vacunas virales I _ II

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VACUNAS ANTIVIRALES
https://www.youtube.com/watch?v=8kuMF8MADHg&feature=youtu.be 
me salteo toda las primeraas partes que son historia de todos los hitos historicos de la vacunacion. Arranco
desde el min 13:37
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https://www.youtube.com/watch?v=8kuMF8MADHg&feature=youtu.be
El fundamento de la vacunacion sostiene en la
induccion de una respuesta dee memoria; es
decri, una vacunacion induce en el hospedero
vacunado una rta inmune de memoria que frente
al ingreso del organismo vacunado de un microorg
patogeno, esa reta inmune dee memoria se activa
rapidamente y lo proteje de la enfermedad
asociada a lla infeccion con ese morg patogeno.
A los antígenos inmunogenos capaces de inducir
una rta que proteja al hospedero frente a la
posterior infeccion con un patogeno, se lo
denomina antigeno protectivo. Y a la rta inmune inducida por estos Ag protectivos se la denomina rta
inmune protectiva. Porque hablamos de Ag protectivos, como saben, los virus son partículas mas o menos
complejas pero que presentan numerosos Ag en su estructura. Ya sea en la estructura de los viriones ose Ag
estructurales, como AG que se generan en el ciclo de replicacion debido a la prod de prot virales durante la
replicacion. No todos estos Ag tienen la capacidad de ser protectivos, es decir de establecer una rta inmune
protectiva. Luego vamos a ver que en la medida de los procedimiento para la elaboracion y preparacion de
vacunas s fueron sofisticando, se torno mas importante la identificacion de aquelloss Ag capaces de
establecer una rta inmune protectiva en un hospedero vacunado. 
Que caracteristicas tienen que presentar el tpo de rta que a nosotros nos interesa inducir, es decir que tipo
de rta es capas de inducir un Ag protectivo-
 Una Rta inmune protectiva, en principio
tienen que tener como destino final la
capacidad de proteger al hospedero de la
enfermedad asociada a la infeccion con un
determinado patogeno, para ello,
idealmente una rta protectiva tienen que
estar dirigida hacia dttos Ag del patogeno, si
bien algunos de esos Ag del patogeno tienen
mayor relacion con la actividad de
proteccion, cuanto mas extenso sea el
espectro de Ag reconocidos por la rta
inmune en patogenos, mayor sera la
probabilidad de que la rta inducida sea
protectiva. Por otro lado, las rtas inmune
protectivas tienden a involucrar la participacion de dttos mecanismos efectores a dttos niveles; rta
intrinseca, innata, adquirida y con la participacion de mecanismos humorales y celulares, cuanto mayor sea
el espectro de efectores involucrados en una rta frente a un patogeno, mayor sera la proobabilidad de que
esa rta tenga caracteristicas protectivas. 
Ahora, no solo es necesario que se involucren dttos mec efectores, sino que también es necesario que el
balance entre esos mec efectores sea adecuado, es decir que la forma y el vigor con el cual esos mec
efectores se activan frente a la presencia del patogeno guarde un balance adecuado que en principio se
debe parecer lo mas posible al balance de una rta inmune natural, es decir, el tipo de rta inmune que se
establece frente a la infeccion con el patogeno. Cuanto mas se parece el balance de la rta generada por la
vacunacion a la generada por la infeccion del patogeno, mayor es la probabilidad de que la rta inducida sea
protectiva.
Por otro lado, una rta inmune protectiva debe ser cruzada, es decir que debe tolerar cambios en la
estructura antigénica del patogeno, debe ser duradera idealmente. En la practica sabemos que no todas las
vacunas son capaces de establecer vacunas duraderas, por ejemplo la vacuna de la gripe protege por un año
y eso se debe a la s variaciones que sufren las cepass circulants del virus influenza que van mutando constantemente
cuando no cambian integramente algún Ag. Ese fue justamente uno de los aportes de hilleman, que reconocio esa
variacion permanente de los virus influenza y predijo que iba a sernecesario la revacunacion anual para proteger
contra la gripe.
Por otro lado, por definicion, toda vacuna que intente establecer una rta protectiva debe impoer una memoria para
que la activacion de la rta de memoria se ala que proteja al hospedero vacunado. Si una rta inmune cumple con todas
las caracteristicas o con la mayor parte de ella va a ser capaz de proteger a un hospedero dee la enfermedad asociada
a la infeccion con un patogeno.
La primera es qu debe ser capaz de inducir una rta
protectiva, es decir, tiene que protagener contra la
enfermedad producida por el patogeno contra el
cual se esta vacunando.
Tiene que ser seguna, no tiene que provocar
patologias, algunos de los problemas mas
importantes que se presentaron en la historia del
dedarrollo de vacunas estan ligados a problemas
de seguridad en la inactivacion, reversion de la
atenuacion de virus vacunales atenuados.
Idealmente una vacuna no debe provocar efectos
colaterales indeseables o estos deben ser
minimizados.
Las vacunas deben ser biologicamente estable,
sobre todo para las vacunas atenuadas, que estan formuladas por virus que conservan la capacidad de replicarse,
aunq han perdido total o parcialmente su virulencia, esto no siempre ocurre, y esa es la razon por la cual algunas
vacunas han sido reemplazadas en algún momento.
