tesis-n1010-Rusconi

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Di r ecci ó n:Di r ecci ó n: Biblioteca Central Dr. Luis F. Leloir, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires. 
Intendente Güiraldes 2160 - C1428EGA - Tel. (++54 +11) 4789-9293
Co nta cto :Co nta cto : digital@bl.fcen.uba.ar
Tesis de Posgrado
Cultivo in vitro de células normalesCultivo in vitro de células normales
de exudado peritoneal de conejode exudado peritoneal de conejo
Rusconi, Renata
1959
Tesis presentada para obtener el grado de Doctor en Ciencias
Biológicas de la Universidad de Buenos Aires
Este documento forma parte de la colección de tesis doctorales y de maestría de la Biblioteca
Central Dr. Luis Federico Leloir, disponible en digital.bl.fcen.uba.ar. Su utilización debe ser
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Cita tipo APA:
Rusconi, Renata. (1959). Cultivo in vitro de células normales de exudado peritoneal de conejo.
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.
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Cita tipo Chicago:
Rusconi, Renata. "Cultivo in vitro de células normales de exudado peritoneal de conejo". Tesis de
Doctor. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. 1959.
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II PARTlüULARALDr. A. aonntnnx.üz. v. DEULoan,DIRSuron alla.
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A.L. DunLAca. DIREGIUBa: DIVISION DE nzozoat¿.vr. JULIO u. lu­
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LAI nz LA cars.aa nz ¡sanciaa DE LAIAuüLTAnun cznncx¿s zxacrns
QISIGLS r NATURALESr: LA UNIVERSILAD un 803808 AIRES.
Dudo principio. do 1900u inicia 01 una” ¡into­
¡Jam de 1a. chula. : dolos tando. "u uuo'.
En1916mi“ (1) obtionocultivo- do nudo ocn­
una" do andadoparacomo!do¡“una adulto. quou ut;
un n dudo “to ¡monto pan h innata-ción M0165!“y o
patológica.
Enle. ¡nos subsiguiente- o. doncflbon“todo. lia­
puntadas paralo. cultivo.do“1qu “innm‘ ¡unn- o
quo01 ¡studio 013016.10.nos. a resultado- pui tivo. o tn­
vh do observacion“ amparan vu y “naciones do 10. vario­
üpol “ du!“ par ¡odio do cultivo. pero. y conln mov“
Nomo“ do oolomoinnoovita!“ (MH-7.8.940).
En1925Juana (32) la” una nom do lo. “todo. n
Ildfll para estudiar 01 orfgondo 1Mhthoo Ionomolnru
6.1 ¡cuandoperitoneal. Sabia habla ¡ost-nido el crían onco­
totill. pero ¡lo tordo Sabin. Bonny Canaima-n concluyen ql.
"tu chulas don-innen parto del "tículo endotelio. on pag
to de un. c‘luh “podrian dal noónquim. pro-ont- on 1a .­
pulpn oapldnion. Mi. muro-anto para “to tipo a. tmb-Jo o.
la doscripoi ón hacha por sabia. Donay caminan-I do varios o
upo- do“la!” de cuandonlilndon de ln aclaracion“ q
puntal“. Los(nano!to. ¡momolurn 601und-do peritoneal
u puedendividirentro.grupo"'W‘ con¡ti­
nidadvan-mopara.1 xauu-¡1noc.'gmmm' (ro­
nottecon.)conneutra!1’06entooo""W
(nonrnootto una) em ¡titulo- del colorante difundido- on
01 citoplasma.
rodas estan clïulas ae obtuvieron inyectando en el ng
ritonso de un conejo. sangre total de conejo.
ln 1931 Bands-iny Rivers (ll) estudiaron un “todo
para cultivar virus aixonstoso y a partir de cilulas obtenic.
das del exudado de un coneJa.
Se describe aquí 1a tlcnica por sar una de las prin.
rss usadas siguiendo el ¡atado de Gayy Clark (Arch-Path 1926
I. 648)para ellulas de erudsdos en cavidades serosaa.
3o inyecta en ls cavidad pleural derecha de un eonaJe
noraal una aencla sstlril de 6 ec de extracto de carne y ¡ona
suecia. 62 horas después ae abre la cavidad esepticascnte y o
se aspira el fluido.se agrega haparina (l ec de una solucion
Is loco para cada lo ec de fluido pleural) a1 candadopara ­
prevenir 1a coagulación y se centrifusa durante 9' a baja ve­
locidad. El sedimento se resuspende en solución de tyrede y se
vuelva a centrífugar. Final-ente las cllulas de 5-10 ec de ­
erudado se suspenden en una sezcla de suero de conaio (l parte
y solución zyrode (J partes) y se siesbran truenos de Barral
con 3cc. e/u.
uoen (9) en lg]! trobaJo con dobn’osy aisla cilulss
sonuclaaraa de tipo sonocitario del emudadopleural. En cult;
vo 'in vitro" sin típicos unan“. pero una pequeñapropog
ción toas caracteristicas de tibroblastos y produce colonias
puras de estos. que nantianen sus características norrolfigi-.
cas a trnvós de varios aubcultivos. Se sugiere que el desarr.
llo de celulas sonnnuclesrea en cultivo esti condicionadoal
tie-po del anplanto. Se puede suponer. dice el autor. que es­
tan dos diferentes tipos celular‘! 0°" 0"'41°' 4° “n0¡1'30
por el hechode que ae encontraron tareas transitorias entre
los sacrors‘os y los tibroblnstoa.
¡n los años entre el 1940y el 1946 se estudia el e­
recto de drogas y agentes bactericidas citntóricos sobre onl­
o}.
tivo de tenido. en! cano lee notividndee de lee antibiótico-o
Beard (13). Hen (IUanoob: (15.16). Parker (17) y
p.12 (1|) eentrihnyen n! entudie de lee releoinnee y carecie­
tíettone de lol vnriee tipo. celuieree encontrado. en lee el!
Chio
In 1947-49 Buen-r (19) denoribe unn tecnica de cultg
ve “in vitro' de oiïulne de conejo. de cobeyony del hombre.
Ani ee ilegn nl eno 1950 con estudian ¡le eepeoinli­
nedoe.Bleu. Guina- y Manuel (20) estudien le "¡intentan
nntlrnl de rntonee y oenejon n ln tuberculenin. haciendo re.­
euentoe oonparnt1veede leucocitne y allein. tngooiteriee ne­
nenuolenree extraidne del ezndndoperitonenl.
En 1952 (21) Zanahernen (22) describe un_n6tede perl
Cultivo de ¡norntegoe 1 tibiobleetoe del exudndoperitnnnnl ­
de ratón y Ion ¡taliee pere nnntdner pnrúeiioe intruoeluleree
ebliandon.
En 1952 (23) deeoribe une tecnica pero cultivo “in o
vitrn' de oelnlnn nenonuelenree nor-aloe en porte obJetoe eu­
neraiéee en Indio líquido. Eetee elimine noneoiteriee ee inreg
¡even een benito. taberouloeoe.
En 1955 (24) nnreki. ¡ensure y Tepine nueetrnn que ­
el cultivo 'in vitrn' de ollnlee peritoneelee de conejo erre­
oe unn fuente ennetnnte e inagotable de neteriel een-ible n .
lee vitae.
En 1956 click. Bontina y ¡en Beer (2!) describieron
unn tecnica de eentrdcuanoión diternn°1n1 pere le rígide ee­
perneaónde lee aeetnellen del eludede peritoneal de rntén. .
