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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA CARRERA DE CIRUJANO DENTISTA TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO DE CIRUJANO DENTISTA “CONTAMINACIÓN AMBIENTAL DE CEPILLOS DENTALES POR ENTEROBACTERIAS Y HONGOS” Presenta: Calixto Benítez Velkis Karen Directora de Tesis: María Teresa de Jesús Zaragoza Meneses Septiembre 2011 http://images.google.com.mx/imgres?imgurl=http://imagenidea.com.mx/zaragoza/1/FESCOLOR-A_b.jpg&imgrefurl=http://imagenidea.com.mx/zaragoza/1/index.htm&usg=__aSy-SSW15gFya0G3_r1LIW9Z0Z0=&h=530&w=527&sz=175&hl=es&start=1&itbs=1&tbnid=iiKZgUy7RqwYtM:&tbnh=132&tbnw=131&prev=/images?q=UNAM+ZA http://images.google.com.mx/imgres?imgurl=http://imagenidea.com.mx/zaragoza/1/FESCOLOR-A_b.jpg&imgrefurl=http://imagenidea.com.mx/zaragoza/1/index.htm&usg=__aSy-SSW15gFya0G3_r1LIW9Z0Z0=&h=530&w=527&sz=175&hl=es&start=1&itbs=1&tbnid=iiKZgUy7RqwYtM:&tbnh=132&tbnw=131&prev=/images?q=UNAM+ZA UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. Esta investigación se realizó con los recursos financieros de un proyecto PAPIME (202009), fue desarrollada con el equipo disponible en el Laboratorio de Investigación en Odontología y con la ayuda de los alumnos de la Carrera de Cirujano Dentista de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, sin su apoyo y participación este trabajo no se habría forjado con éxito. “CONTAMINACIÓN AMBIENTAL DE CEPILLOS DENTALES POR ENTEROBACTERIAS Y HONGOS” AGRADECIMIENTOS Esta tesis, si bien ha requerido de mi gran esfuerzo y mucha dedicación, no hubiese sido posible su finalización sin la cooperación de mis padres, hermanos, familiares, amigos y profesores, los cuales han sido un soporte muy fuerte en momentos de angustia y desesperación; por ello me gustaría agradecer su amistad, apoyo, ánimo y compañía en las diferentes etapas de mi vida. Algunos están aquí conmigo, otros solo en mis recuerdos y en el corazón. Sin importar en donde estén o si alguna vez llegan a leer esto, quiero darles las gracias por todo lo que me han brindado, por todas sus bendiciones y por formar parte de mí. Primero y antes que nada, quiero dar gracias a Dios, por estar conmigo en cada paso que doy, por ayudarme a terminar, por fortalecer mi corazón e iluminar mi mente para hacer este sueño realidad, por ponerme en este mundo loco y por haber cruzado en mi camino aquellas personas que me han acompañado durante todo el periodo de estudio. Gracias por que siempre has guiado e iluminado mí sendero y lo único que te puedo decir es que te necesitaré de hoy en adelante en cada momento de mi vida, por lo que nunca me apartaré de ti. Mami, no me equivoco si digo que eres la mejor mamá del mundo, gracias por todo tu esfuerzo, tu apoyo, tu dedicación, tu empeño, por ayudarme a ser una mejor mujer cada día, por toda la confianza que depositaste en mí. Gracias por que siempre has estado a mi lado. Te quiero mucho. Papá, esa persona que nunca dejara de quererte a pesar de lo buena o mala hija que pueda ser, mi símbolo de sabiduría, seguridad y fortaleza, quien siempre me ha enseñado a luchar para conseguir mis metas y hacer mis sueños realidad, que día a día me demuestra que la vida no es sencilla y es una lucha constante, pero que siempre se puede, que no hay imposibles, que no importa lo que sea siempre hay una razón para vivir, y nada es más importante que estar bien con tu familia, por eso este pequeño logro quiero compartirlo contigo. Gracias por ser mi papi, porque siempre has estado al pendiente de mí, por nunca dejar de brindarme tu confianza, y no existen palabras suficientes para agradecer todo tu esfuerzo y sacrificio realizado para que yo alcanzara este triunfo. A mis hermanos, esas personitas que uno no elige para vivir, pero hacen tu infancia feliz y crecen contigo, siempre están cuando los necesitas, comparten aventuras, travesuras, regaños o momentos difíciles, mi vida no tendría el mismo sentido si alguno de ellos me faltara: Jorge, gracias por ser mi hermano mayor, por no molestar cuando trabajaba, por todo el apoyo económico que me has brindado y porque siempre estás ahí. Irving, mi gemelo bueno, quien me ha acompañado a lo largo de esta aventura que significó la licenciatura, una más a todas nuestras historias. Gracias por estar conmigo en cada una de mis alegrías y decepciones, por ser mi mano derecha, por entender mis malos ratos, por tu paciencia infinita, por apoyar todas y cada una de mis locuras, por defender tus ideas, y a pesar de no creer en mi tesis siempre conté contigo, pero sobre todo gracias por compartir el mundo de la Odontología conmigo. “Porque el éxito no es una meta en la vida, sino un estado de ánimo” Lore, mi hermosa y linda hermana, quien con toda su tenacidad y alegría siempre tiene un abrazo para decirme que todo saldrá bien. Gracias por ser mi acompañante en esas noches de desvelo, por ayudarme a vencer el sueño y el cansancio, por darme ánimos. Gracias por no solo ser mi hermanita, sino también mi mejor amiga y confidente. Ford, espontáneo, inteligente, lleno de ideas para mejorar el mundo, con mucha iniciativa, pero siempre demostrándome que estará ahí para cuando lo necesite. Toda la vida voy a estar agradecida contigo por ese apoyo incondicional y desinteresado que me has bridado. Nunca dejes de ser quien eres para que cada uno de nosotros nunca olvidemos lo que significa amarnos como hermanos. El amor es una fuerza que te emociona día con día, que te permite disfrutar de los detalles insignificantes y compartirlos con alguien; porque no es tan fácil encontrar a esa persona que este a tu lado en los momentos importantes, que te cuide, que se ría contigo, que te respete, que no te juzgue, que te motive, pero sobre todo que te impulse a ser mejor, y tú Omar eres esa persona. Gracias por apoyarme y creer en mí, por amarme a pesar de como soy, porque desde que te conocí supe que eras el príncipe de mis sueños, junto a ti las cosas malas se convierten en buenas, las tristezas se transforman en alegrías, la soledad no existe y mi vida es diferente, por ello solo me queda expresarte con todo mi corazón lo mucho que TE AMO. A todos mis amigos, sin excluir a ninguno Alma, Karina, Aras, Emma, Xavier, Paco, Ana, Dulce Nidia, Diana y Victor. Mil gracias por permitirme entrar en sus vidas, por todos sus consejos, su apoyo incondicional y sobre todo, por los momentos que hemos pasado juntos, han sido ¡súper padrísimos! Un agradecimiento especial a la Lic. Ale, una buena amiga, quien contribuyó con su apoyo profesional en la revisión final de este trabajo, eternamente agradecida. A una mujer muy especial, la Dra. Tere Zaragoza mi directora de tesis, quien no solo guió por buen camino todo el proceso de elaboración y terminado de este trabajo, ya que a lo largo de este tiempo se convirtió en una “mami” para mí, siempre motivándome en los momentos difíciles, recordándome pendientes, apoyándome con sus consejos, escuchando todas mis aventuras y mis locas ideas, disfrutando cada una de mis alegrías. Gracias Dra. por compartir sus conocimientos conmigo, por ser quien encendió esa chispa que memotivó a realizar la investigación y amar la Microbiología. “Porque la investigación se piensa con el corazón” Gracias a la Dra. Olga Taboada, por su desinteresada colaboración y asistencia profesional al poner a mi disposición todo su conocimiento metodológico, por la acertada orientación y discusión critica que permitió que esta tesis llegara a un buen término, pero sobre todo por tomarse el tiempo para atenderme. A cada uno de mis profesores, porque de alguna manera forman parte de lo que soy ahora, en especial al Dr. Jesús Regalado por brindarme su ayuda cuando más la necesitaba, por ser una persona con la que puedo contar siempre, por el cariño que me brinda y los ánimos que me da. Al Dr. Daniel Nájera por la colaboración, apoyo laboral; por su paciencia, por escucharme, aconsejarme y sobre todo por esa gran amistad. A mis sinodales, por sus invaluables sugerencias a la versión original del manuscrito que contribuyeron al mejoramiento del presente trabajo. Psic. Eduardo Cortez Martínez C.D. Noemí López Flores C.D. María del Carmen Salazar Vera C.D. Víctor Javier Álvarez Bañuelos Velkis NO TE RINDAS No te rindas, aún estás a tiempo de alcanzar y comenzar de nuevo, aceptar tus sombras, enterrar tus miedos, liberar el lastre, retomar el vuelo. No te rindas que la vida es eso, continuar el viaje, perseguir tus sueños, destrabar el tiempo, correr los escombros, y destapar el cielo. No te rindas, por favor no cedas, aunque el frío queme, aunque el miedo muerda, aunque el sol se esconda, y se calle el viento, aún hay fuego en tu alma aún hay vida en tus sueños. Porque la vida es tuya y tuyo también el deseo porque lo has querido y porque te quiero porque existe el vino y el amor, es cierto. Porque no hay heridas que no cure el tiempo. Abrir las puertas, quitar los cerrojos, abandonar las murallas que te protegieron, vivir la vida y aceptar el reto, recuperar la risa, ensayar un canto, bajar la guardia y extender las manos desplegar las alas e intentar de nuevo, celebrar la vida y retomar los cielos. No te rindas, por favor no cedas, aunque el frío queme, aunque el miedo muerda, aunque el sol se ponga y se calle el viento, aún hay fuego en tu alma, aún hay vida en tus sueños porque cada día es un comienzo nuevo, porque esta es la hora y el mejor momento. Porque no estás solo, porque yo te quiero Mario Benedetti (1920 – 