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Estudiando Biologia

28/7/2022

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Biología

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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE CIENCIAS

EXPRESIÓN DEL RECEPTOR GABA A EN
CEREBROS DE RATAS SOMETIDAS A
TRAUMATISMO CRANEOENCEFÁLICO Y
ESTIMULACIÓN MAGNÉTICA TRANSCRANEAL
T E S I S

QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE:

Bióloga

P R E S E N T A:

HERNÁNDEZ LUNA MARÍA GUADALUPE

DIRECTOR DE TESIS:
DRA. MARÍA DE LA LUZ NAVARRO ANGULO
2017

usuario
Texto escrito a máquina
usuario
Texto escrito a máquina
CIUDAD UNIVERSITARIA, CDMX
UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis
Digitales Restricciones de uso

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SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL
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citar la fuente donde la obtuvo mencionando el
autor o autores. Cualquier uso distinto como el
lucro, reproducción, edición o modificación,
será perseguido y sancionado por el respectivo
titular de los Derechos de Autor.

1. Datos del alumno
Hernández
Luna
María Guadalupe
5537470082
Universidad Nacional Autónoma de México
Facultad de Ciencias
Biología
309283184

2. Datos del tutor
Dra
María de la Luz
Navarro
Angulo

3. Datos del sinodal 1
Dr
Paul
Carrillo
Mora
4. Datos del sinodal 2
Dr
Josué Orlando
Ramírez
Jarquín
5. Datos del sinodal 3
Dra
María de la Luz
Navarro
Angulo
6. Datos del sinodal 4
M en C
Julio Alejandro
Prieto
Sagredo
7. Datos del sinodal 5
Dra
Marina
Martínez
Vargas
8. Datos del trabajo escrito
Expresión del receptor GABA A en cerebros de ratas sometidas a
traumatismo craneoencefálico y estimulación magnética transcraneal
Número de páginas 84
2016

A mis padres y hermana Nora, gracias por el apoyo incondicional…

“La ciencia no es solo una disciplina de razón, sino también de romance y
pasión”
Stephen Hawking

Este trabajo se llevó a cabo en el Laboratorio de Neuroendocrinología,
Departamento de Fisiología de la Facultad de Medicina, UNAM bajo la dirección
de la Dra. María de la Luz Navarro Angulo, con el financiamiento del Proyecto:
PAPIIT IG201014

Agradecimientos
A la Universidad Nacional Autónoma de México por la educación brindada. En
especial a la Facultad de Ciencias por darme la oportunidad de conocer grandes
profesores los cuales me ayudaron a obtener los conocimientos teóricos y
prácticos necesarios para mi formación.
A la Facultad de Medicina por brindarme la oportunidad de realizar este trabajo
en sus instalaciones.
A DGAPA, UNAM por el apoyo económico para este trabajo correspondiente al
PAPIIT IG201014.
A mi tutora la Doctora María de la Luz Navarro por recibirme en su laboratorio,
confiar plenamente en mi trabajo y su tiempo brindado.
A la Doctora Leticia Verdugo por su colaboración en mi trabajo y apoyo con la
estimulación magnética transcraneal.
Al taller de Fisiopatología Cerebral y Neuroprotección por la formación teórica y
práctica brindada que me ayudo a realizar este trabajo.
Al Instituto Nacional de Pediatría por permitirme aprender técnicas; en especial
a las Doctoras Elvia Coballase y Liliana Carmona por todo el apoyo que
contribuyo a mi formación.
A las personas que forman parte del Laboratorio de Neuroendocrinología de la
Facultad de Medicina, quienes me apoyaron a lo largo de esta investigación; en
especial a Francisco Estrada por sus aportaciones a mi trabajo.
A la Doctora Marina Martínez por su paciencia, apoyo en la metodología y
correcciones a mi trabajo.
A la Doctora Laura Sánchez Chapul del Instituto Nacional de Rehabilitación, por
enseñarme a realizar la técnica de inmunohistoquímica.
A Verónica Rodríguez Mata la técnico del departamento de Fisiología por
enseñarme a mejorar mi técnica histológica.

A Paula Santiago M., mi compañera y amiga del laboratorio por creer en mí, por
su paciencia, por facilitar las cosas para que conociera a otras personas que
ayudaron a la mejora de mi trabajo y apoyarme en todo momento.
A Karina Montiel, mi compañera de tesis y amiga, por trabajar a mi lado todo este
tiempo, apoyarme a realizar diferentes técnicas, animarme en los malos
momentos y escuchar atenta mis historias.
Al Doctor Paul Carrillo Mora por su tiempo dedicado a mi trabajo, por los
comentarios constructivos y la paciencia para ayudarme a interpretar mis
resultados.
Al Doctor Josué por los conocimientos impartidos de fisiología animal, por
aceptar ser parte de mi jurado, dedicarle tiempo a la revisión de mi trabajo y por
las correcciones realizadas que ayudaron a mejorar mi trabajo.
Al Maestro Julio porque fue gracias a sus clases de fisiología que yo me interese
en el estudio de la neurobiología, gracias por formar parte de mi jurado y
ayudarme a mejorar mi trabajo.

Agradecimientos personales
Muchas gracias a mis padres Martina y Jesús por apoyarme a cumplir mis metas
en la vida, por su gran amor y por todas sus enseñanzas que hacen de mi lo que
soy ahora, no me canso de decirles lo mucho que los amo, ambos son mis
grandes héroes.
A mi hermanita pequeña Nora Hilda gracias por todos los momentos vividos, te
amo, gracias por la paciencia que me tienes, por escuchar mis historias,
motivarme en todo momento, y por enseñarme calculo.
A la familia Castañeda Luna, porque son mi segundo hogar siempre presentes
en los momentos buenos y malos. Siempre llenando mi vida de grandes
momentos para recordar.
También quiero agradecer a mis primos, que siempre han sido como mis
hermanos Jazmín, Manuel, Hugo, Ivón y Nancy; gracias por todos los años
juntos, por ayudarme a tener la mejor infancia llena de risas, bromas y juegos,
siempre siendo un equipo apoyándonos mucho a vencer los malos momentos.
Un especial agradecimiento a alguien que ya no está a mi lado, mi prima Nancy
que por tener la misma edad que yo fue mi compañera de vida durante 11 años,
gracias porque siempre me ayudaste a confiar en mí, y eres unos de los motivos
por los que me interesa la investigación enfocada a las patologías, siempre
recordare nuestras historias.
Gracias a Guadalupe Miranda, por todo el amor que me tiene siempre al
cuidando de mí y motivándome, por animarme en los momentos malos y confiar
en que puedo cumplir mis metas.
Agradezco a mis amigos por formar parte de mi vida, a los que están, a los que
estuvieron y los que estarán. Especialmente los amigos de la secundaria que
aún conservo Roberto, Daniel y Michel gracias por todos los años de amistad. A
Berenice, Vanessa, Brizia y Rodolfo gracias porque a su lado he vivido las
mejores historias, llenan mi vida de alegría y risas que a pesar de los años no se
terminan.
Quiero dar gracias a Karina “mi hermana de tesis” que me acompaño a lo largo
de todo este trayecto, siempre a mi lado sin importar si eran fines de semana,
días festivos o vacaciones. Gracias por hacer divertido este proceso con tantas
historias, por tu paciencia, confianza, motivación y ánimo en los días
complicados.
A Paula porque siempre me facilitó los medios para realizar mi tesis, agradezco
mucho todas las aportaciones, siempre recordare tu emoción al ver mis
resultados de inmunohistoquímica. Gran parte de mi trabajo resulto de tus
enseñanzas.

Otra persona que me apoyo mucho durante la elaboración de este trabajo fue
Eduardo, gracias por estar a mi lado en todo momento.
Finalmente pero no por eso menos importante quiero agradecer al laboratorio de
neuroendocrinología, muchas gracias por dejarme pertenecer a su equipo.A lo
largo de mi estancia viví grandes momentos a nivel académico y personal, todo
eso me ha enriquecido como persona. Todas las personas que pertenecen a
este laboratorio han contribuido de alguna forma en mi trabajo, son muchas para
mencionarlas pero saben que los aprecio.

Expresión del receptor GABA A en cerebros de ratas sometidas a
traumatismo craneoencefálico y estimulación magnética transcraneal

CONTENIDOS
1. ABREVIATURAS…………………………………………..…………………..1

2. RESUMEN…………………………………………………………..………….2

3. INTRODUCCIÓN…………………………………………………….………..3

3.1. TRAUMATISMO CRANEOENCEFÁLICO……………………………………..3
3.1.1. Epidemiología………………………………………………………3
3.1.2. Fisiopatología…………………………………………….………3-4
3.1.3. Neuroprotección…………………………………………….……5-7

3.2. ESTIMULACIÓN MAGNÉTICA TRANSCRANEAL………………..…………7
3.2.1. Características generales………………………………….….7-12
3.2.2. Efectos fisiológicos……………………………………………13-14

3.3. SISTEMA GABAérgico…………………………………………………………15
3.3.1. Papel como neurotransmisor inhibidor…………………..…15-16
3.3.2. Tipos de receptores de GABA……………………………..……17
3.3.3. Características del receptor GABAA……………………...…17-18
3.3.4. Subunidades del receptor de GABAA………………..…………19
3.3.5. Síntesis de GABA…………………………………………..…19-20
3.3.6. Liberación de GABA……………………………………….…21-22
3.3.7. Farmacología para el receptor GABAA………………...…….…23

3.4. GABAA y traumatismo craneoencefálico……………………………………..23

4. PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN………………………………………..…….25

5. JUSTIFICACIÓN………………………………………………………….....……25
6. HIPÓTESIS………………………………………………………………………...26
7. OBJETIVO GENERAL…………………………………………………..……..…26
8. OBJETIVOS PARTICULARES………………………………………….…….…26
9. MÉTODOS…………………………………………………………………………26
9.1 Sujetos experimentales…………………………………………..27-31
9.2 Extracción del cerebro………………………………………….…31-32
9.3 Deshidratación del cerebro…………………………………….…32-33
9.4 Cortes del cerebro en parafina…………………………………..33-34
9.5 Rehidratación del cerebro……………………………………………35
9.7 Ensayo de inmunihostoquímica para el receptor
GABAA……………………………………………………………….….….35
9.8 Contratinción con Hematoxilina…………………………………..…36
9.9 Análisis de datos y estadística……………………………………....36
10. RESULTADOS……………………………………………………………….36-65
11. DISCUSIÓN……………………………………………….………………….65-67
12. CONCLUSIÓN……………………………………………………….…………..68
13. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………….68-73
1

