andrógenos en Adultos
Mayores)
ANOVA Análisis Normal de Varianza
β Beta
CaCl2 Cloruro de Calcio
CO2 Dióxido de Carbono
cm Centímetro
KCl Cloruro de Potasio
CI50 Concentración Inhibitoria Media
CICUAL Comité Institucional de Cuidado y Uso
de Animales de Laboratorio
Δ Delta
DEM Desviación Estándar Media
DHT Dihidrotestosterona
DE50 Dosis Efectiva Media
EEM Error Estándar de la Media
ETOH Etanol
Phe Fenilefrina
Fig. Figura
F.C. Frecuencia Cardiaca
°C Grados Celsius
g Gramo
h Hora
HTA Hipertensión Arterial
e.g. exempli gratia (por ejemplo)
et al et aliud, et alii ( y colaboradores)
i.e. Id est ( esto es)
i.p. Intraperitoneal
i.v. Intravenosa
Kg Kilogramo
KH2PO4 Fosfato de Potasio monobásico
L Litro
log Logaritmo
LH Hormona Luteinizante
≥ Mayor o igual que
± Más menos
MP Measure Pressure (Presión Medida)
µL Microlitro
µmol Micromol
VII

µM Micromolar
mg Miligramo
MgSO4 Sulfato de Magnesio
mmHg Milímetros de Mercurio
mM Milimolar
mL Mililitro
mN Milinormal
min Minuto
nmol Nanomol
NIH National Institue of Health (Instituto
Nacional de Salud)
n Número
NaCl Cloruro de Sodio
NaHCO3 Bicarbonato de Sodio
ORQ Orquidectomía
OMS Organización Mundial de la Salud
O2 Oxígeno
% Porcentaje
pH Potencial de Hidrógeno
PA Presión Arterial
PAD Presión Arterial Diastólica
PAM Presión Arterial Media
PAS Presión Arterial Sistólica
p Probabilidad
RA Receptor a Andrógenos
® Registrado
SRAA Sistema Renina-Angiotensina-
Aldosterona
SHR Spontaneously Hypertension Rats
(Ratas Espontáneamente Hipertensas)
s.c. Subcutáneo
TES Testosterona
UI Unidad Internacional
v/v Volumen/volumen
W Wistar
WKY Wistar Kyoto
1

RESUMEN
La testosterona, además de sus efectos masculinizantes, produce un efecto
vasodilatador en diferentes lechos vasculares de machos y hembras de varias
especies. En consecuencia a la vasodilatación que ejerce, podría inducir una
respuesta antihipertensiva, postulando que la deficienciade este andrógeno
podría disparar la hipertensión arterial (HTA). El objetivo de este estudio fue:
1) determinar si el desarrollo de la HTA está asociado con la disminución de
testosterona por disfunción testicular y si la HTA puede prevenirse con sustitución
de testosterona; 2) determinar si la testosterona produce una respuesta
antihipertensiva en ratas hipertensas sin función gonadal y; 3) evaluar el efecto
vasodilatador de testosterona en preparaciones libres de endotelio. Se utilizaron
ratas macho adultas normotensas de la cepa Wistar Kyoto orquidectomizadas
(WKY ORQ) y WKY ORQ tratadas con administración s.c. semanal de 8.7 mg/Kg
de propionato de testosterona (WKY ORQ + TES). Con fines comparativos entre
diferentes cepas, también se usaron machos Wistar orquidectomizados (W ORQ)
bajo el mismo esquema. Los parámetros hemodinámicos fueron censados
semanalmente por pletismografía antes de la ORQ (control) y semanalmente
durante al menos 10 semanas. En W ORQ con HTA establecida se evalúo la
respuesta de diferentes dosis (0.1-100 µmol Kg-1 min-1) de testosterona i.v. en el
animal consciente en libre movimiento mediante el método invasivo para medir la
presión arterial media. Asimismo, el efecto vasodilatador de testosterona se
cuantificó en anillos aórticos aislados de WKY ORQ sin endotelio vascular sobre la
contracción de KCl. Los resultados mostraron que la falta de testosterona por
ORQ produce un aumento significativo de la presión arterial tanto en ratas WKY
como en W, mostrando que no hay diferencia entre cepas, el aumento de la
presión arterial pudo ser prevenido con sustitución de testosterona. También se
observó que la testosterona produce una respuesta antihipertensiva en W ORQ
conscientes con HTA de forma dosis-dependiente (Dosis Efectiva 50; DE50= log
[5.2 ± 0.31] µmol Kg-1min-1, n=6). Además, la testosterona ejerció una acción
vasodilatadora en la aorta torácica (Concentración Inhibitoria 50; CI50 = 12.71 ±
1.01 µM, n=6) en ausencia de endotelio, semejante a la que produce en presencia
de endotelio. Se concluye que la deficiencia de testosterona por disfunción
testicular puede causar HTA, que puede prevenirse con sustitución de
testosterona; lo cual se explica por la respuesta antihipertensiva que produce esta
hormona en consecuencia de su efecto vasodilatador donde el endotelio no está
involucrado. Estos datos pueden ser considerados para el tratamiento de la HTA.

1. INTRODUCCIÓN

1.1. Generalidades
Las hormonas esteroides, son un grupo de lípidos derivados del
ciclopentanoperhidrofenantreno (Fig. 1), compuesto de 4 anillos de carbono
fusionados, con un total de 17 átomos de carbono. Las hormonas esteroides
conforman un grupo de compuestos lipófilos de señalamiento que controlan el
metabolismo, el crecimiento y la reproducción, se agrupan según el número de
átomos de carbono en: estrógenos con 18 carbonos; andrógenos con 19 carbonos
y; progestinas, glucocorticoides y mineralocorticoides con 21 carbonos (Koolman y
Röhm, 2004). Los esteroles son derivados isoprenoides cíclicos formados por 17
átomos de carbono dispuestos en tres anillos hexagonales y uno pentagonal, cuya
estructura básica o núcleo del esterano forma el esqueleto de importantes
sustancias biológicas entre las que se encuentran: colesterol; ácidos biliares y sus
sales; y hormonas esteroides. Las diferencias se deben a los distintos grupos
sustituyentes que se producen fundamentalmente en los carbonos 3, 11 y 17. Las
hormonas esteroides sexuales o gonadales, se sintetizan y liberan en los ovarios y
los testículos a partir de colesterol. En las mujeres se sintetiza mayoritariamente
estrógenos y progesterona, mientras que en los hombres se produce testosterona
y sus derivados.
3

Figura 1. El ciclopentanoperhidrofenantreno o esterano, es la estructura común de las
hormonas esteroides. La cual consiste en 4 anillos fusionados (A, B, C, D), con un total de
17 átomos de carbono.

