AGUILAR-ROMERO-ARLETTE

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA 
 
 
 
 INFORME TÉCNICO DE LA OPCIÓN CURRICULAR EN LA MODALIDAD DE: 
ESTANCIA INDUSTRIAL 
 
TITULO: 
“LÍMITE MICROBIANO” 
 
 
QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE: 
INGENIERO FARMACÉUTICO 
 
PRESENTA: 
AGUILAR ROMERO ARLETTE 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 MÉXICO, D.F. MAYO DE 2009 
ASESOR EXTERNO: QBP. MA. DE JESÚS PURECO OJEDA 
ASESOR INTERNO: QBP. MIRIAM JUÁREZ JUÁREZ 
EVALUADORES: QFB. MA. DE LOURDES MORENO RIVERA 
 IBT. VERÓNICA GABRIELA LUNA FONTAINE 
 
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA 
 
 
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
Arlette Aguilar Romero*, QBP Ma. De Jesús Pureco Ojeda1, QBP. Miriam Juárez Juárez2 
1Jefe del departamento de Microbiología Bristol-Myers Squibb de México planta San Ángel, número telefónico 53378200 Ext 2502 e- 
mail maria.pureco@bms.com 
2Departamento de Biología en la Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología Av. Acueducto s/n, Barrio La Laguna, Col. 
Ticomán, México, D.F. , C.P. 07340, Teléfono: 5729-6000, extensión: 56347 
Palabras claves: OMAs, Hongos, levaduras, microorganismos patógenos
 
 
 
Introducción: Los productos farmacéuticos son agentes 
químicos utilizados terapéuticamente para tratar 
enfermedades. Actualmente, los medicamentos son usados 
para la prevención, así como para el tratamiento de 
enfermedades o sus consecuencias. 
Se exponen los aspectos considerados en la evaluación 
sanitaria de productos farmacéuticos de importación y 
producción nacional. Se relatan los procedimientos 
establecidos para aprobar y considerar un producto como apto 
para uso o consumo humano. La evaluación de los productos 
farmacéuticos por el Registro sanitario se basa en el análisis 
de la materia prima, producto intermedio y producto terminado, 
de interés particular en casos necesarios. Se mencionan los 
análisis microbiológicos más importantes. 
Es importante en la producción de los medicamentos, por lo 
tanto su calidad, es de suma importancia ya que es la materia 
prima más usada y además está presente en otros procesos 
relacionados con dicha producción. Sin embargo, el agua 
también puede actuar como vehículo de microorganismos y su 
carga microbiana dependerá del método de obtención, 
distribución y/o almacenamiento. 
Metodología: La técnica consiste en diluir la muestra en un 
medio de cultivo y luego sembrar una pequeña cantidad de la 
dilución en una placa o bien mezclarla. A continuación, la placa 
debe ser incubada en las condiciones adecuadas. Una vez que 
se han formado colonias visibles, generalmente después de un 
día, se seleccionan para el recuento de colonias las placas en 
las que éstas están bien separadas. Las placas que tienen 
entre 30 y 300 colonias ofrecen una buena relación entre la 
rapidez del recuento y la precisión en el resultado obtenido. El 
número de colonias de una placa, junto con la dilución de la 
muestra que se inoculó en ella, nos permite calcular la 
concentración de células presente en la muestra original. 
Para el análisis de agua, recolectar la muestra. Identificar las 
muestras (sitio, clave y fecha), realizar los análisis utilizando 
material y medios esterilizados y bajo condiciones de 
esterilidad, colocar la membrana en la base del filtro, 
asegurarse de cerrar bien el embudo, colocar 100 mL para 
filtrar, tomar la membrana y como colocarla en una placa con el 
medio de cultivo, incubar las placas en posición invertida entre 
30 – 35 °C durante 48 a 72 horas, pasado el tiempo de 
incubación tomar lecturas y registrar en bitácora. 
 
 
 
 
 
 
Resultados y discusión: 
 
Tabla 4. Resultado de los productos analizados de Febrero 
a Septiembre 2008 
 
 
Conclusiones: En la tabla No. 4 aparece el conteo total de 
microorganismos presentes en cada uno de los lotes 
analizados, además del análisis de microorganismos 
patógenos objetables los cuales deben de cumplir con los 
límites establecidos 
El conteo total de microorganismos mesofilos aerobios se 
mantienen dentro de los límites establecidos para cada uno de 
los productos y los resultados de microorganismos objetables 
durante el periodo de Febrero a Septiembre fueron ausentes 
La materia prima es importante la investigación de 
microorganismos patógenos objetables debido a que la 
materia prima constituye una de las principales fuentes de 
contaminación, ya que si ésta contiene microorganismos 
pueden contaminar el producto del cual forman, durante el 
análisis microbiológico la materia prima cumplió con las 
especificaciones 
Referencia: 
1. Farmacopea de los Estados Unidos de América; 
Formulario Nacional; Vol. 1; Edición anual en español 
(USP) 
2. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; 
octava edición; Vol. I 2004; México (FEUM) 
3. http://www.bristol.com.mx 
4. NOM-059-SSA1-1993 Buenas practicas de 
fabricación 
5. NOM-073-SSA1-2005 Estabilidad de Fármacos y 
Medicamentos 
Tabletas 
Producto Lote Análisis Especificaciones Dilución Resultado 
A PT001 
Mic Mesófilicos Aerobios Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 10 UFC/ g 1:10 <10 
B PT002 
Mic Mesófilicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
E. coli Ausentes 1:10 Ausente 
C PT003 
Mic Mesófilicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
E. coli Ausentes 1:10 Ausente 
Salmonella Ausentes 1:10 Ausente 
D PT004 
Mic Mesófilicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
E. coli Ausentes 1:10 Ausente 
Salmonella Ausentes 1:10 Ausente 
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UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA 
 
Dedicatorias 
 
 
A Dios por haberme permitido llegar hasta este punto y haberme dado salud para lograr mis objetivos, 
además de su infinita bondad y amor. 
 
A mi madre Francisca Romero por haberme apoyado en todo momento, por sus consejos, sus valores, 
por la motivación constante que me ha permitido ser una persona de bien, pero más que nada, por su 
amor. 
 
 A mi padre Tomas Aguilar por los ejemplos de perseverancia y constancia que lo caracterizan y que 
me ha infundado siempre, por el valor mostrado para salir adelante y por su amor. 
 
A mis Hermanos Dolores, Javier, Janeth, Jaime y Tomas por que siempre he contado con ellos para 
todo, gracias a la confianza que siempre nos hemos tenido; por el apoyo y amistad 
 
Amigos que gracias al equipo que formamos logramos llegar hasta el final del camino y que hasta el 
momento, seguimos siendo amigos: Elvia Yanit García, Guadalupe Hernández, Liliana Lizeth García 
y Miguel Ángel Soto 
 
Abraham Vásquez por aguantarme en todos estos momentos difíciles y por enseñarme que no hay 
limites, que lo que me proponga lo puedo lograr y que solo depende de mi. 
 
Y a todas aquellas personas que de una u otra forma, colaboraron o participaron en la realización de 
este proyecto, hago extensivo mi más sincero agradecimiento. 
 
 
 
 
Arlette Aguilar Romero 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITEMICROBIANO” 
1 
 
 
 
 
 
 
 
1 Introducción y Descripción de la compañía 5 
 1.1 Misión 7 
 1.2 Visión 8 
 1.3 Historia 8 
 1.4 Giro de la empresa 9 
 1.5 Organigrama 11 
 
2 Proyecto: " LÍMITE MICROBIANO" 12 
 2.1 Introducción 12 
 2.1.1 Recuento de microorganismos viables 12 
 2.1.1.1 Recuento de Microorganismos Mesofílicos Aerobios 14 
 2.1.1.2 Investigación de microorganismos objetables 14 
 2.1.1.3 Efectividad de Preservativos antimicrobianos 15 
 2.1.1.4 Promoción de crecimiento 16 
 2.1.2 Estabilidades 17 
 2.1.3 Análisis de aguas 18 
 2.1.3.1 Endotoxina 19 
 2.1.3.2 Método de Gelificación 20 
 2.2 Justificación 21 
 2.3 Objetivos generales 22 
 2.4 Objetivos específicos 22 
 2.5 Metodología 23 
 
3 Resultados 34 
 3.1 Análisis de Resultados 38 
 
4 Conclusiones 43 
 
5 Glosario 44 
 
6 Anexos 45 
 
7 Recomendaciones para estancias futuras 55 
 
8 Referencias 56 
 
TEMA PÁGINA 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
2 
 
 
 
 
 
ABREVIATURAS 
 
Abreviatura Significado 
ABP Agar Baird-Parker 
AC Agar Cetrimida 
ADS Agar Dextrosa Sabouraud 
AMC Agar MacConkey 
ASB Agar Sulfito Bismuto 
AST Agar Soya Tripticaseína 
AVB Agar Verde Brillante 
AVJ Agar Vogel-Johnson 
BMS Bristol-Myers Squibb 
CL Caldo Lactosado 
CSC Caldo Selenito Cistina 
CST Caldo Soya Tripticaseína 
CT Caldo Tetrationato 
LAL Lisado de Amebocitos de Limulus 
MP Materia Prima 
OMA Organismos mesófilos aerobios 
OTC Automedicación 
PI Producto Intermedio 
PT Producto terminado 
UFC Unidades Formadoras de Colonias 
XLD Agar Xilosa-Lisina-Desoxicolato 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
3 
 
 
 
 
ÍNDICE DE TABLAS 
 
 
 
