Descarga la aplicación para disfrutar aún más
Vista previa del material en texto
Av. Hidalgo 935, Colonia Centro, C.P. 44100, Guadalajara, Jalisco, México bibliotecadigital@redudg.udg.mx - Tel. 31 34 22 77 ext. 11959 UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA COORDINACIÓN GENERAL ACADÉMICA Coordinación de Bibliotecas Biblioteca Digital La presente tesis es publicada a texto completo en virtud de que el autor ha dado su autorización por escrito para la incorporación del documento a la Biblioteca Digital y al Repositorio Institucional de la Universidad de Guadalajara, esto sin sufrir menoscabo sobre sus derechos como autor de la obra y los usos que posteriormente quiera darle a la misma. UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA CENTRO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS DE LA SALUD DIVISIÓN DE DISCIPLINAS CLÍNICAS DEPARTAMENTO DE CLÍNICAS ODONTOLÓGICAS INTEGRALES ESPECIALIDAD EN ODONTOPEDIATRÍA TESIS PARA OBTENER EL GRADO DE ESPECIALIDAD EN ODONTOPERDIATRÍA DETERMINACIÓN DE INTERLEUCINA 23 (IL-23) EN SALIVA DE NIÑOS CON DENTICIÓN MIXTA TEMPRANA CON CLASE MOLAR I Y II PRESENTA: C.D. PAULINA NOYOLA SÁNCHEZ GUADALAJARA, JAL. NOVIEMBRE 2019 UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA CENTRO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS DE LA SALUD DIVISIÓN DE DISCIPLINAS CLÍNICAS DEPARTAMENTO DE CLÍNICAS ODONTOLÓGICAS INTEGRALES ESPECIALIDAD EN ODONTOPEDIATRÍA TESIS PARA OBTENER EL GRADO DE ESPECIALIDAD EN ODONTOPERDIATRÍA DETERMINACIÓN DE INTERLEUCINA 23 (IL-23) EN SALIVA DE NIÑOS CON DENTICIÓN MIXTA TEMPRANA CON CLASE MOLAR I Y II Presenta: C.D. Paulina Noyola Sánchez Código: 217896318 Codirectores: Dra. en C. Celia Guerrero Velázquez C.D.E.O. José María Chávez Maciel Asesora: C.D. Ruth Rodríguez Montaño Guadalajara, Jal. Noviembre 2019 GUADALAJARA, JAL. ****MES*** 2019 SEDE Instituto de Investigación en Odontología Especialidad en Odontopediatría Departamento de Clínicas Odontológicas Integrales División de Disciplinas Clínicas Centro Universitario de Ciencias de la Salud Universidad de Guadalajara Guadalajara, Jalisco. México DEDICATORIA A Dios por protegerme durante todo mi camino y darme fuerzas para superar los obstáculos y dificultades a largo de estos dos años lejos de casa. Con mucho cariño a mis padres Tonatiuh U. Noyola Isgleas y Virginia Sánchez Hernández quienes me dieron la vida y han estado conmigo en todo momento. Los quiero con todo mi corazón y este trabajo es para ustedes, solo quiero devolverles un poco de todo lo que ustedes me han dado. A María Fernanda Noyola eres la mejor amiga, confidente y hermana que la vida me pudo dar. A mi abuelita Virginia Hernández por todo el amor incondicional, siempre soñé que estarías con nosotros para compartir momentos como este y siempre quiero tenerte a mi lado. A mi novio Angel A. García por aparecerse en mi camino y no dejarme sola desde aquel día, nos convertirnos en un apoyo mutuo y estoy muy orgullosa de lo que hemos logrado. A mi tutora Celia Guerrero por siempre estar presente y compartir conmigo todos sus conocimientos. A mi coordinador de la especialidad José María Chávez por brindarme la oportunidad y ser siempre el faro que nos guiaba. AGRADECIMIENTOS Agradezco a Dios que fue mi principal apoyo, por haberme dado la fuerza y valor para culminar esta etapa de mi vida. Gracias por todo papá y mamá por darme una carrera y ahora una especialidad porque desde el día que les comenté la idea de estudiar en otro estado me dieron la mano y siempre no importando la distancia, hora o día siempre estuvieron presentes y creyeron en mí. Gracias a la Universidad de Guadalajara por haberme permitido formarme en ella. A mi posgrado, por todo el aprendizaje y experiencias. A mis compañeros y maestros, gracias todos ustedes, fueron ustedes los responsables de realizar su pequeño aporte, que el día de hoy se ve reflejado en la culminación de mi paso por esta Universidad. Al centro de investigación en Odontología por permitirme utilizar sus instalaciones y el apoyo para la realización de este proyecto. A Rita y Ruth por ser partícipes y siempre brindarme su me apoyo, tiempo y atención durante todo el proceso. A mi gran tutora la Dra. Celia Guerrero, por inspirarme a conocer más y que cada detalle de sus explicaciones. Gracias por creer en mí, le agradezco su apoyo y dedicación. Gracias Doctor José María Chávez se convirtió en más que nuestro maestro, instructor y padrino se convirtió en un amigo que siempre nos apoyó, infinitas gracias. Nunca consideres el estudio como una obligación, sino como una oportunidad para penetrar en el bello y maravilloso mundo del saber. Albert Einstein http://www.proverbia.net/citasautor.asp?autor=327 ÍNDICE I. INTRODUCCIÓN............................................................. 1 II. MARCO TEÓRICO…………............................................ 3 III. ANTECEDENTES CIENTÍFICOS…….…........................ 21 IV. JUSTIFICACIÓN……………………………………………. 23 V. HIPÓTESIS…………….……………………………………. 24 VI. OBJETIVOS................................................................................................. 25 GENERALES................................................................................................................ 25 ESPECÍFICOS.............................................................................................................. 25 VII. MATERIAL Y MÉTODOS…….……………………………. 26 TIPO DE ESTUDIO ..................................................................................................... 26 UNIVERSO DE ESTUDIO............................................................................................. 26 TAMAÑO DE LA MUESTRA ........................................................................................ 26 TIPO DE MUESTREO.................................................................................................. 26 CRITERIOS DE SELECCIÓN ...................................................................................... 26 VARIABLES………………………………....................................................................... 28 MÉTODO DE RECOLECCIÓN...................................................................................... 28 ANÁLISIS ESTADÍSTICO..............................................................................................36 VIII. ORGANIZACIÓN DE INFORMACIÓN….……………..…. 36 RECURSOS MATERIALES.......................................................................................... 36 ASPECTOS ÉTICOS..................................................................................................... 37 CONSIDERACIONES DE BIOSEGURIDAD................................................................. 37 SEDE DEL ESTUDIO ................................................................................................... 37 IX. RESULTADOS……………………………………………… 39 X. DISCUSIÓN ………………………………………………… 42 XI. CONSLUSIÓN ………………………………..................... 44 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS………………………... 45 ANEXOS…………………………….…………………………. 50 1 I. INTRODUCCIÓN La aparición de los dientes es uno de los aspectos más fáciles de observar durante el desarrollodel niño, la erupción dentaria es el movimiento del diente desde su posición de desarrollo dentro del proceso alveolar, hasta que alcanza una situación funcional dentro de la cavidad oral (Barbería, 2001). Por otra parte, la oclusión dentaria se refiere a la relación y contacto de los dientes en función y para-función. Esta disposición dental ha sido clasificada en 3 tipos según Angle quien estableció una clasificación basada en la relación de cúspides entre los primeros molares superiores e inferiores, la cual ha sido tomada como patrón de referencia clasificándolas en: Clase molar I, Clase molar II y Clase molar III (Silva, 2012). Dicho esto, nos genera un interés la realización de esta investigación a través de la búsqueda de información acerca de las interleucinas participantes en los procesos de reabsorción dental, y cómo interfieren en el proceso de determinación de su relación molar siendo que estos ocurren en la vida de todos los seres humanos en la edad infantil. Por tanto, al ser un tema relacionado con el área de Odontopediatría, se considera que tiene una gran relevancia ya que aún no se tiene claro cómo intervienen. Tanto en la erupción como en la reabsorción dental interactúan distintas moléculas, entre ellas el sistema RANK-RANKL-OPG, sistema en el cual ocurre la osteoclastogenesis. Además, la expresión de RANKL se regula positivamente por citoquinas inflamatorias, tales como TNF-α, interleucina-1β (IL-1β), IL-6, IL-17 e IL- 23 (Zhang YH, 2001; Ju JH, 2008). En este estudio se eligió observar la concentración de la interleuciona-23 (IL-23), siendo esta, una citocina proinflamatoria que interfiere durante los procesos de remodelación ósea. Se seleccionaron 29 niños con dentición mixta temprana con un rango de edad entre los 6 a 10 años en los cuales se evaluó su relación molar, se incluyeron 19 pacientes con clase molar I y 10 pacientes con clase molar II. Se tomaron 2 muestras de saliva. Las cuales posteriormente fueron analizadas por medio del método ELISA para la determinación de interleucina 23 (IL-23). Se planteó determinar la presencia de IL-23 en saliva de niños con dentición mixta temprana con clase molar II, en comparación con la clase I. Sin embargo, encontramos resultados distintos a los planteados en la hipótesis de investigación, ya que al ser evaluados no se encontraron diferencias estadísticamente significativas lo que puede deberse a distintos factores, como pueden ser variables como la edad, el sexo, su clase molar o reconocer que está molécula actúa de manera activa en distintas zonas de la boca durante esta etapa sin mantener algún patrón. 