Los andrógenos, conocidos como hormonas masculinas tienen entre sus
funciones: la masculinización del feto de los machos en desarrollo, la
espermatogénesis (fertilidad), la inhibición de la deposición de grasa, el aumento
de la masa muscular, el desarrollo de los caracteres sexuales masculinos y por
consecuencia el dimorfismo sexual (Gilbert, 2005). Los andrógenos, principalmente
la testosterona, se producen mayoritariamente en las células de Leydig de los
testículos y en menor medida en el hipotálamo, hígado, riñón, tejido adiposo
subcutáneo, en el músculo esquelético, en la corteza suprarrenal de las glándulas
suprarrenales y en los ovarios (Tsutsui, 2006).

1.2. Andrógenos y envejecimiento
La mayoría de las hormonas esteroides disminuyen con el envejecimiento.
Durante la última década ha crecido el interés y entusiasmo en relación al
conocimiento sobre la sustitución de una o más hormonas, que podría mejorar la
4

función y la calidad de vida en la vejez. Con el envejecimiento del hombre, el
mayor descenso de hormonas se observa con la testosterona biodisponible, que
se asocia, además, con una disminución de la calidad y cantidad de los
espermatozoides (Morley, 2001).
En hombres adultos sanos, los niveles plasmáticos de la testosterona son
de 11-36 nmol/L, mientras que la producción diaria es de 4-10 mg/día, de los
cuales el 95% son secretados por las células de Leydig testiculares bajo el
estímulo fundamental de la hormona luteinizante (LH) (Kaufman y Vermeulen,
2005). Durante la infancia (hasta los 12 años) los niveles de la testosterona en
plasma son bajos y oscilan entre 0.52 y 3 nmol/L. Sin embargo, durante la
adolescencia (13 a 18 años) se observa un claro aumento en los niveles
plasmáticos, que van de los 3 a 16.5 nmol/L hasta la adultez (Winter y Faiman,
1972). Mientras tanto, el envejecimiento masculino se acompaña de una
disminución progresiva de la testosterona plasmática, fenómeno denominado con
las siglas en inglés ADAM (Androgen Deficiency in the Aging Male). Esta
declinación es lineal, de 1% a 2% por año y comienza desde la adultez temprana
(4ta. década). Se ha registrado que el descenso de la testosterona total ha
oscilado entre 0.11 y 0.38 nmol/L por año (Harman et al., 2001).
La deficiencia de testosterona es una condición clínica común en la
senectud masculina, la cual contribuye a la pérdida de masa muscular, incremento
en la grasa corporal, inflamación, resistencia a la insulina, aumentan los riesgos de
padecer enfermedades cardiovasculares, disfunción sexual, fatiga, bajo estado de
ánimo y en general, una reducida calidad de vida. Sin embargo, con la terapia de
5

sustitución de testosterona todos esos trastornos son atenuados (Morley, 2001;
Traish, 2014). De forma notable, siendo de interés particular en el presente
estudio, la terapia de reemplazo de testosterona en hombres de la tercera edad
reduce los eventos cardiovasculares; disminuyendo la presión arterial sistólica y
diastólica en sujetos hipertensos bajo este tratamiento, indicando que la terapia de
reemplazo de testosterona en los hombres con deficiencia de testosterona produjo
una marcada y sostenida disminución gradual de la presión arterial sistólica y
diastólica (Haider et al., 2013; Saad et al., 2013).
Es ampliamente reconocido que la hipertensión arterial esencial o primaria
es uno de los más importantes retos en la salud pública mundial y de manera
notable, se presenta en adultos mayores. Esta enfermedad, aunque de etiología
desconocida, es considerada como un desorden multifactorial con muchos
factores genéticos, medio ambientales y demográficos que contribuyen a la
severidad del incremento de la presión arterial (PA). Es importante también
remarcar que existen datos que señalan que las hormonas esteroides gonadales
pueden también participar de manera importante en el aumento de la PA; lo cual
ha sido un aspectocontroversial para determinar un beneficio o daño de estas
hormonas, en el sistema cardiovascular.

1.3. Andrógenos y su relación con el sistema cardiovascular

Por el hecho de que en adultos mayores existe deficiencia de andrógenos y
aumento de la PA, una gran cantidad de estudios funcionales recientes se han
dirigido al estudio de la testosterona y han reportado que este andrógeno y
algunos de sus derivados son agudos vasorelajantes in vivo e in vitro en diferentes
lechos vasculares de animales y humanos; un efecto vasodilatador rápido y
reversible que es independiente de la interacción de la testosterona con los
receptores intracelulares de andrógenos (RA), el RA pertenece a la superfamilia
de receptores nucleares que actúa como un factor de transcripción inducido por la
unión de este a un ligando (andrógeno), siendo este complejo el que modula la
transcripción de los genes blanco; efecto androgénico, lo cual indica una acción
vasorelajante denominada de tipo no genómico (revisado por: Perusquía y
Stallone, 2010). Los efectos vasodilatadores de los andrógenos han sido
ampliamente estudiados y se ha quedado establecido que son esteroides
vasoactivos y su presencia impide la vasoconstricción periférica. De forma notable
estos efectos vasodilatadores no requieren la interacción con el RA (efecto no
genómico). Sin embargo, existen evidencias limitadas de que dicha acción
vasodilatadora de la testosterona tenga como consecuencia una respuesta
hipotensora y que esté vinculada con la regulación de la PA. A este respecto, se
ha documentado que los andrógenos 5-reducidos pueden inducir una respuesta
vasodepresora en la rata descerebrada y desmedulada (Perusquía y Villalón,
2002), un trabajo reciente también demostró que la infusión continua de
testosterona o de su metabolito 5β reducido son capaces de disminuir la PA en
7

ratas machos conscientes normotensas (Perusquía et al., 2015). De forma
colateral, se ha propuesto que los niveles bajos de andrógenos pueden influir en el
desarrollo de la hipertensión arterial, debido a que en hombres hipertensos se han
detectado niveles bajos de andrógenos (Khaw y Barrett-Connor, 1988; English et
al., 1997). Considerando en conjunto las evidencias anteriores, es razonable
proponer que los niveles bajos de andrógenos en sujetos hipertensos podría
parcialmente ser la causa del desarrollo de la hipertensión arterial, un grave
problema de salud pública que afecta a la población mundial. El presente estudio,
pretende contribuir al conocimiento de la etiología de la hipertensión arterial y
establecer el papel que juega la testosterona en la regulación de la PA.
Por otra parte, es pertinente mencionar que la PA es la fuerza que ejerce la
sangre contra las paredes de las arterias a medida que el corazón bombea la
sangre (Argente y Álvarez, 2008). La PA normal en adultos es de 120
mmHg cuando el corazón late (presión sistólica) y de 80 mmHg cuando el corazón
se relaja (presión diastólica). Cuando la presión sistólica es igual o superior a 140
mmHg y/o la presión diastólica es igual o superior a 90 mmHg, la PA se considera
alta o elevada (OMS, 2016).
La hipertensión arterial, es un trastorno en el que los vasos sanguíneos
tienen una tensión persistentemente alta, lo que puede dañarlos. Cuanto más alta
es la tensión, más esfuerzo tiene que realizar el corazón para bombear (OMS,
2016). Si no se controla, la hipertensión puede provocar un infarto de miocardio,
un ensanchamiento del corazón y, a la larga, una insuficiencia cardiaca. Los vasos
sanguíneos pueden desarrollar protuberancias (aneurismas) y zonas débiles que
8

