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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE MEDICINA DIVISIÓN DE ESTUDIOS DE POSGRADO E INVESTIGACIÓN INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS ISMAEL COSIO VILLEGAS RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS ALERGÉNICAS DE HONGOS COMESTIBLES EN UN CASO DE ANAFILAXIA POR CHAMPIÑON T E S I S QUE PARA OBTENER EL GRADO ACADÉMICO DE SUB ESPECIALISTA EN ALERGOLOGÍA E INMUNOLOGÍA CLÍNICA P R E S E N T A YESID BRIAN OLIDEN SAAVEDRA TUTOR DE TESIS: DR. LUIS MANUEL TERÁN JUÁREZ DR. ERIK ELVIN GÓMEZ CARDONA CIUDAD DE MÉXICO AGOSTO 2017 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 2 Este trabajo fue realizado en el departamento de Alergia e Inmunogenética del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias “Dr. Ismael Cosío Villegas” (INER) Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 3 INVESTIGADORES ASOCIADOS Ana Paula Carreón Rodríguez. Químico farmacéutico Biotecnólogo Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 4 En primer lugar agradezco al apoyo eterno de mi Madre Elizabeth Saavedra Ruiz, quien a lo largo de mi formación supo ser el motor que impulsó mis actos, el hombro para descansar y el cable a tierra en los momentos adversos; y a mi padre Luis Alberto Oliden Rivadineira (†), que te diste las formas de estar conmigo todo este tiempo y seguir iluminando mis días oscuros, y animándome en los momentos de desesperación. A mis hermanos que siempre se hicieron presentes de una forma u otra, Christian por ser el ejemplo de Médico a seguir, y Luis, el mejor amigo que podría tener en el mundo. A mis tutores, Erik Gómez Cardona que supo trabajar con paciencia y buen humor cumpliendo con todos los objetivos que nos trazamos; y al Dr. Luis Manuel Terán Juárez quien tuvo la visión de convertir un evento desafortunado en este trabajo. A mis profesores: Fernando Ramírez Jiménez, Gandhi Pavón Romero, y María de la Luz García quienes a lo largo de estos 2 años compartieron todos sus conocimientos e incidieron en el resultado final de mi persona como profesional. A mi compañera de ruta por su apoyo y ánimo constante. Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 5 INDICE I. RESUMEN _____________________________________________________________ 9 II. MARCO TEORICO______________________________________________________ 11 1. ALERGIA ALIMENTARIA_________________________________________________ 11 A. INTRODUCCION _______________________________________________________ 11 B. DEFINICION __________________________________________________________ 12 C. EPIDEMIOLOGIA ______________________________________________________ 13 D. FISIOPATOLOGIA _____________________________________________________ 17 E. MANIFESTACIONES CLINICAS ___________________________________________ 20 a) Reacciones inmediatas …………………………………………………………………………. 22 b) Reacciones mediatas …………………………………………………………………………… 22 c) Reacciones mixtas ……………………………………………………………………………… 23 F. PRUEBAS DIAGNOSTICAS ______________________________________________ 23 a) Reto oral ………………………………………………………………………………….. 23 b) IgE especifica …………………………………………………………………………….. 23 c) Pruebas cutáneas ……………………………………………………………………….. 24 2. ALERGENOS __________________________________________________________ 25 A. DEFINICION ______________________________________________________ 25 B. PRINCIPALES ALIMENTOS _________________________________________ 27 a) Cereales……………………………………………………………………………………. 27 b) Leche de vaca y derivados………………………………………………………………. 28 c) Huevos …………………………………………………………………………………….. 28 d) Pescados…………………………………………………………………………………… 28 e) Crustáceos………………………………………………………………………………… 28 f) Cacahuate…………………………………………………………………………………. 28 g) Soya………………………………………………………………………………………… 29 C. CLASIFICACIÓN___________________________________________________ 29 a) Tropomiosinas…………………………………………………………………………….. 29 b) Parvo albumina……………………………………………………………………………. 30 c) Caseína…………………………………………………………………………………….. 30 d) Prolaminas…………………………………………………………………………………. 30 e) Cupinas…………………………………………………………………………………….. 30 f) Bet v1………………………………………………………………………………………. 30 g) Familias menores ………………………………………………………………………… 31 D. REACTIVIDAD CRUZADA ___________________________________________ 31 E. HOMOLOGIA _____________________________________________________ 35 F. BLAST ___________________________________________________________ 37 3. HONGOS COMESTIBLES________________________________________________ 39 A. INTRODUCCIÓN __________________________________________________ 39 B. MORFOLOGIA ____________________________________________________ 40 C. REPRODUCCION __________________________________________________ 42 D. CRECIMIENTO DE LOS HONGOS ____________________________________ 42 a) Temperatura 42 b) Humedad 42 c) pH 42 4. CLASIFICACION DE LOS HONGOS _______________________________________ 43 5. IMPORTANCIA DE LOS HONGOS _________________________________________ 45 Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 6 6. CONSUMO DE HONGOS EN MEXICO ______________________________________ 47 7. DESCRIPCION DEL HONGO COMO ALERGENO ____________________________ 48 a) Agaricus bisporus ………………………………………………………………………… 49 b) Pleurotus ostreatus……………………………………………………………………….. 52 c) Ustilago maydis…………………………………………………………………………… 53 III. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ______________________________________ 54 IV. JUSTIFICACION _______________________________________________________ 55 V. HIPOTESIS ___________________________________________________________ 56 VI. OBJETIVOS __________________________________________________________ 57 VII. MATERIALES Y METODOS _____________________________________________ 58 a) Tipo de estudio ……………………………………………………………………………. 58 b) Población de estudio……………………………………………………………………… 58 c) Criterios de elección………………………………………………………………………. 58 VIII. DESCRIPCIÓN DEL ESTUDIO __________________________________________ 60 a) Sujetos……………………………………………………………………………………… 60 b) Procedimiento diagnóstico………………………………………………………………..61 c) Extracción de proteínas de hongos……………………………………………………... 62 d) Inmunodetección de proteínas alergénicas……………………………………………. 62 e) Comparación de secuencia de proteínas………………………………………………. 63 IX. RESULTADOS ________________________________________________________ 64 a) Sujetos ……………………………………………………………………………………... 64 b) Inmunorreactividad………………………………………………………………………… 64 c) Reactividad de población de alergia a alimentos……………………………………… 68 d) Comparación de secuencias ……………………………………………………………. 76 X. DISCUSIÓN ___________________________________________________________ 80 XI. CONCLUSIONES ______________________________________________________ 86 XII. BIBLIOGRAFIA ______________________________________________________ 87 XIII. ANEXOS ____________________________________________________________ 96 Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 7 INDICE DE TABLAS TABLA 1. Tolerancia a largo plazo según alimento ________________________________ 14 TABLA 2. Manifestaciones Clínicas de acuerdo al órgano diana _____________________ 21 TABLA 3. Enfermedades relacionadas con alergia mediada por IgE __________________ 22 TABLA 4. Enfermedades relacionadas con alergia alimentaria no-mediada por IgE ______ 22 TABLA 5. Enfermedades relacionadas con alergia alimentaria de causa mixta __________ 23 TABLA 6. Comparación del valor predictivo diagnóstico de PC e IgE específica _________ 24 TABLA 7. Identidad y similitud descrita para Tropomiosina en las distintas especies _____ 32 TABLA 8. Características morfológicas de las micelas _____________________________ 42 TABLA 9. Principales usos de los metabolitos procedentes de esporas en farmacología __ 46 TABLA 10. Consumo de hongos comestibles en población mexicana _________________ 47 TABLA 11. Manejo de hongos comestibles ______________________________________ 48 TABLA 12. Clasificación taxonómica de los principales hongos comestibles ____________ 50 TABLA 13. Valoración nutricional de los hongos por cada 100gr _____________________ 51 TABLA 14. Características de la población de estudio _____________________________ 69 TABLA 15. BLAST realizado comparando la SOD de A. bisporus ____________________ 77 TABLA 16. BLAST realizado comparando la SOD de Pleurotus ostreatus _____________ 78 TABLA 17. BLAST realizado comparando la SOD del Ustilago maydis________________ 79 Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 8 INDICE DE FIGURAS FIGURA 1 Distribución de grupos de trabajo del MEXIPREVAL___________________ 15 FIGURA 2 Frecuencia de alimento sospechado en alergia alimentaria según edad____ 16 FIGURA 3 Frecuencia del alimento reportado como causa de alergia alimentaria_____ 16 FIGURA 4 Fisiopatología de Alergia alimentaria_______________________________ 18 FIGURA 5 Teoría de exposición dual para la sensibilización_____________________ 19 FIGURA 6A Inducción a la tolerancia en la mucosa gastrointestinal_________________ 20 FIGURA 6B Sensibilización alérgica en la mucosa gastrointestinal__________________ 20 FIGURA 7A Esquematización sobre la identidad entre Der p10 y Cra c1 (Tropomiosina) 34 FIGURA 7B Esquematización sobre las diferencias entre identidad y similitud_________ 34 FIGURA 8 Reactividad cruzada y cruces alergénicos___________________________ 35 FIGURA 9 Organización de las proteínas.