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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MÉXICO Facultad de Química Estudio del posible efecto protector de una base nitrogenada y su nucleósido por medio de adsorción en arcillas minerales, expuestas a campos altos de radiación ionizante. TESIS QUE PARA OBTENER EL TITULO DE: Químico Farmacéutico Biólogo PRESENTA: ROMERO BUSTOS VICTOR HUGO DIRECTORA DE TESIS Dra. Alicia Negrón Mendoza. Ciudad Universitaria, Cd. Mx., 2017 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. JURADO ASIGNADO: PRESIDENTE: Dr. Juan Manuel Navarrete Tejero VOCAL: Mtro. Miguel Ángel Zúñiga Pérez SECRETARIO: Dra. Alicia Negrón Mendoza 1ER SUPLENTE: Dra. Elizabeth Reyes López 2DO. SUPLENTE: Dra. Martha Verónica Escárcega B. Sitio donde se desarrolló el tema: INSITITUTO DE CIENCIAS NUCLEARES. UNAM DEPARTAMENTO DE EVOLUCIÓN QUÍMICA. ASESOR DEL TEMA: Dra. Alicia Negrón Mendoza SUSTENTANTE: Victor Hugo Romero Bustos Agradecimientos A mí universidad, Universidad Nacional Autónoma de México, la cual me abrió sus puertas para vivir experiencias únicas e irrepetibles en la vida. Siempre estaré orgulloso de ser universitario. A la Facultad de Química, que a través del esfuerzo y convicción de sus docentes he logrado dar un paso más en mi desarrollo profesional. Me esmeraré por ser un ciudadano comprometido, preparado científica y socialmente con el desarrollo de nuestro país y con el cuidado de nuestro medio ambiente. A la Dra. Alicia Negrón Mendoza, gracias por poner a mi alcance un laboratorio tan completo, donde termine enamorándome aún más de mi carrera profesional y de la formación que me dio. Al Instituto de Ciencias Nucleares y a todo el personal administrativo que ahí labora, especialmente a la secretaria de departamento Liz Valle Rico, la secretaria de la unidad de radiación Reina Salazar Gutiérrez y a los físicos; Francisco García Flores y Benjamín Leal Acevedo. A la Q.F.B. Claudia Consuelo Camargo que me orientó y aconsejo durante la realización del trabajo experimental. Al Dr. Emilio Bucio por su apoyo y sus consejos, que hacían más ameno el tiempo en el laboratorio. Al Dr. Alejandro Heredia por estar tan comprometido con el departamento de Evolución Química, con el medio ambiente y con los alumnos más jóvenes. Al Dr. Sergio Ramos Bernal por compartirme un poco de su visión tan particular de la vida. A todos los compañeros de laboratorio de evolución química, especialmente a Saúl, Ellen, George, Adriana, Abi, Joao, Claudio, Nelly y Luci. A PAPIIT (proyecto IN111116) A José Rangel Gutiérrez del taller de manufactura avanzada Finalmente le doy gracias a remo y al triatlón: entrenadores y amigos, que me han forjado un estilo de vida basado en retos y con los cuales he aprendido a lo largo del tiempo, que la alterativa fácil siempre estará acompañándonos, susurrándonos al oído, detente o abandona, pero sabemos que cada paso que damos, cada pedaleada, cada brazada, cada remada, nos acerca más a la meta y que el rival más fuerte a vencer somos nosotros mismos. DEDICATORIAS A la vida, fuerza creadora, perfecta e infinita……. A ti, Lidia Bustos por tu lucha contra todas aquellas situaciones difíciles, por tu esmero, por tu perseverancia hacia el éxito, porque nunca te has dado por vencida, porque me diste la vida y porque me has educado para ser un buen hombre. Eres una triunfadora y un gran ejemplo, te amo mamá. A Gabriel Romero, gracias por el tiempo que me dedicaste, la disciplina y el respeto que me inculcaste, además de las lecciones vividas de trabajo duro y bien hecho. Te amo papá A mi abuelita Tere y mi tía Pili, ustedes son como mis segundas madres, gracias por tanto amor, cariño y por siempre tener fe en mí, este también es un logro suyo, las amo. A mis abuelos y abuelas: Armando, Pedro, Pillín, Lilia y Cuca, sus abrazos son o eran los mejores y sus consejos más valiosos que el oro, los amos viejos. A ti chaparrita, por permitirme entrar en tu vida y ser parte de tus sueños y metas. Por apoyarme cuando nadie más lo hace, por escucharme, por tolerarme, por creer en mí y en mi loca manera de pensar y vivir. Lo logramos mi cielo, vamos por más, te amo Fernanda Retana. A Ulises Romero, sigamos luchando y disfrutando de la vida, también va por ti hermano. A mi tía Teresita, mujer admirable, punto de inflexión en la familia y claro ejemplo de que querer es poder. A mi tía Lili y mis primas Mari y Lore, les agradezco todo el apoyo y esos momentos en familia tan divertidos que hemos vivido. A mi tío Polo, por escucharme y por tener confianza y fe en mí. A todos mis amigos del equipo de tri UBK, especialmente a Ray Estañol y a Charlie Gámez, que son como mis hermanos y mis secuaces, les estoy sumamente agradecido. A mis primos Adis Bustos y Rafa Retana, que siempre están cerca y pendientes de mí. A mi prima Marisol y sus hijos. A todos mis tíos, tías y primos Bustos, de los cuales he aprendido cosas maravillosas a través de la vida en el campo. A Oscar Retana y Paty Castañeda, gracias por sus consejos y por abrirme las puertas de su hogar. A ti Naomi, a tu hermosa sonrisa y a tu familia Ju, Edna y Jos, que son pura fortaleza. En general a toda mi familia, amigos y compañeros que son lo más valioso y preciado que tengo en la vida. Índice I. Resumen .............................................................................................................. 1 II. Introducción ......................................................................................................... 2 a. Misión del laboratorio de evolución química del Instituto de Ciencias Nucleares. UNAM. ............................................................................................... 2 b. Química de radiaciones. Historia ..................................................................... 3 c. Relevancia de la química de radiaciones aplicadas a diversas áreas de la ciencia. ................................................................................................................. 7 d. Interacción de la radiación con la materia. ...................................................... 9 i. El efecto fotoeléctrico ................................................................................... 10 ii. El efecto Compton ....................................................................................... 11 iii. Producción de pares................................................................................... 12 e. Origen de la vida. ........................................................................................... 14 i. Antecedentes ............................................................................................... 14 ii. Principios de la “química de la vida” ............................................................ 16 iii. Escenario prebiótico en la Tierra primitiva ................................................. 17 iv. Fuentes de energía ....................................................................................20 v. Fuentes naturales de radiación ionizante. ................................................... 21 f. Arcillas. ........................................................................................................... 23 i. Estructura general ........................................................................................ 25 ii. Fenómeno de adsorción sobre arcillas minerales ....................................... 27 iii. Montmorillonita ........................................................................................... 29 iv. Atapulgita ................................................................................................... 30 v. Hectorita ...................................................................................................... 31 g. Bases nitrogenadas y nucleósidos ................................................................. 33 i. Purinas y pirimidinas .................................................................................... 33 ii. Nucleósidos. ................................................................................................ 36 III. Objetivos .......................................................................................................... 38 a. General .......................................................................................................... 38 IV. Procedimiento experimental ............................................................................. 39 a. Fase α ........................................................................................................... 39 b. Fase β ............................................................................................................ 40 V. Materiales y Métodos ........................................................................................ 41 a. Materiales ...................................................................................................... 41 i. Reactivos .................................................................................................... 41 ii. Equipos e instrumentos de análisis ............................................................. 41 iii. Fuente radiactiva ........................................................................................ 42 iv. Limpieza de material .................................................................................. 