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UNIVERSIDAD NACIONAL FACULTAD DE ESTUDIOS “MANUAL DE TÉCNICAS PERICIALES EN QUÍMICA (EL Q. F .B. EN LOS ANÁLISIS PERICIALES) QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO. P R RAYMUNDO RIVERO HERNANDEZ Q.F.B. PEDRO CARLOS MIJANGOS VARGAS Q.F.B. JOSE LUIS DOMINGUEZ RODRIGUEZ NIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXI FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁ CAMPO I “MANUAL DE TÉCNICAS PERICIALES EN QUÍMICA FORENSE“ (EL Q. F .B. EN LOS ANÁLISIS PERICIALES) T E S I S QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO. E S E N T A RAYMUNDO RIVERO HERNANDEZ ASESORES: Q.F.B. PEDRO CARLOS MIJANGOS VARGAS Q.F.B. JOSE LUIS DOMINGUEZ RODRIGUEZ CUAUTITÁN IZCALLI, EDO. DE MEX. 2010 AUTÓNOMA DE MÉXICO SUPERIORES CUAUTITLÁ N “MANUAL DE TÉCNICAS PERICIALES EN QUÍMICA (EL Q. F .B. EN LOS ANÁLISIS PERICIALES) QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO. : Q.F.B. PEDRO CARLOS MIJANGOS VARGAS Q.F.B. JOSE LUIS DOMINGUEZ RODRIGUEZ TITÁN IZCALLI, EDO. DE MEX. 2010 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. UNIVERSIDAD NACIONAL FACULTAD DE ESTUDIOS “MANUAL DE TÉCNICAS PERICIALES EN QUÍMICA (EL Q. F .B. EN LOS ANÁLISIS PERICIALES) QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO. P R RAYMUNDO RIVERO HERNANDEZ Q.F.B. PEDRO CARLOS MIJANGOS VARGAS Q.F.B. JOSE LUIS DOMINGUEZ RODRIGUEZ NIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁ CAMPO I “MANUAL DE TÉCNICAS PERICIALES EN QUÍMICA FORENSE“ (EL Q. F .B. EN LOS ANÁLISIS PERICIALES) T E S I S QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO. E S E N T A RAYMUNDO RIVERO HERNANDEZ ASESORES: Q.F.B. PEDRO CARLOS MIJANGOS VARGAS Q.F.B. JOSE LUIS DOMINGUEZ RODRIGUEZ CUAUTITÁN IZCALLI, EDO. DE MEX. 2010 AUTÓNOMA DE MÉXICO SUPERIORES CUAUTITLÁ N “MANUAL DE TÉCNICAS PERICIALES EN QUÍMICA (EL Q. F .B. EN LOS ANÁLISIS PERICIALES) QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO. : Q.F.B. PEDRO CARLOS MIJANGOS VARGAS Q.F.B. JOSE LUIS DOMINGUEZ RODRIGUEZ TITÁN IZCALLI, EDO. DE MEX. 2010 AGRADECIMIENTOS Son tantas personas a las cuales debo parte de este triunfo, de lograr alcanzar mi culminación académica, la cual es el anhelo de todos los que así lo deseamos. Definitivamente, Dios, mi Señor, mi Guía, mi Proveedor, mi Fin Ultimo; sabes lo esencial que has sido en mi posición firme de alcanzar esta meta, esta alegría, que si pudiera hacerla material, la hiciera para entregártela, pero a través de esta meta, podré siempre de tu mano alcanzar otras que espero sean para tu Gloria. Mis hermanos, Janeht, Jesús, Gustavo, mis padres, María Julia y Leobardo por darme la estabilidad emocional, económica, sentimental; para poder llegar hasta este logro, que definitivamente no hubiese podido ser realidad sin ustedes. GRACIAS por darme la posibilidad de que de mi boca salga esa palabra…FAMILIA. Papa y Mama, serán siempre mi inspiración para alcanzar mis metas, por enseñarme que todo se aprende y que todo esfuerzo es al final recompensa. Su esfuerzo, se convirtió en su triunfo y el mío, LOS AMO. Este trabajo se realizó en la PROCURADURÍA GENERAL DE JUSTICIA DEL DISTRITO FEDERAL (PGJDF) ubicada en Av. Coyoacán No. 1635 colonia del valle centro Del. Benito Juárez C.P. 03100 PRÓLOGO La práctica forense exige un amplio conocimiento de las diversas disciplinas, así como de innumerables pormenores administrativos. Desde luego que hay sobrados textos referentes a esta disciplina, pero muy pocos dan cuenta del contexto global de la práctica cotidiana de técnicas periciales, el cual resulta indispensable para el adecuado cumplimiento de las tareas. En el presente manual se exponen las nociones esenciales así como los mínimos detalles que atañen a la actividad pericial. Revela así la mucha dedicación puesta en acopiar la experiencia necesaria para el dominio del campo en estudio, en su ordenación metódica para la transmisión de estos logros a las futuras generaciones. Considero que este tipo de obra insisto, de tanta utilidad práctica, poco frecuente de ver en nuestro medio, y seguramente más habitual en nuestra cultura , constituye un instrumento que deberá tener presente todo aquel que se desempeña o interesa en el sugestivo y completo terreno de la ciencia forense y mas acentuado en los análisis periciales. ÍNDICE Página INTRODUCCIÓN I OBJETIVOS V CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 1.1) Conocimiento de cartuchos……………………………………………………1 1.2) Prueba de Walker. …………………………………………………………….3 1.3) Prueba de Rodizonato de Sodio. …………………………………………….12 CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 2.1) Embalaje y recolección de muestra ………………….………………………..15 2.2) Reacción de Bencidina (Adler) ………………………...……….…………….17 2.3) Reacción de la fenolftaleína reducida(kastle-mayer)……………………….....19 2.4) Cristales de hemina o de Teichman....……………………………………….. 23 2.5) Determinación de grupo sanguíneo …………………………………………..24 a) En sangré fresca por técnica de reacción antígeno – anticuerpo. b) En sangré seca. CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 3.1) Toxicología forense para la determinación de cocaína………………………32 3.2) Toxicología forense para la identificación de Cannabis Sativa L……………43 3.3) Toxicología forense para la determinación de Benzodiacepinas…………….48 3.4) Toxicología forense para la determinación de Anfetaminas. ………..……....51 CAPÍTULO 4. DETERMINACIÓN DE ALCOHOL 4.1) Identificación y Determinación de Alcohol Etílico…………………………..54 4.2) Identificación de alcohol etílico por micro difusión (cámara Conway) ..........59 CAPÍTULO 5. MONÓXIDO DE CARBONO 5.1) Toxicología forense para la identificación y cuantificación de carboxihemoglobina (Monóxido de Carbono en Sangre)...............................................................................60 CAPÍTULO 6. PESTICIDAS ORGANOFOSFORADOS 6.1) Toxicología forense para la identificación de pesticidas órgano fosforados…….63 CAPÍTULO 7. INCENDIOS Y EXPLOSIVOS 7.1) Investigación de incendios y explosiones............................................................69 CONCLUSIONES........................................................................................................72 GLOSARIO...................................................................................................................73 REFERENCIAS.............................................................................................................76 I INTRODUCCIÓN. En el presente trabajo se desarrollan algunas de las técnicas periciales que se realizan cotidianamenteen la PGJDF en el área de servicios periciales en el departamento de química por lo que se espera fomentar el interés sobre el área toxicología de los estudiantes del área químico biológicas. La toxicología contemporánea difiere radicalmente de la ciencia o cúmulo de conocimientos organizados científicamente, que se enseñaban y practicaban en décadas anteriores. Atrás quedó el envenenamiento agudo con la aureola misteriosa de la muerte repentina, fulminante, sospechosa y rápida( http://www.df.gob.mx/procuraduria). Las pruebas que se realizan en la PGJDF son en algunos casos presuntivas, por ende es de gran importancia el desarrollar técnicas rápidas y confiables para emitir un resultado seguro y confiable, tal es el caso de la determinación de cainas con tiocianato de cobalto para la posible identificación de una sustancia de abuso como es la cocaína, otro ejemplo de ello es cuando se encuentran manchas de sangre presentes sobre el cuerpo de la víctima y de la que se sospecha no pudieran ser originadas por su propia sangre, en estas ocasiones encontramos la importancia de conocer el tipo de sangre que en un momento dado pudiese dar argumentos al ministerio publico para deslindar o bien asegurar la presunta responsabilidad de los inculpados. Las técnicas periciales son una secuencia de normas que se deben seguir de acuerdo a los eventos acontecidos en el lugar de los hechos. En el presente trabajo se dan a conocer algunas de las técnicas empleadas para el desarrollo de una investigación material que fue utilizado al realizar el servicio social dentro de esta gran institución. Hoy en día, la nueva toxicología, se aboca además al estudio de los efectos tóxicos (a largo plazo) de incontables agentes químicos, con los cuales el hombre construye y vive su mundo, tratando de dominar y someter a la naturaleza, desarrollando procesos y sustancias nuevas, que muchas veces se vuelven contra él y los demás seres vivos. Es una ciencia polifacética y multidisciplinaria. (Islas, V. 1995.) II En el afán de mejorar el nivel de vida de todos los habitantes de la tierra, el hombre es ahora más cuidadoso en lo que se refiere al empleo de agentes químicos, ya que los avances vertiginosos de los últimos 100 años han causado problemas, a veces tan grandes como los que se intentó resolver. En el futuro el "progreso" debería ser más moderado y sobre todo responsable, tomando en consideración los efectos indeseables, de los tóxicos. (Islas, V. 1995.) El nivel de vida del hombre depende fundamentalmente del desarrollo de nuevos procesos y sustancias químicas, por consiguiente la toxicología deberá marchar a la par, o adelantarse, tratando de prevenir, diagnosticar y tratar todos los