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Aprendiendo Medicina
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ii UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA EFECTO DE LA FIBRA DEL NOPAL OPUNTIA FICUS INDIACA EN LOS NIVELES DE GLUCEMIA EN PERROS DE RAZA PEQUEÑA ADULTOS SANOS TESIS QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE MÉDICO VETERINARIA ZOOTECNISTA PRESENTA MARÍA DEL PILAR SUÁREZ PONCE DE LEÓN Asesores: DRC MPA MVZ CARLOS GUTIÉRREZ OLVERA MC MVZ KARINA ELIZABETH COSIO CARPINTERO CIUDAD UNIVERSITARIA, CIUDAD DE MÉXICO, 2017 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. i EFECTO DE LA FIBRA DEL NOPAL OPUNTIA FICUS INDIACA EN LOS NIVELES DE GLUCEMIA EN PERROS DE RAZA PEQUEÑA ADULTOS SANOS iii Dedicatoria A mis padres, primos, tías y abuelas. iv Agradecimientos Agradezco a la Universidad Nacional Autónoma de México por formarme desde la preparatoria como persona y profesionista. Al Dr. Carlos Gutiérrez y a la Dra. Karina Cosío, quienes con su experiencia, su gran apoyo como asesores, y motivación como y amigos, me ayudan a concluir mi carrera. A la familia Gutiérrez Torres por su ayuda durante mi experimento. A la Dra. Adriana Ducoing por su asesoramiento en la parte estadística de mi trabajo. A mi familia por apoyarme y motivarme en la decisión de estudiar algo que me apasiona, la medicina veterinaria. v Contenido Resumen.............................................................................................................................................. 1 Introducción ........................................................................................................................................ 3 Nutrición Clínica en Pequeñas Especies .......................................................................................... 3 Nutracéuticos .................................................................................................................................. 5 Fibra de nopal ................................................................................................................................. 8 Diabetes ........................................................................................................................................ 11 Justificación ................................................................................................................................... 15 Hipótesis ............................................................................................................................................ 16 Objetivo ............................................................................................................................................. 16 Objetivos Específicos ..................................................................................................................... 16 Material y Métodos ........................................................................................................................... 16 Análisis Estadístico ........................................................................................................................ 18 Modelo Estadístico ........................................................................................................................ 19 Resultados ......................................................................................................................................... 20 Análisis Químico Proximal del Producto de Nopal Utilizado. ....................................................... 20 Máximo Nivel de Glucosa Alcanzado ............................................................................................ 20 Tiempo en el que se Alcanzó el Máximo ....................................................................................... 21 Mínimo Nivel de Glucosa Alcanzado ............................................................................................. 22 Tiempo al que se Alcanzó la Mínima Concentración de Glucosa ................................................. 23 Incremento de Glucosa Alcanzado Desde el Tiempo 0 Hasta el Máximo ..................................... 24 Discusión ........................................................................................................................................... 26 Conclusiones ..................................................................................................................................... 30 Referencias ........................................................................................................................................ 32 Anexos ............................................................................................................................................... 35 Anexo 1 Máximos .......................................................................................................................... 35 Anexo2 Tiempo Al Máximo ........................................................................................................... 38 Anexo 3 Minimos .......................................................................................................................... 41 Anexo 4 Tiempo Al Mínimo ........................................................................................................... 46 Anexo 5 Incremento Al Máximo ................................................................................................... 49 1 Resumen Durante las dos décadas pasadas se ha adquirido más conciencia de la importancia de la nutrición para la salud gracias al reconocimiento creciente de la asociación entre el alimento y algunos procesos patológicos. (Hand, et.al, 2010). Debido al creciente uso en medicina humana de productos naturales, mejor conocidos como nutracéuticos,que han sido extrapolados en animales de compañía, para dar soporte al tratamiento de algunas enfermedades como la diabetes, se ha tenido la necesidad de comprobar el funcionamiento de estos productos en el caso de perros y gatos. En este estudio se decidió evaluar la acción de la fibra de nopal (Opuntia ficus indiaca) como nutracéutico hipoglucemiante sobre los niveles de glucosa sérica postprandial realizando curvas de glucosa en perros adultos sanos de raza pequeña. Se utilizaron 14 perros de raza pequeña divididos en dos grupos de siete animales. Al primer grupo (tratamiento uno) se le proporcionó diariamente por vía oral con una jeringa sin aguja 50 mg/kg de peso vivo de fibra de nopal Opuntia ficus indiaca deshidratado y pulverizado, diluido en agua para facilitar el manejo; al grupo dos (grupo control) se le proporcionará diariamente un placebo de agua por vía oral. Se tomaron muestras sanguíneas a los 0, 15, 30, 60 y 120 minutos post administración de la fibra y se midió la concentración de glucosa, con el fin de realizar una curva de comportamiento de dicho analito. No hubo diferencias significativas entre ambos grupos, ni en la concentración de glucosa en sangre a través del tiempo, ni en la concentración máxima ni mínima de glucosa, 2 ni al tiempo en el que se alcanzaron estas. Se concluye que la administraciónde esta fibra comercial, no tiene ningún efecto, a la dosis administrada, en la absorción y concentración sanguínea postprandial de la glucosa. 