3 II. MARCO TEÓRICO El desarrollo de los órganos dentarios humanos aparece sucesivamente en dos clases de dientes: los dientes primarios (deciduos o de leche) y los permanentes o definitivos. Ambos se originan de la misma manera y presentan una estructura histológica similar. Los dientes se desarrollan a partir de brotes epiteliales, normalmente, que comienzan a formarse en la porción anterior de los maxilares y continúan su crecimiento en dirección posterior. Poseen una forma determinada de acuerdo con el diente al que darán origen y tienen una ubicación precisa en los maxilares, pero todos poseen un plan de desarrollo común que se realiza en forma gradual y paulatina. Las dos capas germinativas que participan en la formación de los dientes son: el epitelio ectodérmico, que origina el esmalte, y el ectomesénquima que forma los tejidos restantes (complejo dentinopulpar, cemento, ligamento periodontal y hueso alveolar). (Gómez de Ferraris M, 2009). Posteriormente, se forman 10 crecimientos epiteliales en lugares específicos dentro del ectomesénquima de la arcada maxilar, en sitios genéticamente predeterminados que corresponderán a los 20 gérmenes deciduos y, más adelante, a los 32 gérmenes de la dentición permanente que estarán ubicados por lingual o palatino en relación a los elementos primarios. (Gómez de Ferraris M, 2009; Nanci A, 2013; Kumar G, 2011). Los gérmenes dentarios siguen una serie de etapas que serán descritas a continuación: Estadios de desarrollo de órganos dentarios: -Brote o yema Consiste en una proliferación de células ectodérmicas en la lámina dental, originándose un engrosamiento que constituye el primordio, botón dental u órgano del esmalte (Fig. 1). Al mismo tiempo que el ectomesénquima, que rodea a esta 4 estructura, se condensa formando el saco o folículo dentario (Kumar G, 2011; Nanci A, 2013; Sahli C, 2014). Fig. 1. Estadio de brote. Estructuras del órgano del esmalte que se distinguen durante el estadio de yema o brote (Gómez de Ferraris, M, 2009). -Estadio de casquete o caperuza La proliferación desigual del brote formará una concavidad que adquiere el aspecto de un casquete (Fig.2a). En su concavidad central encierra una porción del ectomesénquima que lo rodea, lo que será la futura papila dentaria que dará origen al complejo dentinopulpar. El folículo o saco dental (FD) es formado en este estadio, proviene de células progenitoras ectomesenquimales de la cresta neural craneal (Fig. 2b). Además de su importancia para el desarrollo del periodonto, el FD también es crítico para la coordinación del proceso de la erupción dental ya que regula la osteoclastogénesis y la osteogénesis. (Chai Y, 2000; Ten Cate, A 1997; Slater L, 2000). El FD consiste en el tejido que rodea la papila dental y el órgano del esmalte, que dará origen a las estructuras de soporte (cemento, ligamento periodontal y hueso alveolar) (Chiego D, 2014). Cartílago de Meckel Brote o yema (futuro órgano del esmalte) Trabéculas óseas Condensación del mesénquima Mesénquima Epitelio bucal 5 Fig. 2. Estadio de casquete. Estructuras del órgano del esmalte que se distinguen durante el estadio de casquete inicial (a) y terminal (b). (Gómez de Ferraris, M, 2009). -Estadio de campana Ocurre sobre las 14 a 18 semanas de vida intrauterina. La depresión ocupada por la papila dental se profundiza hasta que el órgano del esmalte adopta una forma parecida a una campana (Fig. 3). Durante esta etapa, la corona del diente adquiere su forma final (morfo-diferenciación). El órgano del esmalte presenta una nueva capa: el estrato intermedio, que tendrá un papel esencial para la formación del esmalte (Kumar G, 2011; Nanci A, 2013; Chiego D, 2014). Mesénquima Papila dentaria Saco dentario indifere Cuerda del esmalte Órgano del esmalte Epitelio externo Retículo estrellado Epitelio interno Epitelio bucal Mesénquima Papila dentaria Saco dentario indiferenciado Lámina dentaria Órgano del esmalte Epitelio externo Retículo estrellado Epitelio interno a) b) 6 Fig. 3. Estadio de campana. Estructuras del órgano del esmalte que se distinguen durante el estadio de campana. (Gómez de Ferraris, M, 2009). -Estadio terminal o de folículo dentarío (aposicional) Se caracteriza por el comienzo de la mineralización y la formación de raíces. (Kumar G, 2011), así como del folículo dentario (FD), ocurre la activación de genes que guiarán cada yema dental para desarrollar un diente de determinado tamaño y forma (Tzaifas D, 2000). El FD de los dientes sucesores permanentes y el ligamento periodontal (LPD) desempeñan papeles importantes en la reabsorción de la raíz, así como en la erupción dental (Wise G, 2002; Marks S, 1987; Larson E, 1994; Fukushima H, 2003). El LPD realiza funciones de soporte de dientes, nutrición dental, homeostasis y reparación de tejidos dañados, además de unir el órgano dentario al hueso alveolar (Kim K, 2016; Bartold P, 2000; Pitaru S, 2002; Shimono M, 2003). Está compuesto por varios tipos de células,incluyendo fibroblastos, cementoblastos, células vasculares, células nerviosas, osteoblastos y osteoclastos (Kim K, 2016; Beertsen W, 1997). 7 Desde 1930, Kronfeld sugirió que el FD es responsable de la reabsorción de la raíz del diente primario (Harokopakis E, 2007). Esto fue demostrado en estudios realizados por Cahill y Marks en 1980, reafirmando la influencia de esta estructura en este proceso. En 1984 continuaron sus investigaciones en perros, realizando estudios con eliminación del órgano dentario (O.D), sustituyéndolo con diversos materiales y manteniendo el FD intacto en los maxilares, teniendo como resultado la erupción de los materiales implantados, a pesar de la ausencia del O.D. De esta forma, demostraron el potencial de erupción gracias a la presencia del FD, poniendo en evidencia que ésta estructura y no el O.D, participa en el proceso de erupción. Por tanto, se sabe que el FD participa en la erupción de los dientes como un tejido diana para atraer a las células mononucleares y proporcionar un medio por el cual estas células pueden fusionarse para formar osteoclastos, además de tener una ubicación ideal para regular los eventos celulares de la erupción y para recibir señales desde el diente (Kim K, 2016; Beertsen W, 1997; Cahill D, 1980). -Desarrollo y formación del patrón radicular En la formación de la raíz, la vaina epitelial de Herwig desempeña un papel fundamental como inductora y modeladora de la raíz del diente. La vaina epitelial es una estructura que resulta de la fusión del epitelio interno y externo del órgano del esmalte sin la presencia del retículo estrellado a nivel del asa cervical. La vaina prolifera en profundidad en relación con el saco dentario por su parte externa y con la papila dentaria íntimamente. En este momento las células muestran un alto contenido de ácidos nucleicos, relacionado con la división o mitosis celular. Al proliferar, la vaina induce a la papila para que se diferencien en la superficie de la mesénquima papilar, los odontoblastos radiculares. Cuando se deposita la primera capa de dentina radicular, la vaina de Hertwig pierde su continuidad, es decir, que se fragmenta y forma los restos epiteliales de Malassez, 8 que en el adulto persisten cercanos a la superficie radicular dentro del ligamento periodontal. (Gómez de Ferraris, M, 2009). ERUPCIÓN DENTARIA La erupción del diente es el proceso mediante el cual los dientes en desarrollo emergen a través de los tejidos blandos y de la mucosa que los recubre para penetrar en la cavidad bucal, contactar con los dientes de la arcada opuesta y actuar durante la masticación. Este proceso se inicia tan pronto como concluye la formación coronaria y la formación radicular. En realidad, la erupción es un proceso continuo que termina sólo con la pérdida del diente, siendo de esta manera un proceso complejo y estrechamente regulado, que involucra células del órgano dental y el alvéolo circundante (Chiego D, 2014; Wise G, 2002). En 1960 mediante un estudio radiológico (Donald B, 1960) se observó que, posterior a la formación de la corona, cada diente comienza a moverse en sentido axial y al alcanzar la longitud radicular entre la mitad y las 2/3 partes de su longitud final, la corona se acerca a la cavidad oral llegando a perforar la encía, ambos epitelios (oral y dentario) se fusionan, se queratinizan y se hunden exponiendo el diente, determinando el momento de la erupción fisiológica (Barbería, LE, 2001). En la erupción dentaria se distinguen tres fases. La pre-eruptiva- que consiste en el periodo en el cual la raíz dental empieza su formación y comienza a moverse hacia la superficie en la cavidad bucal. Durante la segunda fase, –eruptiva pre-funcional, ocurre el surgimiento o aparición del diente a través de la encía, en este estadio la raíz siempre tiene la mitad o dos tercios de su longitud. Y la tercera –eruptiva funcional o post eruptiva-, ocurre una vez que erupciona el órgano dentario dentro de la cavidad bucal y se encuentra con su antagonista del arco opuesto (Fig. 4) (Muñoz E, 2010; Chiego D, 2014; Nanci A, 2013). Este proceso se realiza en 2 etapas: Durante la primera tiene lugar la