casos en los cuales interactúen en forma negativa un ser vivo y un xenobiótico, y sobre todo evaluando el riesgo y la seguridad en el uso de agentes químicos. (Islas, V. 1995.) Con frecuencia se utilizan los nombres de tóxicos y veneno, denominando como veneno a aquellas sustancias que han sido suministradas con fines lesivos premeditados y dejando el nombre de tóxico a la sustancia que aunque pueda ocasionar daño no se suministra con esta intención. Normalmente veneno es concebido como aquello que tiene naturaleza intrínsecamente peligrosa aun en pequeñas dosis, tales como el cianuro, el arsénico, plomo, etc. Aquello que puede ocasionar daño pero no por la naturaleza misma de la sustancia, ejemplo de ello seria el agua, oxigeno, etc. (Islas, V. 1995.) ORIGEN DE LA TOXICOLOGÍA Para poder remontarnos al origen de la toxicología, tendríamos que remontarnos al origen de la biología, puesto que se supone que desde el momento en que surge la vida, aparece también el riesgo de entrar en contacto con agentes nocivos que ponen en peligro el normal funcionamiento del organismo, remontándonos a la historia de información toxicología podemos nombrar los siguientes hechos: La historia de la toxicología es tan antigua, tanto como la humanidad misma y en la búsqueda de datos antiguos encontramos en el Papiro de Ebers (1.500 a.c.), citas que se pueden relacionar con tóxicos de origen natural y aún referencias más antiguas se hacen en papiros egipcios que datan de 1.700 a.c, se advierte el uso de Cannabis Indicus y de Papaver Somniferum y aún se hace referencia a intoxicaciones por el elemento plomo. III En la medicina hindú sobresale Veda ( 900 a.C.); en la griega Hipócrates (400 a.C.) quienes ya mencionaron varios venenos en sus escritos y Theofrastus ( 370- 286 a.C.) estudia los venenos vegetales. (Ariens, E.J. 1978). La historia de la humanidad contempla casos como los de Sócrates que utiliza sus conocimientos sobre cicuta y el de Cleopatra que se vale de la serpiente cobra para poner fin a su vida en forma menos tormentosa. En 1493 nace Felipe Aureolo Teofrasto Bombast de Hohemheim, posteriormente llamado Paracelso, como médico alemán profesor de la universidad de Brasil e importante estudioso de la toxicología, expresó la famosa sentencia "todo es veneno y nada es veneno, la dosis sola hace el veneno" una frase que en su intrínseco significado es incontrovertible. (Ariens, E.J. 1978). La toxicología es el conjunto de procedimientos analíticos cuyo fin es identificar y determinar cualitativa y/o cuantitativamente sustancias tóxicas, psicotrópicas y estupefacientes así como metabolitos de las mismas, tanto en muestras biológicas de cadáveres y de personas vivas y en muestras no biológicas de naturaleza orgánica o inorgánica que comprenden de polvos sólidos y líquidos para conocer de esta manera la forma en que sucedieron los hechos involucrados con la ingestión. Administración transporte o posesión de dichas sustancias con el fin de proporcionar al ministerio público y al juez la verdad. (Ariens, E.J. 1978). La toxicología forense es la rama de toxicología que estudia los métodos de investigación medico-legal en los casos de envenenamiento y muerte. Muchas sustancias tóxicas no generan ninguna lesión característica, de tal manera que si se sospecha alguna reacción tóxica, la investigación visual no sería del todo suficiente para llegar a una conclusión algunas funciones de la toxicología forense son: • Identificar sustancias que produzcan una alteración psíquica pasajera o permanente. • Intoxicación como circunstancia calificadora de un delito. • Intoxicación como delito. • Intoxicación como estado peligroso. La investigación toxicológica, es el conjunto de procesos analíticos que tienen por objeto el aislamiento, identificación y determinación cualitativa o cuantitativa de los tóxicos tanto en vivos como en cadáveres, con el fin de permitir el diagnóstico de intoxicación y el esclarecimiento de los hechos. (Ariens, E.J. 1978). IV Muestras biológicas para la búsqueda de drogas o sustancias toxicas son: • Vivos: Sangre, Orina, Fluido Oral, Pelo, Sudor, Aliento. • Muertos: Sangre, Orina, Tejidos. CLASIFICACIÓN DE LOS TÓXICOS Los tóxicos pueden clasificarse por su origen, estado físico, órgano blanco, composición química y mecanismo de acción. POR SU ORIGEN: • Tóxicos de origen mineral. • Tóxico de origen botánico. • Tóxico de origen animal. • Tóxico de origen sintético. POR SU ESTADO FÍSICO: • Tóxicos Líquidos. • Tóxicos Sólidos. • Tóxicos Pulverulentos. • Tóxicos Gaseosos. POR EL ÓRGANO BLANCO: • Hepatotóxicos. • Neurotóxicos. • Hematóxicos V OBJETIVOS: � Desarrollar un manual con las técnicas de investigación con que se cuenta en la PROCURADURÍA GENERAL DE JUSTICIA DEL DF, para emitir dictámenes periciales o certificados, dando respuesta a los planteamientos emitidos por la autoridad solicitante. � Por medio del presente manual de técnicas periciales mejorar los procesos de atención utilizados en la elaboraciónde dictámenes periciales para dar una respuesta más eficiente a la autoridad. CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 1 CONOCIMIENTO DE CARTUCHOS. Objetivo: Identificar los diferentes cartuchos de arma de fuego y su clasificación así como conocer la constitución química del mismo. Introducción: Se entiende por cartucho (ver Fig.1) la pieza completa con que se carga o abastece toda arma de fuego por otra parte, la Real Academia dé la Lengua Española lo define de la siguiente manera: "Carga de pólvora y municiones, de pólvora sola, correspondiente a cada tiro de arma de fuego, envuelta en papel o lienzo, o encerrada en un tubo metálico". (Lázaro, O. 1997.) Las variedades de los cartuchos dependen de los múltiples tipos de armas y de las modalidades propias de fabricación que tiene cada industria. Sin embargo en términos generales el cartucho esta compuesto de la siguiente forma: 1.- Fulminante o iniciador. Fulminante o iniciador: al hacer contacto el percutor con el fulminante, se produce una chispa que al entrar en contacto con la pólvora expulsa el proyectil por ignición de la misma. (Moreno, R. 1986.) El fulminante o iniciador generalmente es de; plomo, nitruro de bario, fulminato de mercurio, o antimonio. Así mismo la pólvora desde un punto de vista didáctico, las pólvoras se dividen en negras y sin humo o piroxiladas. • Pólvoras negras: están compuestas por salitre o nitrato de potasio (78%), carbón (12%) y azufre (10%). • Pólvoras piroxiladas: son las que se obtienen mediante él ácido nítrico al actuar sobre sustancias que contienen celulosa (se le conoce como nitrocelulosa). CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 2 2.- Componentes de la pólvora - Nitrato de Potasio (KNO3). - Azufre (S2). - Carbón Vegetal. - Cubierta o camisa. 3.- Componentes del proyectil - Plomo (Pb2). - Níquel (Ni2). - Cobre (Cu2). 4.- Casquillo Es de metal y se encarga de contener el resto de los elementos del cartucho. Fig. 1 Composición del cartucho (Lázaro,O.1997.) FULMINANTE POLVORA CASQUILLO PROYECTIL CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 3 PRUEBA DE WALKER Objetivo: Identificar la presencia de nitritos en la ropa, alrededor del orificio de entrada del proyectil, para determinar si el disparo fue próximo, o bien a una distancia tal que no permita la incrustación de la pólvora sobre las prendas. (Lázaro, O. 1997.) Introducción Se deben conocer la utilidad que brindan los elementos químicos que se desprenden al disparar un arma de fuego, tales como son el Pb, KNO2entre otros, para solucionar las interrogantes técnicas que se presentan en la comisión de hechos por arma de fuego. Como se ilustra en la Fig. 2 existen diferentes tipos de de disparos de acuerdo a la distancia en que se realiza. Fig. 2 Esquema de tipos de disparos (Lázaro, O. 1997.) a) Disparo a cañón tocante: También denominado “Disparo con arma abocada”, realizado con él arma apoyada sobre la superficie corporal(Fig. 3), es decir que corresponde a distancia CERO (0), éste se caracteriza por la presencia de signos tales como el Signo de Benassi, este signo significa la presencia de restos de pólvora semicombustionada en el interior de la herida, hemoglobina oxicarbonada producto del monóxido de carbono proveniente de la combustión incompleta de la pólvora también estará presente el Halo de Fisch (Fig 3.1) (A chaval, A. 1979). CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 4 Fig.3 Efecto de explosivo en el disparo a boca de jarro. Fig. 3.1 Disparo a boca de jarro (http://bp3.blogger.com) b) Disparo a quemarropa: Es el disparo efectuado dentro de la distancia máxima de alcance de la boca del cañón del arma luego de expulsado el proyectil y que en armas de puño puede alcanzar distancias no mayores a los 10 mm dependiendo ésta fundamentalmente del largo del cañón del arma considerada y de la carga balística del cartucho utilizado. Este tipo de disparo se caracteriza por la existencia de signos de alteración térmica en la piel o en la prenda exterior que vistiese la víctima al momento de recibir el disparo (chamusca miento de pelos, vellos y fibras textiles, etc.) (http://bp3.blogger.com). CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 5 Fig. 4 Disparo a quemarropa (http://bp3.blogger.com) c) Disparo a muy corta distancia: Presenta tatuaje de restos de pólvora no combustionada o semicombustionada, los que en forma de “granos” van a incrustarse superficialmente en la piel o a adherirse a las prendas de vestir, encontrándose presente también el tatuaje metálico, es decir el producido por las partículas metálicas desprendidas del propio proyectil. (http://bp3.blogger.com) CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 6 Fig. 5 Disparo a muy corta distancia (http://bp3.blogger.com) Al disparar un arma de fuego se manifiestan dos conos de deflagración: Los elementos presentes en el cono posterior del disparo son: 1. Nitratos de potasio, sodio y derivados nitrados proceden de la deflagración de la carga de pólvora del cartucho. 