2009) “¡Si uno conociera lo que tiene, con tanta claridad como lo que le falta!” ~ 8 ~ INDICE Págs. INTRODUCCIÓN 9 JUSTIFICACIÓN 11 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 13 MARCO TEÓRICO 14 HIPÓTESIS 25 OBJETIVO GENERAL 26 DISEÑO METODOLÓGICO 27 a) Tipo de estudio 27 b) Población de estudio 27 c) Variables 28 d) Técnica 29 e) Diseño estadístico 33 RECURSOS 34 RESULTADOS 35 ANÁLISIS DE RESULTADOS 43 DISCUSIÓN 45 CONCLUSIONES 50 PROPUESTAS 51 REFERENCIAS 52 ~ 9 ~ INTRODUCCIÓN Los cepillos dentales tienen una gran importancia dentro del cuidado y prevención de las enfermedades bucales, pero también son la causa de repetidas infecciones bucales y sistémicas. Se ha comprobado que conforme el tiempo de uso es mayor, las cerdas son un reservorio de bacterias y el medio idóneo para el crecimiento de microorganismos que no solo pertenecen a la cavidad bucal, sino que también son provenientes del medio ambiente. Los cuartos de baño, por sus especiales condiciones de humedad, temperatura y ubicación del WC con respecto al lavabo, son los espacios perfectos para que hongos y enterobacterias se desarrollen. Estos microorganismos pueden ser inhalados y permanecer en el aire, en el asiento del retrete, suelo y cepillos dentales que se encuentran alrededor durante al menos ocho días. Entre los factores que influyen en la proliferación de estos microorganismos en los cepillos dentales se encuentra el agua que se utiliza para realizar el cepillado dental, ya que ésta juega un papel importante en el mantenimiento y desarrollo de coliformes fecales, considerando que el agua potable es aquella que no ocasiona riesgos para la salud. Sin embargo, existe evidencia de que la potabilización del agua pierde calidad y logra contaminarse de bacterias entéricas a lo largo de su recorrido por la red de abastecimiento pública y en el manejo intradomiciliario de almacenamiento. Para evitar la contaminación ambiental de enterobacterias y hongos en los cepillos dentales se ha recomendado el utilizar un estuche, capuchón o protector. Sin embargo, estudios realizados han demostrado que los cepillos protegidos tienen una mayor contaminación de estos microorganismos, debido a que esta protección proporciona condiciones ambientales como humedad y temperatura que favorecen su desarrollo. ~ 10 ~ Por tal motivo, el propósito de este estudio fue se determinar la frecuencia de enterobacterias y hongos cepillos dentales, para lo cual se recolectó una muestra de 150 cepillos pertenecientes a los alumnos de la Carrera de Cirujano Dentista de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, inscritos en el periodo 2009 - 2010 del turno matutino. Considerando la información brindada por los alumnos, se observó el crecimiento de estos microorganismos de acuerdo a factores de riesgo ambientales como el tiempo de uso, la permanencia del cepillo dental dentro del cuarto de baño, la utilización de un estuche protector o el tipo de agua que se utiliza durante el cepillado. ~ 11 ~ JUSTIFICACIÓN A través de la historia, las afecciones bucales han constituido un importante problema de salud por su alta prevalencia, demanda pública y fuerte impacto sobre las personas y la sociedad.1 La odontología moderna considera que el mayor esfuerzo debe estar dirigido a reducir la frecuencia de enfermedades bucales mediante un incremento de las actividades de promoción, prevención y educación para la salud; siendo uno de los métodos preventivos más importantes la remoción mecánica de la placa bacteriana mediante el cepillado dental.1, 2 Estudios realizados demuestran que aunque los cepillos dentales juegan un papel muy importante para el cuidado de la salud bucal, también son una fuente para el desarrollo de bacterias patógenas, ya que sus cerdas y el microambiente que en ellas se forma son un medio idóneo para el crecimiento de microorganismos.2, 3 Los cepillos dentales con un tiempo de uso mayor pueden contaminarse con la flora microbiana del aire. Esta es transitoria y variable debido a que presenta un ambiente hostil para el crecimiento de microorganismos, sin embargo, resulta ser un medio transportador de bacterias y hongos que se encuentran en el aerosol emanado del inodoro, en el cuarto de baño y en general del medio ambiente donde los cepillos dentales son almacenados.2-4 Los cuartos de baño, por sus condiciones ambientales de temperatura, humedad, materia orgánica y la ubicación del WC con respecto al lavabo, son los espacios ideales para que hongos y enterobacterias se desarrollen, proliferen y permanezcan hasta ocho días en utensilios u objetos que se encuentran aledaños a este sitio.3,5 Una fuente importante para la reproducción de microorganismos es el agua utilizada durante el cepillado, ya que es un líquido vital e indispensable para los procesos biológicos y aunque normalmente cumpla con los criterios de potabilización, llega a ser contaminada con organismos coliformes.6 ~ 12 ~ La utilización de un estuche o protector para evitar la contaminación del cepillo dental con bacterias ambientales resulta negativo ya que propicia un ambiente húmedo para el desarrollo de hongos y en especial enterobacterias.7Se comprueba así que la contaminación microbiana del cepillo dental juega un rol como puerta de entrada a enfermedades estomatológicas y sistémicas ya que, debido al uso de una inapropiada técnica de cepillado, el usuario puede lacerar la encía favoreciendo la introducción al torrente sanguíneo de microorganismos patógenos y oportunistas provenientes del cepillo.3 Por todo ello decidí realizar esta investigación en la cual cepillos dentales recolectados se procesaron y cultivaron en medios selectivos para el crecimiento de enterobacterias y hongos utilizando las instalaciones del Laboratorio de Investigación en Odontología. El impacto y la trascendencia de este trabajo servirán para hacer conciencia pública de que los cepillos de dientes son contaminados por microorganismos que no sólo provienen de la cavidad bucal, y pueden ser la causa de muchas enfermedades sistémicas o agravar las afecciones estomatológicas, siendo muy importante fomentar la desinfección y el cuidado del cepillo dental. ~ 13 ~ PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA La odontología actual se orienta a la prevención, considerando la remoción de la placa bacteriana con la correcta utilización de un cepillo dental como una de las principales medidas para la disminución de problemas bucodentales. Estudios realizados demuestran que los cepillos de dientes sirven como un vector de microorganismos agravantes de enfermedades bucales con repercusiones a nivel sistémico, esto debido a una técnica de cepillado inapropiada, que puede resultar en una encía lacerada, favoreciendo la introducción de bacterias y hongos provenientes de la flora presente en el cepillo al torrente sanguíneo. Los cepillos dentales son un reservorio y medio idóneo para el desarrollo de agentes patógenos que no solo provienen de la cavidad bucal, por lo que se plantea la siguiente pregunta de investigación: ¿Existe la presencia de enterobacterias y hongos en los cepillos dentales utilizados por los alumnos de la Carrera de Cirujano Dentista de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, inscritos en el turno matutino del periodo 2009–2010? ~ 14 ~ MARCO TEÓRICO La historia de la higiene bucal se remonta a los años 3000 antes de Cristo, con evidencia en las tumbas del antiguo Egipto, en donde se han encontrado vestigios de la utilización de pequeñas ramas de árboles con fibras suaves que se empleaban para la limpieza dental. Posteriormente se observó que en culturas indígenas de Australia, existía un utensilio fabricado mediante el desfibrilado de la punta de una vara de madera de quince centímetros de largo y que cumple una función semejante a la de un cepillo dental. El cepillo de dientes tal como lo conocemos hoy, con las cerdas perpendiculares al mango, fue inventado por los chinos alrededor del año 1490, quienes creían que la acción destructiva de los dientes podía prevenirse eliminando los restos de comida de la boca. En 1640 se introdujo a Europa pero sólo la realeza podía utilizarlo y a partir del siglo XIX se convirtió en el método de higiene bucal más efectivo.8, 9 La odontología moderna se orienta a la prevención, promoción y educación para la salud, ya que las afecciones bucales constituyen un importante problema de salud pública por su alta prevalencia, demanda y fuerte impacto sobre las personas y la sociedad, considerándose que la remoción mecánica de la placa con la correcta utilización de un cepillo dental es una de las actividades de mayor importancia para la disminución de los problemas bucodentales.10-12 Sin embargo, el cepillo dental brinda la desventaja de convertirse en un vector de agentes causantes de enfermedades como caries, gingivitis, periodontitis severa o agresiva, además de contribuir a la diseminación sistémica de microorganismos; por ello es importante hacer hincapié en la bioseguridad con respecto a cómo los cepillos de dientes deben ser adecuadamente almacenados, desinfectados y remplazados en intervalos regulares.1, 2, 10-12 Los cepillos de dientes de uso regular y con un tiempo prolongado, son un reservorio de microorganismos potencialmente patógenos que no solo son de cavidad bucal ya que también provienen de diversas fuentes como: el medio ambiente, el aerosol emanado del sanitario, los dedos de la persona, los sitios ~ 15 ~ húmedos del cuarto de baño, la