los hacen más susceptibles de obstruirse y romperse (OMS, 2016). Además, la
hipertensión arterial es ampliamente reconocida como un importante riesgo de
salud pública y es la mayor causa de muerte y la segunda mayor causa de
discapacidad en el mundo (Orduñez, 2010).
El desarrollo de la hipertensión arterial se asocia con anomalías cardíacas y
vasculares funcionales y estructurales que dañan el corazón, los riñones, el
cerebro, los vasos, y otros órganos, y conducen a la morbilidad y muerte
prematura. Así, la causa de la hipertensión arterial es multifactorial y está
relacionada a la perturbación de la vía que regula la presión arterial a través del
Sistema Renina-Angiotensina-Aldosterona (SRAA) y el sistema autonómico. El
proceso inicia por la liberación de la hormona Renina liberada por el aparato
yuxtaglomerular ubicado en el riñon. La Renina es liberada a la sangre donde
actúa sobre el angiotensinógeno (péptido producido por el hígado) convirtiéndolo
en Angiotensina I, después por acción de la Enzima Convertidora de Angiotensina
(ECA; producida en el endotelio vascular de los vasos pulmonares) se encarga de
convertir la Angiotensina en Angiotensina II, una potente sustancia
vasoconstrictora que trae consigo el aumento en la PA. Indirectamente la
Angiotensina II actúa estimulando la Aldosterona (mineralocorticoide producido en
la glándula suprarrenal), que aumenta la reabsorción de Na+ y agua a nivel de
túbulo colector en el riñon y la excreción de K+ (Ganong, 2014).

2. JUSTIFICACIÓN

La disminución de la producción de testosterona debida a la disfunción
testicular en adultos mayores podría estar acompañada de muchos trastornos
durante esa etapa de la vida. Por lo tanto, es razonable proponer que los niveles
bajos de andrógenos en sujetos hipertensos podría parcialmente ser la causa del
desarrollo de la hipertensión arterial; además, debido a que la hipertensión arterial
incide mucho más en la vejez y, es uno de los problemas más graves en salud
pública, resulta importante establecer: (1) si la deficiencia de testosterona sería la
causa del desarrollo de la hipertensión arterial; (2) si la sustitución de testosterona
podría prevenirlo y/o revertirlo al producir una respuesta antihipertensiva directa
vía intravenosa. En relación a lo anterior, es de interés determinar si el efecto
vasodilatador in vitro de la testosterona es operativo en animales con deficiencia
de andrógenos y analizar la posible participación del endotelio vascular en este
evento. Estos hallazgos pueden representar una importante contribución al
conocimiento del papel que la testosterona pueda jugar en la regulación del flujo
sanguíneo.

3. HIPÓTESIS

Si la producción de testosterona está abatida por la pérdida de la función
testicular, entonces se espera aumento de la presión arterial que puede prevenirse
con la sustitución de testosterona. Se espera que la testosterona producirá una
respuesta antihipertensiva rápida y directa en animales conscientes que cursan
con hipertensión arterial producida por orquidectomía. Si la testosterona induce un
efecto antihipertensivo debe causar, a priori, vasodilatación.

4. OBJETIVOS
4.1 General:
Determinar si el desarrollo de la hipertensión arterial está relacionado con la
deficiencia de andrógenos y que la terapia de reemplazo de testosterona lo pueda
prevenir.
4.2 Particulares:
1. Utilizando a la rata macho orquidectomizada como modelo de
la deficiencia de andrógenos se pretende determinar si existe un
aumento, dependiente del tiempo de la orquidectomía, de la presión
arterial en ratas normotensas de diferente cepa.
2. Determinar si la terapia de reemplazo con testosterona puede
evitar que se desarrolle la hipertensión arterial inducida por
orquidectomía en ratas.
3. Analizar la respuesta directa de la testosterona sobre la
hipertensión provocada por orquidectomía en ratas macho conscientes.
4. Establecer si la testosterona puede provocar vasodilatación en
la aorta torácica aislada de rata macho con orquidectomía y explorar si
el endotelio vascular está involucrado en dicho efecto.

5. MATERIALES Y MÉTODOS5.1. Animales
Se utilizaron ratas macho normotensas de la cepa Wistar Kyoto (WKY) y
normotensas de la cepa Wistar (W) con un peso promedio de 250-300 g y, al
menos 18 semanas de edad. Las ratas WKY se obtuvieron del bioterio del Instituto
de Fisiología Celular de la UNAM y las ratas W del bioterio del Instituto de
Investigaciones Biomédicas de la UNAM. Las ratas fueron mantenidas en
condiciones de bioterio convencionales con alimento para ratas (LabDiet®) y agua
ad libitum.
Los animales fueron usados siguiendo la guía para el cuidado y uso de
animales de laboratorio, publicado por: The US National Institutes of Health (NIH
publication 86-23, revised 2014). Los protocolos experimentales de esta Tesis
fueron revisados y aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de
animales de laboratorio (CICUAL) del Instituto de Investigaciones Biomédicas,
UNAM.

5.2. Influencia de la orquidectomía sobre la presión arterial de ratas normotensas
Después de un periodo de adaptación de las ratas en el cuarto de animales
del laboratorio, se procedió a realizar el primer registro no invasivo de la PA,
considerado tiempo “CERO”, por el método pletismográfico con un sistema de
manguillo caudal para roedores adaptado a un equipo electrónico de medición LE
5002 Storage Pressure Meter marca PanLab HARVARD APPARATUS, España.
13

Previamente se aumentó la temperatura corporal del animal con la finalidad
de producir vasodilatación, en una jaula de poliuretano a 32°C durante 20 min con
ayuda de una fuente de calor; calentador de resistencia colocado
aproximadamente a 30 cm de distancia de la jaula y 2 lámparas de 60 Watts, la
temperatura en el interior de la jaula fue monitoreada con un termómetro de
mercurio para asegurarse de mantener una temperatura adecuada y constante de
32°C. Posteriormente cada rata fue introducida en un tubo de acrílico (26 x 7 x 6
cm) con la finalidad de restringir el movimiento de los animales durante la
medición y mantener la temperatura constante de 32°C dentro de la unidad de
aislamiento (PanLab), bajo estas condiciones se colocó el manguillo (tail cuff) en la
cola del animal, el cual fue conectado a un transductor que detecta y envía la
señal al aparato para registrar; presión arterial sistólica/diastólica y media en
mmHg, la evaluación se repite no más de cinco veces en cada rata para obtener
un promedio (Fig. 2) .
Las ratas WKY han sido usadas como control positivo de normotensión
para el modelo de ratas espontáneamente hipertensas (SHR). En esta cepa
(WKY) se realizó la orquidectomía bilateral para obtener el modelo de deficiencia
de andrógenos.

