PREVALENCIA DE EHRLICHIOSIS CANINA EN CANIS LUPUS FAMILIARIS EN CONSULTORIOS DE LA CIUDAD DE CHIMBOTE (1) (1) (2)

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CAPÍTULO I
Prevalencia de Ehrlichiosis canina en Canis lupus familiaris en consultorios de la ciudad de Chimbote
CAPÍTULO II
MIEMBROS DEL EQUIPO INVESTIGADOR
2.1. Investigadores
Chuquilin Colorado Luis Enrique 
Tapia Castillo Jessica Beatriz
2.2. Asesor
M. V. Chávez Farro Miguel Enrique
CAPÍTULO III
TIPO Y LÍNEA DE INVESTIGACIÓN
1.3. Tipo de investigación
El tipo de investigación del presente trabajo es aplicada (corte transversal) porque pretende aportar beneficios y a encaminar a resolver objetivamente el problema de la Ehrlichiosis canina en Canis lupus familiaris.
1.4. Línea de investigación
Producción animal
CAPÍTULO IV
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La Ehrlichiosis afectan a los caninos son de gran importancia en el mundo entero dentro de la práctica clínica diaria, tanto de la frecuencia de su presentación como por la severidad de los cuadros clínicos que producen, afectando a la Medicina Veterinaria, que es la ciencia encargada del estudio y la industrialización de los animales de compañía (1)
la EHRLICHIOSIS canina se encuentra ampliamente difundida en todo el territorio peruano especialmente en la costa, Por lo cual se propone medir la presencia de esta enfermedad y tomar las acciones necesarias para gestionar las medidas pertinentes respecto a este caso y disminuir los vectores causantes de esta patología como son las garrapatas que no solo afectan al bienestar animal, sino también a los seres humanos (1)
FORMULACIÓN DEL PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN
¿Cuál es la prevalencia de Ehrlichiosis canina en Canis lupus familiaris en consultorios de la ciudad de Chimbote?
JUSTIFICACIÓN
De todas las enfermedades transmitidas por ectoparásitos (garrapata), la Ehrlichiosis canina es la más relevante dentro de la casuística en las clínicas veterinarias en chimbote.
La Ehrlichiosis canina, producida por Ehrlichia canis, es reconocida como una enfermedad infecciosa importante de distribución mundial y potencialmente mortal en perros y otros miembros de la familia Canidae. Este agente infeccioso es distribuido por vía sanguínea a diferentes órganos como el bazo, hígado, corazón, pero donde causa un mayor daño es en los riñones ocasionando poliuria, hematuria y un intenso dolor a nivel de las vértebras lumbares que en muchos casos no le permite caminar al perro (2).
 Muchas veces se suele confundir con otras enfermedades como la piroplasmosis, babesia y leptospirosis por la similitud en su sintomatología.
El motivo principal para la ejecución de este trabajo se basa en la necesidad de determinar la Seroprevalencia de Ehrlichiosis en los perros en consultorios de la ciudad de Chimbote, a través de test de pruebas rápidas, a fin que nos permita establecer las medidas necesarias para un control con respecto al vector de esta enfermedad (2).
LIMITACIONES DE ESTUDIO
Una de las limitantes son factores propios de este departamento como su clima cálido que se mantiene de esta forma durante todo el año, la falta de interés en desparasitar y establecer un programa de control para erradicar la plaga de las garrapatas por parte de los dueños de los canes, la desinformación de las diversas enfermedades que pueden producir estos parásitos y el mal manejo con que crían a sus mascotas favorecen a la aparición de la enfermedad Ehrlichiosis canina , que actualmente afecta a miles de perros y ocasiona grandes pérdidas económicas a los criadores. 
CAPÍTULO V
ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIÓN
ANTECEDENTES
E. Canis fue reportada en Estados Unidos por primera vez en 1963, se investigaron a una población de 78 perros sospechosos de tener Ehrlichia agudsa y 10 perros sanos (3). A los resultados de serología y PCR se determinó una prevalencia de 39%, 33 perros positivos de 85 que tenían una evidencia de una infección pasada o presente de Ehrlichia canis.
En 1996 se determinó el primer caso en México de Ehrlichia canis. Para conocer la distribución, prevalencia y factores de riesgo obtuvieron muestras de sangre de perros en 25 estados y de la capital de la república mexicana (n= 2395). Hicieron una prueba de ELISA. Arrojando como resultado de seroprevalencia de 33.1 % a nivel nacional. La seropositividad ocurrió prácticamente en todas las edades, se presentó en 58 razas diferentes. De los positivos el 77% vivía fuera, el 79% tuvieron garrapatas, el 13% había viajado a zonas enzoóticas y el 54 % presentó signos clínicos (4).
Por primera vez se diagnosticó en Brasil en Minas Gerais en 1973. Posteriormente en el 2003 se realizó un estudio retrospectivo de los años 19980- 2001, donde se analizaron características demográficas. Características clínicas y hematológicas. De los 194 animales, 31 estaban infectados con E. Canis. Y 21 con A. Platys. El 24.4 % de los casos ocurrieron en pacientes de 13 a 24 meses de edad. Los signos más frecuentes que presentaron fueron fiebre, anorexia, apatía, dolor abdominal, linfoadenopatia y disnea (5).