re-contaminación con otros cepillos almacenados adyacentes y el agua utilizada durante el cepillado.3, 11-15 Cuando los cepillos dentales son fabricados están libres de microorganismos y se ha comprobado que después de un periodo de uso que va desde 30 segundos hasta 4 minutos son contaminados por bacterias, virus y hongos que pueden permanecer viables en las cerdas del cepillo por períodos que van desde 24 horas a 7 días dependiendo del tipo de microorganismo. Como tal, no existe un consenso científico sobre las necesidades de recambiar el cepillo dental y de acuerdo con la American Dental Association se recomienda hacer el cambio cada tres o cuatro meses cuando ya las cerdas no están alineadas y pueden lastimar la encía. Sin embargo muchos pacientes usan hasta por un año el mismo cepillo dental.11, 16 De acuerdo con estudios realizados se recomienda que el cepillo de dientes debe desinfectarse por lo menos una vez a la semana con una solución germicida, sin importar si éste es nuevo o ya tiene un tiempo de uso, para así evitar la formación de bacterias en las cerdas, y en el caso de pacientes con enfermedad periodontal o algún otro tipo de infección bucal, faríngea o gastrointestinal, es importante hacerlo todos los días hasta que el cepillo de dientes sea desechado, sin olvidar que éste debe ser remplazado cada mes.11, 16, 17 El agua que se utiliza durante el cepillado es un factor importante que permite la transportación, proliferación y supervivencia de microorganismos en las cerdas del cepillo dental y cavidad bucal. Este es un líquido necesario para el mantenimiento de la vida, su funcionalidad biológica la hace indispensable para el crecimiento de bacterias siendo esencial en los procesos biológicos de éstas.6, 18-20 En México, de acuerdo a la norma oficial NOM-127- SSA1 1994, se dice que en una muestra de 100 ml de agua los organismos coliformes deben estar ausentes y E. coli u organismos termo tolerantes deben ser no detectables, considerándose agua potable para el consumo humano aquélla cuya ingestión no cause efectos nocivos a la salud.20-24 ~ 16 ~ El agua de la red pública considerada como potable que se utiliza en el país normalmente proviene de aguas subterráneas, ríos y mantos acuíferos. La problemática en torno a este recurso radica en el deterioro de la calidad y su disponibilidad, así como en la deficiencia sanitaria de los sistemas hidráulicos de distribución. Diversos estudios han demostrado que el agua de consumo humano superficial o subterránea es contaminada por materia orgánica e inorgánica fecal proveniente del drenaje doméstico, industrial o agropecuario, considerando esto como un riesgo significativo para la salud convirtiéndose en un vehículo de transmisión de microorganismos en especial los de origen intestinal.20, 25-27 Aunque el agua reúna las condiciones de potabilidad, al ingresar al sistema de distribución puede deteriorarse antes de llegar al consumidor, ya sea por contaminación del mismo sistema de distribución o por manejo intradomiciliario deficiente, el cual se agrava por el almacenamiento en cisternas, tinacos u otros depósitos.6, 21, 24 Otro factor que contribuye a la formación de microorganismos en los cepillos dentales es el ambiente donde estos son almacenados. Se ha demostrado que normalmente el cepillo dental permanece dentro del cuarto de baño y por sus condiciones especiales de temperatura, humedad, materia orgánica y la ubicación del WC conrespecto al lavabo, son los espacios ideales para que hongos y bacterias se desarrollen.3, 5 En el agua que hay en los inodoros se forma una película llamada biofilm bajo la cual viven y se alimentan las bacterias, creciendo y reproduciéndose libremente. Cada vez que vaciamos la cisterna del WC, se produce un bioaerosol que propaga miles de gérmenes que salen del inodoro al ambiente, estos pueden desarrollarse, reproducirse y sobrevivir hasta ocho días en utensilios u objetos que se encuentran aledaños a este sitio.3, 5, 12, 28 La flora microbiana del aire es transitoria y variable, este no es un medio donde pueden vivir los microorganismos, pero es un transportador de partículas, polvo y ~ 17 ~ gotas que pueden estar cargadas de gérmenes provenientes del suelo, materia orgánica, animales y el ser humano.28 El destino final de los microorganismos transportados por el aire está gobernado por un complejo conjunto de circunstancias que incluyen las condiciones atmosféricas, humedad, luz solar, temperatura, el tamaño de las partículas y la susceptibilidad a las condiciones físicas ambientales.28 Por mucho tiempo se ha considerado como un método preventivo para evitar la proliferación de bacterias ambientales en las cerdas de los cepillos dentales la utilización de un protector o estuche de plástico, lo cual resulta negativo debido a que la humedad que ofrece el dejar el cepillo dental en su estuche o colocar una protección puede ocasionar o favorecer el crecimiento de microorganismos oportunistas como enterobacterias y hongos.7, 12 Aunque la cavidad bucal normalmente alberga una amplia variedad de especies bacterianas y un número más pequeño de virus, hongos y protozoos, la mayoría de ellos son comensales, ya que viven con nosotros sin causar daño. Su número, así como la variedad de especies, cambia permanentemente. Cabe destacar que cuando el equilibrio inmunológico se rompe y existe un aumento en la población bacteriana, se pueden presentar diversas enfermedades.29-31 El uso de un cepillo dental contaminado favorece la introducción de microorganismos a cavidad bucal, provocando infecciones que pueden tener repercusiones a nivel sistémico.3, 13, 17, 32, 33 Los principales microorganismos encontrados en los cepillos dentales corresponden a microorganismos autóctonos (flora normal de cavidad bucal), como Streptococcus, Staphylococcus, Lactobacillus, Veillonella, Actinomyces entre otros, y microorganismos alóctonos (procedentes del medio ambiente), dentro de los que podemos encontrar enterobacterias como Salmonella, Klebsiella, E. coli, hongos, moho y levaduras como Cándida albicans, entre otras.3, 15, 32, 34 ~ 18 ~ Enterobacterias Dentro de los microorganismos que sobreviven en los cepillos dentales se encuentran los que pertenecen a la familia de las Enterobacterias. Estas constituyen un grupo heterogéneo de bacterias Gram negativas, tienen una morfología bacilar o curva y miden de 1.0 a 6.0 µm, no son esporuladas, algunas tienen movilidad por flagelos, son aerobios y anaerobios facultativos, fermentan la glucosa con formación de ácidos y gas, son oxidasa negativos y catalasa positivos. Poseen diversos factores de virulencia como la cápsula, que impide la unión de los anticuerpos a la bacteria, diversas enzimas líticas como las hemolisinas que tienen efecto sobre los eritrocitos y los leucocitos, fimbrias que promueven la adherencia a las superficies mucosas y gran capacidad de adquirir resistencia a los antibióticos.34-38 Estos organismos cuentan con una membrana interna (citoplasmática), una cubierta de peptidoglucano que la rodea, y una compleja membrana externa (pared celular) que posee canales para la penetración de nutrientes, así como una cápsula compuesta por lipopolisacáridos que le permiten tener un alto grado de antigenicidad y toxicidad por su fracción polisacárida y lipídica. Los lipopolisacáridos de la pared celular contienen moléculas internas de lípidos tipo A que se encargan de llevar acabo los procesos biológicos de las endotoxinas y que solo se liberan cuando la célula muere y se lisa.38-41 En la parte más externa existen tres tipos de antígenos de superficie que sirven para determinar la patogenicidad de una cepa e identificarla. Estos son el antígeno somático o antígeno O, el antígeno flagelar o antígeno H, y el antígeno capsular o antígeno K. Los antígenos O actúan como factores de adhesión-colonización necesarios para la producción de infección, otros actúan como toxinas. Los antígenos H son proteínas encontradas en los flagelos y son responsables de la capacidad de progresión de las enterobacterias. Por último, los antígenos K son polisacáridos ácidos situados en la superficie celular principalmente asociados al desarrollo de bacteremias.38-41 ~ 19 ~ Para aislar estas bacterias se utilizan tres tipos de medios de cultivo que pueden ser: 1) Medios diferenciadores que permiten el crecimiento de colonias, los cuales se preparan con lactosa, sales biliares y un indicador. 2) Medios selectivos, que favorecen el desarrollo de enteropatógenos debido a su alto contenido de sales biliares. 