1. ABREVIATURAS
TCE- Traumatismo craneoencefálico
EMT- Estimulación magnética transcraneal
EMTr- Estimulación magnética transcraneal con impulsos repetitivos
Hz- Hertz
GABA- Ácido 𝛾- aminobutírico
SNC- Sistema nervioso central
mV- Milivolts
GAD- Enzima ácido glutámico descarboxilasa
GABA-T- Enzima GABA-transaminasa

1. RESUMEN
Un traumatismo craneoencefálico (TCE), se define como una alteración en la
función cerebral producida por una fuerza externa, caracterizado por ser un
proceso dinámico con eventos en cascada.
Debido a las consecuencias clínicas y económicas que se derivan de un TCE,
es importante investigar terapias que contribuyan a generar neuroprotección.
Una de ellas podría ser la estimulación magnética transcraneal (EMT), una
técnica no invasiva.
Esta EMT podría actuar a nivel de la expresión de los receptores GABA,
contrarrestando la acción de los receptores NMDA de glutamato, causantes del
proceso de excitotoxicidad post TCE.
El objetivo fue analizar el efecto de la EMT en los receptores GABAA de la corteza
motora e hipocampo de rata posterior a un TCE.
Método: Para este trabajo utilizamos ratas macho de la cepa Wistar con un peso
entre 250 y 300 grs. (n=4). Se formaron seis grupos: control, TCE (40 PSI, 6 mm
de profundidad, L= -2 y P= 1.4), TCE+EMT (1Hz, 15 min/día por 7 días),
TCE+EMT SHAM (15 min/día por 7 días) control más estimulación magnética
transcraneal (1Hz por 15min/día por 7 días) y control más estimulación sham (15
min/día por 7 días).
Posterior a una semana se perfundieron las ratas y se extrajo el cerebro, el cuál
fue incluido en parafina y cortado a 7µm.
Se realizó un ensayo de inmunohistoquímica con un anticuerpo para GABAA
subunidad α1 (1:1000), y se midió la intensidad de marca de la expresión de los
receptores a GABAA en el lado ipsilateral y contralateral de tres zonas diferentes
(anterior al trauma, zona de trauma y posterior al trauma) en el hipocampo y la
corteza motora.
Resultados: La EMT aumenta la concentración del receptor GABAA en el lado
ipsilateral (zona de trauma) en el hipocampo y la corteza.
Conclusión: La EMT modifica la expresión del receptor GABAA, pero aún faltan
más estudios que pudiera indicar su utilidad como terapia no invasiva luego de
un
3

1. INTRODUCCIÓN

Traumatismo craneoencefálico
Un traumatismo craneoencefálico (TCE) se define como una alteración en la
función cerebral u otra evidencia de patología cerebral producida por una fuerza
externa, puede ser por impacto, aceleración o desaceleración, penetración u
ondas de choque; como resultado se puede presentar alteración de la
conciencia, amnesia, cambios neurológicos o neurofisiológicos, fractura de
cráneo, lesiones intracraneanas o incluso la muerte1. El traumatismo
craneoencefálico se caracteriza por ser un proceso dinámico con eventos en
cascada2.
Epidemiología
La incidencia de TCE varía en relación al área geográfica, pero se estima que
alrededor de 200 personas sufren TCE por cada 100,000 habitantes 3.
El TCE representa la tercera causa de muerte en México, con una mortalidad de
38.8 por cada 100 mil habitantes. La población de 15 a 45 años resulta ser la
más afectada, lo que representa un alto costo a largo plazo, al ser personas
económicamente activas; también se ha reportado que el género más afectado
son los hombres con una relación 3:1 4.
A nivel mundial un TCE implica un costo muy alto. Para el 2008 se reportaron
24,129 personas fallecidas por accidentes de tránsito la cual es la principal causa
de un TCE. Las personas que no fallecen a causa de un TCE presentan graves
secuelas que les impide o dificulta regresar a sus actividades productivas5. Se
ha reportado que tan sólo un 40% de los sobrevivientes a un TCE moderado
logra reincorporarse a sus actividades laborales6.
Fisiopatología
El daño del TCE es progresivo y su fisiopatología cambiante de una hora a otra,
debido a que es un proceso dinámico 3.
4

Hay dos tipos de lesiones que se presentan en un TCE, la primaria y la
secundaria. La lesión primaria se origina en el momento del impacto, por lo tanto
no es reversible ya que ocurre necrosis, se caracteriza porque a nivel celular hay
microporación de membranas, desequilibrio en los canales iónicos, en otro nivel
se presenta el daño a vasos sanguíneos que puede ocasionar hemorragias, daño
isquémico. Este tipo de lesión puede ocasionar ser de dos tipos local o difusa7.
La lesión secundaria representa todos los efectos tardíos que con terapia pueden
ser reversibles (Tabla 1)3. Los cambios que induce pueden ser funcionales,
estructurales, celulares y moleculares que producen daño o muerte neuronal1.
Están implicados procesos de liberación de neurotransmisores (se incrementa la
liberación del neurotransmisor excitador glutamato), la producción de radicales
libres, la disfunción mitocondrial, la respuesta inflamatoria, el daño ocasionado
por Ca2+ y la activación de genes 8.
Intracraneales Extracraneales
Aumento de la presión intracraneal
Reducción del flujo sanguíneo
cerebral
Reducción de la presión de
perfusión cerebral
Lesión por perfusión
Lesión masa
Convulsiones
Edema cerebral
Isquemia
Hipotensión arterial
Hipoventilación
Hipoxemia
Hipertermia
Hipotermia
Hiponatremia
Hipoglucemia o hiperglucemia
Sepsis
Disfunciónmultiorgánica

Tabla 1. Alteraciones intracraneales y extracraneales producto del daño secundario en
el traumatismo craneoencefálico (Alted, 2009)
Una atención temprana de una persona que sufrió un TCE es de gran
importancia ya que se pueden prevenir, detener o revertir todas las alteraciones
ocasionadas por el daño secundario5.

Neuroprotección
Existen dos tipos de neuroprotección, la endógena y la exógena. La endógena
es realizada por el organismo y consiste en las respuestas que el mismo activa
con la finalidad de mantener la funcionalidad cerebral ante una lesión9.
El término de neuroprotección endógena, es reciente y se enfoca en el balance
de las respuestas que el organismo presenta frente a un evento de traumatismo
cerebral o isquemia; se sabe que ante una lesión al cerebro se activan
respuestas que inducen muerte cerebral, entre estas el incremento de
neurotransmisores excitadores, sobreproducción de radicales libres e
inflamación. Sin embargo, también se activan mecanismos de autoprotección
como la producción de citosinas antiinflamatorias, antioxidantes endógenos, y
sistemas inhibidores como el GABAérgico y el canabinérgico9. El balance entre
estas respuestas va a determinar el futuro del tejido involucrado10.
La neroprotección exógena hace referencia al uso de diferentes modalidades
terapéuticas que prevengan o retarden la muerte celular como resultado de la
cascada de respuestas fisiopatológicas ante una lesión neuronal que desemboca
en el daño cerebral secundario, así como contribuir a la reparación del sistema
nervioso central3.
Actualmente en pacientes que sufren algún tipo de TCE se están utilizando
diferentes agentes con efecto neuroprotector1. Se ha realizado el ensayo de
múltiples fármacos: antiexcitotóxicos, los bloqueadores de canales iónicos,
neuroesteroides, atrapadores de radicales libres, antiinflamatorios, canabinoides
y factores de crecimiento1. Existen también ensayos no farmacológicos como la
hipotermia; además de éste existen otras estrategias que se encuentran en
investigación. Actualmente no existe un neuroprotector eficaz ante un TCE3.

Tipos de
neuroprotector
Función Limitantes Ejemplos
F
a
r
m
a
c
o
l
ó
g
i
c
o

Antiexcitotóxicos

Limitar o impedir los
procesos excitotóxicos,
generados a partir del
daño cerebral.
Debe administrarse a
pocas horas de haber
ocurrido el evento
traumático y tienen
efectos secundarios a
nivel renal, cardiovas-
cular y psicotrópico,
además es difícil su
acceso a la región
isquémica.

Dozocyilpina o MK-801, cruzan
la barrera hematoencefálica fácil
y rápidamente previenen la
entrada masiva de Ca2+ a
las célula.

Bloqueadores
de canales
iónicos

Bloqueo de diversos tipos
de canales iónicos.

Es difícil establecer si
el uso de bloqueadores
de los diversos tipos de
canales es adecuado
para ofrecer
neuroprotección.
El bloqueo de canales tipo
N puede suprimir procesos
patológicos en modelos
de isquemia.
Quelante de Ca2+, DP-b99, que
en ensayos de fase II ha
mostrado mejora significativa en
pacientes con ictus isquémica.

Neuroesteroides
Proteger o regenerar la
barrera hematoencefá-
lica, reducir el edema
cerebral, regular a la
baja la cascada
inflamatoria y disminuir la
apoptosis; además de
reducir la excitotoxicidad
causada por el glutamato y
potenciar los efectos del
GABA.

Aún se encuentra en
investigación.

Progesterona.
Alopregnanolona, metabolito
activo de la progesterona,
potencia al receptor GABAA.

Inactivadores de
radicales libres
Formar radicales
que se unen a proteínas y
minimizar la posibilidad
de que otros radicales se
les unan.

Aún se encuentra en
investigación.
Polietilenglicol conjugado con la
SOD o pergogoteina (PEG-
SOD) que en estudios
clínicos en fase II ha
demostrado ser eficaz luego de
un TCE, en pacientes a los que
se les ha administrado
4 a 8 h posteriores al evento.

