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ACIDOS NUCLEICOS Estructura general de nucleótidos O- O O O OH OH H H H CH H P 3' 4' 1' O- Base Púrica ó Pirimídica 5' Pentosa Fosfato 2' Estructura de la Purina y de la Pirimidina HC N H C C N H CH C N N 2 1 6 5 4 3 7 8 9 H C CH CH HC N N 2 1 6 5 4 3 Pirimidina Purina NUCLEOSIDOS* Difracción de rayos X del DNA Forma B Forma A Puentes de hidrógeno en los pares de bases de Watson y Crick H 1.8 nm 0.28 nm 0.30 nm H H H C C C C C C-1' N N N N N C C CH3 C C C-1' N N O O H H H C C C C C C-1' N N N O N N H H H C C H C C C-1' N N N O H H H 1.8 nm 0.30 nm 0.29 nm 0.29 nm Timina Citocina Adenina Guanina La desnaturalización del DNA 75 80 85 50 100 t m t m 60 70 80 90 110 100 20 40 60 80 100 Desnaturalización (%) G + C % del total de nucleótidos Temperatura (°C) tm (°C) ARN QUIMICA DE LOS ACIDOS NUCLEICOS SINTESIS PROTEICA T A C G A A C C G T T G C A C A T C A U G C U U G G C A A C G U G Transcripción: 1- Iniciación: Una ARN-polimerasa comienza la síntesis del precursor del ARN a partir de unas señales de iniciación "secuencias de consenso " que se encuentran en el ADN. ARNpolimerasa T A C G A A C C G T T G C A C A T C A U G C U U G G C A A C G U G Transcripción: 2. Alargamiento: La síntesis de la cadena continúa en dirección 5'3'. Después de 30 nucleótidos se le añade al ARN una cabeza (caperuza o líder) de metil-GTP en el extremo 5‘ con función protectora. m-GTP ARNpolimerasa A U G C U C G U G Transcripción: 3- Finalización: Una vez que la enzima (ARN polimerasa) llega a la región terminadora del gen finaliza la síntesis del ARN. Entonces, una poliA-polimerasa añade una serie de nucleótidos con adenina, la cola poliA, y el ARN, llamado ahora ARNm precursor, se libera. m-GTP poliA-polimerasa U A G A A A A A ARNm precursor ARNm precursor AAAAAA AUG UAG cola 4. Maduración (cont.): El ARNm precursor contiene tanto exones como intrones. Se trata, por lo tanto, de un ARNm no apto para que la información que contiene sea traducida y se sintetice la correspondiente molécula proteica. En el proceso de maduración un sistema enzimático reconoce, corta y retira los intrones y las ARN-ligasas unen los exones, formándose el ARNm maduro. ARNm maduro Cabeza Región codificadora del gen Promotor E1 I1 E2 I2 E3 Terminador ADN ARNm precursor ARNm maduro AAAAAA AAAAAA AUG UAG AUG UAG ATC TAC Cabeza Cabeza E1 I1 E2 I2 E3 cola cola Maduración del ARNm (Visión de conjunto). 1er aminoácido ARNt Anticodón Codón ARNm Subunidad menor del ribosoma AAAAAAAAAAA P A A U G C A A U A C Iniciación: La subunidad pequeña del ribosoma se une a la región líder del ARNm y el ARNm se desplaza hasta llegar al codón AUG, que codifica el principio de la proteína. Se les une entonces el complejo formado por el ARNt-metionina (Met). La unión se produce entre el codón del ARNm y el anticodón del ARNt que transporta la metionina (Met). 5’ 3’ U G C U U A C G A U A G (i) Subunidad menor del ribosoma AAAAAAAAAAA P A A U G C A A U A C Elongación I: A continuación se une la subunidad mayor a la menor completándose el ribosoma. El complejo ARNt-aminoácido2 , la glutamima (Gln) [ARNt-Gln] se sitúa enfrente del codón correspondiente (CAA). La región del ribosoma a la que se une el complejo ARNt-Gln se le llama región aminoacil (A). 5’ 3’ G U U U G C U U A C G A U A G (i) ARNm AAAAAAAAAAA P A A U G C A A U A C Elongación II: Se forma el enlace peptídico entre el grupo carboxilo de la metionina (Met) y el grupo amino del segundo aminoácido, la glutamina (Gln). 5’ G U U U G C U U A C G A U A G 3’ AAAAAAAAAAA P A A U G C A A Elongación III: El ARNt del primer aminoácido, la metionina (Met) se libera. 