Una vacuna debe ser de bajo costo, porque tienen que llegar a toda la población, una vacuna es efectiva cuando
puede abarcar a la mayor parte de la población suceptible, osea tiene que ser capaz de establecer proteccion en la
mayor parte de la población suceptible, cosa que no sucederia si las vacunas fuerran de alto costo. Por eso en
muchos paises, los programas de inmunizacion, de vacunacion son gratuitos para las personas. Cuando la imunizacion
con una vacuna alcanza una gran proporcion de la población, eso implica que el agte patogeno reduce sus
probabilidadesde circulacion en esa población, y en esa población se establece la inmunidad de rebaño, esta implica
que al presentar inmunidad la mayor parte de una población suceptible, el virus u otros patogenos encuentran
menos hospederos suceptiles para replicarse y hacer su ciclo de transmision, de tal manera que se reduce la
circulacion del patogeno y quedan protegidos no solo aquellos que se vacunaron, sino los que no se pudieron
vacunar. Tengamos en cta que en toda población hay unaproporcion de individuos que por alguna razon no pueden
ser vacunados, principalmente en el caso de vacunas atenuadas que no se le puede administrar a personas
inmunodeficientes, entonces estas personas no vacunadas quedan protegidas directamente por la proteccion de
aquellas personas vacunadas y que limitan la circulacion del patogeno en el conjunto de la población. Razon por la
cual las vacunas nesesariamente tienen que ser de bajo costo. 
Una vacuna viral efectiva, tienen que ser de facil administracion, o deberia serlo, en este punto se engloban una
cantidad de aspectos que tienen que ver no lsolamente con la administracion en si, sino también con la distribuion,
necesidad de cadena de frio para su preservacion, cuanto ams facil sea llegar a administra la vacuna a la población
seceptibl, mayor sera la probabilidad de alcanzar el efecto protectivo en esa población.
 Hoy se conocen 4 tipos grales de vacunass
virales diferentes. Las que no contienen virus
activos. Las vacunas genicas. Lasvacunas que
contienen virus activos. Y aquellas vacunas con
formulas apartir de vectores virales no
replicativos.
Para cada uno de estos tipos de grupos, hay
distintos subtipos que vamos a analizar. 
Se preparan a partir de la inactivacion de
viriones por tto químico o fisicos, gralmente o
preferentemente por tto químico, elfisico puede
dar lugar a una inactivacion revesible, sobre
todo si se utiliza UV como agente inactivante,
por eso se prefiere la inactivacion por ttoqco
con aldehidos como el formaldehido. Esta
inactivacion tiene que tener como resultado la
incapacidad del virion para infectar y replicarse
en un hospedero suceptible. La inactivacion entonces, debe eliminar la capacidad del virus para replicarse, pero este
debe conservar la actividad antigénica. Es decir los antígenos y especificamente los protectivos localizados en el virion
no debe verse afectados estructuralemente, no deen perder su cap inmunogenica por la inactivacion.
 La primer ventaja es la seguridad, es decir, al
vacunar con un virion inactivo, si la inactivacion
fue correcta, yo estoy seguro de que ese virus no
va a replicar y producir una patologia, siempre y
cuando la vacuna este bien inactivada, algunos
de los eventos desfavorable durante la historia de
las vacunas virales estuvo ligadas al defecto de la
inactivacion de lotes dee vacunas inactivadas que
dieron lugar a la emergencia de brotes de
enfermedad como consecuencia de la
inoculacion de estos lotes defectuosos, esto
ocurrio con algunos dee los primeros lotes de la
vacuna contra la poliomelitis.
Estas vacunas se pueden utilizar sin riesgos en
personas inmuno deficientes y por otro lado son
capaces de estimular una buena rta humoral
cuando se administran dosis repetidas, en gral
estas vacunas se deben administrar en una dosis inicial y varias de refuerzo que se suministran con una periodicidad
variable de acuerdo al tipo de vacuna.
Las limitaciones: en principio como utilizamos un virion inactivado como agte inmunizante, la rta inmune que se
genera es diferente a la rta inmune que se genera en una infeccion natural, es decir, va a presentar un balance
diferente al de una inmunizacion natural, la rta generada es de menor magnitud, duracion y no es cruzada, es decir,
no reconoce a agtes antigenicamente relacionados, osea patogenos relacionados.
Por otro lado, estas vacunas no inducen o inducen una pobre rta en mucosa que como vamos a ver mas adelante es
una ventaja que pueden presentar algunas vacunas atenuadas. La induccion de la rta de Ltcitotoxico es pobre, no hay
una buena rta humoral como consecuencia de la inmunizacion con vacunas inactivadass, y la rta celular contribuye
significativamente al establecimiento de una rta protectiva y es algo qu no ocurre cuando uno utiliza una de estas
vacunas inactivadas.
En gral como son inmunogenos pobres en relacion a las vacunas atenuadas, se requiere del uso de adyuvantes para
potenciar la respuesta inmune. Hay que tener en cta que muchas de las sustancias que pueden ser adyuvantes,
pueden ser toxicos, asi q es un aspecto a tener en cta. y un problema que puede surgir en el uso de este tipo de
vacunas, esta ligado a los defectos de inactivacion, algo que hoy ya no ocurre porque los procesos de ianctivacioon
viral quimica han sido muy puestos a punto, son muy bien conocidos. 
