Identificación de Staphylococcus aureus en alimentos (1)

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Identificación de Staphylococcus aureus en alimentos
Nubis Menco – Hermes Vásquez
Docentes.
Objetivos
Conocer en fundamento de las técnicas utilizadas para el aislamiento de Staphylococcus aureus en alimentos.
Conocer la morfología de Staphylococcus aureus en medios de cultivo selectivos utilizados para la su identificación en muestras de alimentos.
Adquirir destreza en el procedimiento requerido para llevar a cabo la identificación Staphylococcus aureus en alimentos.
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COMPETENCIAS
Conocer la fundamentación de cada una de las técnicas utilizadas para el aislamiento de Staphylococcus aureus en alimentos
Conocer el procedimiento para cada una de las técnicas de las técnicas utilizadas para el aislamiento de Staphylococcus aureus en alimentos.
Reconocer la importancia del análisis microbiológico en los alimentos y su importancia en la prevención de intoxicaciones.
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Enfermedades transmitidas por alimentos
(ETAs)
Son aquellas originadas por el consumo de ciertos alimentos/agua que contienen microorganismos(bacterias, parásitos) o toxinas producidas por ellos.
Salmonella,Shiguella, Escherichia entre otros.
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Enfermedades transmitidas por alimentos
(ETAs)
INFECCIÓN
INTOXICACIÓN
TOXIINFECCIÓN
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Infección alimentaria
Es aquella causada por la ingestión de alimentos que poseen microorganismos vivos.
La manifestación de síntomas va desde horas a días.
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Intoxicación alimentaria
Son aquellas causadas por el consumo de alimentos que contienen toxinas producidas por ciertos microorganismos
La manifestación de los síntomas es corta ya que se presentan al poco tiempo de haber consumidos los alimentos.
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Toxico infección
Son aquellas causadas por el consumo de alimentos con microrganismos causantes de producir toxinas después de ser ingeridas.
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Intoxicación alimentaria por Staphylococcus aureus
Recordemos que los Staphylococcus aureus son cocos grampositivos anaerobios facultativos.
Se pueden encontrar en fosas nasales, boca y provocar abscesos en piel. (Por eso la importancia en alimentos)
Dentro los medios de cultivos para realizar estudios en alimentos encontramos el Baird Parker y Salado Manitol
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Intoxicación alimentaria por Staphylococcus aureus
Es el resultado de la ingestión de alimentos contaminados con cepas de S. aureus que producen enterotoxinas termoestables. 
Los alimentos por lo general se contaminan a través de un operario que los procesa, con el desarrollo del microorganismo y la producción de la toxina. Los alimentos implicados incluyen ensalada de patatas, helados, natillas, productos de panadería, alimentos enlatados y carnes procesadas entre otros.
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Intoxicación alimentaria por Staphylococcus aureus
Se han identificado varios tipos de enterotoxinas estafilocócicas
(A a E; G a I) y tres subtipos de la enterotoxina C. Las enterotoxinas son estables a 100 °C durante 30 minutos y resistentes a la hidrólisis de las enzimas gástricas y yeyunales.
Por ello, cuando un alimento se ha contaminado por estafilococos
productores de enterotoxinas el hecho de volver a calentar ligeramente la comida o la exposición a los ácidos gástricos carecen de capacidad protectora frente a la acción de estos compuestos.
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Síntomas
Gastroenteritis(vomito – diarrea)
Dolor abdominal
Dolor muscular
Cefalea
Fiebre 
Deshidratación
Pueden aparecer entre 1-8 horas después de ingestión.
Es un cuadro autolimitado. 48-72 h
Paliativo.
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Forma de prevenir 
Higiene de manos
Refrigeración de alimentos
No compartir elementos personales
Capacitación del personal que manipula los alimentos.
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Agar Baird Parker 
Nutritivo:Peptona,extracto de carne ,de levadura son ricos nutrientes.
Selectivo: Los compuestos inhibidores son el cloruro de litio y el telurito de potasio que inhiben el crecimiento acompañante.
Diferencial: Los Staphylococcus aureus reducen el telurito a teluro y originan colonias negras con actividad lecitinasica actuando sobre la yema de huevo produciendo un halo alrededor de las colonias
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Agar Baird Parker
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Identificación de Staphylococcus aureus en alimentos
MATERIALES DE LABORATORIO
Agar Baird Parker
Peróxido de hidrogeno
Coloración de Gram
Agua peptonada pipetas de 1cc
Portaobjetos
Microscopios
Mecheros
Tubos estériles pequeños
Plasma fresco citratado
Alimentos (suero, Mantequilla, quesos, jugos)
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Procedimiento
PREPARACION DEL MATERIAL: Organizar el área de trabajo; marcar las cajas y otros materiales de trabajo según la indicación del docente.
PREPARACION DE LAS DILUCIONES: se deben realizar tres diluciones del alimento de la siguiente manera:
Pesar 10 gramos del alimento.
Agregarlos en el frasco tapa azul que contiene 90 ml de agua peptonada, esta dilución corresponde a la dilución 10-1.
Tomar 1 cc de la dilución 10-1 y agregarlo en un tubo con 9 ml de agua peptonada marcado como 10-2, esta dilución corresponde a la 102.
Tomar 1 cc de la dilución 102 y agregarlo en un tubo con 9 ml de agua peptonada marcado como 103 , esta dilución corresponde a la 103.
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Procedimiento
SIEMBRA DE LAS DILUCIONES: sembrar en las cajas de Agar Baird Parker previamente marcadas con las indicaciones del docente; en cada caja se siembra 0.1 cc de la dilución correspondiente.
INCUBACION: Incubar las cajas a 37ºC de 24 a 48 horas en atmosfera de aerobiosis.
 PRUEBAS DE IDENTIFICACION
Las colonias sospechosas de Staphylococcus son negras lisas pueden presentar un halo opaco alrededor de las colonias.
GRAM DE LAS COLONIAS: A las colonias sospechosas se les realiza un Gram.
PRUEBA DE LA CATALASA: Es una prueba de género, para diferenciar cocos Gram positivos en el laboratorio, el género Staphylococcus es positivo para esta prueba.
PRUEBA DE LA COAGULASA: prueba de especie, se utiliza para diferenciar especies de Staphylococcus.
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Si se sospecha que la cantidad de S. aureus es pequeña o existe mucha flora acompañante, se sugiere enriquecer la muestra en caldo soya tripticasa con 10% de NaCl y 1% de piruvato de sodio. Esto favorecerá el crecimiento de S. aureus e inhibirá el desarrollo de la flora acompañante. Los tubos que resulten turbios se sembraran en agar Baird Parker.
Muestras
Lacteos,cárnicos etc.
102.
10-1
 103.
Pesamos 10 g
90 ml agua peptonada
+ 10 g de la muestra =10-1
Tomar 1 cc de la dil 10-1.+ 9ml de agua peptonada= 102.
Tomar 1 cc de la dil 10-2.+ 9ml de agua peptonada= 103.
Sembrar 0.1 cc de cada dil 
Incubamos
35°-37°
aerobiosis 
Bibliografía
Murray Patrick 8° Edicion. Microbiología Médica.
Manual de procedimientos en Bacteriología Clínica. BIOBACTER.
B.A. Freeman. Microbiología Burrows. Interamericana Mc Graw Hill. México.
Diagnostico Microbiologico. Koneman. Editorial Panamericana.
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a2819b9bf93d.pdf
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Gracias!