Optimizacion-del-metodo-analtico-para-la-cuantificacion-de-omeprazol-de-20mg-en-forma-farmaceutica-tableta

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DEDICATORIA 
A DIOS 
POR DARME LA VIDA 
Y PERMITIRME CULMINAR 
UNO DE LOS GRANDES LOGROS 
DE MI VIDA. 
 
A MIS PADRES 
 JULIO Y HELENA POR TODO EL ESFURZO 
QUE REALIZARON A LO LARGO DE MÍ 
VIDA, CONSEJO Y GUIA PARA SEGUIR 
MÍ CAMINO Y LOGRAR DARME UNA 
HERENCIA INAPRESIABLE. 
 
A MIS HERMANOS 
JULIO Y GUSTAVO POR EL CONSEJO, 
 CONFIANZA Y APOYO QUE ME 
 BRINDARON PARA ALCANZAR ESTA META. 
 
 
A ADRIANA 
POR EL APOYO INCONDICIONAL EN LOS 
 MOMENTOS MÁS DIFICILES Y BRINDARME TU 
 CARIÑO, AMOR Y DARME MUCHA FELICIDAD. 
 
A MIS PROFESORES Y AMIGOS 
POR LA ENSEÑANZA Y CONOCIMIENTO 
 A LO LARGO DEL CAMINO. 
 
AGRADECIMIENTOS 
 
A todos las personas de que de alguna manera fueron participes 
para la elaboración de este trabajo y ayuda a concluir una de mis 
metas. 
 
Al laboratorio Farmacéutico SELDER S.A. de C.V. por permitirme 
la elaboración de este proyecto, principalmente y con un gran 
agradecimiento al Lic. Alejandro Martínez Villareal. 
 
QFB. Jesús Alberto Gómez Arellanes, por las amistades y 
facilidades proporcionadas para lograr este proyecto. 
 
A mis asesores QFB Idalia Leticia Flores Gómez y al QFB 
Francisco Javier Rodríguez Martínez, gracias por su amistad, 
consejo, apoyo, e interés por este proyecto. 
 
A mis Sinodales M. en C Ma. Gloria Velásquez Vaquero, Dra. 
Patricia Parra Cervantes y M. en C. Hernán Issac Córtes Andrade 
por el tiempo, consejo y enriquecer mi trabajo. 
 
 
MUACHAS GRACIAS. 
 
INTRODUCCIÓN 
 Página 
I. FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA 1 
A. Métodos analíticos 1 
1. Definición 1 
2. Clasificación 1 
a. En función de su estado regulatorio 1 
1) Farmacopeicos. 1 
2) No farmacopeicos 1 
b. En función de su aplicación 1 
1) Producto a granel 1 
2) Producto terminado 1 
3) Materia prima 1 
4) Indicativos de estabilidad 1 
c. En función de la naturaleza de la respuesta analítica 1 
1) Analitico 1 
2) Bioanalitico 1 
d. En función del propósito analítico 1 
1) Cuantificación del analito. 1 
2) Establecer la presencia del analito o un límite. 1 
3) Identificación del analito. 1 
e. En función de la naturaleza del sistema de medición. 1 
1) Permite medir. 1 
2) No permite medir. 1 
B. Cromatografía de líquidos. 2 
1. Historia. 2 
a. Técnicas cromatograficas. 3 
b. Cromatografía de capa fina. 3 
c. Cromatografía en papel. 3 
d. Cromatografía de fase sólida. 4 
2. Conceptos de cromatografía. 5 
a. Tiempo de retención. 5 
b. Tiempo de retención del frente de disolución. 5 
c. Tiempo muerto o tiempo de corrección corregido. 6 
d. Números de platos teóricos. 6 
e. Coeficiente distribución o reparto. 7 
f. Factor de simetría. 7 
g. Factor de capacidad. 8 
3. Equipo 9 
a. Fases Móviles. 9 
b. Bombas. 10 
1) Presión constante. 10 
2) Flujo 10 
a) Pistón reciproco. 10 
b) Pistón dual. 10 
c) Desplazamiento positivo. 10 
Página 
c. Gradiente de elución. 11 
1) Mezcla de alta presión. 11 
2) Mezcla de baja presión. 11 
d. Inyectores. 11 
e. Columnas. 11 
f. Tubos colectores. 11 
g. Filtros. 11 
h. Medidores de presión. 11 
i. Termostatos de columna. 11 
j. Detectores. 12 
C. Optimización y Validación. 13 
1. Optimización. 13 
a. Concepto. 13 
b. Optimización del Método. 13 
2. Validación 14 
a. Concepto 14 
1) Precisión. 14 
2) Adecuabilidad. 14 
3) Especificidad. 14 
4) Linealidad del Sistema. 14 
5) Linealidad del Método. 14 
6) Exactitud. 14 
7) Repetibilidad. 14 
8) Precisión Intermedia. 14 
9) Estabilidad de la linealidad. 14 
10) Robustez del método analítico. 14 
D. Formas farmacéuticas. 15 
1. Los sólidos de acuerdo a su tipo de liberación. 15 
a. Convencional. 15 
b. Modificada. 15 
1) Prolongada. 15 
2) Retardada. 15 
3) Pulsátil. 15 
E. Tabletas o comprimidos. 16 
1. Tipos de comprimidos. 16 
a. No recubiertos. 16 
b. Recubiertos. 16 
1) Recubrimiento de azúcar. 16 
2) Recubrimiento de película fina. 16 
3) Capas múltiples. 17 
4) Liberación modificada. 17 
5) Gastroresistentes. 17 
2. Ventajas y desventajas. 17 
 
Página 
3. Principales componentes. 18 
a. Diluentes. 18 
b. Aglutinantes. 19 
c. Desintegrantes. 19 
d. Lubricantes. 20 
F. Omeparzol 21 
1. Nomenclatura 21 
2. Propiedades fisicoquímicas. 21 
3. Constante de disociación. 21 
4. Constante de partición. 22 
5. Espectros del omeprazol. 22 
a. UV. 22 
b. Infrarrojo. 22 
c. Masas. 23 
6. Farmacología 23 
a. Indicaciones Terapéuticas. 23 
b. Posología. 23 
1) Ulcera péptica. 23 
2) Síndrome de Zollinger-Ellison. 23 
3) Insuficiencia hepática. 23 
4) Insuficiencia renal. 24 
5) Inyectables. 24 
6) Dosis. 24 
7. Toxicología. 24 
8. Precauciones. 24 
9. Interacciones con otros medicamentos. 24 
a. Antifúngicos azólicos (itraconazol, ketoconazol). 24 
b. Anticoagulantes orales (acenocumarol, warfarina). 24 
c. Antiepilépticos (carbamazepina, fenitoína). 24 
d. Atazanavir 24 
e. Ciclosporina 24 
f. Digoxina 24 
g. Metotrexato 24 
h. Voriconazol. 24 
10. Cuadro Básico. 25 
II. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA. 26 
III. Objetivos. 27 
A. General. 27 
B. Particulares. 27 
IV. HIPOTESIS. 27 
V. METODOLOGÍA. 28 
A. Equipo. 28 
B. Materiales. 28 
C. Reactivos. 28 
D. Diagrama general de Flujo. 29 
E. Procedimiento. 31
Página 
VI. RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS. 34 
A. Revisión Bibliográfica. 34 
B. Estandarización del principio activo. 35 
C. Condiciones de las diferentes metodologías encontradas. 35 
D. Optimizaciones. 36 
1. Fase móvil. 36 
2. Columna. 38 
3. pH. 39 
4. Velocidad de flujo. 39 
5. Temperatura de la muestra. 40 
6. Temperatura de la columna. 40 
7. Preparación de la muestra. 41 
8. Filtro. 42 
9. Evaluación de la optimización. 44 
E. Validación de métodos analíticos. 46 
1. Sistema. 46 
a. Precisión del sistema. 46 
b. Adecuabilidad del sistema. 46 
c. Linealidad del sistema. 46 
2. Método. 47 
a. Especificidad. 47 
b. Exactitud y repetibilidad. 50 
c. linealidad del método. 50 
d. Precisión del método. 51 
e. Estabilidad analítica de la muestra. 51 
f. Tolerancia. 51 
g. Limite de detección. 51 
h. Limite de cuantificación. 51 
3. Comparación. 52 
VII. CONCLUSIONES. 55 
VIII. SUGERENCIAS. 56 
IX. REFERENCIAS. 57 
 