Antiinflamatorios

Contrarrestar el daño
producido por sustancias
proinflamatorias.

En una segunda fase
puede incrementar la
extensión del daño
cerebral debido a un
aumento en la secre-
ción de sustancias
proinflamatorias.
Nimesulide, un inhibidor
selectivo de la
cicloxigenasa (COX-2)
promueve cambios en el flujo
sanguíneo cerebral,
además de disminuir daños
motores y cognitivos.
Corticosteroides, poseen efectos
antiinflamatorios,
7

inmunosupresores y
estabilizadores de membrana de
los lisosomas.
Canabinoides Activación-inactivación de
los receptores CB1.
El efecto neuropro-
tector se logra en dosis
bajas.
Dexanabinol (HU-211),
como tratamiento en pacientes
que sufrieron un
TCE, no demostró eficacia.

Factores de
crecimiento
Controlar la proliferación,
crecimiento, migración,
desarrollo, función y
supervivencia de las
células sobre las que
actúan.
No atraviesan la
barrera hematoen-
cefálica (BHE), pero
dada su capacidad de
activar mecanismos
neuroprotectores vale
la pena continuar con
su estudio.
Administración de BDNF no
mostró efectos sobre
la conducta y los daños
histológicos en
ratas sometidas a TCE
Administración de IGF-1 eleva
los niveles de BDNF y
NT3, y promueve la recuperación
motora y cognitiva
en un modelo de TCE.

N
o
f
a
rm
a
c
o
ló
g
ic
o

Hipotermia

Se reducen las reacciones
bioquímicas de un
organismo
Una disminución en la
temperatura
central de 0,5 a 1,2°C
estimula la liberación
de norepinefrina
ocasionando
vasoconstricción, y
puede llegar a la
isquemia.
La hipotermia leve (32-33°C) por
más de 24 h y un posterior
recalentamiento menor a 24 h
han mostrado efectos benéficos
globales como disminución de la
mortalidad y atenuación del
déficit neurológico grave;
una hipotermia moderada (30°C)
inducida una hora después del
TCE y durante 3 h
disminuye el daño de contusión
cortical.

Tabla 2. Lista de los principales tratamientos neuroprotectores, actualmente no existe
un tratamiento eficaz por ello estos aún se encuentran en investigación (Elaborado a
partir de Estrada et. al., 2012).

Estimulación magnética transcraneal
Características generales
La base de la estimulación magnética trascraneal (EMT) consiste en el principio
físico propuesto por Michael Faraday en 1831; a finales de siglo XX se
8

comprendió la estrecha relación entre el magnetismo y la electricidad. Fue de
gran importancia descubrir que las corrientes eléctricas inducen campos
magnéticos11.
Utilizando este principio surgieron varias investigaciones, en 1959, Kolin y cols.
demostraron en una preparación de rana que un campo magnético fluctuante
podía estimular un músculo periférico12. Para 1982, Patrick Merton y Bert Morton,
del National Hospital for Neurology and Neurosurgery, Queen Square (Londres),
emplean esta técnica para producir una estimulación a nivel de la corteza
cerebral motora, registrando un potencial de acción motor13; sin embargo, fueron
Barker y cols., del Departamento de Medicina Física de la Universidad de
Sheffield (Reino Unido), quienes en 1985 lograron desarrollar un estimulador
capaz de despolarizar neuronas corticales y evocar movimientos
hemicorporales, al activar vías corticoespinales, para evaluar en un ser humano
la integridad de las vías motoras centrales14.
Desde entonces, se ha tenido un incremento exponencial de las aplicaciones de
la EMT.
La estimulación magnética consiste en la aplicación de radiación electromag-
nética que atraviesa el cráneo. La aplicación de ondas electromagnéticas puede
estimular o inhibir el tejido cerebral, esto va a depender de la modalidad de EMT
15.
Para generar un campo magnético que estimule la corteza cerebral se necesita
una corriente de aproximadamente 7-10 kiloamperes;esta corriente va a ser
generada por la cantidad de impulsos que genere la bobina. Se aplica esta
corriente en un pulso muy breve a través de la bobina (duración de 1ms). Este
pulso puede ser de tipo monofásico o polifásico. Se deben considerar dos tipos
de fuentes: corrientes de inducción generadas por la corriente que fluye por la
bobina y corrientes de condensación generadas por la acumulación de carga en
tejidos de resistencia y conductividad diferente (por ejemplo, cuero cabelludo,
cráneo, líquido cefalorraquídeo y cerebro) 14.

Un estimulador magnético de circuito básico incluye un condensador, un circuito
de carga, un circuito de descarga que usa un interruptor eléctrico denominado
thyristor (figura 1), es capaz de hacer fluir miles de amperios en milisegundos a
través de una bobina14.

Figura 1. Esquematiza un estimulador magnético de circuito básico (Imagen tomada
de Pascual, 2008).
La característica principal de la EMT es que no es una técnica invasiva 16. Las
bobinas más utilizadas son la circular y en forma de 8 (figura 2). La bobina con
forma de 8 aumenta la precisión de estimulación en un tejido, ya que la suma de
las cargas produce un campo magnético en forma de cono (figura 3) 14.

Figura 2. Campos eléctricos producidos por
una bobina circular produce un campo
electromagnético más amplio, posibilitando
la estimulación simultánea de los 2
hemisferios cerebrales (a) y una bobina en
forma de 8, la cual produce un campo
electromagnético menor, permitiendo
focalizar áreas para estimular (b). La
morfología externa de cada espirase dibuja
con líneas blancas discontinuas sobre la
imagen delos campos inducidos. m: metros;
V/m: voltios/metro (Imagen tomada de
Pascual, 2008).
10

Figura 3. Dispositivos utilizados para la estimulación magnética transcraneal. A) Bobina
en forma de 8 de un estimulador magnético transcraneal. B) Esquema de aplicación de
ETM en humanos (Imagen modificada de Verdugo, 2014).
Además del tipo de bobina deben considerase otros aspectos como el pulso: tipo
de EMT (simple, pareado, continuo, repetitivo, etc.), la frecuencia, intensidad,
tiempo entre pulsos, duración de la sesión y tiempo entre sesiones. Esto origina
diferentes modalidades de EMT (tabla 3)15.
Se debe elegir el tipo de estimulación magnética dependiendo de las
características del estudio o paciente, ya que según el tipo de estimulación se
pueden producir diferentes resultados15.
La estimulación magnética transcraneal repetitiva (EMTr) (figura 4), es la más
empleada actualmente con fines terapéuticos. En esta estimulación se crea un
tren de pulsos de baja (≤1 Hz) o alta frecuencia (≥5Hz), durante tiempos muy
cortos (milisegundos), proporcionando la capacidad de producir cambios en la
excitabilidad corticoespinal, ocasionando efectos reguladores neuronales que
perduran más allá del tiempo que abarca la propia sesión de EMTr17.
Tipo de estimulación Características
EMT Simple (EMTs) Un único pulso electromagnético sobre la corteza
cerebral.
De pulsos pareados
(EPP)
Aplicación de dos pulsos seguidos que, a su vez,
pueden ser de las mismas o diferentes
características.
A B
11

Estimulación
asociativa pareada
(EAP)

Aplicación de dos pulsos de energías diferentes.
Estimulación
mediante
cuadripulsos (ECP)
Basada en la hipótesis de que el número de pulsos
por sesión es un factor importante en su efecto.
EMT repetitiva
(EMTr)
Emisión de varios pulsos de una intensidad
determinada por unidad de tiempo definida como
tren.
EMT theta burst
(ETB)
Aplicación de ráfagas repetidas de estímulos
electromagnéticos de alta o baja frecuencia.

Tabla 3. Tipos de estimulación magnética trascraneal, para este trabajo utilizamos la
EMTr. (Realizado a partir de Medina, et. al., 2014).

Figura 4. Diferentes formas de aplicar estimulación magnética transcraneal: pulsos
simples, pulsos apareados en una o dos áreas diferentes del cerebro y estimulación
magnética transcraneal repetitiva lenta (≤1 Hz) o rápida (≥ 5Hz). En este trabajo
utilizamos la EMTr (marcada con rojo) (Imagen tomada de Pascual et, al., 2008).

Los efectos secundarios para la EMTr son diferentes, dependiendo de la
frecuencia a la que se aplique (tabla 4); para este trabajo utilizamos frecuencia
baja (1Hz) la cual cuenta con pocos efectos secundarios.

Efecto secundario
EMTr
de baja frecuencia
EMTr
de alta frecuencia
Inducción de
convulsiones
Raro (efecto general
de protección)
Posible (estimación posible del
riesgo crudo 1.4% en pacientes
epilépticos; menos del 1% en
las normales)
Inducción de
hipomanía aguda
Raro Posible después de la
estimulación prefrontal
izquierda
Cefalea transitoria,
dolor local, dolor de
cuello, dolor de
muelas, parestesia
Frecuente Frecuente
Cambios en la
audición transitoria
Posible Posible
Cognitiva transitoria,
cambios
neuropsicológicos
En general
insignificante
En general insignificante
Quemaduras de
electrodos en el cuello
cabelludo
No reportado Reportado ocasionalmente
Cambios estructurales
del cerebro
Inconsistente Inconsistente
Histotoxicidad Inconsistente Inconsistente
Otros efectos
transitorios biológicos
No reportado Cambios hormonales (TSH), y
niveles de lactato en sangre
Tabla 4. Efectos secundarios de la EMTr en diferentes frecuencias (Modificada de
Simone et. Al., 2009).
13