3) Medios enriquecidos, que contienen mayor variedad de nutrientes para favorecer el crecimiento de cepas difíciles.39-42 Las enterobacterias son parte de la microbiota normal del tracto gastrointestinal de humanos y animales, se encuentran en ambientes naturales, plantas, tierra y agua. La mayoría de estas bacterias son consideradas como patógenos oportunistas de boca, vías urinarias, tracto respiratorio, piel, tejidos blandos y cavidades estériles, por lo cual son los microorganismos más importantes desde el punto de vista médico.40-42 Dentro de cavidad bucal, han sido reportadas como transeúntes de la flora bucal y pueden encontrarse en proporciones altas sobre la superficie mucosa, dientes y en el área subgingival de pacientes con periodontitis avanzada o agresiva. Tienen la capacidad para colonizar y proliferar, actuando como cofactor en las formas destructivas de la enfermedad periodontal. También se han aislado de individuos que usan prótesis y están relacionadas directamente con halitosis.38-43 Algunas de estas bacterias poseen factores de patogenicidad propios, otras únicamente causan enfermedad cuando aparecen en el huésped factores que predisponen a la infección. Estos pueden ser locales, ya que actúan facilitando la penetración microbiana por ruptura de las barreras mucocutáneas, como sucede en las heridas, quemaduras, la utilización de prótesis y la presencia de infecciones locales que pueden complicarse con sobreinfecciones.34, 39-42 ~ 20 ~ Otro tipo de factores predisponentes son aquellos donde existe una alteración en el sistema inmune, tal es el caso de pacientes con enfermedades como diabetes, insuficiencia renal, Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) o las edades extremas como neonatos y ancianos.34, 39-42 Los géneros enteropatógenos humanos más importantes son Klebsiella, Salmonella, Escherichia coli, entre otras.34, 39-42 Klebsiella Los microorganismos pertenecientes a este género son bacilos Gram negativos, no flagelados que producen citratos, fermentan lactosa y glucosa. La capa más externa está constituida por una cápsula antifagocitica prominente con antígenos O y K que da lugar a colonias mucoides de gran tamaño. Está conformado por varias especies, entre las que se encuentran K. pneumoniae, K. oxytoca, K. planticola y K. terrígena.39-44 Se encuentra presente de forma natural en el intestino, plantas y suelo, puede proliferar en sistemas de distribución de agua o en agua contaminada por aguas residuales. Se sabe que colonizan las arandelas de los grifos y son excretados en las heces de muchas personas y animales sanos.44-47 Se ha considerado que Klebsiella es una especie oportunista que afecta con mayor frecuencia a personascon sistemas inmunitarios poco activos, la colonización puede dar lugar a neumonías primarias, graves o cavernosas, infecciones invasivas del tracto respiratorio y órganos adyacentes.5, 17, 45-50 E. coli Son bacilos entéricos Gram negativos, no esporulados, móviles con flagelos peritricos, aerobios facultativos, fermentadores y oxidativos en medios con glucosa u otros carbohidratos, catalasa positivos, oxidasa negativos, reductores de nitratos a nitritos. Son poseedores de una cápsula que inhibe la actividad fagocítica, tienen la capacidad de inyectar su propio receptor en la célula huésped para adherirse al moco que recubre la superficie del colon y del intestino delgado.17, 42, 51,52 ~ 21 ~ Son bacterias de rápido crecimiento que colonizan el intestino del hombre pocas horas después del nacimiento y se les considera microorganismos de flora normal. Frecuentemente causan infecciones oportunistas; pero, algunas cepas poseen capacidad patógena primaria produciendo afección en personas previamente sanas sin factores predisponentes que no son originadas por las cepas que habitan normalmente en el intestino, sino por líneas especialmente patógenas que se transmiten por vía fecal-oral, de persona a persona o a través del agua y alimentos contaminados; su presencia es indicio de contaminación fecal.5, 51-54 Las cepas de E. coli enteropatógenas se clasifican según su antígeno en seis grupos: enterotoxigénica, enterohemorrágica, enteroinvasiva, enteropatógena, enteroagregativa y de adherencia difusa, produciendo cuatro cuadros clínicos completamente diferentes, entre ellos la diarrea del viajero y el síndrome urémico hemolítico.5, 17, 51-54 Salmonella Es un microorganismo entérico considerado patógeno primario perteneciente a la familia de las enterobacterias, se caracteriza por ser un bacilo Gram negativo, flagelado, aerobio facultativo, es catalasa positivo, no esporulado, fermenta glucosa, maltosa y manitol; por los antígenos presentes en la capa externa es resistente a los ácidos diluidos y alcoholes.42, 43, 55,56 Normalmente sobrevive en el aire hasta por diez minutos y crece a una temperatura que oscila entre los 5.5°C y los 45°C, tiene la capacidad de ser una bacteria termotolerante, esto debido a que genera factores de resistencia como proteínas de membrana que le dan una mayor protección a los cambios de temperatura, demostrándose que sobrevive a temperaturas mayores a 60°C, resistiendo la refrigeración y la congelación.55-57 Está distribuida abundantemente en la naturaleza, abarcando un amplio rango de huéspedes que van desde animales (aves, insectos y reptiles) hasta humanos, siendo la causa más frecuente de diarreas infecciosas las cuales tienen un alto grado de morbilidad y mortalidad.56-58 ~ 22 ~ Las cepas patógenas en humanos son S. choleraesuis, S. entérica y S. enteritidis y las tíficas que son S. typhi y S. paratyphi.56-58 Hongos Los hongos son microorganismos eucariotas que a partir de la absorción realizan los procesos de nutrición teniendo una reserva de glucógeno. Son aerobios o microaerobios, viven en la tierra o sobre vegetales, especialmente en lugares húmedos. Su crecimiento óptimo se produce entre los 20 y 38°C, a un pH de 5.6 a 7.2, tienen diversos biotipos, con una gran variedad morfológica, pueden ser unicelulares o pluricelulares.42, 59-61 Se multiplican a través de estructuras que pueden ser asexuales, ya que se reproducen mediante la formación de esporas de mitosis, en donde él número de cromosomas permanece constante. También pueden ser sexuales que se originan como resultado de una previa fusión del protoplasma y núcleo de células distintas.42, 59-61 De acuerdo con la morfología y el crecimiento de los hongos que causan micosis en el ser humano, estos pueden ser levaduras o moho comúnmente llamados filamentosos. Las levaduras son microorganismos unicelulares, elipsoidales que se reproducen por gemación, que es la protrusión externa del protoplasma materno formando una saliente que va creciendo poco a poco y finalmente se desprende convirtiéndose en un nuevo individuo. Los hongos filamentosos son multicelulares, tienen un elemento tubular denominado “hifa” que normalmente sigue creciendo hasta ramificarse y formar un conjunto entrelazado llamado “micelio” en donde se producen los elementos de propagación como esporas y conidios.49, 59-61 Cándida albicans Es considerado como uno de los principales hongos patógenos con manifestaciones clínicas en boca, fue descubierto en el año de 1839 por Langenbeck quien observó la formación de placas en las mucosas de boca y otros órganos en cadáveres al momento de la autopsia. En 1842 Gruby confirmó ~ 23 ~ esta observación denominándola Oidium albicans, y para el año 1923 Burkhout la denominó Cándida; terminología utilizada actualmente.59-63 Cándida albicans suele presentarse como una célula oval que mide de 2 a 4 micras, se considera dentro del grupo de las levaduras ya que se reproduce asexualmente por gemación, tiene una forma alargada semejante a hifas, desarrolla seudofilamentos y produce clamidosporas. Asimismo, tiene la capacidad para producir tubos germinales o germinativos cuando las colonias son inoculadas en 0.5 ml. de suero a temperatura de 37°C, observándose los resultados después de 2 o 3 horas.59-64 Un tubo germinal o germinativo se define como una extensión filamentosa de una célula levaduriforme que mide alrededor de la mitad del ancho y tres a cuatro veces el largo de la célula. El tubo germinativo que caracteriza a C. albicans ha sido descrito como un tubo sin constricción en el punto de origen y tiene una apariencia similar a “espejo de mano”. Cándida albicans es la única levadura que produce este tubo, por lo que es una prueba comúnmente utilizada para su diferenciación con otras especies de Cándida. 59-64 Cándida albicans crece "in vitro" en condiciones de aerobiosis, en medios de cultivo con agar, peptona, dextrosa, maltosa, sacarosa y harina de maíz, a pH con rango entre 2.5 y 7.5 y temperatura que oscila entre 20°C y 38°C.60-64 En agar Sabouraud las colonias muy pequeñas aparecen en un lapso de 24 a 36 horas, miden de 1.5 a 2 mm, de diámetro, son de color blanco y aspecto cremoso, pero adquieren un color requemado al continuar envejeciendo, son lisas, suaves, húmedas, de consistencia blanda y rápidamente proyectan filamentos hasta la profundidad del agar; después de 4-5 días se percibe un olor característico de levaduras.60-64 En medios selectivos y diferenciales como en el agar Biggy Cándida albicans crece en periodos de 5 a 7 días, suele presentarse como colonias blandas, grandes y de color marrón obscuro (café).60-54 ~ 24 ~ Podemos encontrar C. albicans como flora normal en cavidad bucal, intestino, vagina, secreción bronquial, piel del hombre y de ciertos animales sin causar patología. En la boca la colonización es significativamente distinta de sitio a sitio. Una etapa temprana y esencial en el desarrollo de la candidiasis bucal es la colonización por parte de las levaduras, un proceso que involucra la adquisición, adherencia y mantenimiento de una población estable de hongos. No obstante, la capacidad de infección disminuye porque existe un equilibrio inmunológico y bacteriano. Cándida albicans jamás está presente de manera prolongada en mucosa, tejido o piel sana, excepto en la región perianal.42, 59-64 La presencia de C. albicans como comensal en las mucosas de sujetos asintomáticos es común, esto debido a que existe un balance entre los mecanismos de defensa del hospedero y el potencial invasivo por parte de las levaduras; cuando el sistema de defensa del hospedero se daña, como ocurre en sujetos con diversas observaciones clínicas, siendo los cambios en el hospedero los responsables del