No Tema Página 
 
Tabla 1 Agentes inactivantes 
Tabla 2 Estudio de estabilidades 20 
Tabla 3 Métodos y límites para los sistemas de agua de uso farmacéutico 21 
Tabla 4 Comparación del Método de Gelificación (LAL) Vs Pirógenos (conejo). 22 
Tabla 5 Resultado de los productos analizados de Febrero a Septiembre 2008 34 
Tabla 6 Resultado de materia prima analizada de Febrero a Septiembre 2008 35 
Tabla 7 Resultado de las estabilidades analizadas de Febrero a Septiembre 2008 36 
Tabla 8 Resultado de los tipos de agua analizadas de Febrero a Septiembre 2008 37 
Tabla 9 Características morfológicas de Staphylococcus aureus sobre medios de 
cultivos selectivos-diferenciales 
52 
Tabla 10 Características morfológicas de Pseudomonas aeruginosa sobre medios 
de cultivos selectivos-diferenciales 
52 
Tabla 11 Características morfológicas de Salmonella sp sobre medios de cultivos 
selectivos-diferenciales 
53 
Tabla 12 Características morfológicas de Escherichia coli sobre medios de cultivos 
selectivos-diferenciales 
53 
Tabla 13 Características medios de cultivos para el análisis de agua 54 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
4 
 
 
 
 
 
ÍNDICE DE FIGURAS Y GRAFICOS 
 
 
 
No Tema Página 
 
 
Figura 1 Organigrama Control de Calidad 11 
Grafico 1 Método en placa para identificación de OMA 24 
Grafico 2 Recuento de hongos filamentosos y levaduras 26 
Grafico 3 Investigación de Pseudomona aeruginosa y 
Staphylococcus aureus 
28 
Grafico 4 Investigación de Escherichia coli y Salmonella sp 30 
Grafico 5 Análisis de Aguas Filtración al vacío 32 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
5 
 
1.- DESCRIPCIÓN DE LA EMPRESA. 
 
Bristol-Myers Squibb (BMS) es una de las diez principales empresas 
farmacéuticas en el mundo. Su Misión es "prolongar y mejorar la calidad de la vida 
humana a través de productos farmacéuticos, nutricionales y para el cuidado de la 
salud de la más alta calidad e innovación". 
La compañía tiene dos divisiones: una Farmacéutica y otra denominada Grupo 
para el Cuidado de la Salud, que se compone de la empresa nutricional Mead-Johnson. 
Constituye un equipo de aproximadamente 43,000 empleados en 300 sitios en más de 
100 países en el mundo. 
BMS se ha convertido en un líder global en materia de salud. Busca hacer una 
diferencia en la vida de las personas en los lugares donde tiene operaciones, 
descubriendo y desarrollando fármacos innovadores para atender necesidades no 
cubiertas por los medicamentos disponibles, así como fabricando productos 
nutricionales y para el cuidado de la salud de la más alta calidad. 
BMS invierte anualmente casi 3 mil millones de dólares en investigación y 
desarrollo de nuevos medicamentos y productos en seis centros de investigación en 
diferentes países del mundo. Es la compañía que durante 2007 obtuvo más patentes en 
la industria farmacéutica en los Estados Unidos y obtuvimos 9 aprobaciones sanitarias 
por parte de la Food & Drug Administration (FDA) en menos de cinco años, cinco de las 
cuales obtuvieron revisión prioritaria por parte de esta autoridad. 
 
Las áreas terapéuticas de enfoque para la investigación de nuevos productos son: 
 Cardiología (aterosclerosis y trombosis), 
 Trastornos metabólicos (diabetes y obesidad), 
 Sistema Nervioso Central (trastornos psiquiátricos, Alzheimer y demencia), 
 Virología (VIH-SIDA, Hepatitis B), 
 Oncología e Inmunología (Artritis y trastornos autoinmunes, así como 
trasplantes). 
En la lucha contra enfermedades graves, las terapias basadas en derivados 
proteicos de origen biológico tienen un papel cuya importancia se incrementa. Para 
reafirmar el compromiso con los pacientes y continuar descubriendo medicamentos 
“LÍMITE MICROBIANO” 
6 
 
innovadores, la compañía está redirigiendo sus esfuerzos y negocio hacia el campo de 
la biotecnología. 
 
La búsqueda estratégica de asociaciones con empresas biotecnológicas ayudarán a 
fortalecer el portafolio de productos de la compañía, mejorando la tecnología y 
manteniendo la productividad de la línea. 
 
A través de los años, Bristol-Myers Squibb y su grupo de científicos han recibido 
varias distinciones, incluyendo la "Medalla Nacional de Tecnología", el "Premio Lasker 
para la Investigación Médica y el "Premio Prix Galien". La compañía se ha distinguido 
año tras año como una de las mejores empresas para madres trabajadoras y es 
reconocida como una compañía líder en el manejo seguro de la salud y el medio 
ambiente. 
 
BMS EN MÉXICO 
A través de todas sus divisiones de negocio, BMS realiza operaciones en México 
desde 1947. A lo largo de este tiempo ha desarrollado marcas muy tradicionales y 
conocidas que gozan de la confianza de médicos y pacientes. 
 
La División Farmacéutica se destacó hasta muy recientemente por el desarrollo 
de antibióticos y de productos cardiovasculares con un amplio reconocimiento entre la 
comunidad médica mexicana. Posteriormente BMS gradualmente inició una transición 
hacia el desarrollo de productos de alta especialización, particularmente en el área 
oncológica. En esta materia, contribuye a revolucionar el arsenal médico mediante 
tratamientos de primera línea contra diversos tipos de cánceres. 
Más recientemente, BMS ha realizado un esfuerzo considerable para traer al 
país de manera simultánea a otros mercados, fármacos innovadores que representan 
una nueva alternativa de tratamiento para pacientes de enfermedades graves como 
leucemia, hepatitis B, VIH-SIDA, trastornos cardiovasculares y del sistema nervioso 
central (esquizofrenia y trastorno bipolar). La innovación de estos productos radica en 
nuevas moléculas que cuentan con mecanismos de acción novedosos y que procuran 
cuidar la calidad de vida de los pacientes. (3) 
“LÍMITE MICROBIANO” 
7 
 
La presencia de Bristol-Myers Squibb en México también ha sido importante en 
el área de medicamentos sin receta médica o autoconsumo (OTC), pues ha 
desarrollado productos que cuentan con arraigo yconfianza entre la población, tales 
como la línea Tempra®, el antipirético y analgésico más prescrito en México; el 
antiácido Sal de Uvas Picot®, con más de 75 años en el mercado y Graneodín®, para 
el alivio de las molestias en la garganta y las vías respiratorias. 
 
Por su parte, la división nutricional Mead-Johnson también ha ejercido una 
importante influencia en el país. Esta compañía cuenta con más de 100 años de historia 
abocándose a la investigación y desarrollo de productos nutricionales para la población 
infantil. Mead-Johnson es líder mundial a través de una línea completa de productos 
entre los que destacan Kindercal®, Protevit®, Enfamil®, Visoles® y Sustagen®. En 
México también manejamos los productos Choco Milk® y Cal-C-Tose®, los cuales han 
acompañado a generaciones de mexicanos en su nutrición diaria. 
 
La misión de Mead Johnson Nutricionales es convertirse en el líder mundial de 
productos nutricionales pediátricos basados en investigación científica para 
proporcionar a bebés y a niños el mejor comienzo en la vida. 
 
En México cuenta con tres plantas de producción, dos de ellas en la Ciudad de 
México (San Angel y Tlalpan) y otra ubicada en la Ciudad de Delicias, en el Estado de 
Chihuahua. En el país BMS cuenta con una fuerza laboral de más de 2,000 empleados 
que realizan operaciones a nivel nacional para garantizar la disponibilidad de nuestros 
productos en todo momento con la garantía de calidad y seguridad que la ha 
caracterizado a lo largo de su historia. (3) 
 
1.1 MISIÓN DE LA EMPRESA. 
 
 Extender y prolongar la vida humana, ofreciendo al mercado productos 
farmacéuticos y de cuidado personal de la más alta calidad, seguridad y confiabilidad. 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
8 
 
1.2 VISIÓN DE LA EMPRESA. 
 
 Que Bristol-Myers Squibb México sea la empresa más admirada y respetada de 
la Industria farmacéutica, promoviendo el alto desempeño de sus empleados, 
predicando sus valores con el ejemplo. 
 
1.3 HISTORIA DE BRISTOL MYERS SQUIBB. 
 
 Bristol-Myers co. fue fundada en el año de 1887 por dos jóvenes: William M. 
Bristol y John R. Myers en Clinton, NY. Desde su inicio el eslogan de sus fundadores 
era “No producimos medicamentos, sino productos para la salud que permitan una 
mejor forma de vida de nuestros congéneres”. 
 
 Sus productos consistían en fármacos locales y poco a poco introdujeron el 
concepto de venta sin receta en algunos medicamentos. La empresa tuvo desde su 
fundación un rápido éxito y crecimiento hasta convertirse en una corporación mundial 
con más de 1, 000 productos en más de 100 países en el mundo. 
 Mead Johnson fue fundada en 1885 por Edward Mead Johnson y su hermano 
james con el nombre de Johnson and Johnson, quienes establecieron una planta de 
productos farmacéuticos en N.Y. 
 
 En 1967 se fusiono Mead Johnson Co. con Bristol Myers Co. constituyendo 
desde entonces uno de los consorcios de productos farmacéuticos y nutricionales más 
importantes de los Estados unidos. 
 
 Los laboratorios E.R, Squibb and Sons son los más antiguos de la corporación. 
Fueron fundados por el doctor Edward R. Squibb en el año de 1856 en NY. 
 
