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_ ....... _. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLAN ESPECIACION QUIMICA DE LOS FARMACOS ANTIINFLAMATORIOS TENOXICAM y PIROXICAM CON Fe (11) TESIS QUE PARA OBTENER EL TITULO DE: INGENIERO QUIMICO PRESENTA: ARTEMIO RESENDIZ GONZALEZ ASESOR: DRA. MARIA DEL ROSARIO MOYA HERNANDEZ CUAunruN IZCALLI, EDO. DE MEXlCO 2005 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLAN UNIDAD DE LA ADMINISTRACION ESCOLAR DEPARTAMENTO DE EXAMEN ES PROFESIONALES ASUNTO: VOTOS APRo.~ATORIOS DR. JUAN ANTONIO MONTARAZ CRESPO DIRECTOR DE LA FES CUAUTITLAN PRESENTE ~~. _: '- ; .0;" ':~f\"'~ , -',. ' . . : A TN: Q. Ma. del Carmen García Mijares Jefe del Departamento de Exámenes Profesionales de la FES Cuautitlán Con base en el arto 28 del Reglamento General de Exámenes, nos perm;timos comunicar a usted que revisamus léI TESIS: ESbleciaci6n qu1mica de los fármacos antiinflamatorios tennx1cam '¡: ----E.iroxh.am con Fe (.[r). que presenta el pasante: Artemio Res~ndiz Gonz!lez con número de cuenta ' 09506019-2 para obtener el título de : 1 nge ni e ro Qú fiímft1ir;;c;¡;;o:------- Considerando que dicho trabajo reúne los requisitos necesariC's para ser discutido en el EXAMEN PROFESIONAL correspondiente, otorgamos nuestro VUTO APROBATORIO. ATENTAMENTE "POR MI RAZA HABLARA EL ESPIRITU" Cuautitlán Izcalli, Méx. a _9_ de Diciembre de __ ..... 2 .... °""°.:0.4 __ PRESIDENTE MC. Guadalupe Sevilla 01az VOCAL Dr. Jose Luis Arias T~llez SECRETARIO Dra. Ma. del Rosario Moya HernQ.U"",-,,,-o<o..-~<--III--___ _ PRIMER SUPLENTE Q. Sonia Rincón Arce SEGUNDO SUPLENTE OrB. Hector Coss Garduño ~~ @<1i=.F"~~~0.~~. @ ~~ g~ ~ ~ ~k §=M.ro'" ~ fa~, (l. ~ft-~ ~, ~ ~ fa ~ g~, jO<li ~ ~.ro'" J ~ <t'"'-nw.~. @ jlU\Al. ~ S~ .F" taJa J-~ ~ nW- fw. ~.F""" ~ fa caM«Q.. @ mi ~ ~ e~ .ro'" ~, .F" Q.u, ~ ~ ~ <t'"'- me fw. aa.ao en. toJ.,~~(k~~. @~~ ~aJ~~~~~~~~me ~~~a~eak~. E9 ... ~ o. ~0[.F" OM, ~ ~ ~ roMiío q<U nW- fw.n. aMa .F"" ~ ok~, 0Á,tt ~ na ~ ~~. §~.F" 0= ~~. E9 ... ~ o. to<b b ~ .ro'" Q.u, r en. mi .F-" .r-= fa g:E9Se. ~~ @ r.,. ~ ~ quimi= ~.ro'" b ~ ~.F"" ef ~ ~ ~ (k eó.I:a.~. ~~. @J~~~F'(\44-~.JW=Mk~. II INOICE L- INTRODUCCiÓN 2.- OBJETIVOS - Hipótesis. -Objetivo General. -Objetivos Específicos. 3.- ANTECEDENTES 3.1. O Artritis Rewnatoide. 3.1.1 La artritis rewnatoide en las articulaciones. 3.1.2 La artritis reumatoide fuera de las articulaciones. 3.1.3 Tratamiento con medicamentos. 3.1. 4 Comportamiento Ácido Base de los Oxicams. 3.1.5 Metabolismo del Hierro. 3.1 .6 Equilibrio QlÚmico y Especiación Qtúmica 3.1 .7 Espectrofotometria. 3.1.8 Métodos Computacionales. 3.1 .9SQUAD 3.2.0 TRlANG 3.2.1 MEDUSA 4.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 4.0.lEquipo y Reactivos 4.1 .1 Comportamiento ácido - basé del piroxicam y tenoxicam. 4 .1.2 Procedimiento experimental para agua. 4.1.3 Procedimiento experimental para acetona. 4 5 6 7 8 14 14 16 17 20 23 26 28 30 31 33 35 38 39 40 41 42 5.- RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS 5.1.0 Detenninación de las constantes de equilibrio Para tenoxicam y piroxicam en medio acuoso 5.1.1 Especiación quimica del tenoxicam con Fe (Il) en agua. 5.1.2 Especiación química del piroxicam con Fe (II) en agua. 5.1.3 Especiación quimica de los fánnacos Piroxicam y tenoxicam con Fe (11) en acetona. -Diagramas de distribución de especies para las especies encontradas 6.- CONCLUSIONES 8.-REFERENCIAS 44 47 49 56 62 74 81 86 11 INTRODUCCIÓN - 1 - El equilibrio químico es algo que ha interesado mucho a los científicos desde tiempos remotos ya que prácticamente todo tiende a un estado estable. Este interés ha desencadenado numerosos estudios para poder determinarlo. A través del tiempo y con los avances de la tecnología, el estudio del equilibrio químico ha evolucionado de tal manera que ahora no sólo la química esta involucmda con éste, sino también las matemáticas y la computación. Esto s~ lo debemos a tres científicos interesados en las constantes de estabilidad, el primero de ellos químico inorgánico F. R. Hartley dedicado a investigar la relaciones cuantitativas entre metales y ligantes, el segundo de ellos C. Borgess quimico analítico interesado en el equilibrio de soluciones y la espectrofotometria y el tercero R. M. Alcock matemáticamente inclinado al desarrollo de modelos computacionales. Esto ha permitido el tratamiento de una gran cantidad de datos en tiempos muy cortos con resultados más precisos, así como eliminar el factor un tanto "empírico o amateur" para determinar las constantes de estabilidad ya que se ha desarrollado un área de estudio específica para este fin (especiación química). Al utilizar este tipo de herramientas podemos aumentar la cantidad de formas con las cuales puede ser estudiado un sistema en equilibrio además de que podemos utilizar una mayor cantidad de información experimental y evitar resultados erróneos. Estudiar sistemas en equilibrio es muy importante ya que no sólo la química analítica se beneficia de ello, otros campos como la medicina o la farmacología han basado su desarrollo en este tipo de estudios. En particular en este trabajo se emplean las técnicas espectrofotométricas y los métodos computacionales para la determinación de las constantes de estabilidad de los complejos formados entre el Hierro en estado de oxidación dos (Fe (U» y los fármacos antiinflamatorios piroxicam y tenoxicam. -2- Este tipo de fánnacos son suministrados a personas que padecen artritis rewnatoide, enfermedad en la que se inflaman las articulaciones produciéndose dolor y dificultad para el movimiento, la inflamación se produce cuando la membrana sinovial es atacada por células que dañan ]a articulación. Los antiinflamatorios no esteroidales denominados oxicams mas específicamente piroxicam y tenoxicam han demostrado tener mayor eficacia y por ello son de los mas recomendados actualmente, por esta razón es importante el estudio de la interacción de estos fármacos con iones metálicos contenidos en el cuerpo humano por ejemplo: el Fe (Il) que como el Cu (JI) o el Zn son de gran importancia para el organismo y han demostrado tener un beneficio adicional cuando se complejan con este medicamento. En este trabajo se determinaron las especies formadas entre estos fánnacos y el ion metálico Fe (JI) así como las constantes de estabilidad para estos complejos para dos diferentes solventes: acetona yagua El método que se utilizó para lograr este objetivo fue el espectrofotométrico, pues es uno de los mas confiables, la forma en que se estudiaron los sistemas en cada solvente tuvo que ver con las propiedades de solubilidad del compuesto, pues debido a que en agua la solubilidad es muy baja se trabajaron concentraciones muy pequeñas, en acetona fue posible utilizar concentraciones mas altas tanto de ligante como de metal debido a su mayor solubilidad. En agua se estudiaron las especies formadas en función del pH, en acetona los métodos usados fueron relaciones molares y variaciones continuas; los datos de estos experimentos se usaron para obtener las especies formadasen ambos solventes así como sus constantes de estabilidad usando los programas computacionales TRIANG y SQUAD. - 3 - 2 OBJETIVOS -4- HIPOTESIS SI LOS FARMACOS ANTIINFLAMATORIOS TENOXICAM y PIROXICAM TIENEN UNA ESTRUCTURA QUE PERMITE PREDECIR V ARIOS CENTROS DE COORDINACIÓN, ENTONCES SE COORDINARÁ CON UN CATIÓN METÁLICO " COMO EL Fe (H), CUYO ESTUDIO DE ESPECIACIÓN QUÍMICA SERA POSIBLE UTILIZANDO LAS TÉCNICAS ESPECIROFOTOMÉTRICAS. - 5 - OBJETIVO GENERAL ESTUDIAR LA ESPECIACIÓN QUIMICA DE LOS FÁRMACOS ANTIINFLAMA TORIOS PIROXICAM y TENOXICAM CON UN CATIÓN METÁLICO DE INTERÉS BIOLÓGICO COMO EL Fe (m. -6- OBJETIVOS ESPECIFICOS 1.- Detenninar el comportamiento espectrofotométrico de los fármacos antiinflamatorios piroxicam y tenoxicam en función del pH a condiciones pseudo-fisiológicas Temperatura (T)= 37±0.5°C y Fuerza iónica (1) =0.15 M. Impuesta con NaC!. 2.- Estudio de especiación de los fármacos antiinflamatorios piroxicam y tenoxicam con el Fe (II), a T = 37 ± O.5°C y 1 = 0.15 M con NaCl, en medio acuoso determinando las especies complejas formadas y sus correspondientes constantes de estabilidad. 3.- Estudio de especiación de los fármacos antiinflamatorios piroxicam y tenoxicam con el Fe (II), en acetona pues este medio permite manejar concentraciones mas altas detenninando las especies complejas formadas y sus correspondientes constantes de estabilidad. -7- 3 ANTECEDENTES - 8- Mantener la salud humana ha sido factor de preocupación desde tiempos inmemorables, nuestros antepasados ya pretendían curar las dolencias de las personas con diferentes tipos de estrategias que en la mayoría de los casos solo estaban influenciadas por la magia y la religión. (1) Con el paso del tiempo el ser humano ha comprendido que si quiere curar una enfermedad debe entender en su totalidad los procesos que se llevan a cabo en el cuerpo humano ya que a éste es al que ataca la enfermedad. Así pues cada enfermedad se genera por la falta o exceso de algún componente en nuestro cuerpo, esto es que el papel que juegan sustancias como proteínas, grasas, vitaminas y minerales es muy importante. Es bien conocido, desde hace muchos años que la salud humana y la vida animal, requieren de la provisión de cantidades de numerosas sustancias orgánicas y de compuestos inorgánicos. Los requerimientos de muchos elementos inorgánicos no fueron conocidos en mucho tiempo, ya que ellos están presentes en los tejidos del cuerpo en concentraciones muy pequeñas. (2) Al hablar de los minerales normalmente imaginamos que son algún tipo de vitaminas complementarias o