erupción del 1er molar permanente, seguido de los incisivos centrales inferiores, superiores y los laterales. Durante la segunda etapa se presenta el periodo de 9 recambio en los sectores laterales hasta su completa erupción y finalización (Boj J, 2005). Fig. 4. Etapas de erupción dentaria. A. Movimientos pre-eruptivos, B. Movimientos eruptivos prefuncionales, C. Diente en erupción y D. Diente erupcionado (Gómez de Ferraris, M, 2009). TEORÍAS DE LA ERUPCIÓN DE LOS DIENTES Se han propuesto cuatro mecanismos como posibles responsables de la erupción dentaria, sin embargo, el mecanismo exacto se desconoce aún, ya que es un fenómeno multifactorial en el que interviene un conjunto de agentes biológicos y es imposible discriminar la aportación de cada uno de ellos (Gomez de Ferraris M, 2009; Canut J, 2005). a) Hipótesis de la presión vascular: El diente hace erupción porque la presión vascular intradentaria es mayor que la de los líquidos que le rodean. b) Hipótesis del crecimiento radicular: Se ha sugerido que el propio crecimiento dentario sería la fuerza responsable de la erupción. c) Hipótesis de la tensión intraligamentosa: La tensión de las fibras colágenas periodontales tirarían del diente haciendo tracción de él hacia el exterior del alveolo. B. A. C. D. 10 d) Teoría de la remodelación ósea: Por resorción y aposición de tejido óseo, que desplazaría el diente hacia la zona oclusal. (Gomez de Ferraris M, 2009; Kumar G, 2011; Canut J, 2005). REABSORCIÓN DENTAL Se piensa que la resorción es el efecto de la inflamación sobre un tejido mineralizado y que la reabsorción dental es una consecuencia que sigue a un proceso inflamatorio del ligamento periodontal y/o la pulpa del diente (Fig. 5). Según este criterio, toda resorción sería un proceso mediado por complejas interacciones entre factores humorales locales (citocinas) y elementos celulares (monocitos y osteoclastos multinucleados) especializados en la destrucción de tejidos duros (Li J, 2014; Ne R, 1999). Fig.5. Reabsorción radicular de diente primario (Gómez de Ferraris, M, 2009). Este proceso es realizado mediante células específicas como son los osteoclastos y odontoclastos. Por tal razón, es importante definir estas células que juegan un papel fundamental tanto en la erupción como en la reabsorción dental (Cuadro I). 11 Cuadro I. Principales diferencias entre Osteoclastos y Odontoclastos Fuente: (Kumar G, 2011; Bozec A, 2017; Zeng H, 2016; Rafea M, 2012.) ERUPCIÓN DENTARIA El periodo de dentición mixta es considerado, en el desarrollo de la oclusión, como el periodo de más cambios de importancia para determinar una oclusión normal. La dentición mixta se inicia a partir de los seis años con la erupción del primer diente permanente y se termina con la exfoliación del último diente temporal, para completar así, la dentición permanente. (Bordoni N, 2010). Osteoclastos Odontoblastos Origen A partir de células mononucleares precursoras hematopoyéticas Posiblemente igual que los osteoclastos Tamaño Dependiendo del número de núcleos: pequeños (3 a 5 N), grandes (6-10 N), gigantes (10 o más Ns) Menor que osteoclasto y menor número de núcleos Factores reguladores Ligando al Receptor activador nuclear Kappa (RANKL). Factor estimulante de colonias de macrófagos (M-CSF), vitamina D, hormona paratiroidea (PTH), factor de necrosis tumoral α (TNF α) RANKL, retículo estrellado Factores que inhiben su diferenciación Factores de crecimiento TGF-beta, estrógenos, interferón, osteoprotegerina (OPG) OPG Ubicación Se encuentran en fosas en la superficiedel hueso llamados túneles de Havers >200 μm Superficie radicular y menor presencia en canal radicular y cámara pulpar Función Extraer la matriz calcificada del hueso, disolver los cristales de fosfato cálcico y digerir colágeno Resorción de cemento, dentina y esmalte Vía de acción Liberación de enzimas como catepsina y mayormente TRAP (fosfatasa acida tártaro- resistente) Enzimas hidrolíticas, lisosomas o proteínas como catepsina K y MMP-9 12 El movimiento de los dientes durante el proceso de erupción ocasiona el desarrollo del hueso alveolar (Proffit WR, 2009). A nivel de los arcos dentales se produce un crecimiento en sentido sagital, transversal y vertical que ha sido mostrado por diversos estudios y autores; Moyers y Van der Linden determinaron cambios importantes y significativos de cómo se da el crecimiento en sentido transversal en el maxilar inferior por la erupción de los incisivos laterales y un aumento del ancho intercanino por la erupción de los dientes anteriores. En la región posterior, se presenta un aumento transversal por el crecimiento de los procesos alveolares al erupcionar los primeros molares (Moyers, 1992; Van der Linden F,1983). El desarrollo y la erupción dental se ajustan a unos patrones similares en todos los dientes, pero ocurren a un ritmo diferente en cada uno de ellos; este proceso se da mediante movimientos fisiológicos en tres fases: pre-eruptiva, eruptiva pre-funcional y eruptiva funcional. En la fase eruptiva pre-funcional, los dientes contactan con sus antagonistas, establecen la oclusión e inician así la fase eruptiva funcional (Gómez de Ferraris M, 2009). Este proceso que está dispuesto dentro de la edad cronológica del paciente y puede tener diferencias en tiempos de erupción asociados a múltiples factores que ocasionan el retraso de la erupción dental (Sanabria A, 2006; Cuadros C, 2008). Este proceso de erupción esta genéticamente determinado al estar asociado con genes como el POST, RUNX2, AMELX, información que se ha tomado de estudios con grupos familiares que han presentado alteraciones en la erupción dental. Por eso, se ha sugerido que el tiempo de erupción depende de la herencia, el metabolismo óseo, el periodo del desarrollo y la posición fetal, las hormonas, la raza, la nutrición, las enfermedades que ha sufrido el individuo y una diversidad de factores locales (Rajic Z, 2000; Frazier-Bowers S, 2009). La cronología de la erupción también se puede ver afectada por factores sistémicos, patologías endocrinas, radiación o síndromes como displasia cleidocraneal y síndrome de Down (Kochar R, 1998). Es tan abundante la información a este respecto que cada día se reportan nuevos síndromes craneofaciales y en muchos de ellos se observa 13 como características importantes los desórdenes en la erupción dental (Dikoglu E, 2015; Frerreira S, 2015). La cronología de erupción hace referencia al tiempo aproximado en años y meses en que debe erupcionar un diente, aunque existen diversas tablas según la población, se conoce que no existe un tiempo específico para que cada diente erupcione por lo que se habla de un rango promedio en que deben erupcionar los dientes y se encuentran diferencias de hasta un año entre un individuo y otro (Fig.6). Este indicador de erupción es un método de valoración del desarrollo dentario, estudios como el de Hagg y Hagg, en población sueca, mostraron una buena correlación entre la erupción y el desarrollo dental (Hagg U, 1986). El proceso de recambio dentario dura entre seis y ocho años, en los que coexisten en la boca dientes deciduos y permanentes, consta de dos fases: en la primera fase exfolian los ocho incisivos temporales centrales y laterales superiores e inferiores que son sustituidos por los permanentes; en esta etapa también emerge el primer molar permanente. Este período se conoce como dentición mixta de primera fase o primer periodo transicional. La segunda fase comprende la exfoliación de caninos y molares deciduos reemplazados por los caninos y premolares permanentes. La edad promedio oscila entre los 9 y 13 años donde también erupciona el segundo molar permanente, este periodo se conoce como dentición mixta de segunda fase o segundo periodo transicional (Cañon OL, 2010; Van der Linden F, 1983). La edad cronológica para la erupción de los dientes permanentes es seis años al iniciar así el primer periodo transicional, entre los 6 y 7 años emergen los incisivos centrales inferiores, entre 7 y 8 años aparecen los incisivos centrales superiores e incisivos laterales inferiores, y entre 8 y 9 años erupcionan los incisivos laterales superiores. A partir de los 9 y 10 años empieza el segundo periodo transicional con la erupción de los caninos inferiores, entre los 10 y 11 años emergen los primeros premolares superiores e inferiores, a los 11 y 12 años se da la erupción de los caninos superiores y segundos premolares inferiores, y este 14 periodo finaliza entre los 11 y 13 años con la erupción de los segundos molares inferiores y por último, los segundos molares superiores (Fig.6) (Van der Linden F, 1983). Fig. 6. Cronología de erupción. Edades de erupción de los dientes permantes (American Dental Association, 2012). SECUENCIA DE ERUPCIÓN La secuencia de erupción, hace referencia al orden en que deben erupcionar los dientes en cada maxilar, se conoce que debe existir un orden específico de tal manera que permita un desarrollo normal de la oclusión. En el maxilar superior, la secuencia de erupción de la dentición permanente se da a partir de la erupción del primer molar, la emergencia de los incisivos centrales, laterales, el primer bicúspide o premolar, segundo premolar, y posteriormente se observa la erupción del canino y segundo molar (Cañon OL, 2010; Bruna M, 2011). En el maxilar inferior, la secuencia de erupción dental normalmente inicia igual que en el superior con la erupción del primer molar, continuando con los