 El 3 de octubre de 1989 se realizó la fusión de Bristol-Myers Co. con E.R. Squibb 
and Sons, constituyendo Bristol-Myers Squibb Co. (3) 
 
 La fusión crea una de las compañías más fuertes del mundo con una posición 
líder en los siguientes 4 mercados: 
“LÍMITE MICROBIANO” 
9 
 
 
 Farmacéutico. 
 Productos de consumo. 
 Nutricional. 
 Material de curación. 
 
 Con el nombre de Bristol-Myers Squibb, se constituyo la quinta empresa 
farmacéutica en el ámbito mundial y nacional. 
 
 Bristol-Myers Squibb Co. es una compañía global de origen Estadounidense, 
diversificada en el cuidado de la salud. La compañía da empleo a más de 50, 000 
personas, en el mundo y opera en más de 60 países. 
 Actualmente Bristol-Myers Squibb Co. se encuentra entre las compañías líderes 
en el descubrimiento y desarrollo de innovadores tratamientos para enfermedades 
cardiovasculares, presión alta, diabetes, SIDA, y otras enfermedades infecciosas, 
antidepresivos, y analgésicos, además de material de curación. También líderes en 
formulas pediátricas. 
 
1.4 GIRO DE LA EMPRESA 
 Farmacéutico. 
 Productos de consumo. 
 Nutricional. 
 Material de curación. 
 
 La división farmacéutica es la división más grande de Bristol-Myers Squibb. Con 
más de $200m de ventas en México y $14bn a nivel mundial, es una de las cinco 
primeras compañías farmacéuticas del mundo, con presencia en México desde los años 
40 del siglo pasado. (3) 
 
 
Cuenta con áreas de especialización: 
 Antiinfecciosos 
 Cardiovasculares 
“LÍMITE MICROBIANO” 
10 
 
 Oncológicos 
 OTC (automedicación) 
 VIH 
 SNC 
 
PRODUCTOS. 
 
Antiinfecciosos. 
Indicados en el tratamiento de infecciones en vías respiratorias, vías urinarias, 
gastrointestinales y de piel. 
 
Cardiovasculares. 
Indicados en el tratamiento de hipertensión arterial, enfermedad coronaria, reducción 
riesgo de infarto. 
 
Oncológicos. 
Indicados en el tratamiento de leucemia y cáncer de colon y recto. 
 
OTC 
Productos de venta directa al público. Indicados en el tratamiento de dolores (cabeza, 
espalda, muelas, oídos, musculares), hiperacidez gástrica, irritaciones leves de 
garganta, antiinflamatorio, etc 
 
VIH 
Indicados para el tratamiento de pacientes (adultos y niños) infectados con VIH. 
 
Sistema Nervioso Central. 
Indicado para el tratamiento de la esquizofrenia y trastorno bipolar. 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
11 
 
Director Regional Ops. De 
Calidad Latinoamérica Gerencia 
General 
Ops. Técnicas 
Gerencia QC/QA y Resp. Sanitario MJ 
Asistente 
Gerencia QA y Resp 
Sanitario BMS 
Sup. Inspecc. Sup. Docum. 
Quím. 
Proceso 
Quím.. 
Materiales Quím.. Docum. 
Gerencia Sist. de Calidad 
Coord. GMP 
Sup. Entrenamiento 
Jefatura QC 
Super. Microbiología Sup. Mét. Anal. y Estab. 
Quím. Analista Quím. Analista Quím. Analista 
 
1.5 ORGANIGRAMA 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 1. Organigrama Control de Calidad 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
12 
 
2. Proyecto: LIMITE MICROBIANO 
Farmacopea de los Estados Unidos (FEUM) Método General de Análisis <0571> 
 
2.4 INTRODUCCIÓN 
 
Durante el proceso de fabricación, almacenamiento y uso, los medicamentos son 
susceptibles de contaminarse con microorganismos como bacterias, hongos y 
levaduras, y por consiguiente se pueden deteriorar. (1) 
 
La contaminación de los productos farmacéuticos, representa un riesgo para la 
salud del usuario; este riesgo se relaciona con la severidad de la infección o 
enfermedad que los microorganismos contaminantes, patógenos u oportunistas, 
pueden producir ya que el deterioro microbiano podría conllevar a cambios en las 
características físicas y químicas que conducirían a que el producto deteriorado no sea 
apto para ser usado. (2)(4)(5) 
 
Este análisis o control microbiológico de las materias primas y de los productos 
farmacéuticos, involucra la realización de dos tipos de ensayos: 
a. Recuentos microbianos, referidos básicamente al recuento total de bacterias 
aerobias mesófilas y/o recuento de hongos y levaduras. 
b. Investigación de microorganismos patógenos objetables, llamados también 
indicadores específicos, como Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas 
aeruginosa y Staphylococcus aureus, etc. 
 
2.4.1 RECUENTO DE MICROORGANISMOS VIABLES 
 
Estimar el número de microorganismo aerobios viables, hongos y levaduras en 
las diferentes etapas de manufactura (materia prima, material de empaque, producto en 
proceso, producto terminado) emplear la técnica de recuento en placa, así como la 
identificación de microorganismos presentes en productos farmacéuticos. 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
13 
 
Se trata de conocer el número total de microorganismospresentes en el 
producto. Este número no guarda relación con el de microorganismos patógenos por lo 
que no puede usarse como índice de su presencia 
 
Dependiendo de las características del medio utilizado y de las condiciones de 
incubación los microorganismos analizados serán miembros de poblaciones diferentes. 
En general se investiga la presencia de microorganismos aerobios viables, hongos y 
levaduras puede ser de interés (1) 
 
La técnica consiste en diluir la muestra en un medio de cultivo y luego sembrar 
una pequeña cantidad de la dilución en una placa o bien mezclarla. A continuación, la 
placa debe ser incubada en las condiciones adecuadas. Una vez que se han formado 
colonias visibles, generalmente después de un día, se seleccionan para el recuento de 
colonias las placas en las que éstas están bien separadas. Las placas que tienen entre 
30 y 300 colonias ofrecen una buena relación entre la rapidez del recuento y la 
precisión en el resultado obtenido. El número de colonias de una placa, junto con la 
dilución de la muestra que se inoculó en ella, nos permite calcular la concentración de 
células presente en la muestra original 
 
La ventaja del método de recuento en placa es su gran sensibilidad. Si se utiliza un 
medio y unas condiciones de incubación adecuadas, puede detectarse incluso una 
única célula viva. Además, el recuento en placa no requiere un equipo complicado. Un 
inconveniente es que el recuento en placa es lento y tedioso y no es muy preciso, 
porque la precisión depende del recuento de un número elevado de colonias. La 
precisión aumenta con el número de colonias que se recuentan, ya que disminuye el 
error debido al muestreo. (2)(6)(7) 
 
El análisis microbiológico puede ser: 
 
 Directo, es decir, la muestra se toma de forma directa para inocular en las 
placas, al medio de cultivo antes de agregarse se le inocula un inactivante 
para neutralizar los conservadores que incluyen los productos los cuales 
impiden el crecimiento de microorganismos dando como resultado falsos 
negativos. 
“LÍMITE MICROBIANO” 
14 
 
 Diluciones, la muestra se transfiere al diluyente seleccionado el cual 
contiene el inactivante. 
 
2.4.1.1 RECUENTO DE MICROORGANISMOS MESOFÍLICOS AEROBIOS 
 
• Sólidos y Líquidos miscibles en agua: pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL 
de muestra y transferirlo a 90 mL del diluyente seleccionado. 
• Sólidos insolubles, tabletas y grageas: pulverizar la cantidad necesaria de 
muestra para obtener 10 g y transferirla a 90 mL del diluyente seleccionado. 
• Líquidos no miscibles en agua: medir exactamente 10 mL del producto, 
transferirlo a 90 mL del diluyente seleccionado adicionando el Polisorbato 20. 
• Ungüentos y ceras: pesar 10 g de la muestra, agregar la cantidad mínima 
necesaria de Polisorbato 20 para que al agitar con una barra magnética estéril se 
forme una pasta, calentar en baño de agua a una temperatura que no exceda de 
45°C y agregar gradualmente el volumen necesario para completar 90mL con el 
diluyente seleccionado. 
• Líquidos Viscosos: Para muestras viscosas que no puedan medirse con pipeta 
en la dilución 1:10, efectuar diluciones 1:50 o 1:100. (2) 
 
 
2.4.1.2 INVESTIGACIÓN DE MICROORGANISMOS OBJETABLES 
 
En función de la vía de administración del producto, se procede a la investigación de los 
microorganismos objetables señalados a continuación: (2) 
 
• Productos dérmicos, rectales y vaginales: 
Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus. 
• Productos orales: 
Escherichia coli y Salmonella sp 
• Materias primas: 
Pseudomonas sp. 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
15 
 
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; 9a edición; Vol. I 2004; México (FEUM) 
2.4.1.3 EFECTIVIDAD DE PRESERVATIVOS ANTIMICROBIANOS 
 
Una gran cantidad de productos farmacéutico se presentan de manera general como no 
estériles; sin embargo, esto no debe representar ningún riesgo para el paciente, ni 
modificación de la calidad de la preparación en las condiciones normales de uso y de 
empleo. Debido a esto, en algunos productos se incluye algún preservativo en la 
formulación, con efectos antifúngicos y antibacterianos. La presencia de estas 
sustancias hace necesario, antes de evaluar la calidad microbiológica, neutralizar la 
actividad del preservativo en el producto, para demostrar que las muestras ensayadas 
no inhiben el crecimiento de los microorganismos debido al preservativo o al principio 
activo por sí mismo. (2) 
 
Tabla 1. Agentes inactivantes 
Preservativo Agente inactivante 
Alcoholes: 
 Clorobutanol 
Polisorbato 20 u 80 al 
10% 
 Feniletil alcohol 
Polisorbato 20 u 80 al 
10% 
Ésteres: 
 
Metil p-hidroxibenzoato al 
0,18% 
Polisorbato 20 u 80 al 5% 
 
Propil p-hidroxibenzoato al 
0,02% 
Lecitina al 0,07% y 
Polisorbato 80 al 5% 
Mercuriales: 
 
Nitrato o acetato fenil 
mercúrico al 0,002% 
Lecitina al 0,5% y 
Polisorbato 80 al 3% 
Sales cuaternarias de amonio: 
 
Cloruro de benzalconio 
Lecitina al 0,5% y 
Polisorbato 80 al 3% 
Penicilina Penicilinasa 
Sulfas Ácido para-amonio 
benzoico (PABA) 
 
Por consiguiente para demostrar la neutralización efectiva del preservativo en el efecto 
inhibidor de las muestras, se realiza un ensayo adicional, preliminar considerando como 
control positivo que consiste en inocular los caldos de enriquecimiento que se utiliza en 
las técnicas descritas, con 1mL de una dilución 10-3 de un cultivo de 24 horas de cada 
“LÍMITE MICROBIANO” 
16 
 
uno de los microorganismos de prueba, añadir la cantidad apropiada de muestra y 
proceder a la recuperación. 
 