algo así; pues en realidad a la gente le es dificil imaginar la presencia de metales como el hierro o el cobre en nuestro organismo y es aún mas dificil imaginar que estos metales son de crucial importancia para nuestro cuerpo. -9- La importancia de los metales como el Fe (II) es tal que el aumento o descenso de un miligramo puede causar severas consecuencias para el organismo. (3) Es un hecho que los iones metálicos se complejan con los diferentes fármacos, de ahí la importancia de estudiar la especiación química de éstos, para poder dilucidar el efecto que causan estos complejos en los seres vivos y de esta forma transportar el uso de estos compuestos metálicos como agentes de diagnóstico o terapéuticos en medicina. (4) En la actualidad se ha logrado sintetizar una gran cantidad de complejos metálicos con diferentes fármacos, los cuales mejoran la calidad del medicamento, disminuyendo sus efectos secundarios e incrementando su acción farmacológica. (5, 6,7) Últimamente la artritis reumatoide se ha extendido de manera muy importante entre la población. Por eso ha surgido la necesidad de estudiar los efectos de los medicamentos para contrarrestarla. La Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad crónica que origina dolor, rigidez, hinchazón y pérdida de función en las articulaciones y puede también acompañarse de inflamación en otros órganos. (8) Se han desarrollado un sinnúmero de fármacos que pretenden curar la artritis aunque en este trabajo nos avocamos a estudiar sólo dos de los fármacos clasificados como Antiinflamatorios no esteroidales que son los más empleados en el tratamiento inicial de la artritis reumatoide. Reducen sus síntomas, mejorando el dolor y la función articular, pero no modifican la evolución de la enfermedad. (9) - 10 - Dentro de esta clasificación de los no esteroidales se encuentran los oxicams (piroxicam, tenoxicam, meloxicam, isoxicam y lomoxicam). De los cuales el piroxicam y el tenoxicam son de los más utilizados en el tratamiento de enfennedades reumáticas crónicas, debido a sus propiedades analgésicas y antipiréticas. (\O) Se ha encontrado últimamente que la acción de estos fánnacos complejados con los metales Cu (H), Mg (H) Y Fe (III) es positiva para el tmtamiento de esta enfennedad y es por eso que la importancia de estudiar nuevos sistemas es crucial. (36) En este trabajo se estudia la interacción entre el Fe (H) otro metal de importancia ya mencionada con los fármacos antiinflamatorios no esteroidales (AINE) piroxicam y tenoxicam estableciendo la especiación química entre el ión Fe (H) y el fármaco. Ya que el Fe en el estado de oxidación (H), es la única forma posible de que sea absorbido por el cuerpo humano. El cuerpo humano requiere de la presencia de ciertos metales para funcionar de manera adecuada La anhidraza carbónica es una enzima que requiere de la presencia de un ión Zn2+ para realizar su función. Los sistemas muscular y nervioso no funcionarían sin la óptima cantidad de sodio, potasio y otros metales. Los metales están presentes en nuestro cuerpo como iones positivos y no como átomos neutros, cuando alguien habla de calcio en el cuerpo no está hablando de calcio metálico sino de calcio en la fonna de iones Ca2+. Hay tres formas principales en las cuales un ión metálico esta incorporado en la química de nuestro cuerpo. - 11 - l.-Iones metálicos existiendo como iones en solución: el suero sanguíneo, los fluidos en y alrededor de las células, son soluciones acuosas que contienen muchas sustancias diferentes disueltas en ellas. Algunos metales como el sodio y el potasio están presentes en estos fluidos como iones libres, Na + y K+ los cuales deben estar neutralizados por su contra ión (er y HeOj. Entonces, en solución cada carga positiva debe ser balanceada por una negativa. 2.-lones metálicos en estructuras compuestas de conjuntos de iones positivos y negativos. (Usualmente asociados con las proteínas). Las partes principales de huesos y dientes están compuestas de iones Ca2+, pol+ y OH" en una estructura sólida cristalina de fórmula: ea5(P04)30H. 3.-lones metálicos en estructuras que se enlazan para formar o deshacer un enlace cava/ente. Las especies bioquímicas más estudiadas son aquellas que contienen iones metálicos enlazados a moléculas covalentes relativamente grandes. Sin embargo el ejemplo más conocido de esta clase de iones metálicos envueltos es el Fe3+ (3). A continuación se presenta una tabla del contenido de los metales presentes en el cuerpo humano. - 12- Tabla 3.1.0. Metales que contiene nuestro organismo Metal % en el cuerpo en Cantidad en plasma. Función principal. un adulto normal. Mg/lOOrnL 310 - 334 El sodio es el ión positivo Sodio 0.10 principal en la sangre y fluido extracelular. Es el ión positivo más abundante Potasio 0.22 13.7 -19.6 en las células, participan en la síntesis de las proteínas y el metabolismo de la glucosa que da energía a las células. 8.5 - 10.5 El calcio es necesario para la Calcio 2.0 formación de huesos y dientes. El magnesio se requiere durante toda la sintesis de las proteinas Magnesio 0.04 1.8 - 3.0 también en la estabilización de las estructuras DNA a RNA y en la transferencia de energía a los nervios cerebrales. 0.05-0.15 El hierro se utilizapan el Hierro 0.005 transporte y almaceaamiento deoÚ2eno. 8xlO-s - 2.6x104 Es vital para la operación de Manganeso 0.0001 varias enzimas y estructura de huesos. para la 1.5xlO-2 -7.5xl0-z El cobalto se encuentra en la Cobalto 0.000004 vitamina B I2 ésta se utiliza en la formación de hemoglobina. 8.5xlO-' - l.lx10- El cobre se encuentra unido a Cobre 0.0004 grandes moléculas en el hígado, cerebro corazón V riñones. El zinc es util izado en todos los Zinc 0.0025 0.050 - 0.15 procesos para que el CÜJ sea absorbido en la sangre y eliminado en los pulmones, estabiliza la insulina. Es identificado como un Molibdeno 0.00002 No conocido componente de varias enzimas y se cree que tiene que ver con la transformación de hierro a I ferritita. Como se observa, cada metal cumple una función muy importante en nuestro cuerpo y la falta o exceso de alguno de ellos provoca daños muy graves para el organismo. Por otro lado, algunas enfermedades que se producen en los seres humanos tienden a afectar el equilibrio entre estas sustancias. - 13- 3.1.0 LA ARTRITIS REUMA TOlDE Es una enfennedad en la que se inflaman las articulaciones produciéndose dolor y dificultad para el movimiento. Además se pueden lesionar otras partes del organismo. Tiene una duración variable, irregular y en general larga, por lo que se dice que es una enfennedad crónica. Las molestias y limitaciones que la artritis reumatoide ocasiona varían mucho de un enfermo a otro, de manera que no hay dos enfermos iguales. La artritis reumatoide es una enfermedad frecuente ya que una de cada 100 personas la padece. Sin embargo no hay que confundir la artritis reumatoide con el "reuma". La artritis reumatoide es una de las más de 200 enfermedades reumáticas diferentes. Por este motivo los consejos de amigos o vecinos que tienen "reuma" pueden no estar indicados o incluso ser contraproducentes. Es una enfermedad que se da con más frecuencia en mujeres, pero que afecta también a varones. No es una enfermedad propia de la edad avanzada. y aunque puede aparecer en ancianos, se presenta con mayor frecuencia de los 45 a los 55 años. También puede afectar a los niños (8) 3.1.1 LA ARTRITIS REUMA TOlDE EN LAS ARTICULACIONES Las articulaciones son las estructuras que unen los huesos entre sí y permiten la movilidad del cuerpo humano. Las porciones finales de los huesos están recubiertas por unas superficies lisas que son los cartílagos, lo cual permite un rozamiento suave entre dichos huesos (Figura 3.1.0). - 14 - M~MBR SINOVIAl Fig. 3.1.0 Esquema de una articulación Con el fin de alimentar, proteger y cubrir estos cartílagos, las articulaciones rusponen de una membrana que las recubre saltando de un hueso a otro y que se llama membrana sinovial. La artritis reumatoide es una enfermedad en la que se produce la inflamación de la membrana sinovial de múltiples articulaciones. La inflamación de la membrana sinovial va a ser la responsable del dolor, de la hinchazón que con frecuencia se observa y de la sensación de rigidez que se puede notar por las mafianas. Unas articulaciones se afectan más que otras y hay algunas que casi nunca se alteran. La persistencia de la inflamación de la membrana sinovial lleva consigo que ésta dañe al hueso en el lugar en que se fija al mismo, dando lugar a pequeñas muescas (erosiones). Además, la inflamación mantenida o frecuente de una articulación puede hacer que el cartílago que permite el rozamiento suave entre los huesos adelgace y desaparezca. Con el tratamiento se puede conseguir que la inflamación de la membrana sinovial se controle, pero el daño ya producido en el hueso y en los cartílagos es irreparable. La sobrecarga de las articu1aciones inflama~ contnbuye a acelerar su destrucción. Para que el daño irreparable sea el menor posible, es imprescindible que el médico - 15 - conozca la realidad diaria del enfermo y que el paciente colabore en el tratamiento siguiendo las medidas que se especificarán más adelante. Fig. 3.1.1. Articulaciones afectadas con más frecuencia en la ArtriJis Reumatoide 3.1.2 LA ARTRITIS REUMA TOlDE FUERA DE LAS ARTICULACIONES Aunque la localización fundamental de las lesiones producidas por la artritis reumatoide está en la membrana sinovial de las articulaciones, a veces se pueden alterar otras estructuras. En la piel pueden encontrarse los llamados nódulos reumatoides que son abultamientos duros (nódulos) que aparecen en zonas de roce, como son los codos, el dorso de los dedos de las manos y los pies, la parte posterior de la cabeza, la zona del talón, etc. También se pueden localizar en el interior del organismo, aunque raramente producen lesiones de relevancia para la sa1ud. Estos nódulos son la consecuencia de la actividad de la enfermedad. No tienen nada que ver con el cáncer y no producen un daño irreversible. Muchas veces se quitan solos con el tratamiento y a veces hay que operar para eliminarlos. La artritis reumatoide puede originar inflamación y atrofia de las glándulas que fabrican las lágrimas, la saliva, los jugos digestivos o el flujo vaginaL Cuando esto .ocurre se habla del denominado Síndrome de Sjogren asociado a artritis reumatoide. La artritis reurnatoide puede producir inflamación u otro tipo de - 16- lesión en diversas estructuras del organismo, asi como alteraciones en los análisis de sangre y orina, que el reumatólogo vigilará y controlará de forma rutinaria. 