____________________________________ 36 FIGURA 10 Reconocimiento de IgE a los epitopos______________________________ 37 FIGURA 11 Representación esquemática de los 7 reinos según Kendrick____________ 40 FIGURA 12 Esquematización de la anatomía de un hongo_______________________ 43 FIGURA 13 Clasificación del reino Fungi _____________________________________ 44 FIGURA 14 Electroforesis en 2 dimensiones y WB bidimensional __________________ 52 FIGURA 15 Principales hongos comestibles___________________________________ 53 FIGURA 16 Electroforesis en 1D con extracto proteico de los distintos hongos________ 70 FIGURA 17 WB de Agaricus bisporus con suero de paciente y control______________ 71 FIGURA 18 WB de Agaricus bisporus var. Brunnescens con suero de paciente y control 71 FIGURA 19 WB de Pleurotus ostreatus con suero de paciente y control_____________ 72 FIGURA 20 WB de Ustilago maydis con suero de paciente y control________________ 72 FIGURA 21 Perfil de proteínas y reactividad en 2D de A. bisporus__________________ 73 FIGURA 22 Perfil de proteínas y reactividad en 2D de A. bisporus var. brunnescens___ 73 FIGURA 23 Diferencia de la reactividad de hongos de la misma especie____________ 74 FIGURA 24 Reactividad 1D contra proteínas de champiñón______________________ 75 FIGURA 25 Características de la SOD del A. bisporus___________________________ 77 FIGURA 26 Características de la SOD del P. ostreatus__________________________ 78 FIGURA 27 Características de la SOD del U. maydis____________________________ 79 FIGURA 28 Comparación de la electroforesis 2D ______________________________ 84 FIGURA 29 WB del A. bisporus del estudio de Gabriel y col (2015) y el nuestro_______ 85 Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 9 I. RESUMEN Antecedentes. La alergia alimentaria es una enfermedad con frecuencia y prevalencia alta en la consulta externa y en emergencias. Los alimentos que se ven implicados son los que se consumen con mayor frecuencia. En cuanto al consumo de hongos comestibles, este ha ido incrementando en nuestro país. El diagnóstico correcto de alergia alimentaria requiere la demostración de la presencia de Inmunoglobulina E específica contra el alimento involucrado. En el caso de los hongos comestibles, aun no se han identificado los determinantes alergénicos involucrados de inducir respuesta alérgica en individuos susceptibles Objetivo general. Reconocer el perfil de proteínas potencialmente alergénicas en hongos comestibles Objetivos específicos. Evaluar el perfil de inmunorreactividad a hongos comestibles en paciente alérgico al Agaricus bisporus; Identificar las diferencias de reactividad a proteínas de hongos comestibles de la misma especie en paciente alérgico a Agaricus bisporus. Comparar las proteínas encontradas en el Agaricus bisporus en pacientes con alergia alimentaria a otros alimentos. Métodos. Estudio básico experimental tipo n=1. Inicialmente se purificó proteína de los hongos comestibles y se estableció el perfil de estas mediante electroforesis en 1D. Posteriormente se evaluó por Western blot (WB) la inmunorreactividad en 1D con A. bisporus (Champiñón), A bisporus var brunnescens (Portobello), Pleurotus ostreatus (Setas), y Ustilago maydis (Huitlacoche), además de WB en 2D para A bisporus y la variedad brunnescens. Se utilizó como anticuerpo primario el suero de un paciente que desarrolló anafilaxia posterior a la ingesta del A. bisporus. Resultados. En la electroforesis de 1D para evaluar el perfil proteico de los distintos hongos comestibles estudiados, encontramos bandas proteicas con distintos pesos moleculares. En el caso de los agaricales (A. bisporus, A bisporus var brunnescens) se Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 10 encontraron bandas similares.Con distintos grados de intensidad. El WB realizado con el suero del paciente y las proteínas de los hongos comestibles, se reconocieron distintas bandas proteicas para cada uno de ellos, siendo los agaricales quienes expresaron más bandas, seguida del P. ostreatus, y en último lugar el U. maydis con menos bandas. Se realizó WB en 2D para los agaricales reconociendo un total de 55 spots para la variedad brunnescens y 49 para el A. bisporus. Muchas de ellas compartidas por ambos hongos. Conclusiones. Con el presente estudio reconocimos proteínas de hongos comestibles que unen IgE de paciente con anafilaxia y que potencialmente tienen actividad alergénica. Con este estudio se inicia el procedimiento de identificación de las proteínas alergénicas con su consiguiente introducción a la base de datos de alérgenos alimentarios. Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 11 RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS ALERGÉNICAS DE HONGOS COMESTIBLES EN UN CASO DE ANAFILAXIA POR CHAMPIÑON II. MARCO TEORICO 1. Alergia alimentaria. A. Introducción La enfermedad alérgica es un fenómeno presente en la humanidad desde el nacimiento de la misma. Esta ha sufrido modificaciones en cuanto a la definición a lo largo de los años por lo que también los métodos diagnósticos, epidemiología, y tratamiento han presentado la misma variabilidad (1). Debido a la diversa terminología usada en la enfermedad alérgica, la Academia Europea de Alergología e Inmunología Clínica (EAACI por sus siglas en Ingles) junto con la Organización Mundial de Alergia (WAO por sus siglas en inglés) publicaron una serie de recomendaciones para establecer la nomenclatura y de esta forma poder englobar las distintas enfermedades que pertenecen a “Alergia” (2). Alergia se define como reacción de hipersensibilidad iniciada por mecanismos inmunológicos, la cual puede ser mediada por anticuerpos o células. Cuando el anticuerpo responsable pertenece al isotipo IgE se dice que los pacientes padecen de una “Alergia mediada por IgE”, sin embargo, no todas las reacciones mediadas por anticuerpos se asocian a IgE, pudiendo pertenecer al isotipo IgG, como es el caso de la anafilaxia inducida por inmunocomplejos, enfermedad del suero. Además de existir Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 12 enfermedades que tienen tanto anticuerpos IgG como IgE como es el caso de la Aspergilosis Broncopulmonar Alérgica (ABPA). Las reacciones alérgicas no-mediadas por IgE se refieren a aquellas cuya fisiopatología engloba la activación de células del sistema inmune como puede ser el Linfocito T, macrófagos, Etc. (2). Alérgeno se define como antígenos que causan alergia. Principalmente estas son proteínas o carbohidratos puros (en el menor de los casos) y en mucho menos porcentaje los isocianatos y anhídridos que actúan como haptenos. Atopia Es la tendencia personal y/o familiar generalmente manifestada desde la niñez o adolescencia para sensibilizarse y producir anticuerpos IgE en respuesta a alérgenos comunes. Hipersensibilidad es la presencia de síntomas o signos objetivamente reproducibles iniciados por la exposición a un estímulo definido que es tolerado en sujetos normales. Hipersensibilidad no-alérgica Es el término propuesto para describir la hipersensibilidad en la que no se puedan probar mecanismos inmunológicos (2). Los cambios en el ambiente, el estilo de vida, la dieta local, y la calidad de vida son algunas variables que influyen a que el individuo desarrolle de novo la enfermedad alérgica con todas sus manifestaciones (3). B. Definición. El Instituto Nacional de Enfermedades Alérgicas e Infecciosas (NIAID