desequilibrio ecológico. Por estas razones la infección porC. albicans puede derivar en el establecimiento de una candidiasis, la cual se puede manifestar de manera superficial, involucrando solamente la mucosa bucal o diseminándose a tejidos adyacentes, siendo esta una forma invasiva más seria. Este tipo de infección micótica puede servir de indicador clínico que señale la presencia de una enfermedad o alteración significativa subyacente.61-65 En un estudio realizado por Pardi y Cardoso (2002) en 57 cepillos dentales se observó la presencia de Cándida albicans en el 58% de estos, permitiendo comprobar "in vitro" que esta especie sobrevive en condiciones favorables en las cerdas de los cepillos. Esto se debe a una característica del hongo para adherirse no solo a las células epiteliales sino también a las superficies acrílicas.60-65 ~ 25 ~ HIPÓTESIS Los cepillos dentales pertenecientes a los alumnos de la Carrera de Cirujano Dentista de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza presentaran diversas cepas de enterobacterias y hongos. ~ 26 ~ OBJETIVO GENERAL Determinar la contaminación ambiental por enterobacterias y hongos en cepillos dentales utilizados por una población de alumnos de la Carrera de Cirujano Dentista de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza inscritos en el turno matutino del periodo 2009 - 2010. OBJETIVOS ESPECÍFICOS Identificar la frecuencia de enterobacterias y hongos en los cepillos dentales de acuerdo con la permanencia dentro del cuarto de baño. Identificar la frecuencia de enterobacterias y hongos en los cepillos dentales de acuerdo con el tiempo de uso. Identificar la frecuencia de enterobacterias y hongos en los cepillos dentales de acuerdo con el tipo de agua que se utiliza durante el cepillado. Identificar la frecuencia de enterobacterias y hongos en los cepillos dentales de acuerdo con la utilización de un estuche o protector. ~ 27 ~ DISEÑO METODOLÓGICO a) Tipo de estudio Observacional, transversal, prolectivo y descriptivo. b) Población de estudio 150 cepillos dentales utilizados por los alumnos de la Carrera de Cirujano Dentista de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza inscritos en el turno matutino durante el ciclo escolar 2009-2010. Criterios de inclusión: Cepillos dentales utilizados por los alumnos de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza de la Carrera de Cirujano Dentista inscritos en el turno matutino del periodo 2009 - 2010. Criterios de exclusión: Cepillos dentales que al momento de la recolección no estaban etiquetados o el alumno no hubiera brindado la información necesaria. ~ 28 ~ c) Variables Dependientes VARIABLE DEFINICIÓN NIVEL DE MEDICIÓN OPERACIONALIZACIÓN Enterobacterias Familia de bacterias Gram negativas que forman parte del intestino. Cualitativa Nominal Presencia o ausencia Hongos Microorganismos eucariotas causantes de enfermedades. Cualitativa Nominal Presencia o ausencia Independientes VARIABLE DEFINICIÓN NIVEL DE MEDICIÓN OPERACIONALIZACIÓN Tiempo de uso del cepillo Magnitud con la que medimos la utilización del cepillo dental. Cuantitativa Discontinua Meses de uso Almacenamiento del cepillo en el cuarto de baño Lugar donde se coloca el cepillo dental, antes o después de su utilización. Cualitativa Nominal -Dentro del cuarto de baño -Fuera del cuarto de baño. Agua Sustancia en estado líquido formada por dos átomos de hidrógeno y uno de oxígeno. Cualitativa Nominal -Agua embotellada -Agua de la red pública Capuchón o Protector Estuche para cubrir el cepillo dental. Cualitativa Nominal -Sí -No http://es.wikipedia.org/wiki/Familia_%28biolog%C3%ADa%29 http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativa http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativa http://es.wikipedia.org/wiki/Intestino ~ 29 ~ d) Técnica Se estableció comunicación formal con los alumnos de la Carrera de Cirujano Dentista de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza inscritos en el turno matutino del periodo 2009-2010, en donde se les explicó en qué consistía el estudio. Los alumnos que participaron donaron su cepillo y al mismo tiempo nos proporcionaron los datos de tiempo de uso del cepillo y si el cepillo se encontraba dentro o fuera del cuarto de baño, si utilizaban un estuche o protector para las cerdas del cepillo, y que tipo de agua usaban para cepillarse, si era del grifo o purificada, así como edad y sexo. Se llevó a cabo un proceso de calibración por parte del director del trabajo especialista en microbiología bucal, que consistió en una prueba piloto para la unificación de criterios con respecto a la observación microbiana y los procedimientos a realizar para la elaboración de cultivos. Se efectuó una recolección de 20 cepillos dentales, los cuales fueron analizados para poder llevar a cabo la calibración donde el observador obtuvo una concordancia del 90% en la observación de la morfología colonial. Los cepillos que fueron analizados en el piloto no formaron parte de la muestra tomada para el estudio. La muestra estuvo constituida de un total de 150 cepillos dentales, los cuales se procesaron en el Laboratorio de Investigación en Odontología. Cada cepillo fue etiquetado con el número de muestra e incubado en tubos estériles que contenían 15 ml de caldo Tioglicolato a una temperatura de 37°C durante 24hrs. (Fig. No 1). Fig. No 1 Cepillos en caldo Tioglicolato. ~ 30 ~ Con un hisopo estéril se tomaron muestras del caldo Tioglicolato donde los cepillos fueron incubados y utilizando una técnica de estría simple se sembraron en cajas con 20 ml de agar estéril Eosina azul de metileno (EMB) para la desarrollo de enterobacterias y agar Biggy para el crecimiento de Cándida. Para la identificación de hongos se llevó a cabo un sembrado con asa estéril en tubos de medio inclinado con 2.5 ml de agar Sabouraud, (Fig. No 2, Fig. No 3, Fig. No 4 y Fig. No 5). Fig. No 2 Preparación de agar Fig. No 3 Cajas de agar Fig. No 4 Tubos de agar Sabouraud Fig. No 5 Sembrado ~ 31 ~ Las cajas de agar EMB y los tubos de agar Sabouraud se incubaron a una temperatura de 37°C por 48hrs, mientras que las cajas de agar Biggy se dejaron incubar por un periodo de 7 días a 37° C, pasado este tiempo y de acuerdo a la observación se realizó la diferenciación microbiana de las colonias tomando en cuenta su morfología típica; los resultados fueron registrados en hojas de datos, como se puede observar en las Fig. No 6, Fig. No 7 y Fig. No 8. Fig. No 6 Klebsiella y E coli en agar EMB Fig. No 7 Salmonella en agar EMB Fig. No 8 Cándida en agar Biggy E coli Klebsiella Salmonella Cándida ~ 32 ~ Para la diferenciación de especies como Cándida albicans se realizó la prueba de formación de tubo germinativo, en la cual, con un asa estéril se tomaron muestras de las colonias presentes en las cajas de agar Biggy, sembrándose en tubos con 0.5 ml de suero a una temperatura de 37°C. por 3hrs. Transcurrido este tiempo se tomó una muestra de cada tubo y se observó al microscopio a 40x para detectar la presencia de tubo germinativo como se puede observar en la Fig. No 9. Fig. No 9 Formación de tubo germinativo ~ 33 ~ e) Diseño estadístico A partir de los resultados obtenidos se construyó una base de datos utilizando el software SPSS Statistics 17.0, por medio del cual se realizó estadística descriptiva,obteniendo a partir de ello frecuencia, promedio y desviación estándar. La prueba de significancia estadística que se empleó para las variables cualitativas fue ji cuadrada, con un nivel de confianza al 95%. Así mismo, se calculó como estimación de riesgo la razón de momios (RM), con un IC95% estableciendo como riesgo cuando la RM >1 y el intervalo de confianza no incluye al 1 (p < 0.05). ~ 34 ~ RECURSOS Humanos Pasante: Responsable de la elaboración del proyecto de investigación. Director de Tesis: Responsable de la dirección del proyecto de investigación Físicos Instalaciones de la FES Zaragoza, Laboratorio de Investigación en Odontología. Materiales Agar Biggy Agar Sabouraud Agar EMB Caldo Tioglicolato Incubadora Balanza Hisopos Matraz Pipetas Porta objetos Microscopio Asa de siembra Cepillos dentales Etiquetas Tubos de vidrio Tubos de plástico Hojas de registro Cajas petri Bolígrafos Mecheros Cinta adhesiva Lápices Hojas Computadora Calculadora Impresora Financieros Recursos de un proyecto PAPIME 202009 ~ 35 ~ RESULTADOS De los alumnos de la Carrera de Cirujano Dentista de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, quienes tenían un promedio de edad de 20 años (± 1.4), se recolectaron 150 cepillos dentales; 90 pertenecieron al sexo femenino y 60 al sexo masculino. De acuerdo a los factores de riesgo para la contaminación microbiana del cepillo dental y partiendo de la información brindada por los alumnos con respecto al tiempo de uso, se encontró que el 69.3% (n= 104) utilizaron su cepillo dental por tres meses o menos, mientras que el 30.7 % (n= 46) lo usaron por un periodo mayor, como se muestra en el cuadro 1. Cuadro 1. Tiempo de uso de los cepillos dentales Tiempo de uso en meses Cepillos dentales fx % Uno 29 19.3 Dos 42 28 Tres 33 22 Más de tres 46 30.7 Total 150 100 Con respecto al ambiente, considerado como el lugar donde los cepillos dentales son almacenados se observó que el 74.7% (n= 112) de los alumnos mantienen su cepillo dental ~ 36 ~ en el cuarto de baño y con respecto al tipo de agua que se utiliza durante el cepillado, el 92% (n= 138) mencionó que utiliza agua de la red pública (Cuadro 2). Cuadro 2. Ambiente del