2. Derivados de bario procedentes del fulminante del cartucho. 3. Elementos de plomo procedente del proyectil o bala sin camisa de cobre o acero. 4. Elementos de antimonio procedentes del fulminante. 5. Elementos de cobre y acero procedentes de la cubierta de la camisa. Los elementos antes mencionados se desprenden, como resultado del disparo de la pólvora, la cual contiene compuestos tales como KNO3 según la siguiente reacción. 2 KNO2 + O2 2KNO3 Por lo tanto, el KNO2, después de un disparo próximo, queda depositado alrededor del orificio de entrada del proyectil. Este compuesto químico (KNO2). CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 7 Fundamento. La identificación de elementos por arma de fuego se efectúan mediante una reacción de diazotación, que se desarrolla sobre una hoja de papel fotográfico, el cual fue previamente tratado con una solución de alfa-naftilamina y ácido sulfanílico y posteriormente sometido la acción del ácido acético para formar el ácido nitroso y la sal de potasio correspondiente. Fig. 6 Las reacciones químicas de la prueba de Walker (Lázaro, O.1997.) KNO2 + CH3 COOH HNO2 + CH3 COOK NH2 HO3S N N + HO3S +HNO2 + H2O Ácido sulfanilico ácido nítrico sal de diazonio agua En formación del colorante rojo con alfa-naftilamina Ácido p-bencensulfonico azoalfanaftilamina (Color rojo) MATERIAL: 1) Ácido sulfanilico 0.5%(en agua). 2) Alfa-naftilamina 0.5% (metanol). 3) Ácido acético 25%. 4) Papel fotográfico desensibilizado. 5) Plancha. 6) Gasa CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 8 MÉTODO 1) Desensibilizar el papel fotográfico con una solución de hiposulfito durante tres minutos para eliminar los haluros de plata; lavar con agua por tres minutos y secar. 2) Aplicar ácido sulfanilico con un algodón humedecido sobre la superficie de la parte gelatinosa del papel, dejar secar y repetir la operación dos veces más. 3) Aplicar alfa-naftilaminade la misma manera que el ácido sulfanilico. 4) Colocar el papel fotográfico desensibilizado con la superficie gelatinosa sobre la parte problema. 5) Depositar sobre el papel fotográfico un trozo de gasa humedecida con ácido acético al 25%. 6) Con la plancha caliente se presiona toda la superficie de la gasa durante cinco minutos con cuidado todos y cada uno de los objetos que se colocaron sobre la prenda. 7) Retirar la plancha y observar los resultados. Fig. 7 Imagen tomada de la PROCURADURIA GENERAL DE JUSTICIA DEL DF en la coordinación general de servicios periciales 2009. CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 9 Diagrama de flujo para la prueba de Walker. Desensibilizar el papel fotográfico con una solución de hiposulfito durante tres minutos para eliminar los haluros de plata; lavar con agua por tres minutos y secar. Aplicar con un algodón humedecido de ácido sulfanilico sobre la superficie de la parte gelatinosa del papel, dejar secar y repetir la operación dos veces más. Aplicar de la misma manera el alfa-naftilamina. Colocar el papel fotográfico desensibilizado con la superficie gelatinosa sobre la parte problema. Colocar sobre el papel fotográfico un trozo de gasa humedecida con ácido acético al 25%. Con la plancha caliente se presiona toda la superficie de la gasa durante cinco minutos cuidando todos y cada uno de los objetos que se colocaron sobre la prenda. CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 10 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS POSITIVO: La prueba se considere positiva cuando se observan en el papel fotográfico puntos rojos o rosas, (ver Fig.8). Figura. 8 Muestra positiva de prueba de Walker imagen tomada de PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. NEGATIVO : En un resultado negativo no se observan en el papel fotográfico puntos rojos o rosas (ver Fig.9) se observa el papel sin ninguna alteración, hace suponer que el disparo pudo haber sido efectuado a una gran distancia por lo que no permitió el depósito de nitritos de la pólvora sobre la ropa. Figura. 9 Muestra negativa de prueba de Walker imagen tomada de PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 11 Examen microscópico En primer lugar las ropas se examinan microscópicamente para una indicación visible del disparo. Algunas cosas como quemaduras, desgarramientos, depósitos negros alrededor del orificio (humo y lubricantes), pólvora incombusta o parcialmente combusta, partículas metálicas, son factores que se utilizan en la determinación de las distancias. (Lázaro, O. 1997.) Después de que la(s) ropa(s) o ropas han sido examinadas microscópicamente y procesadas químicamente los disparos de prueba, son realizados a varias distancias de la ropa testigo. Hasta llegar a una distancia en la que los residuos no alcancen la ropa. De este modo la prenda resultante de cada una de las pruebas se procesan químicamente el patrón obtenido es comparado de acuerdo al tamaño, número y distribución con el patrón obtenido de la ropa de la victima la distancia a la cual el patrón testigo se asemeje más al patrón obtenido de la ropa de la victima, es la distancia aproximada a la cual fue hecho el disparo. La sensibilidad del Ac. Nitroso es de 0.01 microgramos dilución limite 1:5000000 es impórtame señalar que todas las ropas involucradas, deben ser remitidas al laboratorio. (Lázaro, O. 1997.) CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 12 PRUEBA DE HARRISON Objetivo: Técnica emplea para determinar si una persona ha realizado algún disparo con un arma de fuego (fulminante) y tiene la finalidad de detectar residuos de bario y plomo (proyectil) por medio de la prueba de Harrison. Introducción Al disparar un arma de fuego las manos de quien lo hace se quedan impregnadas de partículas de plomo desprendidas del proyectil, bario y antimonio provenientes del fulminante estas partículas se identifican mediante una reacción química esta reacción se lleva a cabo con rodizonato de sodio. (Lázaro, O. 1997.) MATERIAL: Telas (cabeza de indio sin apresto, pre lavada) Solución amortiguadora de tartratos Rodizonato de sodio 0.2 % HNO3 al 2% Microscopio MÉTODO � Limpiar con las telas impregnadas de HNO3 las zonas anatómicas más frecuentes de contacto con residuos de pólvora (ejemplo de ello son las manos). � Agregar dos gotas de buffer en cada fragmento de tela. � Adicionar dos gotas de rodizonato de sodio en cada tela. � Observar microscópicamente e interpretar los resultados. Esta prueba depende para su aserción de los siguientes factores: 1) Número de disparos hechos. 2) Tipo de arma. 3) Condición del arma. 4) Los disparos fueron en ambiente abierto o cerrado. CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 13 5) Tiempo en que transcurrieron los hechos a la toma de la muestra (máximo de 6 hrs.). 6) Maniobras de limpieza o sudoración. Los puntos antes mencionados son importantes porque de ello depende que la muestra obtenida presente compuestos o bien elementos tales como plomo, bario o antimonio los cuales son identificados por medio de la prueba de Harrison Fig. 10 Reacciones químicas en la prueba de Harrison COLORACIÓN ROJO ESCARLATA (Pb 2+) Rodizonato de sodio Rodizonato de plomo O O OO ONaONa O O OO O O Pb Pb 2++ pH=3 HNO3 + Na + Fig. 11 Reacción química en la prueba de Harrison en presencia de plomo (Lázaro, O. 1997.) CAPÍTULO 1. PRUEBAS FISICOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE ELEMENTOS POR ARMA DE FUEGO 14 COLORACIÓN ROSA MARRÓN (Ba 2+) Rodizonato de sodio Rodizonato de Bario O O OO ONaONa O O OO O O Ba Ba 2++ pH=3 HNO3 + Na + Fig. 12 Reacción química en la prueba de Harrison en presencia de Bario (Lázaro, O. 1997.) INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS POSITIVO . La presencia de puntos de color rosa marrón, nos indica la presencia de bario. Una coloración roja escarlata, nos revela la existencia de plomo. Puntos de ambos colores, sugieren la presencia de plomo y bario. (Lázaro, O. 1997.) NEGATIVO (ver Fig. 13) Cuando la coloración de la solución de rodizonato desaparece (naranja) sobre la tela al cabo de unos minutos (debido a que el rodizonato de sodio es fotosensible) y además los puntos coloridos antes mencionados no se aprecian, la prueba es negativa. (Lázaro, O. 1997.) Fig. 13 reacción negativa de rodizonato de sodio imagen tomada de PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 15 HEMATOLOGÍA Recolección y embalaje de una muestra sanguínea A) En el caso de encontrar sangre liquida en el lugar de los hechos, deberá tomarse con ayuda de una pipeta Pasteur o de un gotero y depositarla en un tubo de ensayo limpio y seco, al que deberá añadirse 1 ml de solución salina estéril por cada 5ml de sangre. (Franco, M. 1991.) B) Si no se encuentra sangre fresca, y en su lugar coágulos se tomarán estos con el extremo de un aplicador de madera y se colocarán en el interior de un tubo de ensayo, procediendo después como en el caso anterior. Fig 14. Embalaje de prendas imagen tomada de la PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. C) Si únicamente se localizaron manchas de sangre seca en objetos sólidos (ver fig14) se levanta con pequeños fragmentos de telablanca y limpia sin apresto, humedecidos con solución salina (O.85%). A esta tela que se coloca también en un tubo de ensayo, para su envío al laboratorio. (Franco, M. 1991.)Con otro fragmento de tela, preparado de la misma forma, se tomará una muestra de control del soporte no manchado con sangre. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 16 Cuando las manchas se encuentran sobre cualquier tipo de tela, se recortarán porciones representativas de la muestra, así como un trozo de la misma tela problema que no se encuentre contaminada con sangre. D) Si se trata de manchas sobre vegetales, estos se recortarán y se colocarán en el interior de un sobre una porción manchada del vegetal será también recogida en otro sobre, cuando la sangre que se encuentre sobre tierra o arena, deberá recolectarse tomando un trozo completo del soporte, el que se depositará cuidadosamente en una bolsa de plástico que será colocada en una caja de cartón. También se tomará una muestra de tierra sin sangre y se empacará por separado. (Franco, M. 1991.) E) Si la muestra problema se encuentra impregnada en cabellos, estos se tomarán con pinzas y se trasladarán al laboratorio dentro de pequeñas bolsas de plástico. Manchas de sangre presentes sobre el cuerpo de la víctima y de la que se sospecha no pudieran ser originadas por su propia sangre serán tomadas como se describió. Además se tomará sangre del cadáver con el fin de comparar la sangre del cadáver con las manchas. (Franco, M. 1991.) Todas las muestras tomadas deberán ser etiquetadas así: 1. Número de averiguación o de expediente. 2. Fecha y hora en que se levanto la evidencia 3. Sitio de donde se recolectó. 4. Naturaleza presunta del indicio. 5. Nombre del perito que realizó el levantamiento y embalaje. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 17 Reacción de Bencidina (Adler) Fundamento químico Las peroxidasas sanguíneas son catalasas, que como su nombre lo indica poseen actividad catalítica (enzimática) en las reacciones de oxidación ya que tienen la propiedad de descomponer el peróxido de hidrogeno produciendo la liberación de radicales oxidrilo. (Franco, M. 1991.) H 2O2 H2 O + O2 El grupo Hem de la hemoglobina posee esa actividad enzimática que puede catalizar la ruptura del peróxido de hidrogeno. Mientras no estén presentes otras sustancias orgánicas oxidantes, esta actividad de la hemoglobina que descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxigeno al reaccionar con la bencidina la oxidaran formando un compuesto de color intensamente azul. (Franco, M. 1991) La oxidación de la bencidina es utilizada como prueba presuntiva para la identificación de sangre, la técnica tiene una sensibilidad que permite identificar hasta diluciones de 1:300.000 a 1:500.000. Un resultado negativo excluye la presencia de sangre. BENCIDINA REDUCIDA BENCIDINA OXIDADA (COLOR AZUL) ΝΗ 2 ΝΗ 2 ΗΝ ΝΗ + Η 2Ο + Η b Fig. 15. Reacción de bencidina (Franco, M. 1991.) PREPARACIÓN DE REACTIVO: A) Solución de bencidina: Pesar 0.25g de bencidina y disolver en 175ml de etanol añadir de 5 a 10 gotas de ácido acético glacial, guarda en un frasco ámbar y se refrigera en tanto no se use. B) Peróxido de hidrógeno al 3%: Guardar en frasco gotero ámbar. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 18 METODO � Humedecer 1 hisopo con solución salina isotónica y frotarlo sobre la mancha problema, añadir al hisopo 1 o 2 gotas de bencidina, posteriormente agregar la misma cantidad de peróxido de hidrogeno al hisopo. Diagrama de flujo para la prueba Bencidina INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS POSITIVO. En caso positivo se observara una coloración azul NEGATIVO. En caso negativo no se observara ningún cambio de coloración. Humedecer 1 hisopo con solución salina isotónica y frotarlo sobre la mancha problema. Posteriormente añadir al hisopo 1 o 2 gotas de bencidina. Posteriormente añadir la misma cantidad de peróxido de hidrogeno al hisopo. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 19 REACCIÓN DE LA FENOLFTALEÍNA REDUCIDA (O DE KASTLE-MAYER) Fundamento químico: Esencialmente la rige el mismo principio que se describe para la reacción de Adler debido a la termo labilidad se a confirmado que todas las peroxidasas vegetales se inactivan por calentamiento a 100°C a esta misma temperatura las peroxidasas de origen animal son estables un periodo corto de calentamiento servirá para diferenciarlas, cabe señalar que las peroxidasas de las plantas reaccionan en un medio ácido, mas no lo hacen en un medio alcalino lo que permite una mayor confiabilidad de esta técnica. (Franco, M. 1991) Ο − Ο Ο Ο − ΟΗ Ζn − Η2Ο2 Ηb − Ο Ο Ο − Ο − ΟΗ Fig. 16 Reacción de la Fenolftaleína (Franco, M. 1991.) Fenolftaleína oxidada Fenolftaleína reducida (Rosa) (Incolora) PREPARACIÓN DE FENOFTALEINA: � La fenolftaleína debe ser reducida previamente a fenolftaleína incolora y en este reactivo por su labilidad debe ser guardado en un frasco ámbar. � Se trabaja en un medio alcalino � Se efectúa un calentamiento previo a 100°C por 1 minuto. Para lo cual se requieren los siguientes reactivos: Fenolftaleína………………………………….. 2g. Hidróxido de potasio......................................... 20gr CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 20 Agua destilada................................................. l00 ml Polvo de Zinc................................................... 20g. Disolver estas sustancias y colocarlas a reflujo con el polvo de zinc hasta completa decoloración, esta solución madre deberá guardarse en un frasco ámbar en refrigeración y deberá añadírsele polvo de zinc. Solución de trabajo diluir la solución madre en etanol en la proporción de 1:5: la que también deberá refrigerarse. Solución de agua oxigenada al 3%. Procedimiento: � Humedecer un hisopo con solución salina, frotar la muestra problema y pasarla a un tubo de ensayo con 2 ml solución salina, calentar por 1 min. a 100 0C. � Añadir unas gotas del reactivo esperar unos segundos y adicionar el agua oxigenada. Diagrama de flujo para la prueba de fenolftaleína Humedecer hisopo con solución salina isotónica y frotarlo sobre la mancha problema. Retirar el hisopo y adicionar 1 o 2 gotas de fenolftaleína. A un tubo de ensaye con 2 ml de solución salina, colocar el hisopo calentar por 1 min a 100 0C. En caso de ser positivo se observa una coloración rosa brillante CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 21 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS POSITIVO En caso de ser positivo se observa una coloración rosa brillante NEGATIVO En caso negativo no se observara ningún cambio de coloración. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 22 CRISTALES DE HEMINA O DE TEICHMAN La hemoglobina (ver Fig.17) se encuentra exclusivamente en las células rojas de la sangre, en donde su principal función es transportar al oxígeno desde los pulmones hasta los capilares en los tejidos. La hemoglobina A, la principal en los adultos, está compuesta de cuatro cadenas polipeptídicas (dos cadenas alfa y dos beta) que se mantienen unidas por medio de interacciones no covalentes.(Franco, M. 1991.) Fundamento químico: La hemoglobina cuando se trata con ácido acético se separa inmediatamente de las proteínas como fibrinógeno, globulinas alfa, beta y gama, albúmina y lipoproteínas, durante la hidrólisis la globulina se desnaturaliza. La oxidación del hierro del grupo Hem se efectúa más rápido en medio ácido que en medio alcalino. Si se encentra presente el halógeno inorgánico como el cloro, se formaran cristales insolubles de clorurode ferriprotoporfirina o hemina. El tetrámero de la hemoglobina puede ser considerado como dímero. Las dos cadenas de aminoácidos en cada uno de los dímeros, se mantienen unidas por medio de interacciones hidrofóbicas. Los residuos de aminoácidos hidrofóbicos, se localizan no sólo en el interior de la molécula, sino en una región de superficie de la molécula que hace contacto con la otra subunidad para formar al dímero (αβ). Enlaces iónicos y puentes de hidrógeno también ayudan a estabilizar a la unidad (αβ). Por el contrario, los dos dímeros están unidos débilmente, por medio de enlaces polares, de tal suerte que pueden separarse uno del otro. Estas interacciones débiles dan origen a diferentes posiciones relativas en la desoxi y oxihemoglobina. Fig. 17 Estructura de la molécula de hemoglobina (Estructura cuaternaria) http://es.wikipedia.org/wiki/Grupo_sangu%C3%ADneo. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 23 Preparación del reactivo de Teichman: Cloruro de sodio ……………….. 0.1gr Bromuro de potasio …………... 0.1gr Yoduro de potasio ……………..0.1gr Ác. Acético c.b.p. …………….100ml Método 1. Colocar la muestra problema en el centro de una laminilla de vidrio y poner encima de ella un cubre objetos. 