→ Una variante de las vacunas inactivadas son
las vacunass a subunidades proteicas, aca en
vez de utilizar como agte vacunal un virion
completo, se utiliza un antigeno viral, en
general una proteina viral o un Ag mas
complejo, en gral hoy estas proteínas virales
con capacidad Ag se producen en sistemas de
expresion inv vitro, hay dttos tipos de sist de
expresion, bacterias, levaduras, cel de insectos,
cel de mamiferos; que de acuerddo al tipo de
Ag que uno quiere expresar, uno puede elegir el
sist de expresion que mas le convenga. Para
poder desarrollar una vacuna a partir del uso
de sub unidades proteicas es un requisito tener
identificado cuales son los Ag protectivos.
Cuando uno utiliza una vacuna a virus
inactivado, osea con viriones inactivados, una
vacuna va a contener a todos los Ag estructurales, y entre estos estan los Ag con capacidad de inducir la rta
protectiva. Cuando uno va a inmunizar solo con una proteina tiene que estar seguro que esa proteina es un Ag
protectivo osea que tienen la capacidad de inducir una rta protectiva. La ventaja de este tipo de vacunas esta ligada a
la seguridad, a la posibbilidad de producir Ag en grandes cantidades en sist de expresion que hoy se pueden escalar a
miles de litros capaces de producir cientos y miles de gramos de proteina inmunogenicas, y la capacidad de producir
esto en cualquiera de los sist de expresion, el que mejor se adecue al tipo de Ag.
En cuanto a las limitaciones, los Ag protectuvos tienen que estar identificado, la expresion tiene que ser eficiente, es
decir el sist en el cual produsco la prot inmunogena tienen que ser eficiente con altos rendiminetos. Este inmunogeno
necesariamente debe ser purificado para aislarlo de otras proteínas y Acidos nucleicos contaminantes que aparecer.
La purificacion en ocaciones se lleva una parte considerable, la mas importante del costo final de produccion de un
Ag que se va a utilizar con fines vacunales. Y los procedimientos de purificacion deben ser capaces de conservar al
inmunogeno en estado nativo, es decir aquella estructura terciaria o cuaternaria que sea capaz de inducir una rta
protectiva, si la prot qu utilizo como inmunogeno, en lugar plegarse como se pliega en un Ag nativo, se esta plegando
de manera anormal, es posible que no indusca una rta protetiva, o inclusive indusca una rta anormal que een vez de
proteger, incusca una rta que acelere o aumente la patogeneicidad del agte patogeno. 
Por otro lado, estas vacunas, a sus unidades nesesitan ser inyectadas con adyuvantes, lo que también incrementa el
costo. 
Esta es una variante de las vacunas proteicas, aca
no solo hay que tener identificado al Ag
protectivo, sino que también al epitople o a los
epitopes protectivos inmunodominantes. Y estos
epitopes deben ser para poder ejercer siu
inmunogeneicidad deben ser suministrados con
una prot transportadoras, sobre la cual se van a
presentar estos peptidos inmunogenicos,
alternativamente, el peptido en lugar de
exponerce sobre una prot transportadora, puede
presentarse sobre la superficie de una particula
viral no infecciosa correspondiente a otro virus
que simplemente va a actuar como carrier. Es
decir una particula viral de otro virus al cual se le
va a adherir la particula inmunogenica, la
particula viral solo va a ser vir como transporte
que ademas de ser particulado tiene mayor
chances de generar una rta inmunogenica.
La ventaja de peptidos sinteticos sobre las proteínas recombinantes, es el bajo costo. Los peptidos se pueden
sintetizar por métodos quimicos produciendo muchas cantidad, y una vacuna formulada a base de peptidos es segura
porque en ninguna etapa esta involucrada la participacion del virus patogeno o atenuado. 
Las limitaciones estan ligadas a la falta de exposicion de epitopes conformacionales, aunq si se puede reproducir on
vitro la estructura de un epitope conformacional, teoricamente poddria existir la posibilidad de producir estos
epitopes conformacionales y formular una vacuna con los mismos. 
Los peptidos sinteticos perse tienen baja inmunogenicidad y necesariamente tienen que ser infectados por una pprot
o particula transportadora qu ayuden a sobrepasar esta limitacion. Y el tipo de inmunidad que genera da origen a una
proteccion de muy corta duracion, en la practica si bien se ha experimentado mucho en la formulacion de vacunas
sobre la base de peptidos sinteticos, no existen vacunas producidas mediante esta tegnologia.
A mitad de camino enntre las vacunas a virus
inactivados y las vacunas recombinantes a sub
unidades proteicas estan las vacunas a VLP. Estas
siglas, es el acronimo a partículas similares a
virus. 
