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Influência da Altitude nos Níveis de Óxido Nítrico em Animais

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Rev Acad Peru Salud 2012;19(2) 
TRABAJO DE INVESTIGACIÓN
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Rev Acad Peru Salud 2012;19(2) 
TRABAJO DE INVESTIGACIÓN
Gilda Ruíz Gómez,1 Diana Andamayo Flores,2 Diana Castillo Andamayo3
El presente trabajo de investigación se realizó con 
la finalidad de determinar la influencia de la altura en 
los niveles plasmáticos de óxido nítrico, utilizando 
pollo como animales de experimentación, mediante 
la cuantificación de sus metabolitos estables: nitrito 
y nitratos con el método de Griess. Se demostró que 
los niveles plasmáticos de óxido nítrico en pollos so-
metidos a la altura (3.273 msnm) varían significati-
vamente, en comparación con los que permanecen a 
nivel del mar. Se utilizaron 300 pollos: 150 trasladados 
a la altura y 150 criados a nivel del mar. Los pollos de 
ocho días de edad presentaron variaciones notorias en 
sus niveles plasmáticos de óxido nítrico, elevándose 
los niveles el primer día, disminuyendo el segundo, 
elevándose más aún el tercer día y disminuyendo al 
cuarto y quinto día. Se concluye que la altura influye 
significativamente en los niveles plasmáticos de óxido 
nítrico en pollos.
Palabras clave: altura; óxido nítrico; niveles 
plasmáticos
Influencia de la altura en los niveles plasmáticos 
de óxido nítrico en animales de experimentación
(1) Escuela de Farmacia y Bioquímica, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Peruana Los Andes. Huancayo, Perú.
(2) Departamento de Ciencias Farmacéuticas, Universidad Privada de Huancayo. Huancayo, Perú.
(3) Centro de Investigación de Medicina Tradicional. Lima, Perú.
Enviar correspondencia a: Gilda Ruíz Gómez. Loreto 569. Huancayo, Perú. Dirección electrónica: gilda_ruiz@yahoo.es
Recibido: marzo 2013. Revisado: mayo 2013. Aceptado: julio 2013
This research work was conducted in order to 
determine the influence of the height in the plasma 
levels of nitric oxide, used as experimental animals 
chickens by measuring its stable metabolite: nitrite 
and nitrate by the Griess method. Showed that plas-
ma levels of nitric oxide in chickens subjected to the 
altitude (3,273 m) vary significantly, compared to 
the remaining sea level. 300 chickens were used: 150 
transferred to height and 150 reared sea level. Chic-
kens eight days old showed noticeable variations in 
plasma levels of nitric oxide, rising levels on the first 
day, decreasing the second, rising further decreasing 
the third day and the fourth and fifth day. We conclu-
de that the height significantly influence on the plas-
ma levels of nitric oxide in chickens.
Keywords: height, nitric oxide, plasma levels
RESUMEN ABSTRACT
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La causa exacta del mal de altura es desconoci-
da, los investigadores han planteado varias teorías e 
hipótesis. Cynthia Beall et al.1 encontraron niveles 
elevados de óxido nítrico (NO) en pulmones de dos 
poblaciones de las alturas de Bolivia y el Tibet. Ade-
más, otros investigadores han reportado que exis-
ten mecanismos de adaptación a la altura y conclu-
yen que la adaptación a esta estimula la producción 
del óxido nítrico; tales efectos podrían evidenciar 
los efectos benéficos de la adaptación, dependientes 
del NO.2
El NO es un gas tóxico poderoso por su estruc-
tura de radical libre, cuya molécula está constituida 
por un átomo de nitrógeno y uno de oxígeno; po-
see un electrón libre, que le confiere una enorme 
reactividad química; es extremadamente lábil, por 
lo que su vida media está entre 5 y 15 segundos.3 
El óxido nítrico, por ser un radical libre, se une al 
oxígeno dando dos productos principales que son: 
nitritos (NO2) y nitratos (NO3).
4 Las células endo-
teliales liberan continuamente pequeñas cantidades 
de NO que producen un nivel basal de relajación 
del músculo liso vascular.5
El NO es un autorregulador del flujo sanguí-
neo: regula el flujo sanguíneo en el cerebro, cora-
zón, pulmón, tracto gastrointestinal y riñones.5 
Ajusta de forma automática el flujo sanguíneo en 
respuesta a cambios locales en algunas regiones del 
sistema vascular. Algunos de estos factores físicos 
a los que las células endoteliales responden con un 
aumento de la producción de NO son: isquemia, 
estrés por fricción o cizallamiento e incremento del 
flujo sanguíneo a través del vaso.
Factores localmente liberados por el tejido ad-
yacente, como bradiquinina o acetilcolina, también 
pueden inducir la liberación de NO en algunos 
vasos pero no en otros. La liberación de NO en el 
Influencia de la altura en los niveles plasmáticos 
de óxido nítrico en animales de experimentación
sistema vascular también está controlada por el sis-
tema nervioso autónomo.5
El óxido nítrico (NO), liberado por práctica-
mente todas las células del corazón, ejerce múltiples 
efectos sobre la función cardíaca. Modula las res-
puestas inotrópicas y cronotrópicas, el flujo de en-
trada de Ca2+ y el ciclo del Ca2+ en el retículo sarco-
plásmico, la transmisión autonómica, la frecuencia 
cardíaca, la respiración mitocondrial, el consumo 
miocárdico de oxígeno y la eficiencia mecánica.6
En grandes cantidades, el NO mata a cualquier 
tipo de célula, inhibe el crecimiento de muchos pa-
tógenos, incluyendo bacterias, hongos y parásitos 
(en especial, patógenos intracelulares); posee ade-
más, un papel importante en el sistema inmunoló-
gico y en la inflamación.7 A través de este trabajo de 
investigación se busca evidenciar cómo influye la 
altura en los niveles plasmáticos de NO, cuyos re-
sultados nos permitirán emplear esta relación con 
fines terapéuticos, en humanos y animales de países 
andinos.
