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Validação de Método Analítico para Nimesulida

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
 
 
“VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALITICO PARA NIMESULIDA POR 
ESPECTROFOTOMETRIA U.V” 
 
 
INFORME TÉCNICO DE LA OPCION CURRICULAR EN LA MODALIDAD DE: 
 
ESTANCIA INDUSTRIAL 
 
 
 
QUE PARA OBTENER EL TITULO DE 
INGENIERO FARMACEUTICO 
 
 
PRESENTA: 
 
ALONSO CHÁVEZ GUADALUPE 
 
 
 
 
 
ASESORES: 
 
EXTERNO: QFB BEATRIZ GONZÁLEZ SÁNCHEZ 
INTERNO: QFB MA. ESTHER BAUTIZTA R 
 
 
 
 
 
México, D.F. a 19 mayo de 2008. 
 
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INDICE 
 
I. HISTORIA DE LA EMPRESA …………………………………….2 
2. SIMBOLOS Y ABREVIATURAS …………………………………….7 
3. INTRODUCCION …………………………………….8 
3.1 Ficha técnica de Nimesulida …………………………………….8 
3.2 Validación de Métodos Analíticos ……………………………………10 
3.3 Clasificación de Métodos 
Analíticos 
……………………………………11 
3.4 Parámetros a Evaluar ……………………………………12 
3.5 Informe del proceso de 
Validación 
……………………………………17 
4. JUSTIFICACION ……………………………………18 
5. OBJETIVOS ……………………………………19 
6. METODOLOGIA ……………………………………20 
6.1 Método Potenciométrico ……………………………………20 
6.2 Método Espectrofotometrico ……………………………………22 
7. RESULTADOS ……………………………………26 
7.1 Método Potenciométrico ……………………………………26 
7.2 Método Espectrofotometrico ……………………………………36 
8. COMPARACION DE METODOS ……………………………………50 
9. ANALISIS DE RESULTADOS ……………………………………53 
10. CONCLUSIONES ……………………………………54 
11. BIBLIOGRAFIA ……………………………………55 
12. ANEXOS ……………………………………56 
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I. HISTORIA DE LA EMPRESA. 
 
 
 
El 7 de enero de 1953 nace Mavi Farmacéutica en la ciudad de México, con el objeto de 
fabricar medicamentos de uso humano, de calidad reconocida y a precio accesible para 
la mayoría, buscando la formación integral y el bienestar de sus empleados. 
 
Es fundada por la familia Alonso Vilatela, es una empresa mexicana financiada en su 
totalidad por capital nacional. Después de 8 exitoso años, en 1961 los socios fundan una 
segunda empresa llamada Laboratorios Euromex, con el objetivo de proveer un mayor 
numero de especialidades farmacéuticas. En le año de 1980, se forma un grupo 
industrial Farmex como empresa controladora de laboratorios Euromex y Mavi 
Farmacéutica. Ese mismo año se adquiere la empresa Corporación Farmacéutica. 
 
De esta manera, Grupo Industrial Farmex se convierte en un conglomerado fuerte y 
solidó. Buscando una mayor integración, en 1984 crea Química Fina Farmex, empresa 
productora de principios activos farmacéuticos. Estas materias primas se comercializan 
tanto en el mercado nacional como internacional. 
 
Atendiendo los siguientes sectores. 
 
* Línea comercial (Mavi farmacéutica, laboratorio Euromex) 
 
* Sector Salud (Mavi farmacéutica, laboratorio Euromex) 
 
* Línea fármaco química (química fina Farmex) 
 
 
 
 
 
 
 
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I:I LOCALIZACIÓN DE LA PLANTA: 
 
 
 
 
 
Dirección: 
 
Calle Triangulo esquina con Osa Menor, Colonia Prado Churubusco, S/N, CP 04370, 
Delegación Coyoacán. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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I.2 MISION: 
 
Desarrollar, producir y comercializar medicamentos para atender la salud humana, de 
calidad reconocida y a precio accesible, impulsando la formación integral y el bienestar 
de sus empleados y generando una retribución justa para los accionistas que asegure la 
permanencia y Crecimiento de la organización. 
 
 
 
I.3 POLITICA DE CALIDAD: 
 
 
En nuestra organización la calidad se demuestra: 
 
* Desarrollando y produciendo medicamentos conforme a lo que dispone la Ley 
General de Salud. 
 
* Desempeñando actividades dando cumplimiento a La NOM 059 y la ISO 
9001:2000 
 
* Esforzándose continuamente en mejora de procesos, y el ambiente de trabajo, 
la comunicación con clientes, proveedores y empleados. 
 
* Verificando la satisfacción de nuestros clientes, la capacidad de proveedores y 
eficacia de los procesos. 
 
 
 
 
 
 
 
 
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I.4 LINEA DE PRODUCTOS GENERALES DE LA EMPRESA: 
 
1. ANALGESICOS 
 
2. ANTIBIOTICOS 
 
3. ANTIMICROBIANOS 
 
LINEA DE PRODUCTOS ESPECIFICOS DE LA EMPRESA. 
 
 
NOMBRE COMERCIAL SUSTANCIA ACTIVA PRESENTACIÓN 
ACITAB Acido acetil salicílico Caja c/20 tabletas 
AMIKAVI Amikacina Caja c/ 1 ampolleta 
ARTROBEN CREMA Bencidamina Caja c/1 tubo de 60 g 
ARTROBEN SPRAY Bencidamina Caja c/frasco de 30 mL 
AXTIN Fluoxetina Caja c/14 cápsulas 
BACTOKINA Lincomicina Caja c/ 6 ampolletas 
BIOTAxIL Amoxicilina Caja c/ frasco 75 mL 
CATONA Captopril Caja c/30 tabletas 
DALATINA Clindamicina Caja c/1 tubo de 30 g 
DISTENTAL Bromuro de pinaverio Caja c/14 tabletas 
EUFLUXIN Ciprofloxacino Caja c/12 comprimidos 
EURIFAM Rifampicina Caja c/16 cápsulas 
EUROLOL Metoprolol Caja c/20 tabletas 
FENAGEL Diclofenaco dietil amonio Caja c/1 tubo 60g 
FLUOSEP Ofloxacino Caja c/10 grageas 
FLUXIBIT Loratadina/ambroxol Caja c/1 frasco de 120 mL 
INFLANOX Naproxeno Caja c/12 tabletas 
ITAMOL Subsalicilato de bismuto Caja c/24 tabletas 
masticables 
LESACLOR SUSPENSION Aciclovir Caja c/ 1 frasco 125 mL 
LESIDEN Nimesulida Caja c/ 1 frasco 60 mL 
MACROFURIN Nitrofurantoína Caja c/40 cápsulas 
MAVICAM Meloxicam Caja c/ 14 tabletas 
MAVIDOL Ketorolaco Caja c/10 tabletas 
 
 
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ORTOCOL FORTE DICLOFENACO/COMPLEJOB CAJA C/30 GRAGEAS 
SINFRAC Alendronato sódico Caja c/30 tabletas 
TAXENAN Naproxeno/Paracetamol Caja c/10 tabletas 
UREZOL Fenazopiridina Caja c/20 tabletas 
VIKROL Claritromicina Caja c/10 tabletas 
XINAMIN Complejo B Caja c/30 tabletas 
 
 
GÉNERICOS INTERCAMBIABLES 
 
 
SUSTANCIA ACTIVA PRESENTACION 
CINARIZINA Caja c/60 tabletas 
CLARITROMICINA Caja c/10 tabletas 
CLINDAMICINA Caja c/ 16 capsulas 
DICLOFENACO Caja c/ 2 ampolletas 
DIFENHIDRAMINA Caja c/ 1 frasco 
FLUCONAZOL Caja c/ frasco 
HIDRALAZINA Caja c/5 ampolletas 
KETAMINA Caja c/ 1 frasco 
KETOROLACO Caja c/ 3 ampolletas 
LORATADINA Caja c/ 1 frasco 
MICONAZOL Caja c/ 1 tubo 
ONDANSETRON Caja c/ 3 ampolletas 
TERBUTALNA Caja c/ 3 ampolletas 
ENALAPRIL Caja c/10 tabletas 
FENAZOPIRIDINA Caja c/ 20 tabletas 
FENOBARBITAL Caja c/1 frasco 
PEROXIDO DE BENZOILO Caja c/ 1 frasco 
RIFAMPICINA Caja c/ 1 frasco 
SULFATO FERROSO Caja c/ 1 frasco 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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2. SIMBOLOS Y ABREVIATURAS: 
 
Cuando se haga referencia a los siguientes símbolos o abreviaturas se entera: 
 
