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15 1,a 2,3,b 2,3,c Betty Barón-Ramos de Rosario , Víctor Soto-Cáceres. ,Moisés Rosario -Borrego 1. Gerencia Regional de Salud Lambayeque –Perú. 2. Facultad de Medicina Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo, Lambayeque-Perú. 3. Hospital Provincial Docente “Belén de Lambayeque”, Perú. a. Bióloga microbióloga y Master en Epidemiología. b. Médico especialista en Medicina Interna y Epidemiología. c. Médico especialista en Traumatología. RESUMEN Objetivos: Determinar la validez del método concentrado en esputo con hipoclorito de sodio para el diagnóstico de BAAR en pacientes con radiografía anormal y Bk negativa en la Región Lambayeque. Material y métodos: A 112 muestras de esputo, procedente de pacientes Sintomáticos respiratorios (SR) con Rx anormal y Bk negativo se evaluó la positividad a tuberculosis (TB) con el método concentrado del esputo con hipoclorito de sodio y con cultivo Lowenstein Jensen como prueba Gold estándar. Se llamó positivo al resultado cuando se hallaba de 1 a más BAAR, o de 1 a más colonias de Mycobacterium tuberculosis respectivamente. Los resultados se ingresaron a una base de datos de SPSS vs 15 y analizados con el software EPIDAT vs. 3.1 Se determinó sensibilidad (S), especificidad (E), valores predictivos (VPP) y negativos (VPN). Resultados: La eficacia de esta técnica arrojó una Sensibilidad: 95,65% (IC95%: 93,43% - 97,88%), una especificidad: 100% (IC95%: 99,44-100%), un VPP de 100% (IC95%: 97,73%-100%) y un VPN del 98,89% (IC95%: 98,32% - 99,46%). Conclusiones: El método concentrado en esputo con hipoclorito de sodio es de alta validez, casi semejante al cultivo, para el diagnóstico de tuberculosis en estos grupos de pacientes con radiografía anormal y BK negativo; el costo y tiempo es mínimo y accesible a cualquier nivel básico de laboratorio. Palabras clave: Tuberculosis, Diagnóstico, Microbiología, Hipoclorito de sodio (Fuente: DeCS – BIREME). ABSTRACT Objetive: To determine the validity of the method of concentrated sputum with sodium hypochlorite for the diagnosis of acid-alcohol resistant bacillus (BAAR) in patients with x-ray abnormal and negative bacillocospy in the Region Lambayeque, 2007. Methods: To 112 samples of sputum, proceeding from patients with respiratory symptoms, with smear BK negative and abnormal Rx, positivity to tuberculosis (TB) was evaluated by Lowenstein Jensen culture (Gold Standard) and the method of the concentrated sputum with sodium hypochlorite. A positive result was established as the finding of 1 or more BAAR, or 1 or more Mycobacterium tuberculosis' colonies. The results were put on a database using SPSS v15, and analyzed with EPIDAT v3. Sensitivity, specificity and predictive values of tests were determined Results: The efficiency of this technique determined a Sensitivity of 95.65 % (IC: 93.43 % - 97.88 %), a specificity of 100 % (IC: 99.44-100 %), a negative predictive value of 100 % (IC: 97.73 %-100 %) and a positive predictive value of 98.89 % (IC: 98.32 % - 99.46 %). Conclusions: The method of concentrated sputum with sodium hypochlorite is of high validity, almost similar to the culture, for the diagnosis of tuberculosis in these groups of patients with abnormal Rx and BK negative; the cost and time is minimal and accessible to any basic laboratory level. Key words: Tuberculosis, Diagnosis, Microbiology, Sodium Hypochlorite (Source: MeSH-NLM) INTRODUCCIÓN: La tuberculosis, enfermedad infectocontagiosa ubicada en Rev. cuerpo méd. HNAAA 5(2) 2012 16 los grupos vulnerables de los países más pobres. Se reportan alrededor de 7 a 8 millones de casos nuevos y de 1,3 a 1,6 millones de muertes cada año, siendo la segunda causa de (1)muerte por enfermedad infecciosa en el mundo . La tasa de transmisión de tuberculosis en pacientes paucibacilares es (2)hasta el 17% . En el Perú la tasa de morbilidad e incidencia