ÍNDICE DE FIGURAS Página 
 
Tabla 1. Experimento de Tswett. 2 
Tabla 2. Cromatografía en capa fina. 3 
Tabla 3. Cromatografía en papel. 3 
Tabla 4. Cromatografía de extracción de fase sólida.4 
Tabla 5. Columna CLAR. 4 
Tabla 6. Tiempo de retención. 5 
Tabla 7. Platos teóricos. 6 
Tabla 8. Representación de asimetría en cromatografía. 7 
Tabla 9. Bomba reciproca para CLAR. 10 
Tabla 10. Molécula de omeprazol. 21 
Tabla 11. Espectro UV. 22 
Tabla 12. Espectro IR 22 
Tabla 13. Espectro de masas. 23 
Tabla 14. Diagrama de flujo general. 29 
Tabla 15. Diagrama de Flujo (continuación). 30 
Tabla 16. Cromatograma comparativo de los tiempos de retención 
de la muestra. 41 
Tabla 17. Preparación de la muestra y estándar homogenizados en 
un solo tiempo de retención. 41 
Tabla 18. Efecto del filtro. 43 
Tabla 19. Grafica de linealidad del sistema. 46 
Tabla 20. Cromatograma de especificidad que muestra BLANCO. 47 
Tabla 21. Cromatograma de especificidad que muestra PLACEBO 47 
Tabla 22. Cromatograma de especificidad que muestra ESTANDAR. 48 
Tabla 23. Cromatograma de especificidad que muestra ESTANDAR Y 
ESTANDAR CARGADO. 49 
Tabla 24. Grafica de linealidad del método. 50 
 
ÍNDICE DE TABLAS Página 
 
Tabla 1. Tipos de fases móviles ocupadas en el ámbito 
Farmacéutico para CLAR. 9 
Tabla 2. Requerimientos para una bomba CLAR. 10 
Tabla 3. Detectores comúnmente ocupados para CLAR. 12 
Tabla 4. Formas farmacéuticas catalogadas por su estado. 15 
Tabla 5. Ventajas y desventajas de las formas 
farmacéuticas tableta. 17 
Tabla 6. Diluentes para fabricación de tabletas. 18 
Tabla 7. Aglutinantes utilizados para la fabricación de tabletas. 19 
Tabla 8. Desintegrantes que se ocupan en tabletas. 20 
Tabla 9. Lubricantes ocupados para tabletas. 20 
Tabla 10. Cuadro básico de Medicamentos en el 
Distrito Federal 2012. 25 
Tabla 11. Nivel de preparación del omeprazol 32 
Tabla 12. Comparación de metodologías analíticas en 
bibliografía contra metodología anterior. 36 
Tabla 13. Optimización de la polaridad de las fases móviles 
B y C. 37 
Tabla 14. Comparación de la fase móvil B y C. 37 
Tabla 15. Comparación de los fabricantes de columna. 38 
Tabla 16. Comparación del pH con respecto a tiempo de 
retención de la muestra. 39 
Tabla 17. Optimización de la velocidad de flujo. 39 
Tabla 18. Optimización de la temperatura de la muestra. 40 
Tabla 19. Comparación de la temperatura de la columna. 40 
Tabla 20. Efecto de filtro. 42 
Tabla 21. Condiciones de la metodología optimizada. 44 
Tabla 22. Comparación de las fases móviles establecidas 
a lo largo del desarrollo y optimización de métodos. 45 
Tabla 23. Comparación de desempeño entre dos métodos 
analíticos. 52 
Tabla 24. Resultados de los parámetros del sistema del 
método optimizado. 53 
Tabla 25. Resultados de los parámetros del método para la 
metodología optimizada. 53 
Tabla 26. Tabla comparativa de costos entre la metodología 
anterior y la optimizada. 54 
 
Abreviaturas: 
 
 
CLAR Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución 
 
T° Temperatura en grados centigrados 
 
mm milímetros 
 
cm centímetros 
 
THF Tetrahidrofurano 
 
mL mililitros 
 
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PA Principio Activo 
 
ZE Zollinger Ellison 
 
Psi libra por pulgada cuadrada (Pounds per Square Inch) 
 
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AINES AntiInflamatorios No Esteroideos 
 
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| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 0 de67 
 
 
 
INTRODUCCIÓN 
 
El Omeprazol, (5-metoxi-2-[(4-metoxi-3,5-dimetil-piridin-2-il)metilsulfinil]-3H-
bencimidazol), es usado en el tratamiento de la dispepsia, úlcera péptica, enfermedades 
de reflujo gastroesofágico y el síndrome de Zollinger-Ellison. 
 
El Omeprazol fue el primer fármaco disponible para uso clínico, usado para inhibir la 
bomba de protones reduciendo la secreción de ácido gástrico, siendo el primer fármaco 
de su clase como inhibidor de la bomba de protones, introducido en el mercado en 1989, 
a partir de este siguieron cuatro fármacos más de su clase, (1) este fármaco se concentra 
en la célula productora de ácido (parietal) y se activa en medio ácido del canal secretor. 
Actúa a partir de su metabolito activo que es un inhibidor irreversible de la bomba de 
protones por lo que produce una potente y prolongada inhibición de la secreción ácida 
ante cualquier estimulo. (1) 
 
La cuantificación del Omeprazol es necesaria para obtener un producto, que se 
administra para obtener un tratamiento eficiente, y reducir molestias en el paciente con 
este tratamiento. 
 
Existen métodos analíticos ya desarrollados para la cuantificación del Omeprazol, pero 
debido al costo y recursos utilizados en el método es necesario realizar optimizaciones 
para reducirlos. 
 
En este estudio se realizó la optimización del método analítico por HPLC para la 
cuantificación de Omeprazol en tabletas, modificando diferentes condiciones 
cromatografías y utilizando recursos accesibles para la optimización de estos. 
 
Posteriormente se desarrollo un método optimizado y validado del método, siguiendo los 
parámetros requeridos por la NORMA Oficial Mexicana NOM-177-SSA1-1998, Que 
establece las pruebas y procedimientos para demostrar que un medicamento es 
intercambiable. Requisitos a que deben sujetarse los terceros autorizados que realicen 
las pruebas (2) y la Guía del Colegio de Químicos Farmacéuticos Biólogos para la 
cuantificación de ingredientes activos en productos farmacéuticos terminados. (3) 
 
Siendo los parámetros requeridos: Adecuabilidad del sistema, especificidad, linealidad 
del método, exactitud, repetibilidad, precisión intermedia, estabilidad de la Solución 
analítica y robustez del método analítico. 
  
| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 1 de67 
 
I. FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA 
A. Métodos Analíticos 
 
1. Definición: 
La química analítica (del griego ἀναλύω, disolver, descomponer) es la parte de la 
química que tiene como finalidad el estudio de la composición química de un 
material o muestra, mediante diferentes métodos. Se divide en química analítica 
cuantitativa y química analítica cualitativa. (4) 
 
2. Clasificación 
 
a. En función de su estado regulatorio: 
1) Farmacopeicos: Todos los métodos que aparecen en cualquier farmacopea 
(FEUM, USP, BP, Europea, etc.). 
2) No Farmacopeicos: Aquellos métodos no compendiados en una farmacopea. 
 
b. En función de su aplicación (NOM-059-SSA1-1993, Buenas prácticas de 
fabricación para establecimientos de la industria químico farmacéutica dedicados a 
la fabricación de medicamentos (5) y NOM-073-SSA1-2005, Estabilidad de 
fármacos y medicamentos (modifica a la NOM-073-SSA1-1993, Estabilidad de 
medicamentos, publicada el 3 de agosto de 1996) (2)). 
 
1) Producto a granel. 
2) Producto terminado. 
3) Materia prima. 
4) Indicativos de estabilidad 
 
c. En función de la naturaleza de la respuesta analítica: 
1) Analítico: Cuando la respuesta es de carácter físico (absorción de luz, emisión 
de luz, voltaje, etc.) o químico (consumo de iones –OH, consumo de un 
acomplejante, etc.) 
2) Bioanalitico: Cuando la respuesta es de carácter biológico (crecimiento de un 
microrganismo, protección, muerte, etc.). 
 
d. En función de su propósito analítico: 
1) Cuantificación del analito (contenido o potencia). 
2) Establecer la presencia del analito a un límite (Impurezas presentes). 
3) Identificación el analito. 
 
e. En función de la naturaleza del sistema de medición: 
1) Cuando el instrumento de medición de la respuesta analítica, permite medir una 
señal de ruido (cromatógrafo de líquidos, cromatógrafo de gases, 
espectrofotómetros, etc.). 
2) Cuando el instrumento de medición no permite medir una señal de ruido (bureta, 
medidor de halos, potenciómetros, etc.).(6) 
 
 
 
B. C
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o 
s 
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s 
s, 
 
2.
 