La validez de la prueba se basa en su capacidad para poner en evidencia los 
microorganismos presentes en el producto, por lo que es necesario demostrar que bajo 
las condiciones de la prueba al analizar el producto, es posible recuperar los 
microorganismos de las pruebas previamente inoculados en la muestra. 
 
Microorganismos a prueba: 
Candida albicans 
Aspergillus niger 
Escherichia coli 
Pseudomona aeruginosa 
Staphylococcus aureus 
Zigosaccharomyces riouxi 
 
Para cada producto farmacéutico se deben utilizar los microorganismos que se 
requieran identificar basándose en las referencias oficiales. (2) 
 
2.4.1.4 PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO 
 
Para cada bacteria a ser cultivada para cualquier propósito es necesario proveer 
el ambiente bioquímico y biofísico apropiado. El ambiente bioquímico (nutricional) se 
hace disponible como medio de cultivo, y dependiendo de las necesidades especiales 
de cada bacteria particular se ha desarrollado una gran variedad y tipos de medios de 
cultivo con diferentes propósitos y utilizaciones. Los medios de cultivo son empleados 
para el aislamiento y mantenimiento de cultivos puros de bacterias y también son 
utilizados para la identificación de bacterias de acuerdo a sus propiedades bioquímicas 
y fisiológicas. 
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas 
y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos 
medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su 
“LÍMITE MICROBIANO” 
17 
 
fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y 
reproducibilidad de los resultados obtenidos. (1) 
 
2.4.2 ESTABILIDADES 
 
El objetivo de los estudios de estabilidad, es proporcionar evidencia 
documentada de cómo la calidad de un fármaco o un medicamento varía con el tiempo, 
bajo la influencia de Factores ambientales como: temperatura, humedad o luz. Los 
Estudios permiten establecer las condiciones de almacenamiento, periodos de 
reanálisis y vida útil. 
 
El fabricante, tiene que diseñar y realizar los estudios de estabilidad 
correspondientes que permitan obtener una información segura y demuestren cómo 
varía su calidad con una formulación y un envase determinado durante el tiempo y bajo 
la influencia de lascondiciones de almacenamiento al que esta siendo sometido. Esta 
información le permitirá proponer un periodo de validez durante el cual puede utilizarse 
de forma segura y confiable. 
 
Sabemos que inicialmente un producto farmacéutico puede distribuirse y 
comercializarse en cualquier parte del mundo, por lo cual se hace necesario que el 
medicamento que esta siendo elaborado y consumido en alguna parte del mundo sea 
igualmente eficaz en otra. La estabilidad de los productos farmacéuticos depende 
principalmente de factores ambientales, tales como temperatura y humedad, que 
juegan un papel muy importante en los resultados que se obtienen en las propiedades 
tanto fisicoquímicas y biológicas de los productos farmacéuticos, siendo muy importante 
tomar en cuenta la forma farmacéutica y el envase primario – secundarios. (5) 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
18 
 
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; 9a edición; Vol. I 2004; México (FEUM) 
Tabla 2. Estudio de estabilidades 
Tipo de Estudio 
Condiciones de 
Almacenamiento 
Periodo 
Mínimo 
Frecuencia de 
Análisis 
Estabilidad acelerada 40°C ± 2°C/75% ± 5% HR 6 meses 0, 3 y 6 meses 
Estabilidad a condición 
intermedia 
30°C ± 2°C/65% ± 5% HR 6 meses 0, 3 y 6 meses 
Estabilidad a largo 
plazo 
25°C ± 2°C/60% ± 5% HR o 
30°C ± 2°C/65% ± 5% HR 
12 meses 0, 3, 6, 9 y 12 
meses 
 
 
 
2.4.3 ANÁLISIS DE AGUAS 
 
El sistema de agua purificada es "El corazón de la industria farmacéutica". El 
agua es un factor importante en la producción de los medicamentos, por lo tanto su 
calidad, es de suma importancia ya que es la materia prima más usada y además está 
presente en otros procesos relacionados con dicha producción. Sin embargo, el agua 
también puede actuar como vehículo de microorganismos y su carga microbiana 
dependerá del método de obtención, distribución y/o almacenamiento. Es por ello que el 
agua podría considerarse una fuente potencial de contaminación bacteriana de los 
medicamentos. La FEUM clasifica al agua para uso farmacéutico en diferentes tipos, de 
acuerdo principalmente a su forma de presentación, uso y límites microbianos 
establecidos para cada caso. (2)(9) 
 
El aseguramiento de la calidad microbiológica del agua para uso farmacéutico 
está dado en varios niveles: por un lado se requiere la validación del sistema de 
producción de agua lo que requiere monitoreo, fijar y respetar lo niveles de alerta y 
acción, y mantenimiento de la validación; además, se requiere el control del agua como 
producto final del proceso y en cada caso crítico de la producción del fármaco, cuando 
ésta es empleada como ingrediente. Los límites microbianos se establecen 
dependiendo del uso que se le da al agua. (12)(13) 
 
Existen diferentes técnicas para el control microbiológico del agua, las cuales 
pueden emplearse para el recuento de los organismos viables presentes en la muestra 
de agua. El análisis general contempla la determinación del número de 
“LÍMITE MICROBIANO” 
19 
 
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; 9a edición; Vol. I 2004; México (FEUM) 
microorganismos presentes en un volumen determinado de agua, ausencia de 
microorganismos coliformes y de microorganismos como fuente de sustancias 
pirogénicas. 
 
La elección del método de control microbiológico de la calidad del agua, se debe 
basar en los requisitos del sistema que se esta monitoreando, considerando que no hay 
ningún método que por si solo sea capaz de detectar los contaminantes microbianos 
potenciales en ese sistema. Sin embargo, el método seleccionado debe ser útil para 
determinar el número y tipo microorganismos que son significativos con respecto al 
control del sistema y al impacto del para cada sistema individual. 
 
Tabla 3. Métodos y límites para los sistemas de agua de uso farmacéutico 
Tipo de Agua Método 
Tiempo de 
incubación 
Muestra 
minima 
Límites 
Agua potable Vaciado en placa 30°C - 35°C 1 mL 500 UFC/mL 
Filtración por membrana 
Agua purificada Filtración por membrana 30°C - 35°C 100 mL 100 UFC/mL 
Agua para inyectables Filtración por membrana 30°C - 35°C 100 mL 10 UFC/mL 
 
 
2.4.3.1 ENDOTOXINA 
 
Pruebas para detectar o cuantificar las endotoxinas bacterianas que pueden estar 
presentes en nuestras muestras. Se usa un Lisado de Amebocitos de Limulus (LAL) 
obtenidos a partir de extractos de amebocitos circulantes del cangrejo herradura 
preparado y caracterizado para ser utilizado como Reactivo LAL. (2) 
 
Pirógeno: cualquier sustancia que produce elevación dela temperatura al ser 
administrado parenteralmente a humanos o animales. 
 
Endotoxina: sustancia tóxica localizada en la pared celular de las bacterias gram 
negativas. 
 
Los niveles de endotoxina pueden reducirse controlando la introducción de 
microorganismos y proliferación del sistema 
“LÍMITE MICROBIANO” 
20 
 
 
2.4.3.2 MÉTODO DE GELIFICACIÓN 
 
Nos proporciona una estimación de la concentración de endotoxinas bacterianas en 
productos. Por lo cual se requiere de establecer una curva estándar de regresión y la 
cantidad de endotoxina del material de prueba es determinada por la interpolación en la 
curva de calibración mediante el use del Lisado de Amebocitos de Limulus (LAL) 
Las técnicas de coagulación detectan o cuantifican las endotoxinas basándose en la 
coagulación del reactivo LAL en presencia de la endotoxina. La concentración de 
endotoxina necesaria para que el lisado se aglutine en condiciones estándar, es la 
sensibilidad declarada en la etiqueta del Reactivo LAL. (2) 
 
Tabla 4. Comparación del Método de Gelificación (LAL) Vs Pirógenos (conejo). 
Método de Gelificación (LAL) Pirógenos (conejo) 
Rápido (60min) Tarda (180min) 
Mayor sensibilidad Pone de manifiesto pirógenos 
que no son endotoxinas 
Menor cantidad de falsos positivos Mayor numero de falsos positivos 
Más económico Alto costo 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
21 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
2.3 JUSTIFICACIÓN 
Los productos farmacéuticos terminados, deben ser sometidos a un análisis 
microbiológico que demuestre que cumplen con ciertas especificaciones establecidas 
por los organismos oficiales, para garantizar que los productos son adecuados para el 
uso al que están destinados. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
22 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
2.1 OBJETIVO GENERAL: 
 Evaluar la calidad sanitaria de los productos farmacéuticos (materia prima, 
producto intermedio, producto terminado), mediante el recuento de 
microorganismos mesófilos aerobios, hongos y levaduras; así como, la 
investigación de microorganismos objetables en dichos productos. 
 
