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TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO DE ESPECIALISTA EN: PEDIATRÍA TITULO DE LA TESIS: MANOMETRIA ANORECTAL DE ALTA RESOLUCION EN PEDIATRIA PRESENTA: DRA. ANA GABRIELA DE LEON BECERRA TUTOR DE TESIS: DR. ERICK MANUEL TORO MONJARAZ MEXICO, DF A , 2015 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE MEDICINA DIVISIÓN DE ESTUDIOS DE POSGRADO INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRÍA UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. "MANOMETRIA ANORECT AL DE ALTA RESOLUCION EN PEDIATRIA" ) DRA. RO AUR ROSAS DIREC ORA DE ENSE ~ ~, DA. MANUEL ENRIQUE FLORES LANDERO JEFE DEL DEPARTAMENTO DE PRE Y POSGRADO DA. ERICK l TORO MONJARAZ GASTR OlOGO PEDIATRA ADSCRITO Al SE ICIO E GASTROENTEROlOGIA y NUTRICION PEDIATRICA TUTOR DE TESIS INDICE I. TITULO ................................................................................. 1 II. MARCO TEORICO .............................................................. 1 ANTECEDENTES .......................................................................1 1. Definición ............................................................................1 2. Epidemiología y estadísticas .........................................2 3. Fisiopatología ....................................................................3 4. Diagnósticos clínicos .......................................................7 5. Diagnóstico diferencial .................................................. 10 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ..................................... 10 JUSTIFICACION ....................................................................... 11 OBJETIVO .................................................................................. 11 HIPOTESIS ................................................................................ 11 III. MATERIAL Y METODOS ............................................... 11 IV. RESULTADOS ................................................................ 11 V. CONCLUSIONES .............................................................. 11 VI. BIBLIOGRAFIA ............................................................... 12 P ág in a1 I. TITULO MANOMETRIA ANORECTAL DE ALTA RESOLUCION II. MARCO TEORICO ANTECEDENTES 1. Definición El manómetro es un instrumento mecánico de medición de presiones, el elemento sensible del manómetro puede adoptar numerosas formas, el principio fundamental de que el movimiento del tubo es proporcional a la presión fue propuesto por el inventor francés Eugene Burdon en el siglo XIX y desde entonces ha sufrido modificaciones en cuanto a materiales y formas, así como se ha adaptado a diferentes tecnologías, lo que hoy nos permite tener manómetros, con formas, materiales y utilidades diversas. 14 La manometría anorectal convencional (MARC) provee información del esfínter anal en reposo, así como los cambios que ocurren, durante la contracción voluntaria, el descenso y la activación refleja del piso pélvico. Las presiones normales varían de acuerdo al género, edad y metodología de medición. 9 Actualmente existen dos tecnologías para realizar manometría anorectal (MA), mediante perfusión de agua y en estado sólido, en la última se puede realizar con dos diferentes tipos de catéteres y equipo de cómputo: alta resolución y alta definición o 3D. 7 La mayoría de los catéteres de manometría esofágica de alta resolución consiste en 36 sensores de presión de manera circunferencial, los cuales se encuentran situados a intervalos de 1cm, a diferencia de estos, los catéteres anorectales consisten en un conjunto de 10 a 16 sensores de manera circunferencial, y un conjunto de 16 sensores localizados en la punta que capturan la presión intrarectal, con un total de 256 sensores, separados entre sí a 4 y 2.1mm, respectivamente. El dispositivo mide 6.4cm en longitud y 10.75mm en su diámetro exterior. (Fig 1.1) El programa interpola de manera linear, el espacio entre los sensores y provee mediciones a intervalos de 1mm.6 Por lo tanto provee gran resolución fisiológica y minimiza artefactos de movimiento, los datos pueden ser desplegados en contornos isobáricos que pueden proveer una representación dinámica continua de los cambios de presión. 