En cro
condici
 
Es el t
concen
column
 
 
Es el ti
no tien
 
. Concepto
omatografía
iones crom
 
a. Tiempo
tiempo que
ntración del
na y el tiem
Donde: 
TR=Tiemp
υ =Velocid
L=Longitu
b. Tiempo
iempo nece
e una reten
Donde: 
υ Veloc
Ts= Tiemp
L= Longitu
 
| FUN
s de Croma
a de líquido
atografías. 
o de Retenc
e transcurre
l analito alc
po que tard
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dad lineal p
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DAMENTACIÓ
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(7) 
ción. (TR) 
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da en apare
ción 
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a que el dis
cífica en el 
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Figura 6
ÓN DEL TEMA
e Líquidos.
y utilizados
de la inye
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ecer el máx
 
e migración
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olvente rec
cromatogra
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A 
 
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olvente. 
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se observa
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to. 
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Página 
para determ
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mpuesto en
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5 de67 
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n salir de la
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ra 6. (7) 
 
e 
e 
a 
al 
 
 
Es el t
tiempo 
 
 
Cada p
El núm
column
figura 7
 
 
c. Tiempo
iempo nece
necesario 
d. Número
plato teórico
mero total d
na. Una bue
7. Se calcul
 
 
 
Dónde: 
N =Núme
TR =Tiemp
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| FUN
o muerto o 
esario para
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DAMENTACIÓ
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᾿
ÓN DEL TEMA
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A 
corregido. (T
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na represen
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᾿
TR´) 
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s teóricos, c
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a la línea ba
 
 
Página 
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E
ase en min
6 de67 
respecto a
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Cm = Can
 
o K = 1, 
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ficamente, 
mna. 
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Dónde: 
W0.05 = An
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centímetro
 
Fig
| FUN
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o entra al 
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tidad de Mu
el soluto 
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os. 
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DAMENTACIÓ
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uestra/ Mili
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8. (7) 
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presentació
ÓN DEL TEMA
Reparto. (K
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 La concen
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o distribuye
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el 
n 
| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 8 de67 
 
g. Factor de Capacidad. (k´) 
 
Es el tiempo que se retiene cada componente en la columna. La fase estacionaria retarda el 
soluto en un tiempo t, mientras tm representa el tiempo que permanece en la fase móvil; por 
lo tanto el cociente entre ambos nos dará el valor de k’. (4) 
Este factor depende de la naturaleza química y temperatura de las fases líquidas que 
conforman el sistema. El valor de k’ generalmente están entre uno y diez; k’ mayores 
implican tiempos excesivos para completar la separación, se calcula de la siguiente manera: 
Ec 7 
 
Dónde: 
k’= Factor de Capacidad 
TR= Tiempo de Retención 
tm =tiempo muerto 
 
La CLAR es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, materiales poliméricos, 
productos naturales termolábiles y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto 
peso molecular. La separación cromatográfica es el resultado de interacciones específicas 
entre las moléculas de la muestra con ambas fases, móvil y estacionaria.(4) 
 
Es una técnica cromatográfica usada para separar componentes usando una variedad de 
interacciones químicas entre el analito y la columna cromatográfica, básicamente es un 
sistema compuesto de un reservorio de fase móvil, bomba, inyector, columna de separación, 
detector y horno. (4) 
 
El analito pasa a través de una fase estacionaria o columna, por medio del bombeo de una 
fase móvil liquida que a su vez genera altas presiones a su paso a través de la columna. La 
muestra se introduce en pequeños volúmenes a la corriente de la fase móvil y allí se retarda 
por medio de interacciones químicas con la fase estacionaria mientras atraviesa la columna. 
(4) 
 
El retardo se conoce como tiempo de retención único para el analito, depende de la 
naturaleza del analito, fase estacionaria y de la composición de la fase móvil. (8) 
 
Las combinaciones más usadas en la fase móvil son agua purificada con líquidos orgánicos, 
los más comunes son Metanol y Acetonitrilo, también suelen usarse sales y buffer para 
contribuir a la separación de los componentes. También se usa el Ácido Trifluoroacetico para 
actuar como formador de pares iónicos. Estas combinaciones introducen el concepto de 
gradiente de elución que consiste en la variación de la composición de la fase móvil, para 
adaptarse a los diferentes analitos y conseguir mejores resultados. El gradiente separa los 
componentes de la muestra en función de la afinidad de la fase móvil con el analito. Cada 
analito tiene un gradiente de elución óptimo para obtener la máxima separación de picos en 
el detector. (7, 8, 9) 
 
K᾿= -1 
| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 9 de67 
 
3. Equipo 
 
a. Fases Móviles 
 
Tipo de 
Cromatografía 
Fase Normal 
Fase Inversa o 
Reversa 
Cromatografía de 
ión exclusión 
Cromatografía de 
exclusión molecular 
Fase móvil(10, 11) 
 Heptano 
 Isopropanol 
 Agua 
 Buffer de 
fosfatos 
 Acetonitrilo 
 Metanol, 
principalmente 
 Buffer de 
fosfatos 
 Agua 
 Tetrahidrofurano 
(THF) 
 Solventes 
Orgánicos 
Columna(10 12) 
Aminopropilsilano, 
sílice, grupos 
nitrilos unidos a la 
cadena de sílice, 
otros. 
Cadena de sílice 
unida con cadenas 
de 8 carbonos, 18 
carbonos, fenil, 
otros. 
Acrilatos, sílice 
Poliacrimida Dextrano 
Agarosa Poliestireno 
con poros de 
diferentes tamaños. 
Usos(13) 
Biomoléculas y 
moléculas 
orgánicas polares. 
Polímeros, iones, 
biomoléculas y 
moléculas 
orgánicas. 
Purifica y concentra 
proteínas, 
carbohidratos y 
polisacárido aminas 
cuaternarias, ácido 
sulfonico. 
Polímeros, estructuras 
terciarias y 
cuaternarias de 
proteínas. 
Observaciones 
(12,14) 
No se utilizó 
después de 1970 
por falta de 
reproducibilidad en 
el tiempo de 
retención. 
Es la más utilizada 
para CLAR. 
Es muy utilizado 
pero se limita el 
uso de esté tipo de 
cromatografía a 
moléculas 
orgánicas y 
biomoléculas. 
No es muy utilizado ya 
que no tiene buena 
resolución y es un 
tanto compleja. 
 
Tabla 1. Tipos de Fases Móviles ocupadas en el ámbito 
Farmacéutico para CLAR (8) 
 
 
 
La bom
column
se mue
 
 
Existen
b. Bomba
mba tiene la
na y el dete
estran en la
Requisit
Rango
Rango
Puls
 
n distintos t
1) Pres
los p
flujo
2) Flujo
a) P
re
b) P
c) D
pr
| FUN
as 
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a tabla 2. (7)
tos de una
o de flujo (m
o de presió
sos de pres
Tabla 2
Fig
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o constante
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esplazamie
rovee un flu
DAMENTACIÓ
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e muestra e
 
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n (psi) 
sión 
2. Requerim
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Usando do
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ÓN DEL TEMA
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y sin pulsos
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n flujo const
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través del 
una bomba 
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para CLAR
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R 
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el 
-
. 
e 
| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 11 de67 
 
c. Gradiente de elución. 
 
Para crear un gradiente en la fase móvil, es necesaria una mezcla de los componentes. La 
capacidad de mezcla es vital para obtener el eluyente óptimo. (7) 
Existen dos métodos: 
1) Mezcla de alta presión: se usan bombas de alta presión individuales para cada 
líquido. Las salidas se conectan en una cámara de mezcla, se usa un 
controlador electrónico para asegurar que la mezcla es óptima. 
2) Mezcla de baja presión: ocurre antes de pasar por la bomba, el controlador 
electrónico regula la cantidad de líquido que pasa por los tubos. 
 
d. Inyectores. 
 
Deben introducir muestras liquidas en un rango de volumen desde 0,1 mL a 100 mL con una 
alta precisión. Normalmente se usan inyectores Rheodyne® que poseen válvulas de 6 
puertos con un bucle que permite no solo la inyección de muestra sino también la purga del 
sistema y la eliminación de burbujas. (7) 
 
e. Columna. 
 
Normalmente compuesta de acero inoxidable del tipo 316, con diámetros internos desde 2,6 
a 10 mm, normalmente con filtros de acero poroso las cuales están hechas usualmente con 
sílice fundida con diferentes grupos funcionales, 1 a 10 μm de partícula y de longitud de 10 a 
30 cm. (7) 
 
f. Tubos Colectores. 
 
Son todos aquellos tubos que transportan las sustancias de pre columna a columna, de 
columna a detector o de detector a desechos. No deben superar los 0,634 mm de diámetro 
interno o causaran picos en las mediciones. (7)g. Filtros. 
 