En Perú los primeros casos fueron reportados en 1982, encontrándose una seroprevalencia de E. Canis de 16.5% en caninos de 3 distritos de Lima esta patología se asocia a una de las variables de trombocitopenia, leucopenia, anemia y antecedentes de garrapatas con la enfermedad (6).
Realizaron estudios en tres distritos de Lima, cuyo objetivo fue determinar la prevalencia de D. immitis y E. canis en caninos a través de un kit comercial de ELISA. Los resultados fueron; prevalencia de Dirofilaria immitis y Ehrlichia canis en tres distritos en los meses de febrero a mayo del 2001 fue de 4.4 ± 3.4 y 16.5 ± 6.2, respectivamente (7).
El inicio de la enfermedad se produce cuando las garrapatas inyectan en el lugar de la mordedura las secreciones de las glándulas salivales contaminadas con Ehrlichia canis, con un período de incubación de 8 a 20 días. En donde la enfermedad progresa a través de varias fases: aguda, subclínica y crónica. Cada fase se puede caracterizar por una variedad de anormalidades clínicas y hematológicas (2). Aunque en la práctica clínica no se diferencian fácilmente (8). La ehrlichiosis se puede manifestar con una amplia variedad de signos clínicos como fiebre, letargia, pérdida de apetito, etc. y esto puede ser debido a muchos factores, incluyendo diferencias en la patogenicidad entre las cepas de Ehrlichia spp., raza de perros, infecciones concomitantes con otras enfermedades transmitidas por garrapatas y el estado inmunitario del perro (9).
MARCO TEÓRICO
ETIOLOGIA Y EPIDEMIOLOGIA. 
La ehrlichiosis canina también se conoce como ricketsiosis canina, fiebre hemorrágica canina, enfermedad del resfriado canino, tifus por garrapatas caninas, trastorno de la coagulación de Nairobi y pancitopenia tropical canina, nombres que representan diferentes aspectos de la misma enfermedad. células sanguíneas circulantes de huéspedes mamíferos susceptibles, incluidos los seres humanos (10).
E. canis se transmite por la garrapata marrón del perro R. sanguineus. La infección por este organismo provoca una amplia variedad de anomalías clínicas y hematológicas, cuya gravedad depende de factores como la cepa de E. canis, la raza del perro, el estado inmunológico y la respuesta del animal y la coexistencia de otras enfermedades (11) El desequilibrio inmunológico, en particular la disfunción plaquetaria, parece ser la característica principal de la enfermedad.
La transmisión en la garrapata R. sanguineus ocurre entre las etapas de desarrollo y no por vía transovárica, las tres etapas (larva, pupa, adulto) son susceptibles de transmitir la enfermedad. Se ha demostrado que las garrapatas sobreviven como adultos durante 155-568 días sin alimentarse y transmiten la enfermedad durante 155 días después de la infección, lo que permite que las garrapatas sobrevivan el invierno e infecten a los huéspedes en la primavera siguiente (12).
El agente causal de la enfermedad es la Ehrlichia spp, la cual es un organismo cocoide gramnegativo intracelular obligado. También, conocida como ehrlichiosis monocítica canina, es transmitida por garrapatas del género y especie Rhipicephalus sanguineus. Ladistribución de esta patogenia es mundial, con reporte de casos en varios continentes (13). Miden 0,5 μm. de diámetro, son aerobios y la nomenclatura de algunos microorganismos ehrlichiales, ha sufrido sustanciales cambios (14). 
La enfermedad posee un período de incubación de aproximadamente 8 a 20 días, seguido por tres etapas consecutivas: aguda, subclínica y crónica. La fase aguda puede durar de 1 a 4 semanas. La mayoría de los perros se recuperan de la enfermedad aguda con tratamiento adecuado. Los perros tratados inadecuadamente pueden recuperarse clínicamente pero luego pueden entrar en la fase subclínica, donde solo el recuento de plaquetas puede ser inferior a la normal. Los perros en esta fase pueden estar “clínicamente sanos” durante meses e incluso años (15).
CICLO DE VIDA DE LA GARRAPATA.
En las zonas tropicales y subtropicales, esta garrapata es encontrada en los huéspedes a lo largo de todo el año; mientras que, en áreas templadas, donde hay cambios climáticos, las garrapatas son encontradas en el huésped a lo largo del verano y en menor cantidad en invierno (16). Las etapas inmaduras en la naturaleza se alimentan de los mamíferos pequeños; los perros generalmente son los únicos huéspedes en las etapas inmaduras y adultas (17). 
