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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MÉXICO FACULTAD DE MEDICINA DIVISIÓN DE ESTUDIOS DE POSGRADO INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL CENTRO MEDICO NACIONAL “LA RAZA” UMAE HOSPITAL GENERAL “DR. GAUDENCIO GONZALEZ GARZA” SERVICIO DE PATOLOGIA CLINICA “EVALUACIÓN DE VITEK MS EN LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS Y LEVADURAS EN COMPARACIÓN CON VITEK 2XL” REGISTRO R-2015-3502-95 Tesis de Posgrado para obtener el título de la especialidad de Patología Clínica Presenta: DRA. ROSAS SEINOS EVA CAROLINA MÉDICO RESIDENTE DE 3º AÑO DE PATOLOGÍA CLÍNICA DEL HG “DR. GAUDENCIO GONZALEZ GARZA” LA RAZA Investigador responsable: QFB MA DEL SOCORRO MENDEZ TOVAR Investigador asociado: QFB JOSÉ MARIO ORTEGA OLVERA México, Distrito Federal, a 28 de febrero del 2015 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. 1 Lanza tus sueños al espacio como una cometa y no sabes lo que te devolverán: una nueva vida, un nuevo amigo, un nuevo amor, un nuevo país (Anaïs Nin) Esto fue lo que me paso con la Patología Clínica 2 INVESTIGADOR RESPONSABLE QFB MA DEL SOCORRO MENDEZ TOVAR JEFE DE SECCION DE MICROBIOLOGIA UMAE HOSPITAL GENERAL “DR. GAUDENCIO GONZALEZ GARZA” CMN LA RAZA” INVESTIGADOR ASOCIADO QFB JOSÉ MARIO ORTEGA OLVERA M EN C EN FISIOLOGÍA CELULAR Y BIOLOGÍA MOLECULAR. ESTUDIANTE DE POSGRADO CENTRO DE INVESTIGACIÓN Y DE ESTUDIOS AVANZADOS DEL INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL MÉDICO TESISTA DRA. ROSAS SEINOS EVA CAROLINA MÉDICO RESIDENTE DE 3º AÑO DE LA ESPECIALIDAD PATOLOGÍA CLÍNICA UMAE HOSPITAL GENERAL “DR. GAUDENCIO GONZALEZ GARZA” CMN LA RAZA” 3 “EVALUACIÓN DE VITEK MS EN LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS Y LEVADURAS EN COMPARACIÓN CON VITEK 2XL” ________________________________________ Dra. Luz Arcelia Campos Navarro Directora de educación e investigación en salud UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” ________________________________________ Dra. María del Refugio Álvarez Galán Profesora titular de Patología Clínica UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” ________________________________________ QFB Ma. del Socorro Méndez Tovar Asesora de tesis Jefe de sección de Microbiología de UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” ________________________________________ Dra. Rosas Seinos Eva Carolina Médico residente de 3º año de Patología Clínica de UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” 4 5 ÍNDICE RESUMEN GENERAL .................................................................................................................... 6 INTRODUCCION ........................................................................................................................... 8 MARCO TEORICO ....................................................................................................................... 10 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ........................................................................................... 19 JUSTIFICACIÓN ........................................................................................................................... 19 PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN ................................................................................................ 20 OBJETIVO GENERAL ................................................................................................................... 20 OBJETIVOS ESPECÍFICOS ........................................................................................................... 20 HIPÓTESIS DE INVESTIGACIÓN ................................................................................................. 21 DISEÑO ....................................................................................................................................... 21 MATERIAL Y METODOS ............................................................................................................. 21 DEFINICIÓN DE VARIABLES ....................................................................................................... 23 METODOLOGÍA .......................................................................................................................... 24 PLAN DE ANÁLISIS ..................................................................................................................... 26 CONSIDERACIONES ÉTICAS ....................................................................................................... 27 RECURSOS Y FACTIBILIDAD ....................................................................................................... 27 RESULTADOS .............................................................................................................................. 29 DISCUSIÓN ................................................................................................................................. 50 CONCLUSIONES ......................................................................................................................... 53 BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................................................ 55 HOJA DE REGISTRO Y RECOLECCIÓN DE DATOS ..................................................................... 61 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES ............................................................................................. 62 6 RESUMEN GENERAL Título: EVALUACIÓN DE VITEK MS EN LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS Y LEVADURAS EN COMPARACIÓN CON VITEK 2XL Antecedentes. Tradicionalmente, la identificación de un agente etiológico mediante el aislamiento en cultivo e identificación fenotípica puede variar entre 24-72 horas. A pesar del desarrollo de técnicas de biología molecular para la identificación de microorganismo, su introducción al Laboratorio Clínico no ha sido del todo exitosa debido a que es necesario personal especializado en estas técnicas, acondicionamiento del área de trabajo y al enorme costo que representa su realización. Sin embargo en los últimos 6 años, MALDI-TOF MS se ha utilizado como un método rápido y exacto para la identificación de agentes patógenos basada en la comparación del espectro de masas de 16s rRNA del microorganismo desconocido contra los espectros de masas de una base de datos, en un tiempo de respuesta menor a 24 horas. Objetivo: Evaluar los beneficios de MALDI-TOF MS (VITEK MS de bioMérieux) como método automatizado de identificación de bacterias y levaduras de cepas ATCC y de especímenes clínicos de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza”, en comparación con el método de reacciones bioquímicas (VITEK 2XL de bioMérieux) en el periodo de marzo-abril del 2013. Diseño del Estudio. Retrospectivo, transversal, observacional y descriptivo. Planteamiento del problema. Actualmente, a pesar de los avances en la Medicina, las enfermedades infecciosas son una causa de elevada mortalidad y morbilidad. Por lo cual, es prioritario complementaro confirmar el diagnóstico clínico mediante pruebas de identificación del agente patógeno implicado de manera oportuna y exacta para evitar el establecer tratamientos empíricos, que pueden desarrollar diversos mecanismos de resistencia en el microorganismo sumando a éste al grupo de los mutidrogorresistentes (MRD), los cuales provocan una sobre estancia intrahospitalaria, aumento en los costos de atención y en la incidencia de infecciones nosocomiales. Justificación: Actualmente, la identificación de bacterias o levaduras mediante reacciones bioquímicas tarda de 24-48 horas; por lo cual, la implementación de un nuevo método de identificación de agentes patógenos, como la espectrometría de masas mediante MALDI-TOF, podría reducir el tiempo de respuesta ofreciendo así un tratamiento oportuno dirigido, que impactará en la disminución de costos, en base a una mayor exactitud en la identificación de agentes etiológicos respecto a otros métodos. Pregunta de investigación. ¿Los resultados de identificación bacteriana y levaduras mediante VITEK MS concuerdan con los resultados obtenidos mediante VITEK 2XL? Hipótesis de investigación. Hipótesis nula: MALDI-TOF MS es igual a VITEK 2XL para identificar bacterias y levaduras, ya que el grado de concordancia es perfecto. Hipótesis alternativa: MALDI- TOF MS es desigual a VITEK 2XL para identificar bacterias y levaduras, ya que el grado de concordancia no es perfecto. 