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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
DOCTORADO EN CIENCIAS DE LA PRODUCCIÓN Y DE LA SALUD ANIMAL 
 
 
ESTUDIO IN VITRO SOBRE LA DIFERENCIACIÓN DE CÉLULAS 
MESENQUIMALES DE BOVINO HACIA LOS LINAJES MUSCULAR Y 
ADIPOSO, ASÍ COMO SU EFECTO EN EL METABOLISMO ENERGÉTICO 
 
 
T E S I S 
QUE PARA OPTAR POR EL GRADO DE 
DOCTOR EN CIENCIAS 
 
P R E S E N T A 
 
JESÚS JONATHAN RAMÍREZ ESPINOSA 
 
 
TUTOR 
 
DRA.MARÍA OFELIA MORA IZAGUIRRE 
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN 
 
MIEMBROS DEL COMITÉ TUTOR: 
 
DR. ENRIQUE PIÑA GARZA 
FACULTAD DE MEDICINA 
 
DR. ARMANDO SHIMADA MIYASAKA 
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN 
 
 
 
CUAUTITLÁN IZCALLI , ESTADO DE MÉXICO OCTUBRE 2015 
 
UNAM – Dirección General de Bibliotecas 
Tesis Digitales 
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fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo 
mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, 
reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el 
respectivo titular de los Derechos de Autor. 
 
 
 
2 
 
Dedicatorias 
A mis padres por apoyarme siempre en todo lo que he hecho sin cuestionarme. 
Amá, Apá los amo. 
A la familia en todas sus extensiones, hermanas, tios, primos, que con sus palabras de aliento me 
motivan a seguir adelante. 
A los que ya no estan pero siguen presentes. 
A la familia de destino, los amigos cercanos y lejanos, temporales o definitivos, a las buenas y 
malas influencias que te enseñan un poco más a vivir y disfrutar la vida. 
 
 
 
 
 
 
3 
 
Agradecimientos. 
A la Doctora Ofelia Mora por aceptarme como su estudiante y brindarme todo el apoyo y los 
regaños necesarios para culminar este trabajo. Ahora ya tengo una mamá académica. 
 
A los Doctores Armando Shimada y Enrique Piña por sus observaciones a lo largo de este trayecto, 
por sus consejos más allá de lo académico, pero sobre todo por sus humildad como seres humanos. 
A Laura González, MC Técnico académico del RuMen por todas sus enseñanzas, apoyarme en la 
realización de este proyecto y por su amistad. 
Al laboratorio de diferenciación neuronal y axogénesis (A-03) del Instituto de Neurobiología 
encabezado por el Dr. Alfredo Varela, por el apoyo brindado, tanto material como intelectual, para 
la realización de esta tesis. 
A los compañeros y amigos que vivieron conmigo esta etapa. La mejor de las suertes para todos 
ellos. 
A los miembros del jurado, Dra. Aurea Orozco, Dr Miguel Ángel Cornejo, Dr. Carlos Gutiérrez y 
MC Pablo Pérez-Gavilán por el tiempo que dedicaron a la revisión de este trabajo, así como por sus 
observaciones y aportaciones al mismo. 
A mi alma mater, la UNAM que me ha nutrido más de la mitad de mi vida y particularmente a la 
FES Cuautitlán por las enseñanzas adquiridas en ella, las oportunidades que me ha dado. 
A CONACyT por la beca otorgada y tener así el apoyo financiero para realizar mis estudios. 
 
4 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
“Los dos llegaron cojeando: Guy y el perrito más dócil que había 
nacido en el patio. Guy tenía una pierna vendada y el perrito una de 
las patitas envuelta en trapos. Los dos caminaban a saltos. El perrito 
gruñía – tal vez de dolor – y meneaba la cola – tal vez de 
agradecimiento. 
- Nos caímos Jacinto. 
- Ya lo veo, niño Guy. 
- Al perrito se le torció una patita. Ya se la compuse. 
- ¿Y tú? 
- Acércate. No se lo digas a nadie. Yo no tengo nada. Me vendé sólo 
para consolarlo 
 