El ciclo de R. sanguineus es de tres hospederos, lo que significa que cada una de las fases móviles después de alimentarse de sangre por unos días, deben de abandonar a los huéspedes para evolucionar en el medio ambiente. La duración del ciclo biológico depende de factores ambientales como la temperatura y humedad. La temperatura óptima para la incubación de los huevos, la transformación de larvas en ninfas y de éstas en adultos, es de 30 ºC; el período de cada una de estas etapas se alarga conforme baja la temperatura; mientras que el rango de humedad es más amplio y va de 20 – 93%. En condiciones ambientales ideales el ciclo se completa en aproximadamente 63 días, pero si el ambiente no es favorable el ciclo se puede prolongar por varios meses, durante los cuales la garrapata permanece oculta en un estado de letargia denominado diapausa (18). 
Las hembras repletas realizan una puesta aproximadamente de 4000 huevos, luego de un período de pre ovoposición que va desde 3 a 83 días, los huevos los ponen en lugares protegidos de la luz y de la desecación. Los huevos de garrapata eclosionan entre los 8 y 67 días; las larvas pasan por un período de maduración tras el cual están capacitadas para fijarse a un primer huésped para alimentarse. Entre los 3 y 7 días post fijación, la larva se desprende y busca un lugar resguardado donde realizar su primera muda y se vuelven ninfas que aparecen entre los 6 y los 23 días después de la caída de la larva repleta y están preparadas para subir a un segundo huésped para volver a alimentarse. Se alimenta por 4 a 9 días pasados los cuales la ninfa repleta se desprende del huésped, cae al suelo y busca un sitio resguardado para realizar la segunda muda a partir de la cual emergerán los adultos entre los 12-129 días después, ya que las ninfas pueden sobrevivir más de 568 días en espera de un huésped. Los machos y hembras adultos se fijan a un tercer huésped para alimentarse; las hembras sólo se fijan y succionan sangre una vez y caen al suelo, mientras que los machos se alimentan en forma intermitente y persisten más tiempo sobre el hospedador, para que la mayoría de las hembras queden fecundadas. Éstas, una vez alimentadas, caen al suelo y buscan un refugio donde realizar la puesta de huevos y empieza de nuevo el ciclo (19). (Fig. N° 01).
DISTRIBUCION. 
La distribución de la Ehrlichiosis canina está relacionada con la distribución del vector Rhipicephalus sanguineus y se ha descrito su ocurrencia en cuatro continentes incluyendo Asia, África, Europa y América. 
Existen varios estudios sobre E. canis en el continente sudamericano. En Mina Gerais, Brasil, se ha reportado un 16,00% de ehrlichiosis canina (20). 
En el año 1998 fue diagnosticada por primera vez la ehrlichiosis canina en Santiago de Chile, en perros provenientes de la comuna de Puente Alto, al sur de Santiago. Desde ese año y hasta la fecha se ha ido incrementando el número de casos en toda la región Metropolitana, constituyéndose en una enfermedad cada vez más común, en los meses de primavera y verano (21).
Ehrlichiosis Monocitica Canina. 
Generalmente se refiere a la enfermedad causada por E. canis como ehrlichiosis monocítica canina (EMC), debido a su tropismo por las células monocíticas, aunque a lo largo de la historia ha recibido numerosas denominaciones, como tifus canino, fiebre hemorrágica canina, síndrome hemorrágico idiopático, rickettsiosis canina, enfermedad del perro rastreador o pancitopenia tropical canina.
El vector de esta bacteria gramnegativa es la garrapata Rhipicephalus sanguineus, probablemente la garrapata más ampliamente distribuida en el mundo (22). Rhipicephalus sanguineus se infecta al ingerir sangre de un animal infectado, de forma más probable durante las primeras 2-3 semanas de la infección, ya que en este período existe un mayor número de leucocitos con E. canis en la sangre circulante (23). 
Las E. canis llegan al epitelio intestinal y penetran en la cavidad corporal de la garrapata (el hemocele) acompañados del agua y de los iones en exceso que son aprovechados por las glándulas salivares para formar la saliva que será de nuevo inoculada, en ese o en otro hospedador, permitiendo la transmisión de los agentes infecciosos ingeridos con su comida (24). 
El modo de transmisión es transestadial, pero no transovárico, y se ha observado que la garrapata puede transmitir la infección al perro susceptible hasta 155 días después de haber ingerido al agente (25).
PATOGENIA 
La infección natural en el perro se produce cuando la garrapata infectada se alimenta, ingiriendo la sangre y, a la vez, contaminando con sus secreciones salivares el punto donde se ha fijado. También se ha descrito la posibilidad de una transmisión yatrogénica mediante transfusiones sanguíneas procedentes de perros con EMC (26). (Fig. N° 02).
Posteriormente, Ehrlichia canis se replica en las células mononucleares de nódulos linfáticos, hígado, bazo y médula ósea, en los que penetra por endocitosis mediada por receptores proteicos de la superficie celular (27). Ya dentro de la célula diana, estos microorganismos inicialmente se desarrollan en forma de lo que se denominan “cuerpos elementales”, con un diámetro de 0,5-0,9 μm.; los cuerpos elementales aumentan de tamaño, se replican por fisión binaria y se agrupan, y pasan a ser los denominados “cuerpos iniciales”, de 1,4-2μm de diámetro, que continúan replicándose y agrupándose y, por tanto, aumentando de tamaño, para dar lugar a las “mórulas”, colonias bacterianas rodeadas por una membrana vacuolar, que poseen un diámetro mayor a 2 μm. y que son denominadas así por su forma típica. Los microorganismos se liberan de la célula hospedadora por lisis celular y exocitosis. Las mórulas contienen 100 o más cuerpos de Ehrlichia canis (28). (Fig. N° 03).