2. Deslizar entre lámina y laminilla, por capilaridad, unas gotas del reactivo de Teichmann. 3. Calentar lentamente y a baja temperatura la laminilla hasta evaporación. 4. Dejar enfriar y observar al microscopio Diagrama de flujo para la prueba TEICHMAN INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS POSITIVO En caso de ser positivo se observan cristales romboidales de color café oscuro. NEGATIVO En caso negativo no se observara presencia alguna de cristales. Colocar la muestra problema en el centro de un portaobjetos y un cubre objetos. Colocar unas gotas del reactivo de Teichmann Calentar lentamente a baja temperatura la laminilla hasta evaporación y observar. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 24 DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO La determinación del grupo sanguíneo puede ser de mucha importancia en la investigación criminalística ya que de una mancha de sangre recogida del lugar de los hechos se puede señalar si es sangre de la victima o bien del victimario. (Lázaro, O. 1997.) Sistema ABO. El sistema ABO fué descubierto por Karl Landsteiner en 1901, que estudió los anticuerpos encontrados en el plasma sanguíneo a través de un microscopio, definiendo tres grupos sanguíneos A,B y O. En el año 1907 Decastrello y Sturli definieron el cuarto grupo AB. Los grupos sanguíneos están definidos por antígenos. Estos son la cadena de hidrocarburos, glicoproteínas de la membrana de algunos eritrocitos en la sangre. El grupo O posee el antígeno H, El grupo A posee el antígeno A, el grupo b el antígeno B y el grupo AB posee ambos, aunque generalmente no se menciona el antígeno del grupo O. (Franco, M. 1991).Los grupos sanguíneos se distinguen por la glicoproteína unida a un azúcar diferente (ver Fig. 18). El Antígeno H (Grupo O) está compuesto por una galactosa, una acetilglucosa, una galactosa y una fructosa. El Antígeno A (grupo A) está compuesta por el antígeno H y en la galactosa más externa, tiene unida una acetilgalactosa. El antígeno B (grupo B), tiene la misma base del antígeno H, pero tiene unida otra galactosa en la galactosa del final. El grupo AB, tiene antígenos A y B alternados a lo largo en su membrana y no posee antígenos H. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 25 Fig. 18 Estructura de antígenos.Bohinski,(1991). (Bioquímica. Quinta Edición, Wilmington, EEUU.) Los distintos grupos de sangre, presentan anticuerpos en el plasma sanguíneo. En la mayoría de los casos, los neonatos no poseen anticuerpos en el plasma, ya que estos se producen con el contacto de antígenos similares al A, B y H en los primeros años de vida. El grupo A, tendrá anticuerpos B. El grupo B, tendrá anticuerpos A. El grupo O, tendrá anticuerpos A y B y el grupo AB no poseerá anticuerpos (ver Fig.19). En el caso de las transfusiones de sangre, si se mezclan dos tipos de sangre de igual grupo lo más probable es que no suceda nada, en cambio si se exponen dos tipos de sangre con grupos diferentes, pueden ocurrir diversas complicaciones asociadas a una respuesta inmune del organismo contra las glicoproteínas de la superficie del eritrocito. (Ver http://es.wikipedia.org/wiki/Grupo_sangu%C3%ADneo). CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 26 Figura 19. Imagen de la presencia de antígeno en el eritrocito http://es.wikipedia.org/wiki/Grupo_sangu%C3%ADneo MATERIAL Centrifuga calibrada a 3500rpm 10 Tubos de ensaye Pipetas Pasteur y bulbos de goma Portaobjetos o placas hemoclasificadoras Solución salina isotónica fresca y estéril Suero hemoclasificador: • Anti A • Anti B, • Lecitina anti H, • Anti A1, • Anti RhoD, • Anti M, anti N. A) En sangre fresca: Existen diversas formas de obtención de una muestra sanguínea las cuales son: • Personas vivas • Cadáveres • Coágulos CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 27 En personas vivas se recomienda tomar 2.5ml de sangre venosa en una jeringa estéril y seca. 1. Separar el suero por centrifugación 2. Realizar una suspensión del paquete globular al 2% con solución salina. En cadáveres se toman 5ml de sangre de una arteria, vaso, o bien de la cavidad cardiaca teniendo cuidado de que no se contamine con tejido adiposo del propio cadáver. 1. Separar el paquete globular por centrifugación 2. Lavar el paquete globular 3 veces con solución salina fría, fresca, y estéril. 3. Realizar una suspensión del paquete globular al 2% con solución salina. Cuando se tiene un coágulo se recomienda exprimir cuidadosamente el coagulo contra las paredes de un tubo de ensayo con ayuda de un aplicador de madera. 1. Lavar lo extraído durante 3 ocasiones con solución salina 2. Con los eritrocitos lavados realizar suspensiones al 2% y 5 % MÉTODO 1. Preparar una suspensión de eritrocitos dependiendo de la técnica que se emplee en solución salina. (Lázaro, O. 1997.) 2. Colocar una gota de antisuero en cada lugar predestinado y ya marcado añadir una gota de la suspensión de eritrocitos ya preparada. 3. Mezclar homogéneamente los tubos con la preparación o bien si se utiliza una placa mantener un movimiento oscilatorio constante durante 30 segundos. 4. Agitar suavemente para desprender el botón, en caso del tubo y se observa la presencia o ausencia de aglutinación en ambas técnicas. Figura 20. Aglutinación imagen tomada de la PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 28 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS POSITIVO � Si se observa aglutinación donde se coloco anti-A, la sangre corresponderá al grupo A. � Si se observa aglutinación donde se coloco anti-B, la sangre corresponderá al grupo B. � Si se observa aglutinación en los 2 anteriores, la sangre corresponderá al grupo AB. � Si no se observa aglutinación en los 2 anteriores, la sangre corresponderá al grupo O (ver figura 20) y se observa aglutinación donde colocamos el anti H. Fig. 21. Determinación de grupo sanguíneo de acuerdo a la aglutinación http://es.wikipedia.org/wiki/Grupo_sangu%C3%ADneo Si se observa aglutinación donde se coloco anti-A y anti A1, la sangre corresponderá al grupo A1. Fig. 22. Determinación del grupo O y RH (+) imagen tomada de PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 29 Si se observa aglutinación donde se coloco anti-A y anti H, la sangre corresponderá al grupo A2 Si se observa aglutinación donde se coloco anti RhoD , la sangre sera Rh (+) positivo y viceversa. Fig. 18. Componentes de los eritrocitos de los grupos sanguíneos http://es.wikipedia.org/wiki/Grupo_sangu%C3%ADneoB) En sangre seca En manchas de sangre seca, las células están rotas y por lo tanto las pruebas de aglutinación directa no son factibles, sin embargo los antígenos ABO no se desnaturalizan tan rápidamente por la sequedad durante algún tiempo incluso meses conservan la capacidad de combinarse con anticuerpos específicos. La formación de estos complejos antígeno-anticuerpo se presenta debido a la detección del antígeno en el estroma de las células rojas en manchas de sangre seca. Cuando las muestras de sangre seca se retienen sobre un buen soporte como son fibras textiles las partículas allí adheridas conservan eficientemente el material antigénico; la técnica de absorción-elución tiene como fundamento un primer proceso de absorción especifica entre la mancha problema y un anticuerpo homologo después de que la absorción es completa y su anticuerpo homologo, después de que existe una absorción completa el excedente de anticuerpo se elimina por medio de lavados con solución salina fría. El complejo antígeno-anticuerpo se disocia por calentamiento a 56°C. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 30 El anticuerpo expuesto en contacto con eritrocitos lavados de propiedades antigénicas conocidas finalmente la aglutinación indica la presencia de un antígeno de la misma especificidad que el de las células utilizadas como testigo conocido. Esta técnica es la mas actualmente utilizada para la determinación del grupo ABO en manchas de sangre seca también es utilizado para el sistema MN es un poco mas difícil de determinar debido a sus antígenos inespecíficos. (Franco, M. 1991) MÉTODO � Impregnar con sangre problema, 4 fragmentos de tela de 3 mm2 . � Cuando la muestras no se encuentre sobre tela, absorberla con solución salina en pequeños trozos de algodón estéril. TABLA # 1. Determinación de grupo sanguíneo (Franco, M. 1991) Muestra problema Testigo Control o blanco Anti A Anti B Anti AB Anti H 1. Fijar las manchas de sangre impregnadas en la tela, cubriéndolas con metanol por un tiempo de 15min, posteriormente se procede a eliminarlo. 2. Agregar a cada tubo de la hilera anti A, 2 gotas de suero anti A y así respectivamente el antisuero que corresponda a cada línea. 3. Dejar en refrigeración durante toda la noche a 4 0C 4. Lavar con solución salina hasta obtener una solución clara e incolora. 5. Colocar los tubos en baño María a 56 ºC durante 10 min. 6. Retirar los trozos de tela con aplicadores de madera, diferente para cada tubo. 7. Agregar 2 gotas de glóbulos lavados al 2% del grupo A, del grupo B a los tubos de la hilera B, del grupo AB a los tubos de la hilera AB, y del grupo O a los tubos de la hilera H (problema, control, testigo tabla No.1). 8. Centrifugar a 3500 rpm por 30segundos. 