42 b. Métodos ......................................................................................................... 43 i. Preparación de disoluciones acuosas de xantina y xantosina ..................... 43 ii. Curvas Patrón ............................................................................................. 43 iii. Pruebas de Adsorción ................................................................................ 44 iv. Pruebas de Desorción ................................................................................ 47 v. Exposición de arcillas a radiación ionizante ............................................... 48 vi. Análisis realizados sobre muestras irradiadas ........................................... 50 VI. Resultados Fase α ........................................................................................... 51 a. Caracterización de disoluciones control: ........................................................ 51 i. Detección de la longitud de onda de máxima absorción, mediante espectrofotometría de UV-Vis, barrido de 200-800nm. pH de las disoluciones igual a 2. ......................................................................................................... 51 ii. Detección de los tiempos de retención mediante HPLC. Y separación de moléculas de trabajo. ...................................................................................... 52 b. Curvas de adsorción de xantina y xantosina en montmorillonita de sodio, hectorita y atapulgita. ......................................................................................... 53 c. Pruebas de desorción. xantina y xantosina .................................................... 56 d. Caracterización general de arcillas por FT-IR. ............................................... 61 e. Tratamiento ácido y alcalino sobre arcillas. ................................................... 63 f. Espectros FT-IR de arcillas con moléculas en estudio adsorbidas ................. 66 “cargadas”. ......................................................................................................... 66 VII. Análisis y discusión de los resultados de la primera Fase (α) ......................... 70 a. Analitos. xantina y xantosina. ........................................................................ 70 b. Pruebas de adsorción .................................................................................... 72 c. Pruebas de desorción. ................................................................................... 76 d. Espectros FT-IR ............................................................................................. 80 VIII. Resultados Fase β. Pruebas de Irradiación ................................................... 84 a. Radiólisis de Xantina HPLC ........................................................................... 85 b. Radiólisis de Xantosina. HPLC ...................................................................... 86 c. Muestras sólidas irradiadas ............................................................................ 89 d. Suspensiones................................................................................................. 92 i. Sobrenadantes ............................................................................................. 93 ii. Desorción en Suspensiones ........................................................................ 95 e. Variaciones en la recuperación de moléculas orgánicas. .............................. 98 IX. Análisis de resultados fase β. Pruebas de irradiación. ................................... 101 a. Radiólisis de xantina y xantosina ................................................................. 101 b. Muestras solidas irradiadas. Análisis ........................................................... 106 c. Suspensiones. Análisis. ............................................................................... 107 d. Caso especial hectorita ................................................................................ 108 X. Conclusiones .................................................................................................. 109 XI. Bibliografía ..................................................................................................... 111 XII. Índice de Figuras .......................................................................................... 115 XIII. Índice de Tablas ........................................................................................... 117 1 I. Resumen El surgimiento de la vida en nuestro plantea es y seguirá siendo un tema intrigante para el ser humano cuando se aborda desde una perspectiva científica. El auge tecnológico de estas últimas décadas ha ofrecido herramientas que favorecen el estudio con mayor profundidad de aquellas teorías que proponen que lo que conocemos como vida, es el resultado de una constante evolución de la materia. Muchas son las variables que se han considerado al pasar el tiempo dentro de la evolución química dada la generación de nuevo conocimiento. En este contexto, la inclusión de superficies sólidas como los minerales arcillosos, se ha hecho casi necesaria, puesto que pueden favorecer reacciones químicas importantes o pueden proteger moléculas orgánicas simples en ambientes altamente energéticos, además, su datación posibilita su existencia en escenarios prebióticos. Por tal motivo, se evaluó la capacidad protectorafrente a radiación ionizante (rayos gamma), de tres diferentes minerales arcillosos: montmorillonita de sodio, hectorita y atapulgita, cuando estos han adsorbido una base nitrogenada y un nucleósido. La metodología nos permitió realizar una comparativa entre los efectos de la radiación ionizante sobre las moléculas estudiadas en disolución y estas mismas moléculas cuando están interactuando con los minerales arcillosos. Se emplearon técnicas de UV-Vis, FT-IR y HPLC, para determinar que las arcillas estudiadas pueden proteger la base nitrogenada de dosis de hasta 135 kGy, con porcentajes de recuperación cercanos al 96 % en el caso de la montmorillonita de sodio, en lo que respecta al nucleósido, su estudio se vio afectado por su alta susceptibilidad a la hidrolisis en condiciones de pH ácidos. Para finalmente concluir que la estructura de dichos minerales arcillosos es capaz de absorber y atenuar los fotones incidentes, sin afectar a todas las moléculas orgánicas previamente adsorbidas. Destacando su importancia en el campo de la evolución química. 2 II. Introducción a. Misión del laboratorio de evolución química del Instituto de Ciencias Nucleares. UNAM. La infinita curiosidad de nuestra especie por lo que ocurre a nuestro alrededor, nos ha llevado a descifrar los códigos ocultos que guarda la naturaleza, estamos empezando a entender de manera más íntima los procesos físicos y químicos involucrados en todo aquello que nos rodea, concebimos desde otra perspectiva nuestro pasado, presente e incluso podemos hacer ciertas predicciones objetivas de nuestro futuro. La labor científica es incesante, no se puede tomar un sólo respiro y evoluciona a una gran velocidad. Han pasado poco más de 500 años desde que Leonardo Da Vinci describe desde una serie de relaciones simétricas al cuerpo humano a través de su obra El hombre de Vitrubio. Por otro lado, a inicios del siglo 21 se ha logrado decodificar el genoma humano completo y con ello, podemos describir no solo aquello que nuestros ojos pueden ver, sino que estamos adentrándonos en el razonamiento de los mecanismos más fundamentales de nuestra existencia como organismos biológicos. Lo antes mencionado tiene la intención de poner en evidencia nuestra insaciable necesidad de respuestas, de conocimiento, de nuevas ideas que nos ayuden a entender quiénes somos y hacia dónde vamos, a través de la investigación, del avance tecnológico y, sobre todo a través del trabajo en conjunto con otros individuos a lo largo del planeta. El trabajo que se realiza en el laboratorio de evolución química es el resultado de la colaboración de distintas áreas científicas como: química, física, geología, biología y ciencias de la Tierra, y tiene como finalidad la realización de pruebas experimentales que tengan relación con las hipótesis acerca de cómo era nuestro planeta en sus primeros miles de años de formación y de cómo la materia pudo haberse ido transformado. 3 Tratamos de concebir la evolución, no solo con los conceptos darwinistas de adaptación y selección natural a los que estamos acostumbrados cuando se hace referencia a este término, sino como los posibles mecanismos o factores, que pudieron haber ido contribuyendo a que las moléculas permanecieran estables ante los hipotéticos ambientes tan hostiles, y que a su vez pudieran favorecer la complejidad de las mismas por medio de diversas interacciones. b. Química de radiaciones. Historia La química de radiaciones es una rama de la química que se relaciona directamente con los efectos químicos que pueden surgir debido a la interacción de la radiación ionizante con los materiales. El termino radiación ionizante en un amplio sentido es aplicado a fotones o a partículas que tienen la suficiente energía para ionizar las moléculas de un determinado medio. Esto abarca fotones con un intervalo de energía desde los 10 eV desde su primera energía de ionización hasta algunos millones (MeV), además de partículas energéticas cargadas, electrones, positrones, iones pesados acelerados, etcétera. En un sentido más estrecho sólo las radiaciones antes mencionadas son consideradas dentro de la química de radiaciones, cuyas energías son varios órdenes de magnitud superiores a las de los enlaces químicos. El resultado de la absorción de energía es el rompimiento o re arreglo de los enlaces químicos; en esencia, resulta la descomposición de algunas de las moléculas iniciales y la formación de algunas nuevas (Takács y Wojnárovits, 1995). Se puede decir que la química de radiaciones ha tenido su origen con el descubrimiento de los rayos X por Roentgen en 1895 y de la radiactividad por Becquerel el siguiente año. Los descubrimientos posteriores surgieron de las observaciones en las descargas catódicas y las sales de uranio respectivamente, que expusieron que los rayos pueden penetrar los materiales opacos y activar emulsiones fotográficas. También permitieron descubrir la conductividad eléctrica del aire y otros gases, por la producción de iones cargados. 