incisivos centrales y laterales, pero a diferencia del maxilar superior el diente 15 siguiente en erupcionar es el canino, continuando con el primer premolar, segundo premolar y segundo molar inferior permanente (Cañon OL, 2010). Al respecto de la secuencia de erupción, se ha observado que, si bien existe un patrón general, no todos los individuos obedecen a la misma secuencia. Las variaciones más representativas se observan en relación con el sexo del individuo. Múltiples estudios coinciden en que los procesos eruptivos inician primero en las niñas con una coincidencia del lado derecho e izquierdo (Abarrategi I, 2000; Romo R, 2002). Al analizar los factores locales que determinan esta secuencia se ha reportado que la presencia de caries dental y factores asociados a la perdida prematura de dientes deciduos pueden alterarla si se compara el lado derecho con el izquierdo (Moslemy M., 2004; Adler P, 1963). CLASE MOLAR Los primeros molares superiores son la llave de la oclusión, estos deberían relacionarse de modo tal que la cúspide mesio-vestibular del primer molar superior corresponda anteroposteriormente con el surco vestibular principal del primer molar inferior. Clasificación de la oclusión de Angle La clasificación de la oclusión original de Angle está basada en la relación anteroposterior entre los primeros molares permanentes superiores e inferiores (Angle E.,1899). En la oclusión Clase l, la cúspide mesiobucal del primer molar superior ocluye con el surco bucal del primer molar inferior (Fig. 7a). La oclusión Clase I puede ser dividida adicionalmente en oclusión normal y maloclusión. Ambos subtipos tienen la misma relación molar pero esta última también está caracterizada por apiñamiento, rotaciones u otras irregularidades posicionales. 16 La oclusión Clase II es cuando la cúspide mesiobucaldel primer molar superior ocluye anterior al surco bucal del primer molar inferior (Fig. 7b). Existen dos subtipos de la oclusión Clase II. Ambos presentan una relación molar Clase II, pero la diferencia radica en la posición de los incisivos superiores. En la maloclusión Clase II división 1, los incisivos superiores están inclinados labialmente, creando una sobremordida horizontal significativa. Por el contrario, los incisivos centrales superiores están inclinados lingualmente y los incisivos laterales están labialmente inclinados en la maloclusión Clase II división 2. Cuando se mide desde los primeros incisivos, la sobremordida horizontal está dentro de los límites normales en los individuos con maloclusión Clase II división 2. Fig. 7. Clases molares. A. Clase molar I, normalidad, B. Clase molar II y C. Clase molar III. La maloclusión Clase III es opuesto a la Clase II: la cúspide mesiobucal del primer molar superior ocluye más posterior que el surco bucal del primer molar inferior (Fig. 7c) (Angle E.,1899). Moléculas involucradas en la reabsorción ósea y erupción dental El equilibrio entre la osteoclastogénesis y la osteoblastogénesis dependen de los niveles de las citocinas, así como la diferenciación de los osteoblastos y osteoclastos (Yildirim S, 2008). Su diferenciación y su función están reguladas por unos factores que provienen de células madre de la médula. Los dos factores fundamentales son: el RANK (receptor activador del factor nuclear kappa B) y su ligando (RANKL), que estimulan la formación y actuación de los osteoclastos; y, por A. B. C. 17 otro lado, actúa la osteoprotegerina (OPG), que es un receptor señuelo para RANKL y que inhibe la osteoclastogénesis (Yildirim S, 2008; Harokopakis-Hajishengallis, 2007; Cordeiro, 2011; Fukushima, 2003). Por lo tanto, la osteoclastogénesis estaría regulada por la actividad complementaria de RANKL y OPG (Yildirim S, 2008; Harokopakis-Hajishengallis, 2007; Fukushima, 2003; Tyrovola, 2008). El factor estimulador de colonia de macrófagos (CSF-1 o M-CSF) es otro factor importante implicado en la acción de los osteoclastos. Es un factor de crecimiento hematopoyético producido por fibroblastos, células endoteliales, macrófagos y monocitos. Está involucrado en el crecimiento, supervivencia, diferenciación y proliferación de células hematopoyéticas (macrófagos, fibroblastos, células endoteliales y osteoclastos) y células no hematopoyéticas. Uno de los mecanismos de acción del CSF-1 es la regulación de RANK en las células precursoras de osteoclastos y la reducción de la expresión de los genes de OPG (Harokopakis-Hajishengallis, 2007; Tyrovola, 2008). La acción de RANKL junto con la de CSF-1 promueve la formación de los osteoclastos y su posterior fusión, diferenciación y actuación (Harokopakis- Hajishengallis, 2007; Tyrovola, 2008). Los efectos biológicos de RANKL se producen al unirse con RANK. Los efectos de OPG son contrarios a los de RANK, ya que actúa sobre un receptor que neutraliza a RANKL, evitando la unión RANK- RANKL (Tyrovola, 2008). El sistema RANK / CSF-1 / OPG es la clave para la regulación de las citoquinas que regulan la masa ósea (Yildirim S, 2008). También se ha observado la presencia de CSF-1 durante la reabsorción radicular fisiológica (Yildirim S, 2008). Además, hay unos factores citotrópicos que son la proteína de la parathormona (PTHrP), interleukina-1α (IL-α), IL-6, prostagladina E-2 (PGE2), 1,25-dihidroxivitamina D3 y factor de crecimiento-β1. Estos factores estimulan la expresión de RANKL durante la erupción del diente permanente y la regulan. 18 Además, la expresión de RANKL se regula positivamente por citoquinas inflamatorias, tales como TNF-α, interleucina-1β (IL-1β), IL-6, IL-17 e IL-23 (Zhang YH, 2001; Ju JH, 2008). Interleucina 23 (IL-23) La IL-23 es una citocina heterodimérica pertenece a la familia de la interleucina 12 (IL-12). La IL-12 está formada por las subunidades p35 y p40, sin embargo, se descubrió una subunidad no relacionada con la p35 (p19) y que era capaz de acoplarse a la subunidad p40, que se une al receptor IL-23 (IL-23R) el cual está constituido por una subunidad llamada IL-23R que forma un complejo con la subunidad beta 1 del receptor a IL-12 (IL-12Rb1). La IL-23 es producida por células dendríticas y macrófagos activados (Fig. 8) (Oppmann B, 2000, Wiekowki MT, 2001). Figura 8. IL-23 y su receptor. La IL-23 está formada por la subunidad P19 y P40. La P19 se une a la subunidad del receptor a IL-23 (IL-23R) y la P40 se une al IL-12-Rβ. La señalización del IL- 23R se genera a través de la ruta de las JAK2 y Tyk2 y las STAT3 y STAT4 de: Teng M., & col, 2015. La IL-23 se une a su receptor específico (IL-23R) para activar y mantener la clona, de esta manera las TH-17 producen IL-17 y RANKL. (Harrington, 2005). El IL-23R también puede presentarse en forma soluble (IL-23Rs) por corte y empalme alternativo o mediante la escisión desde la membrana por adamalisinas. (Kan, 2008; Franke, 2016) 19 La señalización a través del IL-23R es por las Janus cinasa 2 (JAK2) y tirosina cinasa 2 (tyk2), la cual activa STAT3 permitiendo la sobrerregulación de RORγT y subsecuentemente se incrementa la producción de IL-17. (Yang, 2011) De esta manera, la IL-17 producida por las Th17 se une a los fibroblastos a través de su receptor induciendo la producción de RANKL. Tanto el RANKL producido por las células Th17 y por los fibroblastos activa los preosteoclastos para su diferenciación en osteoclastos maduros, los cuales se encargan de la reabsorción ósea (Figura 9). (Ghoreschi, 2010; Hajishengallis, 2014). Fig. 9. Modelo del proceso ocurrido en la erupción dental. Los órganos dentarios de la dentición temporal en el periodo de recambio dental inducen la secreción de citocinas proinflamatorias como IL-23 por parte de las células dendríticas. La IL-23 se une a su receptor específico (IL-23R) en células Th17 ayudando a mantener la clona e induciendo la producción de IL-17 y RANKL. Por otra parte, la IL-17 se une al IL-17R en fibroblastos y estos secretan RANKL. El RANKL producido por las Th17 o fibroblastos activan a los preosteoclastos para su diferenciación en osteoclastos maduros los cuales se encargan de la reabsorción ósea alveolar. Las células precursoras de osteoclasto por su parte aumentan el número de osteoclastos y estimulas la reabsorción y erupción dentaria de los órganos dentales permanentes. (Modificado de Takahashi K, 2005; Vernal R; 2006; Hajishengallis G, 2013). Cel. precursoras de osteoclasto CSF-1 EMAP II MCP-1 20 La IL-23 estimula la síntesis de IL-17, que promueve la síntesis de otras citoquinas proinflamatorias (incluyendo IL-1 y TNF). Durante la inflamación, IL-17 se produce principalmente por un grupo de células T CD4 + activadas llamado Th17 células (3), γ δ células T, macrófagos y dendríticas, mieloide, y células linfoides. Células Th17 pueden secretar una gran cantidad de citocinas además de IL-17, incluyendo el factor de necrosis tumoral α ( TNF α), IL-21 (que puede actuar como un factor autocrino de expansión del linaje Th17 de conducción), e IL-22 (Gaffen SL, 2014). Es importante destacar que, IL-17A aumenta el RANKL (activador del receptor de NF κ ligando B) expresión en osteoblastos, indicando un papel en la remodelación ósea (Suzuki E, 2014). 