Situados entre la bomba y el inyector de muestras, para evitar la entrada de ciertas 
sustancias y evitar el colapso de la columna. Normalmente estos filtros estas compuestos de 
acero poroso. (14) 
 
h. Medidores de Presión. 
 
Son indicadores de fallos en el sistema, nos indica cuando un flujo continuo falla por motivos 
de presión y si existe alguna fuga en la infraestructura del sistema. (7) 
 
i. Termostatos de Columna. 
 
Mantiene la columna a una temperatura óptima, sobretodo en análisis cualitativo, puesto que 
las variaciones de temperatura pueden cambian la viscosidad del eluyente e influir en el 
volumen retenido. (4, 6, 7) 
| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 12 de67 
 
j. Detectores. (15) 
 
Detector 
Limite de 
detección (mg) 
Permite gradiente Detección Observaciones 
Detector de 
Espectrómetro de 
masas 
0.1-1 SI 
Todos los 
compuestos 
Tiene problemas 
para separar el 
disolvente por lo 
cual es mejor para 
cromatografía de 
gases 
Detector de arreglo 
de diodos (UV-VIS) 
0.1-1 SI 
Todos los 
compuestos con 
enlaces dobles en 
UV o tengan 
coloración 
Lámpara de 
Deuterio, Xenón o 
Wolframio 
Longitud de onda 
190nm a 900 nm 
Detector de 
Fluorescencia 
0.001 -0.01 SI 
Analitos 
fluorescentes o 
derivados 
fluorescentes 
Son de alta 
sensibilidad 
Detector de índice 
de refracción 
100-1000 NO 
Responde a todos 
los solutos con 
baja sensibilidad 
Son muy sensibles 
a la variación de 
temperatura 
Detector de 
dispersión de la luz 
tras evaporación(13) 
0.1-1 NO 
Se ocupa para 
tamaños de 
moléculas de 
polímeros y 
péptidos 
Es más sensible 
que los detectores 
de índice de 
refracción para 
solutos no volátiles 
Conductividad 0.5-1 NO 
Para cromatografía 
de intercambio 
iónico y trabaja por 
diferencias 
Baja sensibilidad y 
sensibles a 
impurezas 
 
Tabla 3: Detectores comúnmente ocupados para CLAR. (15) 
 
| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 13 de67 
 
C. Optimización y Validación. 
 
1. Optimización. 
 
a. Concepto. 
 
En general, la optimización se emplea para que, una tarea se realice más rápidamente, 
haciendo los cambios pertinentes para que esta se ejecute y funcione más rápido o exista 
una mejora en uno o más recursos del proceso a realizar. 
 
Al optimizar se pretende mejorar el procedimiento de elaboración, para aportar ventajas y 
mejoras en los diferentes procesos, como cambios en la fabricación sin alterar sus 
especificaciones fundamentales, en el caso de productos existentes o nuevos se busca una 
mayor eficacia y rentabilidad del proceso. 
 
Así optimizar, será obtener una eficacia máxima del proceso manteniendo el estándar de 
calidad, “Siempre debería considerarse la posibilidad de que haya una forma distinta de 
hacerlo mejor” es una idea muy efectiva a tener en cuenta en los trabajos de validación, que 
debería aplicarse esta metodología de optimización en las revalidaciones periódicas o 
revalidaciones por cambios. 
 
Por otra parte no debe perderse la idea de que “un proceso óptimo es aquel que permite 
obtener un producto con la calidad establecida al mínimo costo”; con lo cual no es solo 
interesante desde el punto de vista farmacéutico sino que la optimización es imprescindible 
para cualquier proyecto. La idea es “fabricar al mínimo costo con el nivel de calidad exigido” 
(16) 
 
b. Optimización de Métodos Analíticos. 
 
Siempre es necesario aportar algunas ventajas a los métodos analíticos sin alterar sus 
especificaciones fundamentales y utilizando los recursos disponibles teniendo como objetivo 
una mayor eficacia y rentabilidad del método, para obtener una eficacia máxima del método 
manteniendo el estado de calidad del método. 
 
Al validar se debe optimizar el proceso para obtener un producto con calidad establecida al 
mínimo costo, mejorar el rendimiento del proceso y reducir el tiempo; por lo que esto implica 
no solo un enfoque a nivel farmacéutico, si no también a nivel financiero. 
 
La calidad del método debe ser establecida tan pronto como sea posible ya que los cambios 
en una validación provocan trámites, costos directos o es necesario esperar a la revalidación, 
pero la optimización debe ser plasmada en una metodología analítica para poder ser 
validado. 
 
| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 14 de67 
 
2. Validación. 
 
a. Conceptos de Validación de Método Analítico. 
 
1) Precisión: Se demuestra, por estudios de laboratorio, que la capacidad del 
método satisface los requisitos para la aplicación analítica deseada. (2, 3, 17) 
2) Adecuabilidad del Sistema: Verifica que el sistema (instrumento, analista, 
equipo, sustancia de referencia, entre otros) opera en base a criterios 
establecidos, que permiten asegurar la confiabilidad de los resultados de un 
método analítico. (2, 3, 17) 
3) Especificidad: Capacidad de un método analítico para obtener una respuesta 
debida únicamente al analito de interés y no a otros componentes de la 
muestra. (2, 3, 17) 
4) Linealidad del Sistema: Conjunto de operaciones que determinan, bajo 
condiciones especificadas, o la relación entre los valores representados por 
una medición material y los valores conocidos correspondientes a un patrón 
de referencia. (2, 3, 17) 
5) Linealidad del Método: Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos 
directamente o por medio de una transformación matemática definida, son 
proporcionales a la concentración del analito, dentro de un intervalo 
determinado. (2, 3, 17) 
6) Exactitud: Relación entre un valor obtenido empleando en el método y el valor 
de referencia. (2, 3, 17) 
7) Repetibilidad: Precisión de un método analítico, expresada como la proporción 
obtenida entre determinaciones independientes realizadas por un solo 
analista, usando los mismos instrumentos y método. (2, 3, 17) 
8) Precisión Intermedia: Precisión de un método analítico, expresada como la 
correlación relativa obtenida entre determinaciones independientes realizadas 
en un mismo laboratorio, por diferentes analistas, en distintos días. (2, 3, 17) 
9) Estabilidad de la solución analítica: Propiedad de una muestra preparada para 
la cuantificación de la conservación de su integridad fisicoquímica y la 
concentración del analito, después de almacenarse durante un tiempo 
determinado bajo condiciones específicas. (2, 3, 17) 
10) Robustez del Método analítico: Capacidad del método analítico de mantener 
su desempeño al presentarse variaciones pequeñas pero deliberadas, en los 
parámetros normales de operación del método. (2, 3, 17) 
 
 
D
 
Las fo
excipie
 C
 T
 
 
1.
 
Prepar
deliber
fabrica
sustanc
equival
 
Prepar
activas
la mism
de fabr
 
 
D. Formas F
ormas farm
entes en dife
SÓLIDOS
Capsulas 
Tabletas 
Polvo Rest
Pastillas 
Ta
. Los solido
 
a. Conve
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b. Modific
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 Pul3)
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Farmacéuti
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 
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abla 4. Form
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DAMENTACIÓ
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SEMISÓL
Pastas 
Cremas 
Pomadas
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ÓN DEL TEMA
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A 
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LÍQUID
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 Solucio
 Inyecta
 Emulsio
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 Tinturas
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| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 18 de67 
 
3. Principales Componentes. 
 
a. Diluentes. 
 
Los diluentes son sustancias con función de relleno como se muestra en la tabla 6, sin 
actividad farmacológica, utilizadas para alcanzar el tamaño deseado de las tabletas. Se 
seleccionan en función de las propiedades de compresión, solubilidad, capacidad 
absorbente, la alcalinidad y acidez, etc. (20) 
 
DILUENTES PROPIEDADES INCOMPATIBILIDAD MARCAS COMENTARIOS 
Fosfato Dibásico 
de Calcio 
Buenas 
propiedad de 
flujo y puede 
ocuparse como 
lubricante. 
No puede ser usado 
en formulaciones 
con tetraciclinas. 
 
Se reporta 
incompatibilidad con 
aspirina, 
indometacina 
aspartame, 
ampicilina 
cefalexina y 
eritromicina. 
Cyfos, Calstar, 
Calipharm, 
Emcompress 
Insoluble en 
agua y alcohol, 
muy soluble en 
ácido clorhídrico 
3N. 
 
Buenas 
propiedades de 
flujo. 
 