Inn oilnlne obtenida. ee pusieron en enepeneifin en unn celu­
Gtia de section. gelatina e hidrazide de Indio. centrífugíndg
ee en ente nedio lee leetnellen. nientrne que Inn ellnlne ne­
non deneee fueron retenida. en lee onpennedinnne.
nn 1956 angelina. Aeboey Heneen (26) inyeoten nell­
ción eenne rieiolñmoe y "lución finde en el per!tomo de r.
tonee y obtienen Moeteellen en eat‘sóiee diterentee de Gemma.
1e01ón «topleomáticemue eueemn fenóneme inteneoe de note­
orooeon y un Mulero variable de meorófagae enn dnuloe mete­
om-tiooe en en «mph-me. fenómenointerpretado cono regoci­
teeie de ¿dulce de meetoeuen.
En 1956 (Ruben-g y Blenolmon (27) deeoriben en ulte­
do ¡en obtener leucocitoe po‘linortmuo‘leereedel endedo por;toneel de caben-e. que einen ¡no boee pere eetadioe entre es
ción de “me.
kn 1957 term y aobbe Ponent (29) consideren n en;
üpnceoión del “me ponmielftieo en cultivoe '1n vitro" de
“lane emdetivee de eonoe.
Se 1958 Eeten (28) “mm un ehodo ¡wereobtener ¡en
oooitoe polmononuoleeree del exudedede conque.
En 1958-59Puno" (30-31) tmbeje con retoma pere
obtener onltivoe de norgfagoe en 1o proporción del 40 fi pere
el eemdio de Selmonene I‘pr marine. y el ¡seno tie-po eetu­
die el pepe! de lee norofegoe en le imunided neturel.
Con este breve eínteeie ee he deeoedo der e cano“:
elgunoede loe principe!“ espectne tratada por diferentee in
veetiaedoree en el aereo de eatee último déoedee.
En eete trabajo ee decente un “todo pere obtener ­
del conejo en emdndoperitoneal no» en oólulae “¿retorno y
eu cultivo poetefler “in nm'. Se estudie y closet-rollo:
1) une tecnico pere el tratamiento dei enano]. previo e le eau-eg
ción de le neganoión oeluhr;
8) lee mariel". “anime y ¡odio- de «¡nuvo util! eedoeg
J) le anclado del andado peatonal inicie! y dns-enteen pg
rindo de ultima de elsunoe meme e trevde de obaemoie­
oee microeoópicee direotee y recurriendo e lee ooloreoionee
celuleree ouprovi‘olee y penóptioeeo Se pruebe tanbien medio.
- 5 ­
noiootivonon II intento do othIII vnrinnto- Iutttoial OI
1.o “una. o
notan ¡apariencias no ¡0.111.303 ¡otro ¡un esta. ¡a
varian ¡enojo-o
-6­
LAPITU" I.
ww z 34311
Um¡our!th 60h11“. cobrosu ¡noción y ¡aro-pon­
oiózy. ha nidodues-19th (32).“ 01 ¡nante tramas u un
obnmdo 1“ nica" nom. cuandonuria! do vidrio 17m. o
Jona020y Mungia». en. pm y Int-x. lu unan han u
c y l mi comidode tratamientonpirotfismo. I. ¡“afiliación
reanuda en horno (calor noo ¡[80°C1 han y nadia) o Antoni.
vo (mia de ¡cm imidablo) 20°a 1! 1h.
so hn nando¡gun manana. ­
porvidrio Pymdndndou do
una. dana prim" “sionismo-por¡"anulan nao-und.­
on"uniones ¿ovidrio üm. Soun Mina-do 1“ sigui»­
tn solucion“ auna. balanceada.(3.3.3.):
WW
¡tu 1000ootinlu.
mm.”
¡"'31 8 ‘l'o
¡CI 0.40 no
304 “en 7520 0.20 a.
Duoinr sucesiva-onto por agitación onda al en 400 oo do n-o
su hide-tuna. por vidrio.
¡“12.¡gg fin a:
012 (¡no 2H2O 0.18 aro
Dinelnr en 100 oo do una bidntiiladn per vidrio.
241330155 Cn
P94 mas 2320 0,075 Gr.
P04 ¡52K 0,06 a.
91300. 1 “o
Disolvor nue-nina“. OI!¿oo oo de mudanza: agitando ¡u o
_ 7 ­
treo ¡alucinnalo
Aarognr 10 eo de solución do todo tono! ¡1 °.2% llevar o vali­
non 21!!! un 11t20.00n ¡sus bidoatilnda por vidrio.
La. ¡alucinaoo A. fl y c ¡o yuodon proparlr Junta. 10
s conoantrndaogonn.1 objoto do consorvnrlno en ¡hlsdorn a 4iü.
u una 2 oc fi o do olas-aroma.
. ' 6' n ü' H o
Sczgcgfin Ssngg ¡g ganga st' r r * ü o
Gluofigono 0.02 sr.
liankn' ¿San 100 oo.
Entoriliaar oa trance ¡asadorn on ¡utoclnvo durante quince ni­
nutoo.
Conservar on oholodorn o 4' o.
¡gluogñ- g! ¡ggcfiggng a] "¡992 5 g 329::
Solucién Stock do Gluoógonn 6.02 fi 30 eo
Hank. 353 270 oo
notorilisnr on aqutpo inyector on natacion. durant. 15 I.
' 1 ‘ l "s
_Hopar1na 10 me. (950 a.)
820 100 oo.
Solución Stock Hoparinn 5.5 oo
Hank. 333 200 oo.
Estorililnr on eutnolavo quince minutos en equipo inyectar.
- "w'hï"(37)
(excluyendo 1o- iones calcio y ¡nene-io)
80 utilinn para tripninndos
F1061 8 ¿to
¡c1 («,2 cr.
anü CO3 1.15 Cr.
¡Hz P04 0,20 sr.
320 par. 1000 oo.
Solución rojo tono! “.2 i lo oo.
-8­
Enter!!!” en eutnoleve, ¡ex-¡tenor1.atemperature e 4° o.
Sn - . . H Ü“ k w
RH 0333 7.5 aro
nao haaeot11aae 100 oo (e coo)
Dieolver bien por egithn.Agregar un exooeode em de 6 .1.
unter Menoïumr por filtro clarín cante de vidrio. Boton­
¡{en el “tool-ve lo ¡{notan Conservare 0 406. re reposieión
de 652 le hace par ¡pee-do con onrbngonno ­
i.) 1' n " "
Nnun 4 aro
¡120bideatfleüe nene 100 amen un um: donde.
¡site! hasta diaolu046n Googlete.
¿a n r "¿:1 2', .‘í
aolucaón agan u ¡o oe.
¡120bidentilldl 90 “e
ruta" porfiltre olaflzioentede vidrio. Enter!un! enent.
eleve 10 lb. 10 nimtne. Can-crm e * 4‘ C.
29:29:39 Raja {gun} ¡1 qu pere 200 oo
Nodofenol ('ï 354.31) “.4 sr.
801. He 73/20 22.0 al.
Dteolver en eau- Mdeefllede por viario heete completar 200 oo.
Se tritur- e‘l rojo fenol en mortero ¡nata obtener un palm ti­
nfeilo. agregando prngreeivenente en pequeno. volhenee le .015
tión de Hem¡1/20y luego el ¡gue MdeetilndeJiltmr por papel
"een tree'. Uenr 1 ¡1. por cede 100 oe. de le eoluoión e grep.
reto ¡analizar en eutñolave 10" e 15 lb.
Ü .9 F. _.. Ah
IU . - U
B.
para 100 oo
Beheffin de antibinutfleooo
Pgenfioilimgeemmmiüm) 1 oo.