21 III. ANTECEDENTES CIENTÍFICOS Varios autores han intentado definir el mecanismo por el cual se produce la reabsorción dental. Se conoce que en este proceso está involucrado el sistema RANK/RANKL/OPG, en donde la expresión de RANKL se regula positivamente por citoquinas inflamatorias, tales como TNF-α, interleucina-1β (IL-1β), IL-6, IL-17 e IL- 23 (Zhang YH, 2001; Ju JH, 2008).Aunque pocos estudios se han centrado en la expresión de estas moléculas en dientes humanos. Cabe destacar, que todos estos estudios se realizaron a través de órganos dentarios extraídos de pacientes humanos y examinando las expresiones de RANK/RANKL/OPG, ninguno de estos fue realizado determinado la influencia de las interleucinas inflamatorias en el proceso eruptivo. En este sentido, Fukushima et al. examinó la expresión de RANKL y OPG en células del LPD humano en dientes extraídos durante la reabsorción fisiológica radicular, obteniendo como resultado que las células LPD durante el estado de reabsorción de la raíz expresan RANKL, pero disminuyen la expresión de OPG, concluyendo que la expresión de RANKL probablemente participa en la odontoclastogénesis y activa la reabsorción fisiológica de las raíces (Fukushima H, 2003). En 2012, mediante inmunohistoquímica, se comprueba la presencia de RANK en osteoclastos y RANKL en la pulpa de dientes primarios, atribuyendo estos resultados a la función de este complejo en el proceso de reabsorción dental y ósea. Sin embargo, sólo se encontraron niveles de RANKL en la membrana periodontal de un solo órgano dentario deciduo. Podemos atribuir esta respuesta a que sólo se midieron los niveles de RANKL unido a membrana y no se consideró el RANKL soluble (Bille M, 2012). Cabe destacar que nuestro centro educativo, en el Instituto de Investigación de Ciencias Odontológicas, se han realizado estudios en relación a los niveles de RANKL. En el primer estudio se midieron los niveles de RANKL en el LCG de primeros molares superiores e inferiores en los sitios mesial y distal en pacientes 22 con dentición mixta que presentaban clase I y clase II molar. En los resultados se observó un comportamiento discrepante de los niveles de RANKL en ambas arcadas en sitios mesiales y distales de los primeros molares superiores e inferiores (Rodríguez M, 2016). En el segundo estudio se determinó los niveles de RANKL en el líquido crevicular gingival de dientes anteroinferiores y primeros molares inferiores de niños con dentición mixta temprana. En los resultados no se encontraron diferencias significativas entre las zonas anterior y posterior ni en las zonas vestibulares y linguales. Sin embargo, se observó una correlación directamente proporcional entre las zonas vestibular y lingual (Vizcaíno L, 2017). 23 IV. JUSTIFICACIÓN El proceso de erupción y recambio dental es un proceso fisiológico que ocurre en el paciente infantil, el cual nos puede ayudar a saber las etapas y como va encaminado el desarrollo de estos pacientes. Sin embargo, este proceso normal podría verse alterado por maloclusiones que se pueden presentar. Por lo cual, consideramos interesante estudiar la IL-23 en saliva como interleucina pro- inflamatoria presente en la osteoclastogénesis y si la cantidad puede presentarse en distintas proporciones de pacientes con clase molar I y II. 24 V. HIPÓTESIS Ho: La presencia de interleucina 23 (IL-23) se encuentra aumentada en saliva de niños con dentición mixta temprana con clase molar II, en comparación con la clase I molar. Ha: La presencia de interleucina 23 (IL-23) se encuentra disminuida en saliva de niños con dentición mixta temprana con clase molar I, en comparación con la clase II molar. 25 VI. OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Determinar los niveles de interleucina 23 (IL-23) en saliva de niños con dentición mixta temprana con clase molar I y II OBJETIVOS ESPECÍFICOS -Medir las concentraciones de interleucina 23 (IL-23) en saliva de niños con dentición mixta temprana con clase molar I y II. -Correlacionar las concentraciones de interleucina 23 (IL-23) en saliva de niños con clase molar I y niños con clase molar II. 26 VII. MATERIALES Y MÉTODOS TIPO DE ESTUDIO Estudio descriptivo, analítico y transversal. UNIVERSO DE ESTUDIO Se incluyeron a 29 pacientes pediátricos (19 con clase molar I y 10 con clase molar II) en rango de edad de 6 a 10 años con dentición mixta temprana. Los cuales presentaron de acuerdo a la clasificación de relación molar del Dr. Angle clase I y II molar en sus primeros molares permanentes, durante el periodo 2018- 2019 en el curso del posgrado en Odontopediatría en la clínica dental del Centro Universitario de Ciencias de la Salud de la Universidad de Guadalajara. Se realizó una toma de muestra de saliva de aproximadamente 5 ml para su evaluación y estudio. TAMAÑO DE LA MUESTRA Se utilizó una fórmula para calcular el tamaño de la muestra, en donde se espera encontrar una diferencia de promedios entre grupos y se conoce la desviación estándar, dada una confiabilidad y un poder del 80%. S12 + R* S22 n = ____________ (Z 1-alfa/2 +Z 1-beta)2 R (X1-X2)2 La fórmula nos arrojó una n=10, sin embargo, incluimos en el grupo clase molar I una n=19 y en el grupo de clase molar II una n=10. TIPO DE MUESTREO Por conveniencia se utilizó un método no probabilístico de colecta por selección consecutiva y análisis de muestras simples. CRITERIOS DE SELECCIÓN: o CRITERIOS DE INCLUSIÓN * Disponer del consentimiento de los padres o tutores para la recolección de saliva y realización del estudio. 27 * Pacientes que asistieron a la Clínica de la Especialidad de Odontopediatría en el Centro Universitario de Ciencias de la Salud de la Universidad de Guadalajara. * Pacientes con dentición mixta temprana en edades de 6 a 10 años. * Pacientes libres de cualquier enfermedad o compromiso sistémico. * Pacientes con primeros molares superiores e inferiores sanos. *Pacientes libres de caries, traumatismos, enfermedad periodontal, amelogénesis, dentinogénesis, etc. * Primeros molares permanentes en oclusión con Clase I y II molar. * Pacientes con ausencia de apiñamiento dental visible severo. * Ausencia de hábitos orales. * Ausencia de síndromes. o CRITERIOS DE EXCLUSIÓN * Pacientes ajenos a la Clínica de la Especialidad de Odontopediatría en el Centro Universitario de Ciencias de la Salud de la Universidad de Guadalajara. * Pacientes con dentición decidua. * Pacientes con alguna enfermedad sistémica o síndrome. * Pacientes que hayan recibido cualquier tipo de tratamiento ortopédico u ortodóncico. * Pacientes con aparatología ortopédica u ortodóncica. * Pacientes que presenten órganos dentarios con alguna patología (caries, traumatismos, enfermedad periodontal, amelogénesis, dentinogénesis, etc.) o CRITERIOS DE ELIMINACIÓN *Pacientes que durante el estudio hayan tomado medicamentos de tipo antiinflamatorios no esteroideos (AINES). * Muestras que sufran un proceso de descongelamiento inadecuado. * Muestras en las que no se logre determinar la molécula de interés. 28 VARIABLES VARIABLE CRITERIO ESCALA ANÁLISIS ESTADÍSTICO Edad (Independiente) 6-10 años Cuantitativa continua Descriptivo: razón proporción % Sexo (Independiente) Masculino o Femenino Cualitativa nominal Descriptivo: razón proporción % Primer Molar Inferior Permanente (PMP) Erupcionada y en oclusión Cualitativa Descriptivo: razón proporción % Incisivo Central Inferior Permanente (ICI) En proceso de erupción o erupcionado Cualitativa Descriptivo: razón proporción % Incisivo Lateral Inferior Deciduo (ILD) En proceso de erupción o erupcionado Cualitativa Descriptivo: razón proporción % Clase molar Clase molar I y II Cualitativa Descriptivo: razón proporción % IL-23 (Dependiente) pg/µL de LCG Cuantitativa continua Descriptivo: medidas de tendencia central (media, DE, mediana, moda) MÉTODOS DE RECOLECCIÓN o OBTENCIÓN DE SALIVA Sesolicitó al paciente salivar dentro de un contenedor estéril de 100 mL por aproximadamente por 1 a 2 minutos, se rotularon los contenedores. Y se colocaron en hielo frappé, para trasladarse al instituto de investigación de odontología. Se recolectó la saliva de los contenedores y se distribuyó en tubos eppendorf. En seguida los tubos se centrifugaron a 12,000 rpm durante 15 minutos a 4°C. 29 Posteriormente los tubos se colocaron en hielo frappé. Enseguida se separó 1mL de sobrenadante de saliva en un tubo eppendorf con una micropipeta de 100 L, teniendo cuidado de no tomar el sedimento. Después se agregaron 20 µl de PBS+ inhibidor de proteasas (Roche Corporation). Posteriormente los tubos se agitaron en el vórtex durante 5 segundos (en este paso los tubos se colocaron en hielo frappé). Método de ELISA Los niveles de interleucina 23 en saliva obtenidos se analizaron por medio de la prueba ELISA (Human IL-23, DuoSet ELISA, 5 Plate. R&D System a bio-techne brand, Minneapolis, MN. USA). - Materiales contenidos en el kit: 1. IL-23 Humano. Anticuerpo de captura (1 vial, 360 μg) 2. IL- 23 Humano. Anticuerpo de detección (1 vial, 24.0 μg) 3. IL-23 Humano. Estándar (1 vial, 520 ng) 4. Estreptavidina- HRP (1 vial, N/A) - Otros materiales y soluciones requeridas: 1. Kit de reactivo auxiliar DuoSet 2 (5 placas): (Catálogo # DY008) que contiene microplacas de 96 pocillos, selladores de placa, solución de sustrato, solución de parada, tampón de recubrimiento de placa (PBS), tampón de lavado y concentrado de diluyente de reactivo 2. Los componentes enumerados anteriormente se pueden comprar por separado: 1. PBS: (Catálogo # DY006), o NaCl 137 mM, KCl 2.7 mM, Na2HPO4 8.1 mM , KH2PO4 1.5 mM , pH 7.2 - 7.4 2. Buffer de lavado filtrado 0.2 µm: (R&D Systems, Catálogo #WA126), o 0.05 % Tween ® 20 en PBS, pH 7.2-7.4 3. Diluyente de reactivo: (R&D Systems, Catálogo # DY995), o BSA al 1% en PBS, pH 7.2-7.4 30 4. Solución de sustrato filtrada de 0.2 µm: mezcla 1: 1 de Reactivo de color A (H2O2) y Reactivo de color B (Tetrametilbencidina) (R&D Systems, Catálogo # DY999) 5. Solución de parada: 2 N H2SO4 (R&D Systems, Catálogo # DY994) 6. Microplacas: Sistemas de I + D (R&D Systems, Catálogo # DY990) 7. Selladores de placas: Selladores de placas ELISA (R&D Systems, Catálogo # DY992) - Materiales requeridos, pero no contenidos en el kit: 1. Incubadora de 37° C 2. Pipetas de precisión y puntas desechables para pipetas 3. Agua bidestilada 4. Tubos Eppendorf para las diluciones estándar 5. Papel absorbente El método de ELISA se realizó de acuerdo a las instrucciones del fabricante: PREPARACIÓN DE LA PLACA: - En la placa de ELISA se colocaron las soluciones necesarias según la función que iba a tener cada pozo. Previamente se realizó un mapeo que describiendo la posición de cada muestra de cada paciente y de cada una de las soluciones estándar en la placa. PREPARACIÓN DE REACTIVOS -Anticuerpo de Captura CANTIDAD POR VIAL CONCENTRACION DE TRBAJO 360 μg 6.00 μg/mL Preparación: Reconstruir con 0.5 mL de PBS 31 1. Se distribuyó en 5 tubos de 100 mL de PBS en los cuales se colocó 72 μg de anticuerpo de captura por cada tubo. 2. Se almacenó a -20 C°. -Anticuerpo de Detección CANTIDAD POR VIAL CONCENTRACION DE TRBAJO 24.0 μg 400 ng/Ml Preparación: Reconstruir con 1 mL de Reactivo Diluyente 1. Se distribuyó en 5 tubos de 200 mL de reactivo diluyente en los cuales se colocó 4.8 μg de anticuerpo de detección por cada tubo. 2. Se almacenó a -20 C°. -Concentración de trabajo 1. Se tomó la concentración de trabajo de 1 vial ya sea de captura o detección y a 12,000 μL para la utilización de una placa. Anticuerpo de captura Anticuerpo de detección 6 μg/mL 400 ng/mL 100 μL+11900 μL PBS= 12,000 200μL+11800μL reactivo diluyente = 12,000 32 -IL-23 estándar CANTIDAD POR VIAL CONCENTRACION DE TRBAJO 520 ng 125-8000 pg/mL Preparación: Reconstruir con 0.5 mL de reactivo diluyente 1. Se distribuyó en 5 tubos de 100 mL de reactivo diluyente en los cuales se colocó 104 ng de estándar IL-23. -Curva estándar 1. Se realizó en 7 tubos, en el primer tubo se colocaron 7.69 μL de solución estándar de IL-23 en 8000 pg/mL de reactivo diluyente en los 6 tubos siguientes se colocaron diluciones seriadas de 500 μL a 4000 pg/mL, 2000 pg/mL, 1000 pg/mL, 500 pg/mL, 250 pg/mL y 125 pg/mL (Fig. 10). 2. Se colocó en el vortex cada vial por 30 segundos antes de tomar los 500 μL para llevarlos a siguiente tubo. Fig.10 Curva estándar de siete puntos utilizando diluciones seriadas de 2 veces en reactivo diluyente, en orden de mayor concentración a menor concentración. 33 -Estreptavidina-HRP: CONCENTRACION DE TRBAJO 1:40 Volumen final: 12,000 μL 1. Se utilizarán 300 μL de HRP+ 11,700 de reactivo diluyente. -Solución de detección 1. Se tomaron 6,000 μL del frasco directo (sin diluir) y fueron colocados 30 μL por pocillo. - Sustrato 1. Se tomaron 6,000 μL de sustrato A y fueron colocados 100 μL por pocillo 2. Se tomaron 6,000 μL de sustrato B y fueron colocados 12,000 μL por pocillo. -Reactivo diluyente 1. Se trabajará como lo indica el fabricante en una concentración de 1% de BSA en PBS. El reactivo diluyente Duo Set se presenta en una concentración al 10% por lo cual se diluirá 1:10 en agua desionizada. 2. Se prepararon 50,000 μL de reactivo diluyente. -Buffer de lavado 1. Se prepararon 24 mL de wash buffer agregándole 576 mL de agua desionizada teniendo un total de 600 mL de solución. 34 PROTOCOLO GENERAL ELISA Preparación de la placa 1. Se diluyó el anticuerpo de captura a la concentración de trabajo en PBS sin la proteína de interés. Inmediatamente se recubrió la microplaca en todos sus pocillos con 100 μL por pocillo del anticuerpo de captura diluido. Se selló la placa e incubó durante la noche a temperatura ambiente. 2. Se realizó una aspiración a cada pocillo y lavó con la solución de lavado, repitiendo el proceso dos veces para un total de tres lavados. Se lavó llenando cada pocillo con la solución de lavado (400 μL) utilizando una pipeta múltiple. Después del último lavado, se eliminó cualquier restante invirtiendo la placa y contra toallas de papel limpias. 3. Se realizó el bloqueo adicionando 300 μL de reactivo diluyente a cada pocillo. Y se incubó a temperatura ambiente durante 1 hora. 4. Se repitió la aspiración / lavado como en el paso 2. Y posteriormente se realizó la adición de la muestra. Procedimiento para la adición de la muestra 1. Se añadió 100 μL de la muestra y estándar por pocillo. Colocando 2 pocillos por cada muestra y estándar. Se cubrió con una tira adhesiva e incubó por 2 horas a temperatura ambiente. 2. Posteriormente se repitió la aspiración / lavado como en el paso 2 de la preparación de la placa. 3. Se añadió 100 μL del anticuerpo de detección, diluido en el reactivo diluyente, a cada pocillo. Se cubrió con una nueva tira adhesiva e incubar 2 horas a temperatura ambiente. 35 4. Posteriormente se repitió la aspiración / lavado como en el paso 2 de la preparación de la placa. 5. Se añadió 100 μL de la dilución de Estreptavidina-HRP a cada pocillo. Se cubrió la placa e incubó durante 20 minutos a temperatura ambiente. 6. Posteriormente se repitió la aspiración / lavado como en el paso 2 de la preparación de la placa. 7. Se añadió 100 μL del sustrato a cada pocillo. E Incubó durante 20 minutos a temperatura ambiente. 8. Se añadió 50 μL de la solución de detección a cada pocillo. Se debe golpear suavemente la placa para asegurar una mezcla a fondo. 9. Finalmente se determinó la densidadóptica de cada pocillo, se colocó la placa en el lector de ELISA y se leyó la absorbancia década pozo a una longitud de onda de 540 Nm (Fig. 11). Fig.11 Espectofotómetro (Poweani) 36 ANÁLISIS ESTADÍSTICO Para la organización y análisis de la información tanto de las características sociodemográficas (edad, sexo, talla, peso e IMC) como los resultados de la investigación de los sujetos de estudio, se aplicaron herramientas propias de la estadística descriptiva. Se categorizó la muestra en dos grupos: clase molar I y clase molar II. A su vez, en estos dos grupos se evaluaron las siguientes variables: edad, concentración de IL-23 en saliva (pg/mL), sexo (masculino-femenino), peso (kg), talla (m) e IMC (índice de masa corporal). Se aplicó una correlación de Spearman para conocer la relación de la IL-23 en saliva y demás las variables. Los datos obtenidos se presentaron como los promedios ± el error estándar y se mostraran por medio de gráficas y cuadros. El análisis estadístico de los datos se realizó con el programa SPSS V21.0 de la compañía IBM 1989, 2012 para Windows. VIII. ORGANIZACIÓN DE INFORMACIÓN RECURSOS MATERIALES - Dispositivos auxiliares de análisis: Calculadora, computadora, espectofotómetro (Poweani), potenciómetro (Denver), shaker (TS-1000), vortex (Scientific Industries), pipetas (Gilson), centrífuga (Thermo scientific), autoclave, balanza analítica (Denver) - Material de consumo: Puntas para pipeta (Axiyen), gasas (Le Roy), alcohol, agua estéril, agua deshionizada, agua bidestilada, tubos eppendorf (Axiyen), Kit para ELISA (R&D System), tubos 36 falcom, bitácora, hielera, hielo, vasos recolectores estériles, abatelenguas de madera, consentimiento informado, material para esterilizar. - Recursos financieros: Los recursos financieros serán proporcionados por la Especialidad de odontopediatría del Centro Universitario de Ciencias de la Salud de la Universidad de Guadalajara. 37 ASPECTOS ÉTICOS El objetivo del estudio se explicó a cada padre o tutor, antes de que ellos aceptaran que su hijo(a) participara en el protocolo. Posteriormente, los que aceptaron, firmaron el consentimiento informado, realizado de acuerdo con la Secretaría de Salud y Bienestar Social y de su reglamento de la Ley General de Salud, en materia de Investigación para la Salud (2002), Título Segundo, de los Aspectos Éticos de la Investigación en Seres Humanos, en su Artículo 17, categoría II (Anexo 1). Se realizó una historia clínica para pacientes de la especialidad en Odontopediatría de la Universidad de Guadalajara (Anexo 2). El estudio se llevó a cabo de acuerdo a los lineamientos éticos de la declaración de Helsinki. De acuerdo a la NOM-2012 esta investigación está considerada como de riesgo mínimo, según la Secretaría de Salud (REGLAMENTO de Ley General de Salud 2002). CONSIDERACIONES DE BIOSEGURIDAD Cabe mencionar que todos los alumnos e investigadores involucrados en el proyecto trabajaron bajo el reglamento del Instituto de Investigación en 37 Odontología y del Reglamento General del CUCS, para su protección personal y manejo de productos químicos y biológico-infecciosos. Además, todo el personal involucrado en el proyecto fue capacitado previamente. Los residuos de saliva fueron almacenados por miembros del laboratorio en el Instituto de Investigación en Odontología para futuras investigaciones. Los residuos de muestras biológicas fueron desechados bajo los lineamientos de la Norma Oficial Mexicana NOM-007- SSA1-1994. No fue necesario hacer extensivo a las autoridades (Comité de Bioseguridad o protección civil). SEDE DEL ESTUDIO La recolección de muestras de saliva se realizó en pacientes que acudieron a las Clínicas de la Especialidad y Licenciatura de Odontopediatría y los procesos de laboratorio en el Instituto de Investigación en Odontología, ambas instancias pertenecientes al Departamento de Clínicas Odontológicas Integrales del Centro 38 Universitario de Ciencias de la Salud de la Universidad de Guadalajara. Guadalajara, Jalisco. México. 