2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS: 
 Estimar el número de microorganismos viables presentes en diversas formas 
farmacéuticas. 
 
 Confirmar el periodo de estabilidad de los productos farmacéuticos durante el 
cual puede utilizarse de forma segura y confiable 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
23 
 
2.5 METODOLOGÍA 
 
Recuento de Microorganismos Mesofílicos Aerobios 
Método en placa para identificación de OMA: 
 
Pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL de muestra y transferir a 90 mL del 
diluyente seleccionado, inocular por duplicado 1.0 mL de cada dilución del producto en 
cajas petri estériles, añadir a cada caja de 15 mL a 20 mL del medio Agar Soya 
Tripticaseína, con movimientos rotatorios suaves, mezclar la alícuota de la muestra con 
el medio de cultivo, permitir que el medio solidifique e incubar las placas en posición 
invertida entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas, pasado el tiempo de incubación tomar 
lecturas y registrar en bitácora. (Grafico 1) 
Después del periodo de incubación, determinar la UFC de la placa 1 (UFC1) y la 
placa 2 (UFC2). Calcular el promedio de las UFC de las dos placas. 
 
Anotar el promedio de colonias por la dilución de trabajo, informarel número de 
unidades formadoras de colonia por gramo (UFC/g) del producto considerando el factor 
de dilución de la muestra. Si las placas no presentan colonias informar: menor de 10 o 
si no se utiliza dilución informar como cero UFC por gramo de producto (UFC/g). (2)(6)(7) 
 
Material 
 
Pipetas graduadas de 5 mL y 10 mL 
Espátula estéril. 
Cajas petri estériles desechables de vidrio. 
Balanza granataria. 
Cofía 
Cubrebocas 
Buffer de Fosfatos pH 7.2 ± 0.1 estéril 
Agar Soya Tripticaseína 
Inactivante (depende del producto) 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
24 
 
1 mL 
 
1 mL 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Grafico 1. Método en placa para identificación de OMA 
 
10 g o 10 mL de 
muestra y 90 mL 
del diluyente. 
 
15 mL a 20 mL 
de Agar Soya 
Tripticaseína 
 
Incubar las placas en posición invertida 
entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas. 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
25 
 
Recuento de hongos filamentosos y levaduras 
 
Pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL de muestra y transferir a 90 mL del 
diluyente seleccionado, inocular por duplicado 1.0 mL de cada dilución del producto en 
cajas petri estériles, añadir a cada caja de 15 mL a 20 mL del medio Agar Dextrosa 
Sabouraud, con movimientos rotatorios suaves, mezclar la alícuota de la muestra con el 
medio de cultivo, permitir que el medio solidifique e incubar las placas en posición 
invertida entre 20 – 25 °C de 5 a 7 días, pasado el tiempo de incubación tomar lecturas 
y registrar en bitácora. (Grafico 2) 
Después del periodo de incubación, determinar la UFC de la placa 1 (UFC1) y la 
placa 2 (UFC2). Calcular el promedio de las UFC de las dos placas. 
 
Anotar el promedio de colonias por dilución de trabajo, informar el número de 
unidades formadoras de colonia por gramo (UFC/g) del producto considerando el factor 
de dilución de la muestra. Si las placas no presentan colonias informar: menos de 10 
UFC por gramo de producto (UFC/g). (2)(7)(8) 
Material 
 
Pipetas graduadas de 5 mL y 10 mL 
Espátula estéril. 
Cajas petri estériles desechables de vidrio. 
Balanza granataria. 
Cofía 
Cubrebocas 
Buffer de Fosfatos pH 7.2 ± 0.1 estéril 
Agar Dextrosa Sabouraud 
Inactivante (depende del producto) 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
26 
 
1 mL 
 
1 mL 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Grafico 2. Recuento de hongos filamentosos y levaduras 
 
 
10 g o 10 mL de 
muestra y 90 mL 
del diluyente. 
 
15 mL a 20 mL de 
Agar Dextrosa 
Sabouraud 
 
 
Incubar las placas en posición invertida 
entre 20 – 25 °C de 5 a 7 días. 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
27 
 
Investigación de microorganismos objetables 
 
Investigación de Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus 
 
Pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL de muestra y transferir a 90 mL caldo soya 
tripticaseína, mezclar e incubar, si no hay crecimiento, la muestra cumple con los 
requisitos, si se observa crecimiento resembrar la muestra en medios selectivos: (2)(7)(11) 
 Pseudomonas aeruginosa en Agar cetrimida. 
 Staphylococcus aureus en el medio Agar Baird-Parker o Agar Vogel Johnson. 
 Si se observa crecimiento comparar la morfología colonial y microscópica. (Grafico 3) 
Material 
 
Pipetas graduadas de 5 mL y 10 mL 
Espátula estéril. 
Cajas petri estériles desechables de vidrio. 
Balanza granataria. 
Cofía 
Cubrebocas 
Caldo Soya Tripticaseína 
Agar Cetrimida 
Agar Vogel-Johnson 
Agar Baird-Parker 
Inactivante (depende del producto) 
 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
28 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Grafico 3. Investigación de Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus 
 
Si no hay crecimiento, la muestra cumple 
con los requisitos de calidad sanitarios. 
Pseudomonas aeruginosa 
10 g o 10 mL de muestra en 90 mL 
caldo soya tripticaseína. 
Mezclar e incubar 
Si se observa crecimiento resembrar la 
muestra en medios selectivos 
 
Agar Baird-Parker o 
Agar Vogel Johnson. 
Agar cetrimida. 
 
Staphylococcus aureus 
 
Incubar las placas en posición invertida entre 30 – 35 °C 
24h. Si se observa crecimiento comparar la morfología 
colonial y microscópica. 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
29 
 
Investigación de Escherichia coli y Salmonella sp 
 
Pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL de muestra y transferir a 90 mL caldo lactosa, 
e incubar entre 30 – 35 ºC de 18hh a 24 h, si se presenta crecimiento resembrar 1 mL 
de la dilución a los siguientes medios de enriquecimiento: (2)(7)(10) 
 
 Salmonella sp, resembrar caldo selenito-cisteína y tetrationato, mezclar e incubar 
de 12 a 24 h a 30 – 35 ºC, tomar una asada de cada uno de lo medios de cultivo 
anteriores y resembrar por estría cruzada en los medios: AVB, XLD, ASB, e 
incubar. 
 Escherichia coli, apartir del medio de caldo lactosa, tomar una asada y aislar 
resembrando por estría cruzada en Agar Mac Conkey, incubar 
Si se observa crecimiento comparar la morfología colonial y microscópica. (Grafico 4) 
 
Material 
Pipetas graduadas de 5 mL y 10 mL 
Espátula estéril. 
Cajas petri estériles desechables de vidrio. 
Balanza granataria. 
Cofía 
Cubrebocas 
Caldo Soya Tripticaseína 
Caldo Lactosado 
Caldo Tetrationato 
Caldo Selenito Cistina 
Agar Verde Brillante (AVB) 
Agar Sulfito Bismuto (ASB) 
Agar Xilosa-Lisina-Desoxicolato (XLD) 
Agar MacConkey 
Inactivante (depende del producto) 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
30 
 
Salmonella sp, 
 
Escherichia coli 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Grafico 4. Investigación de Escherichia coli y Salmonella sp 
 
 
 
10 g o 10 mL de muestra en 90 mL 
caldo lactosa 
Si no hay crecimiento, la muestra cumple 
con los requisitos. 
Mezclar e incubar 
Si se observa crecimiento resembrar la 
muestra en medios selectivos 
 
Caldo selenito-cisteína y caldo 
tetrationato 
 
Agar Mac Conkey, incubar 
Medios AVB, XLD, 
ASB. 
 
Incubar de 30 – 35 °C 24 h. Si se observa 
crecimiento comparar la morfología colonial y 
microscópica. 
“LÍMITE MICROBIANO” 
31 
 
Análisis de Agua 
 
Recolectar la muestra. Identificar las muestras (sitio, clave y fecha), realizar los análisis 
utilizando material y medios esterilizados y bajo condiciones de esterilidad, colocar la 
membrana en la base del filtro, asegurarse de cerrar bien el embudo, colocar 100 mL 
para filtrar, tomar la membrana y como colocarla en una placa con el medio de cultivo, 
incubar las placas en posición invertida entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas, pasado 
el tiempo de incubación tomar lecturas y registrar en bitácora. (Grafico 5) 
Dependiendo del tipo de agua se le realizara el respectivo análisis: 
 
 Agua potable: Cuenta de organismos mesofilos aerobios, coliformes totales y 
coliformes facales 
 Agua purificada: Cuenta de organismos mesofilos aerobios 
 Agua para inyectables: Cuenta de organismos mesofilos aerobios 
 
Material 
Pipetas graduadas de 1 mL 
Cajas petri estériles desechables. 
Cofía 
Cubrebocas 
Equipo de filtración estéril 
Embudos para filtración esteriles 
Agar EMB 
Agar Soya Tripticaseína 
Membrana para filtración 
Reactivo de Lal 
Baño a 37 °C 1 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
32 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Grafico 5. Análisis de Aguas Filtración al vacío 
 
 
Muestra de agua 
 
. 
Filtración por membrana 
 
. 
EMB para coliformes totales y E. coli 
 
. 
AST para OMAs 
 
. 
Incubar las placas en posición invertida 
entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas. 
 