CANEK 
ERMILO ABREU GÓMEZ 
5 
 
INDICE 
 Página 
 
RESUMEN 9 
ABSTRACT 10 
INDICE DE ABREVIATURAS 11 
1. INTRODUCCIÓN 14 
2. ANTECEDENTES 15 
Artículo. Células troncales mesenquimales: biología, caracterización y 
futuras aplicaciones en salud y producción de especies pecuarias. Parte I. 
Rosa M. Pérez-Serrano, Jesús J. Ramírez-Espinosa, Armando Shimada, 
Anaid Antaramian, Enrique Piña, Ofelia Mora 
15 
Artículo. Células troncales mesenquimales: biología, caracterización y 
futuras aplicaciones en salud y producción de especies domésticas y 
pecuarias. Parte II. Rosa M. Pérez-Serrano, Jesús J. Ramírez-Espinosa, 
Armando Shimada, Anaid Antaramian, Enrique Piña, Ofelia Mora. 
15 
Células troncales mesenquimales: biología, caracterización y futuras 
aplicaciones en salud y producción de especies pecuarias. Parte I. 
16 
 Resumen 16 
 Introducción 16 
 Biología 17 
 Caracterización 19 
 Capacidad de adhesión al plástico 19 
 Capacidad proliferativa 19 
 Detección de proteínas de superficie 20 
 Expresión de factores de transcripción 22 
 Multipotencialidad 23 
 Conclusiones 25 
 Literatura Citada 25 
6 
 
Artículo. Células troncales mesenquimales: biología, caracterización y 
futuras aplicaciones en salud y producción de especies domésticas y 
pecuarias. Parte II. 
28 
 Resumen 28 
 Introducción 28 
 Caracterización de células troncales mesenquimales de especies 
domésticas 
29 
 Caninos 29 
 Felinos 29 
 Equinos 30 
 Porcinos 30 
 Ovinos y caprinos 31 
 Bovinos 31 
 Aves 32 
 Aplicaciones de las CTM de MO en medicina veterinaria y zootecnia 33 
 Terapéutica 33 
 Producción pecuaria 34 
 Desarrollo y metabolismo de músculo y tejido adiposo 34 
Reproducción, transferencia nuclear, tecnologías de ADN 
recombinante y transgénicos. 
35 
 Producción de carne in vitro 36 
 Conclusiones 37 
 Literatura citada 37 
2. HIPÓTESIS 41 
3. OBJETIVOS 42 
 3.1 Objetivo General 42 
 3. 2Objetivos específicos 42 
4 MATERIAL, MÉTODOS Y RESULTADOS. 43 
Artículo. Bovine (Bos taurus) bone marrow mesenchymal cells 
differentiation to adipogenic and myogenic lineages. Jesús Jonathan 
43 
7 
 
Ramírez-Espinosa, Laura González-Dávalos, Armando Shimada, Enrique 
Piña, Alfredo Varela-Echavarría, y Ofelia Mora. 
 Abstract 47 
 Abbreviations used in this paper 48 
 Introduction 49 
 Material and methods 50 
 Cell isolation, culture, and passaging. 50 
 RNA Isolation 51 
 cDNA synthesis 51 
 Real time-PCR 52 
Experiment 1: Proliferation capacity, mesenchymal stem cell marker 
assessment, and induction of adipogenic and myogenic lineages. 
53 
 Proliferation capacity 53 
 Expression of MSC markers 54 
 Adipogenic differentiation 54 
 Myogenic differentiation 55 
Experiment 2: Enhancement of adipogenic and myogenic 
differentiation of bovine bone marrow-derived MSC and changes in 
expression of genes related to energy metabolism. 
56 
 Adipogenic differentiation 56 
 Myogenic differentiation 56 
 Statistical analysis 57 
 Results 58 
 Experiment 1 58 
 Proliferation capacity 58 
 Expression of MSC markers 58 
 Adipogenic differentiation 58 
 Myogenic differentiation 59 
 Experiment 2 60 
 Effect of PPAR agonists on adipogenic differentiation 60 
8 
 
 Effect of PPAR agonists on myogenic differentiation 61 
 Discussion 62 
 Differentiation improvement 65 
 Effect on adipogenesis 65 
 Effect on myogenesis 67 
 Effects of PPAR agonists on energy metabolism 69 
 Conclusions 71 
 Acknowledgements 72 
 References 72 
 Figure legends 80 
 Tables 83 
 Figures 88 
5. DISCUSIÓN 93 
6. CONCLUSIONES 1067. LITERATURA CITADA 107 
 