5’ G U U U G C U U A C G A U A G ARNm 3’ AAAAAAAAAAA P A A U G C A A Elongación IV: El ARNm se traslada, de tal manera que el complejo ARNt-Gln-Met queda en la región peptidil del ribosoma, quedando ahora la región aminoacil (A) libre para la entrada del complejo ARNt-aa3 5’ 3’ G U U U G C U G C U U A C G A U A G ARNm AAAAAAAAAAA P A A U G C A A Elongación V: Entrada en la posición correspondiente a la región aminoacil (A) del complejo ARNt-Cys, correspondiente al tercer aminoácido, la cisteína (Cys). 5’ G U U U G C U G C U U A C G A U A G ARNm 3’ A C G AAAAAAAAAAA P A A U G C A A Elongación VI: Unión del péptido Met-Gln (Metionina-Glutamina) a la cisteína (Cys). 5’ G U U U G C U G C U U A C G A U A G ARNm 3’ A C G AAAAAAAAAAA P A A U G C A A Elongación VII: Se libera el ARNt correspondiente al segundo aminoácido, la glutamina (Glu). 5’ U G C U G C U U A C G A U A G ARNm 3’ A C G (i) AAAAAAAAAAA P A A U G C A A Elongación VIII: El ARNm corre hacia la otra posición, quedando el complejo ARNt3-Cys- Glu-Met en la región peptidil del ribosoma. 5’ U G C U G C U U A C G A U A G ARNm 3’ A C G AAAAAAAAAAA P A A U G C A A Elongación IX: Entrada del complejo ARNt-Leu correspondiente al 4º aminoácido, la leucina. 5’ U G C U G C U U A C G A U A G ARNm 3’ A C G A A U Leu AAAAAAAAAAA P A A U G C A A Elongación X: Este se sitúa en la región aminoacil (A). 5’ U G C U G C U U A C G A U A G ARNm 3’ A C G A A U AAAAAAAAAAA P A A U G C A A Elongación XI: Unión del péptido Met-Gln-Cys con el 4º aminoácido, la leucina (Leu). Liberación del ARNt de la leucina. El ARNm se desplaza a la 5ª posición 5’ U G C U G C U U A C G A U A G ARNm 3’ A A U AAAAAAAAAAA P A A U G C A A Elongación XII: Entrada del ARNt de la leucina, el 5º aminoácido, la arginina (ARNt-Arg). 5’ U G C U G C U U A C G A U A G ARNm 3’ A A U G C U AAAAAAAAAAA P A A U G C A A Elongación XIII: Unión del péptido Met-Gln-Cys-Leu con el 5º aminoácido, la arginina (Arg). Liberación del ARNt de la leucina (Leu). El ARNm se desplaza a la 6ª posición, se trata del un codón de finalización o de stop. 5’ U G C U U A C G A U A G ARNm 3’ Arg-Leu-Cys-Gln-Met G C U AAAAAAAAAAA P A A U G C A A 5’ U G C U U A C G A U A G ARNm 3’ Arg-Leu-Cys-Gln-Met G C U Finalización I: Liberación del péptido o proteína. Las subunidades del ribosoma se disocian y se separan del ARNm. AAAAAAAAAAA Finalización II: Después unos minutos los ARNm son digeridos por las enzimas del hialoplasma. 5’ ARNm 3’ A U G C A A U G C U U A C G A U A G (i) • Los sitios de control en el DNA proporcionan sitios de unión para las proteínas. • Las regiones codificadoras se expresan vía la síntesis de RNA • Un sitio de control que actúa en cis influencia el DNA adyacente pero no influencia al otro alelo. • En el tipo silvestre, los dos alelos sintetizan RNA • Una mutación en un sitio de control afecta solamente al DNA contiguo. • Una mutación que actúa en trans en una proteína afecta ambos genes que controla. • La proteína activa actúa en ambos alelos • Una mutación que actúa en trans en una proteína afecta ambos genes que controla. • La proteína activa actúa en ambos alelos • La proteína mutanteno se puede unir a la región de control de ningún alelo. Enrollamiento y superenrollamiento Superenrollamiento enrollado superenrollado Eje DNA de doble hélice (enrollado) Eje DNA superenrollado (a) (b) Topoisómeros cruciformes DNA relajado DNA parcialmente desenrollado Rearreglo cruciforme del DNA DNA relajado DNA altamente superenrollado Electroforesis en gel de agarosa de plásmidos circulares con diferentes grados de superhelicidad 1 2 3 OTRAS FUNCIONES DE ACIDOS NUCLEICOS METODOS DE CLONACION
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