Hemoterapia

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TEMA DE LA MATERIA
REPASO DE GRUPOS SANGUÍNEOS 
SISTEMA ABO 
DISCREPANCIAS ABO 
TÉCNICA DE NEOCITOS- QUIMERISMOS 
(campo mixto) 
ABO INMUNES 
ABO Y Rh EN TRASPLANTE ALOGÉNICO DE CPH 
SISTEMA Rh 
CONTROL DE CALIDAD DE HEMOCOMPONENTES 
PANELES- MEDIOS DE REACCIÓN 
MÉTODOS ENZIMÁTICOS 
DIAGNÓSTICO GLOBULAR 
INFERENCIA CON POLIESPECÍFICO 
PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD PRETRANSFUSIONAL 
COMPATIBILIDAD PLAQUETARIA 
ANEMIAS HEMOLÍTICAS AUTOINMUNES 
BIOLOGIA MOLECULAR EN GRUPOS SANGUÍNEOS 
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Son de carácter heredado, localizado en estructura polimórfica de la membrana 
GR y son reconocidos por Acs específicos. Se han definido 36 sistemas, 227 
Ags y 1176 combinaciones alélicas (un alelo puede ser dominante o recesivo. 
También puede suceder que ambos alelos sean codominantes. Algunos genes 
tienen alelos que no codifican denominados silentes). 
Sistema de clasificación: 
 CARBOHIDRATOS: ABO, Rh 
 GLICOLÍPIDOS: P 
 GLICOPROTEÍNAS: KELL, Xg, MNS, LEWIS. 
 PROTEÍNAS: Rh, LUTHERAN, DUFFY, KIDD, DIEGO. 
 
MNS (002): IgG + IgM 
Constituido por 46 Ags (cromosoma 4). 
Frecuencia: M+ N- MM 30% 30% 
 M+ N+ MN 50% 50% 
 M- N+ NN 20% 20% 
 S+ s- SS 11% CAUCÁSICOS 6% RAZA 
 S+ s+ Ss 44% 24% NEGRA 
 S- s+ ss 45 % 68% 
 S- s- SuSu 0% 2% 
El Ac M no suele causar RHPT, rara ocasión EHFN, Ac N no produce RHPT ni 
EHFN, Ac S y Ac s producen RHPT y EHFN. 
 
P1PK (003): IgM 
El Ag P1 se halla en el 79% de la población, los individuos que carecen de P1 
se denominan P2. El Ag P es de frecuencia elevada y se halla presente en los 
hematíes de los individuos P1 y P2. 
El precursor de P se denomina PK. 
El Ac P puede ser clínicamente significativo si su rango térmico supera los 
30°c. 
 
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FENOTIPO Ag DETECTABLE FRECUENCIA BLANCOS 
P1 P1P 79% 
P2 P 29% 
PK1 P PK RARO 
PK2 PK RARO 
P -- RARO 
 
LUTHERAN (005): IgG + IgM 
Estos Ags no están bien desarrollados en el nacimiento. Frecuencia: Lua 8,8% 
 Lub 99,9% 
 Lu (a- b-) In Lu 
Anti-Lub puede ocasionar hemólisis intravascular. 
 
KELL (006): IgG 
Los Ags K y k (cellano) son producidos por genes alélicos, dando lugar a 3 
fenotipos: 
K+ k- , K+ k+, K- k+ 
El Ag k (cellano) tiene una frecuencia del 99% por esta razón es raro encotrar 
anti-k. El Ag K tiene una frecuencia de 9%. 
La sustancia precursora (KX) del Ag Kell está presente en leucocitos y HR, si 
estos carecen de KX es McLeod (presenta una forma anormal, acantocitos y 
vida reducida). 
Los Acs Kell son IgG y su producción es estimulada por Tx o embarazo. 
Este Ac destruye precursores eritrocitarios en MO provocando anemia. 
 
LEWIS (007): IgM 
Procede del plasma y se absorben a los GR. 
Se han descripto 3 fenotipos comunes: 
Le (a+ b-), Le (a- b+) y Le (a- b-). 
Estos 3 fenotipos son el resultado de la interacción de los genes Le, H y Se. 
Los Acs del sistema Lewis pueden aglutinar los GR y activar complemento (C´) 
IN-VITRO, pero IN-VIVO tiene escasa importancia clínica por 2 razones: 
 
1. Los Ags solubles Lea y Leb presentes en el plasma del donante neutralizan 
los Acs del receptor. 
2. Los Ags Lewis son rápidamente desplazados de los GR del donante, los 
cuales se transforman y adquieren un fenotipo Lewis igual que el receptor. 
 
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DUFFY (008): IgG 
Se localizan en el cromosoma 1, alberga parásito de la Malaria. 
Frecuencia: Fy (a+ b+) 49% 2% 
 Fy (a+ b-) 18% CAUCÁSICOS 14% RAZA 
 Fy (a- b+) 33% 19% NEGRA 
 Fy (a- b-) 0% 65% 
Los Acs Fy pueden activar el C´, causan reacciones Tx y EHFN. 
Tratados con enzimas son desnaturalizados. 
 
KIDD (009): IgG 
Ubicado en el cromosoma 18. La proteína resultante ayuda en el trasporte de la 
urea. 
Frecuencia: Jk (a+ b-) 29% 
 Jk (a+ b+) 49% 
 Jk (a- b+) 22% 
 Jk (a- b-) MUY RARO (ORIENTALES) 
El Ac Jk es capaz de fijar C´. Se forman como resultado de sensibilización por 
Tx o embarazo. El título de los Acs desciende después de su formación. Puede 
provocar RHPT y EHFN. 
 
DIEGO (010): IgG 
22 Ags localizados en proteína Banda 3. Tiene 2 funciones: intercambio y 
transporte CO2 y sostén citoesqueleto. 
Frecuencia: Dia < 0,01% (chinos y japoneses) 
 Dib > 99,9% 
 
I (027): IgM 
Los Ags I e i se hallan en casi todos los GR. El Ag I se encuentra en grandes 
cantidades en los GR del adulto, pero sólo en pequeñas cantidades en los RN. 
Por el contrario, en los GR del adulto hay pequeñas cantidades del Ag, y en RN 
es muy abundante. El cambio de i a I tiene lugar durante los primeros 18 meses 
de vida. 
Los Acs son autoaglutininas de rango térmico bajo, a menos que reaccionen a 
30°c no son clínicamente significativos. Puede detectarse AutoAcs I NO 
patológico en el suero de la mayoría de individuos sanos. 
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Los Ags de este sistema se detectan sobre los GR entre la 5ta y 6ta semana 
del embrión y no se desarrollan completamente hasta después del nacimiento. 
Esta podría ser una razón para que la EHFN por incompatibilidad ABO, sea 
usualmente leve. Durante el crecimiento, se van adicionando los azúcares 
terminales en la membrana del GR, dando origen a cada uno de los Ags de 
forma específica. Entre los 2 y 4 años de edad, los Ags A y B están 
completamente desarrollados y permanecen constantes durante toda la vida. 
Azúcares terminales: 
A: acetil-galactosamina + Fucosa. 
B: galactosa + Fucosa. 
0: Fucosa. 
AB: acetil-galactosamina + Fucosa + galactosa + Fucosa. 
 
 SUBGRUPOS DE A y B 
Los subtipos del grupo sanguíneo ABO se denominan subgrupos y/o 
variantes. Éstos se diferencian por las cantidades de Ags A, B, 0 (H) sobre 
los GR. 
Los subgrupos se reconocen más frecuentemente cuando existe una 
discrepancia entre la prueba globular (directa) y sérica (inversa). 
 
SUBGRUPO 
DE A 
REACCIÓN EN DIRECTA REACCIÓN EN 
INVERSA 
SUST EN 
SALIVA 
ANTI-A ANTI-A1 ANTI-B ANTI-AB ANTI-H GR A1 GR B GR 0 
A1 4+ 4+ - 4+ - - 4+ - A, H 
A2 4+ - - 4+ 2+ -/2+ 4+ - A, H 
A3 2+ cm - - 2+ cm 3+ -/2+ 4+ - A, H 
Ax -/+ - - 1-2+ 4+ -/2+ 4+ - H 
Ael - - - - 4+ -/2+ 4+ - H 
Am -/+ - - -/+ 4+ -/+ 4+ - A, H 
Ay - - - - 4+ - - - A, H 
Aend 1+ - - 1+ 4+ - - - H 
 
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Métodos (excluidos A1 y A2): 
Aglutinación con anti-A y anti-AB, presencia o ausencia de anti-A1, presencia o 
ausencia de A en saliva, presencia o ausencia de H en saliva, presencia de 
diversas glicosil-transferasas. 
 