4 Comparando la ionización producida por varios minerales y sales de uranio, permitieron el descubrimiento del polonio y el radio por Pierr y Marie Curie en 1898 (Mould, 1998). El descubrimiento de estos elementos y el aislamiento de radio en cantidades apreciables fueron muy importantes para el estudio de química de radiaciones, debido a que hicieron posible poseer una fuente poderosa de radiación ionizante. El campo de estudio relacionado con la química y la radiación antes mencionado permanecía sin nombre hasta 1942, cuando Milton Burton lo bautizó como “radiation chemistry” (Rollefson, 1946).. Hoy en día, la química de radiaciones contempla la parte física y química de la radiación, por un lado, y por otro la parte biológica de la misma. Lind y Day, (1961) , definen la química de radiaciones como la ciencia que estudia los efectos químicos que trae consigo la absorción de radiación ionizante por parte de la materia. Hay algo de evidencia indirecta que sugiere que los estudios de la radiación ionizante sobre la materia pertenecen al primer cuarto del siglo 19. En 1815, Berzelius estudio la emisión de luz por parte de materiales que contenían elementos radiactivos. En 1860, Andrews y Tait estudiaron el efecto de las descargas eléctricas sobre gases y en 1874, Thenard condensó acetileno gaseoso bajo descargas silenciosas. Más tarde Berthelot comprobó que tanto la formación y la descomposición de compuestos puede llevarse a cabo por descargas eléctricas. En 1899 los Curie fueron los primeros en publicar la coloración del vidrio y la porcelana, y la formación de ozono a partir de oxígeno, por medio de radiación. (Giesel, 1900), notó similitudes en los efectos producidos por la radiación y por los rayos catódicos en la coloración de algunos haluros, él también se adentró un poco en la descomposición del agua. Curie y Debierne (1901) siguieron la evolución de especies de oxigeno e hidrogeno, en disoluciones de sales de radio. Una de las investigaciones que incentivaron más el estudio de estos fenómenos radiactivos, fueron los análisis de reacciones inducidas por radón, de Ramsay y 5 Bragg (1907), en los cuales encontraron que la cantidad de moléculas descompuestas era casi igual al número de ionizaciones producidas por el radón en el aire. (Mozumder, 1999) Más tarde en 1917, Kailan comenzó a estudiar los efectos químicos producidos por radiación α y γ, sobre moléculas orgánicas. A mediados del siglo 20, Mund y colaboradores investigaron gases simples y tal vez fueron ellos los primeros en estudiar polímeros. En los años 1930´s, H Fricke realizo estudios sistemáticos del efecto de los rayos X sobre disoluciones acuosas y al mismo tiempo, realizó reacciones de polimerización a partir demonómeros simples que podían efectuarse por efecto de radiación X, γ y neutrones. Él también notó que el bombardeo de electrones cambia las propiedades de los polímeros, especialmente sus propiedades termales. Mucho del trabajo en química de radiaciones fue resumido por (Lind, 1961 y Mund, 1935). Durante la Segunda Guerra Mundial, se presentó un incremento en la actividad en el estudio de los efectos de la radiación sobre el agua y en general sobre disoluciones acuosas, del mismo modo se presentó un auge en los materiales relacionados con los reactores nucleares. Este incremento fue provocado principalmente por la necesidad de conocer los efectos de la radiación sobre materia biológica y también para posicionar los reactores nucleares en condiciones de operación. Estados Unidos a través del proyecto Manhattan incentivó la investigación y el desarrollo de tecnologías relacionadas con la radiación y sus efectos. En general durante el periodo post guerra, el estudio de la química de radiaciones cobró vigor y se centró en el entendimiento fundamental de la interacción de la radiación con la materia como principal objetivo. Alrededor de 1910, M. Curie sugirió que los iones eran los responsables de los efectos químicos de la radiación sobre la materia. Poco tiempo después por medio del trabajo de Lind sobre gases, se introdujo la notación M/N como expresión de una medida cuantitativa del efecto radiactivo, donde N es el número de pares iónicos 6 formados y M es el número de moléculas transformadas, ya sea creadas o destruidas. Esta notación hace referencia a la producción o rendimiento del par iónico y es mucho más empleada en gases donde N es una medida cuantitativa. Sin embargo, por algún tiempo esta notación se empleó indiscriminadamente incluso en sistemas condensados, asumiendo que la ionización no depende de la fase. La notación de G fue introducida por (Burton, 1947) y otros para denotar el número de especies producidas o destruidas por cada 100 eV absorbidos de radiación ionizante, esto a partir puramente de cantidades experimentales independientes de los mecanismos implicados o de bases teóricas. Del mismo modo Burton tiene el crédito por la introducción del símbolo ( ), que se lee como “bajo la acción de radiación ionizante”, sin la implicación de un mecanismo especifico. Dessauer (1923), propuso una teoría acerca de los efectos química-radiación, basados en el aumento de la temperatura como resultado de la energía absorbida, aunque fue descartada poco tiempo después debido a que este aumento local es demasiado pequeño y de muy corta duración. Finalmente, y omitiendo algunos sucesos históricos relacionados con la química de radiaciones, para abordar algunos aspectos teóricos necesarios. Magee y sus asociados, trabajaron durante los 50’s, en los mecanismos de absorción de energía, por medio de la ionización del electrón, seguido de la formación de radicales libres, a través de un proceso de disociación, para terminar con la formación de producto, por medio de la difusión y la reacción de intermediarios (Burton y Magee, 1972). Resumiendo, a lo largo de la historia la química de radiaciones ha buscado dar respuesta a los efectos de la interacción radiación-materia, sobre bases bien establecidas de física y química. Una de las primeras reacciones estudiadas fue acerca de la acción de la radiación sobre el agua. La cual descompone la molécula en una mezcla de especies de oxigeno e hidrogeno, esta reacción se denomina como radiólisis del agua. 7 c. Relevancia de la química de radiaciones aplicadas a diversas áreas de la ciencia. La química de radiaciones, al igual que otras disciplinas científicas, tienen un campo de aplicación muy variado, podemos mencionar al menos tres para la química de radiaciones: vida diaria, industria y conocimiento básico. En términos generales todo el planeta y lo que en él habita, se encuentra bajo un constante ambiente de radiación. De acuerdo con un estimado (Vereshchinskij y Pikaev, 1964), la tasa de exposición a radiación ambiental a nivel del mar es de alrededor de 1mR/día, donde 1 R (roentgen) es la dosis radiación X o γ, que produce 1 carga de unidad electrostática de cualquier signo en 1 cm3 de aire a temperatura y presión constante. Dentro de la vida cotidiana, lo antes mencionado podría considerarse como una exposición insignificante, aunque debemos considerar que la información sugerida para el año 1964 por Veresshinkii y Pikaev, debe de ser menor a la actual, debido al auge tecnológico de hoy día que produce mayor exposición a diversas formas de radiación y claro se debe de considerar el daño efectuado sobre la capa de ozono, que ha mermado su capacidad protectora frente a la radiación solar. Por otro lado, la dosis de radiación en diferentes etapas geológicas a lo largo de la historia debe de ser considerada como un fenómeno difícil de evadir. En este sentido es probable que la evolución genética del hombre se haya visto fuertemente influenciada por la radiación ambiental (Mozumder y Hatano, 2003). El entendimiento de los efectos que trae consigo la radiación en la biología, dependen directamente del estudio de la química de radiaciones como ciencia básica. A nivel industrial la radiación es considerada tanto como mecanismo de iniciación de reacciones, como fuente de conservación de las mismas. Por mencionar algunas de las actividades industriales que emplean una fuente de radiación como parte de sus procesos tenemos las siguientes: preservación de alimentos, curado de 8 pinturas, manufactura en la combinación madera-plástico, síntesis de etil bromuro, materiales de intercambio iónico, síntesis de varios copolímeros, materiales de terminado textil, esterilización de material hospitalario, etcétera. Un hecho en el que se debe de hacer especial énfasis es acerca de la gran importancia que tienen los experimentos en química de radiaciones, ya que podrían considerarse como invaluables, debido a que la energía que aportan las partículas a las moléculas es prácticamente inalcanzable mediante otras vías. La química de iones, estados excitados y radicales libres, proporcionan un estrecho acercamiento al entendimiento de la materia y sus interacciones, abordándolos desde una perspectiva no convencional de la química (Mozumder, 1999). Finalmente debemos de hacer una distinción entre la química de radiaciones y la radioquímica, esta última a diferencia de la química de radiaciones, que hemos estado describiendo, es la disciplina que se encarga del estudio de los elementos radiactivos. Por otro lado, también relacionada la fotoquímica en la que el límite superior que la distingue frente a las dos anteriores radica en la energía no mayor de 30-50 eV por parte de un fotón. 