9 P ág in a2 Fig. 1.1 La presión se ejemplifica en el eje de las Y, mientras el tiempo se grafica en el eje de las x, lo que otorga una visión en dos dimensiones. (Fig 1.2 A y B ) Fig 1.2. Los colores son asignados a las presiones para formar un patrón de contorno con color, los colores fríos (azul) representan presiones bajas, mientras los colores calientes (rojo) representan presiones elevadas. Los dispositivos actuales de manometría permiten magnificar el contorno de color de la alta resolución, y así detectar cambios mínimos, otro método utilizado en conjunto, son las líneas de presión isobárica, las cuales son utilizados para determinar en qué localización del contorno la presión es la misma, por lo que la presión es mayor dentro del contorno y menor afuera de este2. La manometría anorectal evalúa la relajación interna del esfínter con distensión rectal, el procedimiento puede ser realizado con un catéter perfundido con agua, un catéter en estado sólido o un manómetro con balón triple conectado a una transductor y una computadora, donde incluso se pueden obtener biopsias. 4 2. Epidemiología y estadísticas La prevalencia de constipación en niños oscila entre el 4 y el 36%, que afecta más a mujeres que a hombres con una relación 2:1, y ocupa un costo estimado de 3.9 billones de dólares al año.8 En estudios con seguimiento a pacientes con malformaciones anorectales, se evidencia que la incontinencia fecal y la constipación severa ocupan el problema postoperatorio más común e incapacitante en estos pacientes, por lo que una evaluación morfológica y funcional del esfínter anal puede mejorar el pronóstico de estos pacientes, en este caso la manometría anorectal de alta resolución (MAAR) es segura, con costo beneficio elevado y mínimamente invasiva.12 P ág in a3 La manometría es una herramienta diagnóstica que se realiza en centros especializados en motilidad, utilizada para diferenciar entre la función motora normal y las alteraciones neuromusculares, en la evaluación de los pacientes con constipación intratable y pacientes con causas orgánicas21, así como dentro del plan quirúrgico en pacientes con síntomas refractarios. La manometría de alta resolución provee una representación clara de los eventos de presión en el canal anal y en el recto,2 en conjunto con la MAR se puede utilizar el examen de expulsión de globo el cual se ha reportado un 88% sensible y 89% especifico para el diagnóstico, también utilizado para el seguimiento y respuesta del tratamiento,1 mediante un estudio no invasivo que valora el diagnóstico y severidad de constipación e incontinencia en niños.8 Sin embargo el valor de métodos nuevos y más sofisticados para realizar MAR permanece aun sin establecerse en pediatría.7 3. Fisiopatología Antes de hablar de los hallazgos normales en la MAAR, es importante establecer conceptos básicos sobre la fisiologíade esta parte del tubo digestivo. Durante el proceso de expulsión de heces existe un aumento en la presión rectal y una relajación del esfínter anal externo. La continencia fecal depende de 3 factores principales: músculos voluntarios en esfínter anal, sensación del canal anal y motilidad intestinal. Fig 1.3: Componentes del musculo elevador del ano: músculos ileococcígeo, pubococígeo e isquiococcígeo. Los músculos voluntarios son utilizados en periodos breves cuando la masa fecal llega al área anorectal, empujada por la contracción peristáltica involuntaria de el recto sigmoides, previo a la defecación. P ág in a4 La sensación de evacuar reside en el canal anal, la cual es rudimentaria o inexistente en los pacientes con malformaciones anales, esto es secundario a la distención muscular (propiocepción), la implicación clínica de esto es que la materia fecal liquida no es sentida por el paciente, por lo tanto para adquirir algún grado de sensación y control intestinal, el paciente debe tener la capacidad de formar heces sólidas. Durante la exploración física es necesaria la examinación rectal, para evaluar la contracción refleja, en los casos donde esta última no se presenta, se puede sospechar de neuropatía, así como una falta de sensación de heces en el recto lo que eleva el índice de sospecha de hiposensibilidad rectal.19 La motilidad intestinal quizá es el factor más importante de la continencia fecal, el individuo normal, puede voluntariamente relajar los músculos estriados, lo cual permite la migración del contenido rectal a el área sensitiva del canal anal. El principal factor que provoca el vaciamiento del rectosigmoides, en una contracción peristáltica involuntaria, en ocasiones ayudada por maniobra de Valsalva. 