3.1.3 TRATAMIENTO CON MEDICAMENTOS Todos los medicamentos que se emplean para aliviar un malestar tienen efectos secundarios. Los que se usan para tratar la artritis reumatoide también. Cualquier tratamiento a aplicar se realiza en función de considerar que es mayor el beneficio que el riesgo. La opción de un tratamiento en particular por parte del reurnatólogo es fruto de una amplia experiencia a nivel mundial. Al final será el enfermo quien decidirá si asume el tratamiento después de disponer de la mayor información posible. El tratamiento de la artritis reumatoide con medicamentos incluye dos grandes grupos de fármacos: Uno de ellos engloba a los que sirven para aliviar el dolor y la inflamación a corto plazo. Son útiles para bajar la inflamación y sobrellevar el dolor del "día a día", pero no sirven para modificar la evolución de la enfermedad a largo plazo. En este grupo entran los llamados antiinflamatorios y los corticoides. Los antiinflamatorios son medicamentos eficaces. No hay uno mejor que otros para esta enfermedad Cada persona puede encontrar uno que le va mejor a ella en particular. Si no mejora de sus síntomas (después de un plazo de un par de semanas) o no tolera el antiinflamatorio prescrito, hay que consultar al reumatólogo para probar otro. Los corticoides (derivados de la "cortisona") utilizados de forma juiciosa, a dosis moderadas y con unas indicaciones particulares que el reumatólogo conoce, permiten en muchos casos mejorar la calidad de vida a largo plazo, superando a los efectos secundarios que se producen a estas dosis. El otro gran grupo lo integran medicamentos que no sirven para tratar el dolor en un momento determinado, sino que actúan haciendo que la actividad de la enfermedad a largo plazo sea menor. Tardan en hacer efecto semanas e incluso meses. No son eficaces en el 100% de los enfermos, por lo que es habitual que el médico tenga que prescribir varios de forma secuencial hasta - 17 - encontrar aquel que sea más eficaz y mejor tolerado. En este grupo entran el metotrexato, las sales de oro, la cloroquina, la sulfasalacina, la D-penicilamina, la azatioprina, la ciclosporina, etc. En general requieren control por parte del reumatólogo y una estrecha colaboración del paciente. (lO) Por otra parte se encuentran entre los antiinflamatorios no esteriodales los oxicarns que se ha utilizado ampliamente para minimizar los efectos de la artritis reumatoide aunque no detiene el avance de la enfermedad. (T)El piroxocaml y tenoxicam2 son de los fármacos mas comunes, debido a que emergieron como antiinflamatorios de acción prolongada, además el interés acerca de ellos no sólo es farmacológico sino que también proveen un importante punto de vista en términos de su dinámica estructural. Se mostró que el piroxicam tiene 12 posibles tautómeros. El movimiento tautomérico resulta de una transferencia interna muy rápida de protón. Muchos oxicams son componentes congenéricos generados por el concepto de reemplazamiento isostérico en el disefio de fármacos . Esto significa que solo es remplazado un grupo funcional de la molécula base. 1 4-hidroxi-2-metil-3[piridin-2-il-carbonil]2,4-1 ,2-benzotiazina-l, l-dioxido. 2 4-hidroxi-2-metil-N,2-piridinil-2H-tieno [2,3-e] 1,2-tiazina-3-carboxamida-l,1-dioxido. - 18- cC{ J' o J::] -:?' ~ N N ~ I N ~ S"'" 'eH /-- ~ 3 o:r o piroxicam /H o o D CI~~ N~ I I N ~ s"'" 'CH ~ ~ 3 o o meloxicam lomoxicam /H o o OCL~ NfIl I N,_A ~ I N H o C~ s"'" 'CH ~ ~ 3 o o isoxicam Fig. 3.1.2 Estructura química de los fármacos antiinjlamatorios no esteroidales denominados oxicam. En este acercamiento los grupos o fragmentos del componente principal son sustituidos con unidades estéreoelectrónicas similares para mejorar las propiedades fannacocinéticas así como Ia-resistencia a la degradación química o enzimática. - 19 - Un prerrequisito de la sustitución de este grupo es que el fánnaco congénero debe tener similares o aún mejores propiedades fannacodinámicas. Del reemplazamiento del benceno de piroxicam por un tieno resulta tenoxicam. Se debe notar que anteriormente las descripciones cualitativas y predicciones de propiedades fisicoquímicas basadas en las contribuciones de un grupo aditivo no deben de ser válidas si existen interacciones moleculares. En este caso las mediciones fisicoquimicas son necesarias para comprender mejor las propiedades estructurales de los oxicams en solución. (11) 3.1.4 COMPORTAMIENTO ÁCIDO-BASE DE LOS OXlCAMS. Conocer las propiedades ácido base de estos fármacos es de vital importancia para el estudio y caracterización de los mismos. En este sentido podemos observar que los oxicams poseen sitios con estas características ácido-base y dicho equilibrio esta representado de la siguiente forma:(7) HnL (n-k) <==* L-k + nH Ka = [L -1<][ H+t [ HnL(n-l<)] Existen algunos reportes contradictorios en la literatura acerca de las constantes de ionización de los oxicams. Mientras Wiseman asignaba un pKa igual a 6.3 en 1973 medido en dioxano/H20 para el grupo enólico. Bernhard y Zimmermann por su parte en 1984 le atribuían una diferencia considerable al valor de 1.86 para el grupo enólico y 5.46 para el grupo básico piridin-2-yl basado en titulaciones de espectroscopia VV, su último valor implica la naturaleza zwiteriónica del piridin en el oxicam. El hecho de que se hayan encontrado cantidades grandes (25%) de zwiteriones de piroxicam a una temperatura dada usando espectroscopía de 13C_NMR es también una prueba de los bajos valores de pKa en el grupo ácido comparado con el básico - 20- A continuación se muestran tablas de los valores obtenidos por Bernhard y Zirnrnermann para el piroxicam y tenoxicam. Tabla 3.1.1. pKa's para el piroxicamy tenoxicam según Bemhardy Zimmermann. SUSTANCIA pKa pKI = 1.86 ± 0.06 Piroxicam pK2 = 5.46 ± 0.04 Tenoxicam pKI = 1.07 ± 0.l1 pK2 = 5.34 ± 0.06 En el año de 1993, Ruey-Shivan Tsai realizó un estudio del comportamiento ácido base de los oxicams vía potenciometría en agua/etanol y coincide con los mismos valores de pKa reportados por Bernhard y Zimmermann. (11) Los últimos estudios realizados fueron por Krisztina Takács-Novák en el 2000 para fármacos polipróticos entre ellos piroxicam, siguiendo valoraciones pHmétricas por espectrofotometría con una I = 0.15 M Y T= 25 ± 0.5 oc. Los resultados se muestran en la siguiente tabla: (7) SUSTANCIA pKa pK1 = 1.07 ± 0.11 Piroxicam pK2 = 5.34 ± 0.06 - 21 - Otro estudio acerca del comportamiento ácido base de los fármacos antiartríticos fue realizado por Moya-Hernández quien reportó los siguientes datos. FARMACO CONSTANTES REPORTADAS 1=O.15M oonNaCI 37~.5"C pKal = 1.892 ± 0.010 PIROXICAM pKa2 = 5.139 ± 0.007 pKa¡ = 1.143 ± 0.004 TENOXICAM pKa2 = 4.970 ± 0.004 Como se puede observar los datos reportados anteriormente concuerdan con los de Krisztina Takács- Novák esto confirma el comportamiento ácido-base de estos fármacos. En la figura 3.1.2 podemos muestra la estructura química de los fármacos tenoxicam y piroxicam y se observa que existen dos centros de carácter acido base; el grupo enol y el nitrógeno piridínico. Con estos estudios se define un comportamiento que conlleva cuatro procesos de protonaciónldesprotonación como se muestra en la siguiente tigura - 22- Fig. 3.1.3. Comportamiento de ionización microscópica de piro.xicam. 