Las VLP son partículas pseudovirales que carecen
de ácidos nucleicos basicamente, son o capsides
vacias o estructuras membranosas similares a
envolturas virales que no contienen en su interior
un core con los ácidos nucleicos, por lo tanto no
tienen ni la cap de infectar ni de replicarse, pero
si tienen la estructura particuladacapaz de
mimetizar la estructura del virion. Y por lo tanto
tienen una capacidad inmunogenica identica a la
de una vacuna inactivada. Con dos ventajas a su
favor. La seguridad porque no necesitan ser inactivadas y el coosto de produccion porque al no necesitar la
inactivacion, el costo disminuye. 
Por otro lado, estas VLP se pueden producir en grandes cantdades en sist de expresion, levadurass, cultios de cel de
insectos. El fundamento de la produccion de VLP se basa en la capacidad de las proteínas virales de auto ensamblarse
para formar partículas virales o en este caso pseudovirales.
Supongamos que yo conosco cuales son las prot estructurales que forman el virion de un virus, y yo tengo clonados
en un sist de expresion los genes que codifican para estas prot estructurales y yo expreso estos genens en algún
sistema, cuando los productos de la expresion de estos genes se encuentren en las celuals de mi sistema de
expresion, vana tender a asociarse formando unidades estructurales y luego a partiir de esas unidades estructurales
se vana asociar formando pseudoparticulas virales que a continuacion voy a poder utilizar como agtes vacunales.
Las ventajas de utilizar estas pseudoparticulas virales
es que presentan epitopes conformacionales al igual
qu un virion inactivado, son sumamente seguras
porque no contienen Ac nucleicos y tienen una muy
buena inmunogenecidad.
La limitacion ams importan te es que vana requerir de
la administracion de multiples dosis.
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En las vacunas genicas, el agte inmunizante o
inmunogeno se genera insitu en el orgnaismo
vacunado, y esto se consigue a través de la
inoculacion de un elto genico que es
adecuadamente diseñado, luego se incorpora a
las células del oorganismo vacunado y en ese
organismo in situ se va a expresar y generar el
inmunogeno responsable de inducir una rta
protectiva. 
Las centajas son en principio que estas vacunas
admiten la implementacion de plataformas
vacunables, es decir, sistemas pre existentes en
los cuales uno tiene preparado el soporte, el
armazon genica y lo unico que tiene que
incorporar es el gen expecifico qu desea expresar
para cada vacuna, es decir, un unico soporte
general qu luego adite la posibilidad de
incorporar dttos genes e ir ambiandolos de acuerdo a cual es el Ag contra el cual uno desee generar una rta inmune;
esto obviamente s refleja en que uno puede producir rapidamente una nueva vacuna por ejemi ante la emergencia
de un nuevo patogeno como el caso del sarcov-2. Tener estos soportes preparados de antemano y tener la
posibilidad de rapidamente insertar el gen que codifica para el Ag protectivo y rapidamente poder generar una
vacuna, permite atender este tipo de emergencias de manera significativamente mas rapida. 
Por otro lado, este tipo de vacuna permite la prod a gran escala a un costo reducido, también los gastos de
distribución administracion son menores, porque este tipo de vacunas genicas, sobre tdo aquellas formuladas a base
de DNA sonmuy estableees lo que permite el almacenamiento a temp ambiente, y la reconstitucion al momento que
resulte necesario. 
Como el inmunogeno en este caso se genera insitu en el mismo organismo, la forma en que este inmunogeno es
procesado, me refiero a los procesamiento post transcripcionales y post traduccionales son identicos a los que sufre
el inmunogeno en un infeccion natura, por lo tanto es reconocido por el sist inmune de igual manera a una infeccion
natural dando origen a una rta con un balance similar al de una infeccion natural. También es posible inocular con
mezclas de plasmidos qu permite la posibilidad de inducir rtas a varios inmunogenos al mismo tiempo o utilizar un
mismo soporte genico e insertar varios genes sobre ese mismo soporte de tal manera de expresar varios Ag al mismo
tiempo a partir de una unica inoculacion genica.
Aca vemos el concepto explicado para el papiloma. La prot 
principal para la capside del papiloma es la L1, en el sist de 
expresion que se utilice que puede ser levaduras o cel de 
insecto inf con vaculovirus recombinante, se va a expresar L! 
Que expontaneamente se asocian entre si para formar 
capsomeros, los cuales también se asocian espontaneamente 
para formar estas partículas pseudovirales que son las que se 
utilizan como agtes vacunales. En la parte inferior para que 
veamos cual es la diferencia con el virus autentico, se ve que 
se le integra a esta particula una prot minoritaria que se 
ubica ene l vertice de las subunidades estructurales de la 
capside del papiloma virus, y ademas se le incorpora a esta 
particula una doblecadena circular de DNA superenrrollado 
que constituye el genoma del papiloma.
Respecto a la sguridad desde el punto de vista infectologico, son seguras porque no utilizan ningun agente
infeccionso, pero existe la posibilidad de integracion potencial de estos eltos genicos en el genoma de la cel huesped
o la posibilidad de que se den eventos dde recombinacion que podrian tener consecuencias no deseadas en el org
vacunado. Y desde el punto de vista de la generacion de efectos no deseados, estas vacunas al no contener proteínas,
en gral no tienen problemas de generacion de alergias, pero por otro lado si puedn inducir rtas del tipo autoinmunes,
la generacion de Ac anti DNA.