Efectos fisiológicos
Actualmente la EMT es utilizada en diferentes investigaciones e incluso a nivel
clínico, pues los resultados que ha generado y los que podría generar son
prometedores y beneficiosos para el tratamiento de diferentes patologías. A
pesar de esto aún existen mecanismos moleculares y celulares que no parecen
estar del todo claros con relación a su funcionamiento. Diferentes
investigaciones apuntan a que la EMT puede estar involucrada en la liberación
de neurotransmisores, la eficiencia transináptica, las vías de señalización, la
expresión de genes, los fenómenos de neutrofismo y la neuroplasticidad21.
Existen evidencias acerca de la modificación que ejerce la EMT sobre los
neurotransmisores, el sistema dopaminérgico es conocido como uno de los más
afectados al aplicar la EMT sobre la corteza frontal. La EMT produce un aumento
de dopamina en diferentes áreas cerebrales como el núcleo accumbens y el
estriado dorsal22.
En un estudio con el modelo de enfermedad de Parkinson en rata inducido
mediante inoculación de la toxina MPTP (1-metil-4-fenil-1,2,3,6-
tetrahidropiridina), al aplicar EMTr a 25 Hz se lograron revertir los parámetros
conductuales de los animales afectados, y mediante el estudio en la expresión
de Tirosina hidroxilasa (TH), pudo llegarse a la conclusión de que la EMTr
reactivaba, el sistema dopaminérgico de estas ratas lesionadas23.
Esto avala la participación del sistema dopaminérgico en la base del mecanismo
de acción en los efectos neuroprotectores y terapéuticos desencadenados por
EMT, al menos en los modelos animales24.
El glutamato y el ácido 𝛾-aminobutírico (GABA) también son modificados por el
tratamiento con EMTr. Ambos están relacionados con varias patologías25.
En un estudio en ratas control al aplicar EMTr a baja frecuencia (0.5 Hz) y durante
15 días desencadenó cambios en los niveles de glutamato y de GABA
caracterizados por un aumento en la liberación de ambos neurotransmisores en
el hipocampo y núcleo estriado, mientras que disminuyó en el hipotálamo y
permaneció igual en el mesencéfalo26. Igualmente en un estudio con ratas
Fitzgerald y cols. demostraron que a 1Hz disminuye la respuesta cortical; pero
14

no en el caso de las ratas tratadas con lorazepam y dextrometorfano (sustancias
inhibidoras de los receptores GABA y glutamato, respectivamente), apoyando de
esta forma la participación de estosneurotransmisores en el efecto de la EMT27.
Pero como anteriormente se mencionó; la EMTr no solo modifica la liberación de
neurotransmisores, también modifica la activación de genes de expresión
inmediata temprana, como c-Jun y c-Fos. Estos genes se encuentran
involucrados en la respuesta inicial de estímulos como daño cerebral o los
factores de crecimiento como el BDNF28. El grupo del Doctor Drucker- Colin
aplicó EMT de 60 Hz y 0.7 mT (conocida como estimulación de extrema baja
frecuencia), en un modelo de lesión nigroestriatal causada por inyección
intracerebral de 6-hidroxidopamina (6-OHDA) en rata Wistar. Los resultados
revelaron incrementos significativos en nuevas neuronas y proliferación
neuronal, en la zona subventricular (ZSV). De esta forma la neurogénesis
inducida mediante EMT fue descrita por primera vez29. En el 2012 Hellmann y
cols., demuestran que la EMTr puede aumentar los niveles intracelulares de
AMPc y fosforilación del factor de transcripción de elementos de respuesta a
AMPc (CREB) 20.
Post y cols., muestran el efecto neuroprotector de EMTr in vitro e in vivo,
reduciendo el estrés oxidativo desencadenado por el péptido b-amiloide y
glutamato. La aplicación de EMT a 60 Hz y 0,7 mT en un modelo de la
enfermedad de Huntington inducida por el ácido 3-nitropropiónico (3NP), logro
disminuir los biomarcadores de daño oxidativo, aumentando los sistemas an-
tioxidantes30.
La presencia de efectos que produce la EMT, así como su duración e intensidad
es tiempo-dependiente y afectados por las características a las que se aplique la
EMT20.
En la actualidad existe un número creciente de investigaciones que emplean
estimulación magnético transcraneal (EMT) en lesiones cerebrales, como un
medio para evaluar el equilibrio entre la excitación provocada por el glutamato y
la inhibición dada por el GABA31.

Sistema GABAérgico
La inhibición en el sistema nervioso central de mamífero, es llevada a cabo por
el neurotransmisor ácido 𝛾- aminobutírico (GABA) y glicina12. En 1950 Eugene
Roberts descubrió el neurotransmisor GABA el cual tiene un papel inhibidor. Sin
embargo, fue hasta los 60s’ del siglo pasado fue que se le caracterizó con tal
función33. Podemos encontrar al GABA ampliamente distribuido en el sistema
nervioso central (SNC), e incluso en cantidades menores se ha identificado en
muchos órganos tales como el páncreas, la pituitaria, los testículos, el tracto
gastrointestinal, ovarios, placenta, útero y médula suprarrenal. Recientemente
han surgido evidencias de que las células del sistema inmune también pueden
producir GABA y expresar sus receptores34.
Papel como neurotransmisor inhibidor
Aproximadamente del 30-40% de las neuronas del cerebro utilizan a GABA como
neurotransmisor inhibidor. La presencia de GABA en el tejido nervioso va a
proporcionar el equilibrio neuronal entre excitación e inhibición 35.
En las sinapsis inhibitorias postsinápticas se abren canales de cloruro, lo que
permite el paso de estos iones. Para entender cómo se lleva a cabo la inhibición
postsináptica debemos basarnos en la ecuación de Nernst que calcula el
potencial interior de membrana neuronal en reposo que resulta en -65mV, pero
al abrir los canales de cloruro se permite el movimiento de iones con carga
negativa desde el líquido extracelular hacia el interior lo cual resulta en un
potencial de membrana de -70mV36.
Sumado a esto se encuentra la apertura de los canales de potasio, que ven a
permitir que los iones de carga positiva se desplacen hacia el exterior; lo cual
volverá más negativo el potencial interno de la membrana. La entrada de cloruro
más la salida de potasio aumentan el grado de negatividad intracelular, a esto
se le domina hiperpolarización. Ello inhibe a la neurona debido a que el potencial
de membrana es aún más negativo que el potencial intracelular normal. Al
aumento de la negatividad por arriba del potencial de membrana en reposo
normal se le denomina potencial postsináptico inhibidor (PPSI )36.
16

La figura 5 muestra los efectos producidos sobre el potencial de membrana
debido la activación de las sinapsis inhibitorias, lo que permite la entrada de
cloruro o la salida de potasio, con el descenso en el potencial de membrana
desde su valor normal de -65mV hasta un nivel más negativo de -70mV. Por lo
tanto es un PPSI de -5mV, lo que inhibe la transmisión de la señal nerviosa36.

Figura 5. Estados de una neurona. A. Neurona en reposo, con un potencial normal de -
65mV. B. Neurona en un estado inhibido, con un potencial de membrana más negativo
(-70mV) ocasionado por la entrada del ion cloruro y la salida del ion potasio (Imagen
modificada de Guyton et. al., 2011).
Cuando ocurre la apertura del canal iónico formado por el receptor GABAA se
produce un flujo de iones Cl– y bicarbonato a través de la membrana en una
proporción de 4 a 1. El potencial está mucho más despolarizado que el potencial
medio de membrana en reposo (–70 mV), lo que significa que estos iones
siempre entran al interior de la célula al abrirse el canal, originando así una
inhibición postsináptica que anteriormente fue descrita37.
Es importante saber que existen dos tipos de proyecciones GABAérgicas:
proyección a largo alcance y proyección de corto alcance. El primer tipo es
característico de la corteza cerebelosa, la sustancia negra, el globus pallidus y
el núcleo reticular del tálamo. El segundo tipo mediante interneuronas de axón

corto, actúan de manera local sobre las neuronas más próximas, regulando así
el funcionamiento de un grupo reducido de neuronas. Ambos tiempos de
proyecciones regulan el grado de excitación del SNC33.
Por tanto, las consecuencias de la activación de los receptores GABAA dependen
del estado funcional de la membrana neuronal y de su localización espacial en
la neurona, por lo que la neurotransmisión GABAérgica ha de contemplarse
desde una perspectiva dinámica 38.
Tipos de receptores de GABA
El principal neurotransmisor inhibidor en el cerebro GABA, actúa sobre dos tipos
de receptores principales. Los receptores GABAA ionotrópicos, que son
considerados como los mediadores más importantes en la neurotransmisión
inhibitoria rápida del cerebro de mamífero debido a su papel en la modulación
del cloruro39; incluyen a los receptores GABAC32. En comparación los receptores
GABAB metabotrópicos, median respuestas inhibitorias más lentas del GABA,
están acoplados a proteínas G32, se encuentran en una localización pre y
postsináptica y la estimulación de estos receptores genera potenciales
inhibitorios postsinápticos importantes para el refinamiento de la
neurotransmisión inhibitoria al aumentar la conductancia para el K+ 37.
Características del receptor GABAA
Como anteriormente se mencionó el receptor GABAA es muy importante en la
homeostasis neuronal; es por ello que todas las neuronas poseen canales
iónicos GABAA, pero varían los subtipos que se expresan en las neuronas
durante el desarrollo y las regiones del cerebro. Si los canales están ubicados
en la sinapsis generan corrientes fásicas, pero si se encuentran fuera de la
sinapsis generan corrientes tónicas34.
Debido a la estructura primaria del receptor GABAA, forma parte de una
superfamilia de canales iónicos activados por ligando; en esta familia están
incluidos los receptores nicotínicos para acetilcolina, receptores ionotrópicos
para glutamato, glicina y 5HT340 .
18

El receptor GABAA también se caracteriza por ser una molécula proteica
oligomérica, la cual esta ensamblada por diferentes tipos de subunidades
polipeptídicas, en número de cinco, y delimitan al canal transmembrana el cual
es selectivo a iones Cl- o HCO3 – (figura 5)40. Se encuentra en la membrana
postsinaptica 41.
Este receptor está formado por un coensamblaje de subunidades diferentes6.
Hasta ahora se conocen 16subunidades distintas para los receptores GABAA:
α1-6, β1-3, γ1-3, δ, ε, π y θ40. Debido a la cantidad de subunidades se pueden
obtener diferentes isoformas del receptor GABAA. Los receptores funcionales
son pentámeros y están conformados por dos subunidades α, dos subunidades
β y una subunidad 𝛾 o δ39.