23000 u. ¡ce
so1aoaán nauc‘s 1.5 1.8 ee
_ 9 ­
Solución de hidrolizado
do lactoolbu-in- Si (’) 10 eo
Solución do triprinn 2 f
on Pas (Dulbcooo) 1! oo.
(’) La colación de hidrolisado do lacteclbdninn .1 5 í
no propqrna
o polvo do hidrolisado 5 aro
- colación do Hank. 95 ¡lo
Agitar para dinolvcr on bano ¡cría
a 70/80'6.
¡storililar Onoutoolnvo 15 minutos. o 15 lb.
Conservar consolado o nano. 25°C.
- 10 ­
u:_1's ¿a ¿¿':1v0
En terl1noe senorelee eet‘n tor-edo. por une eolución eeline (1
eiológioe. entibiótiooe. enero de ¡emíferoe. debiendo enrique­
0era! con eninoeoidoe. viteninee, teotoree de crecimiento etc.
Se utilizaron loe eiguientee ned1oea
EANKS BUERC¿g fi pere 100 oe
Henke' Bis 60 oo
e01. de entibiotiooe
(penicilo/eetrepto-ic.)
.20000 uo/oo Ice
eol. Henao} 7.5 f 0,20 oo
Suero equino 4o co
Hanke’ BSS 10 eo
801. antibiotiooe 1 oo
301e "le HCOJ79’ ‘ 1.4 0°
Sol.drok AI (eninoaoidoe 401) 2.5 oo
301.etoe 12(t1roeine-oret1ne) 2.5 eo
Sol.etock A3 (glutnninn 100K) 1 oo
Sol.flidrolieedo lactoalbuninl Si 10 oe
3n1 Neon 0,1 n 2.8 ee
Suero equino 20 oo pH 7.3 o ¡.4
¿”RMUTA GRNïRAL DEL mnuro DE WAYMDUTHMl75211 (461
_gl_
Sueggngig. l‘ 0/0
BICI 600
KCI 15
CeClZ. 2H20 12
ugc12. 6H20 24
Ig304 e 71120 20
Dextrnee 900
-11...
¡oi do Month! oo
Oiotoinn B01
Glntationo
Colin. 801
nipozantinl
Olutcninl
unznvo4
¡marca
flanco:
¿amm
¡inlinn
Puntotonlto do Cnlflio
Riboíin'inl
Piridozinn 801
Acido ¡61100
Biotinl
I-Inoaitol 2H20
loootincnidn
Vitnlinl 812W
L.Lininn HG!
L. iotidinn ECI
L-Aoido Glntúnioo
L-Trooninn
L-Argindnl BCI
t.aninl
t-Aoido Aopnrtioo
alicia.
1.75
90°
195
390°
39’
35.0
3090
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224.0
Ivo
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0,002
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15.0
¡.5
705
605
6.0
50°
-12_
Wu un
buon- 500
L-Loaoiln 5.o
L-Iotioninn 5.o
¡planilnlanina 5.0
L-riro-ino 4.o
L-Triptotnno 4.0
L-LlolouOinl 205
banano 1.5
ICC! (Opa 70‘)
Igg¡o 514TR“¡CQgs warmogTHng 123¿; (¡6.51=3g133;g_¡gggg
Sol. ¡took 81 2! cone. (colon.
¡luces-.50. noonrbioo.
dle. una” ono.connn.
hiponntimmiutuim) 50.0 oo
Bol. anchos: 4o 1 cono. (71­
ta-innl) 2.5 oo
801. ¡took 83 10 z cono.
(uinmoidoo) 10.0 oo
Agua bidontilnda 37.5 oo
Antiboitiooo (penicilina­
ntnptouioin ZOOOOIu'oo) 1.0 oo
hace) 7.5 1 1.0 0°
Wa La.ooluoinnoostacknoactor!unn por111­
troo de parecian a por filtro. Suit. y n anzurvan on hola­
don po! tio-po indefinimdo a 4.0.. con excepción do la oo­
lución ¡took 81 qu. no nation. .010 una J “mms.
-13­
FORMULA GENERAL DEL MÉLIO BAJAL DE EAGLE (38)
s_A_;
Amgnoággdo! Mgfio
L/Argininn HC1 21
H1Iüdim HCI 9
L-Inolouoinn 26
Lancia. 26
Lilian 3594
Motioninn 7.4
Ponilalnnin- 16
Trooninn 23,8
Triptorano 4
V0115. 2304
M
Tiroain- 18
Cilüm 12
_s_u
Olutnminn 300
vitangg!
g_1
Biotinn 0,24
Colin. O.12
Acido tólioo 0,44
Nicotinnmidn 0,12
Acido Pantotóndoo 0.21
Piridozal BCI 0.23
Tinnina 0.3’
Riborlavim 0. 051
Inonitol 0.18
_ 14 _
Además:
ÉESIQESISS leía
NnCl 5,84
ECI 0,372
N¡H2P04°H20 0.138
flanco3 1.68
60012 0’ 11
HgCI2 09047
Glucosa 1.000
MEDIOBASALDE EAGLE(EB!) (38-39-40-41-42-43-44-45)
Hnnks' BBS 70 oc
Solo antibiótico.
(penicil/oatropto/ 20.000 u/oo) 1 oo
Solo Naflco3 7,5 fi 1.4 oo
Solostook A1(am1noáo1doo4o x) 2,5 oo
Sol.Stook A2(t1rooina-oiat1nn) 2.5 co
' 40 x
301.3took A3(G1utan1na 100 x) 1 oo
Sol. Stock V (Vitaminas 100 x) 1 oo
301. Nana 0,1 n 0,6 oo
(cuero equino 20 oc( PH 7.4
Todas las soluC1onoaStock ¡o osteriliznn por filtros de pq;
Celanaesterilizanten.
_ 15 _
SUERO EQUIND
(49-50-51-52)
El suero equino. obtenido dc animales Jóvenes y anno­
(3 í 5 años do edad),esterilizado por filtración (bujías po;
callan). o. usado después do haber ¡ido ¡robado on cultivo. ­
testigo. y donostrndo su buon poder nutrioio y falta do toxi
cidad.So conserva a 4°C hasta 2 nenes, y o. centrífugado onda
vos anto. do usar a 1500 RPMx 159
V13.» Mu]; ounn-W
\ W, . .vw ., ..‘.¿: ‘ ..._ ._,.,.- . w “.1,‘ e l ,_a) QdJZHï'UI‘v/¡ï(¡J; Si I .. TÏaÉx‘waJfiAJLI’ Y­
JHIJLQ GULLqu "IN 71QRU?
\
b) ¿UJUULTIVMJ.
sera este primer paso ¿e 1a experiencia ae sigue le
técnica aescrfpta por dareki, Messore y Tepine (24) con.algu­
nes mndificacinnes. Se usa una solución ¿e glucágenn cnmn8-.
¿ente quimintáctñcn para la prnaucción de células ¿e exuüadn
peritoneal. su acción se ejerce enhre las células migratnrias
y se elige par ser un enmponenteGe los tejicne nnrmales.(54)
A un Conejo sano de alrefieanr 3 kg. se le inyectan ­
en el peritonen por tres días chneecut1Vna, 300 cc por vez fio
una solución estéril de glncfigenn al 7,9: 2 fi en Lanka dSS-­
(36) calentaua a 37°U.
ul equipo inyector está annetituide par un frasco ¿ag
ter ee 500 cc se magncicad, con tubulamura Ge viario y de goma
que termine en una aguja calibre 20. (big. I)
F13. 1.