39 IX. RESULTADOS Datos sociodemográficos En este estudio, se incluyeron 29 niños que acudieron a la Clínica de la Especialidad de Odontopediatría en el Centro Universitario de Ciencias de la Salud de la Universidad de Guadalajara para su atención por odontológica con distintas características sociodemográficas como el sexo (femenino-masculino) y la edad (6 a 10 años - media 7.38 años) en etapa de dentición mixta temprana. Se incluyeron 19 pacientes con clase molar I y 10 pacientes con clase molar II. Todos ellos se consideraron como sujetos sanos. (Ver Cuadro II) Cuadro II. Datos sociodemográficos y parámetros clínicos IMC: Índice de masa corporal, m: metros, kg: Kilogramos Cuadro II. Presentación de datos sociodemográficos, promedios y su desviación estándar. Niveles de IL-23 en saliva de niños con dentición mixta con clase molar I y II Al analizar los resultados podemos observar que el promedio de IL-23 (pg/ mL) en saliva fue de (686.32 +426.72) en pacientes con clase molar I. En los pacientes con clase molar II los resultados señalan un promedio de (55.58 +4.66) de IL-23 (pgm/mL) en saliva (Fig.12). Al evaluar dichos datos estadísticamente no se encontraron diferencias significativas. Parámetros Clase Molar I (n=19) Clase Molar II (n=10) Edad (X+DE) 7.2 + 0.6 7.7 + 1.3 Femenino/Masculino 10/9 6/4 Peso (kg) 26.2 + 4.1 28 + 3.7 Talla (m) 1.2 + 0.1 1.2 + 1.1 IMC 19.2 + 1.9 28 + 3.7 40 Fig. 12. Representación gráfica en barras de las concentraciones de IL-23 en los grupos de clase molar I y clase molar II, barras de error estándar en ambas direcciones. CORRELACIONES A través del análisis estadístico de las concentraciones de IL-23 en saliva, por el coeficiente de correlación de Spearman, logramos encontrar correlaciones positivas en pacientes con clase molar I respecto a edad vs peso, edad vs talla y peso vs IMC. Mientras que los valores obtenidos de la IL-23 con todas las variables indican que no hay correlación lineal (Fig. 13). Fig13.Correlaciones pacientes con clase molar I. Grafico que muestra la alta variación de los valores, presentando una asociación positiva entre edad vs peso, edad vs talla y peso vs IMC en pacientes con clase molar I. 0 200 400 600 800 1000 1200 IL -2 3 p g/ m L d e sa liv a CLASE I CLASE II 41 En los pacientes con clase molar II respecto a la edad vs peso, edad vs talla, peso vs talla y talla vs IMC; encontramos una correlación positiva. Del mismo modo, los valores obtenidos de la IL-23 con todas las variables indican que no hay correlación lineal (Fig. 14). Fig. 14. Grafico que muestra la alta variación de los valores, presentando una asociación positiva entre edad vs peso, edad vs talla, peso vs talla y talla vs IMC en pacientes con clase molar II. 42 DISCUSIÓN El estudio del sistema RANKL-OPG encargado de la osteoclastogenesis ha sido ampliamente estudiado en la literatura científica, en análisis dirigidos principalmente a sus efectos sobre la enfermedad periodontal y distintas enfermedades inflamatorias como lo es la artritis reumatoide. Sin embargo, la interacción de citoquinas proinflamatorias como lo que es el eje IL-23/IL-17, el cual está implicado en la osteoclastogenesis a través de la inducción de la expresión de RANKL (Duvallet, 2011), en dientes temporales y la erupción de sus sucesores permanentes han sido poco estudiada, a pesar de que es también un proceso fisiológico de gran relevancia en el ser humano. El estudio de la determinación de la interleucina 23 en el proceso de la erupcióndental podría servir, entre otros, para determinar la presencia e influencia de dicha citocina durante el proceso y si presenta relación en el desarrollo de su clase molar. La muestra de nuestro estudio fue obtenida de 29 niños con dentición mixta temprana de 6 a 10 años en los que se evaluó su relación molar incluyendo 19 pacientes con clase molar I y 10 pacientes con clase molar II. Los resultados obtenidos para el promedio de IL-23 (pg/ mL) en saliva fue de (686.32 +426.72) en pacientes con clase molar I. Y en los pacientes con clase molar II los resultados señalan un promedio de (55.58 +4.66) de IL-23 (pg/mL) en saliva. A partir de los hallazgos encontrados, denegamos la hipótesis general que establece que la presencia de IL-23 se encuentra aumentada en saliva de niños con dentición mixta temprana con clase molar II, en comparación con la clase I molar. Dado que los resultados no existen diferencias de la IL-23 entre la clase I y II molar en saliva en niños con dentición mixta temprana. Observando el tamaño de la muestra, se considera que para obtener resultados más claros es necesaria una mayor cantidad de pacientes. La clase molar III no se incluyó como criterio de selección, puede ser importante que, en futuros estudios, se realice una selección de cada clase molar. 43 En cuanto a las demás variables consideradas se encontró una correlación positiva significativa entre peso para la edad, talla para la edad y el peso con el IMC, dichos resultados nos indica que el crecimiento de los pacientes seleccionados para la muestra se encuentra proporcionado de acuerdo a su fase de crecimiento. 44 CONCLUSIONES Con la realización de nuestro estudio hemos llegado a las siguientes conclusiones: 1. No se observan diferencias significativas entre las concentraciones de IL-23 en saliva en niños con dentición mixta temprana con Clase Molar I y II. 2. No se observó relación entre la IL-23 y las demás variables seleccionadas para el estudio. Perspectiva: Los resultados presentados en este estudio fueron realizados a través de tomas de saliva y obteniendo resultados a través de prueba ELISA. Cabe destacar, que no se encontraron estudios respecto a la determinación de interleucina 23, en pacientes en periodo de erupción y reabsorción dental que tuvieran relación con nuestra metodología, por tal razón, se tiene como perspectiva que, en futuros estudios, pudiera hacerse una comparación entre resultados, evaluando esta investigación en contraste con otras. 45 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS - Adler P. (1963) Effect of some envirommental factors on sequence of permanent tooth eruption. J Dent Res.;42(2),605-616. - Angle E. (1899) Classification of Malocclusion. Dental Cosmos, 74(248-264); 350-357. - Barbería E., Catalá M, García C, Mendoza A. (2001) Odontopediatría (2ª ed.), Barcelona, España, Editorial Masson. - Bartold P., McCulloch C., Narayanan A., Pitaru S. (2000). Tissue engineering: A new paradigm for periodontal regeneration based on molecular and cell biology, Periodontol, 24(1),253–269. - Beertsen W., McCulloch C., Sodek J. (1997) The periodontal ligament: A unique, multifunctional connective tissue, Periodontol 2000, 13(1),20-40. - Boj. J, Catalá M., García C., Mendoza A. (2005) Odontopediatría (1ª Edición), Barcelona, España, Editorial Masson. - Bordoni N, Escobar A, Castillo R. (2010) Odontologia pediatrica, la salud bucal del niño y el adolescente en el mundo actual. Mexico: Panamericana. - Bozec A., Zaiss, M. (2017). T Regulatory Cells in Bone Remodelling. Curr Osteoporos Rep.(15),121-125. - Bruna M. (2000) Estudio cronológico y eruptivo de la dentición permanente en una muestra de la Comunidad de Madrid. Tesis doctoral. Madrid, España. - Abarrategi I, Gorritxo B. Edades medias de erupción para la dentición permanente. Revista Española de Ortodoncia;30(1), 23-29 - Cahill DR, Marks SC. (1980) Tooth eruption: evidence for the central role of the dental follicle. J Oral Pathol Med.; 9, 189-200. - Canut J. (2005). Ortodoncia clínica y terapéutica (2ª Edición), Barcelona, España, Editorial Masson. - Cañon OL, Torres EA. (2010) Desarrollo de la Dentición. Guías Clínicas para el Manejo Odontológico del Paciente Pediátrico. Bucaramanga: Universidad Santo Tomás;. p. 295-300. - Chai Y, Jiang X, Ito Y, Bringas P Jr, Han J, Rowitch DH, Soriano P, McMahon AP, Sucov HM. (2000) Fate of the mammalian cranial neural crest during tooth and mandibular morphogenesis. Development 127(8),1671-9. - Chiego D. (2014) Principios de Histología y Embriología Bucal con orientación clínica (4ª Edición), Barcelona, España, Elsevier. - Cordeiro MR, santos BZ, Reyes-Carmona JF, Figueiredo CP. (2011) Primary teeth show less protecting factors against root resorption. International Journal of Paediatric Dentistry; 21, 361–368 46 - Dikoglu E, Alfaiz A, Gorna M, Bertola D, Chae J, Cho T, et al. (2015) Mutations in LONP1, a mitochondrial matrix protease, cause CODAS syndrome. Am J Med Gen;167(7),1501-1509. - Donald B., Shumaker D., Mahmoud S., El Hadary MS. (1960) Roentgenographic study of eruption. J Am Den Assoc., 61(5), 535-541. - Duvallet E, Semerano L, Assier E, Falgarone G, Boissier M. (2011), Interleucinain-23: una citoquina clave en las enfermedades inflamatorias. Anales de Medicina, 43, (7), 503-511 - Franke M, Schroder J, Monhasery N, Ackfeld T, Hummel TM, Rabe B et al. (2016) Human and Murine Interleukin 23 Receptors Are Novel Substrates for A Disintegrin and Metalloproteases ADAM10 and ADAM17. J Biol Chem.; 91 (20), 10551-1061. - Frazier-Bowers S, Simmons D, Koehler K, Zhou J. (2009) Genetics analysis of familial nonsyndromic primary failure of eruption. Orthod Craniofac Res.;12(2),74-81. - Frerreira S, Aquino S. (2015) Dental findings in Brazilian patients with Fanconi syndrome. Int J Pediatr Dent.;10(11),183-187. - Fukushima H, Kajiva H, Takada K, Okamoto F, Okabe K. (2003) Expression and role of RANKL in periodontal ligament cells during physiological rootresorption in human deciduous teetn. Eur J Oral Sci.; 111, 346-52. - Gaffen SL, Jain R, Garg AV, Cua DJ. (2014). La IL-23-IL-17 eje inmune: frommechanisms a pruebas terapéutico. Nat. Rev. Immunol. 