Figura 5. Receptor GABAA A) Receptor GABAA en la membrana, presenta el canal de
cloruro (imagen tomada de Sieghart y cols., 2002). B) Estructura del receptor GABAA en
una vista longitudinal, permite observar los diferentes dominios que presenta (imagen
tomada de Martin y cols., 2009).
19

Subunidades del receptor de GABAA
Existe un número limitado de subunidades del receptor GABAA en el cerebro de
mamífero 42.
Se han encontrado en diferentes estudios seis clases de subunidades
polipeptídicas: α, β,γ,δ, ε, ρ las que a su vez presentan variantes: α (1-6), β(1-4),
γ(1-4), δ1, ε1, ρ(1-3) 33.
Estas subunidades presentan una distribución regional, celular y temporal. Las
subunidades α1, β1, β2, β3 y γ2 están distribuidas en todo el cerebro. En
contraste las subunidades α2, α3, α4, α5, α6 y γ1 y δ están más limitadas en
algunas áreas del cerebro7. En el cerebro normal las subunidades α1 y δ2 van
aumentando su expresión con el desarrollo y se estabilizan en la adolescencia y
la adultez, mientras que la subunidad α4 se expresa mayormente en la niñez39.

Síntesis de GABA
A partir de la descarboxilación del ácido glutámico se realiza la síntesis de GABA,
está reacción es catabolizada por la enzima ácido glutámico descarboxilasa
(GAD) que se encuentra exclusivamente en neuronas GABAergicas, la actividad
de esta enzima va a limitar dicha síntesis.
En la neurotransmisión GABAérgica se presenta un flujo neto de GABA que va
desde las neuronas hacia los astrocitos. Parece ser que la glutamina que se
sintetiza de manera exclusiva en los astrocitos, podría ser precursor para la
síntesis de GABA.
Anteriormente la enzima GAD era utilizada como marcador para identificar a las
neuronas GABAérgicas presentes en el SNC. Sin embargo, actualmente se sabe
que GAD puede estar presente en subpoblaciones de neuronas excitadoras32.
Hay dos isoformas de la GAD denominadas GAD65 y GAD67 (de acuerdo a su
peso molecular), ambas presentan características particulares y están
codificadas por diferentes genes. A la GAD67 la encontramos en las terminales
nerviosas donde se realiza la síntesis del GABA que es liberado durante la
20

neurotransmisión. La GAD65 se localiza en el citoplasma neuronal y el GABA
que sintetiza es trófico para la sinaptogénesis durante las fases tempranas del
desarrollo neuronal, como protector en daño neuronal, regulador en el estrés
oxidativo y como fuente de energía33.

La enzima GABA-transaminasa (GABA-T) es la encargada de metabolizar el
GABA, se localiza en la matriz mitocondrial; se expresa en cerebro y otros
órganos. En el tejido cerebral podemos encontrar a GABA-T en neuronas y en
astrocitos, pero parece presentar una mayor actividad en estos últimos.
La GABA-T convierte el GABA en semialdehído succínico y regenera el ácido
glutámico a partir del ácido alfa-cetoglutárico. El semialdehído succínico se
puede transformar, a su vez, en ácido succínico, que entrará en el ciclo de Krebs
para volver a formar alfa-cetoglutarato, o puede convertirse en ácido gamma-
hidroxibutírico (GHB) 33(Figura 4).

Figura 6. Muestra la síntesis neuronal de GABA (Imagen modificada de
http://163.178.103.176/Tema1G/Grupos1/TannerT1/aTannerCap3/Tanner59a.jpg).

http://163.178.103.176/Tema1G/Grupos1/TannerT1/aTannerCap3/Tanner59a.jpg
21

Liberación de GABA
Las neuronas GABAérgicas contienen vesículas especializadas que poseen un
transportador de GABA que es capaz de producir una concentración
intravesicular de GABA entre 10 y 20 veces mayor que la que existe en el
citoplasma de la neurona. Cuando se produce la despolarización de la neurona,
estas vesículas se fusionan con la membrana celular en un proceso que implica
la participación de diferentes proteínas específicas (sinaptina, neurexinas,
sinaptotagmina, sintaxina, etc.), que se activan a consecuencia del aumento de
la concentración intracelular de Ca2+ debido a la apertura de diferentes tipos de
canales de Ca2+ dependientes de voltaje. Este proceso genera la liberación del
GABA vesicular a la hendidura sináptica, permitiendo la activación de los
receptores GABAérgicos tanto presinápticos como postsinápticos. Además de
este mecanismo de liberación vesicular, el GABA también puede ser liberado de
manera reversa a través de los transportadores de GABA presentes en la
membrana plasmática de la neurona32. La liberación de GABA citoplasmática es
no dependiente de Ca2+ 32.
El GABA liberado de las terminales presinápticas es inactivado mediante un
proceso de recaptación a través de un sistema de transporte similar al que
utilizan otros neurotransmisores. El GABA puede ser recaptado al interior de la
terminación GABAérgica presináptica, permitiendo su reciclaje, o al interior de
los astrocitos circundantes, donde será metabolizado por la GABA-T. Hasta el
momento se han clonado tres proteínas transportadoras específicas de GABA
(GAT1, GAT2, GAT3), así como un transportador de betaína que también puede
recapturar GABA (BGT1). Las proteínas GAT1 y GAT3 se han encontrado
exclusivamente en el cerebro, mientras que GAT2 y BGT1 están presentes en
múltiples órganos. La GAT1 se localiza principalmente a nivel neuronal, aunque
también puede aparecer en la astroglía. Por el contrario, los otros tres
transportadores son principalmente de localización no neuronal. Se ha estimado
que el sistema de transporte neuronal del GABA es entre 3 y 6 veces más
eficiente que el astrocítico, lo que podría indicar la necesidad de reutilización del
GABA neuronal. Parece ser que la actividad de los transportadores de GABA
22

podría estar regulada por mecanismos de fosforilación y su transporte y anclaje
a la membrana neuronal podrían ser dependientes de dicha actividad 33.
Farmacología para el receptor GABAA
Los receptores GABAA son ampliamente estudiados a nivel farmacológico,
debido a facilidad para interaccionar con numerosos fármacos de uso clínico con
propiedades ansiolíticas, anticonvulsivantes, músculo relajantes y sedativas
(figura 7) 35.

Figura 7. Sitios de unión de fármacos en el receptor GABAA, sitio de unión al GABA y
entrada del cloruro a través del poro. (Imagen tomada de Boron et. al., 2012)
Esta amplia interacción farmacológica se debe a las diferentes subunidades que
pueden conformar el receptor inotrópico. De acuerdo a la composición
estructural va a estar determinada la sensibilidad de los receptores GABAA, por
lo que los receptores exhiben una heterogeneidad en términos de propiedades
del canal y modulación por fármacos. (Tabla 5) 35.

Receptor Agonistas Antagonistas Moduladores Bloqueadores
del canal de
Cl-
GABAA Isoguvacina
Muscimol
THIP
TACA
Bicuculina
SR 95531
Barbitúricos
Benzodiacepinas
Esteroides
Etanol
Picrotoxina
Zn 2+
TBPS

Tabla 5. Fármacos agonistas, antagonistas y moduladores que interactúan con el
receptores de GABAA (Imagen tomada de Cortes y cols., 2011).

GABA y Traumatismo craneoencefálico
Anteriormente se habló sobre la fisiopatología que se produce tras un TCE; pero
debido a que fue el modelo utilizado en este trabajo con un enfoque especial en
el receptor GABAA, es importante conocer con mayor detalle como esta
participando el sistema GABAérgico en un TCE.
Es importante recalcar que un TCE conduce a síntomas neurológicos
postraumáticos como el déficit motor y déficits cognitivos. Estos síntomas van a
ser propiciados por el desequilibrio en el sistema gultamatergico y GABAérgico.
El glutamato es el principal neurotransmisor excitador en el cerebro, suliberación
aguda posterior a un TCE es responsable de la excitotoxicidad, que conduce a
daño neuronal y muerte celular, mediante activación de los receptores
ionotrópicos AMPA (AMPAR) y NMDA (NMDAR) 43.
Las principales productoras de glutamato en el cerebro con las neuronas
piramidales, localizadas en la corteza y el hipocampo; así como las neuronas del
cerebro medio, el hipotálamo y el cerebelo 44 . Por otro lado, GABA se produce
en interneuronas que modulan circuitos tálamo-corticales implicados en
funciones motoras, de atención y memoria45.
24

GABA modula la excitación en el cerebro, posterior a una lesión las células
productoras de este neurotransmisor son afectadas al grado de interrumpir el
equilibrio de excitación e inhibición, conduciendo a lesiones y apoptosis46.
Se mencionaron diferentes subunidades de componen al receptor GABAA, la
investigación tras una lesión cerebral se enfoca principalmente en α1, γ2, α4 y
δ1, debido a que estas subunidades contribuyen con la capacidad de las
interneuronas de modular las señales de inhibición fásicas y tónicas. Estas
inhibiciones son dependientes de cantidad y velocidad de liberación de GABA47.
Las subunidades α1 y γ2 del receptor GABAA están implicadas en la inhibición
fásica, mientras que las subunidades α4 y δ1 participan en la inhibición tónica48.
Según el modelo animal y el tipo de lesión utilizado, la expresión de las
subunidades del receptor GABAA va a ser diferente; sin embargo, las
subunidades α1 y γ2 (responsables de la inhibición fásica) generalmente se ven
disminuidas tras una lesión cerebral; a diferencia de estas las subunidades α4 y
δ1 (responsables de la inhibición tónica) están reguladas hacia arriba49.
Raible y cols. utilizaron un modelo de lesión por percusión fluida (FPI) en ratas,
en sus resultados encontraron un aumento en la subunidad α1 a las pocas
horas, pero una disminución a las 24, 48 h y a los 7 días, mientras que aumento
la subunidad α4 a las 24 h, pero no a los 7 días 50 .
Receptor Subunidad Localización Función Expresión y/o función después
de una lesión cerebral

GABAA
α1 y γ2 Sináptica Permite la inhibición fásica.
Responde más rápido a
cambios en la concentración
de GABA
Agudo y crónico: disminuido
α4 y δ1 Extrasináptica Habilita la inhibición tónica
Responde a más lento
cambios en la concentración
de GABA
Agudo y crónico: aumentado

Tabla 6. Representación de las subunidades del receptor GABAA, localización y función
comúnmente aceptadas, y consecuencias generales después de un TCE basado en la
literatura. El receptor y los cambios en la subunidad probablemente difieren por la
25

gravedad de la lesión y la región del cerebro, que no está representada aquí (Modificada
de Guerriero et. al., 2015).
Existen algunas pruebas que sugieren que el aumento de la producción de GABA
puede mitigar la muerte celular excitotóxica. La síntesis de GABA a partir de
glutamato proporciona un mecanismo para el control de la naturaleza
excitotóxica asociado a condiciones neuroinflamatorias51 e isquemia cerebral.
Gran parte de los datos descritos sugieren que la mayor disponibilidad de GABA
puede atenuar la inflamación52.
La fisiopatología cambiante y dinámica que se desencadena posterior a un TCE
también involucra procesos de inflamación. Recientemente se ha estado
estudiando los efectos de los estímulos inflamatorios sobre el sistema
neurotransmisor GABAérgico y los efectos de este neurotransmisor en el sistema
de neuroinflamación, así como su papel y el potencial terapéutico como
modulador53.