S ó σ Desviación estándar 
S2 Varianza 
S12 Varianza del método 1 
S22 Varianza del método 2 
F0.025,n2-1,n1-1 Valor de la distribución F de fisher asociado a una 
confianza del 2.5% y agrados de libertad 
establecidos. 
F0.975,n2-1,n1-1 Valor de la distribución F de fisher asociado a una 
confianza del 97.5% y agrados de libertad 
establecidos. 
SB2 Varianza del método 2 
SA2 Varianza del método 1 
b Pendiente 
r2 Coeficiente de determinación 
CV Coeficiente de variación 
LD Limite de detección 
LC Limite de cuantificación 
x Media aritmética de x 
y Media aritméticade y 
n Numero de mediciones o recobros o blancos o 
muestras o determinaciones. 
SRf Sustancia de referencia 
σ22/σ12 Razón de varianzas poblacionales 
 
 
 
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3 INTRODUCCION: 
3.1 FICHA TECNICA DE NIMESULIDA 
Nimesulida es una molécula derivada de la sulfonanilida con acción antiinflamatoria, 
antipirética y analgésica que pertenece al grupo de los antiinflamatorios no esteroideos. 
ESTRUCTURA 
 
Nimesulida difiere de otros AINES por poseer una sulfonanilida, como su grupo acídico 
funcional, que le dota de un perfil farmacológico único. Nimesulida inhibe la 
prostaglandina sintetasa, también conocida como ciclooxigenasa, que modifica los 
límites de producción de prostaglandina. Su potencia inhibitoria de la ciclooxigenasa se 
considera intermedia cuando se compara con otros AINES. Se ha demostrado 
recientemente que la ciclooxigenasa existe en dos formas isomorfas en el organismo, 
denominadas COX-1 y COX-2. La COX-1 es una enzima constitutiva que produce 
prostaglandinas que son esenciales para el mantenimiento de la homeostasis vascular y 
las funciones gástricas y renales normales. La COX-2 es una enzima inducible que es 
responsable de la liberación de prostaglandinas durante la inflamación. Según esto, 
parece positivo que la actividad antiinflamatoria positiva de los AINES se puede atribuir 
a su capacidad para inhibir la COX-2, mientras que las reacciones adversas asociadas se 
deben a su capacidad para inhibir la COX-1. 
Nimesulida posee un efecto "scavenger" que interfiere con la producción de radicales 
libres por los leucocitos sin inhibir la quimiotaxis y la fagocitosis. Los productos de los 
radicales libres directa e indirectamente lesionan los tejidos del huésped y contribuyen 
al mantenimiento del proceso inflamatorio. 
Nimesulida protege la lesión tisular que ocurre durante la inflamación y "cortacircuita" 
el proceso inflamatorio. De esta manera, ejerce un potente efecto antiinflamatorio in 
vivo. 
 
 
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Propiedades farmacocinéticas 
Nimesulida es bien absorbido por vía oral y alcanza la concentración plasmática máxima 
en 1-3 horas; tiene una semivida de 2-3 horas y una duración de acción de 6-8 h; por vía 
rectal el pico plasmático se alcanza en aproximadamente 4 h con un tiempo de 
eliminación de alrededor de 5 horas. 
La administración diaria de 1 comprimido, cada 12 horas, con 100 mg de Nimesulida, 
que es la dosis usual en las patologías con un componente inflamatorio, logra el estado 
de equilibrio en 24-36 horas. La administración reiterada no da lugar a fenómenos de 
acumulación. 
Nimesulida se une ampliamente (99%) a las proteínas plasmáticas y posee un volumen de 
distribución aparente estimado de 0,19 a 0,35 l/kg tras la administración oral. 
Nimesulida se metaboliza en gran medida (1 a 3 % de la dosis se excreta invariable en la 
orina) en varios metabolitos que se excretan principalmente en la orina (aprox. 70%) o 
en heces (aprox. 20%). El fármaco es casi completamente biotransformado en 4-hidroxi-
nimesulida en ambas formas libre y conjugada, metabolito que parece contribuir a la 
actividad antiinflamatoria del compuesto. 
Nimesulida se excreta principalmente por vía urinaria (80%) y en menor cuantía por 
heces (20%). 
Indicaciones Terapéuticas 
Tratamiento sintomático de la artropatía degenerativa (artrosis). 
Tratamiento de procesos inflamatorios y dolorosos agudos de diversas etiologías tales 
como postoperatorio y traumatismos musculoesqueléticos. 
Dismenorrea primaria y como antipirético. 
 
 
 
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3.2 VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALITICOS: 
En la industria farmacéutica siempre actúa buscando la calidad de los medicamentos y 
de los procesos de fabricación, por lo que es plenamente importante garantizar que el 
medicamento es seguro, eficaz y eso se garantiza mediante la validación. 
Es por eso que los métodos analíticos deben cumplir con las exigencias de: 
La Dirección general de medicamentos insumos y drogas (Digemid) 
Reglamento de Insumos para la Salud, publicado en el diario Oficial el 4 de Febrero de 
1988 referente a los establecimientos que destinen la fabricación de insumos 
(medicamentos, fármacos, materias primas y aditivos). 
La Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA-1993 Buenas Prácticas de Manufactura de 
productos farmacéuticos, que establece los siguientes puntos: 
1. NUMERAL DE LA NORMA (5.6.3): Que se lleven acabo estudios de validación de 
los procesos de fabricación y de los sistemas involucrados. 
2. NUMERAL DE LA NORMA (9.11.3): Los Métodos Analíticos deben ser validados, de 
acuerdo con lo establecido en el apartado 9.12 “Control de Laboratorio 
Analítico” 
3. NUMERAL DE LA NORMA (9.12.3): Se debe contar con métodos de análisis 
validados para producto a granel, terminado y materia prima en caso de no 
aparecer en cualquier farmacopea internacional ni en la FEUM. 
Norma Oficial Mexicana NOM-164-SSA1-1998 Buenas Prácticas de Fabricación para 
Fármacos que establece: 
1. NUMERAL DE LA NORMA (16.1): Los controles de laboratorio e inspecciones deben 
apoyarse en normas, PNO´s o manuales que contengan las especificaciones para 
garantizar la confiabilidad de sus resultados. 
2. NUMERAL DE LA NORMA (16.1.5): Validación de Métodos Analíticos utilizados por 
la empresa, NO farmacopeicos o farmacopeicos que tengan desviaciones frente a 
la farmacopea de referencia. 
 