Como en este caso el inmunogeno se genera insitu en cel modificadas del propio organismo, hay una buena
induccion de rta celular con produccion de LT citotoxicos,y ademas de una rtaa humoral, tiene una uena rta celular.
Este es un ejemplo de una vacuna genica
de Dna, a la izq se ve el plasmido que es el
soporte genico en el cual se va a insertar el
gen que codifica al Ag protectivo que nos
interesa expresar insitu, esto por un
sistema de transaccion que puede ser a
través de una pistola genica o utilizando
liposomas. Se introduce el plasmido
modificado recombinante en las células
del organismo a vacunar y esas celuals, en
las cuales el gen contenido en el plasmido
se empiezan a xpresar, producen los Ag
protectivos y estos se expresan,
enventualmente se secretan y inducen una
rta inmune que si el Ag esta
adecuadamente seleccionado, sera una rta
sastifactoria.
El otro tipo de
vacunass genicas es el
que emplea ácidos
ribonucleicos, es decir
ARNm, entre las
cuales se diferencian
dos tipos.
Por un lado, las no
amplificantes que
consisten unicamente
en una estructura
genica similar a un
RNAm, es decir, un
RNA que contiene en
el extremo 5’ una
estructura con cap, en
el 3’ una cola polyA,
tienen eltos
regulatorios que no se
traducen en 5’ y 3’
terminales que son
eltos regulatorios, y el
gen del Ag que se
desea expresar. 
Este tipo de RNAm no
amplificante se
diferencia del RNAm
autoamplificante o
replicos, en este caso a la estructura tipica del RNAm eucariota, se le suma los genes correspondientes a las proteínas
no estructurales de un alfa-virus, que se van a coexpresar junto con el gen correspondiente al Ag protectivo, la
expresion de estos genes dan origen a una RNA polimeraza RNA dependiente que va a replicar este RNA, de tal
manera que ademas de expresar el Ag, este RNAm se va a amplificar amplificando a su vez la expresion del Ag y por
lo tanto en principio generando una rta inmune, o induciendo la expresion de una rta inmune mas robsta y duradera.
La estructura de este RNAm autoreplicante deriva de la estructura del genoma de un alfa-virus, es decir, es la
estructura del genoma de un alfa-virus que ees un RNAsc + que carece de los genes que codifican para las proteínas
estructurales de este alfa-virus.
Las vacunas que se ensayan actualmente, (covid), la vacuna para prevencion del covid 19 son del modelo no
amplifficantes. Estas vacunas RNA autoamplificantesdeben atravesar aun algunas etapas de evaluacion de la
seguridad de su uso, sobre todo en relacion a la capacidad de recombinarse en las células del hospedero y de
integrarse eventualmente en caso de ser retrotranscripstas por ejemplo, de recombinarse con el genoma de la cel
huesped. Este RNA ya sea para las vacunas no amplificantes o para las pseudoamplificantes se encapsulan en una
nanoparticula generalmente de naturaleza lipidica, una especie de liposoma y con este se inocula al hospedero, la
idea es que la nano particula conteniendo el RNAm llegue y se introdusca en la cel dendritica (CPPA) y sea conducida
a los gaanglios linfáticos, y se exprese la información contenida en esos RNA m se exprese y sea capaz de inducir una
rta humoral por un lado y una rta celular por otro, que como ya sabemos, estas dos rtas se integran entre si y si el niel
de inducion de inmunidad es adecuado, en conjunto daran origen a una rta protectiva de memoria.
https://www.youtube.com/watch?v=D1_dFQiEW9w&feature=youtu.be 17:22
En ninguna de estas vacunas que comentamos hasa el
momento habia virus activos, son todas vacunas generadas a
partir de virus inactivados o de proteínas recombinantes o de
peptidos, o de eltos genicos como DNA o RNAm. Las vacunas
existentes hasta el momento que no poseen virus activos en
su formulacion, son las vacunas inactivadas para la polio tipo
salk. La vacuna contra el virus de la rabia, la mayoría de las
vacunas para prevenir la gripe, la vacuna contra la hep A.
estas 4 son vacunas a virus inactivados, y la vacuna contra la
hep B y para la prevencion del cancer de cuello uterino
asociadas a la infeccion con el papiloma, son vacunas VLP?.
El segundo gran grupo de vacunas son las
vigentes actualmente , que son a virus
atenuado. Un virus atenuado es aque que
conservando su cap de replicarse a perdido
total o parcialmente su virulencia en el
hospedero. Los virus atenuados existen en
la naturaleza, uno si busca para cada virus
qe circula en la naturaleza va a encontrar
cepas atenuadas en la amplia diversidad
que existe en la naturaleza, se van a
encontrar un espectro de virulencia que va
desde aquellos altamente virulentos a los
atenuados. Osea la naturaleza es una fuente
de virus atenuados. Aunque se han
desarrollado procedimientos para obtener
virus atenuados mediante métodos
artificiales o acelerados, por ejemplo mediante el pasaje seriado en un hospedero animal no habitual para
el virus que sea, o a través del pasaje seriado en cultivos de células animales. 
https://www.youtube.com/watch?v=D1_dFQiEW9w&feature=youtu.be
Un pasaje seriado consiste en inocular un cultivo celular con un virus, esperar que replique, cosechar el
prod de esa repli y con esa primera cosecha volver a infectar a otro cultivo; y as sucecivamente durante la
cantidad de pasajes necesarios, decenas o centenas; hasta que se genere una progenie de virus con
caracteristicas atenuadas. Esto ocurre porque se van produciendo modificaciones del genoma viral que
conduce a la generacion, selección y expancion de una progenie viral que presenta caracteristicas
diferentes al virus original; en este caso la caracteristica que nos interesa es obtener una progenie viral con
una virulencia reducida.