por sus siglas en inglés) define Alergia alimentaria como: “Reacción adversa con efectos en la salud Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 13 secundaria a una respuesta inmune específica que ocurre a la exposición de un alimento y que tiende a ser reproducible” (4). Esta definición no se limita a las reacciones inmunológicas mediadas por IgE ampliado su uso a la inducción de síntomas y signos clínicos. Lo contrario a Sensibilidad o sensibilización que se refiere a la presencia de anticuerpos IgE hacia algún alimento en ausencia de sintomatología tras la exposición (5). Las reacciones alérgicas a los alimentos pueden clasificarse con base en parámetros clínicos o inmunológicos (6). Existe una elevada asociación de alergia alimentaria con otras enfermedades alérgicas durante la edad pediátrica, incluyendo: Dermatitis atópica (22%) (7), Rinitis alérgica (8%) (8), Asma (4%) entre otras. Sin embargo no hay estudios a la fecha que repliquen dichas asociaciones en la población adulta (9). C. Epidemiología Los datos estadísticos en el rubro de la alergia alimentaria son muy variables debido a la falta de consenso en cuanto al diagnóstico (6). Es así que para el 2008, un 25% de la población de Estados Unidos cree que tiene algún tipo de alergia alimentaria (10), en el caso de la población europea un 19% de la población manifiesta haber percibido alguna molestia tras la ingesta de algún alimento en particular (11). En cuanto a la edad adulta, un 8% de la población europea según datos de la Encuesta de Salud Respiratoria de la Comunidad Europea evita alimentos que alguna vez desencadenaron síntomas en piel, gastrointestinal, y mucosas (12). Aproximadamente, existen 170 alimentos claramente identificados como alergénicos (13), de los cuales 8 son responsables de un 90% del total de las reacciones (14), los cuales en orden son: leche, huevo, soja, trigo, cacahuate, nueces, pescados y Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 14 mariscos durante la edad pediátrica. Sin embargo, un alto porcentaje de estos casos desarrolla tolerancia oral a largo plazo (15) (Tabla 1). Tabla 1. Tolerancia a largo plazo según alimento AUTOR/ AÑO TIPO DE ESTUDIO SEGUIMIENTO POBLACIÓN ALÉRGENO RESULTADO Pyziak 2011 Prospectivo 5 años 83 niños, Dx 3 a Leche, Huevo, Soya, Carne 87.9% adquirió tolerancia Savage 2010 Retrospectivo 5 años 133 niños Soya 25% <4a 45% 6a 69% 10 a Keet 2009 Retrospectivo 31m 103 niños IgE positiva para trigo Trigo 29% 4 a 45% 6 a 56% 8 a 62% 10 a 65% 12 a 70% 14 a Savage 2007 Retrospectivo 4 años 881 niños Huevo 4% 4 a 12% 6 a 68% 16 a Levy 2007 Prospectivo 5 años 43 APLV t 62 APLVp APLV 100% t 12% p APLVt: alergia a la proteína de leche de vaca transitoria, APLVp alergia a la proteína de leche de vaca persistente; Dx: Diagnóstico En los departamentos de urgencias en Estados Unidos, la alergia alimentaria representa el primer motivo de consulta de causa alérgica representando un total de 300.000 atenciones por reacciones anafilácticas de las cuales 2.000 requirieron hospitalización y cerca de 200 casos tuvieron desenlace fatal (10). El estudio MEXIPREVAL realizado durante 2013-2014 planteó como objetivo el establecer criterios diagnósticos de alergia alimentaria según grupo etario. Recogió información de distintos centros especializados en la consulta de alergia de todo el país distribuidosen 8 regiones: Noroeste, Noreste, Occidente, Región Centro A, Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 15 Región Centro B, Sur, Península y Ciudad de México realizando un total de 1,971 encuestas (Figura 1). Figura 1: Distribución de los grupos de trabajo en las 8 regiones explicadas en el recuadro de la derecha. (Imagen original tomada de la referencia 6) Los resultados obtenidos por los distintos grupos de trabajo fueron: asociación con atopia en un 100% (Figura 2). Un 80% de los pacientes reportó síntomas en relación a la ingesta de alimentos de los cuales solo el 48% fue referido para su atención. Los síntomas referidos en relación a la sospecha de alergia alimentaria fueron cutáneos (57%), Rinitis (42%), Síntomas gastrointestinales (34%), Asma (23%), Síndrome de alergia oral (SAO) (18%), anafilaxia (5%), Anafilaxia inducida por ejercicio (2%). Al ser los síntomas cutáneos los más referidos fueron: Dermatitis atópica (41%), Urticaria (26%), Angioedema (8%), Urticaria de contacto (1%). En cuanto al alimento reportado como causa de alergia en relación al cuadro clínico, evidenciaron diferencias tanto en la forma de presentación como en la edad de presentación (Figura 2 y 3). El método diagnóstico para establecer el diagnóstico fue principalmente la Historia Clínica (96%), Pruebas cutáneas por escarificación (28%) y por prick-to-prick (9%), Reto oral abierto (18.5%), IgE especifica (16.3%), Pruebas de parche (5%). Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 16 Figura 2. Frecuencia del alimento sospechoso según grupo de edad. Figura 3: Frecuencia del alimento reportado como causa de alergia alimentaria en relación con el cuadro clínico. (Imagen original tomada de la referencia 6) Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 17 D. Fisiopatología de la alergia alimentaria Los modelos animales experimentales permiten el avance para entender a la fisiopatología subyacente en la sensibilización alérgica. La respuesta normal ante antígenos inocuos es la tolerancia, la cual es mediada por la presentación de antígeno por las células dendríticas CD103+ en el tracto gastrointestinal, Células dendríticas CD11b+ a nivel de piel junto con las de Langerhans muestran también papel en este fenómeno. El desarrollo de células T regulatorias (Treg) es reemplazado por proliferación de Linfocitos T helper tipo 2 (Th2) los cuales llevan a una respuesta mediada por IgE (8) (Figura 4) En modelos murinos en los que se usan adyuvantes para vencer la tolerancia oral (Enterotoxina B estafilocócica o SEB) la expresión de IL-33 en las células dendríticas intestinales resulta en la inclinación a una respuesta Th2. (16). La IL-33 tiene un rol central en la sensibilización cutánea a alérgenos alimentarios como se demostró con el cacahuate (17). Otra vía por la cual IL-33 promueve la alergia alimentaria es a través de la expansión de células linfoides innatas tipo 2 (ILC2) (18). La IL-9 ha cobrado relevancia en los últimos estudios como una citocina clave de la respuesta Th2 (8). Esta citocina, tiene papel en la expresión del gen que regula a Ls T CD4+ específicos para el cacahuate, además de tener acción pro-inflamatoria a nivel gastrointestinal y de activación de los mastocitos. Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 18 Figura 4. Los factores que inician la respuesta innata como ser el daño, o actividad adyuvante promueve la producción de citocinas por las células epiteliales, activando a las células del sistema innato como la Célula Linfoide Innata tipo 2 (ILC2), Células dendríticas (CD) y basófilos. Las células dendríticas regulan la producción de OC40L la cual estimulará a que la célula T derive en diferenciación de respuesta Th2. Las ILC2 y los basófilos se encargan de amplificar continuamente la respuesta celular Th2 a través de la producción de citocinas propias del patrón Th2. Las células Th2 promueven el cambio de isotipo de las células B a IgE a través de la producción de IL-4. La IgE acoplada en la membrana de los mastocitos y basófilos es la responsable de las manifestaciones clínicas posterior al ingreso del alérgeno. La IL-9 resulta crucial para la expansión de los mastocitos que contribuye a los síntomas alérgicos. La piel también puede ser un sitio de sensibilización como ocurre en la alergia al cacahuate en población con eccema activo. Fue tras la evidencia que el uso de pañales que contenía aceite en base de cacahuate incrementaba el riesgo a largo plazo de desarrollo de alergia al cacahuate (24). Estos hallazgos dieron como resultado la “Hipótesis de exposición dual en la alergia alimentaria y tolerancia (Figura Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 19 5). Finalmente la tolerancia a los alimentos se da por estimulo de células Treg (Figura 6A y 6B) (23). Figura 5. La teoría de la exposición dual para alergia alimentaria y tolerancia. Involucrando la ruta oral y la cutánea como desencadenantes. CD103+ induce tolerancia mediante la promoción de factores locales como GM-CSF, y Muc2. Las células dendríticas CD103+ migran a nodos linfoides para inducir Treg. Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 20 Figura 6A. Inducción de tolerancia en la mucosa gastrointestinal. Las células dendríticas (DC) CD103+ de la lámina propria intestinal captan antígenos alimentarios de la ruta oral y las transportan a los nodos linfáticos mesentéricos donde en condiciones normales polarizan a una respuesta de linfocitos T naive CD4+ a células T reguladoras (Treg) por mecanismos que involucran ácido retinoico, Indolamina 2,3 dioxigenasa, factor de crecimiento transformante ß y 4-1 BB (Imagen original tomada de la referencia 23) Figura 6B. Sensibilización alérgica en la mucosa gastrointestinal. En presencia de adyuvantes como Toxina cólera, o Enterotoxina B, Las células dendríticas (DC) CD103+ de la lámina propria capturan antígenos alimentarios de la ruta oral y las transportan a los nodos linfáticos mesentéricos donde polarizan a una respuesta de linfocitos T naive CD4+ a Th2 mediante mecanismos que involucran OX40L y TIM-4 (Imagen original tomada de la referencia 23) Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 21 E. Manifestaciones clínicas El espectro clínico de las de la alergia alimentaria varía de acuerdo al mecanismo fisiopatológico subyacente. Lo cual permite clasificar estas en mediadas por IgE o inmediatas, No-mediadas por IgE o mediatas, y mixtas (9). Los síntomas pueden abarcar distintos órganos teniendo diferencias clínicasde la manifestación (Tabla 2). Muchas veces los síntomas pueden abarcar uno o más sistemas y también tener manifestaciones inmediatas y tardías al mismo tiempo. Tabla 2. Principales manifestaciones clínicas de acuerdo al órgano diana. (Tabla original tomada de la referencia 15) Órgano diana Síntomas inmediatos Síntomas tardíos Cutáneo Eritema Prurito Urticaria Eritema morbiliforme Angioedema Eritema/Eccema “Flushing” Prurito Eritema morbiliforme Angioedema Ocular Prurito Eritema conjuntival Epifora Edema peri orbital Vía respiratoria superior Congestión nasal Prurito Rinorrea Estornudos Edema laríngeo Estridor Vía respiratoria inferior Tos Opresión torácica Disnea Sibilancias Retracción intercostal Tos Disnea Sibilancias Gastrointesti nal (Oral) Angioedema en labios, lengua o paladar Gastrointesti nal Nausea Dolor tipo cólico Reflujo Vomito Diarrea Nausea Dolor abdominal Nausea/vomito Diarrea Hematoquezia Cardiovascu lar Taquicardia (Ocasionalmente bradicardia) Hipotensión Ansiedad Sincope Miscelánea Contracción uterina Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 22 a) Reacciones Inmediatas. Estas principalmente son mediadas por IgE englobando 6 condiciones (Tabla 3). Tabla 3. Enfermedades relacionadas con alergia mediada por IgE Desorden Características clínicas Alimentos más frecuentes Urticaria aguda/Angioedema Se relacionan en un 20% de causa aguda, menos del 5% se comporta como urticaria crónica Alérgenos mayores* Urticaria de contacto Contacto directo origina lesiones, Múltiples Anafilaxia Entidad rápidamente progresiva, multiorgánica que puede incluir el colapso cardiovascular Cacahuate, Avellanas, Mariscos, pescado, leche y huevo Anafilaxia alimentaria relacionada con ejercicio Solo se desarrollan manifestaciones clínicas si se hace ejercicio posterior. Trigo, camarón, trigo, arroz Síndrome de alergia oral Prurito y Angioedema en cavidad oral. Rara vez lleva a la anafilaxia (<1%) Síndrome polen frutas *: Alérgenos mayores de acuerdo a la IUIS para pólenes, epitelios, pastos y malezas b) Mediatas. Principalmente sin no-mediadas por IgE-E o mediadas por células. Se reconocen 4 entidades características con diferencias metabólicas y clínicas (Tabla 4). Tabla 4. Enfermedades relacionadas con alergia alimentaria no-mediada por IgE. Desorden Características Alimentos frecuentes Síndrome de Enterocolitis inducida por proteínas Afecta a niños, exposición crónica, emesis, diarrea, bajo crecimiento, Leche de vaca, soya, arroz, carne Proctocolitis inducida por proteínas Evacuaciones con moco Leche Dermatitis de contacto alérgica De causa ocupacional por microingesta o microexposición Especies, frutas, vegetales Síndrome de Heiner Infiltrados pulmonares retraso de crecimiento, anemia ferropénica Leche de vaca Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 23 c) Mixtas. Tienen presentación tardía con exacerbaciones agudas. Son 3 condiciones (Tabla 5). Tabla 5. Enfermedades relacionadas con alergia alimentaria de causa mixta Desorden Características Alimentos frecuentes Dermatitis atópica Se relaciona con alergia alimentaria en un 35% Leche, huevo Esofagitis eosinofílica Síntomas a la deglución, ERGE, nauseas, vómitos Múltiples Gastroenteritis eosinofílica Ascitis, pérdida de peso, edema, obstrucción Múltiple F. Pruebas Diagnósticas El primer paso para el diagnóstico de alergia alimentaria es el reconocimiento de reacciones mediadas por IgE y las no-mediadas por IgE. a) Reto oral. Es el estándar de oro para el diagnóstico de alergia alimentaria. Este puede ser reto abierto, reto controlado, o doble ciego placebo controlado. Este se realiza cuando la historia clínica del paciente no es consistente. b) IgE especifica. La producción de IgE alérgeno-específica es el punto central en cuanto al desarrollo de alergia alimentaria. El cambio de isoforma de la IgE a nivel intestinal se da en las Placas de Peyer (19). En estudios recientes se ha propuesto la existencia de células B de memoria de larga vida las cuales son la fuente que mantiene los títulos específicos de IgE elevados en la alergia alimentaria requiriendo una exposición antigénica persistente y cooperación con Ls T CD4+ (20). Esto se ha fundamentado en Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 24 que el uso de anticuerpos monoclonales anti-CD20 en pacientes con alergia al cacahuate no afecta los títulos específicos de IgE. Si bien la IgE específica para los alimentos es crucial para el diagnóstico definitivo, todavía no se ha podido establecer el punto de discriminación entre sensibilización y alergia. Otro punto a tomar, es que existen proteínas principalmente en alimentos de la misma familia (Ej. Rosaceae) que tienen reactividad cruzada que no habla de sensibilización. Es ahí que toma fuerza el diagnóstico por Componente Resuelto (CRD) el cual se basa en alérgeno purificado específico (21). Se estableció que existen valores predictivos de IgE especifica por CRD para ciertos alimentos como es el caso de Ara h2 el cual es el alérgeno principal del cacahuate y se relaciona con gravedad de síntomas, a diferencia del Ara h8 el cual tiene alta homología con el Bet v1 presente en el abedul (22). La diversidad de los epitopos en la respuesta IgE-especifica al alimento también habla sobre la reactividad clínica. A mayor reconocimiento de estos, la adherencia y unión a la proteína es mayor. Lo cual también permite distinguir entre fenotipos dentro de la misma alergia como es el caso de APLV transitoria y APLV persistente (23). c) Pruebas cutáneas. Son un método no-estandarizado de evidenciar una respuesta mediada por IgE a nivel cutáneo. Para algunos alimentos existe correlación y valor predictivo como puede ser para la leche, cacahuate, huevo. (26) (tabla 6). Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 25 Tabla 6. Comparación del valor predictivo diagnóstico de PC e IgE específica. (26) > 95% positivo = 75% positivo = 50% negativo Alimento PC sIgE PC sIgE PC sIgE Huevo > 7 > 7 < 3 < 2 Leche de vaca > 8 > 15 < 2 > 5 Cacahuate > 8 > 14 < 3 < 2 antecedente < 5 sin antecedente Pescado > 20 Soya > 30 Trigo > 26 PC: Prueba cutánea expresada en mm; sIgE: IgE específica expresada kU/L Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 26 2. Alérgenos. A. Definición. Se define como alérgeno a cualquier sustancia extraña capaz de ser reconocida por el sistema inmune y que desarrolle una respuesta innata (2). En el ámbito de la alergia. La base de datos oficial y reconocida por la WAO es la de WHO/IUIS (World Health Organization/International Union of ImmunologicalSocieties) la cual identificó 831 alérgenos y casi 1220 secuencias distintas de variantes. Existen sin embargo, otras bases de datos que agrupan de forma más específica a los alérgenos, aunque no estén oficialmente reconocidas permiten a los investigadores iniciar los trabajos de reconocimiento e identificación posterior. La base de datos de la Universidad de Viena – Austria reconoce un total de 1042 alérgenos de los cuales 959 se encuentran distribuidos en 151 familias dejando 83 alérgenos en el grupo de no clasificados. Una vez que por distintas tecnologías se reconoce una proteína alergénica, esta debe ser emulada en otros casos para su completa validación (13). Los alérgenos alimentarios pueden ser de origen animal o vegetal, siendo proteínas todos los involucrados en reacciones IgE-dependientes (4). En general, son glicoproteínas, es decir, poseen una o más moléculas de azucares unidos a las cadenas de aminoácidos. La mayoría son estables al calor, ácidos y proteasas. Representan una mínima porción del alimento, pero aun así,́ poseen gran potencia biológica, de manera que pequeñas cantidades son suficientes para Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 27 desencadenar los síntomas importantes, y también producir respuesta cutánea positiva, en las pruebas de alergia, en las personas sensibilizadas (14). Los alimentos suelen contener uno o varios alérgenos principales, denominados “alérgenos mayores”, a los cuales un 50% de los pacientes sensibilizados responden inmunitariamente, y otros llamados “alérgenos menores”, que solo pocos individuos responden (6). En algunos grupos de alimentos, sobre todo vegetales, la sensibilización a un miembro del grupo implica la sensibilización a otros miembros de la familia (Reactividad cruzada) (27). Como se mencionó previamente, los alimentos más habituales en la alergia alimentaria son los más consumidos ya sea en forma natural o como ingrediente, componente o aditivo de cualquier producto elaborado (28) además algunos aditivos pueden provocar reacciones alérgicas (29), o la infestación parasitaria de alimentos de origen animal como es el caso del Anisakis spp para el pescado también puede producir reacciones tras su ingesta. B. Principales alimentos a) Cereales. El gluten es una proteína que se encuentra en el trigo, cebada, centeno, avena, espelta, trigo kamut y otras variedades híbridas. Aunque es más frecuente la intolerancia al gluten y la autoinmunidad por gluten (Enfermedad celiaca), los mismos cereales pueden causar alergia alimentaria. También se describe alergia al polen del cereal y no así por la ingesta. Las reacciones cruzadas entre trigo, centeno, cebada, avena y arroz son secundarias a la alta homología de estos alimentos. Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 28 b) Leche de vaca y derivados. El consumo de leche puede producir reacciones de alergia a las proteínas contenidas en la misma. La Leche contiene más de 40 proteínas, todas ellas posibles alérgenos. Es frecuente encontrar sensibilidad a varias de estas proteínas de forma simultánea. Los niveles de reactividad cruzada alcanzan hasta un 90% entre vaca, cabra. c) Huevos. La alergia al huevo ocupa el segundo lugar de importancia en pediatría, pero a menudo desaparece hasta los 6 años de edad (15). La yema es menos alergénica que la clara la cual está conformada en un alto porcentaje por ovomucoide. Tiene reactividad cruzada con carne de pollo y gato. d) Pescados. Tienen proteínas específicas de la especie, siendo los más frecuentes los Gadiformes (Bacalao, merluza), los peces planos (Lenguado, gallo), y el atún. En menos frecuencia ocupa el salmón, boquerón, sardina. La Alergia al Anisakis es un evento frecuente. Este es un helminto que infesta distintos pescados y cefalópodos. La reactividad cruzada de los pescados se da por familias y es un evento con alta frecuencia. e) Crustáceos. Se incluyen todas las especies de crustáceos dentro de los que destacan camarones, langosta, cangrejo. Estos tienen una alta homología y reactividad cruzada. Además se describe un cruce importante entre crustáceos y ácaros del polvo doméstico por la Tropomiosina. f) Cacahuate. Es una leguminosa y es la principal causa de anafilaxia. Es muy frecuente en edad pediátrica y tiene alta reactividad cruzada (más del 90%) con otros frutos secos. Son termoestables Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 29 g) Soya. Es más frecuente la alergia por vía inhalatoria que tras la ingesta. Tiende a desaparecer con el transcurso de los años y tiene reactividad cruzada con otras legumbres y lácteos. h) Sulfitos. Se emplean ampliamente en la industria alimentaria y de bebidas. Se utilizan como aditivos, inhibidores del oscurecimiento no enzimático, antimicrobianos para esterilización de envases y preservantes. Se han atribuido reacciones retardadas y agudas, aunque estas últimas son menos frecuentes (31). C. Clasificación. La clasificación clínica de los alérgenos ya fue mencionada previamente como alérgenos mayores y menores de acuerdo al grado de sensibilidad. Sin embargo esta clasificación no es propia del alérgeno sino de la potencialidad de la IgE para unirse. Las propiedades químicas, físicas y naturales de los alérgenos permiten clasificarlos en: a) Tropomiosinas. Forman parte de los invertebrados, son proteínas musculares presentes en crustáceos, moluscos, por lo que también forman parte del grupo denominado panalérgenos. Tiene reactividad cruzada con otras especies como ácaros del polvo doméstico (34). Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 30 b) Parvoalbumina/ Proteínas EF manual. Son determinantes alergénicos mayores de pescados, y ciertos reptiles. Es la segunda familia más importante por la alta reactividad cruzada que tiene. También son panalérgenos (35). c) Caseína: Estabiliza las micelas de la leche de mamíferos tras la unión del calcio. La importancia de la caseína es la alta homología que tiene entre las distintas especies. Se reporta que la leche de vaca tiene una homología alta (Cercana al 90%) con la de otros mamíferos como oveja, cabra. En otros mamíferos, la homología es menor (< al 60%) como mono, camello, humano (36). d) Prolaminas. En esta superfamilia se incluyen subfamilias de distintas funciones y distinta cobertura. En primer lugar la Albumina presente en semillas, frutos secos, y legumbres; Proteínas de transporte lipídico no específicas (ns-LTP´s) presente en frutas, verduras, pólenes, y látex; y α- amilasa/inhibidor de tripsina presente en trigo, cebada, arroz, maíz (37). e) Cupinas. Otra superfamilia de proteínas con funcionalidad diversa que comparten una estructura β-principal asociada a un núcleo. Principalmente son las globulinas las cuales son alérgenos mayores de las legumbres, frutos secos y granos. Las globulinas son principalmente de dos tipos: Leguminosas y vicilinas (38). f) Bet v1. Una superfamilia que se representa como el alérgeno mayor del abedul. Es la proteína 10 relacionada con la patogénesis (PR-10). Desde elpunto de vista alimentario se asocia principalmente con el “Síndrome de Alergia Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 31 Oral” el cual se caracteriza por sensibilización vía inhalada a ciertos pólenes que contengan PR-10 y que manifiesten síntomas orales tras su ingesta. Los alimentos que tienen esta característica son principalmente: Rosáceas (Manzana, pera, frutos con hueso como aguacate y durazno); Apiaceas (Apio, zanahoria); y Fabáceas (Soya y cacahuate) (39). g) Familias menores: las cuales de acuerdo al origen se dividen en: procedentes de alérgenos alimentarios de origen animal: Como lipocalinas, lisozimas, transferrinas, serpinas, oligosacáridos, Inhibidores de ovomucoide de Kazal; y alérgenos alimentarios de origen vegetal como: Quitinasa, profilinas, inhibidores de proteasa, lectinas y proteínas tipo taumatina (40). Además, los alérgenos también han sido clasificados de acuerdo a la fuente (Animales, bacterias, Hongos, Plantas), y según las rutas de exposición (Autoalérgenos, Contacto, iatrogénico, ingesta, inhalación, infestación, picadura de insecto) (40). D. Reactividad Cruzada Al hecho que pacientes alérgicos sensibilizados a un alérgeno especifico pueda presentar una respuesta alérgica a otros agentes distintos indica que los anticuerpos IgE específicos son capaces de reconocer alérgenos se denomina reactividad cruzada (41). La reactividad cruzada puede originarse según dos condiciones. Identidad y Similitud. Se define identidad como el número de coincidencias en secuencia de aminoácidos por cada 100 espacios. Similitud por otro lado, se refiere a la presencia de Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 32 características fisicoquímicas (Peso, carga eléctrica, solubilidad, etc.) en una secuencia de 100 espacios (42) (Figura 7A y 7B). Ambas situaciones no son excluyentes, y el resultado final derivará en el reconocimiento del epitopo por la IgE específica. Los alérgenos tienen reactividad cruzada de acuerdo a la familia de proteínas a las que pertenecen (34), sin embargo también pueden relacionarse con otras especies que pertenezcan a otras familias cuando la identidad y similitud sea alta (37. 