9 d. Interacción de la radiación con la materia. A continuación, mencionaremos ciertas consideraciones importantes en la química de radiaciones sólo de manera muy breve y omitiendo algunas fórmulas matemáticas para centrarnos en las bases teóricas. Como hemos señalado anteriormente, la química de radiaciones está enfocada en la interacción de partículas energéticamente cargadas; ya sean electrones, protones, partículas alfa y otras partículas pesadas, además de fotones de alta energía como lo son los rayos X y los rayos γ, con la materia. El resultado de esta interacción es la ionización del medio, claro considerando cierta excitación previa, por lo que a los rayos X y rayos γ, suele denominarse “radiaciones ionizantes”. Desde un punto de vista comparativo, podemos mencionar que los fotones del ultravioleta cercano y del visible, interaccionan con la materia generando estados excitados, pero sin llegar a ionizar el medio. (Fig. 1) Podemos entonces, referirnos a los fotones antes mencionados, como“energía no ionizante” y las reacciones químicas que generan obedecen principalmente al campo de la fotoquímica. Fig. 1. Esquema que muestra el comportamiento de un electrón en estado excitado y un electrón que deja el átomo. (ionización). Tomado de “Japan association of remote sensing,1996” 10 Para el correcto estudio de la radiación ionizante, es necesario el entendimiento de los procesos por los cuales este tipo de energía interacciona con la materia, sobre todo conocer cómo se transfiere al medio y como es absorbida, trayendo cómo consecuencia cambios químicos relevantes. Cuando los fotones de alta energía, (rayos X o rayos γ) interaccionan con la materia, la mayor parte de la energía es absorbida en el medio generando la expulsión de electrones a partir de los átomos del material. Este proceso depende principalmente de la composición atómica, y no así de la estructura molecular. La absorción de ondas de luz tales como: infrarrojo, luz visible, ultravioleta y rayos X ligeros, dependen primordialmente de la estructura molecular del medio y solo indirectamente de la composición atómica (Biaglow et al., 1987). Lo antes mencionado acerca de los efectos de absorción, ya sea sobre los átomos o sobre los enlaces estructurales de las moléculas, son fundamentales para la distinción de radiación ionizante y no ionizante. La ionización del medio por efecto de fotones de alta energía se puede efectuar mediante tres diferentes vías, y son el objeto principal de este apartado introductorio. i. El efecto fotoeléctrico Durante este efecto un fotón es absorbido completamente al tiempo que se expulsa un electrón. La energía cinética de este electrón expulsado es igual a la diferencia entre la energía del fotón y la energía de enlace del electrón en el átomo, de acuerdo con la ecuación de Einstein E=hע-IB, donde E es la energía cinética adquirida por medio de la expulsión del electrón, hע es la energía de un fotón del haz luminoso y IB es la energía de enlace del electrón al átomo. Una cantidad de energía insignificante es impartida al átomo residual, debido a que no todos los electrones del átomo poseen la misma energía de enlace, por lo que a la energía que resulta del electrón expulsado se le denomina fotoelectrón y puede variar. 11 Es sumamente importante señalar que, para que el efecto fotoeléctrico pueda efectuarse, el electrón debe de estar enlazado a una molécula o a un átomo, no es posible dar energía cinética a un electrón libre a través de este proceso, porque la energía y momento no pueden ser conservados si el fotón debe de ser absorbido completamente. Para fotones con energías superiores a 1 MeV, la contribución del efecto fotoeléctrico en el proceso de absorción total de energía es pequeña y puede no ser considerado. ii. El efecto Compton Esta otra vía que también efectúa la ionización del medio, en contraste con el efecto fotoeléctrico propone que sólo una parte de la energía incidente es absorbida para expulsar un electrón, “electrón de Compton”, durante el proceso el fotón incidente desaparece y uno nuevo se forma, pero, con menor energía, propagándose en una dirección diferente, este cambio de dirección es requerido para la conservación de la energía y momento después de la interacción. Las bases fundamentales de este efecto consideran la interacción de los fotones incidentes con los electrones que se encuentran en las capas exteriores, más débilmente unidos y para propósitos prácticos se les puede considerar electrones libres. Es necesario señalar que, para que esta consideración sea válida, la energía de enlace de estos electrones debe ser mucho menor que la de los fotones incidentes. De manera resumida el efecto Compton se considera como una colisión elástica entre un fotón y un electrón débilmente unido o sin unir. En el proceso el fotón pierde energía y el electrón es puesto en movimiento. Algunas teorías señalan que la distribución de la energía del electrón de Compton es muy alta y depende de la energía del fotón incidente. En agua y en compuestos orgánicos es el efecto más importante. 12 iii. Producción de pares En todo momento los efectos Compton y Fotoeléctrico, antes mencionados, consideran que la interacción es entre los fotones y lo electrones de los átomos, por su parte, la producción de pares contempla que la interacción se realiza entre los fotones incidentes con el núcleo, y tiene como resultado la desaparición por completo del fotón y la generación de un positrón y un electrón. Este es un ejemplo de un proceso físico en el que, la energía se convierte en masa. La energía mínima que debe de poseer un fotón para que ocurra la producción de pares, es de 1.02 MeV. A pesar de que los fotones posean esta energía, no se garantiza que el fenómeno ocurra. Por ejemplo, para los rayos γ emitidos por el 60Co y con un promedio de energía de 1.2 MeV por parte de los fotones, la probabilidad de producción del par electrónico es tan pequeña, que virtualmente la absorción de energía es mediante el efecto Compton. En el agua la producción de pares se vuelve significante con energías fotónicas de alrededor de 3MeV (Biaglow et al., 1987). Se puede concluir que independientemente del mecanismo en el que interaccionan los fotones, la generación de electrones secundarios es un fenómeno esencial, debido a que los cambios producidos en el medio son atribuidos a estas partículas. (Fig. 2) 13 Fig. 2. Efecto Fotoeléctrico, Efecto Compton y Producción de Pares. Modificado de http://www.chemicalbiological.net 14 e. Origen de la vida. i. Antecedentes Los sedimentos más antiguos se han encontrado en Groenlandia, las huellas o firmas isotópicas del carbono orgánico de estos metasedimentos otorgan evidencia indirecta de que la vida puede tener alrededor de 3.7 mil millones de años de antigüedad (Holser et al., 1988). Tomando la edad de la Tierra de aproximadamente 4.5 mil millones de años, podemos decir que la vida comenzó de manera temprana dentro de la historia de la misma. Las interrogantes relacionadas a quiénes somos, de dónde venimos y por qué estamos aquí, siempre nos han acompañado, pero en algún momento de nuestra historia estas preguntas fueron la esencia de corrientes filosóficas que dejaron huella, existieron grandes pensadores que debatían acerca de nuestro origen, de nuestras conductas y de nuestro porvenir, dejando a su paso grandes enseñanzas, aunque tal vez, no de carácter científico. El origen de la vida es un tema intrigante para muchos y sumamente sencillo e incuestionable para otros, y que puede ser abordado desde una perspectiva científica y/o filosófica; en este sentido tenemos en primera instancia a los científicos, que se esmeran por proponer hipótesis acerca del surgimiento y la evolución de la vida, y que consideran al tiempo y la materia como los factores determinantes en la transición de lo simple a lo complejo. Seguido de ellos, tenemos a una gran parte de la población mundial para los cuales las enseñanzas expuestas en textos sagrados son la única y absoluta verdad existente, en lo que al origen de la vida respecta. Las preguntas acerca del origen de la vida y las edades de la Tierra y el Universo no son nuevas, generaciones anteriores las han categorizado como piezas de un rompecabezas imposible de resolver. En algunos casos, la fe religiosa continúa consultando sus documentos sagrados acerca del “Génesis” en busca de respuestas. El registro fósil está visto como contradictorio para las tradiciones 15 religiosas, de