- 17 ;...
El lugar ue inyección es ¿Abre el ¡ado áeracho fiel ag
áómen apróximaúamente a 5 cm. por debajo ¿el márgen costal y ­
a 2 cm. a la fieracha de la línea magia. ¿ueáe elegirse también
un punto que Giste ae 2 á 3 cm. par deïajo de la línea costal,
pero sobre el lado isquierdo del animal. ifig- 110%
Ïig. ÏI.
1
A1 cuarto fifa se le inyectan yor la miamavia 200 cc
de solución ("aeHanks con 5 unifiaées ae heparina y antibió­
tiooalTramscurrjaca 5 6 10 minutos y luego de un masaJe suave
del abdomen,el animal es sacrificaéo previa anestesia,por - ­
exanguino.
El conejo deba recibir una üieta alimenticia con abug
dante cantidaá ae agua durante las días cel tratamiento, para
avi ar una deshiürataeión acentuaáa que cnmóicionaría una ab-—
sarción rápida de toda la solución que se quiere extraer cama
fuente de células.
Por ntra parte es ashnsejaïle no hacer la inyección —
de solución ¿e fianha agregada ue heparina "past mnrtem", ya ­
que el relajamieatn y distensián de las vísceras puedeáificul
-18­
tar le introducción del líquido en el peritonee.
Por un onl hecho en ls pared del abdomen. se extrg
en por medio de una pipete aproximadamente 150 cc de un líqui
do opelescente. ligeramente rosado que se recoge en un frasco
de centrífuga de 250 cc de capacidad, estéril previamente en­
friado a 4°C y mantenido en baño de hielo con el propólito de
evitar tenámenoede coagulacitn.
Cada individuo de una respuesta variable en cuanto e
rendimiento celular siendo las fluctuaciones de 10. 20, 30 y
hasta 40 millones de células.
Siguel el filtrado de liquido por gaza. La suspensión
celular es centriíugada lo minutos a 500 RPM,el sedimento o
'Pellet" celular que es blanquecino con une linea superior de
glóbulos rojos. se resuspende y lava con Hanks suero por tres
veces consecutivas centrigugando siempre 10 minutos a 500 R
PM. las celulas son finalmente resuspendidas en medio de cul­
tivo en una relación ll 50. referida al volúmendel "pellet"
extrayéndose una muestra de la mismapara su observación en­
la cámara cuentacólulas. La muestra de ls suspensión celular
ee mezclada V/Vcon la solución del colorante (Solución 0,1%
de cristal violeta en soluci‘n 0,1 H de ácido cítrico). Des­
pues de agitar suavemente a rin de homogeneizar lo más corrag
tamente posible, se carga le cámara de Naubauer y se examina
en el microscopio'anotándoae el grado de separación celular,­
individualisación y númerode celulas. Hechoel recuento en ­
base a elementos monocitarios. el inóculum de siembra se sin;
te e.l x lo por cc de medio de cultivo.
El plan de siemlra está siempre determinado por ls
utilización posterior de los cultivos. Para la realización de
este trabajo tuó el siguiente.
1°) - Tubos de ensayo, de 9.7 á l cc de inoculum. Se destin;
ron el exámenen fresco y luego para coloracionee.
29 - Francos, tipo Kolle de 250 cc, place de cultivo 12 cc.
-19...
para sub-cu1t1Vns.
3°) o Cajas de Eetri, 4.5 om. con cubre para colocacinnee y o
microe00píe de tene.
Dggcgjggggg dg gn; sing. celulaggg de; gandgdo: Mamentneente:
de la siembra. la población celular que integre el exudede e;
ti representada por celulas de orígen eenguínee (globales re­
. jnlo lindocitoegleuoocitoe) y no sanguíneo de tipo nonooitnrie.
La ooleneoión con crietnl violeta pone en evidencia 1a
¡etiología nuclear, siendo los leucocitos polímertonuolearee
de núcleo lobulado y loa nenecitoe de núcleo oval o redondo.­
pudiendoee apreciar tambien el tamanocelular que en los pri­
neros llega a medir de 7 i 10 micrones y en loe segundos n‘e
de 15. (Ver Fig. III y IV.)
Fig III.
Objetivo 10 z
aclaración: Cristal Maleta.
varias tipos celulares que integran la población.
del enudadnperitoneal del conejo.
- 20 -'
Unavos roalicada 1a siembra inicia c1 cultivo "in o
vitro“ a tonporaturn de 37°C. A1 cabo de las pri-ora. 5 horas
las cólulns mantenida. en posición horizontal innívil. onpiona
a adhnrir yy. extendcrao sobre 1a superficio dal vidrio.mrang
onrridan 24 horno 01 notabolinno celular aeidirica 01 ¡odio a
pH7 - 6,9 (pHinicial 7.4 o 7.6) y lo: tubo. y frascos nao.­
jitnn do un lavado con Hunt. suero 20 fi. para arrastrar 1a. o
impurezas pro-onto. i do un cambio de nadia a pH 7.6 que lo ­
roaliin aspirando 01 medio aoiáificado y reponiondo 01 nucvo
en las lil... condicionesde sicnbra.
A1 cabo de 72 horas de cultivo vuelvo a pto-ontarno 1.
¡itiación descriptn, pero 1a observación microscópica directa
nuestra un grnn númerodo oíiulna canarias. al vidrio, Juli­
formen con prolongacionol, que tienden a dar un "Shoot"oonnw
tlaento y ollulan rodondoadai rorringontoa Dion adheridas (vor
lis. V.) '
V.
objetivo 10 x
Micrototografía dir-nte del tubo de ensayo,quonue-tra
un cultivo de 72 horno en ¡colación on 01 ¡odio Eb -‘
752/1 con 20 fi do sacro equino.
-21­
Al quinto día el "sheet" puede considerarse completo.
Las células compactamente unidas forman una menbrana que ou—­
bre el pand de los tubos. alcanzandoae a ver e simple vista ­
comouna película blanquecina.
El medio de mantenimiento requerido ahora tiene pHel
to (7.7 - 7.8) y un porcentaje de suero equino menos (de 20 fi
baja a 10 5 y a 5%).
De tal forma ha sido logrado el primer peso del oulti
vo "in vitro”, el acostumbramientode las células a la sobre­
vivencia y a la proliferación en condiciones ambientales nue­
vas. A continuación será tratado el problema de su mantenimieg
to por tiempo indeterminado e través de subcultivos sucesiooe
y periódicos.
Subouggjvgg: A1 octavo o decime día de cultivo. le población
tiene aspecto muydenso, las celulas empiezan a disponerse en
capas superpuestas. el metabolismoes tan intenso que se re­
queririan cambios de medio frecuentes a intervalos de pocas ­
horas. Ademásexiste la amenaza del desprendimiento más o me­
nos extenso de 1a placa de cultivo.
Ha llegado el momentode obtener subcultivos por me-—
dio de transplantes o repiquee e otros tubos y frescos. Para
desprender las células del vidrio ee utiliza tripsina al 0.30
fi en soluciln de mantenimiento (ver 1a preparación en pági-—­
nas anteriores) dejándolo actuar una hora a 37 90. Esta solu­
ción digiere a la sustancia intercelular y a lae celulas mua;
tas; puede utilizarse también para el mismofin el Versene el
0.02%en solución bufferizada de fosfatos (PBSDulbecco)(37)­
(53), libre de calcio y magnesio deJándola actuar 30 minutos
a 37°C. Esta sustancia tiene la propiedad de despegar las c‘­
lulae del vidrio sin efecto digestivo Chelating Agent).1’.asu!
pensión de celulas ee lleva a tubo cónico. centrifuóado 10 mi
nutos a 500 RPMy obteniendo un 'psllet' firme que es suspen­
-22­
dido en el medio elegido para la siembra en la proporción 1:50
Ia observación en la cámara de Neubauer muestra un eg
tado celular muybueno. elementos separados de formas redondo;
das ente las cuales se diferencian tree tipos:
Tipo l.) - Cllulas redondas de 15 a 20 micrones de diametrode núcleo ovalada o redondo en relación normal o
con la masa citoplasmátics.