También es posible utilizar como fuente de virus atenuado: virus relacionado que infectan a otros
hospederos de la naturaleza, por ejemplo para la prevenvion de la fiebre hemorragica arg, cuyo agte
etiologico es el virus junin que circula de manera persistente en ratones de la zona central de la arg
incluyendo el sur de stafe. Se propuso en algún momento la utilizacion de un virus de la misma flia que
circula en roedores, pero que no infecta naturalmente a sres humanos, el virus tata nll como un posible
agte vacunal para la prevencion de la fiebre hemorragica arg.tambien se pueden utilizar virus
antigenicamente relacionados, osea que infectan elmismo hospedero pero que son menos virulentos y que
son capaces de inducir una rta protectiva contra el virus patogeno.una estrategia posible pero mas riesgosa
es la inoculacion de un virus no atenuado, pero en sitios corporales especifico en el que este virua, cuando
es inoculado en esa via sea capas de inducir una rta pero no sea capas de diseminarse y producir una
patologia; obviamente que antes de utilizar esta estrategia hay que estar seguros de que ese virus no va a
acceder a aquellas localizaciones en el org en donde va a ejercer su efecto patogenico.
La fuente mas racional de virus atenuados es la atenuacion molecular que tiene como prerequisito la
identificacion de los genes responsables de la virulencia, es decir, el fundamento de la atenuacion
molecular es inducir la formación de mutaciones en aquellos genes responsables de la virulencia de un
determinado virus, y inducir mutaciones capaces de conferirle la condicion de atenuado a un virus que sin
esa mutacion o combinacion de mutaciones seria virulento. Recordar que siempre que uno introduce una
mutacion, existe la posibilidad de que esta mutacion se revierta, si este virus atenuado se replica en el
hospedero vacunado, es posible que durante esa repli se genere una mutacion que revierta esa mutacion
original y por lo tanto revierta también el fenotipo de atenuado a virulento.
Las ventajas de la utilizacion de vacunas
atenuada. 
La primera es que la rta que se genera
frente a la inoculacion de un virus atenuado
se parece mucho a la rta que se genera
frente al ingreso al organismo del agte
patogeno, y por lo tanto se genera una rta
sobre dttos antígenos estructurales y no.
como el virus se replica se va a generar una
rta humoral y una celular sistemiaca en
mucosa scon un balance que se parece
mucho a la rta natural y que por lo tanto
tiene mayor probabilidad de alcanzar un
nivel de eficiencia requerido para que esa
rta sea protectiva. Por lo tanto estas
vacunas son efectvas, generan una
inmunidad de larga duracion, y en gral el costo de produccion es menor que las vacunas inactivadas porque,
para las inactivadas, los costos de inactivacion y control de la inactivacion son altisimos y son costos que en
el caso de las vacunas atenuadas no existen y disminuyen el costo total de produccion.
Por otro lado, estas vacunas atenuadas, si completan un ciclo en el hospedo vacunado, tendran la
posibilidad de salir al ambiente externo y disminarse mediante el contacto, amplificando la accion vacunal
entre individuos que no han sido previamente vacunados, esto por un lado es una ventaja que ayidaria a
establecer la inmunidad de rebaño, pero por otro es riesgoso, y ese riesgo se ha concretado, porque entre
esos contactos puede haber individuo que no sean inmunologicamente eficientes, (inmunodeficientes) y
que ante la infeccion con una cepa atenuada respondan por su condicion de inmunodeprimido como si se
tratan de la infeccion con una cepa virulenta, entonces en esas personas se va a producir lo que se conoce
como una enfermedad de origen vacunal, esto se ha dado de manera repetida con las vacunas atenuadas
contra la poliomelitis. Y esa es la razon por la cual la vacunas atenuadas que fueron muy importantes en el
control inicial de los brotes de polio, en la actualidad que estamos en la etapa de erradicacion de la polio,
esas vacunas estan siendo dejadas de lado, reemplazadas por vacunas inactivadas.
Asi que la diseminacion entre contactos puede ser una ventaja, pero también una potenial limitacion.
Entre las limitaciones debemos mencionar que tanto las vacunas inactivadas y atenuadas pueden contener
agtes infecciosos adventicios, un agte adventicio es aquel que esta presente sin que se tenga conocimiento
de su presencia, es decir es un agte infeccioso desconocido, o que cuya presencia en la vacuna no es
conocida. Estos agtes adventicis pueden provenir de los sustratos celulares, dondese producen estas
vacunas, por ejemplo, los primeros lotes de vacunas antipolio se producian en cultivos de riñon de mono
verde africano, estas células venian infectadas de manera persistente con un virus siniano SD40 y ese virus
SD40 paso a los lotes vacunales y aquellos chicos que fueron vacunados contra la polio con esos lotes,
ademas fueron infectados con este virus simiano. También el origen de estos agtes infecciosos adventicios
pueden estar en las materia primas que se utilizan durante la produccion de las vacunas, por ejemplo el
suer fetal bobino que es un suplemento utilizado para promover el crecimiento de las cel animales en los
cultivos, puede ser una fuente de agtes infecciosos adventicios.