9 
 
RESUMEN 
Las células troncales mesenquimales (CTM) son células multipotenciales capaces de 
diferenciarse a varios linajes, esto las hace un modelo útil para estudiar el desarrollo y la 
diferenciación. El propósito de este trabajo fue evaluar el efecto de diferentes agonistas de 
los PPAR sobre la diferenciación y metabolismo de CTM derivadas de bovino e inducidas 
a los linajes muscular y adiposo. Se aislaron células de médula ósea de becerros Holstein de 
7 días de edad y se evaluaron las condiciones para promover la diferenciación adiposa (DA) 
y muscular (DM). Para la DA se usaron células del primer pasaje y se suplementó el medio 
con Rosiglitazona, Telmisartan, Sirtinol o Ácido Linoleico conjugado 9-cis, 11-trans. Para 
la DM se agregó al medio Bezafibrato, Telmisartan o Sirtinol. Mediante qPCR se evaluó la 
expresión de PPARγ para la DA y de cadena pesada de miosina (MyHC) para la DM así 
como genes relacionados con el metabolismo energético. Los datos obtenidos se analizaron 
como un modelo completamente aleatorizado usando el procedimiento GLM del paquete 
estadístico SAS. Para la DA, el uso de Telmisartan a 20 µM mostró la mayor expresión de 
PPARγ (15.58 ± 0.62, p < 0.0001) y se encontraron diferencias en la expresión de 
Hexocinasa II (HK2) (p < 0.0001); Fosfofructocinasa (PFK) (p = 0.0027); Lipasa de 
Triglicéridos del Adipocito (ATGL) (p < 0.0001); Acetil-CoA carboxilasa α (ACACα) (p < 
0.0001) y Ácido Graso Sintasa (FASN) (p < 0.0001), pero no para ACACβ (p = 0.4275). 
Para la DM, el Bezafibrato a 200 µM mostró la mayor expresión de MyHC (73.98 ± 11.79), 
y se encontraron diferencias en la expresión para todos los genes evaluados (HK2: p = 
0.0011; PFK: p = 0.0328; ACACβ: p < 0.0001; PPARδ p = 0.0097; y FABP: p < 0.0001). 
Estos resultados indican que se incrementa la diferenciación hacía adipocitos y miocitos en 
células de bovino derivadas de médula ósea con el uso de Telmisartan y Bezafibrato 
respectivamente, además de que la captación, almacenamiento, uso y movilización de 
sustratos energéticos se mejora con ambos compuestos. 
 
 
Palabras clave: PPAR, diferenciación celular, metabolismo de energía 
10 
 
ABSTRACT 
Mesenchymal stem cells (MSC) are multipotent cells able to differentiate into several 
lineages, making them a useful model to study development and differentiation. The 
purpose of this study was to evaluate the effect of PPAR agonists on differentiation and 
metabolic features of bovine MSC induced to adipogenic or myogenic lineages. Bone 
marrow cells from 7 days old Holstein calves were isolated and conditions to promote 
adipogenic differentiation (AD) or myogenic differentiation (MD) were explored. For AD, 
cultured cells after one passage, were transferred to adipogenic medium supplemented with 
either Rosiglitazone, Telmisartan, Sirtinol, or Conjugated 9-cis, 11-trans linoleic acid. For 
MD, third-passage cells were added to myogenic medium with either Bezafibrate, 
Telmisartan, or Sirtinol. mRNA expression of PPARγ for AD, myosin heavy chain 
(MyHC) for MD, and genes related to energy metabolism were measured by qPCR. Data 
were analyzed as a completely randomized design using the GLM procedure from SAS. For 
AD 20 µM Telmisartan showed the highest PPARγ expression (15.58 ± 0.62 fold, p < 
0.0001) and differences in expression of energy metabolism related genes were found for 
Hexokinase II (HK2) (p < 0.0001); Phosphofructokinase (PFK) (p = 0.0027); Adipose 
triglyceride lipase (ATGL) (p < 0.0001); Acetyl-CoA carboxylase α (ACACα) (p < 0.0001) 
and Fatty acid synthase (FASN) (p < 0.0001), but not for ACACβ (p = 0.4275). For MD, 
200 µM Bezafibrate showed the highest MyHC expression (73.98 ± 11.79 fold), and 
differences in the expression of all energy metabolism related genes were found (HK2: p = 
0.0011; PFK: p = 0.0328; ACACβ: p < 0.0001; PPARδ p = 0.0097; and FABP: p < 0.0001). 
This results point out that adipocyte and myocyte differentiation of bovine-derived MSC is 
enhanced with Telmisartan and Bezafibrate, respectively; energy uptake, storage, 
mobilization, and use of energy substrates are improved with both compounds. 
 