frotis positiva es de 119 ,9 x 100 ,000 hab . y 68 ,3x100 ,000 hab . Respectivamente, cada hora 3 a 4 personas enferman (3)reportándose 81 casos cada día así como 3 muertes diarias En el departamento de Lambayeque en 2007 se tuvieron 579 casos nuevos con tasa de incidencia de 50,81 x 100.000 (3)habitantes . La tasa de tuberculosis en pacientes paucibacilares, diagnosticados sólo por cultivo es del 5% a nivel nacional. En el departamento de Lambayeque es el 6% (consolidado DIRESAL). El gran problema de una tuberculosis paucibacilar (4)radilógicamente activa (Rxa) , es que no es detectada por el examen microscópico directo. En respuesta a lo anterior, se propuso el diagnóstico de la tuberculosis por cultivo bacteriano líquido o sólido. No obstante estos métodos tienen la desventaja de tardar entre dos a ocho semanas para arrojar un resultado. Ante tal inconveniente, se implementaron los s istemas de radiocultivo l íquido automatizado o (5-8)semiautomizado (radiométricos) y no radiométricos . Todas estas pruebas diagnósticas muestran diferentes niveles de eficiencia; detectando micobacterias aproximadamente, entre 14 días, y en la mayoría de las muestras en 21 días. En Cuba se realiza el método de esputo concentrado con hipoclorito de sodio al 5% como rutina para diagnosticar la (9)tuberculosis en pacientes sintomáticos respiratorios. y en Trujillo Chancafe realizó un estudio para establecer el valor diagnóstico predictivo de esta técnica concluyendo que tiene mayor sensibilidad (S) que la microscopía directa pero sin diferencias estadísticas significativas referente a especificidad (E), valor predictivo positivo (VPP) y valor (10)predictivo negativo (VPN) entre ambas técnicas . Por lo que nos planteamos como problema de investigación: ¿Cuál es la validez del método concentrado en esputo con hipoclorito de sodio para el diagnóstico de bacilos alcohol ácido resistente (BAAR) en pacientes radiografía anormal y Bk negativa en la región Lambayeque? La validación de este método de diagnóstico, en este tipo de población, servirá como herramienta para toma de decisiones a la Estrategia Sanitaria Nacional de Prevención y Control de la Tuberculosis; pues con un diagnóstico temprano, oportuno y eficaz permitirá cortar la cadena epidemiológica de transmisión de la tuberculosis y como consecuencia la tasa de incidencia disminuida. La baciloscopía ha sido adoptada por la mayoría de los países en desarrollo como el procedimiento diagnóstico de elección en los enfermos sintomáticos. Sin embargo, su sensibilidad deja que desear, ya que como regla deben existir entre cinco mil a diez mil bacilos/ml de expectoración para que tengan un 50% de posibilidades de ser detectados al microscopio; sólo cuando el número de bacilos alcanza a más de 100.000 por ml de expectoración, podemos esperar que las baciloscopias sean consistentemente positivas. Asimismo se han usado diversos métodos para mejorar el (11-12)desempeño de la baciloscopia de esputo En general, la sensibilidad de la microscopía (en comparación con el cultivo) es mayor con la concentración mediante centrifugación, sedimentación (generalmente después del tratamiento previo con productos químicos como lejía, NaOH, que con la microscopía de frotis (no concentrado) directa. Una revisión sistemática y exhaustiva de 83 estudios que describen los efectos de diversos métodos físicos o químicos para concentrar y procesar el esputo antes de la microscopía encontró que la concentración dio lugar a mayor sensibilidad (aumento de entre 15 y 20%) y mayor tasa de positividad del (9)frotis, en comparación con los frotis directos. Esta técnica no es recomendable en el diagnóstico de rutina en pacientes con radiografía normal, por la alta sensibilidad en el cual se podría detectar BAAR de micobacterias saprofitas. En el método de concentración se digiere el espécimen (esputo) por medio del hipoclorito de sodio y por