7 Material y Métodos. UNIVERSO DE ESTUDIO: Colonias de bacterias o levaduras aisladas en medio de cultivo sólido, obtenidas a partir de cepas ATCC y de muestras clínicas de pacientes externos y hospitalizados en la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza”. TAMAÑO DE LA MUESTRA: cepas ATCC en medio de cultivo sólido y cepas aisladas en medio de cultivo sólido a partir de muestras clínicas de pacientes de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza”. FORMA DE SELECCIÓN DE LOS SUJETOS DEL ESTUDIO: Secuencial simple. DEFINICIÓN OPERACIONAL. Identificación de microorganismo: correlación entre los organismos registrados en la base de datos y los resultados obtenidos del análisis de una cepa aislada. CRITERIOS DE INCLUSIÓN: Cepas ATCC para realizar el programa de control de calidad de VITEK MS y VITEK 2XL; muestras clínicas de pacientes externos e internados en la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza”. CRITERIOS DE EXCLUSIÓN: Muestra clínicas y/o solicitud de estudio que no tengan correctamente los datos de identificación del paciente; muestra clínicas y solicitud de estudios que no coincidan los datos de identificación del paciente. CRITERIOS DE ELIMINACION: Resultados de identificación de agente patógeno que no presenten reporte de resultados de VITEK MS y VITEK 2XL; muestras clínicas, de las cuales no se aíslen colonias de bacterias o levaduras en medio de cultivo sólido. Definición de variables. Identificación de una especie o de un género: Perfecta concordancia de espectros, espectros suficientes para discriminar la identificación de un organismo. Identificación de más de una especie o de más de un género: Una lista de posibles organismos es dada cuando el espectro obtenido no es reconocido, 2-3 organismos identificados o más de 3 organismos. No identificado: No se identificó ningún microorganismo. Metodología. Cada una de las cepas, aisladas en medio de cultivo sólido, se identificará mediante MALDI-TOF MS (VITEK MS) y pruebas bioquímicas (VITEK 2XL). Se recolectarán los resultados obtenidos de las identificaciones de bacterias y levaduras. Plan de análisis. De acuerdo con las recomendaciones de “Statistical Guidance on Reporting Results from Studies Evaluating Diagnostic Tests; Draft Guidance for Industry and FDA Reviewers”, se calculará la especificidad y sensibilidad de la identificación de organismos de cepas ATCC; para los resultados de identificación de organismos de especímenes clínicos, se utilizará el coeficiente kappa (κ) para medir el grado de concordancia y se tomará como referencia cepas ATCC. Consideraciones éticas. No se requiere consentimiento informado del paciente porque no se utilizarán datos de identificación de pacientes de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” para la realización de este estudio. Factibilidad. La sección de Microbiología del Laboratorio Clínico de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” cuenta con las plataformas de identificación de microorganismos, muestras, materiales y recursos humanos para la realización de este estudio. 8 INTRODUCCION A pesar de los avances en el campo de la medicina, las enfermedades infecciosas son la causa de una elevada mortalidad y morbilidad según el reporte de la Organización Mundial de la Salud (OMS) del 2012 y tres de las 10 principales causas de muerte a nivel mundial son infecciones de las vías respiratorias bajas, infección por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) y la diarrea (1). El diagnóstico de una infección microbiana empieza con una evaluación de las características clínicas y epidemiológicas, lo que conduce a la formulación de una hipótesis diagnóstica. Por lo general, se incluye la localización anatómica de la infección con la ayuda de los hallazgos físicos y radiológicos. Este diagnóstico clínico sugiere cierto número de agentes etiológicos posibles con base en el conocimiento de los síndromes infecciosos y sus cursos. Entonces, se establece la causa específica mediante la aplicación de métodos; el clínico debe seleccionar los exámenes y especímenes así como sugerir los posibles agentes etiológicos. Todos los enfoques diagnósticos se inician con algún tipo de muestra tomada del paciente. La microscopia, los cultivos y la detección de antígenos y anticuerpos son métodos clásicos, aunque se están desarrollando enfoques genómicos. La integración de la espectrometría de masas por desorción/ ionización laser asistida por matriz en tiempo de vuelo [matrix-assisted laser desorption ionisation time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS)] en varios laboratorios de microbiología clínica ha revolucionado la identificación rutinaria de patógenos. MALDI-TOF MS complementa y tiene potencial de reemplazar los métodos de la identificación fenotípica existentes y obteniendo resultados en un plazo más oportuno clínicamente. Conforme nuevos métodos y técnicas de diagnóstico se incorporan al Laboratorio Clínico, se debe evaluar su sensibilidad y especificidad y/o grado de concordancia respecto a los 9 métodos de diagnóstico implementados con anterioridad. Sin embargo, es fácil dejarse llevar por la publicidad que las compañías de biotecnología hacen respecto a sus nuevos equipos e instrumentos de diagnóstico. En Latinoamérica, se han publicado pocos estudios que evalúen el grado de concordancia de los resultados obtenidos entre MALDI- TOF MS y métodos manuales y automatizados implementados en el Laboratorio Clínico. 10 MARCO TEORICO Para un óptimo manejo de los pacientes es indispensable obtener la identificación microbiológica del agente causal de la infección en el menor espacio de tiempo posible. Sin embargo, la obtención de un diagnóstico microbiológico rápido resulta compleja utilizando los métodos convencionales, que se basan en el cultivo seguido de la identificación fenotípica del microorganismo una vez aislado; aunque la obtención de un cultivo puro del microorganismo implicado en una infección permite no sólo la identificación del mismo, sino también el estudio de su sensibilidad a diferentes antibióticos y la determinación de marcadores epidemiológicos, el tiempo necesario para su obtención puede variar entre 24 y 48 horas generalmente, más 24 horas adicionales para disponer de los resultadosdefinitivos de la identificación y el antibiograma (Ilustración 1) (2). Ilustración 1 Diagrama de flujo de trabajo y tiempo de respuesta en la identificación bacteriana mediante pruebas fenotípicas (Tomado de Pouneh Dokouhaki, Joseph M Blondeau. Advances in laboratory diagnostic technologies in clinical microbiology and what this means for clinical practice.Clinical Practice, July 2012, Vol. 9, No. 4, Pages 347-352) 11 La identificación bacteriana basada en MALDI-TOF MS es una técnica existente hace más de 30 años (Tabla 1). No obstante, recientemente ha sido utilizada como un método rápido y acucioso para la identificación de rutina de microorganismos patógenos mediante el perfil de proteínas de 16s rRNA. La espectrometría de masas es un método que permite la identificación de una molécula mediante la medición de su masa en relación a sus cargas de masas (m/z) y de los fragmentos generados a partir de ella. El proceso de identificación implica la comparación de los espectros de la muestra con la biblioteca de espectros usando un algoritmo similar a una prueba estadística de significancia. A lo largo de los años se han desarrollado diversos métodos y tecnologías para la identificación de microorganismos, entre los cuales se encuentra la espectrometría de masas [mass spectrometry (MS)] (2). Tabla 1 Evolución del uso de la espectrometría de masas en microbiología básica Año Autor Revista Título 1975 Anhalt JP Anal Chem Identificación de bacterias utilizando espectrometría de masas 1996 Krishnamurthy T Rapid Commun Mass Spectrom Detección de bacterias patógenas y no patógenas por espectrometría de masas MALDI-TOF Holland RD Rapid Commun Mass Spectrom Identificación rápida de bacterias intactas basada en los patrones espectrales por espectrometría de masas MALDI- TOF Claydon MA Nat Biotechnol Identificación rápida de bacterias intactas usando espectrometría de masas MALDI-TOF 1999 Domin MA Rapid Commun Mass Spectrom El efecto de la combinación del solvente y la matriz en el análisis de bacterias por espectrometría de masas MALDI- TOF 2000 Haag AM Am Clin Lab Rápida identificación de Haemophilus spp. y otras bacterias por espectrometría de masas MALDI-TOF Jarman KH Anal Chem Un algoritmo para la identificación automatizada de bacterias usando espectrometría de masas MALDI-TOF 2001 Lay JO Jr. Mass Spectrom Rev Espectrometría de masas MALDI-TOF de bacterias Fenselau C Mass Spectrom Rev Caracterización por microorganismos intactos por espectrometría de masas MALDI-TOF 2002 Bright JJ J Microbiol Methods Rápida tipificación de bacterias usando MALDI-TOF y un software de reconocimiento 12 Bernardo KN Proteomics Identificación y discriminación de Staphylococcus aureus usando espectrometría de masas MALDI-TOF 2005 Dworzanski JP Expert Rev Proteomics Clasificación e identificación de bacterias usando espectrometría de masas basada en proteómica Valentine N Applied Environ Microbiol Efecto de las condiciones del cultivo en la identificación de microorganismos por espectrometría de masas MALDI-TOF 2008 Mellmann A J ClinMicrobiol Evaluación de espectrometría de masas MALDI-TOF en comparación con la secuenciación del gen 16S rRNA para la identificación de especies en bacilos gramnegativos no fermentadores Degand N J ClinMicrobiol Espectrometría de masas MALDI-TOF para la identificación de bacilos gramnegativos no fermentadores aislados de pacientes con fibrosis quística Tomado de García P, Allende F, Legarraga P, Huilcaman M, Solari S. Bacterial identification based on protein mass spectrometry: A new insight at the microbiology of the 21st century. Rev Chilena Infectol. 