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Buenas Prácticas de Laboratorio. 
Un laboratorio de análisis debe tener como principal propósito la producción de datos 
analíticos de alta calidad por medio de uso d mediciones analiticas que sean precisas, 
confiables y adecuadas para tal fin. Esto puede alcanzarse si se cuenta con un sistema 
planificado y documentado de la calidad de las actividades, para esto el laboratorio 
necesitara operar bajo un sistema de garantía de calidad que incluya una extensa 
documentación de sus actividades. 
La validación de un método analítico, garantiza la calidad del medicamento, así mismo 
es necesaria por que: 
1. proporciona alto grado de confianza, seguridad den método y calidad en los 
resultados. 
2. permite el conocimiento profundo del método, si como las características. 
3. este conocimiento y seguridad ayuda a la disminución de fallas y repeticiones, 
por que lleva al ahorro de costos asociados y a cumplir con los tiempos previstos 
de análisis. 
3.3 CLASIFICACION DE MÉTODOS ANALITICOS: 
1.- En función de su estado Regulatorio: 
 * Métodos farmacopeicos. 
 * Métodos No farmacopeicos. 
2.- En función de su aplicación: 
 * Métodos para producto a granel. 
 * Métodos para producto terminado. 
 * Métodos para Materia Prima. 
 * Métodos indicadores de Estabilidad. 
3.- En función de la Naturaleza de la respuesta analítica: 
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 * Métodos físico-químicos. 
 * Métodos Biológicos. 
4.- En función de propósito analítico: 
 * Métodos para cuantificar el analito. 
 * Métodos para establecer la presencia del analito a un límite. 
 * Métodos para identificar el analito. 
5.- En función de la naturaleza del sistema de medición: 
* Métodos en los cuales el instrumento de medición de la respuesta analítica, 
permite medir el ruido (cromatogramas, espectrofotómetro). 
 *Métodos en los cuales el instrumento de medición de la respuesta analítica, no 
permite medir el ruido (potenciómetros, buretas, etc.). 
3.4 LAS CARACTERÍSTICAS DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO SE EXPRESA EN 
FUNCIÓN DE LOS SIGUIENTES PARÁMETROS: 
Selectividad 
Capacidad de un método analítico para determinar únicamente los componentes que se 
pretenden medir. 
Sensibilidad 
Es la pendiente de la recta de calibración que se obtiene cuando el resultado (o señal) 
de la medida o una función de la misma se representa frente a la cantidad o 
concentración del analito. 
Linealidad del sistema: 
Criterios de aceptación: 
El valor del coeficiente de determinación “r2” deberá ser ≥ 0.98 
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El intervalo de confianza para la pendiente debe incluir la unidad 
El coeficiente de variación CV deberá ser: 
≤ 3% Si es químico o espectrofotométrico. 
≤ 2% Si es volumétrico o cromatografico. 
≤ 5% Si es microbiológico 
El porcentaje de recobro deberá ser: 
98-102% Si el método es cromatografico, volumétrico. 
97-103% Si el método es químico o espectrofotométrico. 
95-105% Si el método es microbiológico. 
Linealidad del método analítico: 
Es su capacidad para demostrar que los resultados de la prueba son directamente 
proporcionales a ala concentración del analito dentro de un rango dado. Se clasifica en 
dos: 
1. Cuando se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar un 
placebo analítico. 
2. No se conocen los componentes de la muestra. 
Criterios de aceptación: 
El valor del coeficiente de determinación “r2” deberá ser ≥ 0.98 
El intervalo de confianza para la pendiente debe incluir la unidad 
El coeficiente de variación CV deberá ser: 
≤ 3% Si es químico o espectrofotométrico. 
≤ 2% Si es volumétrico o cromatografico. 
≤ 5% Si es microbiológico 
El porcentaje de recobro deberá ser: 
98-102% Si el método es cromatografico, volumétrico. 
97-103% Si el método es químico o espectrofotométrico. 
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95-105% Si el método es microbiológico. 
Linealidad en el intervalo de aplicación 
La pendiente de la recta de calibración debe ser constante en todo el intervalo de 
aplicación del procedimiento de medida. El límite inferior de dicho intervalo vendrá 
determinado por el valor obtenido para el límite de cuantificación del método. El límite 
superior del intervalo estará condicionado, en general, por la pérdida de linealidad en 
la curva de calibración. 
Exactitud: 
Es la proximidad entre los resultados obtenidos por este método y el valor real. La 
exactitud del método analítico se debe establecerse a lo largo de todo un rango. 
Criterios de aceptación: 
El intervalo de confianza para la diferencia de las dos medias poblacionales del 
porcentaje de recobro, debe incluir el valor de cero. Cualquier otro criterio debe ser 
justificado. 
Rango: 
Es el intervalo entre los niveles superior e inferior, en el que se ha demostrado un nivel 
adecuado de precisión, exactitud y linealidad del método tal cual esta escrito. 
Repetibilidad: 
a. Cualitativamente 
Es el grado de concordancia entre resultados sucesivos obtenidos con el mismo 
método sobre una materia idéntica sometida al ensayo, en las mismas 
condiciones (siempre el mismo operador, igual aparato, igual laboratorio y en 
pequeños intervalos de tiempo). 
b. Cuantitativamente 
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Es el valor por debajo del cual está situado, con una probabilidad especificada, 
el valor absoluto de la diferencia entre dos resultados individuales obtenidos en 
las condiciones anteriormente expuestas. 
En ausencia de otra indicación se entenderá que la probabilidad es del 95%. 
Criterios de aceptación: 
El intervalo d confianza para la razón de varianzas, deberá incluir el valor de 1. 
Cualquier otro criterio debe ser justificado. 
Reproducibilidad: 
a. Cualitativamente 
Es el grado de concordancia entre dos resultados individuales obtenidos con el 
mismo método sobre una materia idéntica sometida al ensayo, pero en 
condiciones diferentes (operadores distintos, aparatos diferentes, distintos 
laboratorios y/o épocas diferentes). 
b. Cuantitativamente 
Es el valor por debajo del cual está situado, con una probabilidad especificada, 
el valor absoluto de la diferencia entre dos resultados individuales obtenidos en 
las condiciones anteriormente expuestas. 
En ausencia de otra indicación se entenderá que la probabilidad es del 95%. 
Límite de detección: 
Es la menor cantidad de analito que puede ser detectada y diferenciada de un blanco, 
pero no necesariamente cuantificada con un nivel aceptable de exactitud y precisión. 
Criterios de aceptación: 
El LD debe ser menor a la especificación. 
El valor del coeficiente de determinación “r2” deberá ser ≥ 0.98 
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El intervalo de confianza para la pendiente no debe incluir el cero. 
Límite de cuantificación: 
Es la cantidad o concentración mínima que puede determinarse con un nivel aceptable 
de exactitud y precisión. 
Criterios de aceptación: 
El LC debe ser menor a la especificación. 
El valor del coeficiente de determinación “r2” deberá ser ≥ 0.98 
El intervalo de confianza para la pendiente no debe incluir el cero 
Incertidumbre de la medida: 
Estimación que caracteriza el intervalo de valores en el que se sitúa generalmente, con 
una alta probabilidad, el valor verdadero de la magnitud medida. 
La incertidumbre de la medida incluye, en general, varios componentes. Algunos 
pueden estimarse a partir de la distribución estadística de los resultados de una serie de 
mediciones y pueden caracterizarse por la desviación típica muestral. La estimación de 
otros componentes solamente puede basarse en la experiencia o en otras informaciones. 
Incertidumbre global: 
Es una cantidad utilizada para caracterizar, como un todo, la incertidumbre del 
resultado dado por un equipo o un procedimiento de medida. 
Precisión: 
Es el grado de concordancia entre los resultados obtenidos aplicando el método 
repetidas veces, bajo condiciones determinadas. La precisión sólo depende de la 
distribución de errores aleatorios. 
Criterios de aceptación: 
El intervalo de confianza para la pendiente debe incluir el valor de 1. 
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3.5 INFORME DEL PROCESO DE VALIDACIÓN 
El protocolo de validación deberá incluir al menos la siguiente información: 
a. Titulo 
b. Propósito u objetivo. 
c. Responsabilidades 
d. Plan de prueba 
e. Criterios de aceptación 
El informe de validación deberá incluir al menos la siguiente información: 
a. Descripción completa de la muestra, especificando. 
o Tiempo y condiciones de muestreo. 
o Cantidad mínima necesaria. 
o Instrumental y recipientes adecuados para la toma y conservación 
de las muestras. 
o Aditivos cuando sean necesarios. 
o Precauciones a tomar una vez recogida la muestra (por ejemplo: 
tiempo y temperatura de conservación). 
b. Descripción completa del método analítico. 
c. Concentraciones ensayadas. 
d. Valores obtenidos en los ensayos realizados. 
e. Valores calculados para la precisión, r2 y CV para cada concentración. 
f. Justificación técnica de la omisión de algún ensayo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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4.JUSTIFICACIÓN: 
 
 
 
 
 
Hoy en día la competencia cada vez es más fuerte en la Industria Farmacéutica. Es por 
eso que el contar con métodos validados para el análisis de materia prima, producto a 
granel y terminado confiere alto grado de confiabilidad en la elaboración de un 
producto, proporcionando así la calidad del producto para quien lo consuma, 
garantizando el fin para el cual fue creado. 
 
La validación de un procedimiento de medida, certifica mediante estudios de 
laboratorio, que las características de dicho procedimiento cumplen las especificaciones 
relativas al uso previsto de los resultados analíticos. 
 
La validación permite el conocimiento de las características de funcionamiento del 
método y proporciona un alto grado de confianza en el mismo y en los resultados 
obtenidos al aplicarlo mediante evidencia documentada y aprobada por el sistema de 
calidad de la empresa. 
 
La validación de un Método Analítico constituye un instrumento importante para 
garantizar la calidad de un medicamento, puesto que confiere la fiabilidad a los 
resultados obtenidos en el análisis, asegurando así que cumplan con los parámetros de 
calidad establecidos. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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5. OBJETIVOS: 
 
 
 
 
 OBJETIVO GENERAL: 
 
 Validar el método analítico para la valoración de Nimesulida 
materia prima: 
* Por UV 
* Por titulación potenciométrica. 
 
 Realizar la comparación de métodos mediante la validación para 
demostrar que se pueden utilizar indistintamente y que se puede 
reemplazar el método espectrofotométrico por el potenciométrico. 
 
 
 OBJETIVOS ESPECIFICOS: 
 
 Comprobar mediante los resultados obtenidos de la validación, que 
el método espectrofotométrico se puede reemplazar como método 
rutinario de control de calidad. 
 