Tipo 2.) - Células redondas de 13 á 15 micrones de nucleo ­
periférico arriflonado.
Tipo 3.) - Algunas celulas gigantes de más de 30 micrones a
' veces binucleadas.
El rendimiento celular es generalmente de l a 3 y el
nueve inoculum requiere 100.000 células por co por estar ya g
oostumbradasa 1a vida "in vitro”.
La ecolución de estos cultivos es rápida pués a las 24
horas el "Sheet" tiende a ser conluente. las celulas son tran!
parentes hialinas sin grsnulosidades y mantienen su relación
normal de núcleo/citoplasma con tipos fuaiformes, poliédricos
con prolonfaciones y redondeadas. Ia multiplicación es activa
y el metabolismo intenso determina al cabo de otra semana la
necesidad de un nuevo repique.
Conesta técnica las células se mantuvieron en cultivo
por un período de más de dos meses a travds de ocho transplag
tes sucesiVOs. En el capítulo sobre Citología se darán más d;
talles sobre 1a evolución de estos cultivos.
C) Solución d. Orio violotna
para 100oo. final...
- Punt 2,1014sr. a. “un aim... maolm un¡oo
oo lo ¡sus ¡idastilads por vidrio (agitar canvi-anto).
-_ Pon-r 0.100 3:5 lo cristal violotn. ¡olor cn y!!!
tino y ¡sanear sucesivnnnnto1; solución do ¡nido nítrico ha.
tu disolv'r. Llcvnr a.volfinan tin-1 100 oo can 1a solución do
“Mo cítrico.
o rampa-md'uhtru'ymmrctm
‘lll'. ÜÁÚ‘OO
Colorantoo ouprnwitnlnoa neutral Roa (latina-1
una. ¡nn-ua1.1.)
Juan. Bryan (3.3b8.)
Solucionc- Stocks
A) -' 92L2eéfi2.2i295;ln.!121¡nl.fiuaw
¡outrll Rod129 la 2 (Concentrloián ¡al colorante
Alcohol nbooluto 90o.) 0,255)3)- WWW:
Jonu. orion 125 ¡3, )
Alcoholmomo62.5«.5 ü 001°­°)- WW!
Alcohol absoluto 10 oo.N- WW!
Soluoidn B) 1,2 g.
Alcohol absoluto 9 o.Ü- W!
Anto- d. usar lgrngnra
.. 24 _
solución A) 3 oo
Won 3) 0.4oo.
(un mas nou um.)
wm 30m outro-own“nnpioocu-Io
«¡mummummmnaumum Bauhau­
myumnpmumoahnduotrugomunmpq
¡1h “lam. uva-nano um 6101um quecontinuool oo­
.lonno Mondo. 80panama lo. borda del.preparadomin­
Mlu chaman- .1 “Cracovia.
IJI' \LnÁ'rl'fl : '. 'I
¡byGW m) 0.30gr.
noche).¡“mas 100 u.
01m (polvo) (3.11.3.) 1.14 a.
Alcohol.¡»mas 112.5 sr.“amamunumyumnhmuncnwwr­
“born.mnmn‘mmtun nun" ¡»om-48m.mmwmdymumnu.
y .A u I|I
4
Montar m con lo ¡man-16a anular sobreunporta y una,
“o
DolarWo
1)- ¡haama a) hasta: (¡lecho!latina) J mato.
b) ¡area-r unmm a. ¿om 4o¡gun
com-nt. tem .1 ¡han de¿ota­
h ¡by (¡n-mala. aclamada un unn
to.
flomrudpmdo.
Macu-¡1:50 filmacion-n
amamantand­
¡Soon-emanan”.
nmmuzstaonnutu.
‘)-nVII'o
- 25 ­
9) - “mantu- d) ¿casona
o) Mateu ¡1101
t) ¡1101- 9 Mmm.
Prop-m¡en wzm defosfatosn pH 6.8n
WN 21.5’Isroon1ulmcnbooouhmduflp
han.
me?“ Soma-onulanOOOuhmn-W
1.4.0
¡MWCMM {mi 2.000"o
rar-unan Wan-gamma“.
9 1to do ¡sin destilada.Wa
1) o amada al ¡Isabel latinos 10mutuoI)chmymmdprmdomcammzmm”
30 mato. C 37°C.
J) o Colemanconm om.
lot}. 1 parto )
“05M” ¿acumulada-nu
4)-hvuunlufloh
Header-ubuntu“
1;“: g 1 6 12 ho­ndo: munr doa 1°m“. ha..." mm micro-069100.
6)o ¡mr c- Milo1)-nummmmm-hcmmn nou.­
“ color-nn. entreno nora-0613100..
O)- lam conButtery «animar. tratar con¡1101.lona.
ers-mu doLlth (Cola-nhun Oo.) 96'.
Alcohol.abuela” 90 oo.
_ 25 ­
¿lumbre ¡único o potásico 100 61'.
¡gn musa. 1.000oo.
01160loW 2.9a.
Duel”: h antesala cnalcohol. el alumbraen ¡sus om “lor.
Quitarm calor y mehr amb-osolucion-o.nom a “unidas 1
mimo. Quitardo].n10! I W 0103160deMomia¡q
Muente. m punto comoh colación to. un color pas-pumosm­
nooloaroltmmcnmtrh. latinounnttnntnunol
m cuandoarma.
I. mah del 4%de¡oido“¿the manto.la mouth do1. ­
tinción nuclear. '
¡bum (fiction).mua muda!) 1 a.
‘GÜ 25 “o
Alcohol 9" 41 No
Agusdestilada 125 a.
num una 6.ousar.
9 ".r I- I ' . . A. . I.“
ros-num 290 oo.
80.1.“turna to ¡ciao pia-10°
(10 sr. do um platino W750oo. 750 Oo.
¡o una)muuwmsuohmdo
“¡un 610.101.100... “Benin.
C . I
Cultivo som V1010!
1) o volcar 01 ¡“to
a) - nur con¡un 883
n-nanroannomsumtoo
4) - un: connacho).to.
5) O «mmm han. ¡100110195°
6)-muw1mcn4fi(udunrtuhnooholymwuu
her)
-27­
noáu-noIonóldedel bom mn mol un.
Obtención“1 con. lo Pal-¡odian
a) o valen:d ariadna ¡(goma u­nomdhumumcmmhtmn
3) - 11m 01tubotu ¡su4)-m hnum.
Homolomtoamow.
Mamma!
1) ¡io-¡tania (Hurto)¡o m1".
a) ¡ando abundanteun ¡sus corran” (una)
J) 81 o.“ cobrocolorado.
¡him ¡nado(11‘B61a 10o. ma) un inn-nun dom
t vana:-w ¡su¡mamas-mummxoouum) ¡n­
nmih l nn:- por
agus.
4) Landoun ¡sus 00mm..
S) lio-m J d 9 nacion.
6) lavado con¡ana comme.W!
1) A10011019?“¡uñas! amarga) 64m.
a)hasta“ «una: BWUIOIIIOIandaba-n.