 
Keywords: PPAR, cell differentiation, energy metabolism 
11 
 
INDICE DE ABREVIATURAS 
 
ACACa / b Acetil Coenzima A carboxilasa a / b 
ADM Medio de diferenciación adiposa 
ADN / DNA Ácido desoxirribonucleico 
ARN / RNA Ácido ribonucleico 
ATGL Lipasa de triglicéridos del adipocito / Desnutrina 
BM Medio basal 
BMD-MSC Células troncales mesenquimales derivadas de médula ósea 
BMP4 Proteína morfogenética 4 
C/EBPα / β Proteínas de unión al promotor CCAAT α / β 
cDNA Ácido desoxirribonucleico complementario 
CH / HC Células hematopoyéticas 
CLA 9Z, 11E Ácido linoleico conjugado 9 cis, 11 trans 
CPT-1 Carnitin palmitoil transferasa 1 
CT / SC Células troncales 
CTE / ESC Células troncales embrionarias 
CTM / MSC Células troncales mesenquimales 
CTS / SSC Células troncales somáticas 
DA / AD Diferenciación adiposa 
DM / MD Diferenciación muscular 
DMEM Medio de Eagle modificado de Dulbecco 
DMSO Dimetil sulfóxido 
EF1α Factor de elongación 1-α 
Eya1 Homólogo de la proteína ojos ausentes 
FABP Proteína de unión a ácidos grasos 
FASN Ácido graso Sintasa 
FGF-2 Factor de crecimiento de fibroblastos 2 
GAPDH Gliceraldehído -3-fosfato deshidrogenasa 
12 
 
Gasp 1 Factor de crecimiento y diferenciación asociado a la proteína sérica-1 
GLUT4 Transportador de glucosa tipo 4 
GPDH Glicerol-3-fosfato deshidrogenasa 
HDL Lipoproteínas de alta densidad 
HGF Factor de crecimiento de hepatocitos 
HK2 Hexocinasa II 
HS Suero equino 
IBMX Isobutil-metil xantina 
ICQ Inmunocitoquímica 
IL-11 Interleucina 11 
IL-6 Interleucina 6 
IM Medio de inducción para diferenciación adiposa 
I-MET Inmunomicroscopía electrónica 
ISCT Sociedad Internacional de Terapia Celular 
ITS Suplemento de insulina, transferrina, selenito de sodio 
LPL Lipoproteína lipasa 
MCC Microscopía de campo claro 
MEF2C Factor potenciador específico de miocitos 2C 
Meox1 Proteína de la homeobox MOX-1 
MET Microscopia electrónica 
MO / BM Médula ósea 
MRF4 Factor regulador del músculo 4, Factor miogénico 6, Herculina 
Myf5 Factor miogénico 5 
MyHC Cadena pesada de miosina 
MyoD1 Proteína de determinación de mioblastos 1 
Pax3 Factor de transcripción Paired box 3 
Pax7 Factor de transcripción Paired box 7 
PCR Reacción en cadena de la Polimerasa 
PD Duplicaciones celulares 
PFK Fosfofructocinasa 
13 
 
PPAR α / γ Receptor activado por proliferadores de peroxisomas α / γ 
PPIA Ciclofilina A 
PPRE Elemento de respuesta a PPARs 
qPCR Reacción en cadena de la Polimerasa en tiempo real 
RPL13a Proteína ribosomal L13a 
RT-PCR Reacción en cadena de la Polimerasa tras transcripción reversa 
Six1 Proteína de la homeobox SIX-1 
TGF-β1 / β3 Factor de crecimiento transformante β1 y β3 
WB Western blot 
YWHAZ Proteína de activación de la Tirosin-3-monooxigenasa y Triptófano-5-
monooxigenasa 
 