Materiales
Se utilizaron 300 pollos de tipo broiler, de un 
día de nacidos, separados al azar en dos grupos de 
150 cada uno, sin diferenciar sexo. Grupo A: Tras-
ladados a Huancayo (3.273 msnm). Grupo B: Cria-
dos en Lima (150 msnm). Los pollos de ambos gru-
pos fueron mantenidos con alimento balanceado y 
agua a voluntad y un régimen de luz de 10 horas 
diarias
Reactivos
- Reactivo de Griess A: Acido sulfanílico 1%, en 
ácido fosfórico al 5%.
INTRODUCCIÓN
METODOLOGÍA
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- Reactivo de Griess B: N-1-naftiletilendiamina 
al 0,1 %, en agua destilada.
- NaOH 1 M
- ZnO4 al 30%
- Heparina
- Zinc metálico.
Equipos:
- Espectrofotómetro UV - VIS RS Labo Med®
- Centrífuga de 3,500 rpm.
Método
Se utilizó el método de Griess para la 
determinación de los niveles plasmáticos de NO. 
El fundamento de esta reacción se basa en una 
reacción de diazotización,* descrita por primera 
vez por Griess en 1879. A través de los años esta 
técnica ha sufrido varias modificaciones. El reactivo 
de Griess usa sulfanilamida y dicloruro de N-(1-
naftil)-etilendiamina (NED) bajo condiciones 
ácidas (ácido fosfórico). Este sistema detecta el 
NO2- en una gran variedad de líquidos biológicos y 
experimentales, tales como el plasma, suero y orina 
y medios de cultivo celular. La sensibilidad de los 
nitritos depende del medio en que se encuentran.
Procedimiento
Las muestras obtenidas día a 
día se procesaron de la manera si-
guiente:
Obtención de la muestra. Las muestras de 
sangre fueron obtenidas por venopunción axilar 
(aprox. 2 mL); diariamente durante los ocho días 
que duró el experimento, tomando al azar 10 ani-
males por día. Las muestras de sangre fueron de-
positadas en tubos heparinizados y se los estabilizó 
colocándolos en reposo en hielo durante 10 minu-
tos; luego se centrifugaron durante 15 minutos a 
3.500 rpm para obtener el plasma, que fue procesa-
da de inmediato.
Desproteinización. La muestra problema se 
alcaliniza con NaOH y luego se desproteiniza con 
ZnSO4.
Método de Griess. El desproteinizado se trata 
con los reactivos de Griess A y B para la formación 
del cromóforo magenta, se lleva a lectura en el es-
pectrofotómetro UV a 520-550 nm. Una alícuota 
del desproteinizado se trata con Znmetálico para 
la reducción de nitritos a nitratos, adicionándoles 
los reactivos de Griess A y B, con lectura igual al 
anterior.
Los niveles plasmáticos de óxido nítrico en po-
llos sometidos a la altura varían significativamente 
en comparación con los que permanecen a nivel del 
mar.
RESULTADOS
(*) La diazotización (del prefijo di-, se-
parar, y azote, nitrógeno en francés) es 
el proceso químico mediante el cual una 
amina aromática primaria rompe su ca-
dena ciclica para convertirse en un com-
puesto de diazonio. [Nota del editor]. 
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Los pollos trasladados a la altura (3.273 
msnm) presentan variaciones notorias de sus ni-
veles plasmáticos de NO verificados por la cuan-
tificación de sus metabolitos estables: nitritos y 
nitratos, lo que concuerda con los hallazgos de 
Bhat y Block,8 quienes afirman que la hipoxia y 
el frío de las grandes altitudes producen un cua-
dro patogénico similar con vasoconstricción pul-
monar y trastornos circulatorios debido a que los 
requerimientos tisulares de oxígeno exceden al 
aporte disponible ambiental. Los pollos criados a 
nivel del mar elevan progresivamente sus niveles 
plasmáticos de NO, lo que concuerda con las in-
vestigaciones de Angulo et al.,9 quienes reportan 
que los pollos aumentan significativamente sus 
niveles plasmáticos de NO hasta pasado el mes de 
edad para luego estabilizarse en un valor mucho 
mayor que otras especies. De acuerdo con los re-
sultados obtenidos, la altura influye significativa-
mente en los niveles plasmáticos de óxido nítrico 
en pollos broilers.
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES
1. Los resultados obtenidos permiten com-
prender y tratar el mal de altura que 
afecta la salud de las personas. 
2. La altura influye significativamente en los 
niveles plasmáticos de óxido nítrico en 
pollos.
3. Los niveles plasmáticos de NO en pollos 
trasladados a la altura varían en forma 
oscilante. Los niveles plasmáticos de NO 
en pollos que permanecen a nivel del mar 
se elevan progresivamente.
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REFERENCIAS

Otros materiales