este mismo modo son considerados los temas en los cuales se plantean formas de vida o especies diferentes sobre el planeta(evolución). (Seckbach, 2004). Por lo que, hasta el día dehoy, las preguntas siguen abiertas: ¿Cómo emergió la vida sobre el planeta? ¿Cuándo y donde apareció la primera forma de vida? ¿Cómo era la atmosfera en la Tierra primitiva? ¿Existen otros planetas que puedan albergar vida? ¿Es la Tierra el único planeta en nuestro sistema solar o incluso en nuestra galaxia donde ha emergido vida? ¿Hay un rol que considerar para las formas exógenas de vida sobre la biosfera? Muchos científicos consideran como escenarios plausibles para el origen de la vida, aquellos donde existen diversas y extremas fuentes energéticas tales como altas temperaturas y diversas fuentes radiactivas. Otros por su parte asumen que las primeras moléculas orgánicas fueron traídas a la superficie terrestre por medio de meteoritos y cometas, que prosperaron gracias a la formación de zonas de protección generadas en aguas profundas o sobre la superficie del planeta. A la fecha persisten algunos argumentos que indican que la composición química y la abundancia de ciertos precursores tales como el HCN, nucleótidos y otras moléculas reductoras, fueron las que dirigieron el proceso hacia la formación de las primeras formas de vida (Swenson, 1989). Para respaldar los argumentos mencionados en el párrafo anterior, mencionamos el surgimiento de la evolución química como una serie de procesos ocurridos en la Tierra primitiva y que hoy en día se ha convertido en una ciencia individual, que cobra mucha importancia debido a que se define como, la serie de procesos físicos y químicos que explican la formación abiótica de compuestos orgánicos de importancia biológica bajo condiciones geológicas primitivas, antes de establecerse lo que conocemos como vida (Negrón, 1993). 16 “Las reacciones que llevan al ensamblaje químico de moléculas prebióticas pudieron haber tomado lugar en “sopas primigenias” en “pequeños estanques calientes” o tal vez sobre la superficie de algunas arcillas.” (Seckbach, 2004). ii. Principios de la “química de la vida” Por un periodo de tiempo sumamente largo dentro de la historia moderna del ser humano, la teoría de la generación espontánea ofreció una respuesta aceptable, y parecía aquietar el enigma del origen de la vida. Pero gracias al riguroso procedimiento experimental de esterilización llevado a cabo por Pasteur en 1865, se eliminó totalmente aquella teoría casi divina, reabriendo la inquietante pregunta acerca del origen histórico de la vida. Unos años más tarde, en 1871 Charles Darwin nos acercó al enfoque moderno del origen químico de la vida mediante una carta dirigida a Hooker, “Si pudiéramos contener en algún pequeño y cálido estanque todo tipo de sales fosfóricas y de amonio, además de luz, calor, electricidad, etc., seguido de la formación de un compuesto proteico formado químicamente, listo para sufrir cambios más complejos, actualmente dicha materia seria absorbida o devorada instantáneamente, lo que no hubiera ocurrido antes de la formación de criaturas vivientes” . Esta revolucionaria idea paso algún tiempo sin trascender, hasta que, en 1924, el bioquímico ruso Aleksander Oparin señalo que la vida tuvo que haber surgido debido a la evolución de la materia, por efecto de la naturaleza reductora de la atmosfera. En 1928 el biólogo británico J.B.S Haldane, independiente al trabajo de Oparin, especuló sobre las condiciones primitivas adecuadas para el surgimiento de vida. Indica que la exposición de una mezcla de agua, dióxido de carbono y amoniaco a luz UV, produce una variedad de substancias orgánicas, incluyendo azúcares y algunos otros compuestos con los cuales se forman las proteínas. Casi veinte años después de la publicación de Haldane, Bernal (1949) supone que las superficies de algunas arcillas minerales estuvieron relacionadas en el origen de la vida. Stanley Miller (1953), publica la formación de aminoácidos tales como: glicina, alanina, acido aspártico y acido glutámico, cuando expone una mezcla de 17 metano, amoniaco y agua, a descargas eléctricas. Este trabajo fue el que abrió el terreno experimental a la química prebiótica. Las etapas secuenciales de la química prebiótica pueden ser los suficientemente probables, según las leyes físicas y químicas, para que sean observables en el laboratorio dentro de un periodo de tiempo razonable. Si ello es así, por lo menos algunos de los sucesos primitivos que condujeron al origen de la vida, pueden ser estudiados por métodos experimentales (Chamberlin y Chamberlin, 1908). A grandes rasgos es posible según algunos autores, describir el proceso de evolución química en tres etapas. En la primera etapa es posible que determinados grupos de moléculas orgánicas se acumularan en el mar primitivo debido a su fácil formación y a una estabilidad superior. Para la segunda etapa la evolución química consistiría en que un grupo específico de moléculas orgánicas serían más capaces de subsistir en forma de conglomerados o complejos, y no de manera aislada. Siempre encontrando formas termodinámicas más estables que las anteriores. Y finalmente durante la tercera etapa, algunos de los agrupamientos más complejos de moléculas orgánicas pudieron adquirir una función, tal como actividad catalítica o la capacidad de resistir cambios de su entorno o de modificarlo, y posteriormente aprendieron algún modo de replicación dependiente de un patrón primitivo. iii. Escenario prebiótico en la Tierra primitiva Antes de continuar con las características físicas propuestas en la Tierra primitiva, vamos a mencionar tres principios básicos que deben ser considerados para entender de una mejor manera los posibles escenarios prebióticos: continuidad, ubiquidad y robustez. Continuidad, aquellos modelos que demuestran más claramente una trayectoria evolutiva continua, que nos lleve desde los orígenes propuestos a las formas de vida existentes, se consideran más plausibles que los modelos que requieren o indican una discontinuidad entre el origen y las formas evolucionadas. Ubiquidad, de manera general condiciones ubicuas pueden ser consideradas mucho más plausibles que aquellas condiciones aisladas o de casos particulares, 18 a menos que se haga referencia a una situación especial, debido a que es necesaria, pero puede o debe ser debidamente fundamentada. Por ejemplo, un escenario marino, parece ser más plausible para un proceso biogénico que un sitio de agua dulce, simplemente porque los océanos se presentan de manera ubicua en la Tierra primitiva. Robustez, un modelo robusto es relativamente independiente de parámetros ambientales definidos de manera muy precisa. Los modelos plausibles para química prebiótica incorporan ingredientes comunes, que no precisan de una composición definida en su totalidad: dióxido de carbono, agua, nitrógeno, minerales de silicio, calor y energía solar. Los cuales debieron de haber prevalecido en abundancia en el escenario prebiótico. Podríamos pensar entonces que la vida en la Tierra sea el resultado de una imperceptible evolución fisicoquímica, y que se efectuaron un sinfín de experimentos de manera natural sobre el planeta, que llevaron a la formación de sistemas moleculares complejos, probablemente algunos de ellos tuvieron la capacidad de capturar energía para efectuar un rudimentario proceso de crecimiento, que pudo haber conducido a la aparición de las primeras células. Para tener una idea más o menos clara del proceso antes mencionado, es necesario tener una perspectiva general del posible ambiente físico en la Tierra en sus primeras etapas después de su formación, que contemple los muchos factores que pudieron haber estado presentes en esos momentos. Hasta el nivel de entendimiento con el que contamos hoy en día, todos los ambientes primitivos son especulativos y ciertamente no son las únicas posibilidades para responder los problemas bajo estudio (Negrón-Mendozay Ramos-Bernal, 1993). Es probable que el artículo de Chamberlin y Chamberlin en 1908 (publicado en Science), haya sido el primero en expresar una opinión informada acerca del ambiente prebiótico. En el que asume que, “los planetas de reciente formación debían contener carbono, azufre, fosforo y todos aquellos otros elementos encontrados en la materia orgánica, generando varios compuestos a partir de los 19 mismos”. También propone que la llegada de material extraterrestre pudo haber sido una fuente significativa de los elementos requeridos para la síntesis posterior de compuestos orgánicos. La vida en sus formas iniciales debió de originarse algún tiempo después de que la Tierra se enfrió lo suficiente para contener agua en estado líquido, este periodo de tiempo “El Arqueano”, debe de ser especulativo, aquellas hipótesis que puedan plantearse al respecto deben de ser producto del razonamiento deductivo (Seckbach, 2004). Retomando la importancia del agua líquida, podemos mencionar que tuvo un rol sumamente importante en cuanto a la aparición y evolución de la vida, gracias a que favoreció la difusión y el intercambio de moléculas orgánicas. El agua líquida posee muchas características, por ejemplo, sus moléculas pueden generar puentes de hidrógeno con moléculas orgánicas, generando situaciones prebióticas interesantes como la agregación estereoselectiva. Por otro lado, el agua líquida también pudo haber sido activa en química prebiótica, a través de la producción de arcillas y la disipación de la temperatura. Es además un poderoso agente hidrolítico y ofrece una gran cantidad de vías químicas disponibles frente a disolventes orgánicos. El agua líquida, por lo tanto, es considerada generalmente como un prerrequisito para el surgimiento de la vida sobre la Tierra. 