centrifugación se concentran en el sedimento las bacterias que pudieran existir. Por lo general, este procedimiento aumentaráel número de extendidos positivos. El hipoclorito de sodio es un tuberculicida activo así como un digestivo excelente, los sedimentos resultantes se consideran no viables y serán útiles solamente para los extendidos coloreados y no para ulteriores métodos de cultivo o de inoculación en animales. El cultivo es una técnica que tiene mayor sensibilidad, pues basta que existan más de 10 bacilos por ml. en muestras digeridas y concentradas, para que sea positivo. Es por esto que los cultivos son el método de elección para el diagnóstico de la tuberculosis en grupos de pacientes SR con radiografía anormal y Bk negativo en los países desarrollados y en vías de desarrollo. Los cultivos pueden ser persistentemente negativos en alrededor del 10% de los casos de tuberculosis pulmonar, aunque ésta sea tan severa como una diseminación miliar. Los cultivos tienen el inconveniente de su mayor costo y de la demora habitual de entre 3 y 8 semanas para dar un informe como resultado. El examen radiográfico es sumamente útil cuando se aplica como parte de una estrategia sistemática en la evaluación de las personas cuyos síntomas o resultados apuntan a la tuberculosis pero tienen baciloscopias de esputo negativas. Para los propósitos prácticos, puede decirse que una radiografía de tórax normal descarta el diagnóstico de tuberculosis pulmonar con bastante seguridad sin embargo mediante la radiografía es imposible discriminar con certeza las lesiones activas de las inactivas, por lo que esto debe evaluarse mediante la bacteriología. Por lo expuesto nos planteamos como objetivo precisar la validez diagnóstica del método concentrado de esputo con hipoclorito de sodio para el diagnóstico de BAAR en pacientes con radiografía anormal y Bk negativo en la Región de Salud Lambayeque y verificar la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo del método de esputo concentrado con hipoclorito de sodio. MATERIAL Y MÉTODOS Área de Estudio: Se desarrolló en la Gerencia Regional de Salud Lambayeque. Tipo de estudio: Prospectivo, observacional, transversal Betty Barón-Ramos de Rosario, Víctor Soto-Cáceres, Moisés Rosario-Borrego Rev. cuerpo méd. HNAAA 5(2) 2012 17 Diseño de Contrastación de Hipótesis: estudio analítico descriptivo: Prueba de Pruebas. Población: la población de estudio estuvo constituida por las muestras de esputo (proveniente de paciente mayor de 15 años sintomático respiratorio radiografía anormal) previamente analizada por Laboratorio Local con resultado baciloscopía negativa. Muestra: usando la calculadora estadística Epidat versión 3.1 usando la formula de tamaño de muestra y precisión para pruebas diagnósticas usando una sensibilidad de 76,1%, (10)especificidad de 97,4%, prevalencia de 28,75% y asumiendo 15% de precisión se obtuvo 112. Unidad de análisis: muestra de esputo. Criterios de inclusión: · Muestra de esputo suficiente, previamente analizada por Laboratorio Local, con resultado baciloscopia negativa y procedente de pacientes mayores de 15 años sintomático respiratorio con radiografía anormal; Criterios de exclusión: · Muestras inadecuadas remitidas por laboratorios locales. · Muestra negativa a BK, de Paciente mayor de 15 años sintomático respiratorio sin radiografía. Procedimientos: Recolección de muestras: las muestras de esputo provenientes de pacientes mayor de 15 años sintomático respiratorio y radiografía anormal, previamente analizada por Laboratorios Locales con resultado BK negativa fueron recolectados y derivados en cajas de acero inoxidable, en condiciones de bioseguridad, por personal de laboratorio de los establecimientos de salud al Laboratorio de Referencia Regional en Salud Pública Lambayeque (LARESA) donde fueron procesadas en condiciones de bioseguridad (cabina de flujo laminar) de la siguiente manera: · Primera parte de la muestra: fue procesado para el cultivo según el método de Löwestein – Jensen (L-J). El cultivo se utilizó como técnica Gold Standard. Los cultivos fueron revisados semanalmente durante 8 semanas. · Segunda parte de la muestra: fue utilizada para el Método concentrado en esputo con hipoclorito de sodio mediante los siguientes pasos: 1. Mezcla de un volumen igual (5 a 10 ml) de esputo y de hipoclorito de sodio al 5%(se utilizó lavandina de uso doméstico); removiendo con un aplicador de madera para asegurar su mezcla completa. 