SUBGRUPO 
DE B 
REACCIÓN EN DIRECTA REACCIÓN EN INVERSA SUST EN 
SALIVA ANTI-A ANTI-B ANTI-AB ANTI-H GR A1 GR B GR 0 
B - 4+ 4+ - 4+ - - B, H 
B3 - 1+ cm 2+ cm 4+ 4+ - - B, H 
Bm - - -/+ 4+ 4+ - - B, H 
Bx - -/+ -/2+ 4+ 4+ - - H 
Bel - - - 3+ 3+ - - H 
 
 
 ANTÍGENO H 
Este Ag se encuentra sobre la membrana de los GR, excepto en las 
personas de fenotipos Bombay (Oh). Como H es un precursor de A y B, 
las personas de los grupos sanguíneos A, B y AB tienen menos H que las 
personas 0. 
Orden de reactividad de anti-H: 0 > A2 > A2B > B > A1 > A1B 
 
 
 SECRETORES Y NO SECRETORES DE LOS AGS ABH 
Aproximadamente el 80% de las personas son secretoras de Ags ABH. La 
secreción de H, A y B controlada por los alelos Se y se, del gen secretor Se.El término secretor se aplica a aquellas personas (genotipo Se/Se o Se/se) 
quienes secretan Ag H con o sin A y/o B en las secreciones. 
Las glicoproteínas específicas de grupo se han encontrado en saliva, líquido 
seminal, lágrimas, sudor, orina, jugos digestivos, bilis, leche materna, 
líquido pleural, líquido pericárdico y peritoneal, líquido amniótico, por el 
contrario, no se han encontrado Ags en LCR. 
La cantidad de Ags solubles en secreciones de la misma persona, varía 
ampliamente. Las secreciones de los secretores con grupo 0 contienen Ag 
H, en tanto que las secreciones de los secretores con grupo A y/o B 
contienen los Ags A y H, B y H, respectivamente. Los NO secretores con 
genotipo (se/se) no producen Ag H soluble. 
 
 
 
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 FENOTIPO BOMBAY 
Se caracterizan por la ausencia de los Ags A, B y H tanto sobre los GR 
como en las secreciones, debido a la herencia de 2 genes hh en el locus H, 
por lo tanto, la síntesis de los Ags A y B está bloqueada por la ausencia del 
Ag H necesario para su expresión. 
Las personas deficientes de los Ags A, B y H producen anti-H, anti-A y anti-
B de origen natural. 
En las pruebas iniciales los GR Bombay se clasifican como grupo 0. 
Los GR NO reaccionan con anti-A, anti-B ni anti-AB, mientras que el suero 
reacciona con cells A, B, AB y 0. Por lo tanto, las personas con el fenotipo 
Bombay deber ser transfundidas sólo con GR de fenotipo Bombay. 
 
 
 
 
 
 
 FENOTIPO PARABOMBAY 
Se caracterizan por tener GR deficientes de Ags ABH, pero a diferencia del 
Bombay, son secretores. 
 
 FENOTIPO GENOTIPO 
POSIBLE ERITROIDE EPITELIO 
SECRETOR 
SECRETOR H POSITIVO H POSITIVO H/H, Se/Se, Se/se 
NO SECRETOR H POSITIVO H NEGATIVO H/H, se/se 
PARABOMBAY H NEGATIVO H POSITIVO h/h, Se/Se, Se/Se 
BOMBAY H NEGATIVO H NEGATIVO h/h, se/se 
 
 
 
 
 
Los títulos de anti-A y anti-B con frecuencia están disminuidos en PACIENTES 
ANCIANOS Y CON HIPOGAMMAGLOBULINEMA, por lo que puedo tipificar 
erróneamente cuando haga el grupo sérico. 
Los RN no producen títulos normales de anti-A y anti-B hasta los 36 meses de 
edad, alcanzando el título máximo entre los 5 a 10 años. 
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Implica que la prueba directa NO concuerda con la prueba inversa, al hacer la 
clasificación sanguínea. 
Los Acs ABO son extremadamente eficientes en la activación del C´ 
produciendo hemólisis IN-VIVO. 
Usualmente las causas de las discrepancias son errores técnicos, por esto el 
primer paso a seguir ante una discrepancia es REPETIR LAS PRUEBAS. Una 
vez se verifique que no hubo error en el proceso, se trata de establecer su 
causa. 
ERRORES TÉCNICOS QUE PRODUCEN DISCREPANCIAS ABO: 
1. Falla para adicionar los reactivos y las muestras de los Px. 
2. Mezcla inadecuada de las muestras y los reactivos. 
3. Suspensión de GR con muy alta o baja concentración. 
4. Sub o sobrecentrifugación de las pruebas. 
5. Error en la identificación de las muestras. 
6. Interpretación incorrecta o registro de los resultados. 
7. Falla para seguir las instrucciones del fabricante. 
 
EJEMPLOS DE DISCREPANCIAS DIRECTA-INVERSA: 
 
GRUPO HEMÁTICO GRUPO SÉRICO MOTIVOS DE DISCREPANCIA 
POSIBLES GR A1 GR B 
A + + Subgrupo de A2 con anti-A1 
AB - + B adquirido (es realmente A) 
0 + débil - Anciano o inmunosuprimido 
(títulos bajos) 
0 - - Neonato sin anticuerpos 
0 - - Hipogammaglobulinemia 
0 - - Fenómeno prozona por 
títulos muy altos 
A + + Panaglutinina fría 
A + + Rouleaux 
0 - - Fallo del reactivo o células 
testigo 
 
Las discrepancias ABO se pueden clasificar de acuerdo a si son mediados por 
GR o por suero. 
 
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DISCREPANCIAS MEDIADAS POR GR 
SUBGRUPOS DE A o B Estos subgrupos poseen menos Ags en la superficie de los GR,dando 
reacciones débiles o ausentes con reactivos anti-A y anti-B 
CAMPO MIXTO Muestran 2 poblaciones diferentes de GR. 
 
POLIAGLUTINACIÓN GR que reaccionan con casi todos los sueros de donantes en las 
pruebas ABO, pero no reaccionan con el suero autólogo. 
 
SUST EN EL 
SUERO/PLASMA 
Pueden inhibir la reacción esperada en la prueba directa como 
secreción excesiva de Ags AB,gelatina de Warthon,colorantes de los 
reactivos anti-B 
 
PCD POSITIVA GR sensibilizados con AutoAcs que producen aglutinación en la prueba 
directa, clasificándose como AB 
 
REACTIVOS Pueden contener un ac que detecta Ags de baja incidencia (raro) 
 
 
 
DISCREPANCIAS MEDIADAS POR SUERO 
ALOANTICUERPOS De tipo IgM (Lea, P, M, N) en directa puede ser A y en inversa 0. 
 
AUTOANTICUERPOS Anti-I o anti-H (potentes) el suero debe ser autoadsorbido para 
removerlos y repetir la prueba inversa c/suero adsorbido 
ROULEAUX Globulinas anormales inducen esto en los GR, dan apariencia de 
aglutinación. 
 
TRANSFUSIÓN DE 
COMPONENTES 
PLASMÁTICOS ABO NO 
IDÉTICOS 
PQ, PF. 
 
EDAD RN no expresan acs ABO, Edad avanzada acs ABO disminuyen. 
 
ENFERMEDAD Px c/ hipogammaglobulinemia o agammaglobulinemia 
 
REACTIVOS Deterioro de los GR usados en pruebas inversas. 
 
 
 RESOLUCIÓN DE DISCREPANCIAS DEBIDAS A LA AUSENCIA DE 
AGS ESPERADOS 
La causa de una discrepancia puede ser inferida a veces de la fuerza de las 
reacciones obtenidas en las pruebas de agrupación con GR o suero. 
Se pueden usar los siguientes procedimientos para intensificar la detección 
de Ags débilmente expresados. 
 
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1. TEMPERATURA: 
Incubar GR lavados con anti-A y anti-AB, durante 30 minutos a 
temperatura ambiente (TA°) para incrementar asociación de Acs con 
escasa cantidad de Ags. Incubar a 4°c puede intensificar aún más la 
fijación del Ac, pero deben ser controladas con GR de grupo 0 y 
autólogos para asegurar que las reacciones son debidas a anti-A y anti-
B y no a otras aglutininas frías. 
 
2. ENZIMAS: 
Tratar los GR del paciente con una enzima proteolítica, como Ficina, 
papaína o Bromelina. El tratamiento enzimático incrementa la reacción 
Ag-Ac con anti-A o anti-B. paralelamente se deben incluir GR del grupo 
0 tratados con enzimas como control de la especificidad de la reacción 
ABO. 
 
3. ELUCIÓN/ADSORCIÓN: 
Se realiza con anti-A o anti-B humanos para adsorber el Ac a los 
correspondientes Ags eritrocitarios. No se debe usar anti-A1 o reactivos 
monoclonales y debe hacerse en paralelo con GR de grupo 0 para 
control. 
 
4. PRUEBA DE SALIVA (inhibición de la aglutinación): 
 Se busca en saliva la presencia de sustancia H, A o B. 
 
PROTOCOLO: 
1. Hacer la misma prueba: aumentando dosis de Ac, disminuyendo T° a 4°c. 
2. Uso de enzimas (trabajan sobre la membrana del GR). 
En directa se enzimatiza a los GR del Px. 
En inversa se enzimatiza a los GR comerciales A, B, 0. 
3. Elución-Adsorción. 
4. Prueba de saliva. 
PENSARLO COMO UNA PRUEBA INVERSA 
Ej. Anti-A + saliva + GR.A  POSITIVO (si aglutina, NO es el grupo) 
  NEGATIVO (si NO aglutina, es el grupo) 
 
Los Acs de anti-A al aglutinarse con la saliva, significa que tiene los Ags 
para dichos Acs por eso queda todo concentrado ahí y al agregar los GR A 
no permite la aglutinación porque no quedan Acs libres. 
 
Si los Acs aglutinaran con los GR A significa que en saliva no están 
presentes los Ags A. 
 
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Ej 2: 
ANTI-A ANTI-
A1 
ANTI-B ANTI-AB ANTI-H ANTI-Lea ANTI-Leb GR A1 GR A2 GR B GR 0 
- - - - 4+ - + W - - 4+ - 
DIRECTA: GRUPO 0 INVERSA: GRUPO A 
 
Se utilizaron los métodos 1, 2, 3 y no funcionaron. El paciente al ser secretor 
facilita la prueba de saliva. 
Saliva + anti-A = 3+ 
Saliva + anti-B = 2+ 
Saliva + anti-Leb = NEG 
Saliva + anti-H = NEG 
Para confirmar si es de grupo 0 o Ael se pasaría a realizar el método 5. 
(BIOLOGÍA MOLECULAR) que se realiza sobre 18 terminales alélicas. 
 