 Demostrar la aplicabilidad del método a las instalaciones y 
equipo con el que se cuenta en la empresa. 
 
 Comprobar que se cumplen con las especificaciones para dicho 
método. 
 
 Demostrar que el método por UV sea reproducible, lineal, exacto. 
 
 
 
 
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6 METODOLOGIA: 
6.1 TITULACIÓN POTENCIOMETRICA 
 
a) Método de análisis de la valoración: 
 
Pesar con exactitud aproximadamente 240 mg de la muestra, transferir a un matraz 
erlenmeyer de 250 y disolver en 30 ml. de Acetona RA y 20 ml de Agua purificada. 
Titular con solución 0.1 M de hidróxido de sodio. Determinar en punto de equivalencia 
potencio métricamente. Cada mililitro de solución de 0.1M de hidróxido de sodio 
equivale a 30.83 mg de Nimesulida. 
 
REACTIVOS: 
Agua purificada. 
Acetona RA 
Nimesulida MP lote: NM/3330107 
Hidróxido de sodio 0.1 M SV 
Ácido clorhídrico 0.1M SV 
 
EQUIPO Y MATERIAL: 
Parrilla de agitación Thermolyne 
Bureta Kimax de 50 ml. 
Balanza analítica Sartorius BP 2215 
Matraz erlenmeyer Kimax de 250 ml. 
Pinzas para bureta. 
Pipetas de 20,10 ml. 
Agitador magnético 
Espátula de acero inoxidable. 
Soporte universal. 
Perilla de succión. 
Potenciómetro Sicnno. 
 
 
 
 
 20
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 21 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
b) Ensayos de validación: 
 
1.- LINEALIDAD DEL SISTEMA DE MEDICION: 
Construir una curva de calibración a los niveles 40, 60, 80, 90, 100,110 %, por medio de 
pesadas independientes, transferir a un matraz erlenmeyer y adicionar 30 ml. de 
Acetona RA y 20 ml de Agua purificada. Titular con solución 0.1 M de hidróxido de sodio. 
Determinar en punto de equivalencia potenciométricamente. 
 
NIVEL% CANTIDAD ADICIONADA 
(mg) 
NO. DE REPLICAS 
40 96 3 
60 144 3 
80 192 3 
90 216 3 
100 240 6 
120 288 3 
 
Criterios de aceptación: se determinaran evaluando los resultados obtenidos por 
regresión lineal. 
Calcular la pendiente 
El intercepto en “y” deberá ser cercano a 0 
El valor del coeficiente de correlación “r” deberá ser 0.99 o mayor 
El intervalo de confianza para la pendiente no debe incluir el cero 
El coeficiente de variación CV deberá ser menor al 1.5% 
 
2.- PRECISION DEL SISTEMA: 
Tomar los resultados obtenidos en el nivel al 100% y calcular los valores de ҳ, SD, y el 
CV. El criterio de aceptación es: CV ≤ 1.5% 
 
3.- LINEALIDAD DEL METODO: 
No aplica debido a que es materia prima y se toma la linealidad del sistema. 
Calcular la pendiente 
Calcular la ordenada al origen 
El valor del coeficiente de determinación “r2” deberá ser 0.98 o mayor 
 21
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pág 22 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
El intervalo de confianza para la pendiente debe incluir la unidad 
El coeficiente de variación CV deberá ser ≤ 2% 
 
4.- EXACTITUD Y REPETIBILIDAD AL 100%: 
No aplica debido a que es materia prima y se toma el la linealidad del sistema al nivel 
100%. Determinar el CV total 
El criterio de aceptación es para el porcentaje de recobro: 98 al 102% 
 
5.- REPRODUCIBILIDAD DEL METODO: 
Realizar el análisis como se indica en la parte a) de este protocolo. Con 2 analistas, en 
dos días diferentes, por triplicado. Calcular el CV y realizar el análisis de varianza. 
El criterio de aceptación para el porcentaje de recobro es: ≤ 2% . 
 
 
6.2 ESPECTROFOTOMETRÍA U.V 
 
REACTIVOS: 
Nimesulida SRef. Lote No: 117H1019 
Nimesulida Lote No: NM/3330107 (materia prima) 
Agua Purificada 
Hidróxido de sodio SV 
 
EQUIPO, INSTRUMENTOS Y MATERIAL: 
Espectrofotómetro Hawlett Packard 
Perilla de succión 
Espátula de acero inoxidable 
Balanza analítica (Sartorius) 
Matraces aforados de 50, 100 y 200 mL 
Pipeta volumétrica de 2, 3, 4, 5, 6 y 7mL 
 
 
 
 22
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pág 23 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
a) Método de análisis de la valoración: 
 
Preparación de la referencia: 
Transferir alrededor de 50 mg Nimesulida SRef a un matraz volumétrico de 100 mL. 
disolver y aforar con hidróxido de sodio 0.1 N, transferir una alícuota de 2 mL. de 
solución a un matraz volumétrico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. 
 
Preparación de la muestra: 
Seguir el tratamiento de la preparación de la referencia pero con la muestra. 
 
Procedimiento: 
Determinar las absorbancias de ambas preparaciones en celdas de 1cm, a la longitud de 
onda máxima de absorbancia, utilizando como blanco de ajuste Hidróxido de sodio 0.1 
N. Calcular el porcentaje de Nimesulida en la muestra por medio de la siguiente 
fórmula: 
(Am/Aref)(Cref/Cm)100 
 
Donde: 
Am/Aref = Las absorbancias de la preparación de la muestra y la preparación de la 
referencia, respectivamente. 
Cref/Cm = Las concentraciones en miligramos por mililitro de la preparación de la 
referencia y de la preparación de la muestra, respectivamente. 
 
b) Ensayos de validación: 
 
1. LINEALIDAD DEL SISTEMA DE MEDICIÓN: 
 
Construir una curva de calibración de la respuesta del equipo contra la cantidad 
adicionada de principio activo, a los niveles 40, 60, 80, 100,120 y 140 %, partiendo de 
una solución patrón (Stock). Tomar el volumen de alícuota de acuerdo con la siguiente 
tabla y llevar aforo a 50 mL con agua. 
 
 23
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UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIANIVEL 
% 
VOL. ALICUOTA 
mL 
No. REPLICAS 
40 2 3 
60 3 3 
80 4 3 
100 5 6 
120 6 3 
140 7 3 
 
 
 
 
 
 
Leer todas las muestras a 392 nm en celdas de 1.0 cm. Registrar los resultados y 
calcular los valores de m, b, mr, br, r y r2. 
El valor del coeficiente de determinación “r2” deberá ser de 0.98 o mayor. 
El coeficiente de variación CV deberá ser menor al 1.5% 
 
2.-PRECISIÓN DEL SISTEMA: 
Tomar los resultados obtenidos con el nivel al 100 % de la linealidad del sistema y 
calcular los valores de x , y el C.V. 
El criterio de aceptación es: CV ≤ 1.5% 
 
3. LINEALIDAD DEL MÉTODO: 
Construir una curva de calibración a los niveles 40, 60, 80, 100, 120, 140 mezclar y 
llevar al aforo con Hidróxido de sodio 0.1 N. Transferir una alícuota de 2 mL de la 
solución a un matraz volumétrico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. 
Analizar por sextuplicado y en días diferentes, al azar, incluyendo en cada día la 
preparación de reactivos y soluciones de referencia. 
 
NIVEL % CANTIDAD (mg) No. REPLICAS 
40 20 6 
60 30 6 
80 40 6 
100 50 6 
120 60 6 
 24
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140 70 6 
Calcular: 
Calcular el porcentaje de recobro. 
El valor del coeficiente de determinación “r2” deberá ser 0.98 o mayor 
El coeficiente de variación CV deberá ser ≤ 3% 
 
4.-EXACTITUD Y REPETIBILIDAD: 
 
Emplear los resultados obtenidos en la linealidad del método, en nivel 100% y 
determinar el coeficiente de variación del % recuperado. 
El criterio de aceptación para el porcentaje de recobro es: 97-103%. 
 
5. REPRODUCIBILIDAD DEL MÉTODO: 
 
Realizar el análisis como se indica en la parte A) de este protocolo, con 2 analistas, en 
dos días diferentes, Calcular los % recuperados, C.V. y realizar el análisis de varianza 
con el porcentaje recuperado. 
El criterio de aceptación para el porcentaje de recobro es: ≤ 3%. 
 
6. LIMITE DE DETECCIÓN Y CUANTIFICACIÓN: 
 
Con lo s resultados obtenidos en la curva de calibración de la linealidad del sistema 
calcular el valor de la pendiente (b1), el coeficiente de determinación (r2) y la 
desviación estándar de la regresión (Sx/y) y con ellos obtener el limite de detección y 
cuantificación. 
 
