06_-_Limpieza_Desinfeccion_y_Antisepsia _Teoria_2014

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ESTRATEGIAS Y APLICACIONESESTRATEGIAS Y APLICACIONES
LIMPIEZA, DESINFECCIÓN Y ANTISEPSIA
EN EL LABORATORIO
Seguridad en Laboratorio- Módulo II
Cátedra de Microbiología General
Facultad de bioquímica y ciencias biológicas
Universidad nacional del litoral
-2014-
Objetivos
• Comparar los diferentes procedimientos aplicados para el
control del crecimiento microbiano , desde el punto de
vista de su eficacia.
• Identificar los factores que condicionan la acción de los
agentes antimicrobianos químicos.
• Conocer las propiedades de un desinfectante químico
ideal.
• Conocer los principales grupos de ATM químicos según
su estructura química y su mecanismo de acción.
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PRINCIPALES RAZONES
�Evitar la contaminación.
�Evitar la descomposición de los alimentos
�Prevenir la transmisión de enfermedades 
infecciosas.
El Bienestar del hombre depende en gran medida 
del control de las poblaciones microbianas
OBJETOS ANIMADOS
OBJETOS INANIMADOS
CONTROL DE LAS POBLACIONES MICROBIANAS
AGENTE ANTIMICROBIANO
Físico Químico
Pueden actuar inhibiendo o destruyendo a los 
microorganismos
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PREFIJOS Y SUFIJOS
Nos orientan sobre el tipo de microorganismo y la 
acción sobre ellos:
Bacterio stático /Bacteri cida
Fungi stático /Fungi cida
Viru stático /Viru cida
Espori cida
Germi stático /Germi cida
TIPOS DE PROCEDIMIENTOS
DESINFECCIÓN
ESTERILIZACIÓN
LIMPIEZA
ANTISEPSIA
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DESCONTAMINACIÓN
Ministerio de Salud de España 1997 - Miller et al., 2000; Mandell, 2002
“Procedimiento físico o químico que transforma un
objeto potencialmente contaminado en SEGURO”
Según niveles de seguridad 
microbiológica
OBJETO 
CONTAMINADO
OBJETO 
SANITIZADO
OBJETO 
DESINFECTADO
OBJETO 
ESTERILIZADO
LIMPIEZA
DESINFECCIÓN
ESTERILIZACIÓN
LIMPIEZA
� Extraer y/o eliminar restos de materia
orgánica e inorgánica.
� Reducir el número de microorganismos
presentes en los objetos.
� Favorecer procesos posteriores de mayor
seguridad microbiológica
Ministerio de Salud de España 1997; Dominguez et al 2002; Mandell et. al 2002
“Ausencia de suciedad ”
Propósitos
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TIPOS DE LIMPIEZA
� Recipientes que 
permitan la inmersión
� Cepillos
� Escurridores
MECÁNICA
� Máquinas lavadoras 
� Material ingresa abierto 
� Preenjuague - Lavado -
Enjuague 
MANUAL
AGENTES DE LIMPIEZA 
AGENTES TENSOACTIVOS
- detergentes de amonio cuaternario
- detergentes aniónicos
- detergentes anfóteros
SOLUCIONES ENZIMÁTICAS
- enzimas proteolíticas
- enzimas lipolíticas
- enzimas amilolíticas
• pH neutro
• Biodegradable
• Fácilmente enjuagable
• No tóxico
• Líquido
• Rápido desprendimiento de la materia orgánica 
Principales 
características
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DESINFECCIÓN
“ Destrucción de los microorganismos patógenos y no
patógenos pero no de las formas resistentes de éstos
que se encuentren en objetos o superficies inanimadas ”
INTERACCIONES Y RELACIONES
Reservorio
Inanimado
Desinfectante
Microorganismo
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Priones
Esporos bacterianos
Micobacterias
Quistes
Virus pequeños no envueltos
Trofozoitos
Bacterias Gram negativo 
Hongos
Virus grandes no envueltos
Bacterias Gram positivo
Virus con envoltura lipídica
Resistencia 
decreciente
Resistencia de los microorganismos a los 
desinfectantes
NIVELES DE DESINFECCIÓN
(según la actividad letal sobre los microorganismos )
� Desinfección de BAJO NIVEL (DBN)
Bacterias no esporuladas
Hongos
Virus con envoltura
� Desinfección de NIVEL INTERMEDIO (DNI)
Mycobacterium tuberculosis
Algunas esporas
Virus pequeños sin envoltura
� Desinfección de ALTO NIVEL (DAN) 
Todos los mo. excepto alto Nº de esporas bacterianas
Ministerio de Salud de España 1997, Dominguez et al 2002
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ALGUNOS DESINFECTANTES
• Glutaraldehído (ALTO NIVEL)
Alquilación y desnaturalización de proteínas.