3) mola mesa nonano.deuna han.4)Wanna-obam:mmmm
WW: (' pantano-1)
Wa ¡mecolcrantccatocadoporcl cinc-a Illes-om
lardclcltcplacn‘claacfluluflmo Pcrcctamhhw‘uc
usarlon cmtraclhaotónca. ¡acoluadnpnparadapara­thumatMoancnclamtmlhtmldcla
4.000(m la uuu-un camuu animos-ca).aluden-c ­
nadal: 10.000cccbtlcnandcpcalhndczóleotacdcamcn­
ción celular com ua porta-objeto c uva-nando al cum con«­
clcolcrantc.Bcpudlmlccbordcapcrammlacvapomlón
y ¿comida y cc hacen“cancion-c a1 almacena alentando
la coloracióncelular ¿uraniounahoraa “montura msm..­
n ¡cuml Roduna qu rccpctar chapa lcc añolcoc.alado oManhunucumlmthmondhmuublu
llana.
alclnúclcccat‘cclorcanclaccilulaaccccnaidcmm:
laa chau-nunca ao nacen valor.
L.¡“at-J." A' ' "1.:: '.'.,'0‘.
nel-mmwm.rcd0ndacqucn1 dcficlñnlczvncc.
claim dcalos-0mm u todoal citoplaana.Anima.
¡anto c ¡Anda-cinc tuu.“- pcr cl ¡cun-al Bad. lúclcca
Wanadoo. chtriccc y ala ccloraclh.
MtoüluNpqucm-ndondac qncaldnndc'laloncronca.
31m- ala-amm colcrcadolimitadoa unauna cl;
mmm dalmmm
un 3 o “luna paqucñaarodeada. ¡lclo lloran... El cltcplacna
cata colorado manana-Mc. ¡calco parafina.
rmtoollulaagrandccrcdcndaadcdadcláalmnccaocclc­
nadan. Iñclcc central.
21m5 o “luna pcqucfiacMonda dclo aim. amena alan
vacuclar no cclcrcadco (P16. Vl. y 711.).
una.mas
WW m '‘«­Wum‘gh “y.”
Observaciones usando 0.1objetivo do tucumán 90 uupo1-cumonaommumuunmunmmu
núoloo núcleopenas-¿oommm o Wo con01“town-In
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ngvoR-OfluluamnmoúmmOMMOo-¡m
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sms-mnuuzoumnomumm. “anthony­
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la lion. “union “ocupa pm 01genial Rod,pero¡lomo dl
una queme, n concentradafinal a una» cobrolu entro­
obáotonla" de 1 a 6.000. 30 loa-ri U. ¡Math ¡o 1 a 15.000
“Mew-Wuoupmihednnrquoumdmmun
tu” ocn01 colorante(Vo:la duoripoih unmun- anterior-o).
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nulo-a.uma-zu Wan. cn.1¡“cpm
un 3 o “luna grandu.m. caminante agrupadas.a ¡la
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“MWMtwumnmaoucm-ummmmmahmwludo7nmaühomem­nom
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musulmanmoimuluidnlnlnnssymmmn
pn.sopmnnmtm°3uuomaunoduumdun
had-Whatntcmmuoumonhutufntsro
emula-union.
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machad‘pann'nnmpomyoum.
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putioulueolmononatophm.ma-prqumu1tzo-1muunm1u­
nmhmfluflunm.
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destapa-n.m4-mmpqmu7t1onmmmxmm
num column-u (1'13.x.)Tomamoummunummdmoumhg
no
¡38.ÉnfgífoïltiigiïtsEïiíg‘auïÉ .¡{gía-nun???¿nos .p.ogggïgcqï.8;t¡ÉA‘CneggíÏ-uggflí_‘Ïigááïqgg83€.382Éniooauvoïoo;tgiitïoïíízi‘.i‘m-83%? ,Stgíeflelgfiüïtg. 8¿Sígegflgigoïgggnguíggasïgí‘vigituu’noítggl;¡igggïgïïgttgífïfiïggut¡Rigging-¡5.35333igggiíïg
_ 34 _
Am “Wim. en. tipodebeWW ¡.1á. 10.m6­
S)-0ümnmduhúh20uimdommmuw
pimdmg “Malcom, mmommoólu. ¡m
en}.th aorpr nlas661m-nacional“.
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3. mln“ dooolomiéamowimmr “11113€;(mm
nu anterior”). por ¡sabornotado quo 1n- mula- etacultivo n0­
emma. mflamantemmmbmmmpmpodmom
nur“museum”.
IAasunción mimoópiuamsnm la desaparicióna. los m
lovato.¡mmm y mmm“. aqiom a. las cual“ cono
Marini“- ¿a1mm”. y mms“. Lapoblación«¡um
m Mao. a ¿al tu)». “¡tomóCalla” o célula Mendes a. 15 6
13uma“ a. damn-o. a. núolaoentre"confiadoy a. «­
mutua¿masy01th inth M1119.
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rs-Iaolon¿»bum muda mulas nmam<vm.n.y mi.)
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to cuando y¡60100“aduanal.- con«¿wmdebil-at.W.W
Mii-LnMWaoWhuflgmmm
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1)o unagan: ¡han demina» a. tipomata-uno,dc­“coloma
a)- uma- manana .7“Montura-n.3)-mdoúuluuomuhmmgmm»mhMonumvaMnmuW
«Ci-AlsmouunquouuummhmddumWyfltWMompraWo-Wn­
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cabroobjeto)h nuth colqu doun1'09!an'in vitro
Colom en ¡n done-dor qll. on su parto interior «¡no un
cuodón ¡osado on ¡sus a nn de autom 01 grada do m.­
dnd ubionto moco-rien
“mr con equ-5530219(95 fl do oxigeno y 9 f de “mando ­
urbónian).oomndo bon-timon” o incubnncna 37°Cduran
to 48-73bona. 20mm. lo incubación, ¡»bn ¡a porno)­
Joto no “¡un un nro. de l un. do profundidadm nm .­
nuoh da parafina (l para) y con do abun- (2 part-o).­
“pooihndon on “tu pagana camaraunn con. del sodio
domitin. Bonn011.u innato ol amobJotouB u.)­
1 n ¡011.m la ¡im ¡anclademua. y confiandan
que no queden¡urban- do un. (mancha: o vuelca 73.8
1 y. 160taba. 1951). In obsomoión u hn. on nieto-oo­
pio una (¡06010Crtolu contra-to de tono). 30 11m a a.
cabon temperatura“Monto innato 1 han.
Chula. ¡untar-o- y pauta?! un con piolonú-noiomo.
¡edition 26 ¡tornan do ancho a 250 nica-one. do largo.
¡nba-¡nl¡num conruina-cian“ una. y atras¡lo del
(¡doohan. tintura".
mnophm mataron". Imagen»con¡nnullunmo un...