Disponible en 
forma anhidra 
Lactosa 
Monohidratada 
Diluente 
comúnmente 
utilizado y 
económico 
Aminoácidos, 
aminas primarias y 
anfetaminas. 
Lactochemmill
ed Granulac 
200, Granulac 
230, Sorbolac 
400, 
Granulac® 140 
Prismalac 40, 
Capsulac 60, 
Sachelac 80, 
Cuando se 
encuentra con 
aminas primarias 
en ambientes 
alcalinos puede 
producir una 
reacción de 
condensación de 
Maillard 
Celulosa 
Microcristalina 
Adsorbente, 
agente de 
suspensión, 
diluente o 
desintegrante 
en comprimidos 
y cápsulas. 
Es incompatible con 
agentes oxidantes 
fuertes y es 
higroscópica. 
Flocel, 
Microcel, 
Avicel, 
Emcocel, 
Compactrol 
Ligeramente 
soluble en 
soluciones 
alcalinas, 
insoluble en 
agua y ácidos 
diluidos y la 
mayoría de 
ácidos orgánicos
Tabla 6. Diluentes para la fabricación de tabletas. (21) 
 
| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 19 de67 
 
b. Aglutinantes. 
 
Estas sustancias unen las partículas entre sí cuando la sola presión no basta para 
mantenerlas agrupadas en gránulos. Además aumentan la resistencia a la ruptura de las 
tabletas, pero reducen su velocidad de disolución, ver tabla 7. 
 
Aunque pueden utilizarse en seco, en general se agregan a la formulación en solución o 
dispersión para garantizar una distribución más homogénea. (21) 
 
AGLUTINANTES CONCENTRACIÓN (P/V) MARCAS 
Carbomero 5-10 Carbopol 
Carboximetilcelulosa de Calcio 5-15 Nymcel 
Carboximetilcelulosa de Sodio 5-15 Nymcel y Gelcel 
Hidroxipropilmetilcelulosa 2-5 Methocel y Pharmacoat 
Silicato de Aluminio y Magnesio 2-10 Pharmasorb y Veegum 
Maltodextrina 2-10 Glucidex, Lycatab y Maltrin
Metilcelulosa 1-5 Celacol y Methocel 
Oxido de Polietileno 5 Poliox 
Plividona 0.5-5 Plasdone y kollidon 
Tabla 7.Aglutinantes utilizados en la formulación de tabletas. (21) 
 
c. Desintegrantes. 
 
Los desintegrantes se utilizan para acelerar la disgregación del principio activo en el agua y 
en los jugos gástricos, facilitando así su disolución y absorción. Esta función la pueden 
ejercer en virtud de la solubilidad, que es mayor que la del principio activo; por ejemplo, 
cuando este es poco hidrosoluble, ejemplos de estos en tabla 8. 
 
También actúan por hinchamiento, favoreciendo la penetración de los líquidos en el 
comprimido y la separación de los gránulos. Por último, cuando los comprimidos son 
efervescentes, el mecanismo de acción consiste en fomentar la liberación de los gases 
previamente incorporados al contacto del comprimido con el agua, lo que conduce a su 
disgregación. (21) 
 
   
| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 20 de67 
 
DESINTEGRANTES CONCENTRACIÓN (%) CARACTERISTICAS 
Celulosa Microcristalina Hasta 10 
AVICEL (MR) es directamente 
comprensible y tiene 
propiedades lubricantes 
Almidón 2 – 10 
Los de maíz y de papa son los 
más utilizados 
Almidón Glicolato Sódico 1 – 10 
PRIMOJEL (MR) 
EXPLOTAB (MR) 
PVP Cross Linked 2 POLIPLASDONE XL (MR) 
Dodecil Sulfato de Sodio 0.5 - 5 
Humectante coadyuvante de 
desintegración 
Tabla 8. Desintegrantes que se utilizan en tabletas. (21) 
 
d. Lubricantes. 
 
Cumplen varias funciones en el proceso de elaboración de los comprimidos. Previenen la 
adhesión a la superficie de matrices y punzones, reducen la fricción entre las partículas, 
facilitan la eyección en la cavidad de la matriz y mejoran la velocidad de flujo de la 
granulación del comprimido. Una selección deficiente o cantidad excesiva pueden originar la 
impermeabilización de los comprimidos, cuyo resultado es una escasa desintegración o una 
disolución retardada ver tabla 9. (21) 
 
LUBRICANTE 
CONCENTRACIÓN
(%) 
PROP. 
DESLIZANTE 
(GLIDANTE) 
CARACTERÍSTICAS 
PROPIEDAD 
PRINCIPAL 
Estearatos 
metálicos 
< 1 Escasa Buena 
Excelente 
Lubricante 
Talco 1-5 Buena Insoluble en agua 
Escasa 
Lubricante y 
Deslizante 
Cera de alto P.F. 3-5 Ninguna Escasa 
Excelente 
Lubricante 
Almidón de maíz 5-10 Excelente Excelente 
Escaso 
Lubricante 
Estearato de Mg, 
Ca, o Ácido 
esteárico 
0.2-1 Ninguna 
Insoluble en agua, 
Fuerza de tableta y 
velocidad de disolución. 
Buen 
Lubricante 
PEG 4000 y 6000 2-5 Buena 
Soluble en agua, 
moderadamente 
efectivo 
Lubricante 
Tabla 9: Lubricantes ocupados para las tabletas. (21) 
 
F. O
 
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Desde 
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6.
 
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(27) 
 
 
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4 
| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 24 de67 
 
4) Insuficiencia renal: No suele ser necesaria la realización de un reajuste 
posológico. 
5) Inyectables: El liofilizado reconstituido y diluido se administrará en infusión 
intravenosa lenta, en un período de 20-30 minutos. 
6) Dosis: Las dosis superiores a 60 mg/24 horas por vía parenteral, deberán 
fraccionarse y administrarse cada 12 horas. 
 
7. Toxicología. 
 
La toxicidad aguda del omeprazol luego de la administración oral en roedores es baja. La 
dosis letal 50 es superior a los 4g/kg. Bien tolerado en estudios a largo plazo con dosis de 
hasta 400 µmol/kg/día orales, en perros y de 1 200 µmol/kg/día orales en ratas. No se 
observó efecto teratogénico ni toxicidad fetal ni se registró efecto mutagénico en estudios in 
vitro e in vivo. (27) La inhibición de la secreción ácida se acompaña de hipergastrinemia. Los 
estudios en perros y ratas demostraron que la administración prolongada se acompañaba de 
hipertrofia de la mucosa oxíntica por efecto trófico de la gastrina. Esta hormona también 
regula la función y proliferación de las células enterocromafines. Los estudios a dos años, en 
ratas, demostraron el desarrollo de carcinoides de estas células en algunos de los animales 
tratados. Sin embargo, estos tumores ocurren independientemente del mecanismo inhibidor 
de la secreción ácida. (23) Los experimentos en perros y ratas indicaron, también, que la 
hipergastrinemia revierte rápidamente una vez que se interrumpe el tratamiento. La 
hiperplasia de las células enterocromafinesen ratas es, totalmente reversible. (27) Los 
tratamientos cortos no se asociaron con aumento significativo de estas últimas células ni con 
cambios en la mucosa oxíntica. En pacientes tratados entre 1 y 4 año no se registró ninguna 
alteración anatomopatológica. En sujetos con síndrome de ZE tratados hasta 4 años, no se 
observó aumento de las células enterocromafines. Esto indicaría, que la hipergastrinemia 
moderada, asociada con dosis antiulcerosas durante períodos cortos, no presenta riesgo. (27) 
 
8. Precauciones. 
 
Los pacientes en tratamiento con fenitoína o acenocumarol, se recomienda monitorizar las 
concentraciones plasmáticas de ambos cuando se inicie y cuando se interrumpa un 
tratamiento con omeprazol. (27) 
 
9. Interacciones con otros medicamentos. (27) 
a. Antifúngicos azólicos (itraconazol, ketoconazol). 
b. Anticoagulantes orales (acenocumarol, warfarina). 
c. Antiepilépticos (carbamazepina, fenitoína). 
d. Atazanavir. 
e. Ciclosporina. 
f. Digoxina. 
g. Metotrexato. 
h. Voriconazol. 
10. Cuadro Básico. 
 
| FUNDAMENTACIÓN DEL TEMA  Página 25 de67 
 
 
El omeprazol se encuentra en el cuadro básico de medicamentos en el Distrito Federal en el 
grupo 8 de Gastroenterología 
 