2012 Jun;29(3):263-72 Los instrumentos de MALDI-TOF consisten de 3 principales componentes (3): 1. Una cámara de ionización dentro de la cual la ionización utiliza un láser (usualmente un láser de nitrógeno ultravioleta de 337nm) y vaporización del espécimen en la fase gaseosa 2. Un analizador de masas de TOF que separa los iones de acuerdo a sus proporciones de cargas de masas (m/z) 3. Un detector de partículas Las proteínas ribosomales son adecuados biomarcadores para el análisis, debido a su alta concentración y modificaciones postraducción específicas resultan en variaciones de masas haciendo que las proteínas ribosomales sean distinguibles por MS (3) (4) (5). La muestra (tejidos, células, líquidos corporales) es impregnada en una matriz orgánica, la cual cristaliza en contacto con el aire. Esta matriz es un compuesto orgánico que absorbe la energía láser (Ilustración 2 e Ilustración 3). Las matrices más utilizadas son el ácido α- ciano-4-hidroxicinnamico [cyano-4-hydroxycinnamic acid, (CHCA)], el ácido sinapinico y el 5-cloro-2mercaptobenzotiazol (3). 13 Ilustración 2 La muestra y la matriz son combinadas sobre el pocillo de la placa (Shah HN and Gharbia SE, eds. Mass Spectrometry for Microbial Proteomics. John Wiley and Sons; 2010) Ilustración 3 El láser causa que los cristales de la matriz absorban la energía, resultando en la vaporización de las proteínas, la cual entonces acelera a través del tubo de TOF (Shah HN and Gharbia SE, eds. Mass Spectrometry for Microbial Proteomics. John Wiley and Sons; 2010) Es necesario conocer si algunas especies bacterianas, levaduras y hongos filamentosos requieren pre-tratamiento con ácidos orgánicos más fuertes y/o alcoholes para liberar las proteínas (6) (7). La diferencia de potencial se genera porque existe un electrodo en contacto con el capilar, mientras que el otro electrodo se sitúa en el detector del espectrómetro. Cuando la muestra sale del capilar se genera una nube de pequeñas gotas cargadas que da lugar a los iones en fase gaseosa. Con esta tecnología, aplicando una diferencia de potencial positiva o negativa se pueden generar cationes o aniones. El analizador de masas es el componente principal del espectrómetro. La estructura delimita una zona de vuelo a través de la cual los iones son acelerados adquiriendo una elevada energía cinética, y durante este trayecto se separarán según su m/z. La mayor parte de iones generados poseen una sola carga (z = 1), por lo que la m/z equivale a m. El 14 periodo de tiempo que tarda cada ion en llegar hasta el detector es denominado tiempo de vuelo y depende de dicha relación. Al final de la zona de vuelo, los iones impactan en el detector. A partir de la información recogida por el detector, se genera el espectro de masas de los diferentes iones de la muestra calculada a partir del tiempo de vuelo (8). Los picos espectrales típicamente corresponden a proteínas de mantenimiento conservadas muy abundantes (por ejemplo, proteínas ribosomales y de unión a ácidos nucleicos) que son mínimamente afectadas por las condiciones ambientales, y tienen una naturaleza básica y altos puntos isoeléctricos que permiten una eficiente ionización. Los espectros dentro del rango de masas 3000–20 000 Da exhiben una útil variabilidad inter- especies y similitudes intra-especies, y la identificación del organismo se proporciona por la referencia a los patrones espectrales de organismos conocidos (3). El proceso de identificación implica la comparación de los espectros de la muestra con la biblioteca de espectros usando un algoritmo similar a una prueba estadística de significancia (Ilustración 4) (7). Ilustración 4 Principio de MALDI-TOF MS. Los pulsos del láser golpean la muestra seca y cubierta con solución matriz en el pocillo de la placa. Las moléculas son desorbidas e ionizadas antes de acelerarse a través del campo libre de vacío, donde fluyen a través de un detector de partículas. El tiempo de vuelo depende de la masa de las moléculas y se genera un espectro, el cual es comparado con una base de datos para la identificación de especies. (Kok J, Chen SC, Dwyer DE, Iredell JR. Current status of matrix-assistedlaser desorption ionisation-time of flight mass spectrometry in the clinical microbiology laboratory. Pathology. 2013 Jan; 45(1):4-17) Placa de muestra Campo electrostático Voltaje variable (+) Rejilla de tierra (-) Analizador de tiempo de vuelo (campo libre) Lente de enfoque de iones D et ec to r d e p ar tí cu la s 15 Los resultados obtenidos con la base de datos del VITEK MS son divididos en categorías de acuerdo a una escala cualitativa (Tabla 2). Tabla 2 Categorías de los resultados del VITEK MS Categoría Valor de confianza (%) Observaciones Buena ID 99.9 Perfecta concordancia de espectros ˃60 al 99.8 Espectros suficientes para discriminar la identificación Baja discriminación ˃60 Una lista de posibles organismos es dada cuando el espectro obtenido no es reconocido No ID <60 Espectro no identificado (Dubois D1, Grare M, Prere MF, Segonds C, Marty N, Oswald E. Performances of the Vitek MS matrix- assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry system for rapid identification of bacteria in routine clinical microbiology. J Clin Microbiol. 2012 Aug; 50(8):2568-76. doi: 10.1128/JCM.00343- 12. Epub 2012 May 16) Las posibles causas de “no ID” es la ausencia espectro de referencia, la presencia de un bajo número de espectros en la base de datos y más de una especie en la muestra (27). Sin embargo, la ausencia de espectros de referencia puede solucionarse al integrar una base de datos de espectros interna (4). En las Tabla 2 y Tabla 3 se muestran resumidos los estudios para evaluar la exactitud entre MALDI-TOF MS y métodos estandarizados o la concordancia entre diversas plataformas de MALDI-TOF MS y/o métodos de identificación fenotípica tradicionales. 16 Tabla 3 Selección de estudios de MALDI-TOF MS en la identificación de aislados bacterianos y directo de especímenes clínicos Año Estudio Materiales y método No./ejemplo de especies No./ especímenes analizados Instrumento/base de datos Hallazgos principales/comentarios 20 09 Seng (9) Aislados de sitios estériles y no estériles encontrados en una laboratorio de microbiología en un período de 16 semanas >100 especies 1660 Autoflex II/Biotyper ver 2.0 95.4% de los aislados se identificaron correctamente a nivel género, 84.1% a nivel especies, 2.8% no identificados (principalmente anaerobios no Clostridium) y 1.7% identificados incorrectamente (S. pneumoniae mal identificada como S. parasanguinis; S. maltophilia identificada como P. hibiscicola; S. sonnei identificada como E. coli) La media de tiempo para la identificación fue de 6 minutos, a un costo de €2.44 20 10 van Veen (10) Aislados clínicos de sitios estériles y no estériles Estudio retrospectivo seguido por un estudio prospectivo en un periodo de 5 semanas >100 especies incluyendo Enterobacteriaceae, bacilos Gram negativos no fermentadores, cocos Gram positivos y bacterias misceláneas 308 (retrospectivo) 919 (prospectivo) Microflex/Biotyper ver 2.0 Identificación correcta de especies, de las muestras clínicas analizadas, en 97.7% de Enterobacteriaceae, 92% no fermentadores, 94.3% de estafilococos y 84.8% de misceláneos (principalmente del grupo HACEK) Suplemento de la base de datos (excepto S. pneumoniae y S. viridans, estreptococos) Bizzini 11) Aislados clínicos obtenidos en un periodo de 4 semanas 56 especies incluyendo estafilococos, estreptococos, Enterobacteriaceae, bacilos Gram negativos no fermentadores y anaerobios 1347 Microflex LT/Biotyper ver 2.0 El 70.3% de los aislados fueron identificados por muestra directa y un 22.9% más después de ña extracción con ácido acetonitrilo fórmico El 98.5% y 93.1% de los aislados fue identificado a nivel de género y especie respectivamente; el 4.9% de los resultados fueron discordantes como resultado de incapacidad para discriminar especies estrechamente relacionadas (Shigella spp. y E. coli), espectros de referencia incorrectos (Eubacterium brachy en lugar de P. acnes), ausencia de aislado en la base de datos de VITEK 2 y discordancia taxonómica Cherkaoui (12) Aislados clínicos de sitios estériles y no estériles recolectados en un periodo de 21 días S. aureus S. epidermidis E. faecalis E. faecium, Enterobacteriaceae H. influenza P. aeruginosa Anaerobios Gram positivos y 720 Microflex/Biotyper AXIMA Assurance/SARAMIS Comparando los sistemas Bruker y Shimadzu con los métodos de identificación fenotípica, los resultados discordantes fueron resueltos mediante la secuenciación de genes de 16S rRNA. La identificación de alta confianza en 94.4% y 88.8% de los aislados para los sistemas Bruker (puntaje ≥1.7) y Shimadzu (puntaje ≥70%), respectivamente. El tiempo de respuesta fue de 5 minutos y US$0.25 por aislado 17 negativos 20 11 Neville (13) Aislados clínicos de cualquier sitio en un período de 1 mes 115 especies incluyen Enterobacteriaceae, bacilos Gram negativos no fermentadores, bacilos Gram negativos misceláneos, cocos Gram positivos, bacilos Gram positivos y anaerobios 927 Microflex/Biotyper ver 2.0 El 96.4% y 84.5% de los aislados estudiados por triplicado fueron identificados a nivel de género y especie respectivamente comparado con los métodos de identificación fenotípicos; los resultados discordantes (incluyendo Shigella spp., S. mitis, S. agalactiae y E. cloacae) se resolvieron repitiendo MS o secuenciación génica de 16S rRNA. El repetir los análisis de MS resolvió 52% de los aislados no identificados durante el análisis inicial. El costo de identificar cada aislado fue de AU$0.45 Bille (14) Microorganismos aislados en el laboratorio en un período de 2 meses 119 especies bacterianas (incluyendo Enterobacteriaceae, bacilos Gram negativos no fermentadores, bacilos Gram negativos misceláneos, cocos Gram positivos, bacilos Gram positivos, anaerobios) 4 especies de micobacterias (M. tuberculosiscomplex, M. chelonae, M. mucogenicum y M. abscesses) 2665 bacterias 22 micobacterias Microflex/Andromas ver 2010 “Buena identificación” en 93.1% y 95.5% de los aislados de bacterias y micobacterias, respectivamente; a partir de la muestra directa en la placa. Especies relacionadas estrechamente, como S. pyogenes/S. dysgalactiae, E. coli/Shigella spp. y S. pneumoniae/S. mitis, también fueron pobremente identificadas. El software Andromas equipado con un sistema experto para superar los problemas de adquisición de espectros y la asignación de un código de barras, indicando el resultado de la tinción de Gram (Kok J, Chen SC, Dwyer DE, Iredell JR. Current status of matrix-assisted laser desorption ionisation-time of flight mass spectrometry in the clinical microbiology laboratory. Pathology. 