Figura 2. Sistema de registro pletismográfico para evaluar presión arterial en roedores. 1)
Aumento de la temperatura corporal de la rata en la caja de animales mediante lámparas
y calentador de resistencia; 2) Tubo de acrílico para restringir el movimiento de la rata; 3)
Manguillo fijado a la cola y conectado a sistema de registro para medición; 4) La
evaluación de los parámetros hemodinámicos se realiza al menos 5 veces en cada animal
para obtener un promedio.

1 2
3 4
15

5.3. Orquidectomía Bilateral
Los animales fueron anestesiados con 10 mg/Kg de Xilacina (Rompun®) y
80 mg/Kg de Ketamina (Anesket®) vía intraperitoneal. Una vez anestesiado el
animal, se procede a la palpación de ambos testículos en el área inguinal. La zona
de la cirugía se rasuró y posteriormente se realizó una incisión en el escroto de
aproximadamente 3 cm de longitud, quedando expuesta la túnica albugínea del
testículo e incidiendo sobre ella, hasta visualizar el cordón espermático.
Posteriormente, el cordón espermático fue ligado con hilo de seda (Surgical®;
calibre 000) asegurándose de que estuviera correctamente ocluido el flujo
sanguíneo, se cortó el cordón espermático con ayuda de tijeras de punta fina para
microcirugía, se procedió de la misma forma con el otro testículo. Una vez que se
retiraron ambos testículos se suturó la zona de la incisión con hilo de seda
(LOOK®; calibre 000000) con puntos simples y finalmente se le aplicó una
solución antiséptica para heridas (VeteriBac®) (Fig. 3).
Posterior a la orquidectomía, los animales se recuperaron en un tiempo
aproximado de 24 h, para que después fueran introducidos a su respectiva jaula
donde cohabitaron con el resto de las ratas orquidectomizadas del mismo grupo.

Figura 3. Técnica quirúrgica para orquidectomía. 1) Se realizó un pequeña incisión en el
escroto de uno de los testículos con tijeras para piel; 2) se extrajo el testículo con pinzas
planas; 3) se cortó el testículo justo debajo del nudo; 4) el otro testículo es extirpado de
igual manera.

1 2
3 4
17

Las ratas WKY orquidectomizadas fueron divididas en dos grupos. Grupo
WKY orquidectomizadas (WKY ORQ) y Grupo de WKY ORQ con tratamiento
sustitutivo de testosterona (WKY ORQ + TES). La PA fue registrada
semanalmente en ambos grupos durante al menos 10 semanas. En algunos
animales WKY ORQ se extendió el monitoreo de la PA por 15 semanas con la
finalidad de detectar si los cambios en la PA eran dependientes del tiempo de la
ORQ. Para descartar la variación entre cepas en el efecto de la ORQ sobre la PA
se utilizó un tercer grupo de ratas de la cepa Wistar orquidectomizadas (W ORQ)
evaluando también su PA durante al menos 10 semanas con fines comparativos
con la cepa WKY.

5.4. Tratamiento de reemplazo de testosterona
Inmediatamente después de la orquidectomía, el grupo designado como
WKY ORQ + TES recibió una administración s.c. semanal de 8.75 mg/kg de
propionato de testosterona disuelto y administrado en aceite de oliva extra virgen.
La dosis fue seleccionada con base en la terapia de reemplazamiento con dosis
fisiológicas y suprafisiológicas de testosterona para prevenir el daño causado por
la deficiencia de esta hormona (Rouver et al., 2015), como una terapia sustitutiva
de reemplazo de testosterona. Este tratamiento semanal duró todo el experimento,
i.e., al menos 10 semanas.

5.5. Evaluación de la acción directa de testosterona sobre la presión arterial por el
método invasivo

Después de 15 semanas de registro de la PA, los animales del grupo W
ORQ cuya presión arterial media (PAM) fue ≥ 135 mmHg (considerando que la
PAM normal es de 100 mmHg) fueron utilizados para determinar la respuesta de
testosterona directamente sobre la PA por el método invasivo en animales
conscientes. Estos animales fueron implantados con dos cánulas: en la vena
yugular para la administración de fármacos y; en la arteria carótida para registrar
la presión arterial y frecuencia cardiaca, este procedimiento se realizó bajo
condiciones asépticas en animales bajo anestesia con 10 mg/Kg de Xilacina
(Rompun®) y 80 mg/Kg de Ketamina (Anesket®) i.p. Inmediatamente se procedió
a colocarlo en la mesa de cirugía en posición de decúbito con el cuello y la nuca
previamente rasurados para la incisión. Se localizó la arteria carótida a la altura
del cuello, se realizó una retracción de los músculos y se expuso la arteria
carótida; para posteriormente, poder introducir la cánula, la cual fue fijada con dos
hilos de seda. Para la canulación de la vena yugular se realizó el corte en la piel
en el triángulo carotideo derecho para exponer la vena yugular interna, el mismo
procedimiento que se realizó para la canulación de la arteria carótida. Las cánulas
fueron pasadas subcutáneamente por el cuello para ser exteriorizadas en la parte
de la nuca. La incisión fue suturada (la piel y músculo) con hilo seda (LOOK;
calibre 000000). Finalmente se aplicóantiséptico tópico sobre las heridas marca
VirBac®.

24-48 h después del periodo posoperatorio, la PA fue registrada a través de
la cánula de la arteria carótida, la cual fue conectada a un transductor de presión
GOULD Statham (modelo P23XL, U.S.A.) para censar las señales mediante un
sistema analógico digital adaptado a un sistema MP150 (Biopac Systems Inc.,
CA., U.S.A). Previo al registro, ambas cánulas se mantuvieron totalmente fluidas
evitando la formación de coágulos, para ello es conveniente la administración de
solución de heparina 5000 UI/mL (Inhepar ®) para purgar las cánulas y verificar
la fluidez de ambos vasos sanguíneos cada 6 h.