SISTEMA LEWIS (007): SECRETORES Y NO SECRETORES 
Está constituido por los Ags Lea y Leb. Como en el caso de los Ags ABH, estos 
tampoco son productos alélicos. 
Existen 4 posibles fenotipos: 
1. Le (a+ b-): solo presente enlos individuos ABH NO SECRETORES. 
Solo el Ag Lea se incorporará a la membrana del GR. 
 
2. Le (a- b+): solo en individuos ABH SECRETORES. 
En secreciones detectamos Leb y poco Lea. 
En los GR sólo detectaremos Leb. 
 
3. Le (a+ b+): solo detectable en individuos ABH SECRETORES.A 
La presencia de ambos Ags en las secreciones es abundante y pueden 
detectarse sobre los GR. 
 
4. Le (a- b-): independientemente del tipo ABH secretor, los GR de estos 
fenotipos CARECEN DE Ags LEWIS. 
Los individuos de este fenotipo producen Acs anti-Lewis y no suelen ser 
clínicamente significativos porque rara vez reaccionan a 37°c. 
FENOTIPO GENOTIPO FRECUENCIA (%) 
LEWIS (FUT3) SECRETOR (FUT2) CAUCÁSICOS AFRO-AMERICANOS CHINOS 
Le (a+ b-) Le/Le Le/le se/se 22 20 0 
Le (a- b+) Le/Le Le/le Se/Se Se/se 72 55 62 
Le (a+ b+) Le/Le Le/le Sew/Sew Sew/se 0 0 27 
Le (a- b-) le/le ninguno 6 25 11 
AL PRESENTAR EL Ag H EN SALIVA EN LA PRUEBA 
DIRECTA SE CONFIRMARÍA QUE ES DE GRUPO 0. 
AL VER LA TABLA DE SUBGRUPOS DE A, LA 
DIRECTA E INVERSA COINCIDE CON Ael. 
Sew: secreción débil 
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¿Qué son los neocitos/reticulocitos? 
Son la etapa anterior a los GR y se localizan en la Médula Ósea (MO) y sangre 
periférica (SP). 
La cantidad de reticulocitos en una muestra permite conocer la actividad 
eritropoyética de la MO. 
¿Para qué sirven los reticulocitos? 
Son GR jóvenes que al ser teñidos con un colorante (azul brillante de cresil) 
presentan en su interior restos semejantes a retículos procedentes de la 
eliminación del núcleo. 
Son un índice de regeneración de la MO frente a una pérdida de GR si el n° de 
reticulocitos se eleva indica que la MO responde y se compensará la pérdida. 
NO INDICA ANEMIA, pero deben incluirse en el estudio de todo proceso que 
indique patología eritrocitaria, siendo un dato imprescindible en el estudio de 
todas las anemias. 
¿Cuántos son? 
Los valores normales (VN) son de 0,5- 2% para hombres y mujeres. 
El recuento absoluto es una medida útil para determinar la respuesta de la MO 
ante una situación de anemia. 
Su valor viene expresado en sobre el total de GR y varía según la edad. 
 
VN absolutos: 25.000- 100.000/mm3. 
Valores de referencia recién nacidos (RN): 20-60 reticulocitos/1000 GR 
(media 150.00/uL). 
 Niños y adultos: 5-15 reticulocitos/1000 GR (media 
25.000-50.000/uL). 
Anemia regenerativa: > 100.000mm3 
Anemia arregenerativa: < 100.000 mm3 
¿Para qué sirve la separación de los neocitos en Inmunohematología? 
Sirve para diferenciar los GR del donante de los del paciente, para saber 
cuáles son los GR propios de los que no lo son. 
Se realiza para: 
1. Distinguir grupos o fenotipos entre los propios o el de unidades 
transfundidas. 
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2. Diferenciar una anemia hemolítica autoinmune (AHAI) PCD POS de 
unidades de GR transfundidos recientemente, posiblemente 
incompatibles con el receptor. 
3. Distinguir el grupo sanguíneo producto del prendimiento de la MO 
alogeneicamente trasplantada. 
4. Hallar el grupo sanguíneo realmente propio de un paciente sometido a 
exanguíneotransfusión (ExTx) o transfusión masiva (TM) con unidades 
compatibles. 
GR PANEL GR AUTÓLOGOS INTERPRETACIÓN 
POS NEG ALOAC 
NEG POS AUTOAC 
POS POS ALOAC y/o ALO+AUTOAC 
POS POS cm ALOAC RHPT 
 
El diagnóstico por intermedio de neocitos nos permite realizar resoluciones de 
QUIMERISMOS en Inmunohematología (convivencia de 2 o más poblaciones 
fenotípicas diferenciables = campo mixto (cm)). 
MÉTODOS DE OBTENCIÓN Y SEPARACIÓN: 
 ESTERES DE FTALATOS: 
Los GR salen con un punto de gravedad de MO de 1.07/08. 
Los GR transfundidos son relativamente más viejos (1.1 punto de 
gravedad). 
 
 CENTRIFUGACIÓN SIMPLE: 
Se utilizan capilares de microhematocrito y centrífuga de 
microhematocrito. 
Cada capilar tiene 7,5 cm. 6 cm con GR. 
 
Técnica: 
1. Llenar 10 a 12 capilares. 
2. Centrifugar de 15 a 20 minutos. 
3. Separar la ½ parte de capilar, porción superior (GR más livianos). 
Consideraciones: 
1. Dejar transcurrir por lo menos 3 días de su última transfusión. 
2. Considerar en pacientes no aplásicos. 
3. Considerar en pacientes hipoaplásicos (serie roja). 
4. Importante contar con un recuento previo de reticulocitos. 
5. La muestra de GR en EDTA debe ser procesada el mismo día de 
extracción. 
 
 
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Interpretación de resultados: 
PCD POS (población total) 
PCD POS (reticulocitos) 
AUTOAC o AUTO+ALOAC por transfusión 
PCD POS (población total) 
PCD NEG (reticulocitos) 
ALOAC por transfusión incompatible 
PCD NEG ( población total) 
PCD POS (reticulocitos) 
AUTOAC 
 
Ejemplos de campo mixto (cm): 
 Paciente mujer 0 NEG, 18% Hto. Recibió hace 7 días 3 unidades de 
GRD 0 NEG r/r. 
 D C c E e 
- + cm + cm - + 
Paciente - + - - + r´/r´ 
Unidad - - + - + r/r 
 
 Paciente mujer 0 NEG, 18% Hto. Recibió hace 7 días 3 unidades de 
GRD 0 NEG r/r. 
 D C c E E 
- - + + cm + cm 
Paciente - - + + - r”/r” 
Unidad - - + - + r/r 
 
 
 DIRECTA INVERSA 
ANTI-A ANTI-A1 ANTI-B ANTI-AB ANTI-H ANTI-D CTRL GR 
A1 
GR 
A2 
GR 
B 
GR 
0 
4+ +w cm - 4+ 3+ cm 4+ cm - - - 4+ - 
Paciente + - - + + + - A2 POS 
Unidad + + - + - - - A1 NEG 
 
 
 DIRECTA INVERSA 
ANTI-A ANTI-A1 ANTI-B ANTI-AB ANTI-H ANTI-D CTRL GR 
A1 
GR 
A2 
GR 
B 
GR 
0 
+ cm - 4+ 4+ 1+ cm - - - - - - 
Paciente + - + + + - - A2B NEG 
Unidad - - + + - - - B NEG 
 
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 Las IgG del sistema ABO: 
Habitualmente las determinaciones sobre los Acs del sistema ABO las 
realizamos con los Acs IgM presentes en todo individuo grupo A, B o 0. 
Pero… las formas IgG del sistema ABO se evidencian en algunas 
circunstancias o determinaciones Inmunohematológicas. 
 
 Manifestaciones ABO por IgG: 
 Hemolisinas ABO. 
 EHFN por ABO. 
 Estudios de isohemaglutininas. 
 Sensibilización transfusional de los subgrupos A y/o AB. 
 Anti-A1 pasivo por transfusión. 
----- Hemolisinas ABO: 
“0 peligrosos”  la suma de las IgM + IgG + potencial activación del C´ in-vitro 
nos evidencia las hemolisinas ABO. 
Siendo los individuos 0 los más probables de ocasionar este hallazgo. 
Se las estudia en aféresis a donantes grupo 0. 
----- EHFN por ABO: 
Las IgG son las únicas que atraviesan la placenta en las embarazadas. 
Cuando las IgG ABO están presentes en ciertas dosis, las mismas pueden 
ocasionar la PCD POS en los GR de los bebés. 
Siendo lo más habitual la madre grupo 0 con bebé grupo A. 
----- Estudios de isohemaglutininas: 
Comprende el estudio y cuantificación de las IgM e IgG con título y score, para 
determinar actividad inmune humoral. 
Es más frecuente determinarlos en niños. 
----- Sensibilización transfusional de los subgrupos A y/o AB: 
Más frecuentemente en los pacientes A2 y/o A2B mediante transfusión A1 y/o 
A1B pueden sensibilizarlos. 
----- Anti-A1 pasivo por transfusión: 
Las transfusiones de PLAQUETAS y/o CRIO preferentemente cuando son de 
donantes 0 y se transfunden a pacientes A, B, AB. 
El plasma de resuspensión puede originar una inmunización pasiva hacia los 
receptores de PLAQUETAS y/o CRIO, y finalmente con las próximas 
transfusiones de GR. 
 