3.1.5 METABOLISMO DEL HIERRO Al inicio se habló de los metales y su importancia en general, pero para efectos de este estudio nos enfocaremos en especial a uno: el hierro, que como metal en nuestro cuerpo no es menos importante que el cobre o el zinc, ya se han mencionado algunas de las funciones más importantes en el organismo ahora se analizará con detalle el metabolismo de este metal en el cuerpo humano pues habremos de notar qué importancia tiene si se compleja con los fármacos ya mencionados también. - 23- El hierro es un elemento esencial para la vida, puesto que participa prácticamente en todos los procesos de oxidación-reducción. Lo podemos hallar formando parte esencial de las enzimas del ciclo de Krebs, en la respiración celular y como transportador de electrones en los citocromos. Está presente en numerosas enzimas involucradas en el mantenimiento de la integridad celular, tales como las catalasas, peroxidasas y oxigenasas (12). Su elevado potencial redox, junto a su facilidad para promover la formación de compuestos tóxicos altamente reactivos, determina que el metabolismo de hierro sea controlado por un potente sistema regulador (13). Puede considerarse que el hierro en el organismo se encuentra formando parte de 2 compartimientos: uno funcional, formado por los numerosos compuestos, entre los que se incluyen la hemoglobina, la mioglobina, la transferrina y las enzimas que requieren hierro como cofactor o como grupo prostético, ya sea en forma iónica o como grupo hemo, y el compartimiento de depósito, constituido por la ferritina y la hemosiderina, que constituyen las reservas corporales de este metal. (14) El contenido total de hierro de un individuo normal es aproximadamente de 3,5 a 4 g en la mujer y de 4 a 5 g en el hombre. (15) En individuos con un estado nutricional óptimo alrededor del 65 % se encuentra formando parte de la hemoglobina, el 15 % está contenido en las enzimas y la mioglobina, el 20 % como hierro de depósito y sólo entre el 0,1 y 0,2 % se encuentra unido con la transferrina como hierro circulante. - 24- Hemoglobina l-l i",(O acHJIJ 80 % J ,emoglobfoa 65 % Miog;obiIH. O ':{, de depósito (ZO ""'> Fsnítina He;l1osiderina Hierro de transpo~te (0 .1-0.2 %} Transferina Enzimas 5 % Catalasas P~f0:ir.!as"s Ci~(iCfú l'1(1S Fig.3I.4 Distribución del hierro en el organismo. Así pues la falta o exceso de este metal trae consigo efectos secundarios para el organismo pero el estudio no queda ahí ya que este metal ha demostrado interactuar con las sustancias que se introducen al cuerpo. Estudiar estas interacciones principalmente con los fármacos antiinflamatorios piroxicam y tenoxicam es el objeto de este trabajo y aunque se tiene reportado algunos complejos de este ión con estos fármacos no se establecen parámetros de estabilidad como las constantes de equilibrio. El piroxicam ha sido usado como un fármaco antiinflamatorio, recientemente ha sido reportado que el producto metabólico del piroxicam en sistemasbiológicos muestra altas propiedades fotosensibles, para investigar el posible papel que juegan los iones metálicos en los efectos fotosensibles del piroxicam en sistemas biológicos, la interacción del eu (ll) y otros iones de metales de transición, han sido estudiados usando diferentes métodos espectroscópicos (32). Una variedad de observaciones recientes indican que cuando se administran complejos de cobre en conjunción con fánnacos antiinflamatorios presentan actividad sinérgica. También se ha observado que Jos complejos de cobre con algunos antiartriticos son por sí mismos mas efectivos que los agentes - 25- antiinflamatorios o compuestos parecidos. En particular el Cu y el Zn son efectivos para provocar un rearreglo de la molécula de piroxicam. Por lo tanto uno de los logros de este tipo de investigaciones es calcular los valores de las constantes de estabilidad de piroxicam con los iones Fe (H), Fe (III), Cu (II), Ni (II) Y Zn (II). La respuesta espectral de diferentes formas prototrópicas de estos fármacos variando los parámetros de solventes ha sido estudiada con la caracterización de su interacción en ambientes biomiméticos no invasivos. La naturaleza de la transición mas baja ha sido identificada El grupo de los oxicams ha emergido como una clase de fármacos de alta eficiencia en contra de varias condiciones artríticas e inflamaciones postoperatorias. Últimamente otras funciones de este tipo de fármacos han sido identificadas las cuales incluyen quemoprevención, quemosupresión, UV-sesitización y UV- protección. Se ha encontrado que estos fármacos son también buenos anti-oxidantes. Sin embargo la razón detrás de su multifuncional aspecto no es bien entendida. No sólo estos fármacos tienen gran potencial terapéutico y farmacéutico sino también proveen interesantes propiedades espectroquímicas en virtud de sus características dinámicas estructurales. En nuestro estudio presentamos una caracterización foto-fisica del comportamiento de diferentes formas prototrópicas del piroxicam y tenoxicam en agua y además se realiza el estudio de especiación de estos dos fármacos con Fe (II) en agua y en acetona. 3.1.6 EQUILffiRIO QUIMICO y ESPECIACIÓN QUIMICA Existen dos grandes áreas de la química de soluciones: la primera tiene que ver con la naturaleza y concentración de cada especie presente en el equilibrio, la segunda concierne a la velocidad y mecanismo por el cual las especies se forman en solución al llegar al equilibrio. - 26- Estos dos aspectos de la química de soluciones se pueden ver de la siguiente forma: kr A+B ----- C+D kr Donde kr Y le son las constantes de formación y descomposición respectivamente, la velocidad con la cual la reacción avanza en el sentido de formación es igual a la velocidad con la que se consume A (-dAldt) y se ve de la siguiente forma: -dAldt=kr[A] [8] Ahora la velocidad de la reacción inversa es igual a la velocidad de formación de A (dAldt) dAldt = kr [C] [O] En el equilibrio las velocidades de formación y descomposición se escriben de la siguiente forma: kr[C] [D] = kr [A] [8] y puede ser arreglada de la siguiente manera: krlkr = KO = [C][D] I [A ][8] Donde ktlkr es una constante denominada KO conocida como constante de equilibrio. Una gran cantidad de constantes de estabilidad han sido determinadas pero aún no se tiene una proporción equivalente entre éstas y las que aún se desconocen. - 27- Existen varios métodos para determinar las constantes de estabilidad para un complejo; por ejemplo espectroscopía, distribución, electroquimicos, calorimétricos y una combinación de métodos que miden propiedades fisicas comunes por ejemplo viscosimétricos y coagulación etc. La potenciometría y la espectrofotometria son de los métodos mas importantes para la determinación de las constantes de estabilidad siendo la espectroscopia uno de los mas versátiles para la especiación química. La propiedad que mide es la absorbancia que cumple con los requisitos mínimos para poder realizar el estudio, pues varia al mismo grado que la formación de un complejo, su variación es cuantitativa a la naturaleza de las especies presentes. A este tipo de comportamiento se le conoce como factor intensivo. Todos los métodos espectroscópicos caen en dos grandes grupos: a) Métodos en los cuales lo que se observa es proporcional al tipo y numero de moléculas, presentes. Todos los métodos espectroscópicos caen en este grupo. b) Métodos en los cuales lo que se observa es proporcional al tipo Y actividad de las moléculas Los métodos electroquímicos y de distribución corresponden a este grupo. 3.1.7 ESPECTROFOTOMETRIA La espectrofotometria se refiere a la medida de cantidades relativas de luz absorbida por una muestra, en función de la longitud de onda. Cada componente de la solución tiene su patrón de absorción de luz característico. Comparando la longitud de onda y la intensidad del máximo de absorción de luz de una muestra versus soluciones std, es posible determinar la identidad y la concentración de componentes disueltos en la muestra (solución incógnita o muestra analítica). -28 - Las ventajas de la espectrofotometría sobre otros métodos analíticos de laboratorio son varias: es rápida, precisa, versátil, fácil de usar y eficiente en costo. Los espectrofotómetros se han mejorado en precisión y versatilidad en los últimos afios con los avances de la tecnología y hoy se consideran indispensables en un laboratorio de química analítica. La espectrofotometría se usa para diversas aplicaciones, como: Análisis cuantitativo y cualitativo de soluciones desconocidas en un laboratorio de investigación, estandarización de colores de diversos materiales, como plásticos y pinturas, detección de niveles de contaminación en aire yagua y determinación de trazas de impurezas en alimentos y en reactivos. Como todos los métodos tiene limitantes, pues al leer escalas de absorbancia o transmitancia se puede caer en cierto tipo de errores, los cuales dependen de factores instrumentales, la región de la escala donde sea leído y la concentración. La determinación experimental de constantes de equilibrio se realiza por diferentes métodos analíticos: espectrofotométricos, potenciométricos, radioquímicos, etc. La espectrofotometría UV NIS es de los métodos más empleados debido a que es relativamente sencillo, económico y de uso general. La determinación de las constantes de equilibrio requiere que el sistema se encuentre en equilibrio o en estado estacionario. La forma de procesar los datos espectrofotométricos va a depender de la complejidad química que presenta el sistema. En el caso de sistemas sencillos el procesamiento de los datos puede simplificarse aplicando los métodos tradicionales, pero en el caso de sistemas mas complicados el tratamiento de los datos requiere la aplicación de métodos gráficos más desarrollados o bien métodos computacionales. (34) - 29- 3.1.8 METODOS COMPUTACIONALES Los métodos computacionales han sido creados para facilitar el manejo de grandes cantidades de datos y eficientar los procesos de los solucionadores numéricos, para el caso de la química analítica se han creado programas para el refinamiento de las constantes de equilibrio para sistemas multireaccionantes y multicomponentes, estos programas varian de acuerdo al algoritmo matemático y a la información experimental que requieren. Los programas computacionales tienen la ventaja de realizar un estudio estadístico de la información que resulta determinando así la calidad de la información obtenida A continuación se muestra una lista de los programas computacionales existentes para el refinamiento de constantes de equilibrio. (35) -SQUAD -LETAGROP -DALSFEX -GAUSS -SCOGS -SUPERQUAD -LEAST -MIQUIV -LEASK -SPECFIT -STEW -PKPOT. (35) -MINIQUAD -TRIANG En el presente· trabajo se utilizaron los programas SQUAD, TRlANG y MEDUSA loscuales se describen a continuación: - 30- 3.1.9 DESCRIPCIÓN DEL PROGRAMA SQUAD SQUAD es un programa creado por Legget escrito en lenguaje FORTRAN. Esta diseñado para refinar el equilibrio a partir