22 Algunas de las medidas claves de rutina en la MAAR en pediatría incluyen las siguientes: Presión basal o en reposo del esfínter anal: esta medida refleja el tono del esfínter anal externo (EAE) y esfínter anal interno (EAI) con una contribución de mas del 75% del último. Fig 1.4 Presión máxima de contracción: definida como la presión máxima por encima de la presión media o el promedio de al menos tres presiones máximas. Longitud del canal anal: determinada por la distancia entre el ano y la localización de 5mmhg o mas de presión por encima de la presión rectal. Reflejo rectoanal inhibitorio (RRAI): es la relajación del EAI con estimulación ya sea por heces o balón, se les pide a los pacientes no realizar contracción voluntaria lo que puede afectar el grado de este. Fig 1.5 Sensación rectal consciente y necesidad de defecar: es el volumen mínimo que desencadena respuesta sensitiva, y la segunda es el volumen mínimo donde el paciente siente necesidad de defecar. Dinámica de expulsión de balón o defecatoria: se refiere a la dinámica de coordinación entre la contracción y relajación cuando el paciente trata de expulsar el balón a diferentes volúmenes donde se puede evidenciar disinergia. 25 P ág in a5 Fig 1.4 La presión basal depende primariamente del tono del esfínter anal interno y es lo primero que es medido al iniciar un estudio de MA AR. La presión generada por los esfínteres anales se evidencia por una barra brillante grande. Fig. 1.5 Reflejo Recto Anal Inhibitorio (RRAI). El aumento de la presión en el balón ilustrada en el sensor 12 coincide con una producción normal de relajación en el canal anal en los canales 4, 6 y 8, el RRAI empieza en el lado rectal del canal anal y se extiende de manera caudal conforme el balón se insufla. P ág in a6 Existen valores normales reportados en niños, principalmente de pacientes sometidos a MA AR, que fueron diagnosticados con constipación funcional. 24 Pacientes con constipación funcional Mínimo Máximo Presión anal media en reposo 57-67 ± 10-12mmHg Presión en contracción máxima 118-140 ± 42-52mm Hg Longitud anal 3.3 ± 0.8cm Umbral para relajación 5 ± 1ml Umbral de sensación rectal 5-14 ± 2-7 ml Volumen de relajación constante 104 ± 49ml Volumen crítico 101 ± 39ml Pacientes saludables Longitud del canal anal Neonatos 1.67±0.34c m Lactantes 1.86±0.6cm Niños 3.03±0.52cm Presión media de reposo 31.07±10.9 mm Hg 42.43±8.9 mm Hg 43.43±8.79 mm Hg Umbral medio de volumen para sensación rectal 9.67±3.6 ml 14±9.5ml 25±11.6ml Existen diferentes técnicas para valoración de la función gastrointestinal, una de ellas es la medición de los eventos de presión dentro del intestino utilizando sistemas para la grabación de la presión intraluminal, los cuales han evolucionado desde globos simples, hasta catéteres en estado sólido, como el que es utilizado en la MAAR, esta última trajo consigo un mejor entendimiento de la fisiología gastrointestinal2. Cuando se sospecha de dismotilidad colónica, la manometría colónica provee una evidencia objetiva de la motilidad colónica, puede descartar neuropatías o miopatía y puede guiar intervenciones terapéuticas, la motilidad puede ser medida de manera cualitativa, mediante la evaluación visual de los patrones manométricos, así como cuantitativa calculando el índice de motilidad. 5 P ág in a7 4. Diagnósticos clínicos Existen dos amplios espectros de patología que puede evaluar la MAAR los dividiremos en dos grupos importantes: a) Constipación Generalmente definida como el retraso o dificultad en el patrón evacuatorio, sin embargo la interpretación del término “retraso” varía ampliamente, dependiendo de la edad. Los cambios durante el crecimiento y desarrollo, la frecuencia y tipo de evacuaciones, debe de ser interpretado en el contexto de la edad y la etapa de maduración del paciente.15 La constipación en pediatría es definida cuando por lo menos 2 de los siguientes 4 criterios están presentes: frecuencia