2013 Jan;45(1):4-17) 18 Tabla 4 Principales publicaciones que describen MALDI-TOF MS para la identificación de especies de levaduras Año Estudio Hongos estudiados No. especies No. aislados Instrumento (base de datos) Identificación a nivel de especie Identificación a nivel de género 2 0 0 9 Marklein (15) Candida, Cryptococcus, Saccharomyces, Trichosporon, Pichia, Geotrichum, Blastoschizomyces 25 267 Bruker Microflex LT II (Biotyper version 1.1) Bruker Bioflex III (Biotyper version 2.0) 92.5% (sin la base de datos complementaria) 87.1% (biblioteca Bruker); 99% (con la biblioteca interna) NA 2 0 1 0 Stevenson (16) Candida, Cryptococcus, Geotrichum, Malassezia, Rhodotorula, Trichosporon 23 194 Bruker UltraFlex I (construcción de biblioteca interna con Biotyper version 2.0.4) 87.1% (biblioteca Bruker); 99% (con la biblioteca interna) 99% van Veen (10) Candida, Geotrichum Saccharomyces, Rhodotorula, Trichosporon, Magnusiomyces 14 80 Bruker Microflex (Biotyper version 2.0) 87.5% 97.5% Bader (17) Candida, Cryptococcus, Galactomyces, Pichia, Geotrihcum, Rhodotorula, Saccharomyces,Trichosporon, Yarrowa, Blastoschizomyces 1192 36 Bruker Microflex LT20 (Biotyper Version 3.0) 99% NA AXIMA Assurance (SARAMIS Premium, version 3.3.1) 99.5% Putignani (18) Candida, Cryptococcus, Geotrichum, Malassezia, Saccharomyces 303 19 Bruker Microflex LT (Biotyper version 2.0) 93.4% NA 2 0 1 1 Dhiman (19) Candida, Cryptococcus, Saccharomyces, Rhodotorula, Pichia Trichosporon, Lodderomyces, Aureobisidium 241 >32 Bruker Microflex LT (Biotyper version 3.0) 92.6% 96.3% Pinto (20) Candida, Cryptococcus, Geotricum, Pichia, Rhodotorula, Saccharomyces, Trichosporon, Arxiozyma, Lodderomyces 264 34 Bruker Microflex LT (Biotyper version 3.1.2.0) 79–84% 94–96% Quiles- Melero (21) Complejo de especies Candida parapsilosis 103 3 Bruker Microflex LT (Biotyper 3.0.1.0) 100% 100% McTaggart (22) Cryptococcus; Candida, Galactomyces, Rhodotorula, Saccharomyces, Trichsoporon 137; 23 7; 13 Bruker Microflex LT (Bruker version 2.0.1 complementada con la biblioteca interna) 58.4% (sin base de datos complementaria ) NA 93.1% (con base de datos complementaria) 100% (con base de datos complementaria) Bille (14) Candida, Cryptococcus, Saccharomyces, Geotrichum, Rhodotorula 160 20 Microflex LT (Andromas database) 98.8% 98.8% Especies de Aspergillus 63 7 98.4% 98.4% * Identificaciones de género y especie concuerdan con los puntajes recomendados por el fabricante: <2.0 indica identificación a nivel de especie y 1.7-1.999 indica identificación a nivel de género. (Kok J, Chen SC, Dwyer DE, Iredell JR. Current status of matrix-assisted laser desorption ionisation-time of flight mass spectrometry in the clinical microbiology laboratory. Pathology. 2013 Jan;45(1):4- 17) 19 En la Epidemiología, MALDI-TOF MS es útil cuando los analitos a identificar son secuencias de DNA y factores de virulencia como metaloproteasas, carbapenemasas u otros biomarcadores de los patógenos; actualmente no se ha estandarizado el protocolo de estudio para este rubro, aunque existen estudios que favorecen su uso para la tipificación de cepas (23) (24) (25) (26) (27) (28) (29). La implementación de MALDI-TOF MS para la identificación de levaduras ha resultado eficiente, rentable, rápido método en comparación con los métodos de identificación fenotípica. Al igual que en las bacterias, la exactitud de la identificación bacteriana depende en gran parte de las cepas de referencia incluidos en la base de datos. Cuando una cepa dada se prueba, la especie de la cepa de referencia con la coincidencia más cercana se retiene para la identificación de la cepa ensayada. Este enfoque elimina fuertes influencias de las condiciones del medio y la composición del medio de cultivo (10). PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Actualmente, a pesar de los avances en la Medicina, las enfermedades infecciosas son una causa de elevada mortalidad y morbilidad. Por lo cual, es prioritario complementar o confirmar el diagnóstico clínico mediante pruebas de identificación del agente patógeno implicado de manera oportuna y exacta para evitar el establecer tratamientos empíricos, que pueden desarrollar diversos mecanismos de resistencia en el microorganismo sumando a éste al grupo de los mutidrogorresistentes (MRD), los cuales provocan una sobre estancia intrahospitalaria, aumento en los costos de atención y en la incidencia de infecciones nosocomiales. JUSTIFICACIÓN A diferencia de otras áreas del Laboratorio Clínico, la automatización del área de microbiología es más compleja dada la gran diversidad de muestras clínicas y las características inherentes a los diferentes microorganismos. Los requisitos ideales en una plataforma o equipo de detección e identificación microbiológica son: 20 • Capacidad de detección de cualquier microorganismo • Detección a partir de la muestra clínica directa • Obtención de resultados en un periodo corto de tiempo (1-6 horas) • Detección de resistencias, factores de virulencia o toxinas • Una buena relación coste-efectividad (25) Actualmente, sólo la identificación de bacterias o levaduras en el Laboratorio Clínico, mediante reacciones bioquímicas (VITEK 2XL de bioMérieux), lleva de 24-48 horas; por lo cual, la implementación de un método de identificación de agentes patógenos que pueda reducir el tiempo de respuesta y, por consecuencia, ofrecer un tratamiento oportuno y disminuir los costos de pruebas de laboratorio y/o estancia hospitalaria (26). PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN ¿Los resultados de identificación bacteriana y levaduras mediante VITEK MS concuerdan con los resultados obtenidos mediante VITEK 2XL? OBJETIVO GENERAL Evaluar los beneficios de MALDI-TOF MS (VITEK MS de bioMérieux) como método automatizado de identificación de bacterias y levaduras de cepas ATCC así como de especímenes clínicos de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza”, en comparación con el método de reacciones bioquímicas (VITEK 2XL de bioMérieux) en el periodo de marzo-abril del 2013. OBJETIVOS ESPECÍFICOS • Determinar la exactitud de la identificación bacteriana de cepas ATCC entre MALDI- TOF MS (VITEK MS de bioMérieux) y reacciones bioquímicas (VITEK 2XL de bioMérieux). • Determinar el grado de concordancia de la identificación bacteriana de colonias aisladas, provenientes de muestras clínicas de especímenes clínicos de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La 21 Raza”, entre MALDI-TOF MS (VITEK MS de bioMérieux) y reacciones bioquímicas (VITEK 2XL de bioMérieux). • Valorar la incorporación de MALDI-TOF MS como método de identificación de bacterias y levaduras al Laboratorio Clínico de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza”. HIPÓTESIS DE INVESTIGACIÓN Hipótesis de nulidad: MALDI-TOF MS es igual a VITEK 2XL para identificar bacterias y levaduras, ya que el grado de concordancia es perfecto. Hipótesis alternativa: MALDI-TOF MS es desigual a VITEK 2XL para identificar bacterias y levaduras, ya que el grado de concordancia no es perfecto. DISEÑO • Retrospectivo • Transversal • Observacional • Descriptivo MATERIAL Y METODOS UNIVERSO DE ESTUDIO Colonias de bacterias o levaduras aisladas en medio de cultivo sólido, obtenidas a partir de: • Cepas ATCC para control de calidad del equipo VITEK MS y VITEK 2XL • Muestras clínicas de pacientes externos y hospitalizados en la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” para identificación de agente patógeno del 25 de marzo al 19 de abril de 2013 TAMAÑO DE LA MUESTRA 22 Cepas ATCC en medio de cultivo sólido Cepas aisladas en medio de cultivo sólido a partir de muestras clínicas de pacientes de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” FORMA DE SELECCIÓN DE LOS SUJETOS DEL ESTUDIO Secuencial simple DEFINICIÓN OPERACIONAL Identificación de bacteria: correlación entre los organismos registrados en la base de datos y los resultados obtenidos del análisis de una cepa aislada. CRITERIOS DE INCLUSIÓN 1. Cepas ATCC para realizar el programa de control de calidad de VITEK MS y VITEK 2XL 2. Muestras clínicas de pacientes externos e internados en la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” CRITERIOS DE EXCLUSIÓN 1. Muestra clínicas y/o solicitud de estudio que no tengan correctamente los datos de identificación del paciente 2. Muestra clínicas y solicitud de estudios que no coincidan los datos de identificación del paciente CRITERIOS DE ELIMINACION 1. Resultados de identificación de agente patógeno que no presenten reporte de resultados de VITEK MS y VITEK 2XL 23 2. Muestras clínicas de pacientes externos e internados en la UMAE Hospital General“Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza”, de las cuales no se aíslen colonias de bacterias o levaduras en medio de cultivo sólido. DEFINICIÓN DE VARIABLES Tabla 