16 
 
 
 
 
 
Aproximadamente entre el 15-25% de trasplante de médula ósea (TMO) 
alogénicos presentan una diferencia de grupo ABO entre receptor y donante. 
Objetivos y finalidades en la realización del seguimiento Inmunohematológico: 
1. OBJETIVOS DENTRO DEL PRE-TRASPLANTE: 
 
 Establecer las diferencias de grupo sanguíneo entre receptor y 
donante. Considerar especialmente las de grupo ABO y Rh. 
 Clasificar las incompatibilidades: MAYOR, MENOR, 
SIMULTANEA/MIXTA. 
Estudios Inmunohematológicos a realizarse: 
 Previos al trasplante en el donante: 
Fenotipo ABO y Rh, PCD, DAI, titulación. 
 
 En el receptor: 
Fenotipo ABO y Rh, PCD, DAI, titulación (perfil antigénico). 
 
 Posteriores al trasplante en el receptor: 
Grupo ABO y Rh, titulación, PCP y/o DAI, PCD (eluído,si hay posibilidad 
o sospecha de hemólisis), Ag patrón de prendimiento, seguimiento de 
quimerismo. 
 
DONANTE RECEPTOR COMPATIBILIDAD TRANSFUSIÓN 
A 0 INCOMP MAYOR GR grupo del receptor 
PLASMA grupo del dador 
PLAQUETAS grupo del donante o 
AB 
B 0 INCOMP MAYOR 
AB 0 INCOMP MAYOR 
AB A INCOMP MAYOR 
AB B INCOMP MAYOR 
0 A INCOMP MENOR GR grupo del donante 
PLASMA grupo del receptor 
PLAQUETAS grupo del receptor o 
AB 
0 B INCOMP MENOR 
0 AB INCOMP MENOR 
A AB INCOMP MENOR 
B AB INCOMP MENOR 
A B INCOMP MIXTA GR grupo 0 
PLASMA Y PLAQUETAS grupo AB B B INCOMP MIXTA 
17 
 
 
 
 Tener cuantificados, mediante titulación y score, los Acs del sistema 
ABO, tanto del receptor como el donante incompatible ABO. 
 Titulación de Acs ABO en el donante en la incompatibilidad menor, 
incompatibilidad Rh u otros sistemas. 
 Tener identificados claramente otros Acs que pudieran haber 
cruzadamente entre el receptor y donante. 
 
 
 2. OBJETIVOS DURANTE EL TRASPLANTE INMEDIATO: 
 Poner de manifiesto algún proceso hemolítico en el receptor, en el 
momento del trasplante. 
 Detectar Acs irregulares a crearse en lo inmediato al trasplante como 
consecuencia del estímulo antigénico de los GR residuales o de las 
unidades hemáticas transfundidas. 
(Incompatibilidad generada por la formación de Acs irregulares del 
sistema inmune trasplantado). 
 Determinar la conformación fenotípica de las unidades de GR, plasma y 
plaquetas a compatibilizar para uso transfusional. 
 
 3 OBJETIVOS DURANTE EL POSTRASPLANTE: 
 Hacer diagnóstico de laboratorio de los pacientes que pudieran 
presentar aplasia selectiva de serie roja por incompatibilidad ABO 
mayor, o hemólisis inmune por incompatibilidad ABO menor. 
 Realizar seguimiento temprano de prendimiento medular, mediante 
tipificación antigénica de los nuevos fenotipos expresados en el paciente 
provenientes del dador. 
 Detectar el fenómeno de quimerismo hematopoyético mixto en el 
receptor mediante el seguimiento del perfil antigénico en los meses 
posteriores al trasplante. 
 
 
APLASIA SELECTIVA DE SERIE ROJA POR INCOMPATIBILIDAD ABO 
MAYOR: 
Ej: donante A - receptor 0. 
Se presenta cuadro clínico de continuidad de hemólisis con permanencia en 
tiempo por clon de linfocitos sobrevivientes a la ablación, que continúan 
emitiendo Acs anti-A. 
 
 
O 
B 
J 
E 
T 
I 
V 
O 
S 
I 
H 
18 
 
 
 
HEMÓLISIS INMUNE POR INCOMPATIBILIDAD ABO MENOR: 
Ej: donante 0 – receptor A. 
Se presenta cuadro clínico de hemólisis específica entre el día 10-15 
postrasplante por permanencia residual de GR A que son hemolizados por el 
nuevo clon de linfocitos que genera anti-A del prendimiento medular. 
 
SENSIBILIZACIÓN POSTRASPLANTE MECÁNICO: 
Donante 0 Rh NEG – Receptor 0 Rh POS. 
Paciente que genera anti-D creado en lo inmediato al trasplante como 
consecuencia del estímulo génico de los GR residuales circulantes 
pertenecientes a la población en extinción. 
Incompatibilidad generada por la formación de Acs irregulares del sistema 
inmune trasplantado hacia Ags circulantes propios anteriores o de unidades 
transfundidas. 
 
 
 
 
 
ENTRECRUZAMIENTO GENÉTICO (cuadro de Punet): 
1. Lea POS se/se NO SECRETOR. 
2. Leb POS Se/se o se/se SECRETOR. 
3. Bombay h/h Se/se Se/Se. 
4. Parabombay h/h Se/se Se/Se. 
5. No secretor H/H H/h se/se. 
6. Secretor H/H/ H/h Se/Se Se/se. 
Ej: 
 MAMÁ A/A Se/se H/h 
PAPÁ A Se H SECRETOR, Leb POS 
A/0 A se h BOMBAY, NO SECRETOR, Lea POS 
Se/se A se H NO SECRETOR, Lea POS. 
H/h A Se h PARABOMBAY, SECRETOR, Leb POS. 
 
 
 
 
 
19 
 
 
 
 Se ha demostrado que los pacientes portadores de ciertas variantes D no son 
susceptibles de desarrollar una aloinmunización frente al Ag D, por lo que 
pueden ser considerados D POSITIVO. 
o D DÉBIL: 
Los GR portadores de un fenotipo D débil poseen un menor n° de sitios 
antigénicos que los GR D POSITIVO. 
En general presentan una aglutinación débil o negativa con Acs anti-D 
monoclonales en medio salino que se potencia en fase SAGH utilizando 
reactivos anti-D de clase IgG. 
La identificación molecular de los distintos alelos D débil permite clasificar a 
los mismos en diferentes “tipos” según la mutación responsable de la 
expresión disminuida del Ag D. 
Se han descripto más de 80 alelos distintos, y entre todos ellos las 
variantes D débil tipo 1, 2, 3 y 4 representan los fenotipos más frecuentes 
en poblaciones caucásicas, superando el 95% de todos los D débil. 
Los alelos D débil tipo 1 y 3 se encuentran en un haplotipo R1 y están 
asociados a la expresión del Ag C, mientras que el alelo D débil tipo 2 
forma parte de un haplotipo R2 y está asociado a la expresión de E. 
El alelo D débil tipo 4 se encuentra en un haplotipo R0, asociado a un 
fenotipo C- c+ e- e+. 
 
o D PARCIAL: 
Los GR con fenotipo D parcial se caracterizan por la ausencia de uno o 
más epítopes del Ag D. 
Los individuos con este fenotipo son capaces de producir AloAcs anti-D 
contra los epítopes ausentes tras una inmunización con GR D POSITIVO. 
Existen los fenotipos D parcial categoría DII hasta DVII con subdivisiones 
(12 parcialismos más frecuentes). 
El fenotipo D parcial puede reaccionar de forma débil con los Acs anti-D. 
 
o Rh NULL: 
Los GR de los individuos de fenotipo Rh Null se caracterizan por la 
ausencia de Ags Rh n su membrana. Estas personas cuando se inmunizan 
producen un Ac anti-Rh29 que reacciona con todos los GR, excepto con los 
GR del mismo fenotipo. 
Las cells Rh Null son anómalas, tanto morfológica como funcionalmente. 
La mayoría de los individuos Rh Null presentan un cierto grado de anemia 
hemolítica que, en algunos casos, puede ser subsidiaria de una 
esplenectomía. 
 