Cuando el equipo se encontraba totalmente calibrado se procedió a iniciar
el registro, la cánula de la arteria carótida se conectó al transductor de presión y
se dejó correr el registro al menos 90 min para tomar un valor basal confiable de la
PA y frecuencia cardiaca (FC); Fig. 4.

Después de 60-90 min del registro (valores basales) de los parámetros
hemodinámicos (respuesta control): Presión Arterial Sistólica (PAS)/Presión
Arterial Diastólica (PAD), Presión Arterial Media (PAM) y Frecuencia Cardiaca (FC;
en Beats min-1 ) se procedió a la administración de testosterona a diferentes dosis
acumulativas (log de la dosis: -1, 0, 1, y 2 µmol Kg-1 min-1) disuelta en etanol
absoluto, administrado por la vena yugular con ayuda de una bomba de infusión
4
5 2
1
3

Figura 4. Sistema para registrar parámetros hemodinámicos en el animal consciente;
rata dentro de la caja de restricción (1), la cánula de la arteria carótida (2), sistema
analógico digital adaptado al sistema de registro MP150 (Biopac Systems Inc., CA.,
EUA) (4) y a una computadora (5). La cánula de la vena yugular (3) se conecta a una
jeringa para administración del fármaco con ayuda de una bomba de infusión.

(Marca: Kd Scientific, Modelo: KDS-100, U.S.A.). Las dosis fueron elegidas en el
mismo rango que se reportó previamente para el efecto hipotensor de testosterona
y 5β-DHT en ratas normotensas (Perusquía et al., 2015). La respuesta provocada
por testosterona sobre la PA y la FC fue observada durante al menos 15 min para
compararla con los valores basales. Después de la administración de la última
dosis de testosterona, el registro de los valores basales de PA y FC continuó al
menos 90 min.

Otros animales fueron considerados como grupo control del vehículo, en el
que se administró testosterona: etanol absoluto en un volumen equivalente de la
administración de cada dosis de testosterona y siguiendo el mismo esquema de
administración.

5.6. Experimentos de reactividad vascular para evaluar el efecto vasodilatador de
la testosterona

Un grupo de ratas WKY orquidectomizadas de 15 semanas, sin tratamiento
fueron sacrificadas por dislocación cervical, inmediatamente se procedió a abrir la
cavidad torácica para exponer la aorta torácica descendente y proceder a su
disección, la cual fue colocada dentro de una caja de Petri de doble pared (Fig. 5),
conectada a un baño recirculador para mantener la temperatura a 37°C. La caja
22

de Petri contenía una solución Ringer Krebs-Henseleit con la siguiente
composición (mM): glucosa (12), NaHCO3 (24.9), NaCl (119.5), KCl (4.74), KH2PO4
(1.18), MgSO4 (1.18) y CaCl2 (2.5); a 37° C y el pH se ajustó a 7.4 mediante
burbujeo constante de gas carbógeno (5% de CO2 y 95% de O2), realizando los
recambios necesarios para eliminar la sangre remanente. En la caja de Petri la
aorta fue limpiada cuidadosamente de los tejidos adyacentes (conectivo y adiposo)
con material quirúrgico de microcirugía (Fig. 5).

Figura 5. Aorta torácica de rata disecada en una caja Petri de doble pared conectada a un
baño recirculador para mantener la temperatura a 37° C en la solución Ringer Krebs-
Henseleit burbujeado constantemente con gas carbógeno. La aorta es limpiada y cortada
de anillos de 1 cm de longitud para introducir dos ganchos.

La aorta de cada rata fue dividida en cuatro anillos de 1 cm de longitud cada
uno; para retirar la capa endotelial de las preparaciones, cada anillo vascular fue
raspado cuidadosamente en su interior con ayuda de un hilo nylon trenzado con la
finalidad de retirar el endotelio vascular, posteriormente cada uno de los anillos
fue suspendido de forma horizontal utilizando dos ganchos de acero inoxidable en
forma de “L”, que fueron introducidos a través del lumen de los anillos aórticos de
manera contrapuesta (Fig. 5). Para realizar el montaje de los anillos aórticos en el
sistema de registro isométrico horizontal para tejido aislado, uno de los ganchos
fue fijado a la base de una cámara de incubación y el otro gancho se sujetó, con
ayuda de un hilo de seda (000), a un transductor de tensión (Grass Instruments,
FT03C), el cual detectó señales mecánicas del tejido y las transformó en señales
eléctricas que envió a un polígrafo de cuatro canales (Grass Instruments, modelo
79 ), la cámara de incubación contenía 10 mL de solución Ringer Krebs-Henseleit
normal a temperatura constante (37°C) mantenida con la ayuda de un baño
recirculador de agua y con un pH de 7.4, mantenido mediante burbujeo constante
de gas carbógeno (Fig. 6).

Figura 6. Sistema de registro isométrico para tejido aislado. 1) Cámaras de incubación las
cuales reciben un suministro de burbujeo constante de gas carbógeno; 2) Baño
recirculador de agua para mantener la temperatura a 37°C en las cámaras de incubación;
3) Transductores de tensión y; 4) Polígrafo.

Una vez que los anillos se montaron en el sistema de registro isométrico, se
sometieron a una fuerza de tensión de 1 g (10 mN), lo cual corresponde a 2 cm de
desplazamiento de la pajilla que se mantuvo durante todo el experimento, se dejó
transcurrir un periodo de estabilización (60 min) antes de comenzar el protocolo
experimental.

Antes de la prueba farmacológica para determinar la ausencia de endotelio
se realizaron dos contracciones, de 10 min cada una, inducidas por Ringer de
potasio alto (60 mM), este Ringer fue obtenido por la sustitución equimolecular de
3
2 4
1
25

NaCl 64.7 mM por KCl 60 mM. La contracción tónica sostenida que produce esta
solución despolarizante (KCl) fue tomada como control para verificar la viabilidad
del tejido. Después de 10 min de cada contracción, los tejidos fueron repolarizados
mediante un recambio de la solución despolarizante por Ringer Krebs-Henseleit
normal y cuando recuperaron su tono basal, se dejaron transcurrir 30 min antes de
inducir un segundo estímulo con la solución despolarizante (KCl 60 mM). Después
de esta prueba, se provocó una contracción con fenilefrina (Phe) 1 µM y, sobre el
tono sostenido de la contracción se adicionó acetilcolina (ACh) 20 µM para
observar si ACh provoca relajación, la cual es una respuesta relajante dependiente
del endotelio. Debido a que las preparaciones fueros raspadas para retirar el
endotelio, no se observó relajación de ACh dependiente del endotelio. Una vez
comprobada la ausencia de endotelio, se realizaron tres lavados con la finalidad
de retirar el compuesto con solución de Ringer Krebs-Henseliet. Los anillos
aórticos se dejaron recuperar durante 30 min posterior al lavado para comenzar
con la prueba de testosterona.