9. Observar si existe o no aglutinación. CAPÍTULO 2. HEMATOLOGÍA FORENSE 31 INTERPRETACION DE RESULTADOS Si se observa aglutinación donde se coloco anti-A, la sangre corresponderá al grupo A esto indica que la sangre tiene el antígeno A por lo que pertenece al grupo A. Si se observa aglutinación donde se coloco anti-B, la sangre corresponderá al grupo B esto indica que la sangre tiene el antígeno B por lo que pertenece al grupo B. Al observa aglutinación en los 2 anteriores, tanto en el tubo que tiene anti-A y anti-B la sangre corresponderá al grupo AB. Si no se observa aglutinación en los 2 anteriores, la sangre corresponderá al grupo O. CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 32 Toxicología forense para la determinación de cocaína. COCAÍNA Es una droga estimulante que produce un poderoso efecto en el centro cerebral. Se le extrae de un arbusto que crece en abundancia especialmente en Perú y Bolivia. Los indígenas de estos países la han usado desde tiempos inmemorables para aumentar su resistencia en contra de la fatiga, en especial al trabajar en lugares de mucha altitud. Produce euforia o sensación de bienestar y satisfacción; el que la usa obtiene gran poder y se considera capaz de hacer frente a cualquier problema, siente una enorme energía y no se cansa, puede mantenerse despierto o trabajar durante largo tiempo. (Lázaro, O. 1997.) Hay una dilatación de las pupilas, elevación del pulso y temperatura. El tiempo de duración varía depende la forma de administración si se inhala en forma de polvo, el efecto dura de 20 a 40 minutos; inyectada dura de 10 a 15 minutos, pero se experimenta una sensación sumamente intensa. Como el efecto es transitorio, el usuario debe de seguir administrándose la cocaína cada 30, 40 o 50 minutos para continuar experimentando la sensación agradable. La cocaína es vasoconstrictora y debido a eso, se han dado casos de usuarios crónicos en que se ha producido una perforación del tabique nasal, flemas, al contraerse los vasos sanguíneos, aumenta la presión de la sangre y los latidos del corazón. Ocasionalmente la cocaína ha producido muerte repentina. El uso de la cocaína tiende aumentar la agresividad del usuario, si una persona se administra cocaína varias veces al día, suele experimentar sentimiento de paranoia, sospecha y hostilidad, que pueden desencadenar actos de violencia. (Lázaro, O. 1997.) El "crack" o "rock" es una forma de la cocaína que puede fumarse y que produce sensaciones más intensas de placer. Se extrae de la cocaína por medio de un proceso químico, a este extracto se le llama base y se le mezcla con Na HCO3 y agua para hacer una pasta, la que entonces se corta en pedazos que se asemejan al jabón o a piedrecillas blancuzcas. Los traficantes adicionan lidocaína, procaina y otros anestésicos; estos aditivos tienen varios efectos, todos convenientes para el traficante porque aumenta el éxtasis del adicto. Otros tales como la maicena o incluso laxantes, se añaden para aumentar e1 volumen y no tienen ningún efecto sobre la potencia del producto. Pero CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 33 otros, como la novocaína, imitan los efectos de la cocaína de manera que el adicto piensa que esta utilizando la droga más pura de lo que realmente es. Muchas personas piensan que el "crack" es más puro debido a lo intenso del éxtasis que provoca, pero este efecto se debe únicamente al método que se utiliza para consumir la droga, en este caso fumándola. (Lázaro, O. 1997.) Muchos síntomas son evidentes para cualquiera que haya ingerido cocaína por cualquiera de sus vías de administración. Quienes la aspiran por la nariz, perciben inmediatamente la irritación de la mucosa de dicho órgano, situación que inmediatamente desemboca en una descarga permanente de moco. Los fumadores de cocaína no tardan en desarrollar ronquera y tos crónicas, con el probable efecto de que sus pulmones pierden parte de su capacidad para procesar gases, con la consiguiente sensación de "falta de aliento", Entre los usuarios de cocaína inyectada, se observa un incremento importante de incidencia de hepatitis y también, aunque en menor grado de otras enfermedades. Existen diversas etapas psicológicas para el cocainómano, cuya progresión y secuencia dependan de la frecuencia y cantidad de la ingestión. En primer lugar esta la fase eufórica que dura alrededor de 20 minutos (entre 15 y 30 minutos). Esta es la etapa espectacular, carismática y la responsable de buena parte de su publicidad y popularidad. (Lázaro, O. 1997.) En segundo lugar, tras esta explosión de actividad, de exacerbamiento de todo lo que el sujeto siente como bueno y positivo, sobreviene una etapa de depresión (bajón) con sensación de agotamiento y vacío. Son comunes las alucinaciones y en usuarios crónicos, pueden producirse episodios sicóticos. Si las ingestiones han sido repetidas y la sesión muy prolongada, es posible que esta etapa conduzca a una tercera, de laxitud total y una serie de trastornos psíquicosque van mucho más allá del fenómeno alucinatorio. Estos cuadros son consecuentes a la ingestión de la droga; pero de manera paralela, se va configurando un cuarto estado o etapa, que es crónico y persiste con independencia de si el individuo ha tomado o no droga en ese momento. (Lázaro, O. 1997.) Dicho cuadro crónico se establece varias semanas (entre 4 y 8) después de iniciar la ingestión regular de cocaína (la vía de administración determinará la relativa rapidez de la instalación de este cuadro crónico). Se caracteriza por irritabilidad, depresión CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 34 crónica y los comienzos de un estado paranoico. El adicto comienza alimentar sospechas respecto a las personas que lo rodean, de manera especial de las más allegadas e imaginar complicados complots en su contra. Otros síntomas relativamente frecuentes son depresión del impulso sexual en varones y excitación en mujeres, lagunas mentales y ataques súbitos de pánico sin causa aparente. (Lázaro, O. 1997.) El síndrome de abstinencia que presentan se caracteriza por: 1) Humor disforico 2) Letargo y fatiga 3) Enlentecimiento o agitación psicomotriz deseo de consumir cocaína 4) Aumento del apetito 5) Insomnio o hipersomnia 6) Sueños extraños o desagradables 7) El adicto cree tener gusanos que le recorren la piel Nombres populares de la cocaína a) coca e) pepsi-cola b) nieve f) cocada c) pericazo g) coco d) coca-cola h) talco La cocaína se absorbe desde todos los sitios de aplicación incluyendo las membranas mucosas y la mucosa gastrointestinal. La absorción aumenta en presencia de inflamación y los efectos sistémicos de la droga pueden así aumentar marcadamente; por ejemplo, esto puede ocurrir si la cocaína se usa en cistoqrafía cuando la vejiga está inflamada. Los patrones de velocidad de excreción varían con el modo de administración y de una persona a otra. La cocaína se metaboliza completamente, principalmente en el hígado; el 1% se excreta intacta en la orina. CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 35 La cocaína se elimina en forma de benzoilecgonina, que es el metabolito principal de la cocaína; también se excreta en una menor proporción en forma de ecgonina y su ester metílico. (Lázaro, O. 1997.) Preparación de reactivos: BOUCHARDAT: Se necesita una solución Iodada disolver 2gr de iodo y 3gr de ioduro de potasio en 100ml de agua. TIOCIANATO DE COBALTO: Disolver 6.8gr de cloruro de cobalto y 4.3gr de Tiocianato de amonio en agua hasta los 100ml. DETERMINACION DE COCAINA A) ESPECTROFOTOMETRIA DE LUZ INFRARROJA A la muestra se realiza una extracción clorofórmica-alcalina esto se realiza tomando una pequeña cantidad de la muestra a investigar y se adiciona una pequeña cantidad de cloroformo, se evapora casi a sequedad y se aplica en forma de película en la pastilla de KBr y se procede a leer la muestra en el equipo de infrarrojo. Figura24. Equipo de infrarrojo para determinación de cocaína imagen tomada en PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 36 ANÁLISIS QUÍMICO PARA COCAÍNA B) Reacciones químicas con desarrollo de color para la identificación de cocaína en su forma física. 1) Bouchardat: En un tubo de ensaye adicionar una pequeña cantidad de la muestra de interés y adicionar de 1 a 2 ml de la solución de bouchardart si se observa un precipitado café nos indica la presencia de una base Alcaloide (precipitado complejo yodo-alcaloide). Figura. 25. Reactivo de Bouchardat para determinación de drogas imagen tomada de PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 37 2) Tiocianato de cobalto: En un tubo de ensaye adicionar una pequeña cantidad de la muestra de interés y adicionar de 0.5 a 1.0 ml de la solución de tiocianato de cobalto. Una coloración azul nos indica la presencia de cainas que son las estructuras base de la cocaína. Figura26. Reactivo de Tiocianato de cobalto y prueba positiva para determinación de cainas imagen tomada de PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. 3) Nitrato de plata 1.5%.- Un precipitado color blanco nos Índica la presencia de cloruros. . Figura 27. Reactivo de Nitrato de plata 1.5% y prueba positiva para determinación de cloruros imagen tomada de PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 38 C) Identificación de metabolitos de cocaína 1) Inmunoensayo competitivo.