 
20 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
D DÉBIL 
DETECCIÓN 
I-III NEG – NO LO 
RESOLVÍ 
IV V- XVII 
TIPIFICA COMO 
POS NEG 
DONANTE EMBARAZADA 
SE LE DA Ig-Rh 
PACIENTE 
POS 
TODOS 
NO SE LE DA 
Ig-Rh A 
EMBARAZADA 
DEPENDIENDO 
DEL TIPO 
NEG 
TODOS 
SE LE DA Ig-
Rh A 
EMBARAZADA 
EMBARAZADA D PARCIAL TIPIFICA 
COMO NEGATIVA Y SE LE DA Ig-Rh. 
21 
 
 
 
VOLUMENES ADECUADOS PARA CADA HEMOCOMPONENTE: 
 GRD (con SA) 300-300 ml. 
 CPQ 40-70 ml (sangre entera). 
 PFC 200-250 ml. 
 CRIO 5-20 ml. 
ALMACENAMIENTO Y T°: 
 ST y GRD 4°c +- 2°c. 
 PFC, PM y PLASMA de BANCO 0°c a -18°c. 
 CRIO 0°c a -18°c. 
 CPQ 22°c -+ 2°c. 
 CG 22°c +- 2°c. 
 GR congelados con glicerol 40%  0°c a -65°c. 
 GR congelados con glicerol 20%  0°c a -120°c. 
 CPH y de cordón umbilical -180°c o menos. 
EXPIRACIÓN DE HEMOCOMPONENTES POR CIRCUITO ABIERTO: 
 Componentes conservados a 4°c +- 2°c  expiran a las 24hs. 
 Componentes conservados a 22°c +- 2°c  expiran a las 4hs. 
 Componentes almacenados n congelamiento  expiran a las 6hs. 
 Componentes descongelados, si son almacenados a 4°c +- 2°c  
expiran a las 24hs. 
 Componentes descongelados, si son almacenamos a 22°c +- 2°c  
expiran a las 4hs. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
GRD CON SA 55-65% DE Hto- 42 
DÍAS. 
GRD SIN SA 70-80% DE Hto- 35 DÍAS. 
SE MANTIENE ESE Hto PARA QUE LOS 
GR TENGAN UNA VIABILIDAD 
ADECUADA PARA CUMPLIR SU ROL 
BIOLÓGICO. 
PQS OBTENIDAS DE ST CONTIENE 
5,5X1010 DE PQS SUSPENDIDAS EN 
40-70ML DE PLASMA PARA LOGRAR 
EL PH ÓPTIMO DE CONSERVACIÓN 
(6,8-7,4). 
EL PH DE LOS CPQ DEBE 
CONTROLARSE EN LA FECHA DE 
VENCIMIENTO 
22 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Los GR y PQS son componentes que se pueden LEUCORREDUCIR y tienen 
una contaminación máxima permitida de 5X106 de leucocitos. 
 El PFC tiene 0,7 ul de factor VIII. 
 El CRIO tiene > 80ul de factor VIII y >150mg de fibrinógeno. 
 El concentrado de granulocitos (CG) deberá contener como mínimo 
1,0X1010 de granulocitos. 
 
CONTROLES DE HELADERA: 
 Control de T° cada 4hs. 
 Control visual deltermómetro. 
 Control auditivo de la alarma. 
 
NORMOGRAMA (para aplicar en el cálculo de centrifugación): 
Valor en centímetros del radio del rotor (se mide desde el centro hasta el vaso 
cuando está centrifugándose). 
Fuerza de centrifugación relativa (grey) fuerza gravitatoria. 
Velocidad del eje de la centrifuga (rpm) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
MEJOR VIABILIDAD DE PQS: 
MUCHO VOLUMEN DE PLASMA, BOLSA DE GRAN SUPERFICIE, AGITACIÓN 
CONSTANTE, PLÁSTICO DE PVC CON BUENA POROSIDAD, DEJAR EN 
REPOSO NI BIEN PRODUCIDA. 
EL MÁXIMO PERMITIDO DE CONTAMINACIÓN DE PQS CON GR ES DE 0,2 ml. 
23 
 
 
 
Resolución de panel con AutoAc: 
1. ¿Es IgM o IgG? 
2. ¿qué intensidad tiene el autocontrol? 
3. ¿El AutoAc tiene Acs libres? 
4. ¿Los Acs libres en el suero son Auto, AloAcs o ambos? 
 
EL AUTOAC DEBE TENER MENOR TÍTULO QUE EL ALOAC CUANDO 
ESTÁN PRESENTES AMBOS para realizar una dilución del suero mediante 
titulación diferenciada. También puede realizarse una termoautoadsorción. 
 
SISTEMA DE C´: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
SE VE EN LA PORCIÓN GLOBULAR 
SE VE EN LA PORCIÓN 
SÉRICA 
Ag-Ac 
C1qrs 
C4 
C2 
C3 
C5 
C6 
C7 
C8 
C9 
BACTERIAS, VIRUS, 
TOXINAS 
C3 
B 
D 
VÍA 
CLÁSICA 
VÍA 
ALTERNA 
VÍA FINAL 
COMÚN 
24 
 
 
 
LOS EFECTOS MÁS IMPORTANTES RESULTANTES DE LA ACTIVACIÓN 
DEL C´ SON: 
1) Opsonización y fagocitosis. 
2) Lisis. 
3) Neutralización. 
4) Aglutinación. 
5) Quimiotaxis. 
6) Activación de mastocitos y basófilos. 
7) Efectos inflamatorios. 
ACTIVIDADES BIOLÓGICAS DE LAS Ig: 
Isotipo IgG más abundante en sangre 80%. 
4 subclases: 
IgG1: 60-70% IgG2: 14-20% IgG3: 4-8% IgG4: 2-6% 
 
Cruzan la placenta (IgG1, 2, 3, 4) y barreras naturales. 
Gran afinidad, se unen al Ag y activan al C´ (IgG3, 1, 2). 
FACTORES QUE AFECTAN LA HEMAGLUTINACIÓN: 
 Potencial Z. 
 Cargas iónicas. 
 Centrifugación. 
 Temperatura. 
 pH. 
 Cantidad, clase y afinidad del Ac. 
 Cantidad y accesibilidad del Ag. 
 Relación de tamaño entre GR y Acs. 
 Densidad antigénica. 
 Umbral de incubación. 
 
REACTIVOS EN BÚSQUEDA DE LAS Ig: 
 SAGH. 
 Enzimas proteolíticas (papaína, Bromelina, Ficina, tripsina). 
 Albúmina bovina. 
 Soluciones de baja fuerza iónica (LISS). 
 Policationes (polybrene). 
MEDIOS POTENCIADORES ENALTECEDORES: 
 Realza aglutinación directa e indirecta. 
 Disminuye el tiempo de reacción. 
 
 
FÍSICOS Y QUÍMICOS 
CUANTITATIVOS 
25 
 
 
 
MÉTODOS ENZIMÁTICOS: 
Las enzimas proteolíticas comúnmente usadas en los procedimientos del 
banco de sangre remueven estructuras de la membrana del GR. 
 
 
 
 
 
VENTAJAS DESVENTAJAS 
Capacidad de mejorar las reacciones 
serológicas de ciertos Acs, en 
especial de los sistemas Rh y Kidd. 
Desnaturaliza Ags M, N, Fya, Fyb, Xg. 
Acs IgM de especificidad Rh y Kidd e 
bajo título NO son detectables por 
métodos convencionales. 
Intensifica la mayoría de las 
aglutininas frías. 
 
 
 
 
Las técnicas enzimáticas en: 
1. Una etapa aditivo (sin validación) 
2. Dos etapas: 
Incluyen el tratamiento previo de los GR a probar. 
Consumen más tiempo pero son más sensibles que los procedimientos 
en una etapa. 
VALIDACIÓN: realizar control desaparición Ag sensible. 
 
TRATAMIENTO ENZIMÁTICO DE HEMATÍES: 
Las enzimas provocan en los Ags el clivaje de ácido siálico al adherirse a las 
cadenas de polisacáridos que poseen cargas negativas. 
 
Reduciendo la carga de las Favoreciendo la 
superficies de los GR aglutinación 
 
 FICINA 
 PAPAÍNA la diferencia entre éstas, es el sitio donde realizan 
 BROMELINA el clivaje de los Ags presentes en los GR. 
FICINA, PAPAÍNA, 
BROMELINA, 
TRIPSINA 
NO DEBE USARSE EN LAS PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES DE RUTINA. 
HERRAMIENTA ÚTIL PARA USO EN LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN. 
26 
 
 
 
AGS DESNATURALIZADOS AGS POTENCIADOS 
M, N, S, s Rh 
Fya, Fyb Kidd 
Xg Lewis 
Ch, Rg P 
JMH I 
 
La reacción de AutoAcs presentes en el plasma enfrentado a GR tratados con 
enzimas, típicamente se ve potenciada. 
¿CUÁNDO UTILIZAMOS ENZIMAS? 
1. COMO HERRAMIENTA EN LA IDENTIFICACIÓN DE ACS 
IRREGULARES: 
Cuando se sospecha la presencia de Acs con especificidad para un Ag 
que es desnaturalizado por enzimas, al utilizar un panel tratado, la 
reacción desaparece o se debilita, pudiendo inferir que se trata del Ac 
sospechado. 
Cuando se desea incrementar la reacción de un Ac que se observa débil 
(o bien no se observa pero se sospecha la presencia), cuya 
especificidad está dirigida contra un Ag que en GR tratados la 
reactividad se ve incrementada. 
 
 
 
 
27 
 
 
 
 
2. COMO HERRAMIENTA EN LA FENOTIPIFICACIÓN: 
Es de utilidad conocer el fenotipo de aquellos pacientes que por 
presentar una patología de base serán transfundidos de manera 
frecuente, y así evitar que se sensibilice contra Ags que no posee. El 
tratamiento enzimático de sus GR permite observar con mayor facilidad 
la presencia de Ags aun cuando se encuentran en la membrana en baja 
densidad. 
 