20 iv. Fuentes de energía La existencia de fuentes naturales de energía es necesaria dentro de cualquier posible escenario prebiótico, debido a que son las responsables de efectuar la transformación de moléculas simples y precursores orgánicos en sistemas de mayor complejidad. El flujo y la interacción de la materia requiere de manera obligada fuentes constantes y eficientes de energía. Las fuentes energéticas más comúnmente consideradas en química prebióticas son: la radiación UV, descargas eléctricas, radiactividad, térmica (volcánica), ondas de choque y rayos cósmicos. (Tabla 1) Tabla 1. Fuentes de energía presentes en la Tierra Primitiva hace 4 Ga. Tomada de “Radioactividad como fuente significante de energía en síntesis prebiótica” (Garzón y Garzón.2001) Fuente J= joule, a= año, m= metro Flujo (Ja -1 m-2) Intensidad (Ja -1 m-3) Inventario (Energía disponible) (Ja -1) Radiación Solar UV (Total) 1.40 x 108 1.20 x 104 6.0 x 1022 UV (λ≤ 150) 7.1 x 104 6 3.0 x 1019 Descargas Eléctricas 1.7 x 105 14 7.0 x 1019 Rayos Cósmicos 60 5.00 x 10-3 2.0 x 1016 Viento Solar 8.00 x 103 0.7 3.0 x 1018 Ondas de Choque 4.60 x 104 4 2.0 x 1019 Volcanes 6.00x 103 0.5 2.0 x 1017 Radioactividad 1.17 x 105 1.17 x 102 1019 Radioactividad Corteza (vetas) 1.50 x 105 1.50 x 102 1.5 x 1019 (5.0 x 1020) Corteza (fallas) 106 103 3.0 x 1018 (1020) Depósitos- U (vetas) - 105 - Depósitos- U (fallas) - 7.00 x 105 - Podemos observar que la energía ofrecida por cada fuente puede variar algunos ordenes de magnitud, dependiendo principalmente del flujo y la cantidad de energía disponible. Aunque el hecho de que una fuente energética sea muy abundante, no 21 quiere decir que sea muy eficiente. Por ejemplo, la luz UV ha ganado terreno frente a la radiación ionizante, en lo que respecta a teorías relacionadas a la Tierra primitiva, debido a su abundancia, excluyendo la baja penetración que tiene en la materia; y con ello se opta más por estados excitados, que por moléculas ionizadas. Miller en 1986, mencionó que la luz UV promovía reacciones fotolíticas importantes para la evolución química, pero en la parte alta de la atmosfera. Por su parte, diferentes autores, entre ellos: Ponnamperumma, Negrón y Draganic´, han tratado de posicionar a las fuentes de radiación ionizante, algunos peldaños más arriba en su importancia, a través de experimentos que tienen como sustento el empleo de radiación gamma, que es mucho más penetrante, en términos energéticos, que la luz UV y que pudo prevalecer sobre la superficie del planeta. Por su parte, las descargas eléctricas son una de las fuentes energéticas más empleadas en los laboratorios de evolución química, debido a su alta eficiencia en reacciones de síntesis abiótica en atmosferas reductoras. (Hodgson y Ponnamperuma, 1968). La energía producida por el impacto de cuerpos celestes sobre la superficie del planeta ha tenido importancia en la síntesis de aminoácidos y ácidos carboxílicos (Negrón-Mendoza et al., 1995). En cuanto a la energía térmica, se cree que su eficiencia pudo haber sido baja, debido a la necesidad de enfriar de manera rápida los ambientes en los que esta fuente haya intervenido (Hart, 1978). v. Fuentes naturales de radiación ionizante. La radiactividad natural tiene su origen a partir de radionúclidos primordiales y sus productos. Estos están distribuidos en suelos, rocas y en la hidrosfera. Violentos procesos nucleares en las estrellas fueron los responsables de la creación de los mismos y fueron incorporados a la Tierra hace aproximadamente 4500 millones de años. 22 Desde su formación, nuestro planeta ha estado permanentemente expuesto a radiación ionizante de origen terrestre y extraterrestre. Las fuentes de radiación ionizante consisten principalmente en la energía emitida durante el decaimiento de diversos radionúclidos tales como 40K, 232Th,235U. De hecho, se calcula que la energía radioactiva en la Tierra primitiva era 3 o 4 veces mayor, que la que se puede registrar hoy en día. A través del decaimiento radiactivo es posible inferir la presencia de los grandes niveles de radiación en el pasado. Nucleídos radiactivos como el 40K están distribuidos en la corteza terrestre especialmente en rocas, arcillas y en los océanos. Las fuentes extraterrestres son las originadas principalmente por rayos cósmicos. (Tabla 2.) Tabla 2. Fuentes radiactivas de origen Terrestre. (Tomada de Draganic¨ et.al. 1991) Fuente Radioactiva Tiempo de vida media / Comentario Abundancia isotópica relativa en T. Primitiva (4.6 x109 años) 40K 1.28 x109 0.145 232Th 1.39 x109 235U 0.71 x109 25.990 238 U 4.5 x109 74.020 244 Pu 4.5 x109 Reactores Nucleares Naturales 1 (Fuente Probable) Los mismos radioelementos y radiaciones que en los reactores artificiales Elementos superpesados con Z= 114 (Fuente Posible) Tiempo de vida media alrededor de 108 – 109 Finalmente es sumamente importante mencionar que la interacción entre la radiación de alta energía con la materia produce estados excitados y ionización. En 23 etapas subsecuentes hay degradación, así como almacenamiento y transferencia de energía dentro de superficies sólidas. Por lo que su estudio y consideración dentro de la química prebiótica es de vital importancia. Esta importancia radica en la alta eficiencia propia de la radiación ionizante para la síntesis de compuestos orgánicos (Draganić et al., 1991). f. Arcillas. Generalidades e importancia en el contexto de evolución química. En un sentido amplio, una arcilla es cualquier material microcristalino compuesto de pequeñas partículas en forma de placas, que van en un intervalo desde algunos micrones2 hasta cientos de micrones de diámetro, dichas placas están a su vez formando una extensa capa. La estructura cristalina de cada unidad de la capa consiste en hojas tetraédricascoordinadas de silicio SiO44- en combinación con hojas octaédricas de Aluminio o Magnesio (Swartzen-Allen y Matijevic, 1974). La mayoría de ellas son productos de síntesis, así como también de degradación. Su formación es principalmente un re ensamblaje de unidades derivadas de erosión de rocas. Al igual que muchas otras variables propuestas en los escenarios geológicos de la Tierra primitiva, el papel de las arcillas minerales sigue siendo discutido en cuanto al rol que hayan podido desempeñar. Aunque actualmente los resultados experimentales relacionados con las mismas ofrecen conclusiones objetivas dentro del laboratorio en cuanto a los efectos que las arcillas pueden traer consigo a consecuencia de su interacción con la materia. El estudio teórico y experimental de los escenarios geológicos referidos a Tierra primitiva han llevado a proponer de manera casi necesaria la inclusión de superficies solidas dentro del panorama prebiótico, puesto que son importantes para favorecer reacciones químicas mediante diferentes mecanismos. En el caso particular de los minerales arcillosos, son consideradas como posibles reactores químicos en 24 síntesis prebiótica, aunque aún quedan muchas preguntas por resolver asociadas a esto (Negrón y Bernal 1993). Entre las superficies más importantes están los silicatos, carbonatos, sulfatos y en particular, las arcillas (Lahav y Chang, 1982), indispensables para la organización de biomoléculas, que posteriormente formarían sistemas moleculares más complejos. Por su parte, la interacción de moléculas orgánicas con arcillas minerales ha sido abordada por diferentes grupos de estudio, con diferentes propósitos. (Billingham et al., 1996). 1 Las arcillas son minerales ubicuos sobre la Tierra y es muy probable que su formación haya tenido lugar en etapas muy tempranas sobre nuestro planeta. Análisis sobre el sedimento de Isua1, mostró arcillas metamórficas de al menos 3.8 x109 años de antigüedad (Moorbath, 1995). Mientras que diversas arcillas se formaron probablemente sobre los continentes en el Arqueano, el área más grande de formación de arcillas pudo haber sido el fondo del mar. Por su parte, el trazado geológico de las esmectitas data de 3000 a 4000 millones de años (Odin y Fullagar, 1988). En un artículo publicado por J.D. Bernal en 1949, el autor destaca el posible rol de las arcillas minerales en la síntesis prebiótica y les atribuye las siguientes funciones: - Concentran materia orgánica diluida en el océano. - Catalizan polimerizaciones a partir del material adsorbido - Protegen frente a luz ultravioleta o cualquier otra fuente energética. 1 Isua, cinturón rocoso ubicado al oeste de Groenlandia. Sus investigaciones han llegado a publicaciones en Nature relacionadas a los fósiles más antiguos encontrados. 