Curso de la enfermedad
Laura Abellán Vivancos (s.f) en su artículo denominado Ehrlichiosis canina describe que el curso de esta enfermedad presenta tres fases que son: 
a) Aguda 
Tras un periodo de incubación de 8 a 20 días se inicia dicha fase y dura de 2 a 4 semanas. Se caracteriza por alteraciones hematológicas: trombocitopenia, leucopenia y anemia leve variable. Otras alteraciones que se pueden presentar son pérdida de peso, anorexia, letargia, hipertermia, (41º C), linfoadenomegalia, exudado oculonasal seroso o purulento, hemorragias, disnea, … Debido al corto periodo de incubación se puede encontrar en algunos de estos animales una infestación evidente de garrapatas, si no han sido eliminadas todavía. En la mayoría de los casos se resuelve esta fase de forma espontánea y se inicia la siguiente fase. 
b) Fase subclínica 
Puede durar de meses a años. En esta fase el animal recupera el peso perdido y resuelve la hipertermia llegando a tener temperatura corporal normal.En algunos animales puede ser eliminado el parásito, (si su estado inmune es competente). Aunque en la mayoría persiste, instaurándose así la fase crónica. 
c) Fase crónica 
Puede manifestarse como una enfermedad leve con alteraciones hematológicas y de peso irrelevantes, o por el contrario, se pueden generar cuadros con:
 -Trombocitopenia, que den síntomas tales como palidez de mucosas, petequias, equimosis en mucosas, y/o hemorragias importantes (epixtasis).
 - Nefropatía perdedora de proteínas, como una glomerulonefritis que se origina por depósito de inmunocomplejos sobre los capilares del glomérulo.
Esto da lugar a proteinuria que en algunos casos puede llevar a hipoalbuminemia lo que explicaría otro síntoma que se puede observar en Ehrlichiosis: edemas en la parte ventral del cuerpo (extremidades, escroto…). 
- Disnea o tos por el edema intersticial a nivel del pulmón. 
- Hepatomegalia, esplenomegalia o linfoadenopatía. 
- Signos oculares, como otra consecuencia de la glomerulonefritis, ya que son animales que tienden a hipertensión sistémica (como cambio de color en los ojos, ceguera y con bastante frecuencia uveítis, hipema, retinitinis, desprendimiento de retina). 
- Alteraciones neuromusculares principalmente causadas por meningitis inflamatoria o hemorrágica (hiperestesia, estados de estupor, o convulsivos) 
- Cojeras, rigidez en la marcha por depósitos de inmunocomplejos en las articulaciones. Infestaciones por Ehrlichia resticiiocepas granulocíticas provocan estos cuadros: cojera, tumefacción o dolor articular. 
Los signos neurológicos pueden ocurrir tanto en la enfermedad aguda como crónica. Estos incluyen signos de meningoencefalitis, como, por ejemplo: lomo arqueado, dolor severo de cuello y lomo, paraparesia o tetraparesia, ataxia, déficit de nervios craneales y convulsiones. Los signos neurológicos pueden ser debidos a hemorragias, infiltración celular extensa y compresión perivascular de las meninges (Waner y Harrus, 2000).
Diagnóstico 
Greene (citado por Romero, Padilla, Alvarado,s.f) afirman que el diagnóstico de la enfermedad se basa en la anamnesis, presentación clínica, hallazgos patológicos al examen clínico y se confirma con las pruebas de laboratorio. Los cambios hematológicos que pueden encontrarse son: trombocitopenias, anemia, por lo general, no regenerativas, y leucopenias. También pueden observase la hiperglobulinemia. Puede confirmarse la infección por la visualización de las mórulas en los monocitos en frotis sanguíneos o aspirados de bazo teñidos con Giemsa, pero solo aparecen en el 4% de los pacientes enfermos por lo cual no debe ser el método de elección. Se puede ampliar la sensibilidad de esta técnica mediante la realización de frotis de capa flogística o frotis de sangre obtenida de capitales del margen de pabellón auricular. Actualmente, la prueba de inmunofluorescencia indirecta de anticuerpos (IFA) usando antígenos de E. canis es el test serológico de diagnóstico más aceptable. Pueden detectar enfermos a partir de los 7 días después de la infección inicial, a pesar de que es posible que algunos perros no se tornen seropositivos hasta los 28 días después de la infección inicial, con lo cual luego de un diagnostico negativo deben repetirse el examen a la 2 o 3 semanas. Después del tratamiento los anticuerpos declinan gradualmente y se tornan negativos entre los 6 y los 9 meses, aunque algunos perros mantienen los niveles de anticuerpos altos de por vida, sin saber si el microorganismo persiste en el organismo por lo que se supone que el paciente se ha recuperado de la infección cuando resuelve la trombocitopenia, la hiperglobulinemia y otras anormalidades clínicas y de laboratorio de forma progresiva. Otros métodos, usados principalmente en investigación, son cultivos sanguíneos para evaluar el crecimiento del parásito, que puede tardar hasta 8 semanas en mostrar crecimiento, PCR puede utilizarse para la detección de E. canis dentro de los 4 a 10 días posinoculación. El diagnóstico de la enfermedad subclínica es un desafío para el clínico.