 
 
 
 
 
 
 25
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 26 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
 
7 RESULTADOS: 
 
 7.1 MÉTODO POR TITULACIÓN POTENCIOMETRICA 
 
LINEALIDAD DEL SISTEMA 
Para determinar el volumen real de titulación se realizo el método de la segunda 
derivada, por el que se determino el volumen real ocupado por cada muestra y en cada 
nivel. Este volumen es necesario para el calculo del porcentaje recuperado en cada 
muestra ya que cada 1 mL de NaOH es equivalente a 30.83 mg de Nimesulida. 
 
Ejemplo de cálculo (M5 del nivel al 100%): obtención de 2da derivada, hoja de 
calculo exel. 
 
MUESTRA 5 NIVEL 100 % 
 
2 DA DERIVADA 
V(mL) volts ∆E ∆V Vr ∆E/∆V ∆(∆E/∆Vra) ∆Vda Vda ∆2E/∆V2) 
0 109 -33 0.2 0.1 -165 100 0.2 0.2 500 
0.2 76 -13 0.2 0.3 -65 -5 0.2 0.4 -25 
0.4 63 -14 0.2 0.5 -70 25 0.2 0.6 125 
0.6 49 -9 0.2 0.7 -45 0 0.2 0.8 0 
0.8 40 -9 0.2 0.9 -45 -20 0.2 1 -100 
1 31 -13 0.2 1.1 -65 35 0.2 1.2 175 
1.2 18 -6 0.2 1.3 -30 10 0.2 1.4 50 
1.4 12 -4 0.2 1.5 -20 0 0.2 1.6 0 
1.6 8 -4 0.2 1.7 -20 0 0.2 1.8 0 
1.8 4 -4 0.2 1.9 -20 5 0.2 2 25 
2 0 -3 0.2 2.1 -15 -5 0.2 2.2 -25 
2.2 -3 -4 0.2 2.3 -20 5 0.2 2.4 25 
2.4 -7 -3 0.2 2.5 -15 -5 0.2 2.6 -25 
2.6 -10 -4 0.2 2.7 -20 0 0.2 2.8 0 
2.8 -14 -4 0.2 2.9 -20 5 0.2 3 25 
3 -18 -3 0.2 3.1 -15 0 0.2 3.2 0 
3.2 -21 -3 0.2 3.3 -15 0 0.2 3.4 0 
3.4 -24 -3 0.2 3.5 -15 5 0.2 3.6 25 
3.6 -27 -2 0.2 3.7 -10 0 0.2 3.8 0 
3.8 -29 -2 0.2 3.9 -10 -5 0.2 4 -25 
4 -31 -3 0.2 4.1 -15 0 0.2 4.2 0 
4.2 -34 -3 0.2 4.3 -15 -5 0.2 4.4 -25 
4.4 -37 -4 0.2 4.5 -20 0 0.2 4.6 0 
4.6 -41 -4 0.2 4.7 -20 10 0.2 4.8 50 
4.8 -45 -2 0.2 4.9 -10 5 0.2 5 25 
5 -47 -1 0.2 5.1 -5 -5 0.2 5.2 -25 
5.2 -48 -2 0.2 5.3 -10 -5 0.2 5.4 -25 
 26
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 27 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
5.4 -50 -3 0.2 5.5 -15 15 0.2 5.6 75 
5.6 -53 0 0.2 5.7 0 -30 0.2 5.8 -150 
5.8 -53 -6 0.2 5.9 -30 15 0.2 6 75 
6 -59 -3 0.2 6.1 -15 0 0.2 6.2 0 
6.2 -62 -3 0.2 6.3 -15 -10 0.2 6.4 -50 
6.4 -65 -5 0.2 6.5 -25 0 0.2 6.6 0 
6.6 -70 -5 0.2 6.7 -25 0 0.2 6.8 0 
6.8 -75 -5 0.2 6.9 -25 -5 0.2 7 -25 
7 -80 -6 0.2 7.1 -30 0 0.2 7.2 0 
7.2 -86 -6 0.2 7.3 -30 -5 0.2 7.4 -25 
7.4 -92 -7 0.2 7.5 -35 -15 0.2 7.6 -75 
7.6 -99 -10 0.2 7.7 -50 -75 0.2 7.8 -375 
7.8 -109 -25 0.2 7.9 -125 -520 0.2 8 -2600 
8 -134 -129 0.2 8.1 -645 540 0.2 8.2 2700 
8.2 -263 -21 0.2 8.3 -105 55 0.2 8.4 275 
8.4 -284 -10 0.2 8.5 -50 10 0.2 8.6 50 
8.6 -294 -8 0.2 8.7 -40 5 0.2 8.8 25 
8.8 -302 -7 0.2 8.9 -35 10 0.2 9 50 
9 -309 -5 0.2 9.1 -25 -35 0.2 9.2 -175 
9.2 -314 -12 0.2 9.3 -60 -20 0.2 9.4 -100 
9.4 -326 -16 0.2 9.5 -80 35 0.2 9.6 175 
9.6 -342 -9 0.2 9.7 -45 -15 0.2 9.8 -75 
9.8 -351 -12 0.2 9.9 -60 
10 -363 
 
MUESTRAS DEL NIVEL 40% 
2da DERIVADA M1,M2,M3 NIVEL 40% 
DETERMINACION DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA 
METODO POTENCIOMETRICO
-5000
-4000
-3000
-2000
-1000
0
1000
2000
3000
4000
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0
Vr
∆2
E/
∆V
2)
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
3.3
 
Grafica 1. Muestra1,2,3-40% determinación del punto de equivalencia para 
Nimesulida, método potenciométrico 
 
 27
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 28 
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MUESTRAS DEL NIVEL 60% 
2da DERIVADA M1,M2,M3 NIVEL 60% 
DETERMINACION DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA 
METODO POTENCIOMETRICO
-3000
-2000
-1000
0
1000
2000
3000
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0
Vr
∆2
E/
∆V
2)
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
4.9
 
Grafica 2. Muestra 1,2,3-60% determinación del punto de equivalencia para 
Nimesulida, método potenciométrico 
 
 
MUESTRAS DEL NIVEL 80% 
2da DERIVADA M1,M2,M3 NIVEL 80% 
DETERMINACION DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA 
METODO POTENCIOMETRICO
-2500
-2000
-1500
-1000
-500
0
500
1000
1500
2000
0 1 2 3 4 5 6 7
Vr
∆2
E/
∆V
2)
8
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
6.6
6.7
 
Grafica 3. Muestra 1,2,3-80% determinación del punto de equivalencia para 
Nimesulida, método potenciométrico 
MUESTRAS DEL NIVEL 90% 
 
 28
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
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MUESTRAS DEL NIVEL 100% 
 
 
2da DERIVADA M2 100%
DETERMINACIÓN DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA
MÉTODO POTENCIOMETRICO
-2500
-2000
-1500
-1000
-500
0
500
1000
1500
2000
2500
0 2 4 6 8 10
Vr
∆2
E/
∆V
2)
12
 8.3
 
Grafica 4. Muestra 2-100% determinación del punto de equivalencia para 
Nimesulida, método potenciométrico 
 
MUESTRAS DEL NIVEL 120% 
 
2da DERIVADA M1 120%
DETERMINACIÓN DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA
MÉTODO POTENCIOMETRICO
-1000
-500
0
500
1000
1500
0 2 4 6 8 10 12
Vr
∆2
E/
∆V
2)
14
 9.7
 
Grafica 5. Muestra 1-120% determinación del punto de equivalencia para 
Nimesulida, método potenciométric 
 29
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 30 
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LINEALIDAD DEL SISTEMA 
 
 
Linealidad del sistema de medición para Nimesulida. 
 