2. Pregunta de investigación
¿La expresión del receptor GABAA se modifica posterior a un TCE por efecto de
la EMT?

3. Justificación
Debido a que el TCE representa una de las principales causas de invalides y
muerte en el mundo, se busca disminuir los efectos fisiopatológicos que genera.
Una estrategia experimental es la estimulación magnética transcraneal de la cual
hay datos de mejoría en pacientes con traumatismo craneoencefálico; se
pretende conocer si esta mejoría se asocia con modificaciones en la expresión
del receptor GABAA.

4. Hipótesis
La EMT disminuirá las respuestas fisiopatológicas provocadas por un
traumatismo craneoencefálico incrementando la presencia del receptor GABAA.

5. Objetivo general
Analizar el efecto de la EMT sobre la presencia del receptor GABAA en
hipocampo y corteza motora de ratas en condiciones de TCE.

6. Objetivos particulares

1) Implementar ensayos de inmunohistoquímica para la identificación del
receptor GABAA en cerebro de ratas sometidas a traumatismo
craneoencefálico y estimulación magnética transcraneal.
2) Analizar el efecto del TCE en la presencia de los receptores GABAA.
3) Analizar la presencia del receptor GABAA en cerebros de rata: grupos
controles, traumatismo craneoencefálico, traumatismo
craneoencefálico más estimulación magnética transcraneal,
traumatismo craneoencefálico estimulación sham, control más
estimulación magnética transcraneal y control sham.

7. Métodos

Sujetos experimentales
Para este experimento utilizamos ratas macho de la cepa Wistar con un peso
entre 250 y 300 grs. al inicio del experimento; manteniéndolas a temperatura
constante, con agua y comida ad libitum y en un ciclo luz oscuridad 12:12 durante
7 días previos al tratamiento.
27

El experimento fue aprobado por el comité de ética local en cumplimiento de la
Norma Oficial Mexicana (NOM-062-ZOO-1999) para el cuidado y uso de
animales de laboratorio.
Los sujetos experimentales se dividieron en seis grupos diferentes (n=4 para
cada grupo): el grupo control, el grupo con traumatismo craneoencefálico (TCE),
un grupo con traumatismo craneoencefálico sham (TCE+SHAM) (15 min por 7
días), el grupo con traumatismo craneoencefálico más estimulación magnética
transcraneal (TCE+EMT) (1Hz por 15min por 7 días), control más estimulación
sham (control+sham) (15 min por 7 días) y control más estimulación magnética
transcraneal (control+EMT) (1Hz por 15min por 7 días).

Figura 8. Muestra los diferentes grupos experimentales utilizados en este estudio.

Grupo control
Solamente se le aplicó anestésico el día del trauma y se devolvió a su caja antes
de que despertara. Los siguientes días se mantuvo en condiciones de bioterio.
Grupo con TCE
Se le aplicó anestésico antes de realizar el trauma. Una vez anestesiada la rata
de procedía a rasurarle la cabeza para facilitar la exposición del cráneo, sumado
28

a esto se realizaba un corte en la piel de la cabeza que permitía observar el
cráneo. Con ayuda del estereotáxico y el atlas de Paxinos y Watson para rata se
localizaba la zona de interés en las coordenadas L=-2 y P=1.4. Finalmente se
realizaba el trauma con ayuda de un pistón pneumático a 40 PSI con 6 mm de
profundidad. De acuerdo a las coordenadas señaladas al aplicar la lesión la zona
afectada resulta ser la corteza motora y el lado que se está afectado mayormente
es el ipsilateral.

Figura 9. A) Estereotáxico. B) Ubicación de las coordenadas utilizando Bregma y
Lambda como referencia, en un punto rojo se señala la ubicación aproximada de la
zona de lesión. C) Rata montada en el estereotáxico. D) Pistón pneumático.

A) B)
C) D)
29

Grupo con TCE más SHAM
Se realizó el traumatismo craneoencefálico en la rata (anteriormente descrito); al
paso de dos horas se aplicó la estimulación sham en la rata. La estimulación
consistió en colocar a la rata en un cilindro, el cual tenía tapas a los lados con el
fin de mantener a la rata inmóvil y una abertura en la parte superior facilitando la
exposición de la cabeza de la rata, además contaba con un orificio por el cual la
rata sacaba su nariz y podía respirar sin problema. Sobre el área de trauma se
colocó una bobina de tipo sham, la cual no emitíaun campo magnético pero si
un sonido particular. El día del traumatismo se realizó la estimulación tipo sham
dos horas después de la lesión, con las ratas aun anestesiadas. Dicha
estimulación duró 15 minutos a una potencia del 100%; terminado el tiempo se
devolvió a la rata a su caja y se dejo en condiciones controladas de bioterio. Se
realizó esta estimulación diariamente por 7 días. Los días posteriores al
traumatismo la rata se estimuló sin anestésico.

Figura 10. A) Equipo para realizar estimulación. B) Bobina tipo sham. C) Cilindro donde
se coloca la rata. D) Acercamiento al equipo de estimulación, donde se puede controlar
tiempo, frecuencia y potencia.
Grupo con TCE más EMT
Se realizó el traumatismo craneoencefálico en la rata (anteriormente descrito); al
paso de dos horas y con las ratas aun anestesiadas se aplicó la estimulación
magnética transcraneal en la rata. La estimulación consistió en colocar a la rata
en un cilindro y ponerle sobre el área de trauma una bobina de tipo en forma de
8, la cual emitía un campo magnético y un sonido característico. Se colocó a
A)
B)
C) D)
31

1Hz por 15 minutos al 100% y posteriormente la rata se dejaba en condiciones
controladas de bioterio. Se realizó esta estimulación diariamente por 7 días. Los
días posteriores al traumatismo la rata se estimuló sin anestésico.

Figura 11. Rata recibiendo estimulación magnética trascraneal.
Grupo control más SHAM
Solamente se le colocó anestésico el día del trauma y a las dos horas se
realizaba la estimulación sham anteriormente descrita, diariamente por 7 días.
Los días posteriores al traumatismo la rata se estimuló sin anestésico.
Grupo control más EMT
Solamente se le coloco anestésico el día del trauma y a las dos horas se
realizaba la EMT (anteriormente descrita) a 1Hz, por 15min al 100%, diariamente
por 7 días. Los días posteriores al traumatismo la rata se estimuló sin anestésico.
Extracción del cerebro
Al día 7 se realizaba la última estimulación y posteriormente al tratamiento se
perfundió la rata. Las ratas fueron anestesiada con 0.3 ml de pentobarbital
sódico. Una vez que las ratas estaban bien anestesiadas se procedió a realizar
con ayuda de tijeras y pinzas una abertura en el tórax para exponer el corazón
evitando dañar los otros tejidos para evitar hemorragias. En el ventrículo
izquierdo se colocaba una aguja de perfusión, se realizaba un corte en la
aurícula derecha y se pinzaba la aorta ascendente, con ayuda de unas pinzas
se sujetó el corazón para asegurar la aguja y evitar fugas. Por medio de esta
aguja se pasaron 250 ml de PBS 1X, y 250 ml de paraformaldehído al 4%. Se
32

desconectó a la rata de la bomba de perfusión y se decapitó con ayuda de una
guillotina. La cabeza se envolvió con papel aluminio y se etiquetó para ser
guardada en el refrigerador a 4ºC. Un día después se extrajo el cerebro y se
colocó en tubos falcón con paraformaldehído 4% por 24 horas.

Figura 12. Procedimiento para exponer el corazón y realizar la perfusión. (Imagen
tomada de:https://www.jove.com/video/3564/animal-entero-fijacin-por-perfusin-de-los-
roedores?&language=Spanish).
Deshidratación del cerebro
Los cerebros se sacaron del paraformaldehído y se colocaron en alcohol al 70%
por 24 hrs. Posteriormente el tejido se deshidrató con alcohol a diferentes
concentraciones en intervalos de 30 min cada uno (70, 80, 80, 96, 96, 100 y
100%). Seguido de una solución xilol-alcohol 100% (1:1) por 30 min y con xilol I
por 1hr, xilol II por 2hrs. Se continuó con una solución xilol- parafina (1:1) por 1
hr. Las muestras se infiltraron con parafina I durante 1 hr, posteriormente en
parafina II por 1 hr. Finalmente se incluyeron en parafina.
33

Figura 13. A) Cerebro de rata control al inicio del tren de deshidratación. B) Cerebro de
rata con trauma al inicio del tren de deshidratación, se observa a simple vista la lesión.
C) Bloques de cerebros incluidos en parafina.
Cortes coronales del cerebro en parafina
Se realizó la toma de cuatro secciones del bloque; anterior al trauma (bregma -
3.80 mm), en la zona de trauma (bregma -2.3mm), posterior al trauma (bregma
-1.80mm) y cerebelo. Los bloques de parafina que contienen el cerebro se
cortaron con ayuda de un micrótomo a un grosor de 7 µm. Estos se ponían en
agua previamente calentada para lograr que el tejido se extendiera y poder
montarlos en portaobjetos gelatinizados.
Los portaobjetos se colocaron en canastillas las cuales se introdujeron en una
estufa a 60oC por 3 hrs, para desparafinar.
A) B)
C)
34

Figura 14.Tres zonas cortadas del bloque de parafina. A) Zona anterior al trauma. B)
Zona del trauma. C) Zona posterior al trauma. (Imágenes tomadas del atlas de
Paxinos y Watson para ratas).