3 Introducción Nutrición Clínica en Pequeñas Especies La nutrición es la ciencia que tiene como objetivo el estudio de los procesos biológicos por los cuales el organismo toma, digiere, asimila y utiliza los nutrientes que tiene el alimento para el funcionamiento, crecimiento y mantenimiento de los procesos vitales (Gutiérrez y Cosío, 2014). Los requerimientos nutricionales de los perros han ido cambiando poco a poco desde su domesticación, permitiendo conocer más a profundidad sus necesidades (NationalResearch Council, 1993). Durante las dos décadas pasadas se ha adquirido más conciencia de la importancia de la nutrición para la salud gracias al reconocimiento creciente de la asociación entre el alimento y algunos procesos patológicos. (Hand, et.al, 2010). En veterinaria se tiene el objetivo de descubrir cuáles son las sustancias esenciales para los animales y qué función ejercen, buscando dosis benéficas. (Grandjean, 2003). Al igual que todos los animales, los perros y los gatos requieren una dieta equilibrada para crecer normalmente y mantener la salud una vez que son maduros. Los nutrientes son componentes de la dieta que tienen funciones específicas dentro del cuerpo y contribuyen al crecimiento, mantenimiento del tejido y de la salud óptima. De esta manera aparecen todos los años nuevos alimentos y fórmulas nutritivas que incorporan además de los nutrientes 4 necesarios para una vida sana, sustancias naturales para prevenir ciertas enfermedades y proteger al organismo (Grandjean, 2003). La nutrición clínica para los animales de compañía es una disciplina en rápido desarrollo, como lo demuestran varios artículos científicos en los últimos 50 años. Los nutriólogos veterinarios reconocen desde hace mucho tiempo que ningún aspecto de la actividad de la producción produce más impacto sobre la salud y la producción que la nutrición; muchos problemas de la salud se asocian con programas de alimentación inadecuados. (Wills, 1994, Tams, 2003, Hand, et.al, 2010).De hecho, sólo en 2004 se publicaron más de 2,648 artículos en los que se destacaba la relación entre la salud, la nutrición y la prevención de enfermedades, que representan un aumento de 100% en la información científica disponible (Pibot, et.al, 2006). Asimismo, con el fin de prestar atención médica completa como parte del plan terapéutico los médicos veterinarios de animales de compañía deben de mejorar el nivel de asesoramiento nutricional que ofrecen, porque es imposible satisfacer las necesidades de salud de sus pacientes sin optimizar la nutrición, los médicos veterinarios de pequeñas especies pueden mejorar la calidad de la atención médica de sus pacientes considerando de manera informada y sistémica los aspectos nutricionales de cada caso tanto para prevenir, como para tratar la enfermedad; así la nutrición puede lograr varias metas para facilitar la recuperación del paciente (Tams, 2003, Hand, et.al, 2010). Según lo recomienda el Colegio Americano de Nutrición Veterinaria, entre otros, la evaluación nutricional comienza con una determinación del estado físico y 5 fisiológico del paciente, una revisión del historial (incluyendo la historia dietética y alimentación), y elexamen físico general. El desarrollo de un plan de alimentación incluye la recomendación de alimentos y métodos de alimentación después de un periodo adecuado, el proceso en dos pasos se repite para determinar si el nuevo plan es correcto y eficaz (Biruete, et.al, 2009, Hand, et.al, 2010). Una evaluación nutricional más detallada está indicada cuando el animal está en un grupo de alto riesgo, cuando cualquier anomalía se identifica, o el animal está recibiendo una dieta desconocida (o hecha en casa). La evaluación detallada incluye todo lo anterior más una investigación de la dieta del paciente y características relacionadas con la nutrición y el entorno de este (Gutiérrez y Cosío, 2014). La nutrición dirigida a perros y gatos es un campo en constante desarrollo. Conocer y enfatizar que los perros y los gatos tienen necesidades nutricionales diferentes a las de sus propietarios, ayudará a prevenir diversas enfermedades que hoy en día reducen el promedio de vida, resaltando que el proporcionar una adecuada nutrición dará como resultado más y mejor calidad de vida (Gutiérrez y Cosío, 2014). Nutracéuticos A partir de los últimos veinte años se encuentran en el mercado algunos alimentos que pueden ser considerados como productos saludables. Estos alimentos funcionales también llamados nutracéuticos, además de su valor nutritivo básico y ser naturales, tienen el equilibrio apropiado de ingredientes queayudan al 6 organismo a funcionar mejor, tanto en el aspecto físico y mental.Muchos estudios científicos demuestran que algunos de los componentes naturales de los alimentos ayudan directamente en la prevención y tratamiento de algunas enfermedades(Bello J, 1961). Los nutracéuticos generalmente son elaborados para ser comercializados en forma de píldoras, polvos y otras presentaciones que no requieren para su venta haber demostrado sus bondades ante las instancias sanitarias correspondientes (Biruete, et.al, 2009). Su clasificación se basa en: ● Los nutrimentos que contienen, según se trate de azúcares, grasas, aminoácidos, vitaminas y minerales. ● Los compuestos que contienen fibra dietética, isoflavonoles, antioxidantes, carotenos, licopenos, ácidos grasos ω-3 y ω-6, compuestos fenólicos, fosfolípidos y fitoesteroles. ● Probióticos y prebióticos (Biruete, et.al, 2009). Así pues, los nutracéuticos son sustancias biológicas extraídas de fuentes naturales, que procuran conservar sus propiedades originales sin hacer algún tipo de manipulación química. Una vez extraídos de su fuente natural, estas sustancias se estudian mediante procesos similares a los que se emplean para identificar las propiedades biológicas de los fármacos utilizados en animales y humanos, cuando 7 sus propiedades han sido documentadas, se comercializan para consumo humano como complementos nutricionales, sin sustituir la dieta diaria. (Biruete et al, 2009) En el caso de la fibra dietética, está constituida por una serie de carbohidratos llamados polisacáridos (no almidonados) y lignina. Estos componentes se derivan de las plantas y comparten la característica de que no pueden ser hidrolizados por las enzimas del sistema gastrointestinal de los mamíferos, se incluyen algunas substancias no estructurales que no se absorben en el intestino, como la pectina, los mucílagos, las gomas y los alginatos(Palacios Paz, 2014). Las fibras se pueden clasificar por su potencial para retener agua; debido a que una de sus propiedades incluye la capacidad de hidratación que resulta en la formación de un gel. Este efecto tiene repercusiones determinantes en la absorción de nutrimentos solubles en agua en la matriz del gel mediante el incremento de la viscosidad del contenido intestinal. También se pueden observar cambios en el tiempo de tránsito intestinal, lo que modera los efectos postprandiales y en el vaciamiento gástrico que es la causante principal del aumento en el peso de la materia fecal. Las pectinas, los mucílagos y de manera más limitada la hemicelulosa son las fracciones de la fibra con mayor capacidad de retención de agua, por su adsorción de compuestos orgánicos y su capacidad de intercambio catiónico(Chávez, 1999, Buffington, et.al, 2004). La acción fisiológica de la fibra en el organismo, dependerá del tipo que se esté consumiendo y la región del tracto digestivo en donde actúe, pudiendo generar un 8 efecto diferente durante la ingestión y digestiónen el estómago, en el intestino delgado o en el intestino grueso (Chávez, 1999). Los efectos descritos previamente, tienen repercusiones metabólicas que pueden ser favorables en ciertos padecimientos como diabetes, hiperlipidemias y obesidad, dependiendo de su concentración en el alimento, de su estado físico y de su composición o combinación, así la pectina y la lignina reducen la absorción de ácidos biliares y de grasas, mientras que la pectina, la hemicelulosa y un poco la celulosa disminuyen la glucemia (Chávez, 1999, Buffington, et.al, 2004). Este último efecto se observa mejor con el uso de pectinas, gomas, mucílagos, fructooligosacáridos y algunas hemicelulosas, debido a que tienen la capacidad de almacenar agua retrasando el vaciamiento gástrico y reduciendo la velocidad de absorción, esto dificulta la transferencia conectiva de la glucosa en el agua a la superficie de