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TODOS LOS POWER POINTS
· Toma de muestra y preparación del paciente.
· Deteccion del antigeno de superficie de la hepatitis B (HbsAg)
· Detección de HCV
· Detección de HIV
Los ensayos de inmunoabsorción (ELISA) son una de las metodologías más utilizadas para el diagnóstico y seguimiento de las infecciones virales.
La técnica de ELISA combina la especificidad de las uniones antígeno-anticuerpo con la sensibilidad de un ensayo enzimático.
Método ELISA para la identificación de antígenos virales
Método de ELISA para la identificación de anticuerpos IGM
· La toma de muestra constituye una de las etapas críticas para el trabajo del laboratorio clínico.
· Es el primer contacto entre el laboratorio y sus ptes y el punto de inicio del proceso pre-analítico.
· Sin lugar a dudas, toda muestra debe ser considerada como potencialmente patógena.
· Es importante tener presente que existen muchos factores que pueden afectar el resultado de las pruebas de laboratorio, algunos de los cuales pueden ser evitados con una adecuada orientación al pte y una correcta técnica de extracción sanguínea.
· La situación dietética del pte puede ser de importancia para ciertas pruebas. Tal es el caso de las variaciones en la concentración de lípidos después de una comida grasosa. El suero sanguíneo muestra una apariencia lechosa debido a la presencia de triglicéridos y quilomicrones. Estos sueros hiperlipémicos influyen en las mediciones, por lo que se recomienda tomar la muestra después de un periodo de ayuno, usualmente de toda la noche.
· Todas las muestras deben ir acompañadas de una solicitud debidamente formulada.
· La solicitud debe contener la siguiente información:
· · Identificación completa del paciente:
· - Nombre completo.
· - Género.
· - Número de documento.
· - Edad o fecha de nacimiento.
· - Procedencia.
· - Sala y número de cama en caso de pacientes hospitalizados.
· · Datos del profesional solicitante (Nombre completo).
· · Pruebas que se solicitan.
· · Consentimiento informado cuando sea necesario (Ej. VIH). NO OLVIDAR
· · Incluir información clínica de utilidad (Diagnóstico, ingestión de fármacos, etc.).
· · Fecha de pedido médico.
· - Rotulado correcto de los tubos!!!!.
Método de ELISA para la detección del antígeno de superficie del virus de la Hepatitis B
· La hepatitis B es una enfermedad del hígado causada por el virus de la hepatitis B (HBV). 
· Puede cursar en forma asintomática, o como un proceso agudo o crónico. 
· En los casos más graves puede derivar en cirrosis hepática y carcinoma hepatocelular primario. 
· Se transmite principalmente por contacto parenteral, percutáneo, o sexual. También se ha observado transmisión perinatal y horizontal.
Fundamentos del método:
· - Los pocillos de la policubeta están recubiertos con anticuerpo de cobayo anti-HBs (anti-HBsAg) que actúa como anticuerpo de captura. 
· - La muestra se incuba en uno de los pocillos. Si la misma contiene HBsAg, éste formará un complejo con el anticuerpo unido a la placa. 
· - El material no unido se elimina por lavado. 
· - En el siguiente paso, se agrega el anticuerpo de cabra anti-HBs conjugado con peroxidasa, que se unirá con los complejos anticuerpo-antígeno formados previamente. 
· - El conjugado no unido se remueve por lavado. 
· - Posteriormente, se agrega una solución conteniendo tetrametilbencidina y peróxido de hidrógeno. 
· - En los casos en que el HBsAg esté presente en la muestra, se desarrolla color celeste que vira al amarillo cuando se detiene la reacción
· IMPORTANTE: conservar todos los reactivos del kit de trabajo a 4°C. Pero al momento de utilizarlos, estos deben estar a temperatura ambiente.
 
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Método de ELISA para la detección de anticuerpos contra el virus de la Hepatitis C
· La hepatitis C es la forma más común de hepatitis post-transfusional.
· Su transmisión se produce fundamentalmente por vía parenteral.
· El 80% de las personas infectadas con HCV desarrollan infección crónica. En el 30% de estos pacientes, la enfermedad progresa hasta la cirrosis o cáncer de hígado.
· La mayoría de las personas con hepatitis C no presenta síntomas; en consecuencia, esta enfermedad raramente es diagnosticada antes de la aparición de sus complicaciones crónicas.
Fundamentos del método:
· Es un ELISA de 3° generacion
· Los pocillos de la policubeta están recubiertos con antígenos recombinantes derivados de la región estructural (core) y de la no estructural (NS3, NS4 y NS5) del virus de la hepatitis C. 
· La muestra diluida se incuba en los pocillos. Si los anticuerpos contra el virus están presentes en la muestra, éstos se unen a los antígenos del pocillo. 
· El material no unido es removido por lavado. 
· En el paso siguiente se agrega el conjugado, que consiste en un anticuerpo monoclonal anti IgG humana conjugado con peroxidasa. Este se une a los complejos antígeno-anticuerpo, formados previamente. 
· El conjugado no unido se remueve por lavado. 
· Posteriormente, se agrega una solución conteniendo tetrametilbencidina y peróxido de hidrógeno. 
· Las muestras reactivas desarrollan color celeste que vira al amarillo cuando se detiene la reacción con ácido sulfúrico.
Todos los reactivos provistos en el kit se deben conservar a 4°C. Pero al momento dee utilizar deben estar a temperatura ambiente.
 
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Método de ELISA para la detección de anticuerpos anti HIV-1 y anti HIV-2
· Los virus de la inmunodeficiencia humana (HIV-1 y HIV-2) son retrovirus transmitidos por la exposición a ciertos fluidos corporales infectados, principalmente secreciones genitales, sangre o productos contaminados derivados de la sangre y pasaje a través de la placenta.
· La evidencia serológica de la infección por HIV-1 y HIV-2 puede ser obtenida determinando la presencia de antígenos y anticuerpos en el suero de individuos en los que se sospecha la infección. 
· Los antígenos, generalmente, pueden ser detectados en la fase aguda y durante la fase sintomática de la enfermedad. 
· Los anticuerpos pueden determinarse a lo largo de toda la infección, comenzando en la fase aguda o inmediatamente después de ella.
Fundamentos del método:
· ELISA de 3° generacion
· Los pocillos de la policubeta están recubiertos con antígenos recombinantes de los virus HIV-1 y HIV-2. 
· La muestra de suero del paciente se incuba en los pocillos. 
· Si la muestra contiene anticuerpos contra HIV-1 o HIV-2, los mismos se unirán a los antígenos sensibilizados en la placa. 
· El material no unido es removido por lavado. 
· En el paso siguiente, se agrega el conjugado que contiene los mismos antígenos de la placa conjugados a peroxidasa. 
· Estos se unirán a los anticuerpos si estaban presentes en la muestra. 
· El conjugado no unido se remueve por lavado. 
· A continuación, se agrega una solución conteniendo tetrametilbencidina y peróxido de hidrógeno. 
· Las muestras reactivas desarrollan color celeste que vira al amarillo cuando se detiene la reacción con ácido sulfúrico.
Todos los reactivos provisto por el kit se deben conservar a 4°C. Pero al momento de utilizar estos deben estar a temperatura ambiente.
 
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