GRUPO N° 8 GASTROENTEROLOGÍA CATÁLOGO 
Clave 
Nombre 
Genérico 
Descripción Cantidad Presentación 
5181 Octreotida Solución Inyectable 1 mg / 5 mL 
Frasco ámpula 
con 5 mL 
5187 Omeprazol o antoprazol 
Solución 
Inyectable 
Omeprazol 40 mg 
ó 
Pantoprazol 40 mg 
Frasco ámpula y 
ampolleta con 10 
mL de diluyente 
5186 
Pantoprazol o 
Rabepreazol u 
Omeprazol 
Tableta o gragea o 
cápsula 
Pantoprazol 40 mg 
o 
Rabepreazol 20 
mg u 
Omeprazol 20 mg 
7,14 ó 28 tabletas 
o grageas o 
cápsulas 
1234 Ranitidina Solución Inyectable 50 mg 
5 ampolletas con 2 
ó 5 mL 
2149 Misoprostol Tabletas 200 µg Envase con 28 tabletas 
 
Tabla 10. Cuadro básico de Medicamentos en el Distrito Federal 2012.(28) 
 
 
| PLANTAMIENTO DEL PROBLEMA.  Página 26 de67 
 
 
II. PLANTAMIENTO DEL PROBLEMA. 
 
 
 
 
Actualmente las necesidades de los laboratorios farmacéuticos, son realizar estudios cada 
vez más pertinentes, que aseguren la calidad del producto tanto para su desarrollo, 
evaluación de proveedores, fabricación y comercialización, además que todo proceso de 
análisis, desde la materia prima, producto intermedio hasta un producto terminado implica un 
gasto de recursos e influye directamente los proveedores en cuanto a la calidad de sus 
productos y costos que implican. 
 
 
Por lo cual es necesario determinar la calidad y utilidad del método analítico así como saber 
que los datos obtenidos al aplicar la metodología analítica son confiables y para garantizar la 
eficacia del método es necesario validar. 
 
 
La validación de los métodos analíticos es un proceso por el cual se determina la 
conveniencia de una metodología dada para proporcionar un dato analítico útil. En este 
proceso se toma una decisión sobre la utilidad de un método después de que sus 
características han sido evaluadas con respecto a los requerimientos analíticos, cumpliendo 
con la normatividad que establece que se validen todos los procesos y metodologías (NOM-
059 y NOM-177), e incluirlos en un protocolo de validación del producto. 
 
 
Esto implica realizar optimizaciones a los métodos analíticos desarrollados los cuales deben 
de ser de calidad y evitar los problemas que se presentan con la metodología desarrollada, 
ya que presentaba problemas con la saturación de la columna y llegaba al punto de taparse y 
debido al uso y la concentración de fosfatos en la fase móvil; por lo tanto no era posible 
utilizarla nuevamente, aumentando los costos de análisis, por esto es necesario hacer un 
método más eficiente, además que se debe procurar optimizar las condiciones y 
proveedores, para reducir costos y tiempo que se obtienen siguiendo metodologías antes 
establecidas, sin olvidar cumplir con la normatividad por lo cual deben ser validado. 
 
| OBJETIVOS.  Página 27 de67 
 
III. OBJETIVOS. 
 
 
 
A. General. 
 
 Optimizar y validar un método analítico para la cuantificación de Omeprazol Base de 20 
mg en tableta forma farmacéutica. 
 
 
 
B. Particulares. 
 
 
 Desarrollar una metodología que evite los problemas encontrados en la metodología 
propuesta. 
 
 Validar el método analítico optimizado. 
 
 Reducir costos y recursos en comparación con la técnica establecida. 
 
 
 
 
 
IV. HIPÓTESIS. 
 
 
 
Al realizar la Optimización del método analítico, ya implementado, para Omeprazol se lograra 
un método más eficiente además que se obtendrá una reducción significativa en recursos 
económicos. 
 
| METODOLOGÍA.  Página 28 de67 
 
V. METODOLOGÍA. 
 
A. Equipo. 
 
 Cromatógrafo de líquidos de lata resolución (CLAR) Waters con detector de arreglo de 
diodos. Con calibración vigente. HPLC 1 M03296403M Waters 
 Inyector : Automático 
 Balanza Semimicro Analítica Marca Mettler Toledo, modelo XS205DU, no. serie 
1126113510, Calibración vigente. 
 Balanza Granataria Digital Marca Sartorius, modelo TE6101, no. serie 9250282, 
Calibración vigente. 
 
B. Materiales. 
 
 Columna cromatográfica: Fase reversa, ZorbaxEclipse Plus C18 (Agillent Tecnologies) de 
4.6 mm DI x 150 mm de largo, tamaño de partícula 5 m. 
 Matraces volumétricos ámbar de 25, 50, 100 y 200 mL, Brand, clase A 
 Probeta de poliproprileno graduada con capacidad de 1000 mL. 
 Pipetas volumetricas con capacidad para 1, 2, 2.5, 3 y 5 mL, Brand Clase A. 
 Filtros Millex HV PVDF 0.45 µm. 
 Espátulas de acero inoxidable 
 Viales para cromatografía de 2 mL color ámbar 
 
C. Reactivos. 
 
 Estándar de referencia Secundaria de Omeprazol Base vigente. Lote: OME/010/09/07 
HELM DE MEXICO JUN/12. 
 Producto de Agrucid, Lote Piloto Prueba 0906-80. 
 Cloruro de Sodio grado reactivo Lote: C39C51 J. T. BAKER. 
 Ácido Clorhídrico grado reactivo Lote: C67B34 J. T. BAKER. 
 Fosfato Dibásico de Sodio grado reactivo Lote: H49C00, H07C10, H34C14 J. T. BAKER. 
 Hidróxido de Sodio grado reactivo Lote: G26C52 J. T. BAKER. 
 Fosfato Monobásico de Sodio grado reactivo C30C02 J. T. BAKER. 
 Acetonitrilo grado HPLC J15C70 J. T. BAKER. 
 Alcohol Etilico grado reactivo Lote: F67K34 J. T. BAKER. 
 Agua purificada grado farmacéutico tipo 1. 
 
 
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D. Diagrama de flujo general. 
REVISIÓN TEÓRICA DESARROLLO EXPERIMENTAL DOCUMENTACIÓN 
 
 
Figura 14. Diagrama de flujo general 
Revisión Bibliográfica 
Caracterización del Principio 
Activo según FEUM 9ᵃ edición. 
Seleccionar 
Metodología 
Analítica 
Caracterización y Análisis de la 
Materia Prima para Estandarización.
Estandarización de la Referencia 
Secundaria.
NO 
Reproducibilidad de la metodología 
reportada en FEUM 9ª Edición, 
metodología a Optimizar (Fase A) y 
metodologías propuestas (Fase B y C). 
Cromatogramas de reproducibilidad 
de metodologías. 
SI 
Propuestas de Optimización 
Optimización de los siguientes puntos en el método: 
a) Fase Móvil 
Fase B: Acetonitrilo‐Buffer de Fosfatos 1M 
Fase C: Metanol‐ Agua + Trietilamina al 1% 
b) Columna 
Water XbridgeC18, Varian Fortis Plus C18 150 x 
4.6 mm y 5 μm 
c) pH: 7, 7.5 y 8.5 
d) Velocidad de Flujo. 0.8,1 y 1.2 mL/min 
e) Temperatura de Muestra. 10, 15, 25, 35 °C 
f) Temperatura de columna. 21, 30, 39 °C 
g) Preparación de muestra y efecto del filtro. 
Evaluar cada 
una de las 
condiciones y 
establecer el 
método 
A
SI 
NO
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REVISIÓN TEÓRICA DESARROLLO EXPERIMENTAL DOCUMENTACIÓN 
 
 
Figura 15. Diagrama de flujo (Continuación) 
A 
Validación del método analítico 
de acuerdo a los siguientes 
lineamientos 
SISTEMA 
MÉTODO 
Precisión 
Adecuabilidad 
Linealidad 
Realizar los 
cálculos 
pertinentes y 
comprobar que 
cumpla con los 
criterios de 
NO
Especificidad 
Exactitud y repetibilidad 
Precisión
Linealidad 
Límite de Cuantificación 
Estabilidad Analitica de la Muestra 
Límite de detección 
ToleranciaNO
Reporte de Validación 
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E. Procedimiento 
 