absorción, generando un aplanamiento pronunciado de la curva de respuesta glucémica y permitiendo mejorar su control. En el caso de perros y gatos se ha reportado que el 10% y el 15% de la inclusión de fibra reducen considerablemente la fluctuación de glucosa sanguínea (Gutiérrez y Cosío, 2014). Fibra de nopal Desde hace cientos de años se ha utilizado un gran número de preparaciones botánicas para el control de la glucosa en sangre. Una de las plantas más utilizadas es el nopal (Opuntia spp)(Shapiro y Gong, 2002, Godard, 2010). El uso del nopal en México data desde épocas prehispánicas, donde desempeñó un papel importante en la economía agrícola del imperio azteca; siendo las plantas 9 cultivadas más antiguas de México. (Mondragón y Pérez, 2001) En los últimos años, el consumo de nopal como hipoglucemiante, se ha visto favorecido a pesar dela poca evidencia científica que lo respalde (Basurto, et.al, 2006, Butterweek, et.al., 2011, López, et.al, 2014) . El nopal en una planta carnosa, arbustiva o arbórea, de 1 a 5 metros de altura, con tallos o ramas (pencas) oblongas o de forma aplanada de color verde. En México se usan las hojas de nopal como alimento y como remedio popular contra la diabetes. Cada 100 g de nopal proporcionen solamente 19.93kcal, de las cuales un pequeño porcentaje atribuido a la fibra dietética al momento de la fermentación, el resto está constituido principalmente por agua (Chávez, et.al,1999, Sáenz, 2006). El nopal se ha convertido en un importante cultivo en muchas tierras semiáridas del mundo. La fruta y los cladodios jóvenes („nopalitos„) comúnmente se han consumido de manera fresca, pero los estudios de investigación de la última década en el procesamiento de nopal han producido otra alternativa que evita daños a la fruta, a pesar de las características tecnológicas que facilitan el procesamiento de una entrada (alto contenido de sólidos solubles, baja acidez y pH alto), aporta un valor añadido a este cultivo. Los cladodios de la planta son una buena fuente de fibra, un elemento importante de la dieta humana y de un potencial considerable para uso médico. Los resultados de varios de estos estudios de investigación que impliquen la producción de jugos, mermeladas, geles, edulcorantes líquidos, alimentos deshidratados y otros productos se discuten (Sáenz, 2000). 10 En los últimos años, el consumo de nopal como antidiabético, se ha visto favorecido por la publicidad dada en medios de comunicación masiva, y no por el conocimiento netamente empírico o científico. La revisión de la literatura sobre el efecto “hipoglucémico” del nopal, indica que la O. streptacantha es la especie más estudiada (Basurto, 2006). Existen evidencias experimentales con diferentes especies de Opuntia spp que apoyan su actividad antihiperglucémica en humanos (Basurto, 2006, Godard, 2010) estos efectos han sido catalogados como antidiabéticos. La O. streptacantha no disminuye la concentración de glucosa sanguínea a valores iguales o menores de 50 mg/dL que podrían promover hipoglucemia. También, estudios in vivo con algunos extractos y polisacáridos del nopal han demostrado considerables propiedades antioxidantes, hipolipidémicas y antidiabéticas en ratas, ratones y humanos.Adicionalmente extractos deshidratados en pacientes diabéticos han demostrado atenuación de la hiperglucemia postprandial. (Núñez, et.al., 2013)Pues inhibe la absorción intestinal de la glucosa y de los lípidos en humanos diabéticos tipo 2, en obesos, en sujetos sanos y en ratas (Basurto, et.al, 2006, Butterweek, et.al.,2011, López, et.al, 2014). La O. streptacantha no disminuye la concentración de glucosa sanguínea a valores iguales o menores de 50 mg/dL. La actividad antihiperglucemiante de O. streptacantha y de O. ficcus indiaca obtenida con altas dosis, se debe 11 principalmente a su contenido de fibra, este contenido y su composición dependen de su estado de madurez (Núñez, et.al., 2013). Los efectos colaterales se resumen en malestar abdominal, flatulencia y aumento en el volumen y frecuencia de heces. Se requieren más estudios científicos suficientes que comparen la efectividad antihiperglucémica del nopal, con el producido por otras fibras (Basurto, 2006). Esto es de especial interés, ya que recientemente la Federación Internacional de Diabetes (IDF) aseguró la necesidad de contrarrestar el aumento de glucemiapostprandial para favorecer la prevención de otras enfermedades (Godard, 2010). Diabetes La diabetes mellitus es una enfermedad que consta de un conjunto de trastornos hiperglucémicos clínicamente heterogéneos. (Wills, 1994) La diabetes mellitus en perros y gatos es un trastorno complejo que no puede ser explicado por una sola causa (Buffington, 2004). La incidencia de este padecimiento en animales de compañía se encuentra entre 0.2 a 1.0% de los animales que ingresan a las clínicas veterinarias,en el caso de los gatos la edad es un factor predisponente sumamente importante reportándose que el 70 al 90% de los casos son animales de más de seis años. Otros factores predisponentes a esta especie incluyen la inactividad, neoplasias pancreáticas, administración prolongada de dietas altas en carbohidratos simples, así como factores genéticos (Wills; 1994, Buffington; 2004, Gutiérrez y Cosío; 2014). 12 Los mecanismos por los que se logra el control son variados, entre los cuales podemos mencionar al hígado, que funciona como un importante sistema amortiguador. Cuando la glucemia se eleva tras la ingesta de alimento, aproximadamente dos tercios de la glucosa absorbida se almacenan de forma inmediata en el hígado en forma de glucógeno y se secreta rápidamente insulina desde el páncreas para que descienda a su normalidad (Días Lovera, et.al, 2002, Crosseley, et.al, 2009). A la inversa, una disminución de glucemia estimula la secreción de glucagón, funcionando de manera opuesta para elevar la glucemia. En la hipoglucemia grave se produce un efecto directo en el hipotálamo el cual estimula al sistema nervioso simpático que a su vez produce la liberación de adrenalina por las glándulas suprarrenales, que finalmente producirá una liberación de glucosa del hígado. En hipoglucemias de horas o crónicas, se produce la secreción de hormona del crecimiento y cortisol; ambas disminuyen la utilización de glucosa, promoviendo la utilización de lípidos (Días Lovera, et.al, 2002, Crosseley, et.al, 2009). La clasificación más común de diabetes es: Tipo 1, o diabetes mellitus dependiente de insulina (IDDM), es caracterizada por una deficiencia de insulina absoluta resultante de la destrucción de las células beta del páncreas. Tipo 2 o diabetes mellitus no insulina-dependiente (DMNID), los resultados de unacombinación variable de disfunción de las células beta y resistencia a los efectos de la insulina por tejidos periféricos (Buffington, 2004). 13 La diabetes tipo 1 parece ser la forma más común de diabetes en perrosy gatos, y el tipo 2 es más común en gatos que en los perros. Ambos tipos de diabetes dan como resultado hiperglucemia, y algunas veces en el metabolismo anormal de los lípidos y de proteínas (Buffington, 2004). El principal tratamiento de la diabetes es la terapia de insulina, seguido por la dieta que juega un papel de apoyo importante (Buffington, 2004). Antes de que existiese insulina exógena se aconsejaba a las personas diabéticas comer dietas pobres en carbohidratos que por consiguientes eran ricas en grasas. Actualmente se recomienda una dieta alta en carbohidratos complejos (50-55%), poca grasa (<20%) y un porcentaje medio de proteínas (14-30%) (Wills, 1994). Las consideraciones específicas para la formulación de una dieta para pacientes diabéticos identificadas hasta la fecha en las mascotas refieren a la fibra, carbohidratos y grasas. Las funciones de la fibra dependen de la relación solubilidad de la fibra en la dieta. Las dietas con fibra que ejercen propiedades gelificantes (relativamente soluble) se recomiendan en los seres humanos debido a la capacidad percibida de estas dietas para reducir la velocidad de la tasa de absorción de nutrientes al cuerpo, lo que modera los efectos postprandiales. (Buffington, 2004). Para un manejo nutricional adecuado deben tomarse en cuenta la constancia de los ingredientes y nutrientes de la dieta, esto permite un mejor control de la glucemia y una mejor acción de los hipoglucemiantes orales. Es por tanto necesario utilizar alimentos con formulación fija (Gutiérrez y Cosío, 2014). 