La prueba de ELISA es un análisis confiable para obtener un diagnóstico rápido de la enfermedad y está remplazando a la prueba de inmunofluorescencia indirecta de anticuerpos (IFA),ya que no requiere de equipo especializado, de tal manera que se puede practicar en centros clínicos con la dotación del kit. El snap combo kit para la detección de anticuerpos contra Ehrlichia canis es un análisis de inmunoabsorción ligada a enzimas (ELISA) del laboratorio IDEXX, que identifica una región immunodominante P30 para lo cual utiliza anticuerpos monoclonales 111H7. Esta prueba posee una sensibilidad de 98.8% y una especificidad de 100%. (Parrado et al 2003).
Diagnóstico diferencial 
Se basa en manifestaciones tales como fiebre, anorexia, descarga nasolagrimal, epístasis y presencia del vector infestando al enfermo. Se asocia con enfermedades sistémicas como hemorragia gastrointestinal, hepatopatía, pancreatitis aguda, hipertensión sistémica, septicemia y CID, neoplasia, hipoadrenocorticismo y fiebre maculosa de las montañas rocosas. Enfermedades que cursan con trombocitopenia o con sintomatología hemorrágica en la práctica clínica, ej., intoxicación por estrógenos o con warfarina, otras como la babesiosis, el distemper, la hepatitis infecciosa viral canina, la leptospirosis y la hepatozoonosis y enfermedades inmunológicas como las coagulopatíasinmunomediadas y el lupus eritematoso sistémico o neoplásicas tales como el mieloma y la leucemia linfocítica crónica. (León y Gómez, 2007)
Tratamiento 
Si está indicado se debe emplear tratamiento de apoyo. Se han empleado varios protocolos con distintas tetraciclinas, doxiciclina, cloranfenicol e inmidocarb. El grupo de estudio de las enfermedades infecciosas de la ACVIM recomienda la doxiciclina a 10mg/ kg vía oral cada 24h durante al menos 28 días (Couto y Nelson, 2010)
Eddlestone y cols., (citados por Couto & Nelson, 2010) piensan que los resultados de estudios que emplean Dipropionato de Imidocarb( de 5 a 7 mg i.m o s.c repetidos en 14 días) en el tratamiento de la Ehrlichiosis canina han tenido resultados variables. En un estudio realizado recientemente la trombocitopenia persistente y la infección no se eliminaron en los perros inoculados de modo experimental. En casos graves de anemia, además del tratamiento antimicrobiano se aconseja transfusión sanguínea, (plasma rico en plaquetas), y si hay deshidratación aplicación de fluídoterapia. Cuando hay trombocitopenia grave que hace peligrar la vida del animal, se pueden utilizar los corticoides (prednisona) a corto plazo (2 a 7 días) recordar disminuir la dosis por efecto adrenal. También son útiles cuando hay poliartritis y meningitis. Es preciso tener en cuenta y así hay que hacérselo saber al propietario que han de practicarse controles hematológicos, así como pruebas de detección del parásito, (IFA o PCR), después de finalizar el tratamiento, ya que éste no es fácil eliminar en la mayoría de los casos y ha de volverse a instaurar de nuevo el tratamiento e incluso es posible que el parásito persista de por vida en el animal. No olvidar de controlar las alteraciones hepáticas con la clásica terapéutica y otras manifestaciones como también la formación de radicales libres con Vitamina E 800 UI/Animal/Día, se recomienda la utilización de Vitamina C en dosis de 500mg/Animal al día (Archila, 2007).
Profilaxis 
Harrus et al. (citado por Romero et al, s.f) afirma que el control de las garrapatas es la medida de prevención más eficaz contra la infección de E. canis. En las perreras deben realizarse test serológicos y control de garrapatas antes de ingresar a los perros a la misma. Los perros de regiones endémicas y aquellos que viajan hacia o desde áreas endémicas deben ser considerados como candidatos potenciales a enfermarse. La enfermedad no deja protección por lo que un paciente curado de ehrlichiosis puede volver a infectarse, sobre todo cuando viven a ambientes endémicos.
DEFINICIÓN DE TÉRMINOS BÁSICOS
Anorexia. Es un trastorno dela alimentación que se caracteriza por el peso corporal anormalmente bajo.
Ehrlichiosis. Es una infección bacteriana transmitida por la picadura de una garrapata.
ELIZA. Es el acrónimo en inglés para enzimoinmunoanálisis de adsorción. Se trata de un examen de laboratorio comúnmente usado para detectar anticuerpos en la sangre. Un anticuerpo es una proteína que el sistema inmunitario del cuerpo produce cuando detecta subtancias dañinas, llamadas antígenos.