 
MÉTODO 3-5-3. ESTANDARIZACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS 
ENZIMÁTICOS: 
Cuando se realizan procedimientos enzimáticos en 2 pasos, es preciso 
determinar la dilución y las condiciones de incubación óptimas de cada lote. 
REACTIVOS: 
1. Solución madre de Ficina al 1% en SSAF a pH 7,3. 
2. Varios sueros inertes sin Acs irregulares. 
3. Anti-D que solo aglutine GR Rh POS tratados con enzimas. 
4. Anti-Fya con reactividad moderada o potente. 
5. SAGH poliespecífico o anti-IgG. 
6. Muestras de GR D POS y Fy (a+ b-). 
7. GR recubiertos con IgG. 
PROCEDIMIENTO: 
1. Preparar una solución de Ficina al 0,1% diluyendo 1 volumen de 
solución madre de Ficina con 9 volúmenes de SSAF a pH 7,3. 
2. Rotular 3 tubos (5mi, 10 min, 15 min). 
3. Agregar volúmenes iguales de GR lavados y Ficina al 0,1% a cada tubo. 
4. Mezclar e incubar a 37°c durante el lapso preestablecido. Si se prepara 
primero el tubo de 15 minutos, después el de 10 minutos y por último el 
de 5 minutos, con intervalos de 5 minutos, es fácil controlar el periodo de 
incubación. 
Ésta se completará en los 3 tubos al mismo tiempo. 
5. De inmediato, lavar los GR 3 veces con gran cantidad de SF. 
6. Resuspender las cells tratadas al 2-5% en SF. 
7. Rotular 4 tubos para cada suero a evaluar: no tratados, 5min, 10min, 
15min. 
8. Agregar 2 gotas del suero apropiado a cada tubo. 
9. Agregar 1 gota de la suspensión de GR a cada tubo. 
10. Mezclar e incubar a 37°c durante 15 minutos. 
11. Centrifugar, resuspender las cells con suavidad y examniar la presencia 
de aglutinación. 
12. Lavar las cells 2-4 veces con SF y evaluarlas con SAGH. 
28 
 
 
 
LECTURA INMEDIATA 5 A 10 MINUTOS POSIBLES RESULTADOS 
NEG POS 2+ C3, IgM, IgA 
POS 1+ NEG IgG sola 
POS 1+ POS 1+ IgG (sola), posible IgG + C3d 
POS 1+ POS 3+ IgG + C3d, IgG + IgA, o 
 IgG + IgM, o C3d sola al 
comienzo y mejorando a 5 
minutos 
NEG POS 2/3+ C3d, IgA o IgM o C3d + IgA/ 
IgM 
En todos los casos realizar los monoespecíficos: 
 Anti-IgM POS siempre complementar con anti-C3d y C3c. 
 Anti-IgG POS siempre complementar con anti-C3d y anti-IgA. 
 Anti-IgG POS siempre complementar con anti-IgG1 y anti-IgG3. 
 Anti-IgG POS siempre complementar con anti-IgA. 
PCD POS - (PCI NEG): 
Remarcar y resaltar si recibió transfusión en los últimos 3 meses o no por su 
implicancia en el eluído por presencia de GR de las unidades. 
DEL ELUÍDO SOLO SE RESCATAN IgG o IgA COINCIDENTES CON PCD 
PREFERENTEMENTE. 
Un eluído NEG partiendo de un paciente con monoespecíficos IgA o IgG POS 
puede decir que ese método de elución no fue el apropiado para ese particular 
hallazgo de IgG o IgA, repetir otro eluído con diferentes principios o puede que 
la PCD se debe a un hallazgo por drogas. 
Muestracantidad y calidad adecuada. 
 
FALSOS NEGATIVOS FALSOS POSITIVOS 
Neutralización (lavados) uso de Ctrl 
de Coombs. 
Extraer de tubuladura (dextrosa) 
Sueros con baja o nula reactividad. Usar agujas de grueso calibre (16G). 
Solución salina con pH alterado. Extraer bajos volúmenes (< 0,5 ml) 
Retardo en añadir el SAGH. Tubos de ensayo 
gelificados/siliconados. 
N° por debajo del umbral de Ig. Extraer GR del coágulo. 
 
29 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Caso1: incompatibilidad ABO, PCD POS en campo mixto. 
Caso 2: termoautoadsorción en pacientes no transfundidos dentro de los 3 
meses con PCD POS. 
Caso 3: paciente 0 NEG con anti-D. 
Caso 4: PCD POS en unidad y NEG suero del paciente en DAI. 
Caso 5: paciente sensibilizado por AloAc. 
La comp con la unidad puede ser POS o NEG según la frecuencia del Ac. 
Caso 6: paciente A2B con anti-A1  hubo transfusión de A1. 
Caso 7: Ag de baja frecuencia en la unidad. 
Caso 8: Ag de alta frecuencia en la unidad. 
PCP 
LI 37°c SAGH 
- + - 
+ - - IgM (incomp ABO) o Ac frío 
+ - + IgM+IgG, IgM+C3d 
El POS en SAGH puede ser que la unidad tenga 
una PCD POS y en la PCP se ve como POS 
+ + - IgM amplio rango térmico 
- - + IgG 
- + + IgG aglutinante o IgG+C3d 
+ + + Todo junto 
PCM DAI (72hs) PCD 
LI 37°c SAGH LI 37°c SAGH 
1 + + - - - - - 
2 - - + - - + + 
3 - - - - - + - 
4 - - + - - - - 
5 - - + - - - + - 
6 + - + - - - - - 
7 - - + - - + - - 
8 - - + - - + - 
9 + - + + - + + 
(por C3d) 
10 + + + 
11 M/M+ 
M/N - 
 M/M+ 
M/N - 
- 
30 
 
 
 
Caso 9: paciente con AHAIF IgM (LI), C3d (SAGH). 
Se realiza PCD resultado POS por C3d. 
Es patológico cuando IgM tiene amplio rango térmico, tiene PCD POS por 
C3d y el título supera a 32. 
Caso 10: Auto + AloAc (se realiza termoautoadsorción). 
Caso 11: AloAc anti-M (reacciona en cells homocigota). 
 
LAS PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD PRETRANSFUSIONALES SE REALIZAN 
CON LA TÉCNICA DE PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA (PCI) 
 
Se utiliza el SUERO DEL PX VS GR DE LA UNIDAD. 
TUBO: 
1. En 1 tubo colocar 1 gota de susp globular (3-5%) de la unidad + 2 
gotas de suero de Px 
2. Se centrifuga 15-20seg, se lee y registra (LECTURA 
INMEDIATA/TA°) 
 
 
3. Se agrega 1 gota de LISS (potenciador de reacción) y se incuba 
durante 10min a 37°c para que el GR se sensibilice. 
Si no hay LISS debe dejarse incubando 30min. 
4. Se centrifuga 15-20seg, se lee y registra (LECTURA A 37°c) 
 
 
 
 
5. Se le hace 3 lavados con SF para eliminar los Acs que no se unieron. 
6. Se coloca 2 gotas de suero de Coombs (SAGH) 
7. Se centrifuga 15-20seg, se lee y se registra (LECTURA EN SAGH) 
*Si da POSITIVO se debe hacer una detección de Acs irregulares (DAI). 
*Si da NEGATIVO se realiza en C/C (cells sensibilizadas con anti-IgG) 
 
 
 
 
 
ETAPA PARA VER SI IgM DA POSITIVO, CORROBORAR QUE NO HAYA 
UNA INCOMPATIBILIDAD ABO. 
FIN DE SENSIBILIZAR A LOS GR PARA VER SI HAY IgG POSITIVO 
31 
 
 
 
Requiere el enfrentamiento del suero del paciente vs las plaquetas a 
transfundir. 
MASPAT monocapa de PQS de donante inmovilizada por centrifugación a la 
superficie de los pocillos recubiertos de Acs monoclonales de ratón plaqueta-
específicos. 
 El principio se basa en la reacción de los Ags-Acs. Una monocapa de 
PQS de donante es inmovilizada mediante centrifugación en la superficie 
de los pocillos de microplaca recubiertos con Acs monoclonales de ratón 
plaquetario específicos. El suero del paciente y LISS son incubados en 
los pocillos apropiados, permitiendo que los Acs del suero se unan a la 
monocapa inmovilizada de PQS. Después de la incubación, los 
componentes de suero que no se han unido se eliminan mediante 
lavado. Los Acs unidos a las PQS son detectados añadiendo IgG anti-
humano monoclonal de ratón y GR sensibilizados con IgG humano y la 
subsiguiente centrifugación de la microplaca. En caso de una reacción 
POSITIVA, el IgG anti-humano y las MASPAT se unen a los Acs IgG en 
la monocapa de PQS. 
 
 Por tanto, las reacciones positivas se caracterizan por la adherencia de 
las MASPAT a toda la superficie de los pocillos, mientras que las 
reacciones negativas producen pellets discretos de MASPAT en el 
centro del pocillo. 
 
SUERO SAGH MONOESPECIFICO MONOCLONAL ANTI-IgG 
ACS PQS DEL SUERO DEL PACIENTE 
PLAQUETAS DEL DONANTE A TRANSFUNDIR 
MONOCAPA INMOVILIZADA SÓLIDA DE ACS MONOCLONALES 
ANTI-PLAQUETARIOS 
GR REVELADORES SENSIBILIZADOS CON IgG 
32 
 
 
 
 
INTERPRETACIÓN: 
Una reacción POSITIVA o POSITIVA DËBIL (los GR forman una capa en el 
fondo del pocillo) indica la presencia de Acs plaquetarios y/o HLA específicos 
en el suero. 
Una reacción NEGATIVA (los GR forman un botón en el fondo del pocillo) 
indica la ausencia de Acs plaquetarios y/o HLA específicos en el suero. 
 
 
 
POSITIVO POSITIVO DÉBIL NEGATIVO 
Si se requiere un autocontrol del paciente, el suero del mismo debe ser 
analizado frente a las PQS del paciente mismo derivadas de una muestra de 
sangre con EDTA. 
 
 
DIFERENCIAS DE ACS ANTI-PLAQUETARIOS POR HLA o HPA: 
Se realiza con el tratamiento de las PQS a compatibilizar con cloroquina. 
La cloroquina desnaturaliza la clase I del sistema HLA que puede estar 
presente en las PQS. 
Primero se analizan las PQS sin tratar, luego se tratan con cloroquina. 
 Si con cloroquina da NEGATIVO hay Acs HLA. 
 Si con cloroquina da POSITIVO hay Acs HPA pero no se descarta un 
HLA oculto. 
 