2. Se agitó durante 1 a 3 minutos y a temperatura del ambiente durante 10 minutos, o hasta que se haya producido la completa digestión. 3. Se traspasó una porción a un tubo de centrifuga con tapa rosca de 15 ml y fue centrifugado durante 10 minutos a 3000rpm. 4. Se decantó el líquido sobrenadante. 5. Con una pipeta pasteur de 3mm de diámetro y longitud aproximadamente de 28 cm. provista de pro-pipeta de jebe, se transfirió de 3 a 5 gotas del sedimento, blanco cremoso, a la lámina porta objeto previamente desengrasada y codificada. Se secó al aire y fue coloreado por el método de Ziehl-Neelsen (estándar). 6. Lectura de baciloscopía recorriendo toda la lámina, los resultados se reportaron positivo: uno o más BAAR, negativo: cero BAAR. Definición de Términos: · Sintomático respiratorio (SR): Paciente con tos y flema por más de 15 días. · Radiografía anormal (Rxa): Radiografía con signos patológicos pulmonares · Baciloscopia negativa (Bk (-)): Muestra de esputo negativo a bacilos alcohol ácido resistente (BAAR). Validez del método concentrado en esputo con hipoclorito de sodio para el diagnóstico de tuberculosis en pacientes con radiografía anormal y baciloscopía negativa. RESULTADOS: El 19,4% de las muestras que fueron negativas (22 casos de 112) resultaron positivas a BAAR con el método concentrado de esputo con hipoclorito de sodio, además con cultivo se obtuvo que 20,54% de las muestras (23 casos de 112) fueron confirmadas de tener tuberculosis (tabla Nº 1). Tabla N° 1: Resultados de la muestra de esputo de pacientes sintomáticos respiratorios con baciloscopia negativa y radiografía anormal con Cultivo Lowenstein- Jensen y método concentrado de esputo con hipoclorito de sodio. La validez de la prueba obtenida fue sensibilidad de 95,65% (IC 95%: 93,43%-97,88%), especificidad de aproximadamente 100% (IC 95%: 93.43%-97.88%); la seguridad dada por el valor predictivo positivo aproximadamente 100% (IC 95%: 97,73% - 100%) y valor predictivo negativo 98,89% (IC 95%: 98,32% - 99,46%), la utilidad con cociente de probabilidades negativo 0,04 (IC 95% 0,01-0,30) (Tabla Nº 02). Tabla Nº 2: Validez, seguridad y utilidad del método concentrado con hipoclorito de sodio en muestra de esputo de pacientes con baciloscopía negativa y radiografía anormal. DISCUSIÓN: El método de concentración de esputo con hipoclorito de sodio para la recuperación de los bacilos alcohol ácido resistente y aumentar la concentración de éstos ha sido referido en varios (13) (14)estudios como los de Cedeño y Angeby . En esta investigación se procesaron 112 muestras de esputo por el método concentrado de esputo con hipoclorito de sodio, en el cual se encontró positividad en un 19,6%, coincidiendo (15) (16)con los trabajos realizados por Saxena , Habeenzu , (17) (14) (18) (19)Gebre , Angeby , Bruchfeld y Callisaya . En nuestro estudio hallamos un mayor número de BAAR encontrados en resultados procedentes de este método concentrado se halló mayor número de colonias en los cultivos de L-J. En la literatura consultada no se encontraron referencias sobre la relación entre el resultado por el método concentrado de esputo según número de BAAR y número de colonias en el cultivo de L-J. Encontramos alta sensibilidad: 95,65% y especificidad 100%, por su parte Saxena encontró similar sensibilidad 96% y (15)especificidad 100% , a diferencia