Las patologias vacunales pueden ser por reversion de la mutacion o en aquellos casos en donde los ptes no
son inmunologicamente competentes, y lo que para la mayor parte de los receptores de la vacuna va a
transcurrir como un virus atenuado, en ptes inmunocomprometidos, esto se puede transformar en un
problema, por lo que las vacunas a virus atenuados no se pueden aplicar a ptes no inmunocompetentes.
Otro problema son los transportes, almacenamiento y uso de estas vacunas porque hay que manter viable
mediante cadena de frio al virus atenuado. 
 
Es otro tipo de vacunas que usan virus con
capacidad de replicacion. Utiliza los virus
como vectores, por un lado tenemos al virus
contra el cual uno desea generar una rta
inmune protectiva, en ese virus se identifica
cual o cuales son los Ag protectivos, se
identifican los genes que codifican a esos AG
protectivos, se aislan, se clonan y se van a
subclonar en el genoma de otro virus, el
vector viral. Este vector viral es un virus cuyo
genoma ha sido modificado para hacerlo no
virulento, hacerlo atenuado y que admite la
integracion a su genoma de uno o mas
genes que codifiquen para aquellos Ag
contra los cuales se desea generar una rta inmune protectiva. Uno de los virus mas utilizado para este
proposito es el axina, es de la flia postviridae, de la misma flia del viruela, de echo esta relacionado con el
virus de la viruela bobina, no se sabe el origen del virus vaxinia; pero este puede ser manipulado invitro
comodamente y ppor ser un genomas de gran tamaño, admite la introduccion de varis genes al mismo
tiempo y da la posibilidad de generar agtes vacunales con la posibilidad de expresar al mismo tiempo varios
AG.
Las ventajas de este tipo de vectores virales replicativos, es que como se replica en el hospedero vacunado
va a generar como producto de la repli una rta inmune magnificada contra el virus vacunal y contra los Ag
recombinantes que se han clonado y expresado en el genoma del virus vector. De esa manera en el
individuo vacunado se genera una rta que puede tener un balance parecido al de una rta naturla y por lo
tanto tiene una alta probabilidad de ser una rta protectiva.
Como ventaja este tipo de vector ofrese la posibilidad de exprecion antigénica magnificada y sostenida en
el tiempo dando una muy buena inmunogenecidad y también la posibilidad de expresar y generar una rta
protectiva contra varios Ag.
A pesar de que hay vacunas basadas en este sistema, en el ambito veterinario que ya estan en uso en
europa y ee uu y en canada, aun se plantean problemas de seguridad. La vacuna que esta en uso basada en
el uso de vectores virales replicativos es una antirabica que se utilizza para la inmuniacion de hospederos
silvestre; lo que se hace es inocular con este virus recombinante replicativo trozos de carne que se
abandonan como cebo en los bosques donde existen especies silvestres suceptiblees a la rabia por ejemplo
zorros, lobos; de tal manera que al comer la carne inoculada con el vector vacunal, estos animales se
infectan con el vector, repliquen este vector, expresen el Ag de la lipoprot de la env del virus de la rabia y se
indusca una rta inmunogenica protectiva que ejerza un efecto protector ene estos animale sislvstres, pero
obviamente, para su utilizacion en humanos hasta el momento no hay ninguna vacuna aprobada vasada en
este tipo de soporte viral.
 
En esta diapo se
esquematiza como es el
procedimiento para la
genercacion de una
vacuna recombinante
basada en el uso del
virus vaxinia para el
herpes simplex como
modelo.
A la izq arriba hay un
virion de herpes
simplex, se extrae el
gen para una glicoprot
de la envoltura del virus
del herpes simplex, este
gen se inserta en el
genoma de vaxinia, y se
obtiene un genoma
recombinante que
carece de algún gen de
vaxinia y en el cual s ha
incorporado el gen de la lipoproteina del herpes. Y a partir de un procedimiento de transfeccion, se
transfectan células suceptibles a vaxinia con este genoma de vaxinia recombinante, y se vana generar en
eseproceso de trasfeccion una progenie de virus vaxinia recombinante que expresa insitu el gen qu codifica
para la glico proteina de la envoltura de herpes simples responsable de inducir en el hospedero vacunado
una rta inmunoprotectiva.
En este caso, los vectores virales han
perdido su cap de replicar y en este caso el
vector oficia solamente como un carrier,
como un transportador para el gen que se
desea expresar insitu para producir uno o
mas Ag que sera los responsables de inducir
la rta inmune protectiva. El ejemplo mas
vigente en la actualidad es la utilizacion de
partiulas de adenovirus de chimpances para
la generacion de este tipo de vacunas.