defecatoria menor a 3 episodios a la semana, 2 o más episodios de encopresis por semana, producción de cantidades grandes de evacuación cada 7 a 30 días (2 a 3 veces mayor cantidad de lo normal), que incluso pueda llegar a alterar el funcionamiento del sanitario, masa abdominal o rectal palpable, a diferencia de la incontinencia fecal funcional no retentiva, la cual definida como encopresis en ausencia de signos de constipación en un niño >4años. 20 En el neonato a término, el primer movimiento intestinal generalmente ocurre en las primeras 36 hrs de nacimiento, pero puede pasar incluso aun más tarde en los paciente prematuros; 90% de los recién nacidos pasan meconio en las primeras 24hrs de vida. En las primeras semanas de vida, lo pacientes evacuan alrededor de 4 veces al día, sin embargo esta variable, depende de la alimentación a base de seno materno o lactancia artificial. Durante los primeros 3 meses de vida, los recién nacidos alimentados al seno materno evacuan alrededor de 3 veces al día, sin embargo los que son alimentados con fórmula varían en número, hasta 2 veces al día.16,17. A los 2 años de edad, el número de movimientos intestinales a disminuido por debajo de 2 veces al día Antes de los 4 años de vida, disminuye aún más a uno por día. La frecuencia de los movimientos intestinales está influenciada por el tipo de alimentación y fórmula.15,18. El tiempo total del tránsito intestinal es de 8.5hrs en promedio de 1-3 meses, 16hrs de 4- 24meses, 26 hrs de 3-13 años y 30-48hrs después de la pubertad.15,18. Estudios recientes sugieren que la constipación crónica puede tener efectos deletéreos en el crecimiento físico, sin embargo un tratamiento de manera temprana confiere mejor pronóstico. La utilidad por excelencia de la manometría anorectal de alta resolución en niños es la Enfermedad de Hirschprung (EH), con una sensibilidad y especificidad de 93 y 99% P ág in a8 respectivamente 25, donde a pesar desugerir el diagnóstico por medio de esta, es útil en la evaluación de sintomatología persistente de incontinencia o constipación, posterior a cirugía correctiva, la presencia de RRAI en los pacientes postoperados es variable, en la mayoría de los estudios no se correlaciona con el resultado, sin embargo se ha observado que existe una correlación positiva entre el resultado funcional y la presión anal en reposo. Pacientes con síntomas obstructivos y con presiones normales o altas y esfínter anal que no se relaja, se pueden beneficiar de una miotomía en el EAI o tratamiento con toxina botulínica.24 b) Incontinencia Fecal Por definición se trata de la defecación en lugares inapropiados para el contexto social, por lo menos una vez por mes, con un período mínimo de 2 meses. La cantidad de heces fecales permite distinguir el término en dos, encopresis, caracterizado por expulsión de heces posterior a un movimiento intestinal en lugares inapropiados y derrame fecal, que se refiere a la fuga de pequeñas cantidades de heces.21 La continencia fecal depende de 3 factores principales: músculos voluntarios en esfínter anal, sensación del canal anal y motilidad intestinal. Los músculos voluntarios son utilizados en periodos breves cuando la masa fecal llega al área anorectal, empujada por la contracción peristáltica involuntaria de el recto sigmoides, previo a la defecación. La sensación de evacuar reside en el canal anal, la cual es rudimentaria o inexistente en los pacientes con malformaciones anales, esto es secundario a la distención muscular (propiocepción), la implicación clínica de esto es que la materia fecal liquida no es sentida por el paciente, por lo tanto para adquirir algún grado de sensación y control intestinal, el paciente debe tener la capacidad de formar heces sólidas. La motilidad intestinal quizá es el factor más importante de la continencia fecal, el individuo normal, puede voluntariamente relajar los músculos estriados, lo cual permite la migración del contenido rectal a el área sensitiva del canal anal. El principal factor que provoca el vaciamiento del rectosigmoides, en una contracción peristáltica involuntaria, en ocasiones ayudada por maniobra de Valsalva. 