Pasado el tiempo de incubación tomar 
lecturas y registrar en bitácora. 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
33 
 
ENDOTOXINA 
 
La prueba de LAL por el método gel-clot se realizó adicionando 0,1 mL del reactivo de 
LAL de sensitividad = 0,25 UE/mLcon 0,1 mL de la muestra. El tubo se agitó suave 
pero completamente, se incubó en un baño de agua no circulante a 37 ± 1 ºC por 60 ± 2 
min. Al final de este periodo de incubación, se retiró el tubo del baño y se invirtió en un 
ángulo de 180 ºC para realizar la lectura. 
Positivo: coagulación 
Negativo: no coagula 
El resultado deberá registrarse como < 0.25 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
34 
 
 
3.- RESULTADOS 
Tabla 5. Resultado de los productos analizados de Febrero a Septiembre 2008 
Tabletas 
Producto Lote Análisis Especificaciones Dilución Resultado 
A PT001 
Mic Mesfílicos Aerobios Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 10 UFC/ g 1:10 <10 
B PT002 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
E. coli Ausentes 1:10 Ausente 
C PT003 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
E. coli Ausentes 1:10 Ausente 
Salmonella Ausentes 1:10 Ausente 
D PT004 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
E. coli Ausentes 1:10 Ausente 
Salmonella Ausentes 1:10 Ausente 
 Soluciones orales 
E PT005 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL 1:10 <10 
E. coli Ausentes 1:10 Ausente 
Salmonella Ausentes 1:10 Ausente 
F PT006 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL 1:10 <10 
G PT007 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL Dir <10 
Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL Dir <10 
E. coli Ausentes Dir Ausente 
Polvos para suspensiones orales 
H PT008 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL Dir <10 
Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL Dir <10 
E. coli Ausentes Dir Ausente 
I PT009 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL Dir <10 
Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL Dir <10 
Jarabes 
J PT010 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL 1:10 <10 
Tabletas vaginales 
K PT011 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 500 UFC/g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 10 UFC/ g 1:10 <10 
S. aureus Ausentes 1:10 Ausente 
Pseudomonas Ausentes 1:10 Ausente 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
35 
 
Tabla 6. Resultado de materia prima analizada de Febrero a Septiembre 2008 
 
 
 
 
Producto Lote Análisis Especificaciones Dilución Resultado 
A MP011 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
E. coli Ausentes/10 g 1:10 Ausente 
Salmonella Ausentes/10 g 1:10 Ausente 
S. aureus Ausentes/10 g 1:10 Ausente 
Pseudomonas Ausentes/10 g 1:10 Ausente 
B MP012 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 10000 UFC/ g 1:10 <10 
E. coli Ausente 1:10 Ausente 
Salmonella Ausente 1:10 Ausente 
Pseudomonas Ausente 1:10 Ausente 
C MP013 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 25000 UFC/ g 1:10 <10 
Salmonella Ausente 1:10 Ausente 
D MP014 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
E. coli Ausente 1:10 Ausente 
E MP015 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10 
Salmonella Ausente 1:10 Ausente 
F MP016 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
E. coli Ausente 1:10 Ausente 
Salmonella Ausente 1:10 Ausente 
G MP017 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 50 UFC/ g 1:10 <10 
E. coli Ausentes/10 g 1:10 Ausente 
Pseudomonas Ausentes/10 g 1:10 Ausente 
H MP018 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
S. aureus Ausentes/10 g 1:10 Ausente 
Pseudomonas Ausentes/10 g 1:10 Ausente 
I MP019 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 25000 UFC/ g 1:10 <10 
Salmonella Ausente 1:10 Ausente 
J MP020 
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y levaduras Max 500 UFC/ g 1:10 <10 
E. coli Ausentes/10 g 1:10 Ausente 
Salmonella Ausentes/10 g 1:10 Ausente 
“LÍMITE MICROBIANO” 
36 
 
 
 
 
Tabla 7. Resultado de las estabilidades analizadas de Febrero a Septiembre 2008 
 
Producto Lote Condiciones Análisis Especificaciones Dilución Resultado 
A PT001 12 m, 25 °C, 60 ٪ HR 
Mic Mesofílicos 
Aerobios 
Max 100 UFC/ g 1:10 <10 
Hongos y 
levaduras 
Max 10 UFC/ g 1:10 <10 
E PT005 12 m, 25 °C, 60 ٪ HR 
Mic Mesofílicos 
Aerobios 
Max 100 UFC/mL 1:10 <10 
Hongos y 
levaduras 
Max 10 UFC/mL 1:10 <10 
E. coli Ausentes 1:10 Ausente 
Salmonella Ausentes 1:10 Ausente 
S. aureus Ausentes 1:10 Ausente 
F PT006 12 m, 25 °C, 60 ٪ HR 
Mic Mesofílicos 
Aerobios 
Max 100 UFC/mL 1:10 <10 
Hongos y 
levaduras 
Max 10 UFC/mL 1:10 <10 
H PT008 24 m, 30 °C, 65 ٪ HR 
Mic Mesofílicos 
Aerobios 
Max 100 UFC/mL Dir <10 
Hongos y 
levaduras 
Max 10 UFC/mL Dir <10 
E. coli Ausentes Dir Ausente 
I PT009 36 m, 25 °C, 60 ٪ HR 
Mic Mesofílicos 
Aerobios 
Max 100 UFC/mL Dir <10 
Hongos y 
levaduras 
Max 10 UFC/mL Dir <10 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
37 
 
 
Tabla 8. Resultado de los tipos de agua analizadas de Febrero a Septiembre 2008 
 
Agua potable 
No. 
Resultados de 
OMA (UFC/mL) 
Resultados de coliformes 
totales (UFC/100 mL) 
Resultados de coliformes 
fecales (UFC/100 mL) 
1 3 0 0 
2 5 0 0 
3 0 0 0 
4 1 0 0 
5 0 0 0 
6 0 0 0 
7 2 0 0 
8 0 0 0 
9 0 0 0 
10 0 0 0 
11 0 0 0 
12 0 0 0 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Agua purificada 
No. 
Resultados de 
OMA (UFC/mL) 
13 0 
14 0 
15 0 
16 0 
17 0 
18 0 
19 0 
20 0 
21 0 
22 0 
Agua para uso inyectable 
No. 
Resultados de 
OMA (UFC/mL) 
Endotoxina 
UE/mL 
23 0 < 0.25 
24 0 < 0.25 
25 0 < 0.25 
26 0 < 0.25 
“LÍMITE MICROBIANO” 
38 
 
3.1 ANÁLISIS DE RESULTADOS 
 
Producto terminado 
En la tabla No. 4 aparece el conteo total de microorganismos presentes en cada uno de 
los lotes analizados, además del análisis de microorganismos patógenos objetables los 
cuales deben de cumplir con los límites establecidos 
 
El conteo total de microorganismos mesófilos aerobios, así como el de hongos y 
levaduras se realiza en general para todos los productos no estériles ya que cuando el 
consumidor adquiere el producto espera que éste se encuentre en perfectas 
condiciones, en muchos procesos industriales las contaminaciones microbianas afectan 
la producción (aire, superficies, equipos, personal, materias primas, envase y empaque) 
afectando la calidad del producto; el recuento varía de acuerdo a los limites 
establecidos para cada producto. 
 
 Producto A 
Es un producto de administración oral sólida, las especificaciones nos indican que 
además de la investigación microorganismos mesófilos aerobios, hongos y levaduras, el 
cual demostró estar dentro de los límites, se realizó el estudio de estabilidad para este 
mismo considerando el tiempo cero y a 12 meses, a pesar de las condiciones de 
temperatura y humedad, este producto demostró ser inocuo para su consumo sin 
causar ningún daño en el organismo. 
 
 Producto B 
Es una forma farmacéutica sólida de administración oral, este producto se utiliza para 
tratar la alta presión sanguínea así que es importante realizar la investigación de 
microorganismos objetables. 
 
E. coli : tiene que resultar ausente en el producto, ya que su presencia puede causar 
una diarrea hemorrágica y a veces puede causar insuficiencia renal y hasta la muerte, 
además de infecciones intestinales y extra-intestinales generalmente severas, tales 
“LÍMITE MICROBIANO” 
39 
 
como infecciones del aparato excretor, meningitis, peritonitis, mastitis, septicemia y 
neumonía Gram-negativa. 
 
 Producto C 
Este producto está indicado para el tratamiento de la hipertensión, por lo cual es 
importante el análisis de microorganismos patógenos. 
 
Para el caso de E. coli el resultado durante el periodo de análisis como se puede 
observar en la tabla 4 se mantuvo ausente demostrando estar dentro de las 
especificaciones. 
 
Salmonella: tiene que resultar ausenteen el producto; la enterocolitis por Salmonella es 
uno de los tipos más comunes de intoxicación por productos farmacéuticos y ocurre 
cuando se consume productos contaminados con la bacteria Salmonella. Cualquier 
producto se puede contaminar durante la producción por el personal que lo manipula; 
su presencia puede causar salmonelosis, diarrea y dolor abdominal. 
 
 Producto D 
Es un antipsicótico atípico. Se utiliza para tratar la esquizofrenia y el trastorno bipolar, 
también conocido como maníaco-depresión. Este producto se puede utilizar en 
combinación con antidepresivos para tratar el trastorno depresivo mayor y por ser una 
forma farmacéutica de administración oral, a este producto es necesario realizar el 
análisis de E. coli y Salmonella ya que como ya se mencionó, la presencia de éstos 
pueden afectar severamente al consumidor. 
 
