Práctica 4 - Padilla

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División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Departamento de Ciencias de la Salud
Campus Cajeme
Licenciatura en Medicina
“Práctica 4 – Tinción de Romanowsky”
Materia: Fisiología Celular Laboratorio
Maestra: Blanca Areli Mondaca Navarro
Alumno: Diego Joel Padilla Benítez
Grupo 1
21 de Septiembre de 2020
Práctica 4 -Tinción de Romanowsky
Objetivo: Observar e identificar de los distintos componentes sanguíneos por pulsión capilar.
Introducción
La célula es la unidad básica de la vida, en los organismos complejos las células están constituidas por el núcleo que contiene la información que determina la función de la célula a través del ADN, en el interior del núcleo se pueden observar unas zonas de forma redondeada conocidas como nucléolos, relacionadas con la formación de la maquinaria necesaria para producir las proteínas, el núcleo se separa del resto de la célula por una membrana doble, rodeando la membrana nuclear se encuentra el citoplasma, separado del exterior por la membrana celular, en la sangre se pueden encontrar leucocitos, granulocitos, células madre y plaquetas. (Mandly)
Los colorantes de Romanowsky (Wright, Giemsa, May Grünwald) son mezclas de dos colorantes primarios, el azul de metileno y la eosina, el azul de metileno (color azul), es un colorante básico, en las células se une a los componentes ácidos que se tiñen de color azul (basófilos), para fines prácticos el único ácido que se encuentra en suficiente cantidad para ser identificado por medio de la tinción, es el ácido ribonucleico ribosomal, el ácido desoxirribonucleico, también abundante, tiene otras características de tinción, la eosina (color naranja) es un colorante ácido; en las células se une a la base que se observa de dicho color (eosinófilas), dos ejemplos muy claros de sustancias básicas son la hemoglobina y la proteína básica de los eosinófilos. (González, 2007)
Materiales y Reactivos
	Reactivos
	cantidad
	Material
	cantidad
	Equipo
	cantidad
	Agua destilada
	500 mL
	Piseta	con agua destilada
	1 por equipo
	Microscopio óptico
	1 por equipo
	colorante de Wright
	20 mL
	porta objetos
	4 por equipo
	Puente	de tinción
	1	por
equipo
	Metanol
	50 ml
	cubre objetos
	4 por equipo
	Lancetas para punción
capilar
	4	por
equipo
	Colorante Giemnsa
	20 ml
	Guantes	de latex
	1 par por persona
	
	
	Solución amortigadora tamponada pH	7.2
(buffer	de Wright)
	200ml
	Jabón	para lavar material
	1 por equipo
	
	
	