14,585-600 - - Ghoreschi K, Laurence A, Yang XP, Tato CM, McGeachy MJ, Konkel JE et al. (2010) Generation of pathogenic T(H)17 cells in the absence of TGF-beta signalling. Nature; 467 (7318), 967-971. - Gomez de Ferraris M, Campos A. (2009) Histologia, embriologia e ingenieria tisular bucodental. Mexico: Editorial Panamericana; - Hagg U, Hagg E. (1986) The accuracy and precision of assesment of chonological age by analysis of tooth emergence. J Int Assoc Dent Child;17(2), 45-52. - Hajishengallis G. (2014) Immunomicrobial pathogenesis of periodontitis: keystones, pathobionts, and host response. Trends Immunol.; 35 (1), 3-11. - Harokopakis-Hajishengallis, E. (2007) Physiologic root resorption in primary teeth: molecular and histological events, J Oral Sci. 49(1),1–12 - Harrington LE, Hatton RD, Mangan PR, Turner H, Murphy TL, Murphy KM et al. (2005) Interleukin 17-producing CD4+ effector T cells develop via a lineage distinct from the T helper type 1 and 2 lineages. Nature Immunology.; 6 (11), 1123-1132. 47 - Ju JH, Cho ML, Moon YM, Oh HJ, Park JS, Jhun JY, Min SY, Cho YG, Park KS, Yoon CH, Min JK, Park SH, Sung YC, Kim HY. IL-23 induce el activador del receptor de la expresión del ligando NF-kappaB en las células T CD4 + y promueve la osteoclastogénesis en un modelo de artritis autoinmune. J Immunol. 2008; 181, 1507-1518. - Kan SH, Mancini G, Gallagher G. (2008) Identification and characterization of multiple splice forms of the human interleukin-23 receptor alpha chain in mitogen-activated leukocytes. GenesImmun.; 9 (7), 631-639. - Kim K, Jeon M, Lee HS, Park JC, Moon SJ, Kim SO, Cho SW, Song JS. (2016) Comparative analysis of secretory factors from permanent- and deciduous- teeth periodontal ligament cells, Arch Oral Biol. 71, 65-79. - Kochar R, Richardson A. (1998) The cronology and sequence of eruption of human permanent teeth in Northern Ireland Int J Paediatr Dent.;8(4), 243-252. - Kumar, G, S. (2011). Orban´s Oral Histology and Embriology. Haryana, India: Elsevier. - Li J, Sarosi I, Yan XQ, Morony S, Capparelli C, Tan HL, et al. (2000) RANK is the intrinsic hematopoetic cell surface receptor that controls osteoclastogenesis and regulation of bone mass and calcium metabolism. - Moslemy M. (2004) An epidemiological survey of the time and sequence of eruption of permanent teeth in 4-15 years olds in Tehran, Iran Int J Paediatr Dent.;14(6),432-438. - Moyers R. (1992) Manual de Ortodoncia. Buenos Aires: Medica Panamericana;. - Muñoz EF. (2010) Crecimiento y Desarrollo de la dentición de la oclusión. Odontología Pediátrica, Buenos Aires, Argentina, Médica panamericana, 21- 46. - Nanci A. (2013) Ten Cate`s Oral Histology Development, Structure and Function, 8ª edición, Editorial Elsevier Mosby. - Ne RF, Witherspoon DE, Gutmann JL. (1999) Tooth resorption. Quintessence Int. 30(1), 9-25. - Rafea M., Al-Gburi B. (2012) A Comparative Study for Localization of Odontoclast in Crown and Root of Physiological Resorbed Primary Teeth. Tikrit Journal for Dental Sciences. (2)96-100. - Rajic Z, Rajic-Mestrovic S, Verzak Z. (2000) Cronology dynamics and period of permanent tooth eruption in zagred children. Coll Antropol.;24(1),137-143. - Romo R, Herrera M. (2002) Cronología de erupción dental en población escolar. Vertientes;5(1-2),43-48 - Sahli C., Brau E. (2014) Endodoncia, Técnicas clínicas y bases científicas. (3ª ed.) Masson. 48 - Shimono, M., Ishikawa, T., Ishikawa, H., Matsuzaki, H., Hashimoto, S., Muramatsu, T., et al. (2003) Regulatory mechanisms of periodontal regeneration Microsc Res Tech, 60(5),491–502. - Silva Valencia Gonzalo Ariel , Huaynoca Naira. (2019) Oclusion clase II. Rev. Act. Clin. Med. - Slater LJ. (2000) Dentigerous cyst versus dental follicle. Br J Oral Maxillofac Surg 38(4),402. - Suzuki E, Mellins ED, Gershwin ME, et al. 2014. The IL-23/IL-17 axis in psoriatic arthritis. Autoimmun. Rev. 13,496–502. - Oppmann B, Lesley R, Blom B, Timans Jackie C, XU Y, Hunte B, Vega F, et. al. (2000) Novel p19 protein engages IL-12p40 to form a cytokine, IL-23, with biological activities similar as well asdistinct from IL-12. Immunity 13,715-725.. - Pitaru S., Pritzki A., Bar-Kana I, Grosskopf A., Savion N., Narayanan A. (2002) Bone morphogenetic protein 2 induces the expression of cementum attachment protein in human periodontal ligament clones, Connect Tissue Res, 43(2–3),257–264. - Proffit WR, Frazier-Bowers SA. (2009) Mechanism and control of tooth eruption: overview and clinical implications. Orthod Craniofac Res.;12(2),59-66 - Takahashi K, Azuma T, Motohira H, Kinane DF, Kitetsu S. (2005) The potential role of interleukin-17 in the immunopathology of periodontal disease. J Clin Periodontol.; 32 (4), 369-374. - Tzaifas D, Smith AJ, Lesot H. (2000) Designing new treatment strategies in vital pulp therapy. J Dent. 28(2),77-92. - Ten Cate AR, Anderson RD. (1986) An ultrastructural study of tooth resorption in the kitten. J Dent Res; 65(8), 1087–93. - Tyrovola JB, Spyropoulos MN, Makou M, Perrea D. (2008) Root resorption and the OPG/RANKL/RANK system: a mini review. Journal of Oral Science 50, 367-76. - Van der Linden F. (1983) The Development of the Dentition. Chicago: Quintessence Publishing. - Vernal R, Dutzan N, Chaparro A, Puente J, Antonieta VM, Gamonal J. Levels of interleukin-17 in gingival crevicular. - Wiekowki MT, Leach MW, Evans L, Sullivan EL, Chen G, Vassileva JF, Bazan DM, et. al. (2001) Ubiquitous transgenic expression of the IL-23 subunit p19 induces multiorgan inflammation, runting, infertility, and premature death. J. Immunol. 166, 7563-7570.. - Wise, G., Frazier, S., D’Souza, R. (2002) Cellular, molecular, and genetic determinants of tooth eruption, Crit Rev Oral Biol Med., 13(4),323-334. - Yang XP, Ghoreschi K, Steward-Tharp SM, RodriguezCanales J, Zhu J, Grainger JR et al. (2011) Opposing regulation of the locus encoding IL-17 49 through direct, reciprocal actions of STAT3 and STAT5. Nature immunology.; 12 (3), 247-254. - Yildirim S, Yapar M, Semet, Sener K Kubar A. (2008) The role of dental pulp cells in resorption of deciduous teeth. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod.;105, 113-20. - Zeng H., Wan, Q. (2016) Osteoclast size regulation and its mechanism. Chin J Stomatol, 51(1), 58-64. - Zhang YH, Heulsmann A, Tondravi MM, Mukherjee A, Abu-Amer Y. (2001) El factor alfa de necrosis tumoral (TNF) estimula la osteoclastogénesis inducida por RANKL mediante el acoplamiento del receptor TNF tipo 1 y las vías de señalización RANK. J Biol Chem. ; 276, 563–568. 50 ANEXOS ANEXO 1 CENTRO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE CLÍNICAS ODONTOLÓGICAS INTEGRALES INSTITUTO DE INVESTIGACIÓN EN ODONTOLOGÍA CARTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO PARA PARTICIPACIÓN DE UN ESTUDIO DE INVESTIGACIÓN BÁSICA Nombre del Paciente:_________________________________________________ Edad: ___________ Teléfono: _________________ Nombre del Padre o tutor: _____________________________________________ Dirección: _________________________________________________________ Municipio y Estado: __________________________________________________ Nombre del estudio: “Determinación de interleucina 23 y el receptor soluble a IL-23 (IL-23R) en saliva en niños con dentición mixta temprana”. Manifiesto que el médico responsable, me explicó la naturaleza del estudio, que consiste en tomar una muestra de saliva de la boca. Esta saliva se utilizará para medir los niveles de una molécula llamada RANKL. La saliva se recolectará en vasos estériles de 100 ml. El médico me invita a que mi hijo (a) participe en el estudio antes mencionado bajo mi autorización. En caso de aceptar, tomará las muestras del niño(a) en una sola ocasión. Acepto que la explicación del médico fue satisfactoria para cada una de las dudas que me surgieron, producto de la participación mi hijo (a) en el estudio. El médico responsable me ha dado la seguridad de que no se revelará la identidad de mi hijo (a) en las presentaciones o publicaciones médicas y científicas que se deriven de este estudio, así como de que los datos relacionados con la privacidad del paciente serán manejados de forma confidencial. Se me ha mencionado que tengo derecho de realizar todas las preguntas que desee acerca del estudio y sus implicaciones en la investigación; las cuales podré realizar de forma personal en el Instituto de Investigación en Odontología de la Universidad de Guadalajara con la Dra. Celia Guerrero [tel: +521 (33) 1058 5200 ext 33748]. O también con la Dra. Paulina Noyola Sánchez [tel: +521 (442) 20 86 093]. Entiendo que como padre o tutor conservo el derecho y la absoluta libertad para revocar en cualquier momento mi consentimiento para participar en el estudio sin que por ello se creen prejuicios o se afecte la atención médica que reciba en la institución mi hijo (a) para continuar con su tratamiento. Guadalajara, Jal a _____ del mes de __________ de 2019 __________________________________ Nombre y firma del Padre o tutor __________________________ __________________________ Dra. Paulina Noyola Sánchez Testigo Fundamento legal: Este documento se apega a la NOM-168-SSA1-1998 del Expediente Clínico, a la Ley General de
Compartir