 Producto E 
Para este producto E. coli y Salmonella durante el período de análisis cumplen con los 
limites de especificación, además de que el principio activo mantiene sus características 
a pesar de ser sometido a ciertas condiciones de estabilidad, y como se muestra en la 
tabla 6 los análisis realizados resultaron favorables para que el producto sea utilizado 
bajo las condiciones establecidas. 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
40 
 
 Producto F 
Para este producto las especificaciones marcan el análisis de microorganismos 
mesofilos aerobios, hongos y levaduras, así como la prueba de estabilidad bajo las 
condiciones y como se observa esta dentro de los limites establecidos 
 
 Producto G 
Se administra de forma oral, y se analiza de forma directa, su indicación es en los 
pacientes con hepatitis B crónica, por lo cual es de suma importancia el análisis de 
microorganismos patógenos para los cuales se tiene como resultado la ausencia de E. 
coli y Salmonella 
 
 Producto H e I 
Estos productos son polvos para suspensiones orales se emplean para tratar 
infecciones causadas por bacterias, como se muestra en la tabla 4 estos cumplen con 
los limites de especificación, y en la tabla 6 los resultados nos indican que cumple con 
las especificaciones de estabilidad 
 
 Producto J 
Es una forma farmacéutica semisólida, la cual contiene altas concentraciones de azúcar 
que ayuda a evitar la contaminación microbiológica, sin embargo es importante el 
análisis del producto para tener la seguridad de que ha sido preparado bajo las 
condiciones de calidad sanitaria, para el período de Febrero a Septiembre el producto 
se mantuvo dentro de los limites de especificación. 
 
 Producto K 
 
Pertenece al grupo de medicamentos llamados antifúngicos, se usa para tratar las 
infecciones de la vagina por hongos, en la tabla de resultados las especificaciones no 
indican el análisis de microorganismos patógenos. 
 
 Staphyloccus aureus: el crecimiento de este microorganismo en los productos es 
acompañado por la producción de algunos compuestos extracelulares como 
“LÍMITE MICROBIANO” 
41 
 
enterotoxinas, las cuales pueden causar intoxicaciones al consumir el producto, esta 
intoxicación no es considerada como enfermedad grave, sin embargo, se han llegado a 
presentar algunas muertes en ancianos y niños, por lo tanto el resultado de 
Staphyloccus aureus es Ausente. 
 
Pseudomonas: es un patógeno oportunista en humanos, infectando el tracto urinario, el 
resultado es Ausente. 
 
El conteo total de microorganismos mesófilos aerobios se mantienen dentro de los 
límites establecidos para cada uno de los productos y los resultados de 
microorganismos objetables durante el período de Febrero a Septiembre fueron 
ausentes 
 
Materia prima 
 
Como se indica en la metodología para la MP es importante la investigación de 
microorganismos patógenos objetables (Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas 
aeruginosa y Staphylococcus aureus), debido a que la materia prima constituye una de 
las principales fuentes de contaminación, ya que si ésta contiene microorganismos 
pueden contaminar el producto del cual forman parte. 
 
Como se muestra en la tabla 5 muestra los resultados de la materia prima mas utilizada 
en el periodo de Febrero a Saptiembre demostrando que cumple con los límites 
establecidos, proporcionando la seguridad de que ésta puede ser utilizada para la 
producción de los productos farmacéuticos que así lo requieran. 
 
Análisis de agua 
 
El agua es la principal materia prima dentro de la industria farmacéutica por lo cual se 
debe de monitorear diariamente para asegurar su calidad sanitaria, dependiendo del 
tipo de agua se tiene que analizar las pruebas indicadas: 
“LÍMITE MICROBIANO” 
42 
 
 Agua potable: durante el periodo de Febrero a Septiembre se tiene un máximo de 
organismos mesófilos aerobios de 3 UFC/mL, y lo cual nos indica que cumple con 
los límites, ya que como se indica en la tabla No. 3 este tipo de agua se considera 
un limite <500 UC/mL, 
 Agua purificada: la tabla 3 indica un límite de <100 UFC/mL para lo cual se 
observa en los resultados que se encuentra dentro de los limites de 
especificación. 
 Para inyectables: se tiene un limite de <10 UFC/mL, para la cual durante el 
periodo de Febrero a Septiembre resultados indicados en la tabla No. 8 nos 
indican cumple con las especificaciones; en cuanto al análisis de endotoxina se 
mantiene < 0.25 UE/mL indicando que cumple con el grado inyectable para 
usarse en la fabricación de los productos inyectables. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
43 
 
4. Conclusiones 
 
 De acuerdo con los resultados obtenidos en los productos analizados se percibe 
que el sistema de calidad manejado en Bristol Myers Squibb es robusto por el 
cumplimiento que se tiene hacia las Buenas Prácticas de Manufacturas, Buenas 
Prácticas de Laboratorio y Buenas Prácticas de Documentación. 
 En la fabricación de los diferentes productos se debe de tener en cuenta muchos 
aspectos críticos para mantener un control microbiológico y uno de ellos es la 
revisión del contenido microbiano para los diferentes productos. 
 Se llevo acabo el control microbiológico de los productos farmacéuticos no 
estériles, manejando correctamente las técnicas adecuadas descritas en las 
metodologías oficiales. 
 Los microorganismos que contaminan a los productos farmacéuticos pueden 
llegar al producto durante el proceso de producción a través de la materia prima, 
el ambiente de producción, el equipo, el material primario y el personal que 
trabaja directamente en el proceso. 
 En base a los resultados obtenidos se muestra que el contenido de carga 
microbiana no sobrepasa los limites establecidos, por lo que el proceso esta 
controlado. 
 Los estudios de estabilidad resultan una herramienta importante para garantizar 
la calidad, seguridad y eficacia de los productos farmacéuticos demostrando que 
el producto es apto durante un periodo de tiempo determinado. 
 Una fuente de contaminación interna en la industria farmacéutica es el sistema 
de distribución de agua, sin embargo el análisis continuo de la misma nos 
proporciona información suficiente para controlar la calidad microbiológica. 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
44 
 
5.- GLOSARIO. 
 
Microorganismos viables: Organismos microscópicos como bacterias y hongos con 
capacidad de reproducción y dan lugar a la formación de colonias. 
Prueba de esterilidad: Determinación de la ausencia de microorganismos viables en la 
muestra. 
Prueba de límite microbiano: Es el recuento de los microorganismos viables 
presentes en una muestra no estéril, para determinar si se encuentra dentro de los 
límites establecidos. 
Prueba de promoción del crecimiento: Determina la capacidad del medio de cultivo 
para permitir el crecimiento de determinados microorganismos viables. 
Estabilidad. Es la capacidad de un fármaco o un medicamento de permanecer dentro 
de las especificaciones de calidad establecidas,en el envase que lo contiene durante 
su periodo de vida útil. 
Estudios de estabilidad. Pruebas que se efectúan a un fármaco o a un medicamento 
por un tiempo determinado, bajo la influencia de temperatura, humedad o luz en el 
envase que lo contiene. 
Estudios de estabilidad acelerada. Estudios diseñados bajo condiciones exageradas 
de almacenamiento para incrementar la velocidad de degradación química, biológica o 
los cambios físicos de un fármaco o de un medicamento. 
Estudios de estabilidad a largo plazo. Estudios diseñados bajo condiciones de 
almacenamiento controladas para evaluar las características físicas, químicas, 
biológicas o microbiológicas del fármaco o del medicamento durante el periodo de 
reanálisis o de caducidad, respectivamente. 
Fármaco. Toda sustancia natural, sintética o biotecnológica que tenga alguna actividad 
farmacológica y que se identifique por sus propiedades físicas, químicas o acciones 
biológicas, que no se presente en forma farmacéutica y que reúna condiciones para ser 
empleada como medicamento o ingrediente de un medicamento. 
Forma Farmacéutica. Es la mezcla de uno o más fármacos con o sin aditivos, que 
permita su administración. 
Calidad sanitaria: Asegura productos aptos e “inocuos” para el consumo humano. La 
inocuidad se aplica a productos alimenticios, cosméticos y farmacéuticos, los cuales 
deben cumplir con sus funciones específicas para los cuales fueron creados, libres de 
contaminación de cualquier tipo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
45 
 
6.- Anexos 
ANEXO 1 
 
“Microorganismos patógenos” 
 
Salmonella: es un bacilo Gram negativo que se comporta como patógeno intracelular 
facultativo. Su hábitat es el aparato gastrointestinal de los animales y el hombre, nunca 
como microbiota normal. Se encuentra asociada a problemas gastrointestinales, 
septicémicos y aborto gracias a su capacidad de invasión celular y sobrevivencia 
intrafagocítica. 
Escherichia coli: es uno de los muchos grupos de bacterias que viven en los intestinos 
de los humanos sanos y en la mayoría de los animales de sangre caliente. Esta 
bacteria ayuda a mantener el equilibrio de la flora intestinal normal (flora bacteriana) 
contra las bacterias nocivas y sintetiza o produce algunas vitaminas. 
Staphylococcus aureus, un microorganismo patógeno presente en piel de animales y 
personas, además de en sus fosas nasales y gargantas. Es un microorganismo muy 
resistente a las condiciones ambientales y extremadamente difíciles de erradicar. Pese 
a que no es esporulado (formas de resistencia elaboradas de forma natural por algunos 
microorganismos), soporta bien condiciones extremas aunque se inactiva a temperatura 
de congelación 
Pseudomona sp: es un bacilo gram negativo, oxidasa positivo, aeróbico estricto 
aunque en algunos casos pueden utilizar el nitrato como aceptor de electrones. móvil, 
que pertenece a la familia Pseudomonadaceae. Es relativamente ubicua y comúnmente 
se la encuentra en el polvo, el agua, las plantas y verduras, medio ambiente marino y 
animales. 
Puede crecer bien en diferentes medios y soporta gran variedad de condiciones físicas. 
Si bien su predilección son los ambientes húmedos la P. aeruginosa es primariamente 
un patógeno hospitalario y causa enfermedad en forma frecuente a huéspedes 
normales. 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
46 
 
ANEXO 2 
“Características de medios de cultivos” 
 
Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus 
constituyentes en: 
 Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen 
animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición de 
minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes ni 
las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos. 
 Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición 
química definida cualitativamente y cuantitativamente. Generalmente se usan en 
trabajos de investigación. 
De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en: 
 Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento de 
un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número de 
microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustancias 
inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los que se 
quieren cultivar. 
 Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser 
medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos 
específicos. 
 Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos 
derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen 
ningún tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar 
características fisiológicas de los microorganismos. 
Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos: 
 Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o 
proveedores que suministren productos de calidad. 
 Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y 
fisicoquímica adecuada. 
 Utilizar materiales de vidrio bien lavado y enjuagado con agua destilada o 
desmineralizada. 
 Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización. 
“LÍMITE MICROBIANO” 
47 
 
 Nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante. 
 