1. Se revisaron de farmacopeas, libros, artículos correspondientes a características de 
principio activo y metodologías para su cuantificación por CLAR. 
2. Se caracterizó el principio activo Omeprazol base según la Farmacopea de los 
Estados Unidos Mexicanos vigente; se estandarizó la materia prima con respecto a 
su estándar USP. 
3. Se reprodujeron los métodos que se encuentran reportados en farmacopeas, 
bibliografía y la metodología que se tiene establecida en el laboratorio. 
4. Se realizaron optimizaciones en los siguientes puntos. 
a. Fase Móvil: A partir de la revisión se realizaron metodologías analíticas y se 
propusieron dos fases móviles que cumplíeran con las características necesarias 
para ser evaluadas, con reactivos que se encuentren en el laboratorio de bajo 
costo, con posibilidades de mejora y con un tiempo de retención menor. 
b. Columna: Se evaluaron dos columnas con las mismas propiedades, C18 150 
mm x 4.6 mm y 5μm, pero de diferentes marcas. 
c. pH: Se evaluaron tres diferentes pH de la fase móvil que fueron 7, 7.5 y 8.5. 
d. Velocidad de Flujo: Se presentaron tres velocidades de flujo diferentes las 
cuales fueron de 0.8 mL/min, 1 mL/min y 1.2 mL/min. 
e. Temperatura de la Muestra: Se decidió probar con temperatura de la muestra a 
10, 15, 25 y 35 °C. 
f. Temperatura de Columna: Se evaluaron diferentes temperaturas en la columna 
los cuales fueron 21, 30 y 39 °C. 
g. Preparación de la Muestra: Se optimizó la preparación de la muestra con 
respecto al diluente. 
Por problemas que se encontraron durante la validación, ya que el estándar y la 
muestra se tenían el mismo tiempo de retención, indicando una desigualdad en la 
preparación de la muestra. 
h. Filtro: Se evaluó el efecto del filtro con respecto a la muestra. 
i. Evaluó la optimización, una vez ajustados los cambios pertinentes de 
optimización evaluados en el punto 4, evaluar el método. 
Existió problemas con el filtro inicialmente utilizado, por lo cual se evaluaron 
diferentes filtros, nylon, nylon + fibra de vidrio y PVDF. 
j. Validación del Método Analítico, evaluaron los siguientes puntos. 
1) Sistema. 
a) Precisión del Sistema. 
Pesar con exactitud el equivalente a 18.52 mg de sustancia de referencia de Omeprazol 
Base y transferir a un matraz volumétrico actínico de 100 mL, adicionar 20 mL de 
alcohol absoluto y 30 mL de medio de disolución para curva de calibración, disolver por 
sonicación por 15 minutos, dejar enfriar y llevar a volumen con el medio de disolución 
para curva de calibración. Tomar una alícuota de 2.5 mL de la solución anterior y 
tranferir a un matraz volumétrico actínico de 25 mL, llevar a volumen con medio de 
disolución para curva de calibración, mezclar perfectamente. Filtra a través de un filtro 
millex HN PVDF 0.45 μm, descartar los primeros mL del filtrado y tranferir a viales para 
HPLC actínicos. 
b) Adecuabilidad del Sistema 
Misma preparación que se utiliza para precisión intermedia. 
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c) Linealidad del Sistema 
Pesar con exactitud el equivalente a 18.52 mg de sustancia de referencia de Omeprazol 
Base y transferir a un matraz volumétrico actínico de 100 mL, adicionar 20 mL de 
alcohol absoluto y 30 mL de medio de disolución para curva de calibración, disolver por 
sonicación por 15 minutos, dejar enfriar y llevar a volumen con el medio de disolución 
para curva de calibración según la tabla 11. 
Nivel 
(%) 
Volumen en mL 
de la alícuota de 
la solución stock 
Volumen de aforo 
con diluente 
Concentración 
(mg/mL) 
Omeprazol Base 
10  1  100  0.00185 
40  2  50  0.00741 
70  7  100  0.01296 
100  5  50  0.01852 
120  6  50  0.02222 
Tabla 11. Niveles de preparación del omeprazol. 
2) Método. 
Preparación de la Solución de Referencia de Omeprazol Base (Preparar por 
duplicado): 
Pesar con exactitud el equivalente a 18.52 mg de sustancia de referencia de 
Omeprazol Base y transferir a un matraz volumétrico actínico de 100 mL, disolver con 
2.5 mL de etanol, disolver por sonicación durante 5 minutos y llevar a volumen con 
medio de disolución para curva de calibración. Tomar una alícuota de 5mL de la 
solución anterior y transferir a un matraz volumétrico actínico de 50mL, llevar a 
volumen de aforo con a medio de disolución para la curva, mezclar perfectamente. 
Filtrar a través de un filtro millex HN PVDF 0.45 µm, descartar los primeros mL del 
filtrado y transferir a viales para CLAR. 
a) Especificidad. 
Preparación de la solución placebo de Omeprazol Base (Preparar por duplicado): 
Pesar aproximadamente 2315mg de Placebo y depositarlo en un matraz actínico 
volumétrico de 100mL, adicionar aproximadamente 50mL de medio de disolución y 
sonicar por 10 minutos, dejar enfriar y volver a sonicar por 10 minutos. Dejar enfriar y 
llevar a volumen con medio de disolución, tomar una alícuota de 5mL de muestra y 
añadir 1mL de hidróxido de sodio 0.5M, mezclar perfectamente. Filtrar a través de un 
filtro millex HN PVDF 0.45 µm, descartar los primeros mL del filtrado y transferir a 
viales para HPLC. 
Preparación del blanco: Tomar una alícuota de 5 mL de medio de disolución y añadir 1 
mL de hidróxido de sodio 0.5M, agitar, filtrar a través de filtro de HN 0.45 µ al 
momento de pasar a viales cromatograficos. 
Preparación de la muestra: Colocar 20 tabletas y pesar con exactitud el equivalente a 
18.52 mg de sustancia de referencia de Omeprazol Base y tranferir a un matraz 
volumétrico actínico de 100 mL, adiconar 20 ml de etanol absoluto y 30 mL de medio 
de disolución, disolver por 15 minutos, dejar enfriar y llevar a volumen con medio de 
disolución. Tomar una alícuota de 2.5 mL, llevar a volumen, mezclar perfectamente. 
Filtrar a través de un filtro de HN PVDF 0.45 µ al momento de pasar a viales 
cromatograficos. 
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b) Exactitud y Repetibilidad del Método. 
Solución muestra de Omeprazol Base (preparación por Sextuplicado): Pesar con 
exactitud el equivalente a 185.20 mg de sustancia de referencia de Omeprazol Base y 
la cantidad de polvo equivalente a 185.20 mg del producto terminado y depositarlo en 
un matraz volumétrico de 200 mL, agregar aproximadamente 5 mL de etanol y disolver 
por sonicación durante 5 minutos, llevar al aforo con medio de disolución para curva y 
mezclar. Tomar una alícuota de 1 mL de la solución anterior y depositarla en un matraz 
de 100 mL, llevar al aforo con medio de disolución para curva. Filtrar a través de filtros 
millex de PVDF 0.45 al momento de vaciar a los viales. (Concentración teórica de 
Omeprazol Base: 0.01852 mg/mL). 
 
c) Linealidad del Método. 
Solución muestra de Omeprazol Base al 10% (Preparación por Sextuplicado): Pesar 
con exactitud el equivalente a 18.52 mg de sustancia de referencia de Omeprazol Base 
y la cantidad de polvo equivalente a 18.52 mg de Omeprazol Base del producto 
terminado y depositarlo en un matraz volumétrico de 200 mL, agregar 
aproximadamente 5 mL de etanol y disolver por sonicación durante 5 minutos, llevar al 
aforo con medio de disolución para curva y mezclar. Tomar una alícuota de 1 mL de la 
solución anterior y depositarla en un matraz de 100 mL, llevar al aforo con medio de 
disolución para curva. Filtrar a través de filtros millex de PVDF 0.45 al momento de 
vaciar a los viales. (Concentración teórica de Omeprazol Base: 0.001852 mg/mL ). 
 
Solución muestra de Omeprazol Base al 100% (Preparación por Sextuplicado): Pesar 
con exactitud el equivalente a 185.20 mg de sustancia de referencia de Omeprazol 
Base y la cantidad de polvo equivalente a 185.20 mg del producto terminado y 
depositarlo en un matraz volumétrico de 200 mL, agregar aproximadamente 5 mL de 
etanol y disolver por sonicación durante 5 minutos, llevar al aforo con medio de 
disolución para curva y mezclar. Tomar una alícuota de 1 mL de la solución anterior y 
depositarla en un matraz de 100 mL, llevar al aforo con medio de disolución para 
curva. Filtrar a través de filtros millexde PVDF 0.45 al momento de vaciar a los viales. 
(Concentración teórica de Omeprazol Base: 0.01852 mg/mL). 
 