¡a o! ¡ndophuu "tangente y oa donado n destacan gram
humana rumana. mana y atun buihnton. Duncanq“
no oncuontnn tanbiin on ¡no pralonínoiomo o!toplnmuon
cow.»
nounulndas en 1a n&na pprinuelear un hiitrm a un grupo: fin} &
tamaña a. means un 1 miorón, fiataüas és mnwimionta por avia­
bla nulunonto en onza sana hacinar. 'o han nntnáa unnbsna ¿o
1nüiee áv raü aaa!6n ona variaoa naa de? Ofilfir 60* filama» no.
briïlonm niña rfl.91tapïaama una riïamantnn fina. ¿si tipa fio
lau uiteonnariss. dia ingu(e:fiñaa fiamhlfinuna sana catan dal
núclom IBannsa, ¿no enrrnaponáo a 1a nbionoión de! aparato ­
¿a 69131 y Canarnanmn. aïgauns clamanína grandes ¿a onnánwan­
ción, "negaba, ;"v4nuctvnrmn, fliwpuaatna un taras de enaqneto
en una ¿o inn gn’na ¿al aficion.
flanco aval ¿e 15 macrnnoo, unn ¿tanga membrana-2 dos n tran o
fnrmncionas ¡nHfl üanágu avanzan (finalealas} de} tamaño de 34
¡sornnuao se flñwtsmgununa masa ue gramatina cabro un ¡caño ­
nm-ns‘noa.
matan oéialns han sida cuzzivaaaa on o! anita 40 aáïx ¿ga MB
753K! can 20 fi wwsacra «quina.
1’15. X?!
Übáotivo 9Q 4
a3} ÚÏGKÜHÏGMWBI
{3} Ïnünpïmuma.
0.1.
(4) Complejolicrogtnnulnvoocioular.
(5) üBnploJo noorovooo1oular en casquoto.
f6) ¿sombrer-molar.
(7) Fnalooloo.
Contrcntsnda cotas nbaorvnoionea con 1n- dosoriptno par Eos.
(53-84-65) En Gozo; c‘lulnl ¡o la Sopa Hola (davivldno do In
estatuas. do ouo1lo uterina un: 1953) podamosintorprotnr II
cinilitud con o] tonñnonnde “pinflo1toain' y actividad ¡Jare­
grnnulovoicioulnr. cuyo tocinon expensas. a continuación!
80 entiendo por “yinaeitoaia' (null drinking) un (cuán-no ¡o­
nOtIlilndo de dlhúntión 1ntrncoluïnr de aicraaotn- problanonto
rolnoionndn con 01 ¡odia aabiontnl. Roo. describiñ don varian
to. do onto fenómenos
l) - on oíaulns cultivndno on tldidn ¡laura! o nnoítiooa
a) o on 03121.3 cultivada. on ¡nero banana.
¡a la torno narra! do “pinnoitosio', las nicrogetnn arranca ­
que ontlln a trívoa do la ¡cubran! coïulcr. roduoonrígidanog
tu un tamañoy ¡o radondonn al ¡travo0lr el oiáopinann (con ao
1 l 3 ¡aeronao)o Su indio. 69 rotaocián no ¡ltorn cambiandoo
o. color can la optico do cantan-to do (una. del blanco brillqg
to 01 negro. fan gota. ontrln entonces I ¡ola-r parto doi 03g;
¿cdo pnrinuelar de aranulen aceros y rottingontoo.1q ‘ptnooic
tocta' quo no nbnazvnon cultivos con ¡nero banano Vhrí- ¡o ­
1. toa-n habitual on cuanto 1-. nietogqaat (de 4 I 23 ¡tetona­
Io ¡OduoonOI tamano. pero of ¡naatrtn un indico diroronho 60
ratoocooión. citado ¡u variación del blanca al noaro (VF 00110
Quando1- 'pinooiïaoia' os activa ¡e dintinguOn Iiúlpr. en 01
Oítoplnlna paquofionarnnuloo negroc (alarnkinotoatorno do “.3
í G.6 ¡{eran-I) qu. lo ¡novon ripidsnonto. Da orgnnoido ql. o
no observa sole en las "Y?Cnïlo'. aparte. oooliñnnlncnto oq:
CI do la cuporzfioio de la: micrognyas (f? grúnuloa) Cano ¡0­
¡non-o ¡ranuïaoianoo negra- (VP católitoo do 3 ¡Havanna do 61.
l.ttn).50 supone qa. ¡no níorokinotoctoral puedeno»! un. tnqn
to celular de caninas que una llevada. a ¡a niorngatnu. tota
06‘.
¡dee ce ¡current pol-quolee gotee ee coloreen ecc el Nec­
trel Red. colonnte indicador de le posible preeencie de c­
hivas. Brea-inc y Rep-inc. Se tnvc le ieprecicn de que 1e­
ntcmkinctoctcru no ee cubanas ni con el neutra Redn! con
el Jeme Green. na ee emcidcrcn entoncee cano pene del con.
crime. San embargoexistirí- me relecMn con Jete.
Tntenlo de der ene explicación e este tenhcno ce “pene que
lee davant“ de lee chance V.“Contienenmpcncntee ¿c1 e“
rc. y cl cccrc humuscontiene ennme inhibitorioc: ¡ete m
de cer un rector queaumente le tor-ación ee loe ¡dulce
W.Se puede eupcmn que lee enetcee llenan e lee nica-oso”
de lee “Juice V”par lec “activated-me con ¡eur-eli cede.
pnl-le engine1mm4taria del cuero hath en lee ¡Mitcng
eee en con «¿cuan ¡note ¡de teme y ceciicn cu índice de ­
retención par le reección end-hice. ¿»Ulptl‘lde le nutren­
¡ación de le encina MMMtone le función digech pmeicae
y los annalu V?”ee “cuelven en 1 6 2 che. (30cc G.4. nt o
aceptan. e Machu. Catalog) (v kms: 691.104. 1931)
¡a "uni-ción m unaMlueih lo anchoas oah
envia-d autom: del con-Jo por-1to obtonu una ¡»1.01611o
001qu lume. con-11midopon nal-átomo.3.061.300
y almue- “sanitario. o ¡han suficiente«no un ana,­
Oilr lr: mmm "in vitro“.
1.a.“ordina- anupnrooonen lu prints-u ¿8 horas.
ocupando“ a 1M num. anuncian. a. vida colo le. 01m.­
mo ¡annual-1o. y Inox-6:.“- quemm en poblacion“mi;
tu. pmitiondo“muito- porunadunan me: ¡lode. og
son.
Dar-nn todo en período de tiempoantiguos sin ¡nyc
duración sus mota-(mon ¡oz-falacia.-¡annalu de del“
y «un... y si. "1.0160meho-oitopllmü en. ¡todo un
ricm-n doni son. “¡Min “rulos. Quad-nnhurntu ¡un o
nu “una ¿hanna1 chun: rihanna“.
BIguanyado distinc- nata- de cultivo. own “tom
en “te”. principal-ontoon ou contenidon ¡land-uno y ­
v1anima. untaniondn amount. h proporcióndo mn ¡quina
pot-1to obten: varuntu ¡oz-zo!851cc. con predominiou u ­
tipo «lala: ¡Abro¡tr-u (Tipotobrnblisnn sobre tipo unch
{un o iman-onto}. ¡cul-I un!“ dome. tipos. población
¡un a uuu ¡"30:01h. no Ilimitado“ sin Cuban-goen nin­
adn ¡monto por onto mtñdo a h obtencióndo cultivo. me.
do ¡nl 11m. ¿o “Inicio30 podrían explica! on viano ¡nao lo. variacione- do
lo. tipo. 001m"- aburridos.companerla. ¡0010.de un;
vo utilizados.
El ¡odio de Innoan Hana un. “inmune. en conce.