A)
B)
C)
35

Rehidratación del cerebro
Se pasaron los cortes por xilol (I y II) durante 5 min cada uno. Se continuó por
alcohol en diferentes concentraciones (100%,96%, 80%, 70%) durante un minuto
cada uno. Posteriormente fueron colocados en agua corriente durante 1 min.
Finalmente se colocaron en PBS 1x durante 1 min.
Ensayo de inmunohistoquímica para el receptor GABAA
Este ensayó de inmunohistoquimica fue realizado con ayuda de un Kit para
inmunohistoquimica de BIOCARE MEDICAL y con el anticuerpo para GABAA α1
con lote NG1898228 de Millipore.
Las laminillas se cubrieron con una solución de citratos (pH=6) en un vaso de
coplin de plástico. Se colocó en un vaso de precipitado 200 ml de agua y fue
colocado en un horno de microondas (Full Power) por un minuto, posteriormente
se colocó dentro del vaso de precipitado el coplin y se dejaron las laminillas 1
min en el horno evitando que se evaporara la solución de citrato. Las
preparaciones se enfriaron a temperatura ambiente sin sacarlas de la solución.
Las laminillas fueron circuladas con un marcador hidrofóbico y lavadas en PBS
1x por 15 min. En el tejido fue bloqueada la peroxidasa endógena con H2O2 al
3% por 15 minutos, posteriormente se lavó con PBS 1x 3 veces por 5 minutos.
El segundo bloqueo en el tejido se realizó con Backgraund Spiner (Azul) por 30
minutos, y posteriormente se decantó. Se permeabilizó el tejido con Tritón X-
100 (al 3%) por 10 min. Se colocaron 50 μl, del anticuerpo primario GABA A α 1
en una concentración 1:1000 y se dejó incubando en cámara húmeda por 60 min
a temperatura ambiente y se lavó con PBS 1x 3 veces por 5 min. Posteriormente
se colocó una gota que cubriera bien el tejido de anticuerpo secundario (MACH
1 universal HRD-Polimer Dopper, anaranjado) y se dejaron incubando en cámara
húmeda por 45 min a temperatura ambiente; al término de este tiempo se
realizaron 4 lavados de 4 min con PBS 1x. Finalmente se realizó el revelado con
DAB, colocando una gota que cubriera el tejido durante 30 segundos; pasado
este tiempo se enjuagó con PBS1x.

Contratinción con hematoxilina
El tejido fue colocado en hematoxilina durante 1 min y posteriormente se enjuago
con agua corriente por 10 seg, y se repitió este paso. Se dieron 10 baños al tejido
en carbonato de litio y se lavó con agua corriente por 10 seg. El tejido fue
colocado 10 seg en diferentes concentraciones de alcohol (70%, 80%, 96% I,
96%II, 100%I, 100%II). Se pasó 10 seg por xilol I, y xilol II. Finalmente se fijó el
cubreobjetos con permount.

Análisis de datos y estadística
Se seleccionaron tres zonas de interés; anterior al trauma, zona de trauma y
posterior al trauma. En estas zonas de analizó la marca producida por la
inmunohistoquímica para el receptor GABAA subunidad α1 en el hipocampo
(CA1, CA2, CA3 y giro dentado (GD)) y la corteza (M1); en el lado ipsilateral y el
contralateral. Se utilizaron cortes de cerebelo para el control de la
inmunohistoquímica.
Con ayuda del programa ImageJ se calculó la intensidad de marca en laslaminillas; posteriormente se graficaron los resultados con el programa Prisma.
Los resultados fueron analizados con una prueba de análisis de varianza de una
vía para ver si existen diferencias significativas. Se consideró diferencia
estadística significativa a una p<0.05. Posteriormente se realizó un prueba de
Bonferroni para saber en qué grupos existe diferencia significativa.
Resultados
Se utilizaron diferentes concentraciones del anticuerpo GABAA subunidad α1
para la técnica de inmunohistoquímica. Las concentraciones utilizadas fueron
1:50, 1:100, 1:500, 1:1000 y 1:1500. Se eligió una concentración 1:1000 ya que
en esta concentración se observó una marca definida de color café en las células
marcadas con el anticuerpo GABAA α, facilitando así su análisis. Para todos los
ensayos de inmunohistoquímica se utilizaron de control positivo y negativo cortes
de cerebelo.
37

A.1
A.2
A.3
A.2
A.4
A.5
B.1
B.2
B.3
B.4
B.5
38

Figura 15. Microfotografías tomadas a 40x se observa la comparación del grupo con
TCE+EMT (A) y el grupo control del lado ipsilateral de hipocampo y la corteza en la zona
de trauma. Se compara CA1 (A1, B1), CA2 (A1, B2), CA3 (A3, B3), GD (A4, B4), M1
(A5, B5). A las imágenes del grupo con TCE+EM se les hace un aumento en las
diferentes zonas (CA1 (a1), CA2 (a2), CA3 (a3), GD (a4), M1 (a5)), donde se aprecia la
D) C)
a.1 a.2 a.3
a.4 a.5
39

marca del anticuerpo GABAA subunidad α1. También se muestra el control negativo (C)
de la inmunohistoquímica en cerebelo y el control positivo (D).
Para el análisis de intensidad de marca se realizó la toma de fotografías a 40x
de las zonas de interés, con ayuda de un microscopio óptico. Se tomaron 3
fotografías para cada corte (n=4), por cada áreas de interés; en total 2160
fotografías. Estas imágenes fueron procesadas con ayuda del programa ImageJ
para calcular la intensidad de marca. Los valores obtenidos de intensidad de
marca se analizaron en Prisma y se realizaron las gráficas correspondientes.
Primero se analizó el grupo control y el grupo con TCE, para ver si existen
diferencias significativas entre ellos al realizar un análisis de varianza de una vía
y una prueba post hoc de Bonferroni. Posteriormente se analizaron los otros
grupos para saber si la EMT presentaba diferencias significativas en cuanto al
nivel de presencia del receptor GABAA.
A continuación se muestran las gráficas de intensidad de marca para el lado
ipsilateral y contralateral de las diferentes figuras.
Para el caso de CA1 los resultados muestran que en las tres zonas (anterior, en
zona de trauma y posterior) hay una mayor presencia del receptor GABAA en el
grupo con TCE del lado ipsilateral y este es significativamente diferente respecto
al control. Para el caso de los grupos con TCE+EMT también se observa una
mayor concentración del receptor; en la zona anterior el lado contralateral e
ipsilateral son significativamente diferentes a los demás grupos pero no entre
ellos; para el caso de la zona de trauma también se observa esta diferencia en
el lado ipsilateral y contralateral respecto a los otros grupos pero entre ellos. En
la zona posterior al trauma la diferencia significativa se mantiene para el grupo
TCE+EMT del lado ipsilateral. Solamente en la zona anterior al trauma se puede
observar que la EMT en el grupo control si causa un aumento en la concentración
del receptor; no es significativamente diferente pero se observan valores
mayores en el grupo con estimulación sham.

Expresión de GABAAen CA1
C
on
tr
ol
c
on
tr
al
at
er
al
C
on
tr
ol
ip
si
la
te
ra
l
TC
E
c
on
tr
al
at
er
al
TC
E
ip
si
la
te
ra
l
0
5.0106
1.0107
1.5107
*
In
te
n
s
id
a
d
r
e
la
ti
v
a

Gráfica 1. Las barras representan la intensidad relativa de presencia del receptor
GABAA subunidad α1. Se muestra el lado contralateral (azul) y el lado ipsilateral (rojo)
para una n=4, cada barra tiene su barra de dispersión. Se utilizó una prueba de ANOVA
de una vía y una prueba post hoc de Bonferroni, se consideró diferencia estadística
significativa a una p<0.05. En CA1 en la zona anterior al trauma el grupo con TCE del
lado ipsilateral es significativamente diferente a los demás (*).

A) Zona anterior al trauma
41

Expresión de GABAAen CA1
TC
E
+S
H
A
M
C
on
tr
al
at
er
al
TC
E
+S
H
A
M
Ip
si
la
te
ra
l
TC
E
+E
M
T
C
on
tr
al
at
er
al
TC
E
+E
M
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la
te
ra
l
C
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tr
ol
+S
H
A
M
C
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tr
al
at
er
al
C
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tr
ol
+S
H
A
M
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si
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te
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l
C
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M
T
C
on
tr
al
at
er
al
C
on
tr
ol
+E
M
T
Ip
si
la
te
ra
l
0
5.0106
1.0107
1.5107
2.0107
2.5107
*
*
In
te
n
s
id
a
d
r
e
la
ti
v
a

Gráfica 2. Las barras representan la intensidad relativa de presencia del receptor
GABAA subunidad α1. Se muestra el lado contralateral (azul) y el lado ipsilateral (rojo)
para una n=4, cada barra tiene su barra de dispersión. Se utilizó una prueba de ANOVA
de una vía y una prueba post hoc de Bonferroni, se consideró diferencia estadística
significativa a una p<0.05. En CA1 de la zona anterior al trauma el grupo con TCE+EMT
del lado contralateral e ipsilateral son significativamente diferentes a los demás pero no
entre ellos (*).