- Identifica el metabolito principal de la cocaína en orina y suero la benzoilecgonina (ver Fig.28 y Fig.29). Figura 28. Muestra biológica (orina) para determinación de drogas imagen tomada de PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. Figura 29. Muestra biológica (sangre) para determinación de drogas imagen tomada de la PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 39 El Análisis del metabolito de la cocaína se realiza con el equipo denominado Emit que es un inmunoanlisis enzimático homogéneo destinado para usarse en el análisis cualitativo y semicuantitativo de benzoilecgonina (metabolito de la cocaína) en la orina humana. Este análisis emplea un valor límite de 150 ng/mL o 300 ng/mL para distinguir las muestras positivas de las negativas. Figura 30. Equipo EMIT para determinación de drogas imagen tomada de PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. El Análisis del metabolito de la cocaína por el equipo Emit (ver Fig.30) proporciona un resultado analítico que es preliminar solamente. Debe usarse un método químico alternativo más específico para obtener un resultado analítico de confirmación. El método de confirmación preferido es la cromatografía de gas acoplada a la espectrometría de masas GC/MSp(ver Fig.31), ya que este método analítico permite precisar una estructura base del compuesto en cuestión puede identificar una pequeña cantidad de la estructura que es constante y se encuentra presente siempre como base de la estructura de un alcaloide para este elemento en investigación. Deben aplicarse las consideraciones clínicas apropiadas y un criterio profesional ante cualquier resultado de pruebas de fármacos de abuso, en particular cuando se utilicen resultados positivos preliminares. (Lázaro, O. 1997.) CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 40 Figura. 31. Equipo cromatógrafo de gases acoplado a masas GC/MSp para determinación de drogas imagen tomada de PGJDF en la coordinación general de servicios periciales 2009. Resumen y explicación del análisis La cocaína es un estimulante del sistema nervioso central que se extrae de una planta, la coca. Usada como droga de abuso, la cocaína se toma en una serie de maneras, que incluyen su inhalación y su inyección intravenosa. Su forma básica puede turnarse, en una forma comúnmente conocida como "crack". La cocaína se absorbe rápidamente, especialmente si se fuma. Aunque todas las formas pueden causar adicción el "crack" tiene altas probabilidades de causar dependencias debido a su efecto más rápido e intenso sobre la persona. Los patrones de velocidad de excreción varían con el modo de administración y de una persona a otra. La cocaína se metaboliza casi completamente en el hígado; sólo el 1% se excreta intacta en la orina. La mayoría de la cocaína se elimina en forma de benzoilecgonina, que es el metabolito principal de la cocaína. También se excreta en una menor proporción en forma de ecgonina y su éster metílico. Los metabolitos son detestables en la orina hasta dos díasdespués de usar la droga la benzoilecgonina puede descubrirse en la orina cuatro horas después de la inhalación de la cocaína. (Lázaro, O. 1997.) El Análisis del metabolito de la cocaína por el equipo llamado Emit detecta la benzoilecgonina, que es el metabolito principal de la cocaína, en la orina humana. No se han obtenido resultados positivos en muestras que contienen otros compuestos sin relación estructural con la benzoilecgonina. CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 41 Las concentraciones límite para distinguir entre muestras positivas y negativas son 150 ng/mL y 300 ng/ml. Entre los métodos utilizados en el pasado para detectar la benzoilecgonina en los líquidos biológicos se encuentran la cromatografía líquida de alto rendimiento, la cromatografía de gases y líquidos, y los inmunoanálisis enzimáticos. Es posible que otras técnicas confirmatorias sean adecuadas para el análisis de algunas drogas de abuso, la GC/MS se acepta generalmente como una técnica de confirmación válida para todas las drogas, ya que permite resultados de máxima confiabilidad. (Lázaro, O. 1997.) Principio del equipo EMIT El análisis realizado en el quipo Emit es una técnica de inmunoanálisis enzimático homogéneo (ver Fig.32) utilizada para analizar ciertos compuestos en orina y suero humano. El análisis se basa en la competencia entre la droga en la muestra en este caso la benzoilecgonina y la droga marcada con la (G6P-DH) ya que estos compiten por los lugares de unión del anticuerpo. La actividad disminuye cuando la enzima se une al anticuerpo, en caso de que exista la presencia del metabolito de cocaína en la orina la benzoilecgonina este se une al anticuerpo y por lo tanto no habrá unión entre la enzima glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6P-DH) y el anticuerpo, ya que este anticuerpo estará unido al metabolito en cuestión, esto ocasiona un aumento en cuanto a la enzima (G6P-DH) y así la concentración de droga en la muestra puede medirse en base a la actividad enzimática. Competitivo Antígeno marcadoAntígeno marcadoAntígeno marcadoAntígeno marcado MuestraMuestraMuestraMuestra LavadoLavadoLavadoLavado SeñalSeñalSeñalSeñal [Ag][Ag][Ag][Ag] SeñalSeñalSeñalSeñal Figura 32. Inmunoensayo competitivo (http://es.wikipedia.org/wiki) CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 42 La enzima activa ose la que no se unió al anticuerpo por la presencia del metabolito de coca el cual se unió al anticuerpo, esta enzima (G6P-DH) transforma la (NAD) en NADH, lo que causa un cambio en la absorbancia que puede medirse espectrofotométricamente. La G6P-DH sérica endógena no interfiere porque la coenzima funciona sólo con la enzima bacteriana (de Leuconostoc mesenteroides) que se emplea en el análisis. (Lázaro, O. 1997.) CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 43 Toxicología forense para identificación de cannabis sativa l (marihuana). MARIGUANA Lo habitual es que la planta sea cortada, secada, picada e incorporada a los cigarrillos, un cigarrillo contiene 2% de THC (ver Fig. 3.2.1), el uso continúo de mariguana provoca un estado de dependencia psíquica, el cannabinoide más importantes es: Figura33. En este esquema se muestra de lado izquierdo un esbozo de la planta de mariguana y al lado derecho la estructura química del THC.(hh//:themedicalbiochemistrypage.org) La droga provoca una sensación temporal de bienestar y a veces causa alucinaciones y cambios de humor. En los individuos intoxicados por la droga se puede encontrar deterioro de sus capacidades físicas y mentales y lesiones en el cerebro. Después de la inhalación del humo, a los pocos minutos producen un estado de borrachera que puede compararse a la del alcohol etílico. Hay exaltación de la fantasía y una pérdida de la percepción de los sentidos del tiempo y del espacio. El contenido de las alucinaciones después de dosis mayores, depende de la estructuración de la propia personalidad del adicto. En general, provoca una sobrevaloración de la capacidad de rendimiento, con el consiguiente sentido de exaltación del yo y un bienestar determinado, dependiente de una autoexcitación. Inmediatamente se desarrolla un estado depresivo. (Lázaro, O. 1997.) CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 44 Si el consumo es continuo provoca una merma del interés general por las cosas y las personas, la consecuencia del efecto lesivo de la droga sobre el cerebro, es el delirio y la manía exaltada. Los efectos físicos inmediatos que ocasiona la marihuana son: 1) Enrojecimiento de los ojos. 2) Taquicardia. 3) Sequedad de boca y garganta. 4) Tos. 5) Ansiedad o agitación. 6) Enlentecimiento temporal. 7) Deterioro de la atención. 8) Juicio alterado. 9) Euforia y desinhibición. Entre los efectos psíquicos, las reacciones más típicas son: 1) Distorsión del tiempo y espacio. 2) Lapsos de pérdida de memoria. 3) Pérdida del control de la emociones (llora y ríe en forma anormal). 4) Pérdida de la facultad para fijarse en pequeños detalles. 5) Reacciones psicóticas. 6) Alucinaciones. 7) Pánico. 