	
	Trapo de tela para limpiar área de
trabajo
	1 por equipo
	
	
 NOTA: LOS QUE ESTA EN LETRAS ROJAS ES LO QUE NECESITARÁN CADA EQUIPO PARA LA REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA DICHOS MATERIALES NO LO PROPORCIONA LA UNIVERSIDAD POR ESTA RAZÓN ORGANICENSE POR EQUIPO POR FAVOR.
Diagrama de Flujo
Resultados
Tinción Giemnsa
Tinción Wright
Discusión de Resultados
Hay 3 tipos principales de células sanguíneas que transitan por el plasma, estos son glóbulos blancos, glóbulos rojos y plaquetas. (Texas Heart Institute) Una de las técnicas más usadas, por su sencillez, bajo costo y eficacia es la tinción Giemsa, en la imagen de arriba, podemos apreciar como esta tinción diferencia el núcleo y el citoplasma celular, en las células sanguíneas, puesto que el ADN queda teñido de un fuerte color azul. Esta tinción se emplea en organismos sin pared celular y eucariotas con núcleo, la capacidad de penetración de esta tinción permite la observación de cortes entre 3 y 6 micras. La eosina es un tinte ácido, y por esta razón unirá estructuras básicas como el citoplasma o los eritrocitos, por otra parte, el azul de metileno tiene un pH básico y unirá estructuras y moléculas ácidas, como el ADN, por lo que teñirá de azul o purpura los núcleos. (Contreras, 2005). En cuanto a la imagen de la tinción Wright podemos observar cómo se diferencian los tipos de células sanguíneas, los componentes que se tiñen con el colorante básico son los basófilos, y los que se tiñen con el colorante ácido son eosinófilos, en la imagen se ve como hay una célula que está teñida por los dos colorantes, esta es un neutrófilo. (Togasi)
Conclusiones
El frotis se realiza con la finalidad de separar los microorganismos, ya que, si tratamos de observar a través del microscopio una gota de sangre, resultará difícil identificar los tipos de células que hay, pues estas estarán agrupadas, y con esta técnica se evita esto y se pueden obtener imágenes claras de los glóbulos rojos, glóbulos blancos, plaquetas y así poder observar si hay alguna anormalidad en su aspecto. La tinción Wright es muy utilizada en los laboratorios para diferenciar los distintos tipos de células que se encuentran en la sangre, principalmente se usa para teñir células bacterianas, aunque también puede utilizarse para teñir células humanas, por su parte la tinción Giemnsa, al ser una solución con un colorante ácido eosina, y dos básicos azur y azul de metileno, teñirá las estructuras celulares dependiendo de su acidez o alcalinidad, esta tinción se usa para frotis de sangre, muestras de orina y médula ósea mayormente.
Cuestionario
1.- Indique cuáles son los componentes del colorante de Wright y Giemsa
La tinción de Wright y de Giemsa son unas tinciones de tipo Romanowsky. Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidación, así como eosina Y o eosina B.
2.- ¿Qué soluciones pueden utilizarse como amortiguador para la tinción de Wright y cuál es el pH que deben tener?
Hidrofosfato disódico (Na2HPO4 2H20) y fosfato de potasio dihidrogenado (KH2PO4) con un pH de 7,2
3.- ¿Qué sucede cuando se evapora el colorante?
La muestra no estará teñida de manera correcta, por lo cual se deberá agregar una solución amortiguadora para evitar la coloración débil.
4.- Define los componentes sanguíneos
Plasma: Se trata del componente líquido de la sangre en el que están suspendidas las siguientes células sanguíneas:
Glóbulos rojos (eritrocitos): Transportan oxígeno desde los pulmones al resto del cuerpo.
Glóbulos blancos (leucocitos): Contribuyen a combatir infecciones y asisten al proceso inmunológico. Los tipos de glóbulos blancos incluyen: Linfocitos, monocitos, eosinófilos, basófilos, neutrófilos.
Plaquetas (trombocitos): Colaboran en la coagulación sanguínea.
Referencias
Contreras, R. (Octubre de 2005). Tinción Giemnsa. Obtenido de La guía: https://biologia.laguia2000.com/tecnicas-en-biologia/tincion-giemsa
González, S. G. (Marzo de 2007). Manual de Prácticas de Laboratorio. Obtenido de Benemérita Universidad Autónoma de Puebla: http://www.facultadcienciasquimicas.buap.mx/ligas/acredita/QFB/data/4_2%20Curriculum/4.2.10%20%20Actas%20de%20%C3%A1reas%20Programas%20de%20asig%20y%20Manuales%20Lab/Manuales%20de%20Laboratorio/An%C3%A1lisisCl%C3%ADnicosLab-pdf/LABORATORIO%20DE%20HEMATOLO
Mandly, E. A. (s.f.). Técnicas de Análisis Hematológico. Obtenido de Grupo Aran: https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=&ved=2ahUKEwib9IPo7PvrAhVVJjQIHaeIA384ChAWMAB6BAgEEAE&url=https%3A%2F%2Fediciones.grupoaran.com%2Findex.php%3Fcontroller%3Dattachment%26id_attachment%3D82&usg=AOvVaw37aGwC-ENq_ccsDsmb5Eqf
Texas Heart Institute. (s.f.). La Sangre. Obtenido de Texas Heart Institute: https://www.texasheart.org/heart-health/heart-information-center/topics/la-sangre/
Togasi, A. M. (s.f.). Introducción al Análisis Clínico. Obtenido de Escuela Nacional Preparatoria UNAM: http://www.ete.enp.unam.mx/IntroAnaCl.pdf
Bitácora