de un modelo químico propuesto, a partir de datos de absorbancia obtenidos a diferentes longitudes de onda y a diferentes composiciones químicas del sisterna(28) Este programa es una versión modificada de SCOGS aplicado al analisis de datos de absorbancias. La suma del cuadrado de los errores esta definida en términos de las absorbancias calculadas y observadas y se aplica para sistemas relativamente simples. Este programa requiere una buena estimación de las constantes de estabilidad para asegurar la convergencia. El modelo químico propuesto puede ser dependiente o independiente del pH y puede tener especies del tipo: m, l,j , i, q >-O El refinamiento de las constantes se realiza por medio de una minimización de la suma de los residuos de absorbancia cuadráticos por mínimos cuadrados no lineales, empleando el algoritmo de Gauss- Newton. ~I ~NW (T E . \2 U = L. i=lL. k=l A i,k - A i,kJ 1 = todas las soluciones. NW = todas las longitudes de onda. A \ k = absorbancia calculada por SQUAD en la i-ésima solución a la k-ésima longitud de onda. - 31 - A \k = absorbancia experimental en la i-ésima solución a la k-ésima longitud de onda. La resolución de la minimización requiere el cálculo de las absorbancia a la k-ésima longitud de onda en la i-ésima solución. Para conocer los valores de absorbancia se necesita resolver la ecuación de Beer. SQUAD propone los coeficientes de absorvitidad molar por especie, y determina la concentración de cada una empleando el algoritmo de Newton - Raphson. La convergencia se da si la diferencia en la minimización de un ciclo iterativo a otro difiere como máximo 0.001. Qué el criterio anterior se cumpla no significa que se tiene el mejor refinamiento de constantes, debido a que se puede caer en el caso de una convergencia de un mínimo relativo. Los parámetros estadísticos que emplea SQUAD para determinar si el modelo químico propuesto explica la información experimental alimentada son los siguientes: Parámetro de correlación (matriz) La desviación estándar sobre los datos de absorbancia (Odatos), y de las constantes (Octes) La desviación estándar por espectro (oespectroJ La desviación estándar sobre los coeficientes de absortividad molar (OcoefJ - 32- El proceso de selección del mejor modelo químico no se basa solamente en la obtención de los mejores parámetros estadísticos, también se debe verificar la consistencia del mismo. Es decir, que los coeficientes de absortividad molar calculados para cada una de las especies sean congruentes con el comportamiento experimental y que las especies refinadas puedan predominar bajo las condiciones experimentales trabajadas. Aunque comúnmente se utiliza la palabra "refinar" para referirse a un modelo que converge bien en SQUAD, en realidad la cantidad de trabajo que existe detrás de esta palabra es mayor a la que aparenta, como se puede observar en el análisis de resultados de los capítulos 4 y 5. Esto se debe a que el experimentador debe cambiar el modelo químico propuesto para refinar cada uno de ellos y analizar la consistencia de los refinamientos obtenidos con los resultados experimentales. Así, un "refinamiento" de la especiación de un sistema implica cientos de corridas diferentes del programa 3.2.0 DESCRIPCIÓN DEL PROGRAMA TRIANG. TRIANG es un programa computacional escrito en lenguaje FORTRAN. El listado de este programa se reporta en el libro "Solution equilibria" (47) TRIANG estima el número de especies que absorben radiación electromagnética en el sistema, a partir de los valores de absorbancia a diferentes longitudes de onda para distintas soluciones, y considerando el error en las lecturas de transmitancia (LlT). La forma de establecer si una especie química absorbe radiación electromagnética involucra una comparación entre valores de absorbancia y los errores asociados a las mismas, suponiendo el ·33 - cumplimiento de la ley de Beer y la de aditividades, de acuerdo al algoritmo que se muestra en la figura 3.1.5 (37). PiYOTCO DCP H {EiIOO1l&J mogor 611 n ~i!áln 1.0 I COMP AiltiJN lJE LOS anmos DE LA /llAS0JW. Fig. 3.1.5 Algoritmo del programa TRlANG. 1RIANG calcula los elementos de una matriz de error, considerando el valor de l1T, la ecuación del error en absorbancia y la teoría de propagación del error. Al comparar diagonales, verifica si el elemento E'ji de la matriz del error multiplicado por tres es menor que el elemento P'ij de la matriz de absorbancias; entonces se concluye que este elemento diagonal de la matriz de absorbancias es diferente de cero. En caso contrario se concluye que ese elemento es igual a cero. - 34- El error en las lecturas de transmitancia (!J.T) es igual a: !J. T = (Error instrumental - Error volumetrioo) III El error experimental es igual al error que se comete en las lecturas de absorbancia y en función directa del espectrofotómetro usado. El error volumétrico está asociado fundamentalmente al material utilizado en el experimento para la manipulación y medición de líquidos. Para datos espectrofotométricos obtenidos experimentalmente el valor de !J. T debe encontrarse en el intervalo de 0.003 <!J.T < 0.010. 3.2.1 DESCRIPCIÓN DEL PROGRAMA MEDUSA. MEDUSA (Make Equilibrium Diagrams Using Sophisticated Algorithms), es una interfase de Windows para calcular Diagramas de Equilibrio de diferentes tipos, como Diagramas de Distribución de Especies, Diagramas logarítmicos, Diagramas de solubilidad, Diagrama de zonas de predominio, etc. con los programas SED o PREDOM. A continuación se muestra un archivo de entrada, el cual debe tener la terminación "DAT' y estar escrito de acuerdo al formato mostrado. - 35- 3,6,1, O Ir Cu Tx HTx , 4.970,1 O 1 H2Tx , 6.113, 2 O 1 Cu(Tx) , 7.000, O 1 Cu(HTx) , 10.520, 1 1 CU(TX)2 , 13 .600, O 1 2 Cu (HTX)2 , 20.050, 2 1 2 Cu (TX)2(s) , 18.700, O 1 2 Cu, H+ LA V, 0.0 -4.5 T,8.000E-05 T, 8.000&05 En la primera línea, se alimenta el número de componentes del sistema, el número de complejos formados, el número de sólidos y finalmente el número de componentes sólidos. Posteriormente, se etiqueta cada uno de los componentes, en este caso son H+, Cu y Tx. - 36- Luego se alimentan los diferentes complejos formados, uno en cada renglón. Primero se etiqueta, luego se escribe el valor dellog 13 (constante de equilibrio de formación global, balanceada con lt) y finalmente se le asigna un vector fórmula de acuerdo a la estequiometria de cada componente en el complejo. Después de alimentar todos los complejos, incluyendo los sólidos, se procede a decidir para qué componente se calculará el diagrama y en función de la variación de que componente, en este caso, se calcula el Diagrama para Cu en función del componente H+ Ahora se asigna el valor de la concentración de cada componente, o bien la variación de este. Estos archivos se alimentan al programa MEDUSA y éste proporcionará las diferentes opciones de Diagramas a construir y los parámetros pueden ser modificados. Se obtendrá como resultado una gráfica "PLT" y SED también puede generar tablas conteniendo los resultados en código ASCn cuyos archivos se nombran como SEDOOO.OUT, para graficar con el programa deseado. - 37 - 4 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL. - 38- 4.1.0 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL EQUIPO Y REACTIVOS EQUIPO. Espectrofotómetro Perkin-Elmer Lambda 18. pHmetro Metler Toledo MA235 pHJlon Analyzer. Electrodo combinado de vidrio y plata/cloruro de plata. Balanza Analítica Metler Toledo AB204. Baño Termostatado MGW Lauda e 12 TI. Bureta Digital Merck. REACTIVOS Piroxicam Sigma. IOmg Tenoxicam Sigma. lOmg NaOHBaker. HCl Baker FeCl2 anhidro Merck. Agua desionizada.Acetona Baker. Ftalato ácido de potasio como estándar primario. Merck - 39- El procedimiento experimental fue dividido en tres partes: la primera que comprende el comportamiento ácido-base de los fármacos piroxicam y tenoxicam, la segunda en donde se estudia la especiación química de los complejos formados entre el Fe (Il) y los fármacos y la tercera que estudia la especiación de estas mismas especies en acetona. 4.1.1 COMPORTAMIENTO ÁCIDO-BASE DE EL PlROXICAM YTENOXICAM. , '. El estudio consistió en determinar la especiación de los fármacos piroxicam y tenoxicam en medio acuoso, bajo condiciones pseudo fisiológicas (T = 37 ± 0.5 oC y 1 = 0.15 M con NaCl) manteniendo una atmósfera inerte de N2. Debido a su baja solubilidad en agua se ha determinado trabajar a concentraciones bajas de ligante donde se evita la precipitación. Las concentraciones elegidas de trabajo fueron IxIO-4 M. para medio acuoso en base a estudios realizados por Moya Hernández (36) Para iniciar la especiación se prepararon soluciones Ix IO-4 M. de piroxicam y tenoxicam habiéndose ya definido que las especies neutras no son del todo solubles en agua se adicionó una cantidad equivalente de NaOH a cada solución para desplazar los equilibrios de las especies a la forma aniónica pirox' y tenox '. La fuerza iónica se controla manteniendo una concentración de NaCI de 0.15 M como electrolito. Para mantener la temperatura lo más constante posible se usa un baño de temperatura ajustándola al valor de 37°C y esperando a su estabilización. - 40 - Por otra parte la atmósfera de N2 se obtuvo burbujeando este gas en todo el proceso. Las soluciones fueron valorados con HCI 0.001M, obteniendo los espectros de absorción cada 0.2 unidades de pH en un intervalo de longitud de onda entre 230 - 450 run. Los intervalos de pH de trabajo fueron: Para piroxicam se trabajo con un pH de 1.2 a]O y para tenoxicam de 0.5 a 8.0. Todos los espectros fueron corregidos por dilución para efectos de la especiación. 