25 i. Estructura general Las pequeñas unidades moleculares de ácido silícico [Si(OH)4] y cationes metálicos hidratados [M(H2O)nm+], son los constituyentes básicos de la mayoría de las arcillas, estos son producidos en soluciones diluidas debido a la erosión de materiales de amplio contenido en aluminosilicatos, que se regeneran así mismos a través del proceso geológico. El proceso de formación de arcillas es muy lento, pero las cantidades producidas son muy grandes. Las hojas tetraédricas son el resultado de la unión entre esquina y esquina con iones de oxígeno, un arreglo que es óptimo para el apantallamiento de la carga positiva producida por los iones Si4+ en los centros del tetraedro. (Fig.3) La hoja octaédrica se construye a través de la unión entre bordes de cada capa, lo que ocasiona que los cationes metálicos estén más próximos unos de otros, frente al caso de la hoja tetraédrica. (Fig.4). Fig.3.: a) Tetraedro de Sílice; b) Hoja tetraédrica de sílice; c) Esquema extendido de la hoja tetraédrica. Tomado de http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx 26 Fig. 4. Octaedro y Capa Octaédrica. Tomado de http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx Los estudios electrocinéticos de las arcillas muestran que a valores de pH cercanos a 2, las partículas llevan una carga neta negativa en el espacio entre cada capa de sílice, llamado espacio interlaminar. El origen de la carga negativa se debe a diversos factores: sustitución isomórfica, imperfecciones en la red, ruptura de enlaces y la exposición de grupos estructurales hidroxilo. La distancia del espacio interlaminar depende de la cantidad de agua o del material orgánico intercalado. Esta carga negativa es compensada con la presencia de contraiones positivos, los más abundantes son Na+, K+ y Ca2+. (Jogun y Zukoski, 1999). Existen tres unidades estructurales más comunes para la clasificación de arcillas minerales: Arcilla tipo 1:1, T-T. Arcilla tipo 1:1, T-O y Arcilla tipo 2:1, T-O-T. (Fig. 5,6 y 7) Fig. 5. Arcilla Tipo 1:1, T-T. Tomado de http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx 27 Fig. 6. Arcilla Tipo 1:1, T-O. Tomado de http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx Fig.7 Arcilla Tipo 2:1, T-O- T. Tomado de http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx ii. Fenómeno de adsorción sobre arcillas minerales Adsorción es el proceso a través del cual ocurre una acumulación neta de una substancia en el límite común que existe entre dos fases contiguas. 28 El mecanismo de adsorción de moléculas orgánicas con arcilla es un fenómeno complejo, donde diferentes procesos pueden tener lugar: puentes de hidrogeno, ion- dipolo o fuerzas de van de Walls. Pueden también ocurrir procesos de formación de complejos con los contraiones de la arcilla o simplemente efectuarse un intercambio catiónico (Swartzen-Allen y Matijevic, 1974). Debido al exceso de carga en la superficie de las arcillas, estas actúan como intercambiadores iónicos naturales y promueven la adsorción. La adsorción depende de: la concentración inicial en equilibrio con el sorbato, la naturaleza de la molécula y su forma, pH de la solución, el metal en el sitio de intercambio, fenómenos de coadsorciòn, tipo de arcilla, metales asociados y la cantidad de moléculas de agua (Negrón-Mendoza y Albarrán, 1993). La adsorción de una variedad de compuestos como aminoácidos, bases nitrogenadas y sus derivados, ácidos carboxílicos y azúcares han sido materia de muchos estudios (Theng, 1974). El mecanismo principal para la adsorción en arcillas obedece al intercambio iónico, aunque las interacciones ion-dipolo y puentes de hidrogeno también toman lugar en el proceso. La adsorción de bases nitrogenadas y sus derivados en arcillas minerales han sido estudiadas ampliamente. Algunas observaciones generales para las bases nitrogenadas y sus derivados son: - La adsorción es dependiente del pH - La adsorción es mayor a pH ácido y decrecen considerablemente a pH por encima de 6. - Las purinas se adsorben más que las pirimidinas - Los nucleósidos se adsorben en menor cantidad que sus respectivas bases- - Las bases son mayormente adsorbidas en el espacio interlaminar. (Negrón-Mendoza et al., 1996) 29 iii. Montmorillonita La Montmorillonita es una arcilla perteneciente al grupo de las esmécticas, tipo 2:1 T-O-T. La cual consiste en 2 hojas tetraédricas sobre una octaédrica, asemejando un sándwich. (Fig.8) Tabla 3. Composición química de la montmorillonita La Montmorillonita de sodio es la arcilla más común, debido a que la concentración de este ion en los océanos es superior frente a otros. En términos generales esta arcilla, puede actuar como una matriz de intercambio catiónico, debido a la sustitución de los iones que se encuentran en el espaciointerlaminar. El hinchamiento producido en estas arcillas se debe a la entrada de agua en el espacio interlaminar (Rao y Jessup, 1983). Cabe destacar que no sólo puede entrar agua o diversos iones al espacio interlaminar, moléculas orgánicas o polares pueden encontrar cabida, dependiendo de sus características fisicoquímicas, por lo que esta arcilla en algunos casos es también una matriz de adsorción de moléculas orgánicas, a través de interacciones ion-dipolo, puentes de hidrógeno y fuerzas de van der Walls (Prego et al., 2009). Componente Peso (%) SiO2 49.40 Al2O3 19.70 MgO 0.27 CaO 1.50 Fe2O3 0.30 Na2O 1.50 H2O 25.67 Fig.8 Estructura de Montmorillonita. A pH menor a 8 el canal interlaminar posee carga negativa, mientras que las orillas de la estructura poseen carga positiva. 30 Tabla 4. Composición química de atapulgita En la actualidad el uso de montmorillonita ya sea de sodio o de calcio, es ampliamente usada en diferentes actividades industriales, que van desde farmacéuticos hasta agrícolas. Por ejemplo, en agricultura se emplea para la purificación de suelos, a través de la adsorción de pesticidas. iv. Atapulgita Las atapulgitas forman parte de un grupo de minerales denominado Paligorsquitas; particularmente frecuentes en sedimentos acumulados en lagos secos, zonas desérticas y sedimentos de origen marino sometidos a intenso lavado o que sufrieron alteración hidrotermal. Son silicatos cristalinos hidratados de aluminio y magnesio con una estructura única en forma de cadena, que le confiere excelentes propiedades coloidales y de adsorción. La estructura general forma una pared de canales, donde cada ladrillo contiguo está perdido. Esta arcilla no puede hincharse debido a sus cadenas tridimensionales y forma estructuras de aguja. Posee un área superficial de 167m2/g, lo que la hace altamente adsortiva (El-Mofty et al., 2008). Fig. 9 Estructura de Atapulgita. Modificado de https://pubs.usgs.gov Componente A (%) B (%) SiO2 53.64 55.03 TiO2 0.60 n.d. Al2O3 8.76 10.24 Fe2O3 3.36 3.53 FeO 0.23 n.d. MnO 0.03 n.d. MgO 9.05 10.49 CaO 2.02 - Na2O 0.83 n.d. K2O 0.75 0.47 P2O5 0.79 n.d. H2O + 10.89 10.13 H2O - 9.12 9.73 A: Análisis por De Lapparent (1935) B: Análisis por W.F. Bradley (1938) 31 Se considera que, dentro de la estructura de esta arcilla, existen moléculas de agua alojadas en los canales, constituyendo agua zeolìtica3, agua de cristalización4 coordinada alrededor de los iones aluminio o magnesio de la capa octaédrica y grupos OH pertenecientes a la red del silicato (Álvarez-Estrada y Conde, 1967) (Fig. 9) La estructura de la arcilla, su naturaleza como intercambiador de cationes y la presencia de otros elementos, son factores importantes que afectan la interacción, molécula orgánica- arcilla. En general, las superficies de las arcillas con una alta carga en su superficie resultan ser excelentes sitios de interacción con moléculas orgánicas. La exposición de grupos OH-, en la superficie de las fibras de atapulgita, pueden cumplir con este propósito (Yuan et al., 2008). Su estudio en lo que se refiere a evolución química, radica en la posible presencia arcillas de este tipo en ambientes hidrotermales, que pudieron ser comunes en el Arqueano (Fowler and Tunnicliffe, 1997). v. Hectorita Es la esmectita trioctaédrica que se caracteriza por contar con un soporte de litio, debido a que contiene a este ion y al Mg como cationes principales en la capa octaédrica. Esta arcilla ha sido estudiada por varios investigadores por su contenido mayor al 1.0 % en Li2O (Ross y Hendricks, 1945). No se ha determinado un porcentaje mínimo de contenido de litio para denominarla como hectorita (April, 1981). Se consideran dos posibles vías de síntesis natural de esta arcilla: (1) alteración hidrotermal y (2) precipitación en depósitos lacustres con altos contenidos alcalinos. Ames et al., (1958), sugieren que la hectorita se formó en las últimas etapas de actividad hidrotermal con alto contenido de flúor y litio. (Shawe, et al., 1964), publicaron el estudio de una montorillonita rica en litio, en zonas hidrotermales 32 afectadas por ceniza volcánica. El origen de esta arcilla no se ha determinado concretamente, aunque es posible que haya sido formada principalmente en sitios afectados por ceniza volcánica. Fig. 10 Estructura T-O- T, Hectorita, mismo arreglo que la Montmorillonita, pero con sustitución de Li por Mg. http://www.pubstemcell.com A pesar de tener un comportamiento típico de esmectitas, la adsorción de diferentes cationes, entre la hectorita y la montmorillonita es muy diferente (Stucki, 1996). La estabilidad de esta arcilla en medio acido es baja, a pH=1 se puede llegar a colapsar su estructura (Balkus y Shi, 1996). Las propuestas que se han planteado acerca de la síntesis natural de esta arcilla la hacen de interés en el campo de química prebiótica, al estar ligada a sistemas hidrotermales que hayan podido estar en contacto con materiales desprendidos de erupciones volcánicas, que además de ser una fuente de energía, pudieron haber Tabla 5. Composición química de Hectorita Compuesto Peso (%) SiO2 54.28 Al2O3 0.68 Fe2O3 0.10 FeO --- CaO 0.50 MgO 25.25 Na2O 3.19 K2O 0.16 Li2O 1.02 CO2 --- SO3 --- TiO2 --- H2O 14.56 33 sido también una fuente de materia