5 Definición de variables Variable Tipo de Variable Definición conceptual Definición operacional Indicador Escala de medición Identificación de una especie o de un género Cualitativa V VITEK MS Perfecta concordancia de espectros 99.9% Buena ID Numérico Espectros suficientes para discriminar la identificación 60 al 99.8% Buena ID Numérico VITEK 2XL 1 organismo identificado 96-99% Excelente Numérico 1 organismo identificado 93-95% Muy buena Numérico 1 organismo identificado 89-92% Buena Numérico Identificación de más de una especie o de más de un género Cualitativa _ VITEK MS Una lista de posibles organismos es dada cuando el espectro obtenido no es reconocido <60% Baja discriminación Numérico _ VITEK 2XL 2-3 organismos identificados 85-88% Aceptable Numérico Más de 3 organismos o ninguno La suma de opciones es igual a 100; después de la resolución de una elección, el porcentaje de probabilidad refleja el número asociado con la opción seleccionada Baja discriminación Numérico No identificado Cualitativa V VITEK MS No se identificó ningún microorganismo <60% No ID Numérico V- No aplica Organismo no Numérico 24 VITEK 2XL identificado METODOLOGÍA Metodología para cepas ATCC y provenientes de especímenes clínicos de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” mediante MALDI-TOF MS (VITEK MS de bioMérieux) Ilustración 5 Preparación de la muestra a partir de cepas cultivadas para análisis de MALDI-TOF MS (tomado de Kok J, Chen SC, Dwyer DE, Iredell JR. Current status of matrix-assisted laser desorption ionisation-time of flight mass spectrometry in the clinical microbiology laboratory. Pathology. 2013 Jan; 45(1):4-17) Metodología para cepas ATCC y provenientes de especímenes clínicos de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” mediante pruebas bioquímicas (VITEK 2XL de bioMérieux). Dentro de los sistemas automatizados para la identificación bacteriana basada en reacciones bioquímicas, se encuentra VITEK 2 que utiliza tecnología de incubación/ crecimiento (Ilustración 6 Preparación de la muestra a partir de cepas cultivadas para análisis de VITEK 2. (www.biomerieux- Muestra de microorganismo desconocido en placa de agar Frotis directo de microorganismo sobre pocillo de la placa Cubrir con solución matriz de CHCA Generar perfil de espectro MALDI-TOF Comparar patrón de referencia de la base de datos Especies identificadas 25 usa.com/servlet/srt/bio/usa/dynPage?open=USA_PRD_LST&doc=USA_PRD_LST_G_PRD_USA_4&pubpa rams.sform=0). Ilustración 6 Preparación de la muestra a partir de cepas cultivadas para análisis de VITEK 2. (www.biomerieux- usa.com/servlet/srt/bio/usa/dynPage?open=USA_PRD_LST&doc=USA_PRD_LST_G_PRD_USA_4&pubparam s.sform=0) http://www.biomerieux-usa.com/servlet/srt/bio/usa/dynPage?open=USA_PRD_LST&doc=USA_PRD_LST_G_PRD_USA_4&pubparams.sform=0 http://www.biomerieux-usa.com/servlet/srt/bio/usa/dynPage?open=USA_PRD_LST&doc=USA_PRD_LST_G_PRD_USA_4&pubparams.sform=0 http://www.biomerieux-usa.com/servlet/srt/bio/usa/dynPage?open=USA_PRD_LST&doc=USA_PRD_LST_G_PRD_USA_4&pubparams.sform=0 26 Los datos de la prueba de un microorganismo desconocido son comparados contra la respectiva base de datos para determinar un valor cuantitativo que se aproxime a los grupos taxonómicos de la base de datos. En la Tabla 6 se especifican los niveles de identificación. Un biopatrón desconocido es comparado con la base de datos de las reacciones para cada género y especie, y se calcula una probabilidad numérica (58). Tabla 6 Niveles de identificación de VITEK 2XL Nivel de confianza de identificación Opciones Probabilidad Comentarios Muy buena 1 organismo identificado 93-95% Buena 1 organismo identificado 89-92% Aceptable 2-3 organismos identificados 85-88% Baja discriminación Más de 3 organismos o ninguno La suma de opciones es igual a 100; después de la resolución de una elección, el porcentaje de probabilidad refleja el número asociado con la opción seleccionada 2-3 géneros exhiben el mismo biopatrón. Realizar pruebas suplementarias Organismo no identificado - No aplica Incluso más de 3 géneros exhiben el mismo biopatrón o el biopatrón es muy atípico. No corresponde a ningún género en la base de datos. Revisar la tinción de Gram y la pureza PLAN DE ANÁLISIS Los datos recolectados serán introducidos en una base de datos computados y procesados, resumidos en tablas y gráficos estadísticos. 27 De acuerdo con las recomendaciones de “Statistical Guidance on Reporting Results from Studies Evaluating Diagnostic Tests; Draft Guidance for Industry and FDA Reviewers” (58), se calculará la especificidad y sensibilidad de la “Identificación de una especie o de un género” de cepas ATCC; para los resultados de “Identificación de una especie o de un género” de especímenes clínicos, obtenidos mediante MALDI-TOF MS y pruebas bioquímicas automatizadas, se utilizará el coeficiente kappa para medir el grado de concordancia. CONSIDERACIONES ÉTICAS No se requiere consentimiento informado del paciente porque no se utilizarán datos de identificación de pacientes de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” para la realización de este estudio. RECURSOS Y FACTIBILIDAD Recursos Humanos a. QFB, QBP y laboratoristas clínicos del área de Microbiología del Laboratorio Clínico de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza”. b. M. en C. Yunuem González Torres. Asesora científica de BioMérieux c. Jefatura de QFB del área de Microbiología del Laboratorio Clínico de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza”. d. Médico residente de Patología Clínica e investigador principal. Recursos Materiales El estudio será sustentado en su totalidad por los departamentos correspondientes y la investigadora, por lo que no se requieren recursos fuera de la unidad ni apoyo externo. A. MALDI-TOF MS 28 1. 0.1 microlitro de cepa de cultivo puro con desarrollo (muestra) 2. Palillos de madera y plástico estériles 3. Placa 4. Reactivos para bacterias a. Cepa ATCC 8739 (E. coli) b. CHCA 5. Reactivos para levaduras a. Acido fórmico b. CHCA 6. Plataforma VITEK MS de bioMérieux 7. Reportes impresos de los resultados de identificación de bacterias y levaduras B. Reacciones bioquímicas 1. Cepa de cultivo puro con desarrollo (muestra) 2. Solución de NaCl 0.45N 3. Nefelómetro digital 4. Casete para tarjetas de identificación y tubos de ensaye 5. Plataforma VITEK 2XL de bioMérieux 6. Reportes impresos de los resultados de identificación de bacterias y levaduras C. Equipo de cómputo propiedad del investigador D. Lápices, plumas, hojas, borrador. Recursos Financieros No se requieren. Factibilidad del estudio El área de Microbiología del Laboratorio Clínico cuenta con cepas ATCC, como insumo para control de calidad de las plataformas de identificación de organismo, y diariamente recibe especímenes clínicos de pacientes externos y hospitalizados de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” para 29 identificación de organismos y susceptibilidad antimicrobiana. Estas pruebas se han realizado, desde hace varios años, en la plataforma VITEK 2XL de bioMérieux y, desde marzo del 2013, en la plataforma VITEK MS de bioMérieux. RESULTADOS Se analizaron 38 muestras de cepas ATCC tanto en VITEK MS y 35muestras de cepas ATCC en VITEK 2XL, ambos de bioMérieux. Los resultados de estas muestras se resumen en las tablas 7, 8 y 9: Tabla 7 Resultados de muestras de cepas ATCC identificadas en VITEK MS y VITEK 2XL de bioMérieux VITEK MS VITEK 2XL Indicadores Identificación de una especie o de un género Buena ID 33 Excelente 17 Muy buena 15 Buena 1 Identificación de más de una especie o de más de un género Baja discriminació n 2 Aceptable 0 Baja discriminación 1 No identificado No ID 3 Organismo no identificado 1 Microorganismo identificado Bacterias Gram positivo 14 13 Bacterias Gram negativo 17 16 Hongos 7 6 Dentro los resultados de las muestras de cepas ATCC analizadas en VITEK 2XL, se reportaron 10 identificaciones de microorganismo con fenotipo incoherente, 1 solicitud de confirmar especie mediante pruebas serológicas y 1 reporte de slashline. 30 Tabla 8 Resultados de identificación de las muestras de cepas ATCC identificadas en VITEK MS de bioMérieux NO. CEPA ORGANISMO HALLADO INDICADOR ¿C O IN C ID E G ÉN ER O ? ¿C O N FI R M A R G ÉN ER O ? ¿C O IN C ID E ES P EC IE ? ¿C O N FI R M A R E SP EC IE ? ATCC6380029 Proteus vulgaris Proteus vulgaris Baja discriminación SI SI SI SI ATCC700323021 Enterobacter hormaechei Enterobacter clocae Baja discriminación SI SI NO SI ATCC12228 Staphylococcus epidermidis Staphylococcus epidermidis Buena ID SI NO SI NO ATCC13253021 Elizabethkingia meningoseptica Elizabethkingia meningoseptica Buena ID SI NO SI NO ATCC14053 Candida albicans Candida albicans Buena ID SI NO SI NO ATCC17666032 Stenotrophonomas maltophila Stenotrophonomas maltophila Buena ID SI NO SI NO ATCC19258 Streptococcus thermophilus Streptococcus thermophilus Buena ID SI NO SI NO ATCC204094 Trichosporon mucoides Trichosporon mucoides Buena ID SI NO SI NO ATCC22019 Candida parapsilopsis Candida parapsilopsis Buena ID SI NO SI NO ATCC25922 Escherichia coli Escherichia coli Buena ID SI NO SI NO ATCC25931030 Shigella sonnei Escherichia coli Buena ID NO SI NO SI ATCC27853-1 Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Buena ID SI NO SI NO ATCC29061-1 Staphylococcus sciuri Staphylococcus sciuri Buena ID SI NO SI NO ATCC29212-1 Enterococcus faecalis Enterococcus faecalis Buena ID SI NO SI NO ATCC29213 Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Buena ID