cepillo y tipo de agua que se utiliza para el cepillado. Tipo de agua Almacenamiento del cepillo dental en el cuarto de baño Purificada % Red pública % Total % Dentro 6 5.4 106 94.6 112 100 Fuera 6 15.8 32 84.2 38 100 Total 12 100 138 100 150 100 El 18.7% (n= 28) de los alumnos mencionó que utilizan un protector o estuche para el cepillo dental (Cuadro 3). Cuadro 3. Frecuencia de uso del capuchón o estuche dental Utilización de protección Cepillos dentales fx % Si 28 18.7 No 122 81.3 Total 150 100 ~ 37 ~ Se observó que el 89.3% (n= 134) de los cepillos dentales desarrolló enterobacterias, identificándose especies como Klebsiella, que se encontró en el 60.7% (n= 91), Salmonella en un 71.3% (n= 103) y E. coli en el 55.3% (n= 83) del total de cepillos recolectados. En cuanto al crecimiento de hongos, el 80% (n= 120) de los cepillos fueron positivos, siendo Cándida albicans la especie identificada en un 37.3% (n= 56) de los 150 cepillos recolectados (Cuadro 4). Cuadro 4. Microorganismos presentes en los cepillos dentales. Microorganismos Cepillos dentales Positivos Negativos fx % fx % Enterobacterias 134 89.3 16 10.7 Klebsiella 91 60.7 59 39.3 Salmonella 107 71.3 43 28.7 E. coli 83 55.3 67 44.7 Hongos 120 80 30 20 Cándida albicans 56 37.3 94 62.7 ~ 38 ~ El crecimiento de enterobacterias de acuerdo con el tiempo de uso, fue mayor en los cepillos que habían sido utilizados durante dos meses con un 95.2% (n= 40). El mayor porcentaje de Klebsiella se presentó en los cepillos que habían sido usados por más de tres meses con 71.7% (n=33) al igual que Salmonella, con un 87% (n=40), mientras que E. coli mostró una frecuencia mayor a los tres meses de utilización con 63.6% (n=21). El desarrollo de hongos fue mayor en los cepillos que tenían más de tres meses de uso con 91.3% (n=42) y en el caso de Cándida albicans su frecuencia más alta se obtuvo a los tres meses con 51.1% (n=17) como se observa en el cuadro 5. Cuadro 5. Presencia de microorganismos en el cepillo dental asociados con el tiempo de uso. Microorganismos Tiempo de uso en meses Uno Dos Tres Más de tres fx % fx % fx % fx % Enterobacterias 20 69 40 95.2 31 93.9 43 93.5 Klebsiella 10 34.5 29 69 19 57.6 33 71.7 Salmonella 16 55.2 25 59.5 26 78.8 40 87 E. coli 11 37.9 23 54.8 21 63.6 28 60.9 Hongos 16 55.2 35 85.7 26 78.8 42 91.3 Cándida albicans 6 20.7 11 26.2 17 51.5 22 47.8 ~ 39 ~ En cuanto a los factores de riesgo analizados, en el cuadro 6 se puede observar que un cepillo dental tiene 38 veces más riesgo de presentar crecimiento de enterobacterias en las cerdas después del primer mes de uso (RM= 39.6; IC95%= 7.0 -222.1, p< 0.0001), encontrando que la presencia de especies como Klebsiella, Salmonella y E.coli aumentan en promedio un 52.7% a partir del primer mes de uso. El cepillo dental que es utilizado por un tiempo superior a un mes tiene 6 veces más riesgo de desarrollar hongos en las cerdas que uno que es utilizado por un periodo menor (RM= 7.8; IC95%= 1.7–34.7, p< 0.002), demostrando que el riesgo para Cándida albicans aumenta hasta un 26.2% después del primer mes de uso. Cuadro 6. Factor de riesgo para el crecimiento de enterobacterias y hongos en cepillos dentales con un tiempo de uso mayor a un mes. *PbaX 2 p< 0.05 Microorganismos RM IC95% p* Enterobacterias 39.60 7.0 - 222.1 0.0001 Klebsiella 12.11 1.4 – 101.2 0.004 Salmonella 20.61 2.45 – 173.2 0.0001 E. coli 9.56 1.14 – 79.8 0.01 Hongos 7.80 1.74 – 34.78 0.002 Cándida albicans 4.42 0.530 – 36.95 0.13 ~ 40 ~ En el cuadro 7 se muestra el crecimiento de microorganismos presentes en los cepillos de acuerdo con el tipo de agua que se utiliza durante el cepillado. Los que fueron utilizados con agua de la red pública tuvieron un crecimiento del 88.4% (n= 122) de enterobacterias y un 81.2% (n= 112) de hongos, mientras que los que usaron agua embotellada desarrollaron un 100% (n= 12) de enterobacterias y un 66.7% (n= 8) de hongos. Cuadro 7. Microorganismos presentes en los cepillos dentales de acuerdo con el tipo de agua que se utiliza durante el cepillado. Tipo de agua Red pública Purificada Microorganismos Positivos Positivos fx % fx % Enterobacterias 122 88.4 12 100 Klebsiella 83 60.1 8 66.7 Salmonella 96 69.6 11 91.7 E. coli 76 55.1 7 58.3 Hongos 112 81.2 8 66.7 Cándida albicans 52 37.7 4 33.3 ~ 41 ~ La presencia de enterobacterias en los cepillos que permanecen dentro del cuarto de baño fue del 91.1% (n=102). Klebsiella se encontró en un 63.4% (n=71), Salmonella en el 71.4% (n= 83) y E. coli con un 61.6% (n=69), mientras que el desarrollo de hongos fue del 81.3% (n=91), identificando Cándida albicans en el 37.5% (n=42) de los casos (Cuadro 8). Cuadro 8. Microorganismos en los cepillos dentales de acuerdo con el almacenamiento del cepillo dental en el cuarto de baño. Microorganismos Cuarto de baño Dentro Fuera fx % fx % Enterobacterias 102 91.1 32 84.2 Klebsiella 71 63.4 20 52.6 Salmonella 83 74.1 24 63.2 E. coli 69 61.6* 14 36.8 Hongos 91 81.3 29 76.3 Cándida albicans 42 37.5 14 36.8 *PbaX 2p < 0.008 ~ 42 ~ Los microorganismos encontrados en las cerdas de los cepillos que utilizan un estuche protector fueron enterobacterias en un 89.3% (n=25), Klebsiellase presenta en el 53.6% (n= 15), Salmonella con un 71.4% (n= 20) y E. coli con un 46.4% (n= 13). El crecimiento de hongos fue de 85.7% (n= 24), Cándida albicans se observó en 35.7% (n= 10) de los casos (Cuadro 9). Cuadro 9. Presencia de microorganismos en los cepillos dentales de acuerdo con la utilización de un estuche o protector. Utilización de estuche o protección Si No Microorganismos Positivos Positivos fx % fx % Enterobacterias 25 89.3 109 89.3 Klebsiella 15 53.6 76 62.3 Salmonella 20 71.4 87 71.3 E. Coli 13 46.4 70 57.4 Hongos 24 85.7 96 78.7 Cándida albicans 10 35.7 46 37.7 ~ 43 ~ ANÁLISIS DE RESULTADOS De acuerdo a los resultados obtenidos en el cuadro 1, se observó que el 30.7% de los cepillos utilizados por los alumnos de la Carrera de Cirujano Dentista de la Facultad de Estudios Superiores Zaragoza tenían un tiempo de uso superior a tres meses. Esto representa que aun siendo los futuros profesionales de la salud bucal, no se tiene el hábito de cambiar el cepillo dental en un periodo máximo a tres meses de acuerdo con las recomendaciones de la ADA. Los resultados muestran que a mayor tiempo de uso del cepillo dental mayor desarrollo de microorganismos, en el cuadro 5 podemos ver que después del primer mes de uso el crecimiento de enterobacterias en promedio aumenta hasta un 26.2%, existiendo un riesgo de 38 veces más con respecto a un menor tiempo de uso (RM= 39.6; IC95%= 7.0 - 222.1, p< 0.0001). El riesgo de encontrar hongos es de 6 veces más, aumentando conforme el tiempo de uso es mayor (RM= 7.8; IC95%= 1.7 – 34.7, p< 0.002) por lo cual, es importante hacer cambio del cepillo con regularidad y llevar a cabo métodos de desinfección con soluciones germicidas en periodos frecuentes para evitar la supervivencia de enterobacterias y hongos en las cerdas, y que estos lleguen a cavidad bucal. La contaminación microbiana del cepillo dental juega un papel importante como puerta de entrada de diferentes enfermedades estomatológicas y sistémicas. Como se observa en el cuadro 4, el 89.3% de los cepillos recolectados desarrollaron algún tipo de enterobacterias en las cerdas, lo cual resulta preocupante ya que estas bacterias no deberían pertenecer al cepillo y mucho menos llegar a cavidad bucal. De acuerdo con la identificación de estos microorganismos, Salmonella que se considera un agente patógeno primario, fue quien se desarrolló con mayor frecuencia, mientras que la presencia de E. coli nos indica que existen partículas de heces fecales en el cepillo dental, además de que hay crecimiento de Klebsiella en las cerdas de los cepillos dentales, esta es una bacteria oportunista capaz de agravar las afecciones bucales y la principal causante de súper infecciones a nivel sistémico. El 80% de los cepillos tuvieron crecimiento de hongos de estos el 37.3% se identificaron como especies de Cándida albicans. Esto quiere decir que el cepillo de dientes no solo es hábitat de hongos provenientes de cavidad bucal, sino también ambientales. ~ 44 ~ La presencia de microorganismos alóctonos bucales en el cepillo dental puede deberse a diferentes causas, entre ellas el tipo de agua que se utiliza durante el cepillado. Es importante reconocer que el 84.2% de los alumnos que donaron su cepillo utilizan agua de la red pública para cepillarse los dientes, como se puede ver en el cuadro 2. En base a los resultados obtenidos y a la estadística realizada se puede observar en el cuadro 6 que no existe una diferencia en el crecimiento de microorganismos entre si se utiliza agua de la red pública o agua purificada. Esto probablemente se debió al número de cepillos analizados, demostrando que existen diversos factores que propician la contaminación ambiental del cepillo de dientes. Otro factor que influye en la proliferación de este tipo de gérmenes es el ambiente donde los cepillos son almacenados, más de un 90% de alumnos dejan el cepillo dental en el cuarto de baño (Cuadro 2). Se encontró que quienes dejan su cepillo en el cuarto de baño tienen más riesgo de encontrar enterobacterias y hongos en las cerdas del cepillo, ya que el mayor crecimiento de estos microorganismos se observó en los cepillos dentales que son almacenados en el cuarto de baño, identificando que E. coli se desarrolló 24.8% más, con una prueba estadísticamente significativa de p < 0.008 como se puede analizar