Equimosis. Moretón pequeño causado por la fuga de sangre de los vasos sanguíneos rotos en los tejidos de la piel o las membranas mucosas.
Especificidad. Es la capacidad del test para detectar a los verdaderos negativos (sanos).
Hipoplasia. se utiliza para indicar un tejido u órgano que se ha desarrollado poco o cuyo desarrollo no es completo: esto significa que el número de células es insuficiente o inferior al normal.
Hiperemia. Abundancia extraordinaria de sangre en una parte del cuerpo.
Letargia. Afección caracterizada por somnolencia y una falta poco común de energía y agilidad mental. Puede obedecer a muchas causas, como a las enfermedades, las lesiones o los medicamento.
Meningoencefalitis. Inflamación de las meninges (tres capas delgadas de tejido que cubren y protegen el cerebro y la médula espinal).
Prevalencia. Proporción de especies que sufren una enfermedad con respecto al total de la población en estudio.
Sensibilidad. Es la capacidad del test para detectar a los verdaderos positivos (enfermos).
Trombocitopenia. Afección en la cual hay un número menor que el normal de plaquetas en la sangre. Puede llevar a sufrir de moretones con facilidad y a demasiado sangrado de las heridas, o al sangrado de las membranas mucosas y otros tejidos.
CAPÍTULO VI
HIPÓTESIS
Hipótesis general
Existen casos positivos de Ehrlichiosis canina en Canis lupus familiaris en consultoriod la ciudad de Chimbote
Hipótesis específicas
Saber prevalencia de Ehrlichiosis canina en Canis lupus familiaris en consultorios de la ciudad de Chimbote
	“Prevalencia de Ehrlichiosis canina en Canis lupus familiaris en consultorios de la ciudad de Chimbote”
	Hipótesis
	Definición conceptual de las variables
	Definición operacional de las variables
	
	
	Variables
	Dimensiones
	Indicadores
	Instrumento de recolección de datos
	Existen casos positivos de Ehrlichiosis canina en Canis lupus familiaris en consultorios de la ciudad de Chimbote
	
Se definiría como el número de casos positivos de ehrlichiosis canina que ingresan a consulta.
	Carga bacteriana
	Tiempo de disminución de la carga bacteriana
	
Tiempo de disminución de bacterias intracelulares en días:
8 días: Óptima (++++) 15 días: Aceptable (+++) 22 días: Moderada (++) 38 días: Mínima (+)
	Un hemograma
Historia clínica que confirma la ehrlichiosis canina
Test inmunocromatológico
	
	Se definirán como método
Preventivo mediante la dosificación y evitar el hospedador intermediario
	Dosificación
	Tratamiento combinado
	Dosis: afoxolaner 5 mg/kg y fluralaner y 25 -56 mg/kg 
Frecuencia de medicación afoxolaner, fluralaner y garrapaticida
Vía de administración: Oral
	Aplicación del afoxolaner y fluralaner
	
	
	
	Garrapaticida
	
	
	
	
	Protocolo con afoxolaner y fluralaner
	Tratamiento con afoxolaner y fluralaner
	
	
Operacionalización de variables
CAPÍTULO VII
OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN
OBJETIVO GENERAL
Determinar la prevalencia de ehrlichiosis canina en Consultorio de la ciudad de Chimbote 2021.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
1.- Determinar la prevalencia de Ehrlichia canis en caninos según edad en consultorios de la ciudad de Chimbote
 2.- Determinar la prevalencia de Ehrlichia canis en caninos según sexo en consultorios de la ciudad de Chimbote
CAPÍTULO VIII
MARCO METODOLÓGICO
MATERIALES Y MÉTODOS
Localización
El presente trabajo de investigación se realizará en consultorios de Chimbote de la ciudad de Chimbote, cuyas características geográficas y meteorológicas son:
Datos Geográficos y Meteorológicos (*)
Altitud 4 msnm
Temperatura máxima 32° C
Temperatura media 23° C
Temperatura mínima 14° C
Humedad relativa promedio anual 82%
Precipitación pluvial promedio 44 mm
Insolación promedio anual 3-6 horas/día
 (*) Fuente: SENAMHI – Chimbote 2017
MATERIALES
Material experimental
· 50 caninos
Equipos
· Hojas de registros 
· Gradilla para tubos de ensayo 
· Tubos con EDTA de 10 ml 
· Conjugado E. canis
· Dispositivos SNAP
· Cinta masking 
Materiales de campo
· Hojas de registro 
· Cámara fotográfica 
· Mandil 
· Guantes de manejo 
· Torniquete para uso en pequeños animales 
· Tijeras 
· Alcohol 
· Algodón 
· Agujas calibre 22 G, 24 G 
· Jeringas de 5 ml 
· Tubos con EDTA, tapón lila, de capacidades de 10 ml 
· Adhesivos para la identificación de muestras. 