Las ventajas de las vacunas basadas en
vectores no replicativos, son la calidad del
Ag como en todos los sistemas en los cuales
el Ag se expresa insitu en el propio
hospedero vacunado, las modificaciones
ppost transcripcionales y postraduccionales
que sufren las prot antigenicas vana tener la misma calidad que las del Ag producido en una infeccion
natural. Ademas, ese Ag va a ser presentado a través de las vias de presentacion que son utilizadas también
en una infeccion natural, y por lo tanto, la probabilidad de inducir una rta con un balance similar al de la rta
natural por lo menos frente a eseAg en una infeccion natural, son elevadas. Ademas, existe la posibilidad de
clonar y expresar varios Ag al mismo tiempo, y lo mas importante es que este tipo de sistema se puede
utilizar como plataforma polivalente, es decir, uno puede tener armado el esqueleto de este vector no
replicativo y en el momento que sea necesario insertarle el gen para el Ag que resulte encesario expresar y
asi generar una vacuna rapidamente cuando la emergencia lo exija.
En comparación con los vectores virales replicativos, la expresion es menos stenida y por lo tanto la
expresion del Ag y la magnitud de la rta inmune generada son menos vigorosas, y esto es posible que se
termine traduciendo en una inmunidad de menor duracion y en la necesidad de otras dosis o refuersos.
Aca esta esquematizado el procedimeinto
para generar un adenovirus recombinante no
replicativo con el potencial de ser utilizado
como un agente vacunal, entonces, hay un
plasmido convencional en el cual unoo tiene
la posibilidad de insertar el gen que codifica
para el Ag protectivo, que uno esta interezado
expresar en el huesped vacunado para
generar una rta protectiva.
Este plasmido recombinante se va a recombinar a su ve con un genoma de adenovirus que ha sido
modificado, se ha extraido una fracccion genica lo que hace que este adeno virus sea impposibilitado de
replicar en una célula, exepto que la célula le provea en trans aquella fraccion genica de la cual este
genoma ha sido privado en el caso de la mayoría de los vectores adenovirales, se elimina el gen E1 total o
parcialmente. Entonces cuando se recombina el plamido recombinane con el genoma del adenovirus
plasmidico, se va a obtener un plasmido de adenovirus molecular recombinante que contiene el gen que
deseo expresar invivo. Este vector plasmidicose puede amplificaren bacterias y luego se linealiza, se corta
con una enzima de restriccion en un sitio, se linealiza y se transfecta en una linea celular especial, que en
este caso es la linea celular 293 que expresa el producto que codifica el gen E1 de adenovirus, de tal
manera que en la cel 293 el adenovirus se va a replicar porque en esa cel se expresa E1, si infectamos otra
linea cel que no sea 293 con este mismo plasmido linealizado, no vamos a optener una progenie de
adenovirus. De tal manera que vamos a tener una progenie de adenovirus que es una progenie vector,
porque en el genoma de ese adenovirus vector esta inserto el gen que codifica al Ag que deseo expresar
invivo. Entonces estos vectores que contienen el gen correspondiente al Ag se van a utilizar para infectar al
hospedero que uno desea vacunar. De lo que se va a encargar la particula de adenovirus es introducir en la
cel blanco del hospedero es el genoma de adenovirus recombinante que tiene el gen que codifica al Ag que
deseo expresar.
De tal manera, que
ese gen va a llegar
al nucleo de la cel
infectada con el
vector
recombinante, alli
ese gen se va
aexpresar, se va
asinetizar el Ag
recombinante, ese
Ag va a sufrir las
transformaciones
propias que una
célula efectua
sobre cualquier Ag
generado in situ, y
lo va a expresar en
su membrana de
tal manera de
inducir una rta de
tipo citotoxica, ese
Ag eventualmente
se va a secretar, va a ser procesado por CPA que vana inducir una rta humoral de tal manera que en este
tipo de sistema vamos a terminar generando una rta celular y humoral con un balance bastante parecido al
que se genera en una rpta frente a una infeccion natural con el virus patogenico.
La sabin, que es la vacuna contra la polio, esta siendo reemplazada por las
vacunac inactivadas en el contexto de la erradicacion de polio.
La triple viral que contiene inmunogeno de paperas, sarampio y rubeola es una
vacuna a virus atenuado.
La vacuna contra la varicela. Las contra rotacirus y la contra la fiebre amarilla,
son todas vacunas atenuadas que contienen virus activos lpm yo me vacune.
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en esta diapocitiva podemos ver las dttas alternatvas en estudio para la generacion de vacunas contra el
sars-cov-2. Arriba a la izq tenemos vacunas atenuadas, abajo en negro vacunas inactivaadas. Vacunas a
DNA, vacunas a RNAm; vacunas con vectores virales replicativos; vacunas con vectores virales no
replicativos; vacunas a VLP y vacunas a sub unidades. Practicamente todo el espectro de vacunas que vimos
en esta clase estan en linea de desarrollo para la prod de vacunas que protejan contra sars-cov-2. Y para
cada tipo de vacunas hay varios proyectos en evaluacion. El objetivo de todas estas vacunas es llegar al
punto de generar una rta de memoria capaz de proteger a los individuos vacunados contra las formas
severas de la infeccion por sarscov-2 almenos.