Agar Baird Parker: Medio de alta especificidad diagnóstica, selectivo y diferencial para 
el aislamiento y recuento de estafilococos coagulasa positiva en materiales de 
importancia sanitaria. 
 
En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el extracto de carne 
constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el extracto de levadura aporta vitaminas 
del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos. 
Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de potasio y al cloruro 
de litio, los cuales inhiben el desarrollo de la flora acompañante. La yema de huevo 
permite demostrar la actividad lecitinásica. 
 
Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de 
color grisáceo-negro, y dan reacción sobre la yema de huevo produciendo alrededor de 
la colonia una zona opaca que a menudo tiene una zona clara mas externa. 
Se pueden encontrar cepas no lipolíticas, que presentan igual características de 
colonias pero sin la zona opaca y clara. 
 
Agar Cetrimida: Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas 
aeruginosa y de otras especies del género. 
 
La fórmula de este medio está desarrollada para favorecer la selección de P. 
aeruginosa y estimular la formación de pigmentos. Es éste un medio muy semejante al 
King A, en el cual el cloruro de magnesio y el sulfato de potasio promueven la formación 
de piocianina, pioverdina y piomelanina de P. aeruginosa. La cetrimida es un detergente 
catiónico que actúa como agente inhibidor, libera el nitrógeno y el fósforo de las células 
de casi toda la flora acompañante, aunque inhibe también algunas especies de 
Pseudomonas. 
 
Agar Sabouraud: Medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de 
hongos patógenos y saprófitos. También es útil para el cultivo de levaduras. 
“LÍMITE MICROBIANO” 
48 
 
 
Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos, 
particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel, pelo, etc.). En el medio de 
cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para el desarrollo de 
microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH 
ácido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. Además, al medio 
de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento. 
 
Agar Mac Conkey: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos 
de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permitediferenciar bacterias que 
utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de 
la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo. 
 
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el 
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de 
sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de 
gran parte de la flora Gram positiva. 
 
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce 
un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la 
precipitación de las sales biliares. 
 
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras. 
 
Agar Sulfito de Bismuto: El medio de cultivo agar sulfito de bismuto, es un medio 
selectivo recomendado para el aislamiento y diferenciación de Salmonella typhi y otras 
Salmonellas a partir de diversas muestras. 
 
La presencia de sulfito de bismuto inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y 
de la mayoría de las bacterias Gram negativas. La producción de sulfuro de hidrógeno 
se manifiesta en el centro de la colonia por un precipitado negro y un halo negro 
“LÍMITE MICROBIANO” 
49 
 
grisáceo con brillo metálico por la reacción de los iones bismuto con el sulfuro de 
hidrogeno 
 
Agar Soya Tripticaseína: es un medio utilizado para promover el crecimiento de 
microorganismos fastidiosos y adicionado de sangre para observa reacciones 
hemolíticas. 
 
Verde Brillante Agar: Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento 
de Salmonella spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a partir de muestras clínicas, 
alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria. No se recomienda para el 
aislamiento de Shigella spp. 
 
Es de un valor excepcional cuando se investiga un gran número de muestras de heces 
o alimentos, por su alta capacidad de diferenciación de las colonias sospechosas. 
En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente 
de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de 
carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando 
hay producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, el cloruro de sodio 
mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo. 
 
Agar Vogel Johnson: Medio utilizado para la rápida detección de estafilococos 
coagulasa positivo fermentadores de manitol, a partir de alimentos y otros materiales de 
importancia sanitaria y clínica. En el medio de cultivo, la tripteína y el extracto de 
levadura, aportan los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. El 
manitol es el hidrato de carbono fermentable. El telurito, el cloruro de litio y la alta 
concentración de glicina, son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de la flora 
acompañante y el rojo fenol es el indicador de pH. 
 
Los estafilococos coagulasa positivo, fermentan el manitol, produciendo la acidificación 
del medio y el viraje del indicador de pH al color amarillo, y también reducen el telurito a 
teluro. Debido a esto, se observan como colonias de color negro, rodeadas de una zona 
amarilla. 
“LÍMITE MICROBIANO” 
50 
 
 
Lactosado Caldo: Se recomienda como prueba presuntiva para investigar la presencia 
de bacterias del grupo coliforme en agua, productos lácteos, etc. 
Actualmente también está indicado para el preenriquecimiento no selectivo en la 
búsqueda de Salmonella sp. 
 
Es un medio rico en nutrientes,y no contiene inhibidores del crecimiento bacteriano. 
El extracto de carne y la peptona, son la fuente de carbono y nitrógeno, mientras que la 
lactosa es el hidrato de carbono. Por la fermentación de la lactosa, se produce ácido y 
gas, y éste último se demuestra al usar las campanas Durham. 
 
Se le usa también como medio de preenriquecimiento, porque permite recuperar células 
injuriadas, diluye sustancias tóxicas o inhibitorias y favorece el desarrollo de Salmonella 
con respecto a otras bacterias 
 
Caldo Selenito Cistina: Medio utilizado para el enriquecimiento selectivo de 
Salmonella sp. a partir de muestras de materiales de importancia sanitaria. 
 
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo 
bacteriano. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el selenito de sodio inhibe 
flora Gram positiva y la mayoría de la flora entérica excepto Salmonella sp. La l-cistina 
es el agente reductor y fue propuesta por la FDA para el aislamiento de Salmonella en 
productos alimenticios incrementando la recuperación por reducción de la toxicidad del 
selenito. 
 
Caldo Digerido de Caseína-Soya-Polisorbato 20: Medio de dilución, recomendado 
por USP para realizar el control higiénico de productos no obligatoriamente estériles. 
 
Este medio de dilución, tiene la capacidad para neutralizar desinfectantes, debido a la 
presencia de lecitina de soja, que neutraliza compuestos de amonio cuaternario. 
El agregado de polisorbato 20 (tween 20), es útil para neutralizar compuestos tales 
“LÍMITE MICROBIANO” 
51 
 
como fenol, formalina, hexaclorofeno, y la combinación de la lecitina con el Tween, 
permiten neutralizar etanol. 
 
Caldo Tetrationato: Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de 
Salmonella spp. a partir de materiales de importancia sanitaria 
 
El medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios para el 
desarrollo bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y absorbe metabolitos 
tóxicos. La selectividad está dada por la presencia de tiosulfato de sodio, tetrationato 
(generado en el medio por el agregado de la solución iodo-iodurada) y sales biliares, los 
cuales permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato 
reductasa, como ser la Salmonella spp. e inhiben el desarrollo de la flora acompañante. 
 
Medio Levine (eosina azul de metileno): Sus componentes fundamentales son la 
eosina y el azul de metileno. Se utiliza para diferenciar las enterobacterias coliformes 
(lactosa +) y las no coliformes (lactosa – colonias transparentes Salmonella y Shigella) 
 
Medio Agar XLD (agar xilosa, lisina.dexicolato): Los compuestos principales son la L-
lisina, el rojo fenol, el tiosulfato sódico, el citrato de hierro y azúcares (lactosa, glucosa y 
xilosa). Sirve para aislar enterobacterias patógenas. Para hacer la lectura hay que 
seguir los siguientes criterios: 
 
 La descarboxilación de la lisina: colonias rojas característico de Shigella 
 
 Fermentación de azúcares: Colonias amarillas tipos de Escherichia, Citrobacter, 
Serratia, Proteus, Enterobacter y Kelbsiela. 
 
 Producción de SH2 (debido a tiosulfato sódico y citrato férrico): colonias negras 
típico en Salmonella SH2 +, Arizona, Proteus y Edwardsiella. 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
52 
 
 
 
ANEXO 3 
 
“Tablas de características para la identificación de microorganismos patógenos” 
 
 
Tabla 9. Características morfológicas de Staphylococcus aureus sobre medios de cultivos 
selectivos-diferenciales. 
 
 
Medio de cultivo Morfología colonial 
Morfología microscópica y 
reacción al Gram 
Imagen 
Agar Vogel Johnson 
Colonias negras 
rodeadas de zona 
amarilla 
Cocos Gram positivos 
agrupados en racimos. 
 
Agar Baird Parrker 
Colonias negras 
lustrosas brillantes 
rodeadas de sonas 
claras de 2 a 5 mm 
Cocos Gram positivos 
agrupados en racimos. 
 
 
 
 
Tabla 10. Características morfológicas de Pseudomonas aeruginosa sobre medios de cultivos 
selectivos-diferenciales. 
 
 
Medio de cultivo Morfología colonial 
Morfología microscópica y 
reacción al Gram 
Imagen 
Agar Cetrimida Colonias verdosas Bacilos Gram negativos 
 
 
 
 
“LÍMITE MICROBIANO” 
53 
 
 
Tabla 11. Características morfológicas de