Solución muestra de Omeprazol Base al 120% (Preparación por Sextuplicado): Pesar 
con exactitud el equivalente a 222.20 mg de sustancia de referencia de Omeprazol 
Base y la cantidad de polvo equivalente a 222.20 mg del producto terminado y 
depositarlo en un matraz volumétrico de 200 mL, agregar aproximadamente 5 mL de 
etanol y disolver por sonicación durante 5 minutos, llevar al aforo con medio de 
disolución para curva y mezclar. Tomar una alícuota de 1 mL de la solución anterior y 
depositarla en un matraz de 100 mL, llevar al aforo con medio de disolución para 
curva. Filtrar a través de filtros millex de PVDF 0.45 al momento de vaciar a los viales. 
(Concentración teórica de Omeprazol Base: 0.02222 mg/mL). 
 
d) Precisión del Método. 
Solución muestra de Omeprazol Base al 100% (Preparación por Sextuplicado): Pesar 
con exactitud el equivalente a 185.20 mg de sustancia de referencia de Omeprazol 
| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 34 de67 
 
Base y la cantidad de polvo equivalente a 185.20 mg del producto terminado y 
depositarlo en un matraz volumétrico de 200 mL, agregar aproximadamente 5 mL de 
etanol y disolver por sonicación durante 5 minutos, llevar al aforo con medio de 
disolución para curva y mezclar. Tomar una alícuota de 1 mL de la solución anterior y 
depositarla en un matraz de 100 mL, llevar al aforo con medio de disolución para 
curva. Filtrar a través de filtros millex de PVDF 0.45 al momento de vaciar a los viales. 
(Concentración teórica de Omeprazol Base: 0.01852 mg/mL). 
 
e) Estabilidad Analítica de la Muestra. 
Se toman tres muestras de las utilizadas para exactitud a los tiempos necesarios. 
f) Límite de Detección. 
Tomar como solución stock y preparar soluciones a 0.463, 0.74, 0.929 y 1.11 μg/mL. 
g) Límite de Cuantificación. 
De las soluciones preparadas para límite de detección se determina el límite de 
cuantificación. 
h) Tolerancia. 
Preparar el estándar y dos muestras como se muestra en la precisión del método. Inyectar 
en dos equipos cromatograficos con las mismas condiciones, muestras y fase móvil. 
k. Reporte de Validación. 
VI. RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS. 
 
A. Revisión bibliográfica. 
 
Se realizó una revisión obteniendo información útil en 3 farmacopeas (española (19), 
mexicana (18) y americana (24)) y 10 artículos. 
 
Análisis: al realizar la revisión bibliográfica no se encontró información en primeras fuentes 
con respecto a las metodologías analíticas, ya que la forma farmacéutica en las farmacopeas 
es de capsula de gelatina dura, con gránulos recubiertos y no existe una metodología 
especifica de tabletas, sin embargo, se encontró bastante información en artículos, con la 
limitante que se refieren a bioquivalencia, plasma y no a métodos analíticos para producto. 
 
B. Estandarización del principio activo Omeprazol base según FEUM. 
 
Se analizaron las características químicas. 
 
 Solubilidad: Soluble en diclorometano y soluciones alcalinas, moderadamente soluble en 
metanol y alcohol, poco soluble en acetona y alcohol isopropilico e insoluble en agua. (18) 
 Valoración (98% a 102%): se obtiene un resultado de 100.24%.(18) 
 Humedad: 0.8638%. (18) 
 
Análisis: los resultados obtenidos fueron satisfactorios, ya que muestran que la materia prima 
del principio activo, que se estandarizó, puede ocuparse para los estudios correspondientes 
cumpliendo con las especificaciones. 
   
| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 35 de67 
 
 
C. Condiciones de las diferentes metodologías encontradas. 
 
Mediante características, recursos con que se cuentan en el laboratorio y sin los problemas 
del método anterior, se eligieron dos opciones de metodologías, se compararon con el 
método anterior y se determino una fase móvil de mejores características. 
 
Las tres metodologías se reprodujeron tal como se encuentran descritas en la bibliografía, 
utilizando condiciones constantes para las tres: columna (Xbridge C18), equipo (Waters, 
Alliace ), y el detector (arreglo de diodos). 
 
La Fase móvil A tenía problemas de saturación de sales, por lo que fue necesario realizar un 
lavado exhaustivo, la vida útil de la columna es de aproximadamente dos meses con trabajo 
continuo (aproximadamente 1000 inyecciones). 
 
| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 36 de67 
 
 
PROPIEDADES 
FASE A 
(método anterior) 
FASE B FASE C 
Fase Móvil 
Acetonitrilo : Buffer de 
Fosfatos 1M con Fosfato 
Dibásico de Sodio y Fosfato 
monobásico de sodio (66:34) 
Metanol : Agua+1% de 
Trietilamina (60:40) 
Acetonitrilo : Buffer de 
fosfatos 0.05 con Fosfato 
Monobásico (65:35) 
pH 7.6 7.4 8.5 
Columna 
Watters Xbridge C18 150 x 4.6 
mm, 5μm 
Bondapack C18 300 x 3.9 
mm, 5μm 
Watters Symmetry C18 
150 x 4.6 mm, 5μm 
Flujo (mL/min.) 1 2 1 
Tiempo de 
Retención 
obtenido (min.) 
3.5 8.5 2.71 
Tabla 12. Comparación de metodologías analíticas en bibliografía contra metodología anterior (29) 
 
Análisis: Al presentar problemas con saturación de las sales fue necesario buscar 
metodologías que eviten saturación en Fase A considerando que deben ocuparse recursos 
de fácil acceso para el laboratorio, se decidió probar dos fases móviles la B y la C como se 
muestra en la Tabla 12, B es una fase móvil con recursos de fácil acceso y sin contenido de 
sales evitando el problema de la fase A, por otro lado la Fase móvil C es accesible y con una 
concentración menor de fosfatos para evitar la saturación de la columna 
 
D. Optimizaciones: 
Se realizaron optimizaciones en los siguientes puntos. 
 
1. Fase Móvil. 
 
Se realizaron modificaciones para optimizar las condiciones de la fase móvil B y C en la tabla 
12, ya que se encontró que no se tenían problemas para utilizarse. Para reproducir estas 
modificaciones se ocupó la mismas columna (Watters Xbridge C18 150 x 4.6 mm, 5μm), y 
Cromatógrafo de líquidos de alta resolución (CLAR) Waters con detector de arreglo de 
diodos. Con calibración vigente. HPLC 1 M03296403M Waters, Inyector: Automático 
  
| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 37 de67 
 
 
 
Condiciones 
cromatográficas 
Fase Móvil B Fase Móvil C 
Proporción 50-50 60-40 75-25 65-35 62.5-37.5 55-45 
Tiempo de retención (tR) 4.7 3.08 1.7 3.47 3.12 2.54 
Factor de simetría (t) 1.09 1.15 1.2 1.31 1.30 1.37 
Área (μV*S) 352146 338945 318812 553,873 511,030 501,639 
Platos teóricos (N) 6132.13 6085.7 5475.58 8,277.05 8,423.03 6,447.48
Factor de Capacidad (K´) 3.7 2.02 0.7 2.47 2.12 1.54 
Presión (Psi) 2837 2837 2910 1130 1195 1700 
Tabla 13. Optimización de la polaridad de las fases móviles B y C 
La optimización de las polaridades de la fase móvil B y C se determino por medio de sus 
respuestas analíticas que se muestran en la Tabla 13, con estos valores se determino la 
proporción ideal de cada fase móvil. 
 
Condiciones 
Cromatográficas 
Fase Móvil C 
62.5:37.5 
Fase Móvil B 
50:50 
Muestra Estándar 
Placebo 
Cargado 
Estándar 
Placebo 
Cargado 
Tiempo de retención 
(tR) 
2.43 2.5 5.56 5.63 
Factor de simetría (t) 1.06 1.31 1.09 1.1 
Área (μV*S) 1922406 410566 2022530 399206 
Platos teóricos (N) 7411.23 7277.12 3436.4 6781.04 
Factor de Capacidad 
(K´) 
1.43 1.5 4.56 4.63 
Presión (Psi) 1540 1447 2380 2240 
Tabla 14. Comparación de la fase móvil B y C con respecto a su respuesta del estándar y 
placebo cargado. 
| RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS.  Página 38 de67 
 
Análisis: Al realizarse modificaciones en la polaridad de las fases móviles en la bibliografía se 
encontró una proporción en cada fase móvil, tabla 14 evaluándose la respuesta del estándar 
y del placebo cargado; encontrándose que la fase móvil C con la proporción 62.5:37.5 tiene 
mejor respuestas analíticas evaluadas con respecto a la fase móvil B. 
2. Columna. 
 
Condiciones 
cromatográficas 
Columna 
Waters Varian 
Flujo (mL/min) 1.0 1.0 
Tiempo de retención 
(tR, min.) 
2.58