prima para la síntesis de diversas superficies sólidas, como lo son las arcillas. g. Bases nitrogenadas y nucleósidos Una base nitrogenada es una molécula orgánica que contiene nitrógeno y que actúa como una base en reacciones químicas. Las propiedades básicas derivan del par de electrones libres del átomo o átomos de nitrógeno que posee. Las bases nitrogenadas son también llamadas nucleobases, debido a que actúan como bloques estructurales de los ácidos nucleicos (DNA) y (RNA). Existen dos grupos principales de bases nitrogenadas de interés biológico: purinas y pirimidinas. Ambos grupos se asemejan a la piridina y son moléculas planas y no polares. i. Purinas y pirimidinas Los compuestos originarios de las dos clases de bases nitrogenadas halladas en los nucleótidos son los compuestos heterocíclicos pirimidina y purina, que poseen carácter aromático. La propia purina puede considerarse como un derivado de la pirimidina; está constituida por un anillo de pirimidina y otro imidazol condensados. Las bases nitrogenadas principales que se encuentran en los nucleótidos son tres derivados de la pirimidina: el uracilo, la timina y la citosina, y dos derivados de la purina, la adenina y la guanina. Es importante señalar que la xantina, molécula principal de este trabajo experimental, es incluida en este último grupo de bases (púricas) (Fig. 11). Las pirimidinas son moléculas planares; las purinas son casi planares, con un fruncido muy ligero. Los grupos funcionales importantes que intervienen en la formación de los enlaces de hidrogeno son los grupos amino de la adenina, la guanina y la citosina, los grupos –NH- del anillo en la posición 1 de la adenina y de la guanina y la posición 3 de las bases de pirimidina, así como los átomos de oxigeno fuertemente electronegativos que están situados en la posición 2 de las pirimidinas y en la posición 6 de la guanina. 34 Las bases pirimidínicasy púricas libres son relativamente insolubles en agua. Son compuestos básicos débiles que pueden existir en dos o más formas tautoméricas según su pH. Fig. 11 Bases Nitrogenadas: Púricas y Pirimidínicas. Muchos han sido los procedimientos experimentales realizados bajo condiciones simuladas en la Tierra primitiva que han rendido aminoácidos, bases púricas y pirimidínicas, azúcares y muchos otros compuestos orgánicos, a partir de precursores inorgánicos tales como los que debieron de haber estado presentes en el entorno primitivo, operando bajo la activación de diversas fuentes de energía (Fig. 12). Fig. 12 Síntesis de adenina con un rendimiento de 0.5%. (Tomado de Status of the Prebiotic Synthesis of Small Molecules, (Miller 1986) https://www.google.com.mx/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwiuxtPBxMjVAhXL4yYKHZWjBP0QjRwIBw&url=http://carmenced.blogspot.com/&psig=AFQjCNE2bsLRubgVul6gDf23Fl1FAlXQXQ&ust=1502312518879119 35 En la mayoría de las reacciones químicas que conducen a la formación abiótica de compuestos orgánicos nitrogenados sencillos, el cianuro de hidrógeno tiene suma importancia, además de que se forma fácilmente mediante las siguientes reacciones: 2𝐶𝐻4 + 𝑁2 → 2𝐻𝐶𝑁 + 3𝐻2 𝐶𝑂 + 𝑁𝐻3 → 𝐻𝐶𝑁 + 𝐻2𝑂 Como mencionamos anteriormente, estas reacciones son favorecidas mediante la temperatura(volcanes), fuentes de radiación (UV y radiación solar) o descargas eléctricas (relámpagos). Bajo condiciones simuladas, el cianuro de hidrogeno es un precursor de compuestos altamente reactivos, tales como el cianoacetileno, la cianamida y los nitrilos. Estos son a su vez precursores de una variedad de aminoácidos y bases nitrogenadas (Fig. 13). 36 Fig. 13 Evolución química de biomoléculas a partir del HCN. (Nelson et al., 2008) ii. Nucleósidos. Son moléculas orgánicas monoméricas que resultan de la unión covalente entre una base heterocíclica con una pentosa (Fig. 14). Existen dos series de nucleósidos: los ribonucleósidos, que contienen D-ribosa como componente glucídico (A), y los desoxirribonucleòsidos, que contienen 2- desoxi-D-ribosa(B). Los nucleósidos son mucho más solubles en agua que las bases libres. Al igual que los glucósidos, los nucleósidos son relativamente estables frente a los álcalis. Los nucleósidos purínicos se hidrolizan con cierta facilidad con los ácidos para liberar la pentosa y la base libre. Sin embargo, los nucleósidos pirimidinicos son resistentes frente a hidrolisis ácida. (Michelson, 1963). 37 Estas moléculas al combinarse con un grupo fosfórico producen nucleótidos que son los componentes moleculares básicos de las cadenas de ADN y ARN, que son de vital interés en los estudios de evolución química y surgimiento de la vida. Fig. 14 Nucleósidos. Unión mediante enlace N-glucosídico, entre C1 de la pentosa y un nitrógeno de la base. (N1 pirimidínicas, N9 purínicas), con la perdida de una molécula de agua. El nucleósido xantosina, molécula estudiada a lo largo de este trabajo experimental, pertenece al grupo de ribonucleosidos y si bien es cierto que no forma parte de las moléculas estructurales del DNA o del RNA, al igual que la Xantina es un intermediario importante en el metabolismo de bases púricas. Diversas vías bioquímicas de degradación de bases nitrogenadas como la guanina conducen a la formación de xantina, antes de dar paso a la formación de metabolitos más simples. La síntesis abiótica de nucleósidos en escenarios prebióticos ha sido complicada en los últimos años, pero ha sido posible. Orgel y colaboradores lograron la síntesis de adenosina, mediante el calentamiento y la desecación de la base nitrogenada y la ribosa, en presencia de sales divalentes, aunque con un rendimiento bajo. (Collins, 2005). 38 III. Objetivos a. General Estudiar la posible capacidad protectora ofrecida por arcillas minerales de interés en química prebiótica a moléculas orgánicas previamente adsorbidas y son expuestas a diferentes dosis de radiación ionizante. Particulares . Determinar las condiciones de adsorción-desorción de xantina y xantosina en tres diferentes arcillas minerales: atapulgita, hectorita y montmorillonita de sodio. . Cuantificar porcentajes de adsorción de molécula orgánica-arcilla, por medio de espectrofotometría UV y cromatografía de líquidos de alta resolución. . Comparar los efectos producidos por la radiación ionizante en las moléculas bajo estudio, en ausencia y en presencia de superficies minerales. . Expresar porcentajes de recuperación de moléculas orgánicas adsorbidas, tras ser expuestas a radiación ionizante. . Emplear espectrofotometría de infrarrojo para determinar si este método es eficiente para evidenciar el fenómeno de adsorción, así como también para seguir los posibles cambios generados en la estructura de las arcillas minerales, después de su exposición a radiación ionizante. 39 IV. Procedimiento experimental Una vez asignadas las moléculas orgánicas, así como las arcillas minerales para evaluar, se inició el trabajo experimental; dividido en dos fases: α y β. α. Condiciones de adsorción y desorción. Durante el proceso se establecen: los pH de adsorción y desorción, tiempos de agitación de suspensiones (arcilla y disolución), tiempo de centrifugación, definición de condiciones de análisis en HPLC, concentraciones de disoluciones y cantidades de arcilla. β. Pruebas de irradiación. Exposición de arcillas cargadas secas (botones y polvos), suspensiones y blancos, a diferentes dosis de radiación ionizante. Posterior a la exposición se realiza el análisis de las muestras por HPLC y FTIR (solidos). Al finalizar esta etapa se tendrá una aproximación objetiva acerca de la capacidad protectora ofrecida por las arcillas sobre nuestras moléculas orgánicas. a. Fase α Búsqueda bibliográfica acerca de los factores que pueden favorecer el fenómeno de adsorción de nuestras moléculas orgánicas en las arcillas minerales. (Punto de partida). Establecido un pH de trabajo para las disoluciones se procede a definir λmax de xantina y xantosina por espectro UV -Vis Determinación de pH de trabajo Realización de Curvas de Calibración UV – Vis y HPLC λmax útil para lecturas directas en UV – Vis y para establecer condiciones de lectura en HPLC Realización de Pruebas de Adsorción - Desorción Definición de los intervalos de concentración de las disoluciones, basadas en los mínimos de detección y saturación de señal en los equipos. • Tiempos de 1, 5, 15, y 40 min de agitación, • Lecturas de sobrenadantes por UV – Vis y HPLC, • Definición de pH de desorción. Una vez establecidos los % de Adsorción de xantina y xantosina en las tres arcillas, se comienzan las pruebas de irradiación. 40 Botón: se refiere al producto sólido obtenido al finalizar la centrifugación de un tubo que contiene arcilla y disolución de xantina o xantosina. Este material sólido es posteriormente sometido a secado. Y se dice que está “cargado”, puesto que ha adsorbido cierta concentración de moléculas orgánicas. Polvo: en algunas muestras, el botón anterior fue molido físicamente hasta obtener un polvo fino. b. Fase β Tipos de muestras: Corresponde a arcillas cargadas y secas. Algunas permanecen como botones después de centrifugar y otras se trituran hasta obtener un polvo fino. Corresponde a suspensiones acuosas (arcilla- disolución de xantina o xantosina) en jeringas de vidrio. Se burbujeo argón en cada jeringa para desplazar el oxígeno. Disoluciones de xantina y xantosina (blancos sin arcilla) Botón Polvo Dosis Irradiación: 135, 68, 34 y 17 KGy Análisis
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