39) (Tabla 7) (Figura 8). Tabla 7. Identidad y similitud descrita para Tropomiosina en las distintas especies. Fuente Alérgeno Z-sc %-Id %- Sim Alimento/Fuente Tropomiosina Dermatophagoides pteronysinus 1537.8 100 100 HDM Tropomiosina Dermatophagoides pteronysinus 1519.3 99.3 99.6 HDM Tropomiosina Dermatophagoides pteronysinus 1517.6 99.3 99.3 HDM Tropomiosina Mag 44 Dermatophagoides farinae 1504.1 98.2 99.6 HDM Tropomiosina Dermatophagoides pteronysinus 1492 98.9 98.9 HDM Tropomiosina Lepidoglyphus destructor 1476.1 96.1 98.9 HDM Tropomiosina Blomia tropicalis 1459.4 94.4 98.9 HDM Tropomiosina Tyrophagus putrescentiae 1447.4 93.3 99.3 HDM Tropomiosina Portunus sanguinolentum 1306 82 96.8 Cangrejo Tropomiosina Scylla serrata 1306 82 96.8 Cangrejo Gigante Tropomiosina Portunus trituberculum 1304.2 82 96.8 HDM Isoforma de Tropomiosina Homarus americanus 1301.6 82 96.1 Langosta Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 33 Tropomiosina Erimacrus isenbeckii 1299.8 82 96.8 Cangrejo de crin Tropomiosina Eriocheir sinensis 1298.1 81.7 96.5 Cangrejo oriental Tropomiosina Erimacrus isenbeckii 1285.7 80.6 96.8 Cangrejo de crin Tropomiosina Oratosquilla oratoria 1282.2 81.3 95.8 Camaron mantis Isoforma rápida de Tropomiosina Homarus americanus 1276 80.6 96.1 Langosta Isoforma corta de tropomiosina Paralithodes camtschaticus 1269.8 79.9 95.4 Cangrejo de Kamcahtka Tropomiosina Procambarus clarkii 1263.7 79.9 95.8 Cangrejo rojo de pantano Tropomiosina Portunus pelagicus 1262.8 79.6 95.8 Cangrejo azul Tropomiosina (Lit v 1) Litopenaeus vannamei 1261.9 80.3 95.1 Camarón blanco Tropomiosina Pandalus borealis 1261.9 80.3 95.1 Camarón del Caribe Tropomiosina Crangon crangon 1261 80.3 95.4 Camarón común HDM: House dust mite (Ácaros del polvo doméstico), Zc-sc: Score Zm, % ID: Porcentaje de identidad; % SIM: Porcentaje de similitud Tanto la identidad como la similitud son componentes principales para comprender el concepto de homología. Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 34 Figura 7A. Esquematización sobre la identidad entre la Der p10 y Cra c 1 (Tropomiosina) Figura 7B. Esquematización sobre las diferencias entre identidad y similitud entre cadenas de aminoácidos Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 35 Figura 8. Cada alérgeno se encuentra representado en los óvalos (Blancos: LTPs) y Cuadros (Profilinas). Las líneas muestran la co-sensibilidad y cruces potenciales entre alérgenos. (Imagen original tomada de la referencia 42) E. Homología. Es la relación que existe entre dos partes orgánicas diferentes cuando sus determinantes genéticos tienen el mismo origen evolutivo. En el punto de vista molecular, este concepto se traslada al nivel de organización de las proteínas estructura primaria y/o secundaria similar en dos proteínas distintas que generen una reacción (42). El epítope reconocido por la IgE puede ser dirigido contra los Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 36 plegamientos, secuencias lineales o cadenas terciarias, por lo cual, la homología entre proteínas no es un factor predictor de reactividad cruzada pero puede ayudar a entender casos donde existe una gran distancia filogenética entre organismos y a pesar de ello se da una reacción cruzada (Figura 9 y 10). Existen herramientas bioinformáticas con acceso a bases de datos públicas que permiten la comparación de la secuencia lineal, estructura plegada, y características bioquímicas. Una de las principales herramientas para establecer la homología en secuencia entre dos entidades es BLAST. Figura 9. Nivel de organización de las proteínas. A: Secuencia de una cadena de aminoácidos o Estructura primaria; B. Interacción de secuencia de aminoácidos por enlaces de hidrogeno o Estructura secundaria; C. Atracciones de hélices alfa y hojas plegadas o Estructura terciaria; D. Proteína con 2 o más cadenas de aminoácidos o Estructura cuaternaria. Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 37 Figura 10. Reconocimiento de IgE a los epitopos según el nivel de organización proteica. A: Reconocimiento lineal de AA; B. Reconocimiento de los plegamientos secundarios; C. Reconocimiento de dos cadenas alfa. D. Reconocimiento de dos secuencias de aminoácidos de dos cadenas distintas de la misma proteína. F. Herramienta Básicade búsqueda de alineación local (BLAST). Es un programa informático de alineamiento de secuencias de tipo local (Basic Local Alignment Search Tool). Esta herramienta busca comparar una secuencia problema o query contra una gran cantidad de secuencias introducidas en una base de datos. Es capaz de comparar un parámetro y la significación de los resultados. Su mayor uso está en la búsqueda de probables genes homólogos. Al encontrar una secuencia de novo se introduce en el programa para buscar la comparación con otras secuencias previamente caracterizadas y así poder inferir en su función. Es gracias a esta Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 38 herramienta que una vez identificada la secuencia de aminoácidos de una estructura proteica se puede establecer similitudes e identidades que nos lleven a determinar la homología proteica. Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 39 3. Hongos Comestibles A. Introducción Micología deriva del griego Mikes que significa Sponge (Algo con muchos poros). Estos son microorganismos carentes de clorofila, cuyo talo generalmente filamentoso no consta de órganos como raíces, tallo, ni hojas. Sin embargo algunos hongos poseen estructuras análogas como el Rizoide y Estolones (41). En 1969, Robert H. Whittaker los clasificó en el reino Fungae agrupando a los seres vivos en cinco reinos en la escala biológica: Monera (bacterias, los actinomicetos y algunas algas verdes y azules), Protista (los protozoarios y el resto de las algas), Fungae (Hongos y levaduras), Plantae (Vegetales superiores) y Animalia (Animales superiores) (42). En 1983, Awksworth y colaboradores identificó en el reino Fungi a un total de 64.200 especies distintas con 5.940 géneros y 5.275 sinónimos, de las cuales aplicando en el aspecto clínico se tienen aproximadamente 50 especies que causan enfermedad en el humano y 10.000 que parasitan a las plantas (41). Esta clasificación fue modificada basándose en el advenimiento de la biología molecular e inmunobiología manteniéndose hasta la fecha. Fueron los estudios de B. Kendrick que finalmente clasificó a los seres vivos en 7 reinos: Archaebacteria, Eubacteria, Chromista, Protozoa, Fungi, Plantae y Animalia (figura 11). Los dos primeros tienen células procariontes y también se llaman dominios; los demás son eucariontes; desde el punto de vista filogenético, los animales están cercanos a los hongos, en los cuales los hongos inferiores (Zygomycota) están separados de los superiores (Basidiomycota y Ascomycota) (42). Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 40 Figura 11: Representación esquemática de los 7 reinos según Kendrick (Imagen original tomada del libro: Micología médica aplicada de Roberto Arenas. Capítulo 2: Generalidades. 