SI NO SI NO ATCC34419 Candida lusitaniae Candida lusitaniae Buena ID SI NO SI NO ATCC35218 Escherichia coli Escherichia coli Buena ID SI NO SI NO ATCC43076082-1 Enterococcus saccharolyticus Enterococcus saccharolyticus Buena ID SI NO SI NO ATCC43079033 Streptococcus equi spp. zooepidermicus Streptococcus equi spp. zooepidermicus Buena ID SI NO SI NO ATCC43534 Oligella ureolytica Oligella ureolytica Buena ID SI NO SI NO 31 ATCC49619009 Streptococcus pneumoniae Streptococcus pneumoniae Buena ID SI NO SI NO ATCC51299-1 Enterococcus faecalis Enterococcus faecalis Buena ID SI NO SI NO ATCC6258 Candida krusei Candida krusei Buena ID SI NO SI NO ATCC700324025-1 Klebsiella oxytoca Klebsiella oxytoca Buena ID SI NO SI NO ATCC700327022-1 Enterococcus casseliflavus Enterococcus casseliflavus Buena ID SI NO SI NO ATCC700603 Klebsiella pneumoniae Klebsiella pneumoniae Buena ID SI NO SI NO ATCC9950 Candida utilitis Candida utilitis Buena ID SI NO SI NO ATCCBAA1026-1 Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Buena ID SI NO SI NO ATCCBAA1744087-1 Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Buena ID SI NO SI NO ATCCBAA747037 Acinetobacter baumannii Acinetobacter baumannii Buena ID SI NO SI NO ATCCBAA749042 Ochrobactrum anthropi Ochrobactrum anthropi Buena ID SI NO SI NO ATCCBAA750044-1 Staphylococcus saprophyticus Staphylococcus saprophyticus Buena ID SI NO SI NO ATCCBAA751041 Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes Buena ID SI NO SI NO ATCCBAA976-1 Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Buena ID SI NO SI NO ATCCMYA2950 Candida glabrata Candida glabrata Buena ID SI NO SI NO ATCC43076082 Enterococcus saccharolyticus - No ID NO NO NO NO ATCC700324025 Klebsiella oxytoca - No ID NO NO NO NO ATCCBAA1744087 Pseudomona aeruginosa - No ID NO NO NO NO 32 Tabla 9 Resultados de las muestras de cepas ATCC identificadas en VITEK 2XL de bioMérieux NO. CEPA ORGANISMO HALLADO INDICADOR ¿C O IN C ID E G ÉN ER O ? ¿C O N FI R M A R G ÉN ER O ? ¿C O IN C ID E ES PE C IE ? ¿C O N FI R M A R E SP EC IE ? OBSERVACIONES ATCC700323021 Enterobacter hormaechei Slashline Baja discriminación SI NO NO SI Enterobacter clocae complex ATCCBAA751041 Listeria monocytogenes Sphingomonas paucimobilis Buena NO SI NO SI Fenotipo incoherente ATCC12228 Staphylococcus epidermidis Staphylococcus epidermidis Excelente SI NO SI NO ATCC13253021 Elizabethkingia meningoseptica Elizabethkingia meningoseptica Excelente SI NO SI NO ATCC14053 Candida albicans Candida albicans Excelente SI NO SI NO ATCC17666032 Stenotrophonomas maltophila Stenotrophonomas maltophila Excelente SI NO SI NO ATCC204094 Trichosporon mucoides Trichosporon mucoides Excelente SI NO SI NO ATCC29061031 Staphylococcus sciuri Staphylococcus sciuri Excelente SI NO SI NO ATCC34419 Candida lusitaniae Candida lusitaniae Excelente SI NO SI NO ATCC43076082 Enterococcus saccharolyticus Enterococcus saccharolyticus Excelente SI NO SI NO ATCC700324025 Klebsiella oxytoca Klebsiella oxytoca Excelente SI NO SI NO ATCC700327022 Enterococcus casseliflavus Enterococcus casseliflavus Excelente SI NO SI NO ATCC9721086 Pseudomona aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Excelente SI NO SI NO ATCC9950 Candida utilis Candida utilis Excelente SI NO SI NO ATCCBAA1744087 Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Excelente SI NO SI NO ATCCBAA747037 Acinetobacter baumannii Acinetobacter baumannii Excelente SI NO SI NO ATCCBAA749042 Ochrobactrum anthropi Ochrobactrum anthropi Excelente SI NO SI NO ATCCBAA750044 Staphylococcus saprophyticus Staphylococcus saprophyticus Excelente SI NO SI NO ATCCMYA2950 Candida glabrata Candida glabrata Excelente SI NO SI NO ATCC25922 Escherichia coli Escherichia coli Muy buena SI SI SI SI Fenotipo incoherente ATCC25931030 Shigella sonnei Shigella sonnei Muy buena SI SI SI SI Confirmar con pruebas serológicas 33 ATCC27853 Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Muy buena SI SI SI SI Fenotipo incoherente ATCC29212 Enterococcus faecalis Enterococcus faecalis Muy buena SI SI SI SI Fenotipo incoherente ATCC29213 Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Muy buena SI SI SI SI Fenotipo incoherente ATCC35218 Escherichia coli Escherichia coli Muy buena SI SI SI SI Fenotipo incoherente ATCC43079033 Streptococcus equi spp. zooepidermicus Streptococcus uberis Muy buena SI NO NO SI ATCC43534 Oligella ureolytica Cryptococcus albidus Muy buena NO SI NO SI Fenotipo incoherente ATCC49619009 Streptococcus pneumoniae Kocuria rosea Muy buena NO SI NO SI ATCC51299 Enterococcus faecalis Enterococcus faecalis Muy buena SI SI SI SI Fenotipo incoherente ATCC6258 Candida krusei Candida krusei Muy buena SI NO SI NO ATCC6380029 Proteus vulgaris Proteus vulgaris Muy buena SI NO SI NO ATCC700603 Klebsiella pneumoniae Klebsiella pneumoniae Muy buena SI SI SI SI Fenotipo incoherente ATCCBAA1026 Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Muy buena SI SI SI SI Fenotipo incoherente ATCCBAA976 Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Muy buena SI SI SI SI Fenotipo incoherente ATCC19258 Streptococcus thermophilus - Organismo no identificado NO NO NO NO 34 Conforme a los lineamientos de “Statistical Guidance on Reporting Results from Studies Evaluating Diagnostic Tests; Draft Guidance for Industry and FDA Reviewers Draft Guidance”, se utilizaron las siguientes fórmulas para calcular la sensibilidad y especificidad (Ecuaciones 1 y 2) de la identificación de microorganismo en muestrasde cepas ATCC. Ecuación 1 Ecuación 2 VP: verdadero positivo (el resultado de identificación de genero/especie coincide con alguna cepa ATCC, no es necesario confirmar) VN: verdadero negativo (no se identificó organismo alguno) FP: falso positivo (el resultado de identificación de genero/especie coincide con alguna cepa ATCC, pero es necesario confirmar porque presenta fenotipo incoherente o requiere pruebas adicionales) FN: falso negativo (el resultado de identificación de genero/especie no coincide con alguna cepa ATCC, es necesario confirmar resultado) Conforme a las definiciones anteriores, agrupamos los resultados obtenidos de la identificación de género y especie de las muestras de cepas ATCC obtenidos en las plataformas VITEK MS (Tabla 10) y VITEK 2 XL (Tabla 11), ambas de bioMérieux. Tabla 10 Resultados de la identificación de género y especie de microorganismo en muestras de cepas ATCC en VITEK MS de bioMérieux Género Especie VP 32 VN 3 VP 32 VN 3 FP 2 FN 1 FP 1 FN 2 Tabla 11 Resultados de la identificación de género y especie de microorganismo en muestras de cepas ATCC en VITEK 2XL de bioMérieux Género Especie VP 21 VN 10 VP 19 VN 10 FP 3 FN 1 FP 5 FN 1 35 Al sustituir los valores en las fórmulas de sensibilidad (¡Error! No se encuentra el origen de la referencia.) y especificidad (¡Error! No se encuentra el origen de la referencia.) para la identificación de género y especie, según corresponda, obtenemos: VITEK MS Género Especie Sensibilidad = 32 32 + 1 Sensibilidad = 32 32 + 3 Sensibilidad = 0.9697 Sensibilidad = 0.9412 Sensibilidad = 96.97% Sensibilidad = 94.12% Especificidad = 3 3 + 2 Especificidad = 3 3 + 1 Especificidad =0.6000 Especificidad =0.7500 Especificidad =60.0% Especificidad =75.0% VITEK 2XL Género Especie Sensibilidad = 31 31 + 1 Sensibilidad = 19 19 + 1 Sensibilidad = 0.9545 Sensibilidad = 0.9500 Sensibilidad = 95.45% Sensibilidad = 95.0% Especificidad = 10 10 + 3 Especificidad = 10 10 + 5 Especificidad = 0.7692 Especificidad = 0.6667 Especificidad = 76.92% Especificidad = 66.67% Se analizaron 220 muestras clínicas de pacientes de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” en VITEK MS y VITEK 2XL, ambos de bioMérieux (¡Error! No se encuentra el origen de la referencia.). Sin embargo, se eliminaron del muestreo 4 muestras que no presentaron desarrollo del cultivo en placa, 3 muestras contaminadas y 3 muestras con desarrollo de microbiota normal. 36 Ilustración 7Muestras clínicas de pacientes de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” En las tablas 9 y 10 se resumen los resultados obtenidos en la identificación de muestras clínicas de pacientes de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza”. aspirado bronquial, 5 cultivo de ulcera, 2 espermocultivo, 3 expectoracion, 4 exudado faringeo, 6 exudado moco nasal, 4 exudado vaginal, 8 hemocultivo, 21 líquido cefalorraquídeo, 3 liquido peritoneal, 2 liquido pleural, 4 otros, 18 punta de cateter, 12 salida de cateter, 7 secrecion bronquial, 13 secrecion de herida quirurgica, 8 secrecion traqueal, 2 Urocultivo, 88 37 Tabla 12 Resultados de muestras clínicas de pacientes de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” identificadas en VITEK MS y VITEK 2XL de bioMérieux Número de muestras identificadas VITEK MS VITEK 2XL 38 35 Indicadores Identificación de una especie o de un género Buena ID 205 Excelente 57 Muy buena 135 Buena 4 Identificación de más de una especie o de más de un género Baja discriminación 5 Aceptable 3 Baja discriminación 1 No identificado No ID 0 Organismo no identificado 10 Microorganismo identificado Bacterias Gram positivo 100 96 Bacterias Gram negativo 100 94 Hongos 10 10 No identificado 0 10 38 Tabla 13 Comparación de resultados de las muestras clínicas de pacientes de la UMAE Hospital General “Dr. Gaudencio González Garza” del Centro Médico Nacional “La Raza” obtenidos en VITEK MS y VITEK 2XL, ambos de bioMérieux No. VITEK MS VITEK 2XL Género Especie INDICE DE COINCIDENCIA No. muestra Microorganismo identificado Indicador No. muestra Microorganismo identificado Indicador Observaciones V2XL V IT EK M S V IT EK 2 XL C O EF IC IE N TE K A PP A V IT EK M S V IT EK 2 XL C O EF IC IE N TE K A PP A ¿C o in ci d e gé n er o ? ¿C o n fi rm ar ? ¿C o in ci d e es p ec ie ? ¿C o n fi rm ar ? 