Geles de agarosa y acrilamida - Dariel Isai Soria Cordova

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Geles de agarosa
y acrilamida
Dana Amairany Cabrera Méndez
A nivel molecular, un gel
funciona como un tamiz de
moléculas que se mantienen
unidas por puentes de
hidrógeno y forman
pequeños poros. Permiten
separar moléculas por
tamaño y forma.
¿Q
ué
es
un
gel?
Us
os de geles 
Separar fragmentos
de ADN en una
muestra.
Separar fragmentos
de productos de
PCR y la asignación
de tamaño de los
mismos.
(Aga
rosa)
Separar fragmentos que
se transferirán a una
membrana (de nailon o
nitrocelulosa) para llevar
a cabo la técnica de
Southern blot.
Poliacrilamida
Acrilamida + BisacrilamidaA B TEMED + Persulfato de
amonio
Acelera la tasa de formación de
radicales libres del persulfato que a su
vez catalizan la polimerización.
Us
os de geles 
Separar y purificar
proteínas por su
tamaño, forma y
carga. 
Detectar complejos
ADN-proteína en la
técnica denominada
EMSA .
Separar fragmentos más
pequeños y cuando se
quiere obtener una
mayor resolución.
(P
olia
crilamida)
Gel poliacrilamida
Preparar cámara Gel separador gel concentrador
Eliminar alcohol +
lavar con agua
Gel concentrador
sobre separador
Esperar polimerización 
1 2 3
4 5 6
Agarosa Poliacrilamida
Más utilizados en separación de ácidos
nucleicos, aunque también se utiliza en
ocasiones para proteínas
Utilizados en separación de proteínas
Tienen un poder de resolución mucho menor
que los de poliacrilamida
Mayor limitación en separación de tamaños (5-
600 pb)
 Químicamente inertes, estables en un amplio
rango de pH, temperatura y fuerza iónica 
Se corren en cámara de electroforesis
horizontal Más complicado de elaborar y manipular
Mayor rango de tamaños que pueden
separarse (50 pb a 40 kb)
CARACTERÍSTICAS DE LOS GELES
¿Cómo se tiñen los geles?
Desventajas: Recuperación de proteína pobre, baja
reproducibilidad, un estrecho rango lineal de cuantificación
Desventaja: Tóxico a altas concentraciones
Algunos de los métodos utilizados en la tinción de geles
son:
TINCIÓN DE PLATA: método colorimétrico utilizado en
geles de poliacrilamida.
BROMURO DE ETIDIO: agente intercalante (se intercala
entre las bases nitrogenadas) que se usa como
colorante fluorescente en geles de poliacrilamida y
agarosa
AZUL DE COOMASIE: Método más utilizado. Sensibilidad
de 50 ng.
ACRILAMIDA Y
BISACRILAMIDA
Geles con un
porcentaje alto
de acrilamida (10-
15%T) 
Geles de
porcentajes
menores de
acrilamida (<10%T) 
Separación de
proteínas de pequeño
tamaño (menores de
50KDa)
Porcentajes
Separación de proteínas mayores
Proporción (Acrilamida:Bisacrilamida)
19:1 Se utiliza péptidos pequeños
29:1 Se utiliza para separar proteínas de tamaño
"normal"
37.5:1 Ideal para separar proteínas de alto peso
molecular.
REFERENCIAS
Alberto Checa Rojas. (2017). Método: Gel de poliacrilamida para proteínas. 2022, Marzo 9,
Conogasi.org https://conogasi.org/articulos/metodo-gel-de-poliacrilamida-para-proteinas/
Checa Rojas, A. (2017) Método: Gel de electroforesis Agarosa. Conogasi, Conocimiento para la vida.
2022, Marzo 9 https://conogasi.org/articulos/metodo-gel-de-electroforesis-agarosa/
Fierro Fierro, F. (s. f.). Electroforesis de ADN. inecc.gob. Recuperado 9 de marzo de 2022, de
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/electroforesis.pdf
Universidad de Alcalá. (s. f.). Electroforesis con gel de poliacrilamida. uah.es. Recuperado 9 de marzo
de 2022, de
http://www3.uah.es/jcdiez/biologia%20sanitaria/metodos%20biologia%20molecular/practicas.pdf
Maldonado Alconada, A., & Jorrín Novo, J. (2020). Electroforesis desnaturalizante en geles de
poliacrilamida. Análisis de proteínas de hojas de Arabidopsis thaliana. uco.es. Recuperado 9 de marzo
de 2022, de https://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/16%20ELECTROFORESIS%20GELES%20PAA.pdf