en el cuadro 8. El 18.7% de los alumnos mencionó que utilizaban un estuche protector para el cepillo dental como se observa en el cuadro 3. Estudios realizados muestran que esto es un factor negativo, ya que proporciona condiciones ideales de temperatura y humedad para la proliferación de microorganismos. Como se muestra en el cuadro 9, la utilización de un protector de plástico propició un crecimiento mayor de hongos. ~ 45 ~ DISCUSIÓN La cavidad bucal es considerada como puerta de entrada de diferentes microorganismos causantes de enfermedades bucales y sistémicas, por ello en los últimos años se han realizado varios estudios que reflejan la función que tiene el cepillo de dientes como vector de microorganismos, ya que las bacterias al depositarse entre las cerdas de éste, se incuban y se reproducen desencadenando infecciones repetitivas en los individuos.3, 12 Los cepillos dentales son fabricados libres de microorganismos y después de un periodo de uso que va desde 30 segundos hasta 4 minutos, pueden ser contaminados por una amplia gama de microorganismos que no solo son parte de cavidad bucal, sino también ambientales, procedentes de diversas fuentes como: el aerosol emanado del inodoro, los dedos de la persona, los sitios húmedos del cuarto de baño, las condiciones ambientales de almacenamiento y el agua utilizada durante el cepillado.3, 11-15 En el presente trabajo se encontró que el 89.3% de los cepillos presentó enterobacterias, identificándose especies como Klebsiella, Salmonella y E. coli en más del 50% de los cepillos recolectados, coincidiendo con el estudio llevado acabo por Contreras y cols.16 en 84 cepillos donde se estableció que los cepillos dentales se contaminan con organismos entéricos y que pueden permanecer viables en las cerdas por días. El estudio realizado por Trigoso y col.7 en el 2009 también logró demostrar la presencia de enterobacterias en cepillos dentales. La presencia de enterobacterias es importante debido a que son microorganismos considerados como inusuales y oportunistas en boca, que agravan de manera directa a las enfermedades bucales, como en el caso de la periodontitis, en la que actúan haciéndola más agresiva.16, 38 En el estudio realizado por Betancourth y cols.38 observaron que el 35.9% de los pacientes con enfermedad periodontal crónica, agresiva o severa, tenían microorganismos del géneros Klebsiella, que a nivel sistémico son causantes de infecciones faríngeas, pulmonares y gastrointestinales.5, 17 Los hongos son microorganismos oportunistas causantes de micosis. Su presencia en las membranas mucosas es común, no causan problema alguno por que existe un balance ~ 46 ~ entre los mecanismos de defensa del hospedero y el potencial invasivo por parte de las levaduras. Sin embargo, cuando el sistema de defensa se daña, la infección se puede manifestar de manera superficial, involucrando la mucosa bucal, o diseminada, la cual constituye una forma invasiva más seria. 60-65 El principal hongo patógeno capaz de presentar manifestaciones clínicas en boca es C. albicans, que de acuerdo al estudio realizado por Pardi y Cardozo60, permitió comprobar “in vitro” que esta especie sobrevive en las superficies acrílicas de las cerdas del cepillo dental hasta por 2 semanas, sugiriendo que el cepillo favorece la supervivencia del hongo. En la presente investigación, el 80% de los cepillos analizados presentaron crecimiento de hongos que, de acuerdo asu morfología colonial solo fueron levaduras y de las cuales, el 37.7% se identificaron como Cándida albicans. La presencia de hongos como Cándida es importante ya que se ha encontrado en pacientes con periodontitis donde el proceso destructivo de la enfermedad es más severo debido a los mecanismos patógenos de esta levadura. Betancourth y cols.38 demostraron el crecimiento de levaduras en el 7% (n=356) de los perfiles microbiológicos de pacientes con enfermedad periodontal agresiva. El factor tiempo juega un rol importante, ya que durante años se ha demostrado que a mayor tiempo de uso de un cepillo dental, el crecimiento de bacterias en las cerdas aumenta. Como tal, no existe un consenso científico sobre las necesidades de recambiar el cepillo, ya que solo se recomienda el cambio cuando las cerdas no están alineadas o cuando pueden lastimar y lacerar la encía, es decir cada tres meses. Sin embargo muchos pacientes usan hasta por un año el mismo cepillo de dientes,16 por lo que en esta investigación se enfatiza la importancia con respecto al tiempo de uso, debido a que el 30.7 % (n= 46) de los alumnos estudiantes de odontología, utilizaron su cepillo por un tiempo mayor a tres meses. La presencia de enterobacterias era mayor en los cepillos dentales conforme el tiempo de uso se incrementó, encontrando que a los dos meses de utilización más del 90% de los cepillos analizados desarrollaron este tipo de bacterias; especies como Klebsiella, Salmonella y E. coli mostraron mayor frecuencia a los tres meses de ser utilizados. ~ 47 ~ Realizando la estadística pertinente, se demostró que existe un riesgo de 38 veces más de encontrar enterobacterias después del primer mes de uso (RM= 39.6; IC95%= 7.0-222.1, p< 0.0001). De acuerdo con estudios realizados por Nelson-Filho y cols.11 los microorganismos pueden permanecer viables en las cerdas del cepillo por períodos que van desde 24 horas a 7 días, comprobando que el 100% de los cepillos de dientes desarrollan bacterias después de un minuto de cepillado, por lo tanto el uso diario del cepillo de dientes contaminado contribuye a la difusión de los microorganismos presentes en este. En la investigación realizada por Warren y cols.32 analizaron cepillos que fueron secados al aire durante cuatro horas después del cepillado, demostrando que las bacterias son capaces de sobrevivir a la desecación. Contreras y cols.16 demostraron que los bacilos entéricos súper infectantes permanecen viables hasta por 16 días en el cepillo dental. En el presente estudio se observó que el desarrollo de hongos es mayor en los cepillos que tienen un tiempo de uso de más de tres meses, comprobando estadísticamente que existe un riesgo de 6 veces más de encontrar hongos después del primer mes de uso (RM= 7.8; IC95%= 1.7–34.7, p< 0.002). Se coincide con autores como Contreras y cols.16 Warren y cols.32 Nelson-Filho y cols.11 entre otros, quienes sugieren que el cepillo dental debe ser desechado por lo menos cada mes y desinfectarlo cada tercer día con soluciones como hipoclorito de sodio o clorhexidina, siendo necesario hacer énfasis en pacientes con enfermedad periodontal o cualquier proceso infeccioso en cavidad bucal, ya que ellos deben desinfectar su cepillo diariamente y realizar el recambio cada mes. El agua que se utiliza durante el cepillado es considerada como un factor importante que permite la proliferación, transportación y supervivencia de microorganismos en las cerdas del cepillo dental y cavidad bucal, ya que diversos estudios realizados en México por Jacoby.24 Rivera y cols.25 Guerrero y cols.26 entre otros, han demostrado que el agua de consumo humano superficial o subterránea es contaminada por materia fecal proveniente del drenaje doméstico, industrial o agropecuario. Por su parte, Knobelsdorf y Mujeriego.6 observaron que el agua se contamina debido a los sistemas de almacenamiento y ~ 48 ~ distribución, ya que estos constituyen un ambiente propio para el desarrollo bacteriano; el flujo de agua favorece el transporte de nutrientes y bacterias, mientras que las paredes de las tuberías y las partículas presentes en el agua pueden servir como superficies de crecimiento. Considerando que el agua es un factor de riesgo para el desarrollo de enterobacterias y hongos, en el estudio realizado por Sato y cols.15 se demostró que existe una mayor contaminación en los cepillos dentales que son enjuagados con agua del grifo. En la presente investigación se observó que el 92% de los alumnos que donaron su cepillo utiliza agua de la red pública, sin embargo, no existió una diferencia estadísticamente significativa, en la presencia de microorganismos entéricos, ya que los cepillos que utilizaron agua embotellada presentaron un desarrollo mayor. Esto probablemente se debió a que el número de alumnos que utilizan agua embotellada era menor y que existen otros factores que conllevan a la presencia de enterobacterias en los cepillos. En el caso de hongos existió una diferencia del 14.5%, siendo mayor en los que utilizan agua de la red pública pero aun así no hay una diferencia estadísticamente significativa, por lo que convendría realizar estudios al respecto. La formación de microorganismos ambientales en los cepillos de dientes está asociada al cuidado post higiene bucal y las condiciones de almacenamiento. Coincidiendo con el estudio de Arias y cols,12 más del 70% de los pacientes guarda el cepillo dental dentro del baño, que por sus condiciones especiales de temperatura, humedad, materia orgánica y la ubicación del WC con respecto al lavabo, son los espacios ideales para que hongos y enterobacterias se desarrollen. Sin embargo, es mínima la población que reconoce que el aerosol producido por las descargas del sanitario lleva bacterias a diferentes sitios del cuarto de baño, los cuales pueden depositarse en los utensilios que se encuentran en un perímetro de 108 cm y contaminarlos, haciendo posible la adquisición de enfermedades.12 A pesar de que el aire es un medio donde no pueden vivir los microorganismos, resulta ser un transportador