22 La incontinencia fecal funcional, puede ser categorizada en primaria o secundaria, para la primera, se categoriza en el niño que aún no controla esfínteres, mientras que la segunda se ocupa para el niño previamente continente, la cual responde mejor al tratamiento. Existen 4 grupos de niños con incontinencia fecal: - Constipación con incontinencia por rebosamiento - Incontinencia fecal funcional no retencionista (IFFNR) - Malformaciones anorectales - Problemas medulares P ág in a9 En el 95% de los pacientes, sin causa orgánica identificada, se considera el diagnóstico de un desorden funcional de la defecación, sin embargo, el 90% de estos es secundario a constipación, y el 10% se clasifica como IFFNR. La constipación funcional, está caracterizada por una defecación dolorosa en la mitad de los pacientes, por lo que puede favorecer a la pérdida de materia fecal durante el día, en los niños con impactación pueden presentar incontinencia inclusive durante la noche. Los pacientes con IFFNR presentan un patrón evacuatorio normal, la definición es un paciente con una edad de desarrollo psicomotor por lo menos de 4 años, con historia de defecación en lugares inapropiados para el contexto social, por lo menos una vez por mes, sin evidencia de proceso inflamatorio, anatómico, metabólico o neoplásico y sin evidencia de retención fecal por lo menos 2 meses previos al diagnóstico. El mecanismo fisiopatológico de la IFFNR es desconocido, existen teorías que apuntan a que los pacientes, niegan o rechazan su estimulo normal y fisiológico para defecar, por lo que contraen el esfínter anal externo para retener heces en el recto, esto último basado en la función anorectal sensorimotora y MAR normal, pero dinámica defecatoria anormal.21 Durante el proceso de expulsión de heces existe un aumento en la presión rectal y una relajación del esfínter anal externo. En los pacientes con proceso de defecación alterado, existe la posibilidad de disfunción sensorial, donde el límite de ocupación colónica para activar el deseo de evacuar esta elevado en aproximadamente 60% de los pacientes con defecación disinérgica, lo que puede estar asociado con un incremento de la distensibilidad rectal. Existen cuatro tipos de defecación disinérgica: - Tipo I: existe una fuerza propulsiva adecuada <40mmhg con un aumento en la presión del esfínter anal paradójica. - Tipo II: no existe una fuerza propulsiva adecuada con una contracción anal paradójica - Tipo III: fuerza propulsiva adecuada sin presencia de relajación o presencia incompleta de esta <20%. - Tipo IV: fuerza de propulsión inadecuada con ausencia o relajación incompleta del esfínter anal. 19 (Fig 1.4) P ág in a1 0 Fig.1.4 5. Diagnóstico diferencial La constipación es un problema muy común tanto en primero como segundo nivel atención donde la etiología funcional contribuye al 36%3, en los niños es un problema común que abarca el 3% de todas las visitas al pediatra y 35% de las referencias a un gastroenterólogo pediatra. La manometría anorectal, a pesar de que no se considera de primera elección para el diagnóstico de pacientes, se ha utilizado en pacientes con síntomas refractarios3, con una prevalencia de 14.7% en pacientes hasta los 18 años, de los cuales el 31% inicio durante la infancia por factores variados.19 La incontinencia representa un problema devastador, para los que la sufren, y generalmente priva a una persona de convertirse socialmente aceptado, lo que ocasiona secuelas psicológicas serias. La mayoría de los pacientes que son sometidos a reparaciones de malformación anorectal, sufren en algún grado de desordenes funcionales de la defecación y anormalidades en el mecanismo de continencia fecal, hasta aproximadamente en un 25%. 22 En estudios con seguimiento a pacientes con malformaciones anorectales, se evidencia que la incontinencia fecal y la constipación severa ocupan el problema postoperatorio más común e incapacitante en estos pacientes, por lo que una evaluación morfológica y funcional del esfínter anal puede mejorar el pronóstico de estos pacientes, en este caso la MA AR es segura, con costo beneficio elevado y mínimamente invasiva.12 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Es importante resaltar que no existen estudios publicados acerca de presiones normales de MA en niños. En los pacientes más jóvenes, la sedación o anestesia es necesaria, debemos tomar en cuenta que esto puede