 
14 
 
1. INTRODUCCIÓN 
El crecimiento del sector pecuario, impulsado por la industrialización de la producción y el 
incremento de la demanda de los productos de origen animal, exige una mejora en la 
capacidad de producción y en la calidad de los productos ofertados a los consumidores. Por 
lo que, en el caso de los productos cárnicos, es necesario el conocimiento de los 
mecanismos celulares y moleculares que regulan tanto el metabolismo energético como los 
procesos de diferenciación y desarrollo de los tejidos muscular y adiposo. A la par del 
entendimiento de estos procesos se requiere el desarrollo de nuevas tecnologías con el fin 
de incrementar la eficiencia de las diferentes especies pecuarias. Dentro de estas nuevas 
tecnologías, se encuentra el uso potencial de moléculas sintéticas o naturales, que, mediante 
la regulación de la expresión génica, modifiquen positivamente el metabolismo y 
diferenciaciónde los tejidos muscular y adiposo. En este sentido los Receptores Activados 
por Proliferador de Peroxisomas (PPARs) son blancos potenciales de estas tecnologías al 
ser factores de transcripción relacionados con la regulación del metabolismo energético y 
con la diferenciación celular. Por otro lado las células troncales mesenquimales (CTM) son 
células multipotenciales capaces de dar origen a diversos tejidos (adiposo, óseo, muscular, 
neuronal, entre otros). Esta propiedad de las CTM las hacen un modelo atractivo para el 
estudio de los mecanismos implicados en la diferenciación celular por lo que en el presente 
trabajo se les utilizó como modelo biológico para evaluar el efecto de diferentes 
compuestos que modificaran la actividad de los PPARs y con ello la capacidad de 
diferenciación y el metabolismo energético de estas células ya diferenciadas hacia los 
linajes muscular y adiposo. 
 
 
 
 
 
15 
 
2. ANTECEDENTES 
 
CÉLULAS TRONCALES MESENQUIMALES: BIOLOGÍA, CARACTERIZACIÓN 
Y FUTURAS APLICACIONES EN SALUD Y PRODUCCIÓN DE ESPECIES 
PECUARIAS. PARTE I 
 
Rosa M. Pérez-Serrano, Jesús J. Ramírez-Espinosa, Armando Shimada, 
Anaid Antaramian, Enrique Piña, Ofelia Mora 
 
CÉLULAS TRONCALES MESENQUIMALES: BIOLOGÍA, CARACTERIZACIÓN 
Y FUTURAS APLICACIONES EN SALUD Y PRODUCCIÓN DE ESPECIES 
DOMÉSTICAS Y PECUARIAS. PARTE II 
 
Rosa M. Pérez-Serrano, Jesús J. Ramírez-Espinosa, Armando Shimada, 
Anaid Antaramian, Enrique Piña, Ofelia Mora 
 
Artículos publicados en: Agrociencia, Vol. 46, No 4 y 6 respectivamente. 
 
16 
 
 
 
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2. HIPÓTESIS 
El uso de compuestos que favorezcan la actividad y expresión de PPARs incrementará la 
diferenciacion adiposa y muscular de células mesenquimales de bovino. 
 
 
 
42 
 
3. OBJETIVOS 
3.1 Objetivo General. 
Evaluar el efecto de compuestos agonistas de PPAR, naturales o sintéticos, sobre el 
desarrollo, diferenciación y metabolismo energético de células mesenquimales obtenidas de 
médula ósea de bovino diferenciadas hacia los linajes muscular y adiposo. 
 
3.2 Objetivos Específicos. 
1) Establecer cultivos primarios de células troncales mesenquimales (multipotenciales) 
obtenidos de médula ósea de bovinos. 
2) Estandarizar un sistema de cultivo-diferenciación de células multipotenciales hacia los 
linajes muscular y adiposo. 
3) Conocer los cambios en la expresión de diferentes factores de transcripción asociados a 
la diferenciación muscular o adiposa. 
4) Manipular diferentes factores de transcripción usando agonistas (naturales o sintéticos) 
que permitan una mejor diferenciación de ambos tipos celulares así como conocer sus 
efectos en el metabolismo energético. 
 
 
 
43 
 
4. MATERIAL, METODOS Y RESULTADOS. 
 
Bovine (Bos taurus) bone marrow mesenchymal cells differentiation to 
adipogenic and myogenic lineages. 
Jesús Jonathan Ramírez-Espinosa, Laura González-Dávalos, Armando Shimada, Enrique 
Piña, Alfredo Varela-Echavarría, y Ofelia Mora 
 
Artículo aceptado para publicación en Cell Tissue Organs 
 
44 
 
 
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45 
 
Bovine (Bos taurus) bone marrow mesenchymal cells differentiation to adipogenic and 
myogenic lineages 
J.J. Ramíreza, L. González-Dávalosb, A. Shimadab, E. Piñac, A. Varela-Echavarriad and O. 
Morab 
 
a Programa de Posgrado en Ciencias