8) Paranoia CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 45 Algunos adictos presentan instintos agresivos y han llegado a la violencia e incluso a cometer serios delitos. La droga es retenida por el organismo hasta una semana o más A largo plazo, el fumador habitual de marihuana pierde la motivación interior para llevar una vida normal y constructiva pierde el interés en el trabajo, las ocupaciones intelectuales y otras tareas útiles a la sociedad. La marihuana desinhibe, por lo que el fumador hace cosas indebidas que no sería capaz de hacer sin haberse administrado la droga, como exhibicionismo sexual y comercio sexual. (Lázaro, O. 1997.) Se estima que aún fumando con máxima eficiencia no se absorbe más del 50% del delta 9-THC de un cigarrillo de marihuana. De este modo, un cigarrillo de 1 gr que contiene un 1% de delta 9-THC llevara como máximo 5 mg a los pulmones; los efectos farmacológicos se producen después de empezar a fumar y las concentraciones plasmáticas llegan al máximo en 10 o 30 minutos; si no fuma más, los efectos duran pocas veces de 2 a 3 horas. (Lázaro, O. 1997.) Después de la administración oral, los efectos se manifiestan de media a una hora, los efectos máximos pueden reaparecer en la segunda o tercer hora y tienen buena correlación con las concentraciones plasmáticas. Los efectos pueden persistir de tres a cinco horas, aunque la absorción gastrointestinal es casi completa, el delta 9-THC es aproximadamente tres veces más potente fumado que ingerido. El delta 9-THC es convertido rápidamente en un metabolito activo, el 11-hidroxi-delta 9-THC, que produce efectos idénticos al compuesto original y a su vez se convierte en un metabolito inactivo más polar, el 8,11-dihidroxi-THC que es excretado por orina y heces. Muy poco delta 9-THC no metabolizado se encuentra en la orina; después de llegar al máximo las concentraciones plasmática de delta 9-THC y del 11-hidroxi-delta 9-THC disminuyen rápidamente al principio (vida media en minutos). Reflejando la redistribución de estos compuestos lipofilicos en los compuestos ricos en lípidos, incluyendo el SNC. Trazas de delta 9-THC y sus metabolitos persisten en el plasma humano durante varios días; el consumo de dosis orales repetidas de delta 9-THC durante varios días o fumar diariamente durante varias semanas, no parecen producir efectos acumulativos. Los fumadores crónicos de marihuana metabolizan más rápidamente el delta 9-THC que los no fumadores. (Lázaro, O. 1997.) CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 46 El síndrome de abstinencia comienza a las pocas horas después de la supresión de la droga y se caracteriza por: 1)Irritabilidad 2) Inquietud 3) Nerviosismo 4) Pérdida del peso 5) Insomnio 6) Temblores NOMBRES POPULARES DE LA MARIHUANA a) Mota g) Mostaza b) Café h) Mora c) Grifa i) Toque d) Verba J) Epazote e) La verde k) Cannabis NOMBRES POPULARES DE LOS CIGARRILLOS DE MARIHUANA Canuto, Chicharrra, Chucho, Horro, Pito, Tabaco, Fino, Fajuto. Petardo El consumidor de marihuana suele mostrarse histérico, hablando rápidamente y en tono elevado, en otras ocasiones representa un estado de sopor y somnolencia. Suelen tener cigarrillos de marihuana en papel de doble espe-sor de color crema o marrón. De tamaño menor que un cigarrillo corriente, con el papel torcido o doblado hacia atrás en ambos extremos, siendo de color más verdoso que el tabaco ordinario. El olor que la sustancia despide es similar al del cáñamo, se impregna en las ropas y el aliento. (Lázaro, O. 1997.) CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 47 Preparación de soluciones: Duquenois: Disolver 2 gr de vainilla y 0.3 de acetaldehído en 100ml de Etanol p-dimetllaminobenzaldehído: Disolver 0.5gr de p-dimetllaminobenzaldehído en 50ml de una mezcla de 60 ml de etanol y 40ml de acido sulfúrico concentrado. ANÁLISIS QUÍMICO MARIHUANA a) Reacciones químicas con desarrollo de color para la determinación de mariguana en su forma física. 1) Duquenois: un cambio de color a azul-violeta o azul nos Indica la existencia de cannabis. 2) p-dimetllaminobenzaldehído: los cannabinoles reaccionan dando un color rojo que cambia a violeta. b) OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE TRICOMAS Figura.34. Tricomas (hh//:themedicalbiochemistrypage.org/spanish/glycoproteins.) C) EMIT (Inmunoensayo).- Detecta el 11-9-THC-ácido carboxílico, que es el principal metabolito del delta 9-THC, en la orina humana. Además detecta los siguientes metabolitos; 1) 8-beta-11-dihidroxi-delta 9-THC 2) 8-beta-hidroxi-delta 9-THC 3) 11-hidroxi-delta 8-THC 4) 11-hldroxi-delta 9-THC CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 48 Toxicología Forense Para la Determinación de Benzodiacepinas. BENZODIACEPINAS Son un grupo de fármacos relativamente extensos con variedades de efectos e indicaciones. Las benzodiacepinas se encuentran formadas por una estructura común para ellas a las que se les agregan diferentes radicales; Esta estructura común se une por un anillo bencénico unido a otra diacepina de siete miembros. Casi todas las benzodiacepinas tienen una sustitución 5-arilo en el segundo anillo bencénico y un anillo 1,4-diasepina. Todo ello redunda en las modificaciones de la actividad principal e incluso en la mayor potencia del fármaco. Así los grupos aceptores de electrones en posición dos en el segundo anillo bencénico, aumenta la potencia del fármaco, mientras que los sustituyentes en cualquier otro lugar disminuyen la efectividad. . (Lázaro, O. 1997.) Algunos efectos son: � Incoordinación motora y agresividad. � Deterioro de atención y confusión. CLONASEPAM Benzodiacepina de acción prolongada, posee una vida media de eliminación de 20 a 40 horas, se metaboliza en el hígado en un 98% originando metabolitos activos como el 7-aminoclonacepam. Posteriormente se elimina por vía renal en forma metabolizada en un 49 a 69% y solo una cantidad menor como clonacepam (0.5%) sin metabolizar en 24 horas. (Lázaro, O. 1997.) CLORACEPATO Benzodiacepina de acción prolongada. Se adsorbe bien por vía oral y de forma relativamente rápida; en un tubo digestivo sufre una descarboxilacion, transformándose en nordiacepam. El cloracepato es relativamente estable a un pH de 7.4 o más, pero es descarboxilado rápidamente a nordiacepam. (Lázaro, O. 1997.) CLORDIACEPOXIDO Benzodiacepina de acción prolongada, su acción comienza entre los 15-45 minutos después de su administración oral y tras 15-30 minutos después de su administración intramuscular. Tiene una vida media de eliminación de 5-30 horas; CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 49 posee al menos cuatro metobolitos activos tales como el norclordiacepoxido, el cual es llamado demoxepam. Posteriormente es reducido a nordiacepam y a su vez es hidroxilado a oxacepam. El primer metabolito, el norclordiacepoxido tiene una vida media de 18 horas; el demoxepam tiene una vida media de 14-95 horas; el nordiacepam de 30 a 200 horas y el oxacepam de 5-15 horas. Se elimina principalmente por vía renal en forma de metabolitos y tan solo 1-2% como clordiacepoxido. . (Lázaro, O. 1997.) DIACEPAM Benzodiacepina de acción prolongada su acción comienza entre los 15-45 minutos después de su administración oral; alcanzando unos niveles máximos en sangre entre los 30 y 90 minutos. Se metaboliza en el hígado principalmente por metilación, dando como resultado varios metobolitos activos entre los que destacan nordiacepam con una vida media de 30 a 200 horas; temazepam con una vida media de de 9 a 12 horas y oxacepam con una vida media de 5 a 15 horas. Su eliminación es preferentemente renal en forma de metabolitos, encontrándose en orina un 33% de conjugados glucuronidos de oxacepam y un 20% de conjugados de nordiacepam, de 4- hidroxidiacepam y temacepam. . (Lázaro, O. 1997.) FLUNITRACEPAM Benzodiacepina de acción intermedia. La vida media de eliminación oscila entre las 15-30 horas. Se metaboliza en el hígado obteniendo un metabolito activo denominado desmetilflunitracepam. Se elimina fundamentalmente por vía renal; en orina se han identificado al menos once metabolitos. Menos de un 0.2% de la dosis se elimina por vía renal como flunitracepam. . (Lázaro, O. 1997.) LORACEPAM Benzodiacepina de acción corta. La acción comienza entre los 15-45 minutos después de su administración oral posee una vida media de eliminación de 9-22 horas. La metabolización se produce en el hígado por gloucuronoconjugasion de forma rápida, no teniendo metabolitos activos; la eliminación es fundamentalmente renal, eliminándose un 75% de la dosis como conjugado glucuronido durante un periodo de 15 días, otro 14% de la dosis se elimina por la misma vía. . (Lázaro, O. 1997.) CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 50 ANALISIS QUIMICOS A BENZODIACEPINAS A) Reacciones químicas con desarrollo de color para la identifición de benzodiacepinas en medicamentos 1) Formaldehido acidó sulfúrico.- Las benzodiacepinas dan un color rojo con excepción de bromacepam (naranja) y no hay reacción con clordiacepoxido. 2) Bratton-marsal.- Un color magenta nos indica que hay benzodiacepinas en orina. B) Espectrometría infrarroja. A las tabletas se les hace una extracción clorofórmica; a la fase clorofórmica se lleva a evaporación casi a sequedad; se aplica en forma de película en una pastilla de KBr y se produce a la lectura. C) Identificación de metabolitos de benzodiacepinas EMIT: Inmunoensayo este tipo de análisis detecta benzodiacepinas y sus metabolitos en orina humana este método mantiene el mismo principio que se emplea en la determinación de cocaína. CAPÍTULO 3. DROGAS DE ABUSO TOXICOLOGÍA FORENSE 51 Toxicología forense para la determinación de anfetaminas. ANFETAMINAS Las anfetaminas y sus derivados son estimulantes que fueron llamadas “píldoras de la felicidad” porque quitan tensiones, eliminan el cansancio, levantan el animo e incrementan el impulso. Por ello han sido empleadas en los estados de agotamiento, después de las enfermedades infecciosas y los trastornos circulatorios que causan fatiga, vértigo e incapacidad funcional. También frenan el apetito por lo que se han usado en numerosas dietas para adelgazar y reducir peso. Como estimulante del S.N.C se les emplea para combatir la depresión en enfermos psiquiátricos. El uso excesivo y sin vigilancia, estorba la acción normal de los protectores
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