No corroe metales ni afecta plásticos.
DAN 20-90´
Esterilizante 6-10 h
Conc. 2% (pH: 7,5-8,5)
Es tóxico y tiene un alto costo.
Fundamentalmente se emplea en hospitales para tratar instrumental 
clínico.
•Formaldehído (NIVEL ALTO O INTERMEDIO)
Destrucción de pared celular, inactivación de enzimas esenciales y 
precipitación de proteínas.
DAN: cuando se combina con alcohol 70% (8%).
DNI: cuando se usa al 4%.
Aplicación hospitalaria.
ALGUNOS DESINFECTANTES
• Acido peracético (ALTO NIVEL)
Oxidante fuerte.
Germicida rápido de amplio espectro.
Eficaz en presencia de materia orgánica y a bajas temperaturas.
Sus subproductos no son nocivos.
Se usa combinado al peróxido de hidrógeno.
• Peróxido de hidrógeno (ALTO NIVEL)
Oxidante fuerte.
Se utiliza en superficies y equipamiento médico.
Es necesario enjuagar bien el equipamiento luego de emplearlo puro 
antes de emplearlo en pacientes.
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ALGUNOS DESINFECTANTES
• Detergentes catiónicos en alcohol (derivados de amonio 
cuaternario) (BAJO NIVEL)
Lesión membrana celular, desnaturalización de proteínas y activación 
enzimática.
Para limpieza de superficies.
Inactivación por materia orgánica, jabón y aguas duras.
• Derivados fenólicos (INTERMEDIO A BAJO NIVEL)
Destrucción de pared celular, inactivación de enzimas esenciales y 
precipitación de proteínas.
Para desinfección de superficies ambientales y dispositivos NO críticos.
Se mantiene activo en presencia de materia orgánica.
ALGUNOS DESINFECTANTES
• Alcoholes (Etanol-isopropanol) (NIVEL INTERMEDIO)
Desnaturalización de proteínas.
Acción rápida.
Se debe emplear al 70%.
Dañan algunos materiales como lentes ópticas y gomas.
• Compuestos clorados (Hipoclorito de sodio, dicloroisocianurato 
sódico, cloramidas) (NIVEL INTERMEDIO)
Agentes oxidantes poderosos.
Bajo costo, rápida acción y amplio espectro.
Inactivación en presencia de materia orgánica, altamente corrosivos e 
inestabilidad química.
La potencia microbicida de los compuestos de cloro se expresa 
como el cloro libre disponible en el compuesto
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HIPOCLORITO DE SODIO
(Lavandina)
Envasada a pH alcalino 
¿Cómo prepararla?
• Vc x Cc = Vd x Cd
• Conc. Lavandina comercial - 1 
Conc. A preparar
A tener en cuenta….
• Marca reconocida
• Concentración del rótulo.
• Fecha de envasado (˂ 3 meses).