· Caja para transporte de muestras 
Fármaco
· Alcohol
Materiales de aseo
· Jabón
· Alcohol en gel
Materiales de oficina
· Cuaderno 
· Esferos, Lápices 
· Flash memory 
· Computadora 
· Hojas 
· Lápices 
· Impresora 
METODOLOGÍA
1. Selección de caninos 
Se seleccionarán 50 caninos, de diferente sexo y edad, según lo descrito bajo material biológico. Los animales procederán de los consultorios veterinarios de Chimbote y serán escogidos al azar.
2. Toma de Muestra de Sangre 
Para la realización de la prueba inmunocromatográfica comercial se extraerá aproximadamente 1 O cc de sangre de cada canino en experimentación, para lo cual se desinfectará con algodón y alcohol la zona en donde se encuentra la vena cefálica y se procederá a su punción. La sangre será colectada en tubos de vidrio conteniendo anticoagulante y llevada al lugar en donde se efectuará la prueba.
3. TEST ELISA (SNAP 4Dx PLUS). 
Test Elisa SNAP, es un test que proporciona resultados para la detección de anticuerpos contra A. phagocytophilum, A. platys, E. ewingii, E. canis, B. burgdorferi y antígenos contra Dirofilaria inmitis, en ocho minutos. Tiene especificidad de 100% y sensibilidad de 96,2% para Erliquia canis. Este test es de uso clínico y constituye un método de diagnóstico periódico y rápido. El SNAP emplea antígenos purificados que proporcionan mayor sensibilidad y especificidad, ya que la tecnología basada en péptidos únicamente permite evaluar la presencia de anticuerpos muy específicos frente a los agentes, lo que descarta los falsos positivos.
El test es una prueba ELISA, el cual permite detectar la presencia de antígenos para Dirofilaria inmmitis y anticuerpos para Ehrlichia canis, Ehrlichia ewingii. En el caso particular de enfermedad de Lyme, según la FDA, reconoce dos test de ELISA para reconocimiento de anticuerpos contra Borrelia, los cuales son: Prevue B y el péptido C6 (61). Este test utiliza el péptido C6; el cual es una proteína de superficie única y es altamente específica que funciona como antígeno, al formarse anticuerpos contra la misma se da la reacción de color (62)
 
Funcionamiento del kit ELISA SNAP IDEXX 4Dx PLUS en el caso de detección de antígenos.
A.- El antígeno queda fijado cuando el anticuerpo conjugado ligado a la enzima y la muestra de sangre se combinan 
B.- La matriz ha sido tapizada con anticuerpos específicos 
C.- El conjugado y el antígeno se unen al anticuerpo ligado a la matriz 
D.- Se activa el dispositivo 
E.- La etapa de lavado elimina de la matriz inespecificidades.
F.- El sustrato fluye por la matriz limpia. El sustrato reacciona con el conjugado para amplificar la presencia del antígeno. Dando una lectura.
Representación de los resultados de las pruebas observados. 
TRATAMIENTO Y ANÁLISIS DE DATOS
Los análisis de los datos y la evaluación estadística se empleará ........................................
PREVALENCIA 
Para determinar la prevalencia de ehrlichiosis canina DIAGNOSTICADA mediante el uso de pruebas diagnóstico: kit Elisa (SNAP 4DX plus idexx) se utilizó la siguiente fórmula (74):P = NC/NP*100
Dónde: 
P= Prevalencia. 
NC = número de casos en un momento dado. 
NP = Total de población en un momento dado. 
INTERVALO DE CONFIANZA 
Para determinar el intervalo de Confianza se aplicó la siguiente formula:
ANALISIS DE ASOCIACION. 
Para el análisis se aplicará la prueba x2 (chi-cuadrado) al 5% de significancia para medir la relación que existe entre las pruebas diagnósticas. Para su determinación se utilizará el programa estadístico SPSS 22.
MATRIZ DE CONSISTENCIA METODOLÓGICA
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	
CAPÍTULO IX
LITERATURA CITADA
1. El examen hematológico no es concluyente para la determinación de que un animal sea libre de Ehrlichiosis canina (α = 0.05.)
2. No existe relación entre la presentación de la enfermedad y la época del año (α = 0.05). 
3. Skotarczak, B. Canine ehrlichiosis. Ann. Agric. Environ. Med. 2003. 10: 137- 141 p. 
4. Núñez, L. Estudio de la seroprevalencia de Ehrlichia canis en México. 2002: [On Line] disponible:
 http://www.maicodemexico.com.mx/espanol/protocolo_canino.htm [22/19/2021]. 
5. Moreira, S.M.; C.V. Bastos; R.B. Araujo; M. Santos; L.M.F. Passos. Estudio retrospectivo (1998 a 2001) da erliquiose canina em Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil. 2002. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia 50: 20-25.
6. Hoyos, L. Evaluación del examen hematológico y la técnica indirecta de ELISA en el diagnóstico clínico-laboratorial de ehrlichiosis canina. Tesis de Médico 
Veterinario. Facultad de Medicina Veterinaria, Univ. Nacional Mayor de San Marcos, Lima. [Tesis pre grado] 2007. 98 p. 