Para determinar la capacidad vasorelajante del tejido a testosterona, los
anillos aórticos fueron contraídos con Ringer de potasio alto (KCl 60 mM), una vez
que la contracción mantuvo un tono estable, se adicionaron las siguientes
concentraciones de manera acumulativa de testosterona: 0.1, 1, 10 y 100 µM. El
efecto de cada concentración sobre la contracción de KCl se registró hasta que ya
no hubiera modificación en la línea basal. Después de observar el efecto de laadición de la última concentración de testosterona se realizaron tres lavados
26

consecutivos con solución Ringer Krebs-Henseliet, retirando así todos los residuos
del compuesto. En cada anillo aórtico estudiado, el efecto inducido por cada una
de las concentraciones del andrógeno se evalúo durante aproximadamente 10
min, y se reportó en términos de porcentaje de inhibición (% de relajación) de la
contracción inducida sobre KCl.
Los datos fueron evaluados midiendo la amplitud (en cm) de la contracción
que induce el Ringer de KCl (control) y 10 min después (efecto) de la adición del
compuesto. Los efectos fueron presentados como porcentaje de relajación con
respecto al control. Además, en otros experimentos se realizaron las pruebas
correspondientes al vehículo (etanol absoluto) en el cual fueron disueltos los
andrógenos, aplicando cada concentración a un volumen final de 0.1% v/v sobre la
contracción de KCl.
Con los datos obtenidos se construyó la curva concentración-respuesta, los
datos fueron graficados, ajustando la recta mediante regresión lineal, para obtener
la concentración inhibitoria media (CI50; concentración del andrógeno requerida
para inducir 50% de relajación de la contracción inducida por KCl) del andrógeno.

5.7. Presentación de los datos y análisis estadístico
Los datos de experimentos de animales ORQ fueron presentados en mmHg
de la PAM. Los experimentos en ratas hipertensas conscientes se presentaron en
términos de disminución de la PAM en mmHg comparado con los valores basales
de la PAM antes de la administración de testosterona. Los datos de la aorta
torácica aislada de rata fueron reportados en términos de porcentaje de relajación
de la contracción inducida por KCl y la respuesta control (el 100% de la
contracción inducida por KCl) fue la amplitud de la contracción considerada justo
antes de adicionar la primera concentración de testosterona y comparado con la
amplitud de la contracción después del efecto de cada concentración a
testosterona. Todos los datos representan una media de n ≥ 6 animales ± error
estándar de la media (EEM), donde cada “n” representa a una rata de cada grupo
experimental (WKY orquidectomizadas = WKY ORQ, WKY ORQ con tratamiento
sustitutivo de testosterona = WKY ORQ + TES y Wistar orquidectomizadas = W
ORQ).
Con la prueba de “t de Student” no pareada (por ser muestras
independientes) se comparó: (i) aumento de la PAM a las 10 semanas de la
orquidectomía entre los diferentes grupos de ratas (WKY ORQ, WKY ORQ + TES
y W ORQ); (ii) la curva dosis-respuesta de la disminución de la PAM inducida por
la administración de cada una de las diferentes dosis de testosterona al
compararse contra el vehículo (etanol absoluto); (iii) el porcentaje de disminución
de la PAM en animales conscientes inducido por la administración de testosterona;
(iv) la respuesta del vehículo, en el cual fueron disueltos los andrógenos (etanol
28

0.1%), con el efecto vasodilatador inducido por cada una de las concentraciones
de los andrógenos y; (v) los valores en términos de porcentaje de relajación
inducidos por testosterona sobre la contracción de KCl en aorta torácica con
endotelio contra aorta torácica sin endotelio. Siendo valores significativos cuando
p < 0.05.
Se utilizó la prueba estadística de ANOVA de una vía, seguido del test
post hoc de Tukey para: (i) la PAM en los diferentes grupos de ratas (WKY ORQ,
WKY ORQ +TES y W ORQ) y; (ii) la curva concentración-respuesta de efecto
vasodilatador inducido por cada una de las concentraciones de testosterona sobre
la contracción de KCl en aorta torácica con endotelio contra aorta torácica sin
endotelio. El procesamiento de los datos fue analizado y graficado utilizando el
programa estadístico GraphPad PRISM® (Versión 6.01).

5.8. Compuestos utilizados
Cloruro de Acetilcolina (ACh) (A-6625 de SIGMA Chemical Co. EUA),
Hidrocloruro de Fenilefrina (Phe) (P6126 de SIGMA Chemical Co. EUA) los cuales
fueron disueltos en agua bidestilada y se mantuvieron en frasco ambar por ser
compuestos fotosensibles y a una temperatura de 4°C para evitar su degradación.
La testosterona (17β-hidroxi-4-androsten-3-ona) (C-4382 de SIGMA) fue disuelta
en etanol absoluto (Merck, México, S.A.) se mantuvo a una temperatura de 4°C
para evitar la evaporación del etanol absoluto. El propionato de testosterona (17β-
hidroxi-4-androsten-3-ona, 17-propionato) (T-1875 de SIGMA) fue disuelto en
aceite de oliva extra virgen y se mantuvo a temperatura ambiente.

6. RESULTADOS

6.1. Evaluación de la presión arterial en ratas macho orquidectomizadas
La deficiencia de testosterona por orquidectomía es un modelo
ampliamente utilizado en animales de experimentación. Se observó que la
PAS/PAD y PAM fueron gradualmente incrementadas después de la
orquidectomía en las ratas WKY. Con la finalidad de unificar la variación entre
PAS/PAD, en la Fig. 7 se ilustra el curso temporal del cambio de la PAM en
mmHg; mostrando un incremento cada semana después de la orquidectomía; sin
embargo, cuando se inició un tratamiento semanal de testosterona inmediato a la
orquidectomía (grupo WKY ORQ+TES) se previno tal incremento de la PAM, sin
ningún cambio significativo (p > 0.05) entre la semana 0 y la 10. Los valores
fueron significativamente diferentes (p < 0.0001) en las ratas WKY ORQ en
comparación con el grupo de las ratas WKY ORQ+TES a las 10 semanas de
orquidectomía.

Figura 7. Comparación del aumento de la PAM (mmHg) entre el grupo de ratas WKY
ORQ respecto al grupo de ratas WKY ORQ + TES. La comparación de los valores a la
semana 10 mostró un aumento significativo (*p < 0.0001). Cada símbolo en las curvas
representa n ≥ 6 ± EEM. La flecha representa el momento de la orquidectomía. La
semana “cero” son los valores iniciales de presión arterial.