14 Los objetivos del soporte nutricional en perros y gatos con diabetes mellitus incluyen proporcionar los nutrientes adecuados para mantener la condición corporal,junto con la administración de insulina se promueve el control de las concentraciones de glucosa en sangre, finalmente se intenta evitar las complicaciones habituales de la enfermedad (Buffington, 2004). El peso corporal y la condición corporal juegan un papel importante en la determinación de la dieta más adecuada para pacientes con diabetes mellitus. La obesidad puede exacerbar la diabetes en algunos casos, y cierta pérdida de peso en gatos diabéticos obesos puede resolver el estado diabético en la diabetes tipo 2. En los seres humanos obesos con diabetes de tipo 2, la pérdida de peso de sólo 5% a 10% da como resultado una mejora significativa en el control de glucosa en sangre. Debido a esto, se recomienda que los esfuerzos de pérdida de peso continúen hasta que se ha logrado el control de la glucemia (Buffington, 2004). Debido a que por lo general la insulina se administra en combinación con las comidas, el método de alimentación juega un papel importante para ayudar a controlar las concentraciones de glucosa en sangre. La meta es que los nutrientes sean absorbidos lentamente cuando los niveles de insulina sean adecuados, minimizando de esta manera una hiperglucemia postprandial rápida. El enfoque más común se orienta a alimentar al paciente justo antes de la inyección de insulina. Si las inyecciones se administran dos veces al día, la mitad de la comida diaria debe proporcionarse antes de cada inyección (Buffington, 2004). 15 Justificación La diabetes es una de las enfermedades que cada vez son más frecuentes en mascotas (perros y gatos), por lo que muchos propietarios tratan de ayudar a sus animales proporcionándoles nutracéuticos preparados para humanos, pero no para estos animales, tal es el caso de la fibra de nopal. Por esta razón es importante realizar estudios que confirmen o descarten la eficacia de su uso y que además demuestres que no causen efectos secundarios. 16 Hipótesis Hipótesis nula: No habrá diferencia en la curva de glucosa en perros sanos de raza pequeña cuando se les administre un bolo de glucosa adicionado con fibra de nopal con aquellos que reciban únicamente el bolo de glucosa. Hipótesis alterna: Habrá diferencia en la curva de glucosa en perros sanos de raza pequeña cuando se les administre un bolo de glucosa adicionado con fibra de nopal con aquellos que reciban únicamente el bolo de glucosa. Objetivo Evaluar el efecto de la fibra de nopal, sobre los niveles de glucosa sérica al realizar curvas de glucosa en perros adultos sanos de raza pequeña. Objetivos Específicos ● Comparar las curvas de glucosa en perros adultos sanos de raza pequeña complementados y no complementados con fibra del nopal deshidratado, al administrarles un bolo de glucosa. ● Verificar que al complementar la dieta con fibra de nopal, no haya un descenso excesivo en la glucemia. Material y Métodos El trabajo se realizó en un domicilio particular. Se utilizaron 14 perros adultos de raza pequeña (10 Schnauzer y 4 Dachshund) de 3 a 5 años de edad, 17 esterilizados, todos con condición corporal 3/5 y un peso vivo de 7-10 kg. Se les realizó un examen físico general para corroborar que los perros estuvieran sanos. A todos los animales se les proporcionó el mismo alimento comercial de calidad premium marca Pedigree® especial para perros adultos de razas pequeñas en mantenimiento con el siguiente análisis garantizado: Proteína Cruda(min.) 23% Grasa (min.) 12% Humedad (máx.) 12% Fibra (máx.) 5%. La cantidad proporcionada de alimento se calculó de acuerdo a sus necesidades energéticas particulares, (REM= 99(PV) 0.75) (NationalResearch Council, 1993, Hand, et.al, 2010, Gutiérrez y Cosío, 2014,) con un periodo de adaptación a dicho alimento de un mes. Los animales se dividieron aleatoriamente en dos grupos de siete perros cada uno, al primer grupo (tratamiento uno) se le proporcionó diariamente por vía oral con una jeringa sin aguja 50 mg/kg (Núñez, et.al., 2013) de peso vivo de fibra de nopal Opuntia ficus indiaca deshidratado y pulverizado, diluido en agua para facilitar el manejo; al grupo dos (grupo control) se le proporcionará diariamente un placebo de agua por vía oral. Con el fin de analizar las curvas de glucosa de cada uno de los animales fueron muestreados al día cero (antes de empezar a dar tratamientos), mediante muestras sanguíneas a los 0, 15, 30, 60 y 120 minutos (Godard, 2010, Butterweek, et.al., 2011), repitiéndose una vez que hayan comenzado el tratamiento, diariamente por 7 días, tomando la muestra cero con un periodo de ayuno de 8-12 horas y administrando el tratamiento y el placebo al mismo tiempo 18 que el bolo de glucosa. Los resultados de las mediciones fueron reportados en unidades internacionales (mmol/L).La toma de muestras se realizó de la vena safena, por medio de una jeringa de un mL con aguja fina. A ambos grupos se les administró un bolo de glucosa anhidra por vía oral a 2g/kg (Godard, 2010, Núñez, et.al., 2013) de peso vivo después de la primera medición de glucemia que fue realizada por medio de un glucómetro digital (One Touch – ultramini®) con tiras (One touch®). Para verificar la composición del producto de nopal se realizó un análisis químico proximal para determinar la cantidad de proteína cruda, extracto etéreo, carbohidratos y fibra cruda. Además, se realizó una prueba de fibra acido detergente y fibra neutro detergente. Análisis Estadístico El diseño estadístico fue completamente aleatorizado de un solo factor, con mediciones repetidas en el tiempo. Llevándose a cabo un MANOVA mediante el paquete estadístico JMP versión 7.0 del SAS Institute, para evaluar el efecto del tratamiento, del tiempo y de la interacción del tratamiento con el tiempo, siempre y cuando se cumplan los supuestos del modelo. El diseño del estudio corresponde al de un solo factor con dos niveles: con y sin fibra de nopal, completamente aleatorizado, con 7 observaciones repetidas en el tiempo (tiempo 0 y diario por seis días) cuyo análisis se realizó mediante análisis de varianza multivariado para observacionesrepetidas en el tiempo(Sánchez, 2001, Scott E. y Harold D., 2003). Repeticiones: 7 perros de raza pequeña adultos sanos por cada tratamiento 19 Se midieron en cada día los niveles de glucosa al tiempo 0, 15, 30, 60 y 120 segundos y para cada día se midieron las siguientes variables respuesta: Máximo nivel de glucosa alcanzado Tiempo en el que se alcanzó el máximo Mínimo nivel de glucosa alcanzado Tiempo en el que se alcanzó el mínimo Incremento de glucosa alcanzado desde el tiempo 0 hasta el máximo Modelo Estadístico Y= XB+E Y: Matriz de 7x7 cuyos renglones son los valores de la variable respuesta en cada perro del tiempo 1 al tiempo 7. X: Matriz diseño de 7 x 3 B: Matriz de parámetros de 3 x 7. Cada columna es un vector β(p)de parámetros al tiempo (p). p=1,…,7 β(p)T = (μ(p), α1 (p), α2 (p)) donde: μ(p): Media general al tiempo p α(p): efecto del tratamiento i al tiempo (p) i= 1 sin fibra de nopal en el alimento ; 2 con fibra de nopal en el alimento E: Matriz de errores aleatorios de 7x7 20 Resultados Análisis Químico Proximal del Producto de Nopal Utilizado. Cuadro 1. Composición del producto utilizado como hipoglucemiante Producto