5ta Edición) B. Morfología. Son organismos heterotróficos para las sustancias carbonadas, son aerobios o anaerobios facultativos y su nutrición es a través de enzimas y por absorción. Su pared celular es quizás la estructura que más diferencia frente a otras especies porque contiene quitina y glucanos embebidos en una matriz de polisacáridos y glicoproteínas. Los organismos semejantes a hongos (Agrios, 1997) que hasta 1990 se consideraban Hongos Verdaderos, poseen una pared celular compuesta de glucanos y pequeñas cantidades de celulosa pero no quitina, éstos son los Oomycota que ahora se ubican en el Reino Chromista; sin embargo, se continúan tratando como hongos ya que existen muchas similitudes con ellos (43). La gran mayoría de los hongos son estrictamente saprófitos, sin embargo también existen parásitos (obligados o biotróficos y no obligados), hiperparásitos, patógenos y simbiontes (42). Existen algunas características que le dan cierta similitud con los animales, como por ejemplo: heterotrofia para sustancias carbonadas, poseen células Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 41 móviles (planosporas) que son similares a las de protozoos y espermios. El núcleo es el típico de una célula eucariótica (43). Los hongos macroscópicos, que alcanzan hasta algunas decenas de centímetros, están constituidos por agregaciones miceliales formando cuerpos fructíferos o carpoforos en donde se localizan, además, estructuras de reproducción sexual (basidios con basiodiosporas). Los macromicetos están formados por una fructificación carnosa llamada pileo (“sombrero”), unido por su parte central al ápice de un estípite (o tallo) bien diferenciado. En un principio esta fructificación se encuentra envuelta por un velo universal, que es una vaina de hifas que en la madurez permanece por lo general conspicua en forma de copa o de saco en la base de estipite (volva) o, a veces, como escamas o restos de membranas friables en dicha base y, con frecuencia, también en la superficie del pileo (42). El micelio es una estructura cilíndrica de distintas características como tamaño, nucleación, grosor, distribución (Tabla 8), los cuales al agruparse se denominan Hifas (Figura 12B y 12D). Dependiendo del crecimiento se clasifican en reproductores (aéreos) o vegetativos. Los primeros crecen hacia la superficie externa del medio y se encargan de producir los orgánulos reproductores (Endosporios) (Figura 12C) para la formación de nuevos micelios; los micelios vegetativos cumplen función de nutrición con crecimiento hacia el interior. Las hifas son filamentos unicelulares que crecen en el ápice con mucha rapidez (1mm por hora), las cuales al organizarse y unir las distintas ramificaciones conforman una enorme superficie denominada micelio (42). Típicamente los hongos son inmóviles con escasa corriente citoplasmática al interior de las hifas, las esporas que son expulsadas por el esporangio constituyen el verdadero transporte de los hongos para llegar a distancia (Figura 12D y 12E). Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 42 Tabla 8. Características morfológicas de las micelas Situación Morfología Tabiques Función Ubicación De sustrato Color Continuos Vegetativo Externo Consistencia Tabicados Sumergido Cantidad Ausentes Reproductivo Interno C. Reproducción Esta puede ser de dos tipos. Sexual, la cual ocurre en la mayoría de los hongos cuando se unen dos gametos produciendo un zigoto; y Asexual la cual se da mediante la esporulación. D. Crecimiento de los Hongos Dentro de los factores físicos que afectan el crecimiento de los hongos se encuentran: a. Temperatura. Los rangos de temperatura a los cuales pueden desarrollarse los hongos son bastante amplios: Temperaturas mínimas (5 - 10ºC, Ej. Cladosporium herbarum); Temperaturas óptimas: (20 - 40ºC, Ej. Aspergillus niger) Temperaturas máximas (35 - 45ºC, Ej. Aspergillus fumigatus) y Temperatura letal (más de 37ºC) b. Humedad ambiental y sustrato. Existen hongos cuyo hábitat es el agua o medios acuáticos (Ej. Phytophthora, Spongospora), otros son de medios xerofíticos (Oídios). Esimportante la relación Humedad-Temperatura para el desarrollo de los hongos y por lo tanto los efectos que ellos pueden provocar en los sustratos en los cuales se desarrollan (Ej. enfermedades en plantas). c. pH. Los hongos se desarrollan mejor y predominan en medios con altas concentraciones de H+; el rango de pH en el cual se desarrollan se ubica Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 43 generalmente entre 3,5-6,5. Figura 12. Esquematización de la anatomía de un hongo. A. Micela; B. Hifas; C. Estructura productora de Esporas; D. Estructura reproductora; E. Esporas E. Clasificación de los Hongos A pesar de las distintas controversias sobre la pertenencia a los reinos, la clasificación aceptada actual divide al reino fungi en 4 filos (Figura 13) siendo las más importantes los hongos pertenecientes a los filos Basidiomycota y Ascomycota donde se encuentran más del 90% de hongos con traducción clínica (43). Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 44 El análisis genético de las Basidiomycotas permite revelar una subclasificación: parásitos y setas. En la primera subfamilia se encuentran las Ustilaginomycetas y Puccinomycotina, y en las setas se encuentran principalmente las Agaromycotinas. En el subfilio de Ustilaginomycetas se encuentra como máximo representante el Ustilago maydis o Huitlacoche, el cual es un hongo parasitario del maíz que tiene una amplia distribución y comercialización en México desde la época Maya (42). En el caso de las Agaromycotinas tienen una distribución más cosmopolita. Una de las órdenes que tiene más relevancia es la de los Agaricales. En esta se encuentran los géneros de Pleurotus, y Agaricus (Pleurotus ostreatus o Setas comestibles, Agaricus bisporus o Champiñón y Agaricus bisporus variedad brunnescens o Portobello) (42). Las Ascomycotas por otro lado, tienen la importancia en la parte clínica ya que algunos hongos microscópicos como Aspergillus spp, Alternaria spp, Penicillum spp Figura 13. Clasificación del reino Fungi (Kendrick 2002) Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 45 se encuentran dentro de este filo los cuales se asocian con eventos alérgicos como Rinitis, Asma con sensibilidad a Hongos, Aspergilosis broncopulmonar alérgica entre otros (42). F. Importancia de los Hongos El reino de los hongos tiene una edad aproximada de 1.500 millones de años, siendo que a la fecha se tienen identificadas cerca de un millón de especies distintas, constituyendo de esta forma el reino con mayor diversidad (43). La quimioheterotroficidad es una característica exclusiva de este reino en la que destaca la capacidad de ambientación rápida a situaciones potencialmente adversas. Esta característica explica en cierta parte la estrecha mutualidad con la biosfera en la que se desarrollan (43). La relación que tiene con la humanidad data desde la antigüedad. Las civilizaciones antiguas como griega, romana zapoteca o maya han utilizado a los hongos como fuente de alimentos especialmente en ritos sagrados, además que algunas especies con características psicotrópicas como la Psilocibina del Psilocybe zapotecum eran de uso exclusivo en ritos de curación (42). Hablando de las setas, estas han formado parte de la alimentación cuyo primer reporte es acerca de las propiedades del Amanita caesarea (Seta de los césares) empleada durante la coronación y cambio de autoridades romanas. Las trufas también se encuentran en este grupo, seta comestible principalmente en población europea. En nuestro país uno de los hongos que tiene mayor importancia es el U. maydis, empleado por los aztecas para consumo y como producto de intercambio comercial (44). Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 46 En cuanto a los hongos microscópicos, estos tienen mayor relevancia en cuanto a la fermentación y elaboración de alimentos y bebidas como el Sacharomyces cerevisiae el cual se emplea en la elaboración de Vino, cerveza, pan, pilque Sake, entre otros. Uno de los usos más importantes en cuanto a los hongos viene a ser el uso de los metabolitos como principio activo de distintos fármacos empleados rutinariamente en la práctica médica (Tabla 9) (42). Tabla 9. Principales usos de los metabolitos procedentes de esporas en la farmacología Hongo Producto Función Penicillium notatum Penicillium chrysogenum Penicilina Antibiótico Acremonium cephalosporium Cefalosporinas Antibiótico Aspergillus nidulans Anidulafungina Antimicótico Aspergillus niger Fumagilina Antimicótico Coleophoma empetri Micafungina Antimicótico Glarea lozoyensis Caspofungina Antimicótico Penicillium griseo Grisefulvina Antimicótico Penicillium citrinum Mevastatina Estatina Aspergillus terreus Lovastatina Simvastatina Estatina Elaphocordyceps subsessilis Ciclosporina Inmunosupresor Ashbya gossypii Vitamina B12 Vitamina Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 47 G. Consumo de Hongos en México Los hongos comestibles constituyen un alimento funcional con propiedades nutricionales y medicinales que promueven la salud lo cual promueve la seguridad alimentaria en momentos de crisis (41). Los hongos comestibles tienen un alto contenido proteico, minerales y vitaminas