Principio activos: ácido hipocloroso
Actividad óptima a pH Ácido
pero es Inestable
Precauciones 
Lavandina comercial (concentrada) Lavandina diluida (soluciones de 
trabajo) 
Mantener en su envase original 
Recipiente bien tapado 
Conservar en lugar fresco y oscuro 
NO conservar más de 24 horas 
NO utilizar agua caliente para prepararlas 
NO mezclar con detergentes 
 
Diluir con agua de red para bajar el pH
DILUCIONES Y APLICACIONES MÁS 
FRECUENTES
Condición de sucio Condición de limpio
Condición de 
limpio
Para cubrir áreas 
contaminadas antes 
de remover la masa 
del material.
Luego de remover la 
masa del material
Luego de remover 
la masa del 
material
Derrames
Grandes superficies
(paredes, pisos)
Instrumental
(áreas de trabajo: 
mesadas)
Cloro libre 
(requerido)
1,0 % (10 g/l) 0,1% (1 g/l) 0,5 % (5 g/l)
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RESUMIENDO….¿Donde establecería el punto de corte en función de 
los resultados que espera obtener según aplique un desinfectante de 
DAN, DNI o DBN?
ATM HONGOS
BACTERIAS
G + G -
VIRUS 
ENVUELTOS MICOBACTERIAS
VIRUS 
DESNUDOS
ESPORAS 
BACTERIANAS
C.FENOLICOS
0,5-5%
Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible Resistente
HALOGENOS
< 0,5 %
Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible Regular
ALCOHOLES 60-
90% Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible Resistente
FORMALDEHIDO 
20% Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible
GLUTARALDEHID
O,2% Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible
D. AMONIO 
CUATERNARIO Sensible Sensible Regular Sensible Resistente Resistente Resistente
YODÓFOROS
(yodopovidona 9-
12 %)
Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible Sensible Resistente
OMS 1993, Basualdo et al 1996, Mc Donnell 1999
DBN
DNI
DAN
FACTORES QUE CONDICIONAN LA ACCIÓN 
DE LOS ATM
Formulación
Concentración del producto
Tiempo de contacto
Temperatura
pH del medio
Naturaleza del solvente
Interferencia de otras sustancias(Mat. Org.)
Naturaleza y concentración de 
los mo. presentes
Localización de los mo. 
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PROFUNDICEMOS...
Si se cuenta con un ATM que reacciona con materia o rgánica:
A) 1ro. Desinfecto - 2do. Descontamino
B) 1ro Limpio - 2do. Desinfecto
C) Descontamino
D) Aplico DAN
Respecto a la SOLUBILIDAD DE UN DESINFECTANTE: ¿Por qué
creen que la acción de éste depende del medio en que se halla
disuelto?
Respecto al TIEMPO DE CONTACTO: ¿Se reduce o aumenta cuando
una superficie no ha sido limpiada? ¿Por qué?
PROPIEDADES DE UN DESINFECTANTE IDEAL
� Amplio espectro
� Germicida
� Acción rápida
� Penetrante
� Estable
� Activo a temperatura ambiente
� Soluble
� Eficaz en presencia de materia orgánica 
� Inodoro o desodorante
� Compatible con otros productos 
� Inocuo
� No corrosivo 
� Económico
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¿Qué tipo de desinfección es más 
conveniente desde el punto de vista de 
la seguridad del hombre y del 
ambiente?
� Desinfección química 
� Desinfección física
PARA PENSAR…
ESTERILIZACIÓN
“ Destrucción o separación de todos los 
microorganismos (incluido esporas bacterianas) que se 
encuentren en objetos o superficies inanimadas ”
Puede emplearse agentes químicos o físicos para 
lograr este objetivo.
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ANTISEPSIA
Agente antiséptico
Sustancia química que inhibe o destruye las formas 
vegetativas de los microorganismos presentes sobre un 
tejido vivo (piel o mucosas).
Ruzeva 2002, Negroni 1998, Panorama actual del medicamento 1988
“Procedimiento que involucra la prevención de la sep sis 
por inhibición o destrucción de los microorganismos 
que la originan ”
Hospedero
(defensas)
Antiséptico
Microorganismo
INTERACCIONES Y RELACIONES
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ALGUNOS ANTISÉPTICOS
• Biguanidas (gluconato de clorhexidina)
Disrupción de la pared celular y precipitación de las proteínas celulares. 