de nopal deshidratado Producto comercial de nopal Humedad 7.339% 8.190% Proteína cruda 4.294% 7.339% Fibra cruda 8.562% 7.415% Cenizas 9.203% 7.631% Fibra neutro detergente 35.375% 39.199% Fibra ácido detergente 46.075% 40.527% Máximo Nivel de Glucosa Alcanzado(Anexo 1) No se encontró ningún efecto significativo. Tratamiento (p= 0.8430); Tiempo (p =0.7040); Tiempo x tratamiento (p= 0.499). Las medias por mínimos cuadrados y sus errores estándar aparecen en el siguiente cuadro: Cuadro 2. Promedio del nivel máximo de glucosa alcanzado (mg/dl) Tratamientos Medias por mínimos cuadrados Error estándar 1 109.30612a 6.3465778 2 107.48980a 6.3465778 Literales diferentes indican diferencias estadísticamente significativas (p < 0.05). Tratamiento1: con nopal, Tratamiento 2: sin nopal 21 Figura 1. Promedio del nivel máximo alcanzado, en cada día, por tratamiento Tiempo en el que se Alcanzó el Máximo(Anexo 2) No se encontró ningún efecto significativo. Tratamiento (p= 0.2085); Tiempo (p =0.2081); Tiempo x tratamiento (p= 0.2848). Las medias por mínimos cuadrados y sus errores estándar aparecen en el siguiente cuadro: Cuadro 3. Tiempo al que se alcanza el máximo (minutos) Tratamiento Medias por mínimos cuadrados Error estándar 1 29.693878a 8.4145013 2 45.510204a 8.4145013 Literales diferentes indican diferencias estadísticamente significativas (p < 0.05) 0 1 2 3 4 5 6 7 Día0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 m m o l/ l d e gl u co sa Día de Tratamiento MÁXIMO NIVEL DE GLUCOSA ALCANZADO Tratamiento 1 Tratamiento 2 22 Tratamiento1: con nopal, Tratamiento 2: sin nopal Figura 2. Promedios de los tiempos al máximo, por tratamiento y por tiempo Mínimo Nivel de Glucosa Alcanzado (Anexo 3) No se encontró efecto significativo del tratamiento (p=0.7217) ni de la interacción tiempo por tratamiento (p=0.3038). El efecto del tiempo si fue significativo (p=0.0064). Mediante un análisis de perfiles que compara tiempos consecutivos, se encontró que las diferencias entre el promedio del nivel mínimo de glucosa a lo largo del tiempo se deben a la diferencia entre el tiempo 0 y 1(p= 0.0407), el tiempo 2 y el 3 (p=0.0213) y el tiempo 4 y 5 (p=0.0481) La gráfica del promedio del nivel de glucosa para cada tiempo y las medias correspondientes se presentan a continuación: 0 20 40 60 80 100 Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 M in u to s Día de Tratamiento TIEMPO EN EL QUE SE ALCANZÓ EL MÁXIMO Tratamiento 1 Tratamiento 2 23 Figura 3. Promedio del nivel mínimo de glucosa alcanzado para cada tiempo Cuadro 4. Promedio de los niveles mínimos de glucosa alcanzado para cada tiempo (mg/dl) Día0 Día1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 59.3571429 64.7142857 63.8571429 70.1428571 71.7142857 76.3571429 74.6428571 Las diferencias encontradas son entre el tiempo 0 y1, el tiempo 2 y3, el tiempo 4 y5. Tiempo al que se Alcanzó la Mínima Concentración de Glucosa(Anexo 4) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 MÍNIMO NIVEL DE GLUCOSA ALCANZADO Tratamiento 1 Tratamiento 2 24 No se encontró ningún efecto significativo. Tratamiento (p= 0.4490); Tiempo (p =0.7976); Tiempo x tratamiento (p= 0.9419). Las medias por mínimos cuadrados y sus errores estándar aparecen en el siguiente cuadro: Cuadro 5. Promedio del tiempo al que se alcanza el mínimo (segundos) Tratamiento Medias por mínimos cuadrados Error estándar 1 76.224490a 14.383412 2 60.306122a 14.383412 Literales diferentes indican diferencias estadísticamente significativas (p < 0.05) Tratamiento1: con nopal, Tratamiento 2: sin nopal Figura 4. Promedio de los tiempos al mínimo, por tratamiento y por tiempo Incremento de Glucosa Alcanzado Desde el Tiempo 0 Hasta el Máximo(Anexo5) 0 20 40 60 80 100 120 140 Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 M in u to s Día de Tratamiento TIEMPO AL QUE SE ALCANZÓ LA MÍNIMA CONCENTRACIÓN DE GLUCOSA Tratamiento 1 Tratamiento 2 25 No se encontró ningún efecto significativo. Tratamiento (p= 0.4439); Tiempo (p =0.7853); Tiempo x tratamiento (p= 0.3250). Las medias por mínimos cuadrados y sus errores estándar aparecen en el siguiente cuadro: Cuadro 6. Promedio del incremento de nivel de glucosa alcanzado desde el nivel al tiempo 0 al nivel máximo alcanzado (mg/dl) Tratamiento Medias por mínimos cuadrados Error estándar 1 36.244898 4.6660146 2 31.020408 4.6660146 Literales diferentes indican diferencias estadísticamente significativas (p < 0.05) Tratamiento1: con nopal, Tratamiento 2: sin nopal Figura 5. Promedio del incremento de nivel de glucosa alcanzado desde el nivel al tiempo 0 al nivel máximo alcanzado (mg/dl), por tratamiento y tiempo 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Incremento0 Incremento 1 Incremento 2 Incremento 3 Incremento 4 Incremento 5 Incremento 6 INCREMENTO DE GLUCOSA ALCANZADO DESDE EL TIEMPO 0 HASTA EL MÁXIMO Tratamiento 1 Tratamiento 2 26 Discusión Como se observa en los resultados, el producto de fibra de nopal utilizado en este estudio a la dosis de50 mg/kg vía oral no tuvieron ningún efecto en la concentración de glucosa sanguínea postprandial de los animales tratados, ni en los niveles máximos, mínimos, ni a través del tiempo. Esto puede ser debido a que las concentraciones y presentación de la fibra utilizada en este estudio, difieren de las presentaciones utilizadas en estudios en los cuales si hubieron resultados, como en el realizado por Butterweek, et.al., 2011 que experimentaron con ratas utilizando una dosis 176 mg/kg de nopal diluido en agua por sonda gástrica, con un ayuno de 12 horas, dieta ad libitum y las muestras se tomaron cuando las ratas estaban anestesiadas con halotano 4%obteniéndose una diferencia significativa entre el grupo de animales a los que se les administró nopal y el grupo control; en estudios realizados por López, et.al se les administró a ratas inducidas a diabetes una preparación de nopal deshidratado y pulverizado en el laboratorio en una suspensión de 0.005g/mLque se administró a una dosis de 50mg/kg y posteriormente se les administró una solución de glucosa a 2g/kg, ambos administrados por medio de una sonda gástrica, obteniendo resultados favorables sobre la concentración sanguínea de glucosa. Como puede verse en los estudios mencionados la fibra de nopal proporcionada no fue industrializada, se obtuvo de nopal desecado o licuado, mientras que en presente estudio se analizó la fibra a partir de un producto comercial industrializado,que es como se maneja para público, esto muestra que no debe de ser extrapolado directamente en los productos industrializados los resultados obtenidos de investigaciones que utilizan 27 el nopal fresco. Adicional a esto se realizó un análisis químico proximal del producto utilizado y se encontró que el porcentaje de fibra es mucho menor al que se reporta en otros estudios.Para comparar otra alternativa comercial, se le realizó un análisis químico proximal a un producto naturista buscando que los valores de fibra fueran similares a los del producto utilizado en este estudio se asemejaran más a los que se reportan en un nopal crudo, sin embargo, también se encontró un nivel de fibra muy bajo en este último.El análisis de fibra cruda realizado a los productos comerciales dio un porcentaje de 8.56%, que encomparación a lo que según reportan algunos artículos (Muñoz de Chávez y Ledesma, 2002)y la FAO, que es de 35.2% de fibra total en materia seca, es sumamente bajo, razón por la cual pudo no haberresultados en el presente estudio.Además, se observó que dentro del bajo porcentaje de fibra en el producto utilizado,una gran parte fue de fibra no soluble, lo cual podría estar relacionado con que no se observara ningún cambio en la glucemia postprandial, ya que el tipo de fibra que se ha probado que tiene el efecto hipoglucemiante es la soluble. Como se pudo comprobar en este estudio; los nutracéuticos son sustancias biológicas extraídas