Expresión de GABAAen CA1
C
on
tr
ol
c
on
tr
al
at
er
al
C
on
tr
ol
ip
si
la
te
ra
l
TC
E
c
on
tr
al
at
er
al
TC
E
ip
si
la
te
ra
l
0
5.0106
1.0107
1.5107
*
In
te
n
s
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a
d
r
e
la
ti
v
a

Gráfica 3. Las barras representan la intensidad relativa de presencia del receptor
GABAA subunidad α1. Se muestra el lado contralateral (azul) y el lado ipsilateral (rojo)
para una n=4, cada barra tiene su barra de dispersión. Se utilizó una prueba de ANOVA
de una vía y una prueba post hoc de Bonferroni, se consideró diferencia estadística
significativa a una p<0.05. En CA1 de la zona del trauma el grupo con TCE del lado
ipsilateral es significativamente diferentes a los demás (*).

B) Zona de trauma

Expresión de GABAAen CA1
TC
E
+S
H
A
M
C
on
tr
al
at
er
al
TC
E
+S
H
A
M
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M
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C
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tr
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at
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al
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M
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C
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H
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M
C
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tr
al
at
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al
C
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+S
H
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M
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l
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M
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C
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tr
al
at
er
al
C
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tr
ol
+E
M
T
Ip
si
la
te
ra
l
0
2.0107
4.0107
6.0107
8.0107
***
**
In
te
n
s
id
a
d
r
e
la
ti
v
a

Gráfica 4. Las barras representan la intensidad relativa de presencia del receptor
GABAA subunidad α1. Se muestra el lado contralateral (azul) y el lado ipsilateral (rojo)
para una n=4, cada barra tiene su barra de dispersión. Se utilizó una prueba de ANOVA
de una vía y una prueba post hoc de Bonferroni, se consideró diferencia estadística
significativa a una p<0.05. En CA1 de la zona del trauma el grupo con TCE+EMT del
lado contralateral es significativamente diferente a los otros grupos (**) y al ipsilateral
(***) que también presenta diferencias significativas con los otros grupos.

Expresión de GABAA
C
O
N
TR
O
L
C
on
tr
al
at
er
al
C
O
N
TR
O
L
Ip
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ra
l
TC
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C
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tr
al
at
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al
TC
E
Ip
si
la
te
ra
l
0
1.0107
2.0107
3.0107
4.0107
5.0107
*
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te
n
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r
e
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v
a

Gráfica 5. Las barras representan la intensidad relativa de presencia del receptor
GABAA subunidad α1. Se muestra el lado contralateral (azul) y el lado ipsilateral (rojo)
para una n=4, cada barra tiene su barra de dispersión. Se utilizó una prueba de ANOVA
de una vía y una prueba post hoc de Bonferroni, se consideró diferencia estadística
significativa a una p<0.05.En CA1 en la zona posterior al trauma el grupo con TCE del
lado ipsilateral es significativamente diferente a los demás(*).

C) Zona posterior al trauma
45

Expresión de GABAA
TC
E
+S
H
A
M
C
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tr
al
at
er
al
TC
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H
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al
C
on
tr
ol
+E
M
T
Ip
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la
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l
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2.0107
4.0107
6.0107
*
In
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s
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r
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la
ti
v
a

Gráfica 6. Las barras representan la intensidad relativa de presencia del receptor
GABAA subunidad α1. Se muestra el lado contralateral (azul) y el lado ipsilateral (rojo)
para una n=4, cada barra tiene su barra de dispersión. Se utilizó una prueba de ANOVA
de una vía y una prueba post hoc de Bonferroni, se consideró diferencia estadística
significativa a una p<0.05. En la zona anterior al trauma el grupo con TCE+EMT del lado
ipsilateral es significativamente diferente a los demás grupos (*).
En CA2 no se observaron diferencias significativas entre el grupo control y el
grupo con TCE para la zona anterior y de trauma. Al comparar el grupo con
TCE+EMT si se observan diferencias significativas con respectos a los otros
grupos, se observa una mayor concentración del receptor en el lado ipsilateral
para la zona anterior; lo mismo pasa para la zona de trauma pero en esta el lado
contralateral también presenta diferencias significativas con los otros grupos y
entre ellos. En la zona anterior al trauma se encuentran aumentados los niveles
de intensidad de marca para el grupo control más EMT con respecto a la
estimulación sham aunque no se tienen diferencias significativas. En la zona de
46

trauma el control más EMT también se observa mayor que la estimulación sham
pero parecida al control.

Expresión de GABAAen CA2
C
on
tr
ol
c
on
tr
al
at
er
al
C
on
tr
ol
ip
si
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c
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tr
al
at
er
al
TC
E
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2.0106
4.0106
6.0106
In
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s
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d
r
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v
a

Gráfica 7. Las barras representan la intensidad relativa de presencia del receptor
GABAA subunidad α1. Se muestra el lado contralateral (azul) y el lado ipsilateral (rojo)
para una n=4, cada barra tiene su barra de dispersión. Se utilizó una prueba de ANOVA
de una vía y una prueba post hoc de Bonferroni, se consideró diferencia estadística
significativa a una p<0.05. En CA2 de la zona posterior al trauma no hay diferencias
significativas entre los grupos.

A) Zona anterior al trauma
47

Expresión de GABAAen CA2
TC
E
+S
H
A
M
C
on
tr
al
at
er
al
TC
E
+S
H
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M
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H
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at
er
al
C
on
tr
ol
+E
M
T
Ip
si
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0
5.0106
1.0107
1.5107
2.0107
*
In
te
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s
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a
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r
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v
a

Gráfica 8. Las barras representan la intensidad relativa de presencia del receptor GABAA
subunidad α1. Se muestra el lado contralateral (azul) y el lado ipsilateral (rojo) para una
n=4, cada barra tiene su barra de dispersión. Se utilizó una prueba de ANOVA de una
vía y una prueba post hoc de Bonferroni, se consideró diferencia estadística significativa
a una p<0.05. En CA2 de la zona anterior al trauma el grupo con TCE+EMT del lado
ipsilateral muestra diferencia significativa respecto a los demás grupos (*).

Expresión de GABAAen CA2
C
on
tr
ol
c
on
tr
al
at
er
al
C
on
tr
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ip
si
la
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ra
l
TC
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c
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al
TC
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ip
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l
0
2.0106
4.0106
6.0106
8.0106
In
te
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s
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d
r
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la
ti
v
a

Gráfica 9. Las barras representan la intensidad relativa de presencia del receptor
GABAA subunidad α1. Se muestra el lado contralateral (azul) y el lado ipsilateral (rojo)
para una n=4, cada barra tiene su barra de dispersión. Se utilizó una prueba de ANOVA
de una vía y una prueba post hoc de Bonferroni, se consideró diferencia estadística
significativa a una p<0.05. En CA2 de la zona del trauma no hay diferencias significativas
entre los grupos.
B) Zona de trauma
49

Expresión de GABAAen CA2
TC
E
+S
H
A
M
C
on
tr
al
at
er
al
TC
E
+S
H
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si
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M
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C
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tr
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at
er
al
TC
E
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M
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C
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tr
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+S
H
A
M
C
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tr
al
at
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al
C
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tr
ol
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H
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M
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l
C
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tr
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M
T
C
on
tr
al
at
er
al
C
on
tr
ol
+E
M
T
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si
la
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l
0
1.0107
2.0107
3.0107
4.0107
**
*
In
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n
s
id
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d
r
e
la
ti
v
a

Gráfica 10. Las barras representan la intensidad relativa de presencia del receptor
GABAA subunidad α1. Se muestra el lado contralateral (azul) y el lado ipsilateral (rojo)
para una n=4, cada barra tiene su barra de dispersión. Se utilizó una prueba de ANOVA
de una vía y una prueba post hoc de Bonferroni, se consideró diferencia estadística
significativa a una p<0.05. En CA2 de la zona del trauma el grupo con TCE+EMT del
lado contralateral es significativamente diferente a los otros grupos (*) y al ipsilateral (**)
que también presenta diferencias significativas con los otros grupos.
Al igual que en CA2, CA3 no presenta diferencias significativas entre el grupo
control y el grupo con TCE, pero visualmente se ve una mayor concentración en
el grupo con TCE del lado ipsilateral seguida del grupo control del lado ipsilateral.
Al comparar el grupo TCE+EMT se observa que es significativamente mayor la
concentración del lado ipsilateral con respecto a los otros grupos. En la zona
anterior al trauma se ve un incremento en la concentración pera el lado ipsilateral
del grupo control y el grupo control más EMT pero estos no son
significativamente diferentes. Para la zona de trauma los mayores niveles de
concentración están en el lado ipsilateral del grupo TCE+EMT.

Expresión de GABAAen CA3
C
on
tr
ol
c
on
tr
al
at
er
al
C
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tr
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si
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tr
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v
a

Gráfica 11. . Las barras representan la intensidad relativa de presencia del receptor
GABAA subunidad α1. Se muestra el lado contralateral (azul) y el lado ipsilateral (rojo)
para una n=4, cada barra tiene su barra de dispersión. Se utilizó una prueba de ANOVA
de una vía y una prueba post hoc de Bonferroni, se consideró diferencia estadística
significativa a una p<0.05. En CA3 de la zona anterior al trauma no hay
diferencias significativas entre los grupos.

A) Zona anterior al trauma
51

Expresión de GABAAen CA3
TC
E
+S
H
A
M
C
on
tr
al
at
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al
TC
E
+S
H
A
M
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si
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l
TC
E
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M
T
C
on
tr
al
at
er
al
TC
E
+E
M
T
Ip
si
la
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l
C
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tr
ol
+S
H
A
M
C
on
tr
al
at
er
al
C
on
tr
ol
+S
H
A
M
Ip
si
la
te
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l
C
on
tr
ol
+E
M
T
C
on
tr
al
at
er
al
C
on
tr
ol
+E
M
T
Ip
si
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0
5.0106
1.0107
1.5107
*
In
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e
la
ti
v
a

Gráfica 12. Las barras representan la intensidad relativa de presencia del receptor
GABAA subunidad α1. Se muestra el lado contralateral (azul) y el lado ipsilateral (rojo)
para una n=4, cada barra tiene su barra de dispersión. Se utilizó una prueba de ANOVA
de una vía y una prueba post hoc de Bonferroni, se consideró diferencia estadística
significativa a una p<0.05. En CA3 de la zona anterior al trauma hay diferencias
significativas en el grupo con TCE+EMT ipsilateral con respecto