Figura 8. Comparación del aumento de la PAM entre el grupo de ratas Wistar-Kyoto
orquidectomizadas (WKY ORQ) respecto al grupo de ratas Wistar orquidectomizadas
(W ORQ). En análisis mostró que no existe diferencia significativa en el aumento de la
PAM de cada cepa durante 10 semanas para el grupo de ratas WKY ORQ al compararlo
contra el grupo de ratas W ORQ. Cada símbolo en la curva representa n ≥ 6 ± EEM. La
orquidectomía, indicada por la flecha, se realizó después de conocer los valores iniciales
de presión arterial, la cual se consideró como semana “cero”.

Se continuó monitoreando la presión arterial en algunos animales del grupo
W ORQ hasta la semana 15 después de la orquidectomía, mostrando que la PAM
continúa incrementándose con una diferencia significativa (p < 0.05) entre la
semana 10 y la 15 (Fig. 9).
33

Figura 9. Monitoreo de PAM (mmHg) hasta la semana 15 para las ratas de la cepa Wistar
orquidectomizadas (W ORQ). La comparación mostró que la PAM aumenta
significativamente (*p < 0.05) entre la semana 10 y 15 después de la orquidectomía
indicada por la flecha. Los valores representan la media de n ≥ 6 ± EEM. La ORQ se
realizó después de conocer los valores iniciales de la PAM, la cual se consideró como
semana “cero”.

6.2. Respuesta producida por testosterona sobre la presión arterial de ratas
conscientes.
La testosterona provocó una disminución directa e inmediata de la PAM
después de cada dosis administrada en las ratas conscientes W ORQ, esta
respuesta hipotensora se mantuvo algunos minutos, con una recuperación casi
total de los valores basales originales después de 120 min de la administración de
la dosis más alta (Fig. 10). Los datos graficados muestran una respuesta
hipotensora de la testosterona que fue dependiente de la dosis, con una dosis
efectiva media (DE50), calculada por regresiónlineal que se ajustó al método
semilogarítmico con valor de log [5.2 ± 0.31] µmol Kg-1 min-1 (Fig. 11). Nótese que
después de la última dosis la PAM disminuyó más de 40 mm Hg. El vehículo
(ETOH absoluto) a la adición de volumen equivalente de cada dosis de
testosterona no tuvo un efecto significativo sobre la PAM y la respuesta
hipotensora de testosterona fue significativamente diferente (p < 0.05) a el ETOH.

Figura 10. Registro invasivo típico donde se muestran los valores en mmHg de la Presión
Arterial Media (PAM; valores basales) en ratas Wistar orquidectomizadas después de 15
semanas. Cada dosis de testosterona provocó disminución de los valores basales de la
PAM.

Figura 11. Respuesta antihipertensiva de testosterona sobre la presión arterial de la rata
Wistar orquidectomizada. A) Curva dosis-respuesta de disminución de la PAM (mmHg) a
diferentes dosis de testosterona, la Dosis efectiva media (DE50) en µmol Kg-1 min -1 fue
calculada por regresión lineal. B) Porcentaje de disminución de los valores basales de la
PAM (Control 100%) a las diferentes dosis de testosterona; diferencias significativas (*p <
0.05, **p < 0.001) al comparar con el control. Cada barra o símbolo representa n ≥ 4 ±
EEM. La respuesta de testosterona sobre la PAM fue significativamente diferente (p <
0.001) a la producida por el vehículo (etanol absoluto).
37

6.3. Efecto vasodilatador de la testosterona
Se observó que por ausencia de endotelio, la ACh no produjo relajación,
garantizando que las preparaciones son libres de endotelio. En los anillos aórticos
sin endotelio, la contracción inducida por KCl fue disminuida por testosterona en
forma dependiente de la concentración (Fig. 12), un efecto que fue
significativamente diferente a la adición de 0.1% de etanol (ETOH absoluto) para
cada concentración, la concentración inhibitoria media de testosterona, calculada
por regresión lineal y ajustándose al método semilogarítmico, mostró un valor de
12.71 ± 1.01 µM (Fig. 13).

Figura 12. Registro típico de la respuesta vasorelajante de la testosterona sobre el tono
de la contracción inducida por KCl. Las concentraciones se administraron de manera
acumulativa (panel superior). El lavado (L) es el cambio de la solución despolarizante por
Ringer en su composición original. El panel inferior muestra que el vehículo (etanol
absoluto) adicionado en un volumen equivalente a cada concentración aplicada de
testosterona (volumen constante de 10 µL, el cual corresponde a 0.1 % del volumen total
de la cámara) no modificó el tono de la contracción de KCl.

Figura 13. Porcentaje de relajación de la respuesta a Testosterona en el grupo de ratas
WKY ORQ sin endotelio sobre la contracción de KCl. El vehículo, etanol se adicionó a 10
µL por cada concentración, el cual representa 0.1% del volumen total de la cámara y no
modifica significativamente el tono de la contracción. El efecto de testosterona fue
significativamente diferente al del vehículo (*p < 0.05, **p <0.001). Cada símbolo en la
curva representa n ≥ 6 ± EEM. Concentración inhibitoria media (CI50) en µM.

Estos datos fueron comparados con el efecto vasodilatador de la
testosterona en aorta torácica aislada de rata con presencia de endotelio en
machos WKY (Datos no publicados del laboratorio) mostrando que no hay
diferencia significativa (p > 0.05) en presencia o ausencia de endotelio (Fig. 14).

Figura. 14. Comparación de la relajación de cada concentración de testosterona en aorta
sin endotelio (presente trabajo) y con endotelio (Datos no publicados del laboratorio).
Mostrando que no hay diferencia significativa (p > 0.05). Cada barra representa la media
de n ≥ 6 ± EEM.

7. DISCUSIÓN

El modelo de rata orquidectomizada es ampliamente aceptado para el
estudio de la deficiencia de andrógenos. Los resultados del presente estudio
revelan que la deprivación de testosterona por la orquidectomía de las rata macho
aumentó la PA y, puede ser uno de los factores que contribuyen en el desarrollo
de la hipertensión arterial, como parece que ocurre en hombres de la tercera edad.
Lo anterior es reforzado por el hecho de que la terapia de remplazamiento de
testosterona, en las ratas del presente estudio, pudo prevenir el aumento de la PA
después de la orquidectomía. Estos hallazgos fuertemente sugieren que los
niveles bajos de testosterona y el remplazamiento de testosterona, están
asociados con el desarrollo de la hipertensión y el mantenimiento de la PA normal
(normotensión), respectivamente. Sin embargo, se admite que algunos grupos de
investigación han reportado datos contradictorios: la orquidectomía disminuye la
PA (Iams y Wexler, 1977; Ganten et al., 1989; Cheng y Meng, 1991; Reckelhoff et
al., 1998; Reckelhoff et al., 2000); la terapia de remplazamiento con un andrógeno
anabólico incrementa la PAM en ratas Wistar (Bissoli et al., 2009); y la
orquidectomía de ratas Wistar no altera la PA sistólica, mientras que el tratamiento
con testosterona muestra incremento de la PA (Rouver et al., 2015). La primera
sospecha sobre estas controversias es que en el presente estudio se utilizaron las
ratas WKY, las cuales podrían ser más susceptibles al aumento de la PA que la
cepa Wistar que se han estudiado por otros grupos, sugiriendo así, una diferencia
entre cepas de la misma especie. Sin embargo, los presentes hallazgos descartan
esta posibilidad, debido a que la orquidectomía incrementa la PA tanto las ratas
42