NIVEL 
(%) 
 
mg 
Adicionados 
 
Replica 
número 
 
RESPUESTA 
volumen 
 
Media 
 
SD 
 
CV ( %) 
 
 
40 
 
 
96.0000 
 
1 
2 
3 
 
 
3.30000 
3.30000 
3.30000 
 
 
3.300 
 
 
0.0 
 
 
0.0 
 
 
60 
 
 
144.0000 
 
1 
2 
3 
 
4.90000 
4.90000 
4.90000 
 
 
 
4.900 
 
 
0.0 
 
 
0.0 
 
 
80 
 
 
192.0000 
 
1 
2 
3 
 
6.60000 
6.70000 
6.60000 
 
 
 
6.6330.0577 
 
 
0.87 
 
 
90 
 
 
216.0000 
 
1 
2 
3 
 
7.30000 
7.40000 
7.30000 
 
 
7.333 
 
 
0.05774 
 
 
0.79 
 
 
 
 
100 
 
 
 
 
240.0000 
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
 
8.30000 
8.30000 
8.10000 
8.30000 
8.10000 
8.30000 
 
 
 
 
8.233 
 
 
 
 
0.10328 
 
 
 
 
1.25 
 
 
120 
 
 
288.0000 
 
1 
2 
3 
 
9.70000 
9.70000 
9.70000 
 
 
 
9.700 
 
 
0.0 
 
 
0.0 
Tabla 1 Linealidad del sistema de medición para Nimesulida, método 
potenciométrico 
 
 
 
 
 
 30
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 31 
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GRAFICA: LINEALIDAD DEL SISTEMA 
 
LIN
EA
LID
AD
 DE
L S
IST
EM
A P
AR
A N
IME
SU
LID
A M
ET
OD
O 
PO
TE
NC
IOM
ET
RIC
O
y =
 0.0
33
6x 
+ 0
.1
R2 
= 0
.99
92
024681012
0
50
10
0
15
0
20
0
25
0
30
0
35
0
mg
 Ad
icio
na
do
s
Volumen (mL)
 
Grafica 6 Linealidad del sistema de medición para Nimesulida, método 
potenciométrico. 
 
 
b= 0.1 m= 0.0336 r=0.9996 
br= 0.011 mr=0.9850 r2= 0.9992 
 
Cumple con los criterios de aceptación: SI 
 
 
 31
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 32 
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PRECISIÓN DEL SISTEMA AL 100% 
Precisión del sistema para Nimesulida 
 
# RE RESPUESTA (VOLUMEN) 
 
 
PLICA 
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
8.30000 
8.40000 
8.10000 
8.30000 
8.10000 
8.30000 
Tabla 2. Precisión de stema para Nimesulid o potenciométrico. 
x= 8.250 σ= 0.12274 C.V.= 1.48 
Cumple con los criterios de aceptación: SI 
 
XACTITUD AL NIVEL100% 
xactitud del método para Nimesulida 
NO. 
REPLICA 
% RECU RADO 
 
X 
 
DESVIACION 
 
C.V. 
l si a, métod
 
 
 
E
 
E
 
PE
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
101.72 
100 35 3. 4 1. 5 
101.46 
99.22 
101.67 
99.22 
1 01.72
 
 
 
.8
 
 
 
0
 
 
 
2
Tabla 3. Exact método para Nimesulida, método potenciométrico 
% de Recobro= 98-102% = 100.835% C.V.= 1.25 
 
Cumple con los criterios de aceptación: SI 
 
itud del
 
x
 
 
 32
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 33 
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LINEALIDAD DEL MÉTODO 
 
Linealidad del método para Nimesulida. 
Nivel Replica mg (x) 
adicionados
 
 
mg (y)
rec s
 
uperado (%) número 
% 
rec. 
Media Media CV 
X Y Y 
 
 
40 
 
96.000 97.06 101.10 
96.03 
 
97.06 
 
0.003 
 
 
 
1 
2 
3 
 
96.100 
96.000 
 
97.06 
97.06 
 
101.00 
101.10 
 
 
 
 
 
 
 
 
60 
 
144.200 
 
144.11 
 
99.94 
 
144.23 
 
144.08 
 
0.041 
 
 1 
2 
3 
 
144.200 
144.300 
144.11 
144.01 
99.94 
99.80 
 
 
80 
 
192.400 194.11 100.89 
 
192.63 
 
199.09 
 
0.870 
 
 
 
 
1 
2 
3 
 
192.500 
192.500 
 
197.05 
194.12 
 
102.1 
100.84 
 
 
 
 
 
 
 
 
90 
 
216.400 
 
214.71 99.22 
 
216.17 
 
215.68 0.78 
 
1 
2 
3 
 
 
216.300 
215.800 
 
217.69 
214.70 
 
100.62 
99.49 
 
 
 
 
 
 
 
100 
240.000 244.13 101.72 
 
240.18 
 
242.16 
 
1.257 
 
 
 
 
 
 
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
240.600 
240.100 
240.100 
240.100 
240.000 
 
244.11 
238.23 
244.11 
238.23 
244.13 
 
101.46 
99.22 
101.67 
99.22 
101.72 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
120 
288.000 285.29 99.06 
 
288.20 
 
285.29 0.001 
 
1 
2 
3 
 
288.200 
288.400 
 
 
285.29 
285.29 
 
98.99 
98.92 
 
 
 
Tabla 4 Linealidad del o todo potenciométrico. 
 
 
 
 métod para Nimesulida, mé
 
 
 33
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 34 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
 
GRAFICA: LINEALIDAD DEL METODO 
Gráfica 7 Linealidad del método para Nimesulida, método potenciométrico 
b= 2.764 m= 0 876 r=0.9997 
r2= 0.9993 
 
Cumple con los criterios de aceptación: SI 
 
LIN
EA
LID
AD
 DE
L M
ET
OD
O P
AR
A N
IME
SU
LID
A M
ET
OD
O 
PO
TE
NC
IOM
ET
RIC
O y
 = 0
.98
76x
 + 2
.76
43
R2 
= 0
.99
93
050100150200250300350
0
50
100
150
200
250
300
350
mg
 Ad
icio
nad
os
mgRecuperados
 
 
 
.9
 
 
 34
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 35 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
 
REPRODUCIBILIDAD DEL METODO 
Analista 
Resultados en % 
 
 
Día 1 2 
 
 
1 
 
99.22 
101.631 
101.631 
101.588 
 
101.715 
99.26 
 
 
101.631 99.26 
2 
 
101.588 
101.631 
 
101.67 
101.631 
 
Tabla 5. Reproducibilidad del método p Nimesulida, método potenciométrico 
X= 101.04 σ= 1.08 C.V.= 1.07 
Cumple con los criterios de aceptación: SI 
TABLA DE ANALISIS DE VARIANZA 
Fuente 
variación 
Gra
 
ara 
 
 
 
 
 
dos 
de de 
Libertad 
Suma de 
Cuadrados 
Cuadrado F 
calc da 
F 
 
tablas 
medio 
u al
de 
Analista 1 0.38 0.38 0.78 18.51 
Día 2 0.97 0.49 0.34 4.46 
Error 8 11.5 1.44 
Total 11 12.85 
Tab nálisis varian a Nimesulida, métod potenciométrico 
Cumple con los criterios de aceptación: SI 
 
la 6 A de za par o 
 
 
 
 
 35
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 36 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
7.2 MÉTODO POR ESPECTROFOTOMETRIA UV. 
INEALIDAD DEL SISTEMA 
 
 
L
 
 
 
Espectro1. Linealidad del sistema de medición para Nimesulida, método 
 
espectrofométrico 
 
 
 
 
 36
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 37 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
LINEALIDAD DEL SISTEMA 
Linealidad del sistema de medición para Nimesulida. 
 
NIVEL Concentración Replica RESPUESTA Media 
 
SD 
 
CV ( %) 
 
 
(%) [ mg / mL ] Abs 
 
 
40 4.0000 
0.18601 
0.189 0.00258 1.37 
 
 
 
 
 
1 
2 
3 
 
0.19112 
0.18922 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
60 6.0000 
0.28308 
0.284 0.00078 0.28 
 
 
 
1 
2 
3 
 
0.28459 
0.28419 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
80 
 
8.0000 
0.37360 
0.376 
 
0.00372 0.99 
 
 
 
 
 
1 
2 
3 
 
0.37342 
0.37996 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
100 10.0000 
0.46727 
0.469 0.00231 0.49 
 
 
 
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
0.46785 
0.47077 
0.46696 
0.47156 
0.47209 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
120 
 
12.0000 
 
0.56365 
 
0.561 
 
0.00250 
 
0.45 
 
 
 
 
1 
2 
3 
0.55866 
0.56084 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
140 14.0000 
0.65360 
0.655 0.00161 0.25 
 
 
 
 
 
1 
2 
3 
 
0.65500 
0.65682 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tabla 6 Linealidad del sistema de para Nimesulida, método 
 
medición 
espectrofotométrico. 
 