 PQS NO TRATADAS PQS TRATADAS 
CON CLOROQUINA 
ANTI-HLA + HPA + + 
ANTI-HPA + + 
ANTI-HLA + - 
 
 
 
 
 
 
33 
 
 
 
 
 
LA AHAI ES UN TIPO DE ANEMIA HEMOLÍTICA ADQUIRIDA, PRODUCIDA 
POR ACS QUE REACCIONAN CON LOS PROPIOS HEMATÍES DEL Px 
(AUTOACS) CONDUCIENDO A SU DESTRUCCIÓN. 
 
AHAI CALIENTE: 
Esta mediada por AUTOACS que reaccionan de forma óptima a 37°c. La 
mayoría de los acs son de clase IgG 1 o 3. Raramente están implicados acs de 
clase IgM o IgA capaces de reaccionar a 37°c, solos o acompañando a los de 
clase IgG. 
Los acs implicados producen una HEMÓLISIS EXTRAVASCULAR en el SRE. 
Los GR recubiertos de acs IgG son eliminados de la circulación mediante la 
unión de la porción Fc del ac y el receptor para el fragmento Fc de las cells 
fagocíticas y citotóxicas del BAZO E HÍGADO. 
Las IgG1 y 3 pueden ACTIVAR EL C´ pero las proteínas reguladoras (CD55, 
CD59) impiden la activación completa deteniéndola en el fragmento C3b. 
La presencia simultánea de IgG + C3b AUMENTA LA FAGOCITOSIS de las 
cells sensibilizadas y ACEELERA LA DESTRUCCIÓN DE LOS GR EN EL 
BAZO. 
Los GR QUE SOLO PORTAN C3b se eliminan de la circulación por la acción 
de los macrófagos del HIGADO. 
DATOS CLÍNICOS: algunos Px  APARICIÓN GRADUAL DE Sx DE ANEMIA, 
asociada a fiebre e ictericia. 
 Otros Px  INICIO BRUSCO, DOLOR LUMBAR Y Sx DE 
ANEMIZACIÓN RÁPIDA. Ambos orinas oscuras frecuente. 
 
En la AHAI idiopática un 50-60% de casos presentan esplenomegalia. 
Un 30% hepatomegalia y un 25% adenopatías. 
 
DATOS DE LABORATORIO: 
Anemia importante  7 g/dL al Dx, que progresa hasta que el tratamiento 
empieza a ser efectivo. 
Recuento de leucocitos y PQ  normales. 
34 
 
 
 
RETICULOCITOSIS, en extensión de SP se observan ESFEROCITOSIS y 
POLICROMATOFILIA. 
Estudio medular  HIPERPLASIA ERITROIDE. 
Parámetros bioquímicos  aumento de bilirrubina indirecta, disminución de 
haptoglobina, aumento de LDH. 
 
 
DATOS INMUNOHEMATOLÓGICOS: 
Los Px presentan una PCD POS, en el 90% de los casos es por IgG aislada o 
EN COMBINACIÓN con C3. El 10% restante presenta SOLAMENTE C3. 
Si la PCD es POSITIVA por IgG, los AUTOACS pueden ser ELUÍDOS de la 
membrana y examinar su reactividad frente a otros GR con una PCI. 
Generalmente el ELUÍDO se comporta como PANAGLUTININA. 
En un 1-4% de los casos la PCD esNEGATIVA, cuando la sospecha clínica es 
firme, es útil REALIZAR EL ESTUDIO DEL ELUÍDO que en ocasiones 
RESULTAN POSITIVA, investigar si la Ig implicada es de TIPO IgA y/o IgM. 
 En las AHAIC suele también encontrarse AUTOACS LIBRES EN EL SUERO 
del Px, que reacciona frente a todos los GR normales, dando un resultado 
POSITIVO EN EL ESCRUTINIO Y EN LA IDENTIFICACIÓN DE ACS 
IRREGULARES, asi como en las PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD. 
 
PRONÓSTICO Y TRATAMIENTO: 
Una minoría alcanza una remisión completa, mientras que en otros casos el 
curso es crónico, y evoluciona a brotes. 
 El TRATAMIENTO DE PRIMERA LINEA en Px con signos clínicos de 
hemólisis consiste en la administración de ESTEROIDES POR VÍA 
ORAL. (70-80% buena respuesta). 
 TRATAMIENTO DE SEGUNDA LÍNEA, cuando el 1° es ineficaz, se 
plantea la ESPLENECTOMÍA. 
 ESTRATEGIAS TERAPÉUTICAS, altas dosis de GGEV, 
PLASMAFÉRESIS o DANAZOL. 
 
 IgG +C3 (67%) 
 IgG (20%) IgG (algunas veces 
 C3 (15%) IgA o IgM adicional, 
 que cursan c/ PCD +) 
 REACTIVO POR IgG 
PCD POS TIPO DE 
Ig 
ELUIDO 
35 
 
 
 
 
 50-90% REACTIVO EN PCI 
 90% aglutina GR tratados con enzimas 
 13% hemoliza GR tratados con enzimas 
 
 
 
 Lw, U, K, Kpb, K13, Ge, Jka, Ena Y Wrb 
 Usualmente dentro del sistema Rh (70%), aunque 
reaccionen con todos los dadores disponibles (REACCIÓN 
PANAGLUTINANTE). 
El método para determinar la especificidad Rh clínicamente significativa es la 
TITULACIÓN DIFERENCIAL del Ac frente a GR de distintos fenotipos Rh. 
FENITPO 
DE GR 
2 4 8 16 32 64 128 256 
rr 4+ 3+ 3+ 2+ 2+ 1+ 0 0 
R1R1 4+ 3+ 3+ 2+ 2+ 1+ 0 0 
R2R2 3+ 2+ 1+ 0 0 0 0 0 
 
 
AHAI FRÍA /SCA: 
Los AUTOACS son reactivos a T° BAJAS y preferentemente a 4°c. 
 
DATOS CLÍNICOS: algunos Px  hemoglobinuria cuando el clima es frío, 
palidez, e ictericia. 
 Otros Px  hepatoesplenomegalia leve o moderada. 
 
DATOS DE LABORATORIO: 
El GRADO DE ANEMIA depende del grado de EXPOSICIÓN AL FRÍO. 
Con frecuencia, las muestras de sangre presentan AUTOAGLUTINACIÓN A 
TA°, lo que dificulta la realización de la extensión de sangre y de los recuentos 
celulares. La autoaglutinación se intensifica a 4°c y REVIERTE al calentar la 
muestra a 37°c. 
 
 
SUERO 
ESPECIFICIDAD 
36 
 
 
 
DATOS INMUNOHEMATOLÓGICOS: 
Es necesario mantener la muestra de EDTA a 37°c y LAVAR LOS GR con SF 
precalentada a 37°c para dispersar las crioaglutininas antes de realizar la 
tipificación ABO y Rh y la PCD. 
El Dx debe ser considerado cuando una PCD da POSITIVO por C3 y 
NEGATIVA por IgG. 
Los Acs son de tipo IgM, que inducen a la fijación de C´sobre los GR. 
Los AUTOACS LIBRES en el suero del Px causan la AGLUTINACIÓN de los 
GR NORMALES a BAJAS T°, con un TÍTULO EVELADO A 4°c, y 
reaccionando con una intensidad mucho MENOR a T° de 30°c. 
Es frecuente que el AC tenga una ESPECIFICIDAD Ii, Pr (patológico título > 64 
y tiene capacidad de aglutinar en albúmina). 
 
PRONÓSTICO Y TRATAMIENTO: 
Es significativamente mejor el pronóstico que en los casos de AHAIC. 
 Casos secundarios a procesos infecciosos  presentación clínica más 
aguda y SE RESUELVEN ESPONTANEAMENTE EN VARIAS 
SEMANAS. 
 Casos idiopáticos  CURSO CRÓNICO Y BIEN TOLERADO. 
Los Px deben evitar la exposición al frío. 
LA ESPLENECTOMÍA NO SE CONSIDERA INDICADA EN ESTOS Px, 
ya que la hemólisis no se produce mayoritariamente a nivel esplénico, 
por lo que resulta ineficaz en muchos casos. 
 
 C3 IgM NO REACT. 
 
 
 Acs IgM con actividad aglutinante hasta 30°c en albúmina 
 Alto título a 4°c > 512. 
 
 
HEMOGLOBINURIA PAROXÍSTICA A FRIGORE 
(HPF): 
La HEMÓLISIS es de INICIO AGUDO, y provoca una ANEMIA rápidamente 
PROGRESIVA. El Px puede presentar escalofríos, fiebre, dolor abdominal y 
lumbar, náuseas y malestar general. 
PCD POS TIPO DE Ig ELUIDO 
SUERO 
37 
 
 
 
Existe hemoglobinemia, hemoglobinuria, eritrofagocitosis es frecuente. 
Los AUTOACS son de tipo IgG que REACCIONAN con los GR en las ZONAS 
MÁS FRIAS del organismo provocando la FIJACIÓN IRREVERSIBLE del C3 
DISOCIANDOSE a T° MÁS ELEVADAS (37°). 
El Ac suele tener ESPECIFICIDAD P, reaccionando con todos los GR normales 
excepto con aquellos de fenotipo p o pk. 
Aunque el ac raramente alcanza un TÍTULO SUPERIOR A 64 es potente y 
CAPAZ DE PROVOCAR la aparición súbita de una anemia grave por 
HEMÓLISIS INTRAVASCULAR. 
 