de fuentes naturales, que procuran conservar sus propiedades originales sin hacer algún tipo de manipulación química. Una vez extraídos de su fuente natural, estas sustancias se estudian mediante procesos similares a los que se emplean para identificar las propiedades biológicas de los fármacos utilizados en animales y humanos, cuando sus propiedades han sido documentadas, se comercializan para consumo humano como complementos nutricionales, sin sustituir la dieta diaria. (Biruete et al, 2009) Sin embargo estos 28 productos no cuentan con regulaciones que les exija cumplir con cierta eficacia ni demostrar su contenido nutricional, lo cual permite que muchas veces se caiga en el error de utilizarlos pensando en que se asemejan a la presentación normal del producto antes de ser industrializado, dando por hecho que se cumplirá el efecto esperado en el organismo, como fue el caso de este estudio. Las fibras se pueden clasificar en base a su solubilidad o su capacidad de dispersase en el agua, las fibras que son altas en compuestos como la celulosa (insolubles), poseen una capacidad muy limitada para absorber compuestos de la dieta y las fibras como la pectina,mucílagos o gomas tienen una gran capacidad para formar geles y soluciones viscosas en el tracto gastrointestinal, los cuales favorecerán la captación de agua y compuestos como la glucosa, retardando así la absorción.(Case LP, 2011,Hand MS, 2010)La viscosidad de las fibras en agua depende de la concentración de fibra, la carga iónica, el pH, y el tamaño de las partículas. Un aumento en la viscosidad gastrointestinal puede retrasar la absorción de nutrientes y retrasar la glucemia postprandial, retrasar el vaciado gástrico y reducir las interacciones del alimento con las enzimas digestivas(Case LP, 2011,Hand MS, 2010.)Al analizar esta premisa y comparar los resultados de este trabajo se puede pensar que la razón por la que no se observó el resultado esperado en la hipótesis, esté relacionado con la cantidad, tipo y características de la fibra utilizada. En este estudio se decidió utilizar el nopal deshidratado de manera comercial pensando en la forma más sencilla de llevarlo a las manos el médico veterinario 29 en la clínica o la las manos del propietario al que se le recomienda el uso para su mascota. 30 Conclusiones De acuerdo con los resultados obtenidos en este estudio, se puede concluir que la administración de nopal deshidratado a una dosis de 50mg/kg de peso vivo, con un porcentaje de fibra cruda de 8.562% en materia seca después de la administración de glucosa a una dosis de 2g/kg de peso vivo, no tiene ningún efecto sobre los niveles de glucemia. No es pertinente extrapolar los resultados obtenidos en investigaciones en las cuales se utiliza nopal fresco para la comercialización y uso de fibra de nopal industrializada, ya que los resultados no son para nada similares. La presentación del producto y su concentración de fibra cruda son factores que afectan en la efectividad del nopal como hipoglucemiante, razón por lo cual es probable que no se haya obtenido el resultado que se planteaba en la hipótesis alterna,sin embargo; no se descarta que, administrando nopal con otro tipo de preparación y a una diferente dosis, pueda funcionar para reducir el incremento de glucemia después de administrar un hiperglucemiante. Se recomienda realizar más estudios con otros productos que se expenden actualmente para este fin y ver su real acción antes de que sean utilizados en los animales basándose únicamente en estudios de la acción de esta fibra fresca. El no haberse presentado una diferencia significativa entre los grupos también pudo deberse a que la muestra puede ser considerada pequeña (n=7), por lo que es recomendable para otros estudios el tener un grupo mayor de animales. 31 Durante este estudio no se observaron signos clínicos que sugieran enfermedad como efecto secundario de los productos administrados. 32 Referencias 1. Basurto., Lorenzana-Jiménez, M., & Guerrero, G. A. M., 2006, Utilidad del nopal para el control de la glucosa en la diabetes mellitus tipo 2. RevFacMed UNAM, 49 No.4, México 2. Buffington, C. T., Holloway, C., & Abood, S. K., 2004, Manual of veterinary dietetics. WB Saunders\ Elsevier Science. USA 3. Case LP., Carey DP., Kirakawa DA., Daristole L., 2011., Nutrición canina y felina.Tercera edición 4. Chávez, et.al, 1999, Evaluación clínico-biológica de dos fuentes de fibra: glucomannan y nopal, en los niveles séricos de lípidos en pacientes diabéticos, UNAM, Facultad de Química, Ciudad de México 5. Crosseley, et.al, 2009 Test rápido de determinación de Glicemia (Tiras Reactivas): Validación por Métodos de Laboratorio, Hospitales Veterinarios Vol. 1 Santiago Chile 6. Días C. L., Phillips, C. R., & Cabezón, J. C., 2002, Diabetes Mellitus en perros: técnicas de diagnóstico. Monografías de Medicina Veterinaria, Santiago Chile 31-39 7. Ettinger, S. J., & Feldman, E. C., 2009. Textbook of veterinary internal medicine. Elsevier HealthSciences., USA 8. Godard, M. P., Ewing, B. A., Pischel, I., Ziegler, A., Benedek, B., & Feistel, B., Acute Blood Glucose Lowering Effects and Long-Term Safety of Opuntia 33 Supplementation in Pre-Diabetic Males and Females, Journal of Enthopharmacology, 130, págs. 631-634, USA 9. Grandjean, D., &Filgueira, M. C., 2003, Todo lo que hay que saber sobre los Nutrientes- perros y gatos, Aniwa Publishing, París 10. Gutiérrez y Cosío, 2014, Manual de Nutrición Clínica de Perros y Gatos, editorial CEAMVET, 1° edición, México 11. 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Nunez, et.al., 2013, Functional and Hypoglycemic Properties ofNopal Cladodes O. ficus indiaca al Different Maturity Stages Using in Vitro and in Vivo Tests, Journal of Agricultural and Food Chemistry 16. Palacios Paz, C. M., 2014. Determinación de la composición parcial de polisacáridos, propiedades fisicoquímicas y actividad antioxidante de la fibra 34 dietética del chocho (Lupinusmutabilis Sweet) y quinua (Chenopodiumquimoa Wild) Universidad Nacional de Chimborazo; Ecuador. 17. Pibot, et.al, 2006 Enciclopedia de Nutrición Clínica Canina Royal Canin, París Francia 18. Sáenz, 2000, Processing technologies: an alternative for cactus pear (Opuntia spp.) fruits and cladodes, Journal of Arid Environments, Volume 46, Issue 3, , Pages 209-225 19. Sáenz C.,Berger, H.,2006,Utilización agroindustrial del nopal, Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación, Boletín De Servicios Agrícolas De La FAO, Vol. 162,Roma 20. Shapiro y Gong. 2002, Natural products used for diabetes, College of Pharmacy, Western University of Health Sciences, Pomona, Calif 91766- 1854, USA. 21. Tams, 2003, Handbook of Small Animal Gastroenterology, Elsevier Health Science 2ª edición USA pág. 416 22. Wills, J. M., & Simpson, K. W. (1994). El libro de Waltham de nutrición clínica del perro y el gato. Acribia. http://www.sciencedirect.com/science/journal/01401963 http://www.sciencedirect.com/science/journal/01401963/46/3 35 Anexos Anexo 1 Máximos ManovaFit N 14 DFE 12 LeastSquaresMeans OverallMeans Día0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 5.9206349 6.0238095 6.190476 6.269841 5.293651 6.269841 6.5396826 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 36 tx Día0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 5.9206349 6.0238095 6.190476167 6.269841 5.293651 6.269841 6.5396826 5.2142857 5.2142857 6.222222222 6.365079 6.246032 6 6.5396826 Between Subjects Sum All Between Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0034127 0.0410 1 12 0.8430 Intercept Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 48.61964 583.4357 1 12 <.0001 tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0034127 0.0410 1 12 0.8430 WithinSubjects Contrast Sphericity Test Mauchly Criterion 0.1034378 ChiSquare 22.183678 DF 20 Prob>Chisq 0.3306275 AllWithinInteractions Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.8445666 