 
 
 
 37
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 38 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
GRAFICA: LINEALIDAD DEL SISTEMA 
 
b= 0.004 m= 0.0465 r=1.00 
 
Cumple con los criterios de aceptación: SI 
 
 
 
ES
PE
CT
RO
FO
TO
ME
TR
IA
 U
V
y =
 0
.0
46
5x
 +
 0
.0
04
R2
 =
 1
00.10.20.30.40.50.60.7
0
2
4
6
8
10
12
14
16
ug
/m
L
Abs 
 
LIN
EA
LID
AD
 D
EL
 SI
ST
EM
A 
PA
RA
 N
IM
ES
UL
ID
A
 
Grafica 8. Linealidad del sistema de medición para Nimesulida, método 
espectrofométrico 
br= 0.0089 mr=0.9915 r2=1.00 
 
 38
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 39 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
PRECISIÓN DEL SISTEMA AL 100% 
Precisión del sistema para Nimesulida 
 
# RE RESPUESTA (ABS) 
 
 
PLICA 
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
0.46727 
0.46785 
0.47077 
0.46696 
0.47156 
0.47209 
Tabla 6. Presición de stema para Nimesulid o potenciométrico. 
x= 0.469 σ= 0.00231 C.V.= 0.49 
Cumple con los criterios de aceptación: SIXACTITUD AL NIVEL100% 
xactitud del método para Nimesulida 
NO. 
REPLICA 
% RECU RADO 
 
X 
 
DESVIACION 
 
C.V. 
l si a, métod
 
 
 
E
 
E
 
PE
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
100.55 
99.94 
100.90
101.06
99.08 
100.52
100 34 0.728846 0.728846 
 
 
 
 
 
.
 
 
 
 
 
 
 
 
Tabla 7. Exact método para Nimesulida, método potenciométrico 
% de Recobro= 97-103% x= 100.34% C.V.= 0.73 
 
Cumple con los criterios de aceptación: Si 
 
itud del
 
 
 
 39
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 40 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
LINEALIDAD DEL MÉTODO 
 
Espectro 2. Linealidad del método para Nimesulida, método espectrofométrico 
 
muestras de los niveles 120, 140y 40 % 
 
 
 
 
 40
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 41 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
LINEALIDAD DEL MÉTODO 
 
 
Espectro 3. Linealidad del método para Nimesulida, método espectrofométrico
 
 
muestras de los niveles 100, 80y 60 % 
 
 
 41
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 42 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
LINEALIDAD DEL MÉTODO 
 
Linealidad del método para Nimesulida. 
Nivel Replica m
adicionados
g (X) 
 
Mg (Y) % Medi
rec. 
a Media CV 
rec osuperad(%) número X Y Y 
 
 
40 
102.15 
20.16 20.18 1.50 
 
 
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
20.300 
20.200 
20.100 
20.100 
20.100 
20.000 
 
20.74 
19.85 
20.19 
20.14 
20.15 
19.98 
 
98.29 
100.46 
100.18 
100.24 
99.91 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
60 
 
28.70 
 
30.65 0.52 
 
 
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
30.500 
30.500 
30.400 
30.400 
30.400 
30.000 
 
30.76 
30.78 
30.68 
30.68 
30.66 
30.34 
 
100.84 
100.92 
100.92 
100.91 
100.85 
101.14 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
80 
 
40.08 
 
39.92 0.90 
 
 
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
40.400 
40.000 
40.100 
40.000 
40.000 
40.000 
 
40.54 
39.60 
40.12 
39.62 
39.88 
39.75 
 
100.35 
98.99 
100.05 
99.06 
99.71 
99.37 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
100 
100.55 
 
 
 
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
50.100 
50.000 
50.300 
50.300 
50.000 
50.000 
 
50.38 
49.97 
50.75 
50.83 
49.54 
50.26 
 
99.94 
100.90 
101.06 
99.08 
100.52 
 
50.12 
 
50.29 0.97 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
120 
 
60.03 
 
59.08 0.30 
 
 
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
60.000 
60.000 
60.000 
60.200 
60.000 
60.000 
 
58.91 
58.87 
59.27 
59.21 
59.00 
59.24 
 
98.19 
98.11 
98.78 
98.36 
98.34 
98.73 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
140 
102.15 
 
70.08 
 
70.23 1.19 
 
 
1 
2 
3 
4 
5 
6 
 
70.000 
70.100 
70.100 
70.100 
70.100 
70.100 
 
71.51 
68.90 
70.42 
70.23 
70.27 
70.04 
 
98.292 
100.46 
100.18 
100.24 
99.91 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tabla 7 Linealidad del método p mesulida, método espectrofotométrico. 
 
ara Ni
 42
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 43 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
GRAFICA: LINEALIDAD DEL METODO 
Gráfica 9. Linealidad del método para Nimesulida, método espectrofométrico 
 
b= 0.2656 m= 0.9923 r=0.9997 r2= 0.9995 
 
Cumple con los criterios de aceptación: SI 
 
 
LIN
EA
LID
AD
 DE
L M
ÉT
OD
O P
AR
A N
IME
SU
LID
A M
ÉT
OD
O 
ES
PE
CT
RO
FO
TO
ME
TR
ICO
y =
 0.9
923
x +
 0.2
656
R2 
= 0
.99
95
01020304050607080
0
20
40
60
8
mg
 Ad
icio
nad
os
0
mgRecuperados
 
 
 
 
 43
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 44 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
REPRODUCIBILIDAD DEL METODO 
Analista 
Resultados en % 
 
 
Día 1 2 
 
 
1 
 
100.13 101.19 
99.868 
99.828 
 
99.491 
101.29 
 
 
99.373 99.75 
2 
 
99.54 
99.431 
 
99.96 
100.0 
 
Tabla 8. Reproducibilidad del método para Nimesulida, método 
X= 99.99 σ= 0 3 C.V.= 0.63 
 
Cumple con los criterios de aceptación: SI 
 
TABLA DE ANALISIS DE VARIANZA 
Fuente 
variación 
Grado
 
espectrofotométrico 
 
.6
 
 
Suma de Cuadrado s 
Cuadrados medio de 
 
de 
Libertad 
F 
calc da 
F 
 
tablas 
 
u al
de 
Analista 1 0.38 0.38 1.69 18.51 
Día 2 0.97 0.49 2.26 4.46 
Error 8 11.5 1.44 
Total 11 12.85 
Tabla lisis d rianza imesuli , método pectrofot étrico 
Cumple con los criterios de aceptación: SI 
 
 9 Aná e va para N da es om
 
 
 
 44
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 45 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
REPRODUCIBILIDAD DEL METODO 
nalista 1: Día 1 
 
A
 
 
 
 
Espectro 4. Reproducibilidad del método para Nimesulida, método 
espectrofométrico 
 
 
 
 
 
 
 
 45
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 46 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
REPRODUCIBILIDAD DEL METODO 
nalista 2: Día 1 
 
A
 
 
 
Espectro 5. Reproducibilidad del método para Nimesulida, método 
 
espectrofométrico 
 
 
 
 
 
 
 46
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 47 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
REPRODUCIBILIDAD DEL METODO 
nalista 1: Día 2 
 
A
 
 
 
 
Espectro 6. Reproducibilidad del método para Nimesulida, método 
 
espectrofométrico 
 
 
 
 
 
 
 47
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 48 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
REPRODUCIBILIDAD DEL METODO 
nalista 2: Día 2 
 
A
 
 
 
 
Espectro 7. Reproducibilidad del método para Nimesulida, método 
 
espectrofométrico 
 
 
 
 
 
 
 48
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 49 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
ESTÁNDAR UTILIZADO EN LA REPRODUCIBILIDAD DEL METODO-DIA 1 
 
 
 
ESTÁNDAR UTILIZADO EN LA REPRODUCIBILIDAD DEL METODO-DIA 2 
 
 
 
 49
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 50 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
8. COMPARACION DE LOS METODOS 
 
REPETITIBILIDAD EN EXACTITUD: 
 
 
METODO A 
(UV) 
 
 
METODO B 
(POTENCIOMETRICO) 
 
1 100.55 101.72 
2 99.94 101.46 
3 100.90 99.22 
4 101.06 101.67 
5 99.08 99.22 
6 100.52 101.72 
∑y 602.05 605.01 
∑y2 0541 60413.3565 61014.
n 6 6 
S2 0.53121 1.57415 
S12 menor 
S22 mayor 
F0.025,n2-1,n1-1 0.14 
F0.975,n2-1,n1-1 7.15 
T a 9. Compar métodos, repetitibilidad en exactitud 
 
valo de confianza 
 ≤ σ22/σ12≤ 21.1875
 
Los parámet de desempe s métodos son igua lo que se puede usar 
indistintame Ya que el in e confianza incluye 
Los cálculos fectuaron de exo 1 
 
 
 