con bajo contenido de grasas con reportes no comprobados sobre su papel naturista en el control de enfermedades metabólicas (42). Desde 1933, el cultivo y aprovechamiento de hongos se ha desarrollado exponencialmente en el país, actualmente se tiene estimado que la producción anual sobrepasa las 58 mil toneladas. Los primeros estudios que se realizaron sobre el consumo local son de la primera década del siglo XX en las poblaciones de Ciudad de México, Puebla, Tlaxcala y Toluca. (44) en los que se tomaron en cuenta variables socioeconómicas, edad y el consumo en porcentaje (tabla 10 y 11). Tabla 10. Consumidores de hongos comestibles Según región. Proporción de consumidores de hongos comestibles en la región de estudio de acuerdo a entrevistas (n=540) aplicadas en mercados públicos y tianguis en el periodo 2000 - 2004 y en supermercados (n=400) en el periodo 2004 – 2007. (Tabla original tomada de la referencia 44) Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 48 Tabla 11. Manejo de hongos comestibles Principales percepciones y manejo de hongos comestibles por minoristas, restaurantes, taquerias en la región central de México 2003. (Tabla original tomada dela referencia 42) Resulta difícil determinar cuáles son los hongos que se consumen con mayor frecuencia en el país debido a que el consumo varía de acuerdo a la región. Sin embargo, es evidente que tanto el champiñón como el Huitlacoche ocupan los primeros lugares. (44) H. Descripción del hongo comoalérgeno. Es bien sabido que cualquier proteína es capaz de elicitar una respuesta alérgica en un individuo susceptible, lo cual va a depender de varios factores relacionados tanto con el individuo como con el alimento, dentro de los cuales destacan: Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 49 - Procesamiento e industrialización del alimento. Este factor se relaciona con los conservantes empleados durante la industrialización, pesticidas durante el cultivo, cambios en la genómica del alimento para su mayor cultivo, tiempo de procesamiento. - Consumo local de alimentos. Los hongos comestibles en nuestra región no son los mismos que en la población asiática (45), por lo que la exposición a alimentos no- relacionados con la línea ancestral propia del individuo también se puede relacionar (46) - Labilidad de las proteínas al momento de la preparación. Existen proteínas que de acuerdo a la preparación para su consumo pueden sufrir cambios estructurales importantes que fragmenten la proteína, que la destruyan, o simplemente que la estructura secundaria cambie de tal forma que los epitopos de la IgE no la reconozcan (47) a. Agaricus bisporus. O champiñón común. Es una especie de hongo agarical nativo de Europa y América del Norte que principalmente es cultivado con fines gastronómicos. A. bisporus tiene un sombrero redondeado y ligeramente aplanado en la parte superior. Durante su crecimiento este sombrero está unido al pie por un anillo simple. Hacia el final de su desarrollo se abre, exponiendo las laminillas típicas de las agaricáceas. Estas laminillas no están sujetas al pie, y cambian gradualmente de un color rosado a pardo oscuro. El sombrero puede alcanzar los 18 cm de diámetro, y el pie hasta 8 cm de largo y 3 cm de diámetro (48). Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 50 El rasgo distintivo de A. bisporus es microscópico: sus esporas miden de 5-5-8- 5 µm por 4-6.5 µm, de forma elíptica, se presentan dos por cada basidio, en lugar de cuatro como es habitual en otros Agaricus (48). Su taxonomía fue descrita por Imbach en 1946 (Tabla 12) manteniéndose a la fecha a pesar de los cambios postulados por Kendrick (48). Sus características nutricionales establecidas por la USDA (United States Department agriculture) y se detallan en la Tabla 13 Tabla 12. Clasificación taxonómica de los principales hongos comestibles Hongo División Clase Subclase Orden Familia Genero Especie Champiñ ón Basidiomycota Agaricomycetes Agaricomycetida e Agaricales Agaricaceae Agaricus bisporus Portobel lo Basidiomycota Agaricomycetes Agaricomycetida e Agaricales Agaricaceae Agaricus Bisporus var. brunnesce ns Setas Basidiomycota Agaricomycetes Agaricales Pleurotaceae Pleurotu s ostreatus Huitlaco che Basidiomycota Ustilaginomycet es Ustilaginales Ustilaginaceae Ustilago maydis Si bien estructuralmente se tiene la conformación proteica del Agaricus bisporus aún no se tiene en claro el poder alergénico de este. Existe un reporte en la literatura de un caso sobre anafilaxia tras la ingesta de Champiñón preparado. (51) En dicho reporte, se consiguió identificar dos proteínas capaces de elicitar una respuesta mediada por IgE mediante Western blot y posterior estudio de espectrometría de masas. Estas proteínas identificadas son: Superóxido dismutasa, y NADP deshidrogenasa dependiente de manitol (51) (Figura 14). Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 51 Tabla 13. Valor nutricional de los hongos por cada 100gr (3.5 oz) Variable Champiñón Portobello Setas Huitlacoche Energía kCal 22 22 33 40 Carbohidratos gr 3.2 3.2 6.09 7.88 Azucares gr. 1.98 1.98 1.11 1.65 Fibra dietética gr. 1 1 2.3 2.2 Grasa gr. 0.34 0.34 0.41 0.44 Proteína gr. 3.09 3.09 3.31 3.38 Vitaminas Tiamina (B1) mg (%) 0.081(7) 0.081(7) 0.125 NA Riboflavina (B2) mg (%) 0.402(34) 0.402(34) 0.346 NA Niacina (B3) mg (%) 3.607(24) 3.607(24) 4.956 NA Ácido pantotenico (B5) mg (%) 1.467 (30) 1.467 (30) NA Vitamina B6 mg (%) 0.104 (8) 0.104 (8) NA Folato (B9) ug (%) 17 (4) 17 (4) 38 NA Vitamina B12 ug (%) 0.04 (2) 0.04 (2) 0 NA Vitamina C mg (%) 2.1 (3) 2.1 (3) 0 NA Vitamina D ug (%) 0.2 (1) 0.2 (1) 29 NA Minerales Hierro mg (%) 0.5 (4) 0.5 (4) 1.33 NA Magnesio mg (%) 9 (3) 9 (3) 18 NA Fosforo mg (%) 86 (12) 86 (12) 120 NA Potasio mg (%) 318 (7) 318 (7) 420 NA Sodio mg/% 3 3 18 NA Zinc mg (%) 0.52/5 0.52/5 0.77 NA Agua (gr) 92.5 92.5 89.18 NA Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 52 b. Pleurotus ostreatus. O setas comestibles. Se distribuye por gran parte del Holartico en zonas templadas con cultivos cosmopolitas. Está emparentado con la seta de cardo Presenta un sombrero de 5 a 20 cm de diámetro, con el pie desplazado hacia un lado y creciendo habitualmente junto a otros ejemplares superpuestos. La superficie es lisa y brillante; de color gris o gris oscuro, y en ocasiones gris pardo o azulado. El margen del sombrero cambia con la edad, siendo enrollado en los ejemplares jóvenes y abierto en los adultos. Tiene las láminas apretadas, delgadas, decurrentes y de color blanquecino. La carne es firme, algo dura en los ejemplares adultos, y de sabor y olor agradables. Crece naturalmente en la superficie de tocones y troncos de maderas blandas como el chopo la haya o el sauce, entre otros. Bastante común, Y no existen reportes de alergia a este hongo (49). Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 53 c. Ustilago maydis. Pertenece al filo Basidiomycota (Tabla 5) No tiene una reactividad cruzada entre basidiomycetas, y a la fecha no tiene alérgenos caracterizados, aunque tiene cierta homología con la Malassezia sympodalis. Sus esporas tienen un diámetro de 7 a 10 mm. Es un género que contiene cerca de doscientas especies de parásitos en las gramíneas. Es parasito del maíz nativo de México. Es dimórfico, existente como levadura de una sola célula sobre la materia vegetal muerta, o como una forma filamentosa patógena producida por apareamiento. Tampoco se han reportado casos de anafilaxia a pesar de ser un alimento con gran potencial alergénico pues es consumido por una población particular y representa riesgo para aquellos individuos ajenos a esta población. (50) Reconocimiento de proteínas alergénicas de hongos comestibles en un caso de anafilaxia por champiñón ______________________________________________________________________________________________________________ Dr. Oliden Saavedra 54 III. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA A la fecha, existe escasa evidencia de reacciones alérgicas inmediatas tras la ingesta de hongos comestibles, en particular a uno de los hongos de mayor consumo: El champiñón (Agaricus bisporus). Esta situación dificulta la identificación de proteínas contenidas en los hongos que sean capaces de inducir una respuesta mediada por IgE, y consiguientemente obtener los determinantes alergénicos de
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