disminuir el tono del esfínter anal interno, generalmente en niños mayores de 5 o 6 años, no es necesario, e incluso el paciente puede cooperar con el examen, P ág in a1 1 sobre todo en maniobras dinámicas como simular defecación, las cuales anteriormente solo eran utilizadas en adultos7 JUSTIFICACION En pediatría la mayoría de los casos de constipación, son secundarios a una obstrucción de la salida pélvica, en donde las causas más comunes son retención funcional fecal, anismo, acalasia o hipertensión1. En años recientes, la MA, la ultrasonografía anal y estudios de tránsito colónico han demostrado anormalidades fisiológicas y estructurales en estos pacientes. 8 Por lo tanto la manometría confiere resultados de manera acertada y precoz para los pacientes que ameritan tratamiento, sobre todo los pacientes que ameritan intervenciones de tipo quirúrgicas. OBJETIVO El objetivo principal de este estudio, es la recolección de evidencia existente en Manometría Anorectal de Alta Resolución (MA AR), para mejorar su conocimiento y limitaciones en población pediátrica, así como dar a conocer utilidades en patología pediátrica. HIPOTESIS La manometría es una herramienta diagnóstica que se realiza encentros especializados en motilidad, utilizada para diferenciar entre la función motora normal y las alteraciones neuromusculares, en la evaluación de los pacientes con constipación intratable y pacientes con causas orgánicas21, así como dentro del plan quirúrgico en pacientes con síntomas refractarios y evaluación indispensable en pacientes con incontinencia fecal. III. MATERIAL Y METODOS Se realizo una revisión de la bilbiografía existente en los principales buscadores, Pubmed, OVID, ScienceDirect, Springerlink y Jama Evidence de enero 2008 a enero 2014, con las palabras claves “manometry” y “pediatric”, utilizando el acceso de la Facultad de Medicina, Universidad Nacional Autónoma de México. IV. RESULTADOS Existen ventajas marcadas entre la manometría anorectal simple y la de alta resolución, donde en la primera solo se cuenta con un resultado en dos dimensiones, otra desventaja es que no discrimina entre las contribuciones individuales de las estructuras de los músculos pélvicos, en comparación con alta resolución donde se incluyen imágenes en tercera dimensión, así como permite establecer la contribución de las presiones de diferentes componentes.6 V. CONCLUSIONES No existen estudios de manometría anorectal de alta definición en pacientes pediátricos (MAAD), solo existe un estudio, Ambartsumyan & cols, que evalúa perfiles de presión endoanal en pacientes sin malformaciones anorectales, en donde se observa que existe P ág in a1 2 una asimetría en las presiones, lo mismo que se ha encontrado en adultos, sin embargo se concluye que durante el estudio no se encuentran variables importantes en cuanto a presiones, de acuerdo a talla, peso o índice de masa corporal, el estudio realizado demuestra la adecuada tolerancia y seguridad de la manometría anorectal. 23 La MAAR debe ser considerada como una herramienta útil en el diagnóstico de estreñimiento crónico, así como favorecer el estudio de pacientes en edad pediátrica de manera que se obtengan más estudios para beneficio en un futuro cercano, sobre todo en casos refractarios a tratamiento convencional. A demás de ser utilizada para descartar problemas funcionales en pacientes con incontinencia sin etiología definida. VI. BIBLIOGRAFIA 1. Belkind- Gerson Jaime, Goldstein Allan M and Kuo Braden. Balloon Expulsion Test as a Screen for Outlet Obstruction in Children With Chronic Constipation. JPGE. 2013 enero; 56 (1): 23-25 2. Conklin Jeffrey, Pimentel Mark and Soffer Edy. Color Atlas of High Resolution Manometry. 1st rev. New York: Springer Science; 2009. 98p. 3. Afzal Nadeem A, Ptighe Mark and Thompson Mike. Constipation in children. Italian Journal of Pediatrics. 2011; 37(38): 1-10 4. F. Har Aileen and Croffie Joseph. Encopresis. Pediatrics in review. 2011 Septiembre; 31 (9): 368-74. 5. Dranove Jason, Horn Debra, Naradimha Reddy S., Croffie Joseph. Effect of intravenous erithromycin on the colonic motility of children and Young adults during colonic manometry. Journal Pediatric Surgery. 2009, Julio; 22; 45: 777-783. 6. 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