1 123383-1 Pseudomonas aeruginosa Buena ID 123383-1 Pseudomonas aeruginosa Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 2 123473-1 Enterococcus faecalis Buena ID 123473-1 Enterococcus faecalis Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 3 123513-1 Salmonella group Buena ID 123513-1 Salmonella spp. Muy buena NO NO D NO NO D SI SI NO SI 4 123559-1 Klebsiella oxytoca Buena ID 123559-1 Klebsiella oxytoca Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 5 123527-1 Streptococcus sanguinis Buena ID 123527-1 - Organismo no identificado SI NO B NO NO D NO SI NO SI 6 123552-1 Corynebacterium tuberculostearicum Buena ID 123552-1 - Organismo no identificado NO NO D NO NO D NO SI NO SI 7 123585-1 Escherichia coli Buena ID 123585-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 8 123608-1 Enterococcus faecalis Buena ID 123608-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 9 123690-1 Escherichia coli Buena ID 123690-1 Escherichia coli Muy buena Fenotipo incoherente SI SI A SI SI A SI SI SI SI 10 123701-1 Enterococcus faecalis Buena ID 123701-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 11 123704-1 Escherichia coli Buena ID 123704-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 12 123706-1 Escherichia coli Buena ID 123706-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 13 123708-1 Escherichia coli Buena ID 123708-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 14 123675-1 Pseudomonas aeruginosa Buena ID 123675-1 Serratia macerens Buena Fenotipo incoherente SI NO B SI NO B NO SI NO SI 15 123714-1 Escherichia coli Buena ID 123714-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 16 123716-1 Enterococcus faecalis Buena ID 123716-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 17 123768-1 Enterococcus faecalis Buena ID 123768-1 Enterococcus faecalis Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 18 124109-1 Klebsiella pneumoniae Buena ID 124109-1 Klebsiella pneumoniae Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 39 19 124116-1 Candida albicans Buena ID 124116-1 Candida albicans Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 20 124117-1 Candida albicans Buena ID 124117-1 Candida albicans Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 21 124121-1 Acinetobacter baumanii complex Buena ID 124121-1 Acinetobacter baumanii complex Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 22 124139-1 Klebsiella oxytoca Buena ID 124139-1 Klebsiella oxytoca Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 23 124157-1 Escherichia coli Buena ID 124157-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 24 124159-1 Escherichia coli Buena ID 124159-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 25 123766-1 Morganella morganii spp. morganii Buena ID 123766-1 Morganella morganii spp. morganii Muy buena NO NO D NO NO D SI SI SI SI 26 124161-1 Enterococcus faecalis Buena ID 124161-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 27 124012-1 Staphylococcus epidermidis Buena ID 124012-1 Leuconostoc rnesenteroides spp. cremoris Buena SI NO B NO NO D NO SI NO SI 28 124166-1 Escherichiacoli Buena ID 124166-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 29 124181-1 Klebsiella pneumoniae Buena ID 124181-1 Klebsiella pneumoniae Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 30 124187-1 Enterococcus faecalis Buena ID 124187-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 31 124189-1 Escherichia coli Buena ID 124189-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 32 124191-1 Enterococcus faecalis Buena ID 124191-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 33 124195-1 Enterococcus faecalis Buena ID 124195-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 34 124197-1 Acinetobacter baumanii complex Buena ID 124197-1 Acinetobacter baumanii complex Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 35 124197-1 Acinetobacter baumanii complex Buena ID 124197-1 - Organismo no identificado SI NO B SI NO B NO SI NO NO 36 124203-1 Escherichia coli Buena ID 124203-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 37 124205-1 Acinetobacter baumanii complex Buena ID 124205-1 - Organismo no identificado SI NO B SI NO B NO SI NO NO 38 124135-1 Paenibacillus spp. Buena ID 124135-1 - Organismo no identificado NO NO D NO NO D NO SI NO SI 39 124212-1 Escherichia coli Buena ID 124212-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 40 124213-1 Staphylococcus aureus Buena ID 124213-1 Staphylococcus aureus Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 41 124226-2 Acinetobacter baumanii complex Buena ID 124226-1 Acinetobacter baumanii complex Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 42 124226-2 Acinetobacter baumanii complex Buena ID 124226-1 - Organismo no identificado SI SI A SI NO B NO SI NO NO 43 124253-1 Staphylococcus aureus Buena ID 124253-1 Staphylococcus aureus Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 40 44 124257-1 Escherichia coli Buena ID 124257-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 45 124265-1 Enterococcus faecalis Buena ID 124265-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 46 124273-1 Enterococcus faecalis Buena ID 124273-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 47 124279-1 Klebsiella oxytoca Buena ID 124279-1 Klebsiella oxytoca Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 48 124280-1 Enterococcus faecalis Buena ID 124280-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 49 124286-1 Escherichia coli Buena ID 124286-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 50 124287-1 Escherichia coli Buena ID 124287-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 51 124292-1 Escherichia coli Buena ID 124292-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 52 124296-1 Streptococcus agalactiae Buena ID 124296-1 Enterococcus faecalis Muy buena Fenotipo incoherente SI SI A NO SI C NO SI NO SI 53 124297-1 Escherichia coli Buena ID 124297-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 54 124303-1 Escherichia coli Buena ID 124303-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 55 124305-1 Escherichia coli Buena ID 124305-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 56 124308-1 Enterococcus faecalis Buena ID 124308-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 57 124308-2 Staphylococcus haemolyticus Buena ID 124308-2 Staphylococcus sciuri Muy buena Fenotipo incoherente SI SI A NO SI C SI NO NO SI 58 124312-1 Acinetobacter baumanii complex Buena ID 124312-1 Acinetobacter baumanii complex Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 59 124318-1 Staphylococcus aureus Buena ID 124318-1 Staphylococcus aureus Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 60 124321-1 Staphylococcus aureus Buena ID 124321-1 Staphylococcus aureus Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 61 124327-1 Escherichia coli Buena ID 124327-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 62 124225-1 Pseudomonas aeruginosa Buena ID 124225-1 Enterobacter gergoviae Excelente Fenotipo incoherente SI NO B SI NO B NO SI NO NO 63 124332-1 Escherichia coli Buena ID 124332-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 64 124341-1 Escherichia coli Buena ID 124341-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 65 124373-1 Citrobacter koseri Buena ID 124373-1 Escherichia coli Muy buena Fenotipo incoherente NO SI C NO SI C NO SI NO SI 66 124377-1 Escherichia coli Buena ID 124377-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 67 124254-1 Haemophilus influenzae Buena ID 124254-1 Kocuria varians Muy buena NO NO D NO NO D NO SI NO SI 68 124380-1 Enterococcus faecalis Buena ID 124380-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 69 124383-1 Escherichia coli Buena ID 124383-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 70 124386-1 Escherichia coli Buena ID 124386-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 41 71 124269-1 Morganella morganii spp. morganii Buena ID 124269-1 Morganella morganii spp. morganii Muy buena NO NO D NO NO D SI SI SI SI 72 124388-1 Escherichia coli Buena ID 124388-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 73 124392-1 Enterococcus faecalis Buena ID 124392-1 Enterococcus faecalis Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 74 124394-1 Morganella morganii spp. morganii Buena ID 124394-1 Escherichia coli Aceptable NO SI C NO SI C NO SI NO SI 75 124410-1 Escherichia coli Buena ID 124410-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 76 124437-1 Escherichia coli Buena ID 124437-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 77 124470-1 Enterococcus faecalis Buena ID 124470-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 78 124476-1 Staphylococcus aureus Buena ID 124476-1 Staphylococcus aureus Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 79 124506-1 Escherichia coli Buena ID 124506-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 80 124543-1 Pseudomonas aeruginosa Buena ID 124543-1 Pseudomonas aeruginosa Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 81 124558-1 Acinetobacter baumanii complex Buena ID 124558-1 Acinetobacter baumanii complex Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 82 124579-1 Pseudomonas aeruginosa Buena ID 124579-1 Pseudomonas