4.1.2 ESPECIACIÓN QUÍMICA DE LOS FÁRMACOS PIROXICAM y TENOXICAM CON Fe (ll) EN MEDIO ACUOSO. Ya conocido el comportamiento de los fármacos a condiciones pseudo fisiológicas yen base a las especies hidrolizadas del hierro a esas mismas condiciones (36) se prepararon los siguientes sistemas. Ya que se estudiaron los complejos metal-ligante a tres diferentes relaciones molares 1:1, 1:2, 1:3 en función del pH los intervalos de trabajo fueron de 0.8 a 8 para piroxicam y de 0.5 a 8 para tenoxicam debido a que a pH mayores a 8 se presentaba precipitado, la concentración delligante fue modificada en función de la relación metal-ligante manejada debido a que se trabajó por volúmenes para la relación 1: 1 se mezclaron 20 mL de la solución de Fe (JI) con 20 mL de solución conteniendo al fármaco, para la relación 1:2 20 mL de Fe (1I) con 40 mL de fármaco y por último para la relación 1:3 20 mL de Fe (II) con 60 mL de fármaco. Se obtuvieron los espectros de absorción cada 0.2 unidades de pH en un intervalo de longitud de onda de 230-450 nm. Para modificar el pH se hicieron adiciones de HCI O.OIM todos los espectros fueron corregidos por dilución para efectos de la especiación. Es importante destacar que se mantuvieron las condiciones pseudo fisiológicas en todo momento así como la atmósfera de N2• - 41 - 4.1.3 ESPECIACIÓN QUÍMICA DE LOS FÁRMACOS PIROXICAM y TENOXICAM CON Fe (ll) EN ACETONA. Para el caso de la acetona se prepararon soluciones de Fe (H), piroxicam y tenoxicam a una concentración de lxlO-3 M y se mezclaron en frascos viales siguiendo la metodología de variaciones continuas y relaciones molares. Que se describe a continuación. RELACIONES MOLARES Este método nos permite variar la relación metal-ligante en la solución y al obtener sus espectros de absorción, se denota una tendencia de los espectros a subir y mantenerse ya que la relación llega ser constante en un máximo de absorban cia. Las relaciones trabajadas fueron: Tabal 4.1.0 Relación de mililitros trabajados para el método relaciones molares. Mililitros de M Mililitros de L M=METAL L=LIGANTE La tabla 4.1.0 muestra las cantidades usadas. Se observa que cubre los complejos formados entre el metal y el ligante en las relaciones 1:1 , 1:2 y 1:3 y se puede dilucidar si existen complejos polinucleares. VARIACIONES CONTINUAS Para este método se realizo un juego de soluciones de la siguiente forma: - 42- Tabla 4.1.1 Relación de mililitros trabajados para el método variaciones continúas. M 10 9.5 9 8.5 8 7.5 7 6.5 6 5.5 5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 L O .5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8 1.5 .5 O 8.5 9 9.5 10 Este método varía ambas concentraciones a lo largo del estudio y permite observar el comportamiento de los complejos a diferentes relaciones metal-ligante. La característica de este método al graficarse es que presenta un máximo en la relación predominante. - 43- 5 RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS - 44 - 5.0 RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS Piroxicam En la imagen de la figura 5 podemos obselVar el comportamiento que presentó el fármaco en función del pH. Los espectros de absorción presentan una serie de caracteristicas en particular por ejemplo se obselVan que a valores altos de pH hay tres máximos, a 350, 285 Y 250 nm. Y al ir disminuyendo el pH se recorre el máximo de 350 y los otros desaparecen. Además la presencia de dos puntos isosbésticos en las longitudes de onda de 290 y 300 nm reafirma la idea de un equilibrio de intercambio de protón. 2.4 2.2 pH 2.0 __ 7.052 1.8 --5.841 1.6 .... .. 5.418 .. l 1.4 -6-5.178 f 1 1.2 4: 1.0 0.8 ___ 2 .016 0.6 _1.809 0.4 _1.456 0.2 0.0 230 250 270 290 310 330 350 370 390 410 430 4SO Longitud de onda Fig. 5.1.0. Espectros de absorción en función del pH para piroxicam a una concentración de Ixlrr M. - 45 - Para los valores más bajos de pH el principal máximo esta en 335nm., aunque se presenta uno más a 280nm. Tenoxicam En este caso a pH's mayores a 5 se presentan máximos a 370, 285 y 255nm. Para este caso a pH's bajos el máximo de 285 va desapareciendo y el de 370 se incrementa cinco unidades. De igual forma se observa la presencia de un punto isosbéstico a 300nm involucrando un equilibrio de intercambio de protón. 3.0~-----------------------------------------------------------------, 2.6 2.0 1.0 0 .6 Plinto i~o~hé:stic.o pH 1-+- 8 .140 1 ---5.599 --lIf- 5.165 i --&-4.533 1- 3.483 1- 2 .655 1-+- 1.857 1--1.421 i -+- 1.068 --*-0.676 O.O +-----~----~---,----~----~----_r----_r----~----~--~~~ .. 230 260 270 290 310 330 360 370 390 410 430 460 Longitud de onda Fig. 5.1.1 Espectros de absorción en función del pH para lenoxicam a una concentración de IxIO-4 M - 46- En base a estos resultados se puede realizar el siguiente análisis de los datos. Para obtener las constantes de estabilidad de estos compuestos se utilizaron los programas SQUAD y TRIANG, programas que actúan por medio de la iteración de la ecuación: HnL (n-k) <==> L -k + nH Ka = [L-k][Wr [ HnL(n-k)] Así que es importante tener un aproximado o una idea del compuesto formado para hacer más eficiente el uso del programa computacional. 5.1.0 DETERMINACIÓN DE LAS CONSTANTES DE EQUILffiRIO DE LOS FÁRMACOS PIROXlCAM y TENOXICAM EN MEDIO ACUOSO. Los datos obtenidos de la valoración de ambos fármacos en agua fueron acomodados para ser corridos por SQUAD y se obtuvieron los siguientes resultados. Cabe destacar que se utilizaron los modelos propuestos por Moya-Hernández (36) para agilizar el trabajo. Piroxica. Tabla 5.1.0 Constantes refinadas por SQUAD para el piroxicam en medio acuoso. ESPECIE LOG fJ pKa' s o- U H2pirox+ 7.031 1.89 7.80xlO- j 5.73xlO-l Hpirox 5.139 5.14 Donde a = desviación esú\ndar de la constante y U = suma se cuadrados. - 47- Tenoxicam Por su parte las constantes refinadasobtenidas para tenoxicam fueron: Tabla 5.1.1 Constantes refinadas por SQUAD para el tenoxicam en medio acuoso ESPECIE LOG~ pKa's (J U H2tenox 6.113 1.14 6.28xlO· 3 3. 72xlO-L Htenox 4 .969 4.97 5.1.1 ESPECIACIÓN QUÍMICA DEL TENOXlCAM CON FE (II) EN AGUA. Los complejos formados durante la experimentación se distinguen por un cambio en la coloración de las soluciones al momento de mezclar el metal Fe (II) con el fánnaco (piroxicam o tenoxicam) ambos en solución. Para efecto de la experimentación se realizó lo siguiente: El ión Fe (H) fue obtenido al disolver cloruro de hierro (JI). Por otra parte la solución del fármaco se obtuvo como lo marca el procedimiento experimental. Es importante destacar que la forma de mantener la fuerza iónica constante en el valor de 0.15 M se logró colocando en cada solución de metal o ligante, cloruro de sodio al 0.15 M, ya que los complejos que se puedan formar entre los cloruros y el fármaco no causan ningún problema en la especiación. Como se ha leído anteriormente la especiación se llevó·a cabo en dos medios acuosos diferentes un medio no polar y un medio polar esto con el fin de determinar el comportamiento de estos complejos en ambas situaciones. ·48 - Para obtener la especiación de este fármaco con Fe (H) como ya se menciona en el procedimiento experimental se trabajaron tres relaciones diferentes metal-ligante: 1: 1, 1:2 y 1 :3. Para cada sistema se obtuvo un juego de datos espectrofotométricos cuidando siempre la relación de concentlación así como las condiciones a las que se debía mantener el sistema T=37 ±O.5 OC, 1= O.l5M impuesta por NaCI y un burbujeo constante de nitrógeno para evitar la oxidación del Fe (JI), es importante destacar que la concentración de los complejos que se puedan formar con los cloruros es insignificante es por eso que se decidió usar este compuesto para imponer la fuerza iónica. Como primer plano se analizarán de manera general las evidencias del complejo metal ligante para las relaciones reportadas en los resultados. 0.9 0.8 0.7 .. 0.& "O <: f 0.6 o .! c( 0.4 0.3 0.2 0.1 o 230 280 Punto isosbéstico 330 380 Longitud de onda (nm) pH ....... 7.056 -5.076 -3.317 -3.128 I 1-+-3.06 ......... 2855 -1.454 ...... 0.8155 -0-0.718 ....... 0.589 Fig. 5./.2. Espectros de absorción para complejo fenoxicam - Fe (11) en medio acuoso para la relación l: l concentración de lxl (f4. -49 - En esta grafica se puede observar que para la relación l:l se presenta un punto isosbéstico en la longitud de onda de 300nrn, hemos hablado de que esta característica sólo se presenta cuando hay un equilibrio de intercambio de protón' pero para poder establecer la existencia del complejo es necesario compararlo con el espectro de absorción del tenoxicam solo fig. 5.1.1, pues se presentó un cambio de coloración al mezclarse con el Fe (II). En este caso el punto isosbéstico se encuentra a la longitud de onda de 300 nm. Pero los valores de los máximos en la absorbancia se han modificado de una manera muy notoria mientras que para el tenoxicam sólo los valores se encuentran entre 2.6 y 1.3 de absorbancia, el resultado para la solución que contiene la relación 1: 1 metal-ligante se encuentran en el rango de 0.5 a 0.66 esto implica que no sólo modifica el espectro sino que es la prueba de que es otro compuesto diferente al Jigante sólo fig. 5.1.1. Todos los datos obtenidos para esta relación serán analizados por medio del programa TRlANG para corroborar las especies que están absorbiendo en el sistema Posteriormente se realizarán las corridas en SQUAD para determinar las constantes de estabilidad. Es necesario obtener la información de las tres relaciones metal-ligante para poder hacer el análisis computacional. RELACIÓN 1:2 Fe(II) -TENOXICAM En este caso nuevamente se modifican los valores de absorbancia de los máximos dando a entender que no sólo se forma un compuesto sino que es un compuesto diferente a la relación 1: 1 esto debido a que para esta solución los valores se encuentran entre 1.1 a 1.5 cifra que es mayor a la obtenida en el sistema 1:1 y al mismo tenoxicam firg. 5.1.1. Por otro lado a simple vista podemos observar una modificación en las bandas de los espectros. - 50- 1.40 1.20 1.00 .!'