de estos, y de acuerdo al estudio realizado por De la Rosa y cols,28 los organismos entéricos primarios como Salmonella llegan a sobrevivir hasta por diez minutos en el aire. ~ 49 ~ Esta investigación demostró que los cepillos dentales que son almacenados en el cuarto de baño tienen mayor crecimiento de enterobacterias y hongos, en especial, existe una frecuencia mayor de E. coli con una diferencia estadísticamente significante (p < 0.008). Partiendo de ello, se considera que el cepillo dental debe ser desinfectado cada tercer día y almacenado fuera del cuarto de baño en un lugar seco. Se ha reportado que el estuche plástico en el que se puede colocar el cepillo dental como medio de protección, ocasiona aumento en el crecimiento de microorganismos oportunistas como enterobacterias y hongos.12 En el estudio realizado por Trigoso y col.7 donde comparó el crecimiento de enterobacterias en 30 cepillos protegidos, por un estuche plástico y 30 no protegidos, se demostró que los estuches plásticos tienen un efecto negativo, ya que promueven un ambiente para la proliferación de estas bacterias. Difiriendo con este estudio, en la presente investigación, el desarrollo de enterobacterias fue igual en los cepillos que utilizaron capuchón que en los que no, con respecto a la presencia de hongos fue mayor su frecuencia en los cepillos que tenían protector, con una diferencia del 7% sin relevancia estadística, esto probablemente al número de muestra, por lo cual, realizar otro estudio más a fondo con este tipo de variables sería apropiado. La contaminación del cepillo dental por microorganismos ambientales es un tema que los odontólogos deberían considerar de gran importancia, ya que es necesario instaurar medidas para garantizar la relativa esterilidad delos instrumentos que se utilizan diariamente en procesos de higiene bucal, ayudando de manera preventiva a disminuir afecciones bucales y sistémicas. ~ 50 ~ CONCLUSIONES Los cepillos llegan a ser altamente contaminados por microorganismos ambientales como enterobacterias y hongos. La desinfección del cepillo dental debe realizarse cada tercer día con soluciones antisépticas como clorhexidina al 0.12% o hipoclorito de sodio al 1% para evitar el desarrollo de microorganismos ambientales en las cerdas del cepillo. Se demuestra que a mayor tiempo de uso mayor riesgo de encontrar enterobacterias y hongos en los cepillos de dientes, por lo que es importante no utilizar el mismo cepillo por más de un mes. La frecuencia de enterobacterias fue mayor en los cepillos que son almacenados en el cuarto de baño, encontrando que E. coli se presenta con un mayor porcentaje. Por ello, el cepillo dental debe ser almacenado fuera del cuarto de baño, en un lugar seco, lejos de contaminantes fecales. No existe una diferencia estadísticamente significativa ante la presencia de microorganismos según el tipo de agua que se utiliza durante el cepillado. La utilización de un protector de plástico aumenta el crecimiento de hongos, por lo que si se utiliza como medio de protección, es importante que también sea desinfectado junto con el cepillo. ~ 51 ~ PROPUESTAS Es importante conocer todos los factores de riesgo que permiten que los microorganismos ambientales lleguen al cepillo dental convirtiéndolo en un vector de agentes causantes de repetidas infecciones, para que de esa manera se puedan difundir e implementar las medidas de desinfección, recambio, almacenamiento y cuidado post higiene bucal del cepillo. Es recomendable realizar estudios microbiológicos tomando en cuenta variables como el tipo de agua que se emplea durante el cepillado y la utilización de una protección plástica. ~ 52 ~ REFERENCIAS 1. Limonta VE, Araújo HT. Intervención educativa para modificar conocimientos sobre salud bucal en escolares de tercer grado. MEDISAN 2000; 4(3): 9-15. 2. Soria-Hernández MA, Molina FN, Rodríguez PR. Hábitos de higiene bucal y su influencia sobre la frecuencia de caries dental. Acta Peditr Mex 2008; 29(1): 21-4. 3. Obando G, TorresK. Efecto del triclosán sobre el biofilm del cepillo dental. Rev Estomatol Herediana 2007; 17(1): 25-8. 4. Flores TF, Pardave IM, Valenzuela CC. Estudio aerobiológico de la zona aledaña al relleno sanitario “San Nicolás” Municipio de Aguascalientes. Investigación y ciencia Universidad Autónoma de Aguascalientes 2007; 15(37): 13-8. 5. Aguado GJ, Lumbreras BC. Infecciones por enterobacterias. Med 1998; 7(78): 3622-8. 6. Knobelsdorf J, Mujeriego R. Crecimiento bacteriano en redes de agua potable. Ingeniería del Agua 1997; 4(2): 17-28. 7. Trigoso GL, Trigoso RV. Efectos del uso de un estuche protector para los cepillos dentales en la contaminación con enterobacterias. Vis Dent 2009; 12(1): 500-5. 8. Márquez R, Lacruz R. Aspectos morfológicos y psicológicos en el diseño de cepillos dentales. Rev Arbit Univer Zulia 2004; 1(9): 16-24. 9. Contreras HG, Garibay PL. Cepillo de dientes el mejor invento en la historia de los EU. La Ciencia y el Hombre 2003; 1(1): 79. 10. Montiel AF. Flora bacteriana habitual. Boletín Escuela de Medicina. Pontificia Universidad Católica de Chile1997; 26: 133-9. 11. Nelson-Filho P, Faria G, Assed BR, Rossi MA, Yoko II. Evaluation of the contamination and disinfection methods of toothbrushes used by 24- to 48-month-old children. J Dent Child 2006; 73(3): 152-9. 12. Arias AL, Hernández SV, Aránzazu MG, Martínez LC. Hábitos de higiene y mantenimiento del cepillo dental antes y después de la aplicación de un material educativo. Usta Salud 2009; 8: 37-43. 13. Willi-Eckhard W, Schaumburg C, Torsten KF, Sziegoleit A. Microbial contamination of tooth brushes with different principles of filament anchoring. J Am Dent Assoc 2005. 136: 758-65. javascript:openWindow(520,%20450,%20'http://www.imbiomed.com.mx/1/1/autores.php?method=listArticlebyAuthor&id_revista=228&id_autor=87192') javascript:openWindow(520,%20450,%20'http://www.imbiomed.com.mx/1/1/autores.php?method=listArticlebyAuthor&id_revista=228&id_autor=87193') ~ 53 ~ 14. Taji AH. The microbial contamination of tooth brushes. A pilot study Australian. Dent J 1998; 43(2): 128-30. 15. Sato S, Yoko II, Guimarães LE, Panzeri H, Ferreira de Albuquerque JR, Pedrazzi V. Bacterial survival rate on toothbrushes and their decontamination with antimicrobial solutions. J Appl Oral Sci 2004; 12 (2): 1-6. 16. Contreras RA, Astudillo M, Daza L, García ZL, Gaviria P, Parra PB, Rosales H, Jaramillo EA. Contaminación microbiana de los cepillos dentales en pacientes con enfermedad periodontal. Rev Estomat 2002; 10(1): 4-14. 17. Meseguera MA, Begoña CJ, Oliver A, Puig BJ. Diagnóstico microbiológico de las infecciones bacterianas del tracto respiratorio inferior. Enferm Infecc Microbiol Clin 2008; 26(7):430-6. 18. Isaac-Márquez AP, Lezama-Davila CM, Ku-Pech PP, Tamay-Segovia P. Calidad sanitaria de los suministros de agua para consumo humano en Campeche. Salud Pública de Mex 1994; 36(6): 655-62. 19. Ramírez E, Robles E, Sainz MG, Ayala R, Campoy E. Calidad microbiológica del acuífero de Zacatepec, Morelos, México. Rev Int Contam Ambient 2009; 25(4): 247-55. 20. Monforte GG, Cantú MP. Escenario del agua en México. Culcyt 2009; 1(30): 31-41. 21. Nom-127-SSA1 1994, Salud ambiental. Agua para uso y consumo humano. Límites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilización modificada y publicada en el diario oficial de la federación el 20 de junio del 2002. 22. Santos GJ, Guerrero ML, Reyna CR, Mejía VG. Marco legislativo del suministro de agua en México. Rev Panam Salud Pública 2009; 26(6):549–52. 23. Flores-Abuxapqui JJ, Suarez-Hoil GJ, Puc-Franco MA, Heredia-Navarrete MR, Vivas- Rosel ML, Franco-Monsreal J. Calidad bacteriológica del agua potable de la ciudad de Mérida, México. Salud Pública de Mex 1995; 37(3): 236-9. 24. Jacoby E, Consumo de bebidas saludables en México. Salud Pública Méx 2009; 51(3): 1-2. 25. Rivera VR, Palacios VO, Chávez MJ, Belmont MA, Nikolskii GI, De la isla BM, Guzmán QA, Terrazas OL, Carrillo GR. Contaminación por coliformes y helmintos en los ríos ~ 54 ~ Texcoco, Chapingo y San Bernardino tributarios de la parte oriental de la cuenca del valle de México. Rev Int Contam Ambient 2007; 23(2): 69-77. 26. Guerrero T, Rives C, Rodríguez A, Saldivar Y, Cervantes V. El agua en la ciudad de México. Ciencias 2009; 2(94): 16-23. 27. Cirelli, AF.; Mortier C. Evaluación de la condición del agua para consumo humano en Latinoamérica. Solar Safe Water 2005; 3(7): 17-32. 28. De La Rosa MC, Mosso MA, Ullán YC. El aire: hábitat y medio de transmisión de microorganismos. Obser Medio ambient 2002; 5: 375-402. 29. Montiel AF. Flora bacteriana habitual. Boletín Escuela de Medicina. Pontificia Universidad Católica de Chile 1997; 26: 133-9. 30. Ardila MC. Asociación potencial entre enterobacterias presentes en periodontitis y enfermedades sistémicas. Acta Odontol Venez 2010; 48:1-9. 31. Medina ML, Merino LA, Gorodner O. Manifestaciones clínicas y hallazgos microbiológicos en enfermedades gingivoperiodontales. Bol Inst Med 2004; 1(3): 73-7. 32. Warren DP, Millicent TC, Goldschmidt PD, Mathew BT, Adler-Storthz K, Harris JK. The effects of tooth pastes on the residual microbial contamination of toothbrushes. J Am Dent Assoc 2001; 132: 1241-5. 33. Padilla EC, Lobos GO, Jure OG, Matus FS, Descouvieres CC, Hasbún AS, Maragaño LP, Núñez FL. Aislamiento de bacterias periodontopáticas desde hemocultivos y ateromas obtenidos de pacientes con aterosclerosis y periodontitis.Rev
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