aeruginosa Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 83 124601-1 Escherichia coli Buena ID 124601-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 84 125238-1 Candida albicans Buena ID 125238-1 Candida albicans Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 85 124315-1 Enterobacter asburiae Baja discriminación 124315-1 Enterobacter asburiae Muy buena NO NO D NO NO D SI SI SI SI 86 124316-1 Enterobacter asburiae Baja discriminación 124316-1 Enterobacter asburiae Muy buena NO NO D NO NO D SI SI SI SI 87 125294-1 Escherichia coli Buena ID 125294-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 88 125323-1 Acinetobacter baumanii complex Buena ID 125323-1 Acinetobacter baumanii complex Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 89 125386-1 Candida albicans Buena ID 125386-1 Candida albicans Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 90 125452-1 Staphylococcus aureus Buena ID 125452-1 Staphylococcus aureus Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 91 125462-1 Klebsiella pneumoniae Buena ID 125462-1 Klebsiella pneumoniae Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 92 125464-1 Staphylococcus aureus Buena ID 125464-1 Staphylococcus aureus Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 93 125468-1 Escherichia coli Buena ID 125468-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 94 125475-1 Escherichia coli Buena ID 125475-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 95 125494-1 Enterococcus faecalis Buena ID 125494-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NOSI NO 96 125499-1 Citrobacter werkmanii Buena ID 125499-1 Enterococcus faecalis Muy buena NO SI C NO SI C NO SI NO SI 97 125522-1 Escherichia coli Buena ID 125522-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 42 98 125534-1 Klebsiella pneumoniae Buena ID 125534-1 Klebsiella pneumoniae Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 99 125538-1 Enterococcus faecalis Buena ID 125538-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 100 125543-1 Enterococcus faecalis Buena ID 125543-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 101 125544-1 Candida albicans Buena ID 125544-1 Candida albicans Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 102 125548-1 Stenotrophomonas maltophilia Buena ID 125548-1 Stenotrophomonas maltophilia Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 103 124403-1 Enterobacter clocae Baja discriminación 124403-1 Citrobacter freundii Excelente NO NO D NO NO D NO SI NO SI 104 125551-1 Staphylococcus aureus Buena ID 125551-1 Staphylococcus aureus Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 105 125552-1 Staphylococcus aureus Buena ID 125552-1 Staphylococcus aureus Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 106 125561-1 Candida glabrata Buena ID 125561-1 Candida glabrata Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 107 124414-1 Morganella morganii spp. Morganii Buena ID 124414-1 Morganella morganii spp. Morganii Muy buena NO NO D NO NO D SI SI SI SI 108 125566-1 Staphylococcus aureus Buena ID 125566-1 Staphylococcus aureus Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 109 124429-1 Streptococcus pyogenes Buena ID 124429-1 Sphingomonas paucimobilis Excelente SI NO B NO NO D NO SI NO SI 110 125571-1 Klebsiella pneumoniae Buena ID 125571-1 Klebsiella pneumoniae Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 111 125571-1 Acinetobacter baumanii complex Buena ID 125571-1 Acinetobacter baumanii complex Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 112 125573-1 Escherichia coli Buena ID 125573-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 113 125574-1 Escherichia coli Buena ID 125574-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 114 125587-1 Pseudomonas aeruginosa Buena ID 125587-1 Pseudomonas aeruginosa Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 115 124466-1 Enterobacter clocae Baja discriminación 124466-1 Enterobacter cloacae Muy buena NO NO D NO NO D SI SI SI SI 116 124469-1 Morganella morganii spp. Morganii Buena ID 124469-1 Morganella morganii spp. morganii Muy buena NO NO D NO NO D SI SI SI SI 117 125590-1 Candida albicans Buena ID 125590-1 Candida albicans Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 118 125592-1 Staphylococcus epidermidis Buena ID 125592-1 Staphylococcus aureus Buena Fenotipo incoherente SI SI A NO SI C SI NO NO SI 119 125593-1 Pseudomonas aeruginosa Buena ID 125593-1 Pseudomonas aeruginosa Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 120 125602-1 Staphylococcus aureus Buena ID 125602-1 Staphylococcus aureus Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 121 125603-1 Staphylococcus aureus Buena ID 125603-1 Staphylococcus aureus Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 122 125607-1 Staphylococcus aureus Buena ID 125607-1 Staphylococcus aureus Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 123 125617-1 Enterococcus faecalis Buena ID 125617-1 Enterococcus faecalis Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 43 124 125621-1 Escherichia coli Buena ID 125621-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 125 124919-1 Streptococcus mitis/oralis Buena ID 124919-1 - Organismo no identificado SI NO B NO NO D NO SI NO SI 126 125623-1 Escherichia coli Buena ID 125623-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 127 125633-1 Escherichia coli Buena ID 125633-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 128 125645-1 Escherichia coli Buena ID 125645-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 129 125295-1 Micrococcus luteus/lylae Buena ID 125295-1 Micrococcus luteus Muy buena NO NO D NO NO D SI SI SI SI 130 125653-1 Klebsiella pneumoniae Buena ID 125653-1 Klebsiella pneumoniae Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 131 125657-1 Escherichia coli Buena ID 125657-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 132 125666-1 Escherichia coli Buena ID 125666-1 Escherichia coli Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 133 125669-1 Escherichia coli Buena ID 125669-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 134 125455-1 Streptococcus mitis/oralis Buena ID 125455-1 - Organismo no identificado SI NO B NO NO D NO SI NO SI 135 125700-1 Staphylococcus aureus Buena ID 125700-1 Staphylococcus aureus Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 136 125702-1 Staphylococcus aureus Buena ID 125702-1 Staphylococcus aureus Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 137 125704-1 Candida albicans Buena ID 125704-1 Candida albicans Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 138 125466-1 Staphylococcus epidermidis Buena ID 125466-1 - Organismo no identificado SI NO B NO NO D NO SI NO SI 139 125732-1 Pseudomonas aeruginosa Buena ID 125732-1 Pseudomonas aeruginosa Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 140 125739-1 Acinetobacter baumanii complex Buena ID 125739-1 Acinetobacter baumanii complex Muy buena SI SI A SI SI A SI NO SI NO 141 125752-1 Klebsiella pneumoniae Buena ID 125752-1 Klebsiella pneumoniae Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 142 125755-1 Candida lusitaniae Buena ID 125755-1 Candida lusitaniae Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 143 125797-1 Escherichia coli Buena ID 125797-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 144 125800-1 Escherichia coli Buena ID 125800-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 145 125499-1 Citrobacter freundii Buena ID 125499-1 Citrobacter freundii Muy buena NO NO D NO NO D SI SI SI SI 146 125806-1 Escherichia coli Buena ID 125806-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 147 125893-1 Enterococcus faecalis Buena ID 125893-1 Enterococcus faecalis Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 148 125894-1 Escherichia coli Buena ID 125894-1 Escherichia coli Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 149 125896-1 Enterococcus faecalis Buena ID 125896-1 Enterococcus faecalis Excelente SI SI A SI SI A SI NO SI NO 150 123524-1 Staphylococcus epidermidis Buena ID 123524-1 Staphylococcus epidermidis Muy buena SI SI A NO NO D SI NO SI SI 44 151 123609-1 Proteus mirabilis Buena ID 123609-1 Proteus mirabilis Muy buena SI SI A NO NO D SI NO SI SI 152 123635-1 Staphylococcus epidermidis Buena ID 123635-1 Staphylococcus epidermidis Muy buena SI SI A NO NO D SI NO SI SI 153 123659-1 Staphylococcus epidermidis Buena ID 123659-1 Staphylococcus epidermidis Muy buena SI SI A NO NO D SI NO SI SI 154 123660-1 Staphylococcus epidermidis Buena ID 123660-1 Staphylococcus epidermidis Muy buena SI SI A NO NO D SI NO SI SI 155 123732-1 Staphylococcus epidermidis Buena ID 123732-1 Staphylococcus epidermidis Muy buena SI SI A NO NO D SI NO SI SI 156 123737-1 Staphylococcus epidermidis Buena ID 123737-1 Staphylococcus epidermidis Muy buena SI SI A NO NO D SI NO SI SI 157 123754-1 Staphylococcus hominis spp. hominis Buena ID 123754-1 Staphylococcus hominis spp. hominis Muy buena SI SI A NO NO D SI NO SI SI 158 124029-1 Staphylococcus arlettae Buena ID 124029-1 Staphylococcus warneri Buena Fenotipo incoherente SI NO B NO NO D SI NO NO SI 159 124104-1 Staphylococcus epidermidis Buena ID 124104-1 Staphylococcus epidermidis Muy buena SI SI A NO NO D SI NO SI SI 160 124110-1 Staphylococcus hominis spp. hominis Buena ID 124110-1 Staphylococcus hominis spp. hominis Muy buena SI SI A NO NO D SI NO SI SI 161 124131-1 Enterococcus faecium Buena ID 124131-1 Enterococcus faecium/gallinarum
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