! u ¡ 0.80 € ~ ~ 0.60 0.40 0.20 pH R I--usal -5.283 ...... 4.671 __ U14 0.00 -t-. ----..,.-----.,..-------,------,.---~~ ............... 200 250 300 350 500 Longitud de onda (nm) Fig. 5./.3. Espectros de absorción para el complejo tenoxicam - Fe (JI) en medio acuoso para la relación 1:2 concentración de IxIO·4• RELACIÓN 1:3 Fe (TI) -TENOXICAM. En este caso los cambios no son significativos, los rangos de los máximos se encuentran en 1.5 a 2.5 de absorbancia prácticamente los mismos para el ligante, esto quiere decir que en la solución no predomina ningún complejo y que las desviaciones en los valores de absorbancia se deben a la interferencia de los complejos formados en las relaciones 1: 1 y 1:2 los cuales se forman en menor cantidad. - 51 - 2.5 pH 2 __ 8.16 1-+- 5.998 1-+-5.4 .!! 1.5 -+-4.408 o e 1 __ 2.606 • i! O 1 -0-1 .606 • .A OC I __ 1.004 1--0.886 1 0.5 I -0.6OS I O+-------~--------~--------~------~~~~~~~~ 230 280 330 380 430 480 Longitud de onda (nml Fig. 5.1.4. Espectros de absorción para el complejo tenoxicam - Fe (JI) en medio acuoso para la relación 1:3 concentración de lx 1 rr. Los datos espectrofotométricos fueron compilados para crear las matrices correspondientes para cada programa computacional los datos en medio acuoso se analizaron en el programa SQUAD primero alimentando los modelos correspondientes a la relación metal-ligante de cada sistema. A continuación se muestra una tabla con ejemplos de los modelos alimentados a SQUAD para el tenoxicam en agua Tabla. 5.1.2 Ejemplo de algunos modelos alimentado a SQUAD para la relación 1: 1 Modelo alimentado Log Kalim Log Kcal crcalcte cr datos U T{l)Fe{l)H(2) 15 11.233 0.0988 T(I )Fe(l )H(I) 12 9.339 0.0711 1.0272xlO-2 9.9389xl0-2 T(l)Fe(I) 8 3.658 0.0286 - 52- Modelo alimentado Log Kalim LogKcaI ocalcte (J datos U T(2)Fe(l )H(2) 21 20.36 0.0677 T(I)Fe(l)H(2) 15 11.84 0.087 l.32xlO-2 1.57xlO- 1 T(l)Fe(l)H(I) 12 10.21 0.1107 T(l)Fe(l) 7 5.45 0.089 Tabla.5.1.3 Ejemplo de algunos modelos alimentado a SQUAD para la relación 1:2. Modelo alimentado* Log Kalim Log Kcal T(2)Fe(I)H(2) 21 20.3681 T(l )Fe(l )H(2) 15 11.8475 T(l)Fe(I)H(l) 12 10.2136 T(I)Fe(l) 7 5.45 Modelo alimentado Log KaJim Log Kc..J T(2)Fe(I)H(4) 24 24.35 T(2)Fe(l)H(2) 21 22.49 T(l )Fe(1 )H(2) 15 22.49 T(I)Fe(I)H(l) 12 13.27 Log K'¡¡m- Logantmo de la constante ahmentada a SQUAD. Log K..t = Logaritmo de la constante calculada por SQUAD. ocalcte 0.0677 0.087 0.1107 0.089 oeal/cte 0.095 0.062 0.0686 0.0584 o" /cte = Desviación estándar de los valores de la constante calculados. 0""., = Desviación estándar de los datos de absorbancia alimentados a SQUAD. U = Suma de cuadrados. Odatos U l.3248xl0-2 1.5725xlO-J Odato. U 1.0281xlO-2 9.47xl0-2 • Modelo químico supuesto alimentado a SQUAD en donde T = tenoxicam, Fe = hierro y H = protón. El número entre paréntesis representa el coeficiente estequiométrico del complejo. Como podemos observar sólo se tomaron en cuenta los modelos de la relación 1:1 y 1:2 ya que estos son los que presentaban la información necesaria para que el programa convergiera de manera adecuada. En la tabla 5.1.2 podemos observar que los sistemas alimentados convergen utilizando el modelo ya mencionado pero sus parámetros estadísticos (O, U) no son adecuados pues presentan valores muy altos. Se fueron descartando cada combinación de complejos hasta obtener el modelo mas adecuado. Al final se obtuvieron los siguientes resultados para el complejo Fe-tenoxicam con las constantes de estabilidad. - 53- Tabla. 5./.3 Modelosresultantes de la especiación química en medio acuoso para el complejo Fe - tenoxicam. Tenoxicam Zona ácida de 0.6 - 3.5 pH Mod.Alim. Constante (K) GConstante GOal U Fe (H2Th 25.93 0.1249 8.871x10-3 6.000x10· 2 FeH2T 14.51 0.0452 FeH3T2 25.59 0.0941 Zona básica de 3.5 - 8 pH Fe (HT) 2 23.31 0.0467 FeHT 13.49 0.1074 1.066x10· 2 8.143x10·2 FeT 8.34 0.1139 FeT2* 13.00 ·constante de estabilidad fijada para el programa SQUAD en el modelo alimentado Como podemos observar los modelos resultantes corresponden a cada zona de pH, esto es debido al . comportamiento acido·base del ligan te, por lo tanto los complejos formados también se ven afectados por este. La decisión de tomar un juego de complejos para cada zona de pH tabla 5.1.3 es debido a que la estadística de los sistemas alimentados globalmente no fue la más adecuada. En la tabla 5.1.3 se ·54 - observa que los complejos predominantes son los de relación estequimetrica 1: l y 1:2 Hierro- Tenoxicam el sistema 1:3 no se tomó en cuenta ya que no aportaba información de algún complejo formado. A continuación se muestran las gráficas de los coeficientes de absortividad molar calculados por el programa para este grupo de complejos que como podemos ver tienen un comportamiento similar al que presenta la solución experimentalmente. SDE+04~------------------------------------------------r========n • ..IIE+D4 3.5E+D4 280 330 Long. de onda (nm) 380 ...... FIICHlT~ -FIIICIT2 •• Fe(IfT)2 ~FeH2T ..q.FeHT -F~TZ Coencientes de absortividad molar para los drerentes complejos de Fe(lI}-tenax:ica.m en medio acuoso. Fig. 5.1.4. Coeficientes de absortiviCÚld molar para el complejo tenoxicam - Fe (lf) en medio acuoso concentración de Jxl(J4. - 55- 5.1.2 ESPECIACIÓN QUÍMICA DEL COMPLEJO Fe - PIROXICAM EN AGUA. De la misma fonna que para el tenoxicam, los complejos de piroxicam se estudiaron valorando las soluciones que contenían las especies en las tres diferentes relaciones 1:1, 1:2 y 1:3 la valoración se realizo con Hel 0.01 M. Se tomaron los espectros de absorción cada 0.2 Wlidades de pH y se obtuvieron los resultados aquí presentes. Para analizar el comportamiento de este complejo de la misma forma que con el tenoxicam primero se realizó una comparación entre los resultados obtenidos al mezclar los reactantes y los resultados del ligante solo. RELACIÓN 1:1 Fe-PIROXICAM En la figura 5.1.0 se observa el patrón de comportamiento delligante solo donde se distinguen puntos isosbésticos a las longitudes de onda de 290 y 300 nrn. En comparación con la figura 5.1.5 se observan cambios notorios en el valor máximo de absorbancia. Mientras que para el piroxicam solo, los valores son de 2.3 y 1.3, para el complejo son de 0.83 y 0.68 esto nos demuestra que existe una especie diferente al piroxicam que se esta fonnando en la solución. Además de que se presenta también un cambio de coloración en la solución. - 56- 0.9 0.8 0.7 0.6 .!! ~ 0.5 .. -e o ;JU c( 0.3 0.2 0.1 O 230 Puntos isosbésticos 280 330 380 Longitud de onda 430 pH --'-6.951 .-6-6.556 ""*-5.481 ---5.392 ~4.165 -+-3.757 -2.762 ""*-1 .727 ___ 1.565 -+-1.363 -+-1.157 -0.958 Fig. 5.1.5 Espectros de absorción en función del pH para la relación 1: 1 Fe - Piroxicam a una concentración de lxlrr M RELACIÓN 1:2 Fe-PIROXICAM Para la relación metal-ligante1:2 se encontró algo importante, en este caso se observan dos puntos isosbésticos con valores de absorbancia completamente diferentes al delligante solo en este momento podemos decir que existe no sólo una sino por lo menos tres especies diferentes en el sistema y que son especies protonadas y vislumbra una posible respuesta a el complejo predominante para este sistema. - 57- l ,5,---------------------------------------------------------------, 2 • 1.5 Ü e ~ ~ ... « 0.5 pH -<>-5.841 -tl-5.446 -<>-4246 --.!r-3.046 I -+-2.447 1 ..... 2247 1 ""-2.044 1-><-1.823 1 ...... 1.635 1 -+-1 .43 -+-1 .236 ! - 1.048 --0.834 o~--------~--------~--------~----~~~~~~~~ ... 230 280 330 380 Longitud de onda 430 480 Fig. 5.1.6 Espectros de absorción en función del pH para la relación 1:2 Fe - Piroxicam a una concentración de lxlrr M RELACIÓN 1:3 F~PIROXICAM En este caso nuevamente no se presenta evidencia de un cambio significativo en los valores de absorbancia o longitud de onda por lo tanto quiere decir que los complejos que predominan son una mezcla de los complejos formados en las relaciones 1: 1, 1:2 y posiblemente la 1:3 aunque esto no es absoluto y es posible que se encuentren complejos polinucleares. - 58- lO .¡¡ 2.5 2 ¡ 1.5 -e l « 0.5 280 330 380 Longitud de onda (nm) pH H __ 5.254 --3.003 "'-2.205 -6-1.8 -<>-1 .601 I -+-1 .402\ -1.1991 __ 0.8981 430 480 Fig. 5.1.7 Espectros de absorción enfunción del pHpara la re/ación 1:3 Fe - Piroxicam a zma concentración de lx10'-4 M Los datos obtenidos se arreglaron para ser compilados por el programa computacional ya mencionado con el fin de obtener las constantes de estabilidad de estos complejos. A continuación se muestra un ejemplo de los modelos alimentados a SQUAD. Tabla. 