Obtenção de Enzima Papayotina

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Universidad nacional de Formosa
Facultad de ciencias de la salud
Licenciatura en bromatología
Química biológica
Año 2016
Profesor: GOROSTEGUI, Horacio
Alumno: DELGADILLO, Alberto
Laboratorio de química biológica
Trabajo practico Nº5: Enzimas 
Objetivo
El siguiente trabajo consiste en obtener la papayotina o papaína, enzima proveniente del fruto conocido como mamon, dicho fruto debe estar desarrollado pero no maduro. La enzima se obtendrá siguiendo unos pasos determinados en el laboratorio que se explicaran más adelante. 
Son catalizadores biológicos.
Se dividen en 6 clases según su reacción catalizada, se las distingue por un código correspondiente a su subclase.
Aceleran una reacción química sin formar parte de los productos.
Disminuyen la Ea.
 OXIDORREDUCTASAS
ENZIMASCatalizan reacciones de óxido-reducción asociadas a coenzimas cuando S es donante de H+
Actúan sobre los sustratos (S).
Se les asigna el sufijo “asa”, o según el tipo de reacción catalizada: deshidrogenasa. 
Catalizan la transferencia de un grupo de atamos.
TRANSFERASAS
Hay oligomeros: enzimas formadas por asociación de varias subunidades
HIDROLASAS
Catalizan ruptura de enlaces por hidrolisis.
	HALOENZIMAS = APOENZIMA + COENZIMA 
Jugos digestivos, procesos de coagulación.
Son extracelulares
Catalizan la unión de 2 moléculas acopladas.
PROPIEDADES
E+S ↔ ES E+P
Para formar “ES” S se fija en un lugar definido: SITIO ACTIVO
A > num de moleculas > vel.de transformación química. 
Enzima total 
Proteína macromolécula termolábil
No proteica termoestable tamaño pequeño 
LIGASAS
Interconvierten isómeros de cualquier tipo
ISOMERASAS
LIASAS
Catalizan ruptura de enlaces, distintos al de hidrolisis.
Ph. 
Temperatura. 
Concentración del sustrato. 
Son intracelulares 
Inhibidores anticompetitivos. 
Inhibidores no competitivos 
Inhibidores competitivos. 
Inhibidores irreversibles: producen cambios permanentes en la molécula. 
Inhibidores reversibles: a su vez se clasifican en: 
Inhibidores enzimáticos: inhiben la acción catalítica de las enzimas.
FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA. 
Concentración de enzimas.
MEMBRANA PLASMATICA: mecanismo de transporte.
CITOSOL: glucolisis. 
COMPLEJO DE G.: síntesis de oligosacáridos, glicolisacion. 
R.E. fracción microsoma: síntesis de lípidos, metabolismo. 
RIBOSOMAS: síntesis de proteínas. 
LISOSOMAS: función degradadora de moléculas.
MITOCONDRIAS: enzimas de reacciones oxidativas. 
NUCLEO: participan en la función genética. 
Procedimiento:
En la obtención de la enzima, se procedió como primer paso a recortar la película o placa de rayos x conseguida, en rectángulos de 4 x 6 cm aproximadamente. Con agua previamente calentada, se mojó la parte superior de la placa recortada, y se eliminó el recubrimiento de este raspándolo con un bisturí. Luego se trazaron con lápiz círculos de aproximadamente 1 cm de diámetro en la cara no alterada de la película, y se los titulo como c, c5, c10, c 20, c40. 
Para la obtención de la papaína se cortó el fruto por la mitad, y de manera manual se exprimió el jugo de ella en tubos de ensayos, y así poder obtener su látex. 
En uno de los tubos o tubo 1, se colocó 1 ml del látex y 4 ml de solución buffer o tampón de veronal. A partir de aquí se sigue unos pasos en series o repetitivos;
En un tubo 2, se colocó 1 ml del contenido del tubo 1 ml de la solución buffer. 1/10 
En un tubo 3, se adiciono al contenido del tubo 2 (1ml de este) 1 ml del líquido tampón. 1/20.
En el tubo 4, se colocó 1ml del contenido del tubo 3 más 1 ml de la solución buffer. 1/40.
En un tubo 5, a 1 ml del tubo 4 previamente agregado, se adiciono la solución tampón 1 ml. 1/80. 
Para finalizar el procedimiento, se procedió a colocar en una cámara hermética, y se lo llevo a encubar durante 15 minutos a una temperatura de 37º, la papaína despliega su capacidad digestiva óptima a esta temperatura. 
Conclusión
El respectivo procedimiento detallado no dio resultados positivos con respecto a la determinación de la enzima, si bien pequeños obstáculos fueron resuelto de manera rápida, se puede llegar a la conclusión de que en esta técnica la disolución veronal que ya había estado preparada, no haya estado en condiciones óptimas para su utilización. Otro factor es la placa de rayos x, el gel que debía estar presente en ella pudo haberse deteriorado por el tiempo que transcurrió desde su primera utilización o también haberse acabado.