Matan“ “poner” . lnI “1 ¡“to d. Eagle.llomflo a m
dobla. on ¡nenas eaaoo. En sabado ql. 10- libroblaateo. ou.­
rron por onto aumento. y tiondon o dos-parecer 601 cultivo.xc
cegininn por OJIIDIO¡o onouoatrn on anna-ntruoúonOI superio­
tu ¡1' 'opam" (uf-1m, otros¡madonna Enoüdin-no;
nn. ¡Iutnnin-J y 1105-a car un ¡sota! linitanto poll dl cro­
oinionto do eiort.n cop-n do fibroblostoo. Sería ont. una ro­
nóa para 039110.! 1a tran-formación on o‘lulno llillïldl. quo
tau. un cultiva 6.0908. do ¡Igunao pasaje. en al Indio H37,2/1
Por otro 1-. onacontrnoionoo do vitamina. duplicadas. y o! o­
grogado no vitamina 312 (C.ü2fi) tienden n aumentar el orooi-o
litnto colulnr. asplionnaooo1a mayorprolirornoión de los -.
odlulns cultivada. on HB752/1 (¡eymnuih). on contra-tc con 01
orooiaionto aunar observnúoon cultivo. nnntoniaao oa 01 ¡0­
610 KB(Siglo).
;cnaaon la empatannna. poder onntitnnr esta. capoei­
otonn onamianto. anulan.
Para en indudable qa. toda vos qua no parta oo un. ng
Macia- celular emplean para nbnnw “una do cultivo punt.
o. necesario recurrir n las tóonicaa de naoïauaonto olonaloo
o port1r do una en). odluln. Puóo. per 1a ¡inplo ¡06111000160
do lo. onndieivnen de cultivo. cano puede no: por cnríqu001-.
siento o empobrociaiontmno lo. principio. natr1oioo. ¡alo no
añanisuo 15 ¡tonuaeidn de un tipo ooïutar. pero no ¡u don-po­
rioiáa total. la! ntro lodo tampacooo penita. asegurar ¡o .­
qno no ¡a trato ¡impleronto do ¡nrflanto- nortolóslonc. El oa­
tudia a. las aclaraciones auprlvitoïeo y al uno de partícula.
oolaidnlos o. indico canoizlo para oprooinr cl afinar. de ¡long
tigo. que incogtnn un ouitivo.
/ ¡A/V/v//_,...W
3-3 Quay-1:?)
Enanos Air... “ozubro de 1959.­
meQuantume! mmm.
“nenee! adultmi. "unum'. Mmtoght. ell­¡no1(¡reuma- “hue­
tol) 1.105462. 1916.
A“¡puma lema ter the
«Alumno. ot ¡una tienta
'ln una. mhreeovosldm.
1925.
(¡been-unen en noch-tea u.­
euee end und-tee. ¿manana-n.
neta. uan-356. 1938.
' ‘r-anemia. «then-¿:0­
m(1)
(6)W
(9)WL.
en“ een- ot the peritonealuna.”ute tu una” t:­
pee. Bee. enemmumedopm.
'21. SSC-3330192H‘e
Aeen-nun ¡tw e: 1mm;
tee end“mu-ete eulthntod
la “me Bri‘emeM'emeNE
'960 961.1928lmomu'o5filo
533.1931­
Invleedun bem“ epdeeultmm muelle Rede:mat1:m.smomm.ms
1120.1935.
"lanueebuth e!unmom“endMim“ Ii
reference to Mamma-n end
Mal proponiend’mtotuberc
ueoeotnneoühzüpaós. 1926.
me dura-km3 m Hem und
peritonqu sm en!gmbu
¡uuu-en.an Medebors'cmmorú’euhrmh
v 190.196.1936.
the «volaron et pure«¡nur
el ¡1m bla-te tm singleau“11., “¡y10.50
1191.1. 1936.
’L’Gt'tzt‘ttt
'mw-nm-r«muIrm diltztnoatrozgangorzlitdoou
¡o¿cummmomia:«mmm(ct) "tfit“8L!o.6
ÍQÜQV'ÍÜÍH.ÜJ‘Í‘'Ï”“‘ï‘tn.
'ÏQ°¡‘33Ü.'“3Ü.3°..°33''ql
°576t°azetIGt
IQV°tot‘tv6t'ott‘ott'99A'ao'a
'ua-*°r’UOtOtATDJI090-810w;
zOOGDIDJIJrotondaqg‘n¡OSqu
-oao'u¡o¡tangtnocana¡ocor.
¡o¡untfiotoslbto:cuotat:udnaí
mumonmv’zffit/tffit'df'dz'oottor-Kng°e'Oítth¡t¡Ofi'uflhüü'i
ammunflflhmwds
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martom'etót'ós‘sv'sa°A09'.
-tua°uzvd'uoav’Ut'UTQOJÑIJPU.
¡albounuo;loglboqúntt¡o(tu.
3t3‘t“'flll.0019"}.tillttno
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’tht‘Lo9‘t66‘Gct’v’w
'nm0mor«¡unn91mm
tu"una!30numm
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la. 313.331. Sumar 1957.
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Simpletio-no culture “miga.to: qmtitnflngtm nc:anof"tiene “thai-1 0.110.
nino. v .128(3.319) 306. 1958.
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121mm ¿“113.101.136. 771. 1958.
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una“magma ¡10:10:15:an­muowo'20
¡nominac-cantan o! on indaga
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¡1to. ¡NNOSOOQWI'O'ÜÁ01O
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nififllffiho '1695380568. 19590
Studio.enthe ¡alpha uanquo: una“ ouiuntedInum.
Intel-relation:thhow-n mm­
no. “inmune. uno-um. ¡ndcomo. um. J. menciona­
Ilbl '35. 756. 79‘. 19570
uuu- culturenutritiva.
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nomu mamut ofnb­
‘bit tibroblaou. ¡train li a 3-56.
403... ¡111.1010‘1091’100’
nba- fora-uan u mayas-ion en},
turco o! L ¡una tibroblnata.
Proa.m..wor.mo1.m v 97.
359.362. 19543.
no effecto! “tu imitan. en
the proliferan“: o! ¡train nome
con. ul Vitro (¡ou-orambla-tt
Jo “‘o Cancer m‘o v16.769.302.
1955.
-53­
(79)M...
(00)W
(61)W
(82)m
(33)
«E ¡r-lr ¡r (:1
Thamu cantan!e! fin
andamio Ironhour»u­
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Coopmtm. NJ.
¡YTBPLUCCIONI
Brevehjetnria del cultivo '1n vitro' de celu
lee de ezudado peritoneal de mamíferna con e.
peoiel referencia el uso de onneJoe........;...
CAPITUYO g
Material. eoluotonee salinas. medio. de cultivo
CAPITU'Ó I]:
e) Obtención de oóïulee de ezudado gor1tonee1
del conejoy pri-er cultivo “in v1tro'......
b) Subcültívoloeeoeaooeo.oeeoeeoeoeoeoeeeeoeeoo
CAP TU” n
Citologfe del exudndoperitoneal y de lo. cul­
tivoe 'in v1tro'..
e) Preparaciónde lee colorante. ..............
b) Coloraoionee y nbeerveoionee nicrnscópioee
d. 1.. O‘lulll eeeeeeeeeeeoeeeoeeeeoeeeeeeee
CAPÍTUÏC VI
01t0106íe en contre-te d. t... eeeeeeeoeoeoeee
REÏQJENÍ C‘"C’U3ïï9?3a.o..........o.....o....
BIBLIOGRQÏIAeoeeeeeeeoeeeeeeeeeeeeeoeeeeeoeee
16
19
22
28
JV
'43
4!
	Portada
	Introducción
	1. Material, soluciones salinas, medios de cultivo.
	2. Obtención de células de exudado peritoneal del conejo y primer cultivo in vitro; Subcultivos.
	3. Citología del exudado peritoneal y de los cultivos in vitro.
	4. Citología en contraste de fases.
	Conclusiones y resumen.
	Bibliografía
	Índice