5.1.4 Modelos alimentados a SQUAD para el piroxicam en las relaciones 1:1 y 1:2. Modelo alimentado Log l("lim Log KcaJ acallete a datos U P(2)Fe(1 )H(2) 22 21.1095 0.0551 P(2)Fe(l) 15 11.0448 0.0875 6.88xW·3 4.03xlO·2 P{I)Fe(l)H(2) 13 11.1847 0.0495 P( 1 )Fe(l )H(I) 11 10.5329 0.0659 P(I)Fe(l) 7 7.1193 0.0648 - 59- Tabla.5.J.5 Modelos resultantes de la especiación química en medio acuoso para el complejo Fe - piroxicam. Piroxicam Zona básica de 3.5 - 7 pH Mod. Alim. Constante (K) O"constan!e O"Oat U Fe (HP) 2 24.3041 0.0235 FeP2* 14.00 9.928x10-3 8.842x10- 2 FeHP 13.60 0.0662 FeP 8.41 0.0643 Zona ácida de 0.8 - 3.5 pH Fe(H2Ph 26.65 0.0026 FeH3P2 26.02 0.0007 . FeH2P* 7.427x10-3 4.705x10- 2 15 Fe(HPh* 24.5 • Especies fijadas para escuda como valores constantes. Para el piroxicam se realizaron un sinnúmero de pruebas con respecto a los modelos alimentados que al final por medio de clasificar los sistemas formados dependiendo de la zona de pH, se obtuvieron los modelos de la tabla 5.1.5. Nuevamente se tomaron los modelos con la mejor estadística y que además se adaptaban a los sistemas que evidenciaban los datos experimentales. - 60- En la tabla 5.1.5 podemos ver que existe un predominio de los complejos 1: 1 y 1:2 y de nueva cuenta los complejos 1:3 no son tomados en cuenta pues no aportan información y cuando en las corridas se tomaban en cuenta reportaban las estadísticas más altas confirmando la hipótesis de que no se forman complejos con esta relación Finalmente los modelos de la tabla 5.1.5 fueron los aceptados para los complejos metal-ligante de los fármacos y el Fe (Ir) en medio acuoso. La grafica de los coeficientes de absortividad molar nos muestra la similitud de lo experimental con lo calculado. 1~~~~----------------------------------------~======~ 7.1E~ .::--6.IE+04 _~ 5.1E+04 ~4.IE+04 CA) 3.OE+04 2.OE+04 -Fe(H2P)2 -7'-FeHJP2 --Fe(HP)2 __ FeH2P -O-FeHP __ FeP2 --FaP ~IE~+-----____ ~~ ________ ~ ________ ~~~~~~~~=Q.d 230 280 330 380 Long. de onda (nm) Coeficient.es de absortividad molar para los d"erentes complejos de Fe(II}.p iroxicarn en medio acuoso. Fig. 5.1.8. Coeficientes de absortividad molar para el complejo Fe (JI)- Piroxicam En medio acuoso concentración de lx10-4• - 61 - S.1.3 ESPECIACIÓN QUÍMICA DE LOS FÁRMACOS PIROXICAM y TENOXICAM CON Fe (ll) EN ACETONA. Por otra parte también se realizo la especiación de estos complejos en acetona Es un hecho que el procedimiento experimental es diferente ya que para lograr este objetivo se utilizaron los métodos de variaciones continuas y relaciones molares, cabe destacar que en estos experimentos tambiénse mantuvo una atmósfera inerte por medio de burbujeo de N2 y se controló la evaporación de la acetona trabajando a temperaturas por debajo de su presión de vapor. Los datos obtenidos se tomaron y analizaron de manera que se estimara un complejo para cada relación en el caso del agua. Por su parte los resultados de los métodos de variaciones continuas y relaciones molares usados para la especiación en acetona se analizaron en primer plano gráficamente para tener un acercamiento de la relación de los complejos. TENOXICAM RELACIONES MOLARES La primera evidencia de la existencia de los complejos es el cambio de coloración en la solución al momento de mezclarlos. En las gráficas 5.1.9 y 5.2.0 se observa el comportamiento espectrofotométrico de la solución para el método de relaciones molares, al realizar un análisis grafico de los resultados obtenidos la relación en donde se encuentra la inflexión no es ninguna que corresponda a las relaciones 1:1, 1:2 o 1:3 sino que presume ser un polinuclear debido a que 1.6 corresponde a la relación 2:3 esta hipótesis fue certificada por medio del programa computacional SQUAD. -62 - 0.1 0.8 0.7 ti 0.6 o ~ fU J < 0.4 0.3 0.2 0.1 450 500 650 Longitud de onda 600 Fraccion de Fe(lI) r=:¡ -"'0_5 I ""-0_75 -;0-1 I =:: I -3 650 700 Fig. 5.1.9 Espectros de absorción para sistema Fe (I1) -Tenoxicam- en acetona a una concentración de JxJ(J3 M 0.3 T -- ---------- ------- -- ------ ---------------- ------ ------------------------------ 0.25 ~ I 0.2 i I 0_15 ~ 0.1 1.6 0_05 I o +--------r---~,---,---,,----,----,_____, o 0 .5 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 Fracción mol Fig. 5.2.0 Método de relaciones molares para el sistema Tenoxicam - Fe (11) en acetona a 510 nm. - 63- VARIACIONES CONTINUAS Las soluciones fueron analizadas en el espectrofotómetro y los espectros obtenidos tienen el siguiente comportamiento: .!! u e .. € o lO ... ce 3.5 3 Punto isosbestico 2.5 2 1.5 ':~--400 450 500 550 Longitud de onda 600 Fracción de Fe (11) ~o ~O.5 --<>-1 ""*""1 .5 -2 -+-2.5 --;0-3 ....... 4.5 ""*""6 -+-7.5 -8.5 -+-9.5 -'-10 650 700 Fig. 5.2./ Espectros de absorción para sistema Tenoxicam - Fe (Il) en acetona a una concentración de lxIOo3 M Los espectros fueron registrados en un rango de longitudes de onda entre 400 y 700 nm, se encontró un punto isosbéstico en la longitud de onda de 430 nm. Que nos aportaba la evidencia de la existencia de un complejo. Para el análisis de estos datos se utilizó el programa TRIANG que aportó la información necesaria para encontrar los complejos formados de manera más específica. - 64- Esto aunado con la información obtenida por la grafica 5.2.1 que de la misma forma que para el método relaciones molares da un acercamiento muy confiable de lo que está pasando en el sistema. 0.6 0.46 • • • 0.4 0.36 I 0.3 0.26 0.2 • 0.16 0.1 o .'iR 0.06 o o 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.6 0.7 0.8 0.9 Fraooión mol Fig. 6.2.3. Método de variaciones continuas para el sistema Fe (11) -Tenoxicam en acetona a 510 nm De nueva cuenta el análisis que se pueden obtener de estas gráficas nos muestra una evidencia más tangible de que los complejos formados son los polinucleares. Esto quiere decir que elligante es capaz de enlazar a más de un ión metálico presente. Los datos obtenidos por los dos métodos se acomodaron para ser corridos primeramente por el programa TRIANG Y posteriormente por SQUAD. Las observaciones que pudimos obtener del análisis con TRIANG tienen que ver con el número de especies que están absorbiendo en la solución que nos proporciona ayuda directa para saber los modelos que van a ser alimentados a SQUAD. - 65 - Los datos se alimentaron comenzando con un margen de error de 0.0009 a 1 y se obtuvieron las especies que absorben para ese valor, cabe destacar que un modelo solo puede ser tomado en cuenta si se encuentra entre el valor de 0.01 a 0.09. y fmalmente los datos corridos por SQUAD nos llevaron a los siguientes modelos, para el complejo Fe (Il)- tenoxicarn en acetona. Tabla 5.1.6 Resultados obtenidos para el complejo Fe (11)-Tenoxicam en acetona. Modelo Log K,up- Log Kcal (Jconst (Jdat U T(2)Fe(2) 7 13.3713 .2274 T(3)Fe(2) 18 18.1467 .2418 5.9319x1O-3 2.5757xlO-2 T(4)Fe(2) 20 20.5539 .2307 Como podemos observar en la tabla 5.1.6 los modelos que se adecuaron son los polinucleares que coinciden con los resultados que se tenían gráficamente. En la fig. 5.2.3 se grafican los coeficientes de absortividad molar para este modelo demostrando un comportamiento similar al experimental, esto aunado a la estadística obtenida reafirman la decisión de establecer este sistema de la tabla 5.1.6 como el predominante en la solución. - 66- 20000 18000 Especies mnnadas 16000 14000 __ T(2)Fe(2 -... 12000 :§ 10000 __ T(3)Fe(2~ ~ 8000 "- tu 6000 --T(4)Fe(2 4000 2000 O 410 460 510 560 610 Longitud de onda (nm) Fig. 5.2.3 Coeficientes de absortividad molar para las especies presentes en el sistemo Fe (11)- Tenoxicam en acetona, calculados por SQUAD. PIROXlCAM La especiación de este fármaco con el Fe (II) se realizó siguiendo el procedimiento ya mencionado anteriormente. Se encontraron varios problemas ya que aunque los datos experimentales eran repetitivos se encontraba cierta incongruencia así que se decidió variar la concentración de los reactantes y certificar lo que estábamos obteniendo, de este modo la concentración con la que se comenzó a trabajar fue 5xlO·3 M. y posteriormente fue cambiada por lxlO-3 M. Con los resultados obtenidos se generó un juego de datos en los que se observó el mismo comportamiento para ambos sistemas, por otro lado se modificaron las condiciones de trabajo como la temperatura ya que al principio se trabajó con temperaturas por debajo de los 10° C y se hizo otra serie de experimentos a temperatura ambiente y de nueva cuenta se obtuvieron los mismos resultados. - 67- Los resultados obtenidos nos muestran que se presenta un complejo entre el fármaco y el metal bajo las condiciones ya planteadas. Se utilizaron también los métodos de variaciones continuas y relaciones molares estos experimentos arrojaron las evidencias necesarias para lograr la especiación química del complejo. Retomando los resultados obtenidos podemos observar lo siguiente: Relaciones molares 0.9 Fracción de Fe(II). 0.8 0.7 --+-0 -"-025 0.6 ........ 0 .5 • "O e 0.5 --+-0.75 1 .e o -125 lO .A 0.4 < I 0.3 1 -1.5 -<>-1 .75 ...... 225 0.2 Gj 0.1 -6-.4 O 400 450 500 550 600 650 700 Longitud de onda (nm) Fig. 5.2.3 Espedros de absorción para el complejo Fe (lI)-Piroxicam en acetona. Para este caso la tendencia de los espectros de absorción nos demuestra que existe una variación en la concentración de la especie que absorbe ya que el Fe (H) en solución es colorido así como el piroxicam se puede pensar que la absorción registrada es de uno de los dos reactantes. Una de las - 68- fonnas de evidenciar el complejo y continuar con el estudio es el cambio de color al momento de mezclarlos. En la figura 5.2.3 se observan una serie de datos que corresponden al comportamiento espectrofotométrico de cada relación manejada, es decir si observamos la tabla 4.1.0 podemos visualizar que en un inicio existe una solución que sólo contiene Fe (Il) y al final otra solución que sólo contiene al piroxicam esto implica que al variar los espectros por cada solución se están presentando especies diferentes al metal o al ligante solos. 0.3 • • 0.25 • • • • • 0.2 • . !! • u e ti ~ 0.15 o VI • .o c( 0.1 • 1.6 • 0.05 • O O 0.5 1.5 2 2.5 3 3.5 4 Fracción mol Fig.5.2.4 Método de relaciones molares para el complejo Fe (JI) - Piroxicam. Este análisis gráfico nos muestra una severa tendencia del sistema hacia los complejos polinucleares y confirma la existencia
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