Amplio espectro de acción (más efectivo contra las bacterias gram (+), 
hongos) y es un buen viricida. 
No es inactivado por el material orgánico y suele ser menos irritante para 
la piel que los yodóforos.
Velocidad de acción intermedia a rápida.
• Compuestos yodados (tintura de yodo, yodóforos: 
yodopovidona).
Amplio espectro de actividad antimicrobiana.
Muy irritante, es absorbido por la piel.
Se inactiva por materia orgánica.
Velocidad de acción intermedia.
ALGUNOS ANTISÉPTICOS
• Compuestos fenólicos (P-clorometoxylenol, triclosán)
Provocan lesiones en la membrana citoplasmática.
Amplio espectro de acción.
Baja irritación.
Absorción por la piel.
Velocidad de acción intermedia.
• Alcoholes (etanol, isopropílico)
Desnaturalización de proteínas.
Amplio espectro. 
No deja residuos en las superficies.
Rápida acción.
Baja irritación, causa resecamiento de la piel.
Concentración efectiva: 70%.
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PROFUNDICEMOS...
Con respecto al tiempo de contacto:
En caso de antisepsia de la piel conviene: 
A. Acción lenta y sostenida 
B. Acción rápida e instantánea
En caso de heridas conviene:
A. Acción lenta y sostenida 
B. Acción rápida e instantánea
PARA PENSAR…
¿Qué diferencia existe entre la acción 
de un antiséptico y un desinfectante 
sobre los microorganismos?
¿ Por qué la diferencia? 
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PARA PENSAR… ¿Qué desinfectante compraría para 
su hogar?
� DESINFECTANTE A: limpiador diario-desinfectante
� Descripción del Rótulo: mata el 99.9% de virus, bacterias y hongos
� Uso: desinfectante para baño y cocina
� Composición: Cloruro de amonio cuaternario 0.22%, ing. Inertes c.s.p. 100%
� Efectividad: evita la generación de hongos y moho en superficies y mata el 99.9%
de gérmenes, bacterias y hongos como Salmonella typhi, Escherichia coli,
Morganella morganii, Staphylococcus aureus, Aspergillus niger
� DESINFECTANTE B: limpiador diario
� Descripción del Rótulo: elimina el 99.9% de virus, bacterias y hongos
� Uso:
1. Limpieza Diaria: 3 en 1 (dilución)
2. Limpieza Profunda: puro con esponja
3. Desinfección Total: puro y dejar actuar 10 minutos con la superficie a desinfectar
� Composición: Cloruro de benzalconio 0.16%, contiene tensoactivo no ióni co ,
solvente, colorantes y perfume
� Efectividad: virus (HS Tipo 1), Bacterias (Vibrio cholerae, Staphylococcus aureus
Salmonella sp., Escherichia coli), Hongos (Candida albicans, Aspergillus niger)
BIBLIOGRAFÍA
� Basualdo, J.A.; Coto, C.E.;De Torres, R.A. "Microbiología Biomédica" 2° ed. Atlante, Bs. As. 2006.
� Madigan,M.T. Martinko, J.M.;Parcker J. "Brock. Biología de los Microorganismos" 10° ed. Pearson 
Educación, Madrid. 2004.
� Mandell, Bennet, Dolin. “Enfermedades infecciosas” 5° ed. Ed. Panamericana. 2002.
� Mossel, D. A. A.; B. García Moreno. “Microbiología de los alimentos” 2° ed. Ed. Acribia. 2003. 
� Russell, A.D.; Hugo, W.B.; Ayliffe, G.A.J. editores. “Principles and Practice of Desinfection, 
Preservation and Sterilization”. 2° ed. Blackwell Scientific Publications, Oxford. 1992.
� Tortora, G.J.; Funke, B.R.; Case, C.L. “Introducción a la Microbiologia”. 9° ed. Médica Panamericana. 
Bs. As. 2007.