WKY como las Wistar. No obstante, también deberá tomarse en cuenta que las
diferentes condiciones experimentales tales como: la edad del animal, el tipo de
andrógeno usado, la vía de administración, el tiempo para observar el efecto de la
hormona después de la orquidectomía, la forma de aplicación y régimen de
dosificación, etc., pueden también ser causa de las diferencias.

A favor de los resultados obtenidos en el presente trabajo, existen
numerosos estudios clínicos y epidemiológicos que han asociado los bajos niveles
plasmáticos de la testosterona con disfunción cardiovascular. Específicamente, en
hombres hipertensos los niveles en plasma de testosterona se encuentran
abatidos en relación con sus contrapartes normotensas, exhibiendo una
correlación inversa con la PA (Barrett-Connor y Khaw, 1988; Hughes et al., 1989;
Phillips et al., 1993; English et al., 1997; Simon et al., 1997; Khaw y Barrett-
Connor, 1998; Svartberg et al., 2004). Todos estos extensos hallazgos clínicos
han sugerido que la hipotestosteronemia puede ser un factor de riesgo para el
desarrollo de la hipertensión. Conjuntamente, también los resultados de este
estudio están apoyados por las evidencias existentes en relación al declive de la
testosterona por la edad avanzada y su clara relación con enfermedades propias
de la edad, llamado síndrome de deficiencia de andrógenos en hombres mayores,
ADAM (Morley, 2001). Entre estos trastornos destaca la hipertensión, obesidad,
síndrome metabólico, osteoporosis, incontinencia urinaria, pérdida de la fuerza
muscular, cambios de temperamento asociados con disfunción sexual, que
incluye, disfunción eréctil, eyaculación precoz y disminución de la libido.
Remarcablemente, también se ha reportado que la terapia de remplazamiento de
43

testosterona previene y reduce la severidad de estos padecimientos (Traish et al.,
2009; Wang et al., 2011; Corona et al., 2014; Isidori et al., 2014; Pongkan et al.,
2016). De tal manera, los datos de este trabajo son las primeras evidencias
experimentales que sustentan los resultados de numerosos estudios clínicos y
epidemiológicos, demostrando que la insuficiencia de testosterona es un factor
que influye en el desarrollo de la hipertensiónarterial, que puede ser prevenido
con el reestablecimiento de testosterona.

En forma notoria, con este trabajo se determinó que la testosterona es
capaz de disminuir directamente la hipertensión producida por la orquidectomía.
La administracion intravenosa de testosterona produjo una rápida y marcada
reducción de la PAM del grupo de ratas Wistar conscientes orquidectomizadas,
indicando que es posible que los andrógenos endógenos pueden contribuir a la
regulacion de la PA evitando el desarrollo de la hipertensión; asimismo, se
dislumbra que el tratamiento con andrógenos podría tener un valioso uso
terapéutico.

Los resultados obtenidos sobre una respuesta antihipertensiva directa de la
testosterona en el animal consciente sugieren, así, que los andrógenos pueden
jugar un papel muy significativo en la regulación de la PA, siendo inminente que
este hecho es el resultado del agudo efecto vasodilatador de la testosterona que
ha sido reportado en numerosos trabajos (Revisado en: Perusquía, 2003; Yildiz y
Seyrek, 2007; Perusquía y Stallone, 2010; Kelly y Jones, 2013).

En relación a lo anterior, fue posible comprobar que la testosterona también
produce vasorelajación en la aorta torácica aislada de ratas WKY macho
orquidectomizadas contraída con KCl. Es ampliamente conocido que el endotelio
vascular juega un papel muy importante en la regulación del tono vascular de los
vasos sanguíneos; por liberación de los factores relajantes y contráctiles derivados
del endotelio (Furchgott y Vanhoutte, 1989). A este respecto, existe una polémica
sobre la participación del endotelio en el mecanismo de la acción vasorelajante de
la testosterona (Perusquía y Stallone, 2010). En este estudio se observó que la
relajación inducida por la testosterona en la aorta sin endotelio es de igual
magnitud que en la aorta con endotelio (datos no publicados del laboratorio), lo
cual señala que el endotelio vascular no está involucrado en la relajación que
induce la testosterona en varios lechos vasculares, como se ha propuesto
anteriormente (Perusquía et al., 2007; Perusquía et al., 2012).

Referente a que la hipertension arterial es un problema de salud pública
mundial, el presente trabajo es una contribucion parcial al conocimiento para
esclarecer la acción de la testosterona y su relación con la PA, quedando
plenamente justificado que se requieren más estudios en este campo.

8. CONCLUSIONES

1. La deficiencia de testosterona por orquidectomía es un factor que influye
en el desarrollo de la hipertension arterial, la cual puede ser prevenida con el
reestablecimiento de la testosterona circulante por una terapia de reemplazo.

2. La administracion intravenosa de la testosterona produjo una rápida y
marcada reducción directa de la PAM en ratas Wistar conscientes
orquidectomizadas, confirmando que es posible que los andrógenos endógenos
contribuyan a la regulacion de la PA y el desarrollo de la hipertensión. Esta
respuesta antihipertensiva parece indicar que el tratamiento con andrógenos
podría tener un valioso uso terapéutico.

3. La testosterona también es capaz de producir vasorelajación sobre la
contracción inducida por KCl en la aorta torácica aislada de ratas WKY macho
orquidectomizadas con hipertensión.
a) Este hallazgo demuestra que la respuesta antihipertensiva de la
testosterona es resultado de la vasodilatación que induce.
b) El endotelio vascular no está involucrado en la relajación que induce la
testosterona.

9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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REFERENCIAS VIRTUALES

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hipertensión arterial?. Consultado el 10 de agosto de 2014.
http://www.who.int/features/qa/82/es/
Portada
Índice General
Resumen
1. Introducción
2. Justificación
3. Hipótesis
4. Objetivos
5. Materiales y Métodos
6. Resultados
7. Discusión
8. Conclusiones
9. Referencias Bibliográficas