 
 
abl ación de
Inter
0.4148 
ros ño de lo les por 
nte. tervalo d el 1. 
 se e acuerdo al an
 50
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 51 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
REPETITIBILIDAD EN LINEALIDAD DEL METODO 
 A (UV) METODO B (POTENCIOMETRICO) METODO
Cantidad 
adicionad
mg mg 
a 
Cantidad 
recuperada 
 
% de recobro 
 
% de recobro 
Cantidad 
adicionada 
Cantidad 
recup
mg 
erada 
mg 
20.3 20.74 102.15 101.1 96.0 97.06 
20.2 19.85 96.1 97.06 98.29 101.0 
20.1 20.19 96.0 97.06 100.46 101.1 
20.1 20.14 144.2 144.1 100.18 99.94 
20.1 20.15 100.24 99.94 144.2 144.1 
20.0 19.98 99.91 99.8 144.3 144.01 
30.5 30.76 100.84 100.89 192.4 194.11 
30.5 30.78 100.92 102.1 192.5 197.05 
30.4 30.68 100.92 100.84 19.5 194.12 
30.4 30.68 100.91 99.22 216.4 214.71 
30.4 30.66 100.85 100.62 216.3 217.64 
30.0 30.34 101.14 99.49 215.8 214.7 
40.4 40.54 100.35 101.72 240.0244.12 
40.0 39.6 98.99 101.46 240.6 244.12 
40.1 40.12 100.05 99.22 240.1 238.23 
40.0 39.62 99.06 101.67 240.1 244.12 
40.0 39.88 99.71 99.22 240.1 238.23 
40.0 39.75 99.37 101.72 24.0 244.13 
50.1 50.38 100.55 99.06 288.0 285.29 
50.0 49.97 99.94 98.99 288.2 285.29 
50.3 100.9 98 9 50.75 .92 288.4 285.2
50.3 50.83 101.06 
50.0 49.54 99.08 
50.0 5 100.52 0.26 
60.0 58.91 98.19 
60.0 58.87 98.11 
60.0 59.27 98.78 
60.2 59.21 98.36 
60.0 59.0 98.34 
60.0 59.24 98.73 
70.0 71.51 102.15 
70.1 68.9 98.029 
70.1 70.42 100.46 
70.1 70.23 100.18 
70.1 70.27 100.24 
70.1 70.04 99.91 
∑y 3 598.1032 2108.02 
∑y2 359 53 668.61 21 2 1629.75 
n 36 22 
S2 1 .203381 45 9.1043801 
F0.02 1-1 5,n2-1,n 0.32 
F0.97 1-1 5,n2-1,n 3.36 
Tabla 10. Compara e método titibilid inealidad del método 
 
 
 
ción d s, repe ad en l
 51
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Intervalo de confianza no incluy idad, por que cumple con las especificaciones 
 puede hacer uso indistinto de los méto s. 
122. ≤ σ22/σ12≤ 1.8806 
Los cálculos se efe n de ac l anexo 2 
 
PRECISIÓN DEL MÉTODO 
 
ETODO A METODO B 
e la un lo
y se do
0838 128
ctuaro uerdo a
M 
DIA A A1 A2 1 A2 
 
DIA 
 
1 
100.13 
99.868 
99.828 
101.19 
101.29 
99.22 
101.631 
101.588 
101.631 
101.715 
99.26 
99.491 
 
1 
 99.373 99.75 101.631 
2 99.54 
99.431 
99.96 
100.0 
2 101.588 
101.631 
99.26 
101.67 
101.631 
∑y 1199.851 ∑y 1212.456 
∑y2 6.978 119974.5958 ∑y2 12251
n 1 12 2 n 
SA2 0.399448 SB2 1.1680627 
F0.025,11,11 0.29 F0.975,11,11 3.47 
Tabla 11. Comparación de métodos, repetitibilidad en precisión del método 
tervalo de confianza 
0.8480 σ22/σ12 .146944 
 
Como intervalo ianza l 1, los parámetros de desempeño
por lo tanto los m se pue indistintamente. 
 
Los cálculos se efectuar anexo 3 
 
 
 
 
 
 
In
15 ≤ ≤ 10
 el de conf incluye e son iguales 
étodos den usar
on de acuerdo al 
 52
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pág 53 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
9. ANALISIS DE RESULTADOS: 
 
 Linealidad del sist
MET .5 
% y al compararlos con los criterios de a tación, este parámetro cumple con las 
especificaciones ya que la concentración es directamente proporcional a la unidad de 
respuesta del sistema de odo espectrofotometrico 
umple con los criterios establecidos. 
ema: 
ODO POTENCIOMETRICO: De acuerdo a los resultados obtenidos, r2= 0.9992 , CV≤ 1
cep
medición, de igual manera el Mét
c
 
 Linealidad del método: 
Se realizo un grafico de mg adicionados VS mg recuperados, al cual se determinó el 
le con los criterios ya que el valor de 
2= 0.9993, CV≤ 1.5 % este parámetro asegura la proporcionalidad directa sobre el 
tervalo de trabajo. Para el caso del Método espectrofotometrico cumple con el 
riterio de aceptación. 
coeficiente de correlación, este coeficiente cump
r
in
c
 
 Precisión del sistema al 100% 
rico como el espectrofotométrico, son precisos ya que 
mbos cumplen con los criterios de aceptación ya que ninguno sobrepasa el 1.5 % con 
Tanto el método potenciomét
a
respecto al CV. 
 
 Exactitud y Repetitibilidad: 
METODO POTENCIOMETRICO: Es exacto ya que la media del porcentaje de recobro tiene 
un valor de 100.84% y el rango para el criterio de aceptación es de 98-102%, también 
cumple con CV≤ 1.5 % 
METODO ESPECTROFOTOMETRICO: Este método tiene un rango mas amplio de 97-103% 
el valor de la media cae dentro del rango al tener un para el porcentaje de recobro, 
valor de 100.34% y no sobrepasar el límite del CV≤2%. 
 
 Reproducibilidad: 
Ambos métodos son reproducibles ya que al realizar el análisis de varianza resulta que 
los diferentes analistas no interfieren con la reproducibilidad del método. 
 
 
 
 53
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL 
pág 54 
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
 Comparación de métodos: 
Al realizar el análisis de varianza para determinar si los parámetros de desempeño 
son iguales, resulta que cumple con los criterios establecidos para dichos 
parámetros, por lo tanto los métodos se pueden usar indistintamente, ya que esta 
arámetros reales y documentados. 
4. Reproducible 
usar indistintamente, ya que se cumple con los 
 
 por el método 
potenciométrico. 
 El método se puede usar como método rutinario de control, ya que las 
étodo espectrofotométrico ya que este facilita el análisis 
acortando el tiempo y cantidad de muestra. 
en la industria farmacéutica se requiere de análisis rápidos pero 
sempeño y el método espectrofotométrico 
ecesidades para la empresa. 
justificada su comparación con p
 
10. CONCLUSIONES: 
 
 Mediante los resultados obtenidos durante el proceso de validación se puede 
afirmar que se cumplen con las especificaciones señaladas de cada parámetro 
por que el método es: 
 
1. Lineal 
2. Preciso 
3. Exacto 
 
 
 Los métodos se pueden 
parámetros necesarios para el uso indistinto de ellos. 
 El método espectrofotométrico mediante la validación y comparación cumple 
con las especificaciones señaladas, el cual se desea remplazar
 
instalaciones y equipos son adecuados para la reproducibilidad de este. 
 
 Se prefiere el uso del M
 
 Como se sabe 
de calidad aceptada para su de
satisface esas n
 
 
 
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UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGIA 
 
 
 
11. BIBLIOGRAFIA: 
éxico (2000). 
2. Ley General de Salud (1997). 
xicana NOM-059-SSAA-1993, Buenas Practicas de Fabricación 
para establecimientos de la industria químico farmacéutica dedicados a la 
5. Guía de Validación de Métodos Analíticos, 1ª Edición de Mayo2002. 
Iberoamericana. 3ª Ed. México (1991). 
8. European Pharmacopoeia, 5th Edición, Vol. II, pp. 2101-2102 
 
 
 
 
 
1. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 7ª Ed. M
3. Reglamento de Insumos para la Salud. 
4. Norma Oficial Me
fabricación de medicamentos. 
6. British Pharmacopoeia. Monograph Development: Methods of Analysis. Version en 
CD-ROM, 1998. 
7. Diseño y Análisis de experimentos, Montgomery D.C. Grupo editorial 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 55
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12. ANEXOS 
Modelos de cálculo. 
ANEXO 1 
 
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ANEXO 2 
 
 
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ANEXO 3 
 
 
 
 
 
 
 
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TABLAS 
 
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 68
	caratula
	TRABAJOESTANCIA

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