0.9853 6 7 0.4990 UnivarunadjEpsilon= 1 0.6885 6 72 0.6595 0 1 2 3 4 5 6 7 Día0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 m m o l/ l d e gl u co sa Día de Tratamiento MÁXIMO NIVEL DE GLUCOSA ALCANZADO Tratamiento 1 Tratamiento 2 37 Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F Univar G-G Epsilon= 0.5824406 0.6885 3.4946 41.936 0.5853 Univar H-F Epsilon= 0.9195187 0.6885 5.5171 66.205 0.6477 Time Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.5413211 0.6315 6 7 0.7040 UnivarunadjEpsilon= 1 1.1089 6 72 0.3658 Univar G-G Epsilon= 0.5824406 1.1089 3.4946 41.936 0.3612 Univar H-F Epsilon= 0.9195187 1.1089 5.5171 66.205 0.3657 Time*tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.8445666 0.9853 6 7 0.4990 UnivarunadjEpsilon= 1 0.6885 6 72 0.6595 Univar G-G Epsilon= 0.5824406 0.6885 3.4946 41.936 0.5853 Univar H-F Epsilon= 0.9195187 0.6885 5.5171 66.205 0.6477 Response promedio de maximos WholeModel SummaryofFit RSquare 0.003401 RSquareAdj -0.07965 Root Mean Square Error 16.79147 Mean of Response 108.398 Observations (or Sum Wgts) 14 AnalysisofVariance Source DF Sum ofSquares Mean Square F Ratio Model 1 11.5466 11.547 0.0410 Error 12 3383.4402 281.953 Prob> F C. Total 13 3394.9869 0.8430 ParameterEstimates Term Estimate Std Error t Ratio Prob>|t| Intercept 108.39796 4.487708 24.15 <.0001 tx[1] 0.9081633 4.487708 0.20 0.8430 Residual byPredictedPlot tx LeastSquaresMeans Table Level LeastSq Mean Std Error Mean 1 109.30612 6.3465778 109.306 2 107.48980 6.3465778 107.490 -40 -30 -20 -10 0 10 20 30 p ro m e io d e m a x im o s R e s id u a l 70 80 90 100 110 120 130 140 promeio de maximos Predicted 38 Anexo2 Tiempo Al Máximo Manova Fit Response Specification To construct the linear combinations across responses, N 14 DFE 12 ParameterEstimates Tiempo max0 Tiempo max1 Tiempo max 2 Tiempo max 3 Tiempo Max 4 Tiempo max 5 Tiempo max 6 Intercept 28.9285714 27.8571429 38.5714286 35.3571429 40.7142857 35 56.7857143 tx[1] 1.07142857 -6.4285714 -4.2857143 -13.928571 2.14285714 -13.571429 -20.357143 LeastSquaresMeans OverallMeans 0 20 40 60 80 100 120 Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 28.9285714 27.8571429 38.5714286 35.3571429 40.7142857 35 56.7857143 39 Tx Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 1 30 21.4285714 34.2857143 21.4285714 42.8571429 21.4285714 36.4285714 2 27.8571429 34.2857143 42.8571429 49.2857143 38.5714286 48.5714286 77.1428571 Between Subjects Sum All Between Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.147212 1.7665 1 12 0.2085 Intercept Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 3.3282414 39.9389 1 12 <.0001 tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.147212 1.7665 1 12 0.2085 WithinSubjects Contrast Sphericity Test Mauchly Criterion 8.82e-17 ChiSquare 361.45447 DF 20 Prob>Chisq 1.935e-64 AllWithinInteractions Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 1.3407829 1.5642 6 7 0.2848 UnivarunadjEpsilon= 1 1.4287 6 72 0.2156 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 M in u to s Día de Tratamiento TIEMPO EN EL QUE SE ALCANZÓ EL MÁXIMO Tratamiento 1 Tratamiento 2 40 Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F Univar G-G Epsilon= 0.5239143 1.4287 3.1435 37.722 0.2488 Univar H-F Epsilon= 0.7905444 1.4287 4.7433 56.919 0.2301 Time Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 1.6389055 1.9121 6 7 0.2081 UnivarunadjEpsilon= 1 1.9060 6 72 0.0914 Univar G-G Epsilon= 0.5239143 1.9060 3.1435 37.722 0.1428 Univar H-F Epsilon= 0.7905444 1.9060 4.7433 56.919 0.1110 Time*tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 1.3407829 1.5642 6 7 0.2848 UnivarunadjEpsilon= 1 1.4287 6 72 0.2156 Univar G-G Epsilon= 0.5239143 1.4287 3.1435 37.722 0.2488 Univar H-F Epsilon= 0.7905444 1.4287 4.7433 56.919 0.2301 Response promedio de tiempo al máximo Whole Model Summary of Fit Analysis of Variance Source DF Sum ofSquares Mean Square F Ratio Model 1 875.5466 875.547 1.7665 Error 12 5947.5219 495.627 Prob> F C. Total 13 6823.0685 0.2085 ParameterEstimates Term Estimate Std Error t Ratio Prob>|t| Intercept 37.602041 5.949951 6.32 <.0001 tx[1] -7.908163 5.949951 -1.33 0.2085 Residual byPredictedPlot tx LeastSquaresMeans Table Level LeastSq Mean Std Error Mean 1 29.693878 8.4145013 29.6939 2 45.510204 8.4145013 45.5102 -30 -20 -10 0 10 20 30 40 50 p ro m e d io d e t ie m p o a l m á x im o R e s id u a l 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 promedio de tiempo al máximo Predicted 41 Anexo 3 Minimos Manova Fit Response Specification To construct the linear combinations across responses, N 14 DFE 12 ParameterEstimates Min0 Min 1 Min 2 Min 3 Min 4 Min 5 Min 6 Intercept 59.3571429 64.7142857 63.8571429 70.1428571 71.7142857 76.3571429 74.6428571 tx[1] 2.35714286 2 -0.4285714 -1.8571429 -3.1428571 -2.6428571 -1.7857143 LeastSquaresMeans OverallMeans Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 3.2976191 3.59523809 3.5476191 3.89682539 3.98412698 4.24206349 4.14682539 tx 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.54 4.5 Min0 Min 1 Min 2 Min 3 Min 4 Min 5 Min 6 42 tx Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 1 3.42857143 3.7063492 3.52380952 3.79365079 3.80952381 4.09523809 4.0476191 2 3.16666667 3.484127 3.57142857 4 4.15873016 4.38888889 4.2460317 Between Subjects Sum All Between Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0110815 0.1330 1 12 0.7217 Intercept Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 84.679089 1016.1491 1 12 <.0001 tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0110815 0.1330 1 12 0.7217 WithinSubjects Contrast Sphericity Test Mauchly Criterion 0.1565268 ChiSquare 18.133162 DF 20 Prob>Chisq 0.5786365 AllWithinInteractions Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 1.2816732 1.4953 6 7 0.3038 UnivarunadjEpsilon= 1 1.3693 6 72 0.2387 Univar G-G Epsilon= 0.682562 1.3693 4.0954 49.144 0.2576 Univar H-F Epsilon= 1 1.3693 6 72 0.2387 0 1 2 3 4 5 Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 m m o l/ l Día de Tratamiento MÍNIMO NIVEL DE GLUCOSA ALCANZADO Tratamiento 1 Tratamiento 2 43 Time Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 7.222774 8.4266 6 7 0.0064 UnivarunadjEpsilon= 1 10.9736 6 72 <.0001 Univar G-G Epsilon= 0.682562 10.9736 4.0954 49.144 <.0001 Univar H-F Epsilon= 1 10.9736 6 72 <.0001 Time*tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 1.2816732 1.4953 6 7 0.3038 UnivarunadjEpsilon= 1 1.3693 6 72 0.2387 Univar G-G Epsilon= 0.682562 1.3693 4.0954 49.144 0.2576 Univar H-F Epsilon= 1 1.3693 6 72 0.2387 ManovaFit Response Specification To construct the linear combinations across responses, N 14 DFE 12 ParameterEstimates Min0 Min 1 Min 2 Min 3 Min 4 Min 5 Min 6 Intercept 59.3571429 64.7142857 63.8571429 70.1428571 71.7142857 76.3571429 74.6428571 tx[1] 2.35714286 2 -0.4285714 -1.8571429 -3.1428571 -2.6428571 -1.7857143 LeastSquaresMeans OverallMeans Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 3.2976191 3.59523809 3.5476191 3.89682539 3.98412698 4.24206349 4.14682539 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 Least Squares Means 44 tx tx Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 1 3.42857143 3.7063492 3.52380952 3.79365079 3.80952381 4.09523809 4.0476191 2 3.16666667 3.484127 3.57142857 4 4.15873016 4.38888889 4.2460317 Profile WholeModel Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 1.2816732 1.4953 6 7 0.3038 Intercept Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 7.222774 8.4266 6 7 0.0064 tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 1.2816732 1.4953 6 7 0.3038 Column1 Column1 M Matrix MMin0 Min 1 Min 2 Min 3 Min 4 Min 5 Min 6 1 -1 0 0 0 0 0 WholeModel Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0019464 0.0234 1 12 0.8811 Intercept Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.4379477 5.2554 1 12 0.0407 tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0019464 0.0234 1 12 0.8811 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 Min0 Min 1 Min 2 Min 3 Min 4 Min 5 Min 6 MÍNIMO NIVEL DE GLUCOSA ALCANZADO Series1 Series2 45 Column2 Column2 M Matrix MMin0 Min 1 Min 2 Min 3 Min 4 Min 5 Min 6 0 1 -1 0 0 0 0 WholeModel Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.041763 0.5012 1 12 0.4925 Intercept Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0052023 0.0624 1 12 0.8069 tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.041763 0.5012 1 12 0.4925 Column3 Column3 M Matrix MMin0 Min 1 Min 2 Min 3 Min 4 Min 5 Min 6 0 0 1 -1 0 0 0 WholeModel Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0301296 0.3616 1 12 0.5588 Intercept Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.5833082 6.9997 1 12 0.0213 tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0301296 0.3616 1 12 0.5588 Column4 Column4 M Matrix MMin0 Min 1 Min 2 Min 3 Min 4 Min 5 Min 6 0 0 0 1 -1 0 0 WholeModel Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0270903 0.3251 1 12 0.5791 Intercept Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0404682 0.4856 1 12 0.4992 tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0270903 0.3251 1 12 0.5791 Column5 Column5 M Matrix MMin0 Min 1 Min 2 Min 3 Min 4 Min 5 Min 6 0 0 0 0 1 -1 0 46 WholeModel Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0046809 0.0562 1 12 0.8167 Intercept Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.403611 4.8433 1 12 0.0481 tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0046809 0.0562 1 12 0.8167 Column6 Column6 M Matrix MMin0 Min 1 Min 2 Min 3 Min 4 Min 5 Min 6 0 0 0 0 0 1 -1 WholeModel Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0083857 0.1006 1 12 0.7565 Intercept Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.033543 0.4025 1 12 0.5377 tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0083857 0.1006 1 12 0.7565 Anexo 4 Tiempo Al Mínimo ManovaFit Response Specification To construct the linear combinations across responses, N 14 DFE 12 ParameterEstimates Tiempo Min0 Tiempo min 1 Tiempo min 2 Tiempo min 3 Tiempo min 4 Tiempo min 5 Tiempo min 6 Intercept 66.4285714 62.1428571 96.4285714 62.1428571 62.1428571 62.1428571 66.4285714 tx[1] 2.14285714 6.42857143 23.5714286 6.42857143 6.42857143 6.42857143 4.28571429 47 LeastSquaresMeans OverallMeans Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 66.428571 62.142857 96.428571 62.142857 62.142857 62.142857 66.428571 tx tx Tiempo Min0 Tiempo min 1 Tiempo min 2 Tiempo min 3 Tiempo min 4 Tiempo min 5 Tiempo min 6 1 68.5714286 68.5714286 120 68.5714286 68.5714286 68.5714286 70.7142857 2 64.2857143 55.7142857 72.8571429 55.7142857 55.7142857 55.7142857 62.1428571 Between Subjects Sum 0 20 40 60 80 100 120 Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 M in u to s Día de Tratamineto 0 20 40 60 80 100 120 140 Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 M in u to s Día de Tratamiento TIEMPO AL QUE SE ALCANZÓ LA MÍNIMA CONCENTRACIÓN CE GLUCOSA Tratamiento 1 Tratamiento 2 48 All Between Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0510343 0.6124 1 12 0.4490 Intercept Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 3.7542654 45.0512 1 12 <.0001 tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0510343 0.6124 1 12 0.4490 WithinSubjects Contrast AllWithinInteractions Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.2183162 0.2547 6 7 0.9419 UnivarunadjEpsilon= 1 0.3022 6 72 0.9338 Univar G-G Epsilon= 0.352562 0.3022 2.1154 25.384 0.7537 Univar H-F Epsilon= 0.4656254 0.3022 2.7938 33.525 0.8098 Time Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.4209713 0.4911 6 7 0.7976 UnivarunadjEpsilon= 1 0.9556 6 72 0.4615 Univar G-G Epsilon= 0.352562 0.9556 2.1154 25.384 0.4025 Univar H-F Epsilon= 0.4656254 0.9556 2.7938 33.525 0.4199 Time*tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.2183162 0.2547 6 7 0.9419 UnivarunadjEpsilon= 1 0.3022 6 72 0.9338 Univar G-G Epsilon= 0.352562 0.3022 2.1154 25.384 0.7537 Univar H-F Epsilon= 0.4656254 0.3022 2.7938 33.525 0.8098 UNIVARIADO Response Promedio de tiempo al mínimo WholeModel AnalysisofVariance Source DF Sum ofSquares Mean Square F Ratio Model 1 886.880 886.88 0.6124 Error 12 17378.134 1448.18 Prob> F C. Total 13 18265.015 0.4490 ParameterEstimates Term Estimate Std Error t Ratio Prob>|t| Intercept 68.265306 10.17061 6.71 <.0001 tx[1] 7.9591837 10.17061 0.78 0.4490 49 Residual byPredictedPlot tx LeastSquaresMeans Table Level LeastSq Mean Std Error Mean 1 76.224490 14.383412 76.2245 2 60.306122 14.383412 60.3061 Anexo 5 Incremento Al Máximo Manova Fit Response Specification To construct the linear combinations across responses, N 14 DFE 12 ParameterEstimates Incremento0 Incremento1 Incremento 2 Incremento 3 Incremento 4 Incremento 5 Incremento 6 1.87698413 1.58333333 2.25 2.29365079 1.45634921 1.56349206 2.05555556 -50 -30 -10 10 30 50 P ro m e d io d e t ie m p o a l m ín im o R e s id u a l 20 30 40 50 60 70 80 90 100 120 Promedio de tiempo al mínimo Predicted 50 Least Squares Means Overall Means Overall MeansIncremento0 Incremento 1 Incremento 2 Incremento 3 Incremento 4 Incremento 5 Incremento 6 33.7857143 28.5 40.5 41.2857143 26.2142857 28.1428571 37 tx tx Incremento0 Incremento 1 Incremento 2 Incremento 3 Incremento 4 Incremento 5 Incremento 6 1 2.23015873 1.97619048 2.23809524 2.42063492 1.07936508 2.00793651 2.142857 2 1.52380952 1.19047619 2.26190476 2.16666667 1.83333333 1.11904762 1.968254 Between Subjects Sum 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Incremento0 Incremento 1 Incremento 2 Incremento 3 Incremento 4 Incremento 5 Incremento 6 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Incremento0 Incremento 1 Incremento 2 Incremento 3 Incremento 4 Incremento 5 Incremento 6 INCREMENTO DE GLUCOSA ALCANZADO DESDE EL TIEMPO 0 HASTA EL MÁXIMO Series1 Series2 51 All Between Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0522377 0.6269 1 12 0.4439 Intercept Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 8.6592208 103.9107 1 12 <.0001 tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.0522377 0.6269 1 12 0.4439 WithinSubjects Contrast Sphericity Test Mauchly Criterion 0.1240434 ChiSquare 20.407433 DF 20 Prob>Chisq 0.432716 AllWithinInteractions Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 1.2205165 1.4239 6 7 0.3250 UnivarunadjEpsilon= 1 0.5923 6 72 0.7355 Univar G-G Epsilon= 0.6097929 0.5923 3.6588 43.905 0.6556 Univar H-F Epsilon= 0.9835185 0.5923 5.9011 70.813 0.7328 Time Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 0.4367872 0.5096 6 7 0.7853 UnivarunadjEpsilon= 1 0.8439 6 72 0.5403 Univar G-G Epsilon= 0.6097929 0.8439 3.6588 43.905 0.4964 Univar H-F Epsilon= 0.9835185 0.8439 5.9011 70.813 0.5388 Time*tx Test Value Exact F NumDF DenDF Prob>F F Test 1.2205165 1.4239 6 7 0.3250 UnivarunadjEpsilon= 1 0.5923 6 72 0.7355 Univar G-G Epsilon= 0.6097929 0.5923 3.6588 43.905 0.6556 Univar H-F Epsilon= 0.9835185 0.5923 5.9011 70.813 0.7328 Response Promedio del incrementoal máximo WholeModel AnalysisofVariance Source DF Sum ofSquares Mean Square F Ratio Model 1 95.5335 95.534 0.6269 Error 12 1828.8222 152.402 Prob> F C. Total 13 1924.3557 0.4439 ParameterEstimates Term Estimate Std Error t Ratio Prob>|t| Intercept 33.632653 3.299371 10.19 <.0001 tx[1] 2.6122449 3.299371 0.79 0.4439 52 Residual byPredictedPlot tx LeastSquaresMeans Table Level LeastSq Mean Std Error Mean 1 36.244898 4.6660146 36.2449 2 31.020408 4.6660146 31.0204 -25 -20 -15 -10 -5 0 5 10 15 20 P ro m e d io d e l i n c re m e n to a l m á x im o R e s id u a l 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Promedio del incrementoal máximo Predicted Portada Contenido Resumen Introducción Hipótesis Objetivo Material y Métodos Resultados Discusión Conclusiones Referencias Anexos
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