del estudio de Habeenzu (16)que halló una sensibilidad de 76% y especificidad de 100% , similar a lo halladopor Chancafe en Trujillo que solo obtuvo Rev. cuerpo méd. HNAAA 5(2) 2012 N % N % Positivo 22 19,64 0 0 22 Negativo 1 0,89 89 79,46 90 Total 23 20,54 89 79,46 112 Método Concentrado en esputo con Hipoclorito de Sodio Cultivo Lowenstein-Jensen TOTALPositivo Negativo Característica % IC 95% Sensibilidad (%) 95,65 93,43% - 97,88) Especificidad (%) 100 99,44 - 100 VPP (%) 100 97,73 - 100 VPN (%) 98,89 98,32 - 99,46 specimens by using the automated BACTEC 9000 MB system and comparison with radiometric and solid culture systems. J Clin Microbiol. 1997; 35(9): 2229-2234. 8. Cuevas RZ. Pasado, presente y futuro de las técnicas diagnósticas de tuberculosis. Rev Inst Nal Enf Resp Mex. 2003; 16(3):181-186. 9. Ministerio de Salud Pública (MINSAP). Programa Nacional de la Tuberculosis. La Habana: MINSAP. 1999. 10. Cheng MSC. Valor diagnóstico predictivo de la técnica de esputo sedimentado con hipoclorito de sodio y de la microscopía directa de esputo en el diagnóstico de la tuberculosis. Compromiso Médico. 2006; 1(1):10-15. 11. Steingart KR, Ng V, Henry MC, et al. Sputum processing methods to improve the sensitivity and yield of smear microscopy for tuberculosis: a systematic review. Lancet Infect Dis. 2006; 6(10): 664-674 12. Henry MC. Conventional light microscopy versus fluorescence microscopy for the diagnosis of pulmonary tuberculosis: a systematic review. [Tesis de maestría] Berkeley: University of California, Berkeley; 2005. 13. Cedeño R, Maneiro E, Orellan Y, Alcalá B, Guevara A. Detección de bacilos ácidos resistentes en muestras de esputo por el método de concentración con hipoclorito de sodio. Revista de la Facultad de Farmacia. 2004; 46 (2):8- 11 14. Angeby KA, Hoffner SE, Diwan VK. Should the "bleach microscopy method" be recommended for improved case detection of tuberculosis? Literature review and key person analysis. Int J Tuberc Lung Dis. 2004; 8(7): 806-815. 15. Saxena S, Mathur M, Talwar VK. Detection of tubercle bacilli in sputum: application of sodium hypochlorite concentration method. 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Victoria Chiclayo Teléfonos: 074-223312 (domicilio) Ccelular: 978268882 RPM: *0345533 Correo: vicsoca@hotmail.com Revisión de pares: Presentado: 01/05/2012 Aceptado: 15/06/2012 18 (10)sensibilidad de 76,1% y especificidad de 97,4% , explicándose por que en este último estudio se compararon muestras de esputo en general, a diferencia de nuestro estudio que se comparó específicamente de pacientes BK negativos y radiológicamente positivos, grupo especial para quienes sería de mayor utilidad el procedimiento. Por otro lado el Valor Predictivo Positivo que encontramos es bastante alto 100% lo que indica una notable seguridad diagnóstica de la prueba concentrada. Por lo que podemos concluir que este método tiene alta sensibilidad y especificidad, en esta población de paucibacilares (Bk negativo y Radiografía anormal), a la vez que es sencillo, simple y barato comparado con el cultivo dado que la lejía (hipoclorito de sodio) es fácil de adquirir y además un potente desinfectante que elimina a las micobacterias después de 5 minutos de exposición, por lo que se constituye por si solo en una medida de bioseguridad muy efectiva al manipular las muestras que probablemente contienen micobacterias y los resultados se obtienen rápidamente en un tiempo menor o igual a una hora. Se recomienda que La Estrategias Sanitaria del Ministerio de Salud Control de la Tuberculosis (ESPCT) pudiese implementar este método como diagnóstico rutinario en grupo de pacientes sintomáticos respiratorio con radiografía anormal y baciloscopía negativa. Conflicto de interés: Los autores declaran no tener conflicto de interés relacionado con el tema del presente artículo. 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