 
 
TRATAMIENTO: 
Los esteroides y esplenectomía NO son efectivos. 
Si la hemólisis es muy grave hay que mantener al Px muy bien hidratado para 
conservar la perfusión y la función renal y la Tx puede ser necesaria. 
 
 C3 IgG NO REAC. 
 
 
 Hemolisina bifásica de Donath- Landsteiner sensibiliza 
GR en frío y hemoliza a 37°c. 
 
 
 
PCD POS TIPO DE Ig ELUIDO 
SUERO 
38 
 
 
 
AHAI MIXTA: 
Tiene ambos tipos de Acs (IgG + IgM). 
Los SINTOMAS Y SIGNOS CLÍNICOS SON PROPIOS DE LA AHAIC suelen 
predominar. 
El inicio de la hemólisis puede ser brusco y la anemia muy intensa. 
 
TRATAMIENTO: 
Con esteroides es efectivo. 
Es común que los Acs IgM presenten un título < 64 a 4°c, pero la amplitud se 
extiende hasta los 37°c. 
 
 REACTIVO 
 IgG+C3 IgG+IgM POR IgG 
 
 
 
Muchos fármacos PRODUCEN MODIFICACIONES EN EL SISTEMA INMUNE, 
algunas de ellas presentan manifestaciones clínicas. 
Cuando el blanco de la modificación repercute en el GR pueden dar lugar a la 
aparición de una AHID. 
En general se producen tras la administración de altas dosis por periodos 
prolongados, EL AUMENTO DE LA DOSIS NO AUMENTA LA PROBABILIDAD 
DE DESARROLLAR AHID. 
CARACTERISTICAS: 
 Presentación clínica variable. 
 16% de todas las AHAI. 
 Más de 100 drogas implicadas. 
 Tiempo de exposición a la droga y la aparición de AHID- 6 días. 
 Independiente de la vía de administración. 
 Una vez formados, los Acs pueden permanecer por años. 
 
PCD POS TIPO DE Ig ELUIDO 
39 
 
 
 
PCD POS (por IgG): 
Se desarrolla en el 3% de los Px que reciben ALTAS DOSIS DE PENICILINA, y 
el 10% de los Px que reciben por MÁS DE 3 MESES ALFA-METILDOPA. 
 
ELUÍDO: NO REACTIVO. 
 
Dx: 
Dificultoso frecuente polimedicación, drogas que inducen autoinmunidad 
pueden confundirse con AHAI idiopáticas. 
 Relación temporal entre administración del medicamento y la hemólisis 
no es concluyente. 
 Otras posibles causas concomitantes de anemia. 
 Acs contra metabolitos de la droga. 
 Acs contra excipientes o sus metabolitos. 
 
MECANISMO DE 
ACCIÓN 
DROGA PROTOTIPO MECANISMO DE 
ACCIÓN 
Adsorción- Hipótesis del 
Hapteno 
Penicilina, 
Cefalosporinas 
Hemólisis extravascularHipótesis de complejo 
inmune 
Quinidina, quinina, 
cefalosporinas 
Hemólisis intravascular 
aguda y falla renal 
Inducción de 
Autoinmunidad 
Alfa-metildopa AHAI 
 
 AHAIC AHAIF AHAI MIXTA HPF 
PCD IgG 
IgG + C3 
C3 
C3 SOLO IgG + C3 
C3 
C3 SOLO 
TIPO DE Ig IgG IgM IgG + IgM IgG 
ELUIDO AC IgG NO REACTIVO AC IgG NO REACTIVO 
SUERO PCD: 35% DE GR 
NOTRATADOS 
AGLUTINADOS A 
20°c 
AC AGLUTINANTE 
IgM > 1000 (60%) A 
4°c, REACCIONA A 
> 30°c 
AC IgG REACTIVO 
EN PCI MAS AC 
AGLUTINANTE 
IgM REACTIVO A 
> 30°c 
PCI DE RUTINA 
NEG, 
HEMOLISINAS 
BIFÁSICAS IgG 
REACTIVAS EN LA 
PRUEBA DE 
DONATH-
LANDSTEINER 
ESPECIFICIDAD AMPLIAMENTE 
REAQCTIVOS 
MÚLTIPLES 
ESPECIFICIDADES 
GENERALMENTE 
ANTI-I 
HANITUALMENTE 
NO CLARA 
ANTI-P 
40 
 
 
 
 
CRITERIOS QUE DEFINEN UN GRUPO SANGUÍNEO: 
 El Ag debe ser definido por un AloAc humano. 
 El Ag debe ser un carácter heredado. 
 El gen que codifica debe haber sido identificado y secuenciado. 
 Debe conocerse su localización cromosómica. 
 El gen debe ser diferente y no un homólogo estrechamente relacionado 
a los otros genes que codifican Ags de grupos sanguíneos de los 
sistemas existentes. 
INTRODUCCIÓN: 
La reacción entre los Ags eritrocitarios y los Acs (suero/plasma del paciente o 
reactivos comerciales) son la base de las técnicas en Inmunohematología. 
 Determinación de grupo ABO y Rh. 
 Determinación de Ags de significancia clínica (Kell, MNS, Kidd, Duffy). 
 Detección de Acs irregulares. 
 Pruebas de compatibilidad. 
Limitaciones: 
 Fenotipo de paciente politransfundido. 
 Fenotipo de paciente con GR recubiertos de Ig. 
 Identificación de variantes. 
 Discrepancias. 
 Falta de reactivos para la detección de algunos Ags. 
 Dificultad para crear paneles de detección e identificación de Acs 
irregulares. 
Las técnicas que involucran al ADN han llevado a entender las bases 
moleculares de los sistemas sanguíneos. 
Los eventos moleculares llevan a la formación de Ags distintos y por ende, 
fenotipos distintos. 
UTILIDADES: 
 DONANTES: para posibles transfusiones de CGR (búsqueda de Ag 
NEG). Para crear paneles de cells para la búsqueda de Acs irregulares. 
 
 RESOLUCIÓN DE DISCREPANCIAS: D variantes, discrepancias ABO. 
 
 MATERNO-FETAL: para la prevención de EHFN (por incompatibilidad 
Rh). 
41 
 
 
 
ADN fetal se puede obtener a partir de cells amnióticas, muestras de 
vellosidades coriónicas y de plasma materno. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
o La existencia de las técnicas moleculares facilita la resolución de 
problemas que no pueden ser resueltos con la hemaglutinación. 
o Reactividad débil de algunos reactivos para ciertos Ags. 
o Tipificación de pacientes con transfusiones recientes. 
o Identificación de riesgo de EHFN. 
o Aumentar la fiabilidad de unidades Ag NEG para transfundir. 
o Llegar a un genotipo no significa necesariamente que el Ag se va a 
expresar en el GR. 
o La mayoría de estas técnicas son muy costosas, por lo cual el 
enfoque que se está dando en los estudios es la creación de 
algoritmos de identificación para disminuir costos, manteniendo la 
calidad. 
MÉTODOS MOLECULARES PARA LA GENOTIPIFICACIÓN DE GRUPOS 
SANGUÍNEOS: 
RENDIMIENTO TECNOLOGÍA 
BAJO PCR punto final ,PCR- RFLP 
PCR- SSP, PCR- multiplex 
MEDIANO PCR en tiempo real 
Secuenciación sanger y sus modificaciones 
BeadChip, Luminex XMAP 
MLPA (multiplex ligation depent probe amplification) 
ALTO BloodChip ,Taqman openArrays 
Genome Lab SNP Steam 
Mini secuenciación (SNaPshot assays) 
MALDI-TOF MS, Secuenciación masiva 
LOS AGS SON PROTEÍNAS 
QUE ESTÁN CODIFICADOS 
DIRECTAMENTE POR LOS 
GENES 
LOS HIDRATOS DE 
CARBONO DE LOS AGS SON 
CONTROLADOS POR LOS 
GENES QUE CODIFICAN 
GLICOTRANSFERASAS 
TODOS LOS GENES YA HAN 
SIDO SECUENCIADOS 
LOS POLIMORFISMOS DE 
LOS GRUPOS SANGUÍNEOS 
SON DEFINIDOS 
GENETICAMENTE Y SUS 
AGS TAMBIEN SON 
PRODUCTOS GÉNICOS 
42 
 
 
 
PCR alelo específico: 
 Uso de primers de secuencia específica. 
 Permite la amplificación de secuencias específicas para identificar 
distintos alelos de un gen. 
ASP PCR alelo específico amplification: 
 Permite detectar polimorfismos y mutaciones de una simple base de un 
ADN dado. 
Los individuos pueden ser homo o heterocigota para los alelos 
amplificados. 
Se basa para distinguir alelos que tienen cambios en un aminoácido. 
 Cada alelo se amplifica en un tubo distinto usando el primer que 
distingue el alelo y otro que se anille en una región conservada. Los 
oligos deben tener una longitud de 14-17nt (de esa forma el missmatch 
tiene mayor influencia sobre la T annealing). 
 Además en ese tubo si se amplifica también un control interno que 
puede ser otra secuencia del gen que esté conservada en los alelos es 
un buen control porque la ausencia de amplificación ya nos está dando 
un diagnóstico. 
PCR en tiempo real: 
 Variante de la PCR convencional en la cual se puede cuantificar el 
producto simultáneamente a su amplificación. 
 Se distinguen entre sí por el método de detección: 
° Fluorocromo no específico. 
° SYBR Green (se une a cualquier molécula de ADN). 
° Fluorocromo específico (sonda). 
° Se cuantifica la fluorescencia emitida.