7. Adrianzen, J.; Chávez, A.; Casas, E. C. Seroprevalencia de la Dirofilariosis y Ehrlichiosis canina en tres distritos de Lima. Rev. Investig. Vet. Perú, 2003. Vol.14, no.1, p.43- 48.ISSN 1609-9117. 
8. Sainz, A., Amusateguie, I., Rodríguez, F. y Tesouro, M. Las Ehrlichiosisen el Perro. Presente y futuro. Profesión Veterinaria. 2000. 12(47):22-28 p. 
9. Waner, T., Leykin, I., Shinitsky, M., Sharabani, E., Buch, H., Keysary, A., Bark, H. & Harrus, S. "Detection of platelet-bound antibodies in beagle dogs after artificial infection with Ehrlichia canis", Vet. Immunol. Immunopathol. 2000. vol. 77, no. 1-2 145-50 p. 
10. Rikihisa Y. The tribe Ehrlichieae and ehrlichial diseases. Clin. Microbiol. Rev. 4. 1991. (3):286–308 p. 
11. Simón, C. Ehrlichiosis. 2003. [On Line] disponible: http://www.mevepa.cl/modules.php?name=News&file=article&sid=590 [16/08/2021]
 
12. Leon, A., Demedio, J., & Marquez, M. (2008). Diagnóstico de Ehrlichiosis en caninos en la ciudad de La Habana. Redvet, III, 1–22. Recuperado de: http://www.veterinaria.org/revistas/recvet/n050508/050802.pdf 
13. Gómez, N., & Nora, G. (2010). Enfermedades Infecciosas de los Caninos y Felinos. Buenos Aires: Inter-Médica.
14. Harrus, S., Waner, T. y Neer, M. Ehrlichia and Anaplasma infections, capítulo 26. En: Infectious diseasses of the dog and cat. Editorial ELSEVIER, 2007. Cuarta edición, Georgia, EE. UU. 227 – 238 p. 
15. Rojas, E. 2001. (a) Las garrapatas IV (en línea). Consultado 23 oct. 2014. Disponible en: http://www.webveterinaria.com/merial/Garrapatasiv. pdf. 
16. Breitschwerdt, E.B. Suplemento del Compendio Sobre Educación Continua para el Veterinario en Práctica. 2003. Vol. 24, 1-A. 155 p. 
17. Fisher, M; McGarry, J. “Fundamentos de Parasitología en Animales de Compañía”.Alemania. Intermedica S.A. 2006. 137p. 
18. Vásquez, R. et al. Parasitología veterinaria. Madrid, ES., McGraw-Hill- Interamericana. 1999. 711-713 p. 
19. Moreira, S.; Bastos, C.; Araujo, R.; Santos, M. y Pasos, L. Estudo retrospective (1998 a 2001) da erliquiosis canina em Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil. Arq. Bras. Med. Vet. Zoo., 2002. 50: 20-25 p. 
20. López, J.; A. Castillo; M. Muñoz; S. Hildebrandt. Hallazgo de Ehrlichia canis en Chile, Informe preliminar. Arch. Med. Vet. 1999. 31(2): 211-214 p. 
21. Groves, M.G., Dennis, G.L., Amyx, H.L. & Huxsoll, D.L. "Transmission of Ehrlichia canis to dogs by ticks (Rhipicephalus sanguineus)", American Journal of Veterinary Research, 1975. vol. 36, no. 7, 937-940 p. 
22. Woody, B.J. & Hoskins, J.D. "Ehrlichial diseases of dogs", The Veterinary clinics of North America.Small animal practice, 1991. vol. 21, no. 1, 75-98 p. 
23. Cupp, E.W. Biology of ticks: Tick-transmitted diseases. Vet. Clin. North. Am. Small Anim. Pract. 1991; 21(1):1-26 p. 
24. Lewis, G.E.,Jr. Ristic, M., Smith, R.D., Lincoln, T. & Stephenson, E.H. "The brown dog tick Rhipicephalus sanguineus and the dog as experimental hosts of Ehrlichia canis", American Journal of Veterinary Research, 1977. vol. 38, n° 12, 1953-1955 p. 
25. Neer, T.M. & Harrus, S. "Canine Monocytotrophic Ehrlichiosis (E. canis, E. chaffeensis, E. ruminantium, and N. risticii Infections). Ehrlichiosis, Neorickettsiosis, Anaplasmosis, and Wolbachia Infection." in Infectious Diseases of the dog and cat, ed. C.E. Greene, Third edn. Saunders Elsevier, St. Louis, Missouri, 2006. 203-217 p. 
26. Messick, J.B. & Rikihisa, Y. "Characterization of Ehrlichia risticii binding, internalization, and proliferation in host cells by flow cytometry", Infection and immunity, 1993. vol. 61, no. 9, 3803-3810 p. 
27. Baneth, G. IP - Infectious & parasitic diseases: canine ehrlichiosis – a silent killer. 31st World Small Animal Veterinary Congress (República Checa), 2006. 479-483 p. 
CAPÍTULO X
IMPACTO POTENCIAL DE LOS RESULTADOS DE INVESTIGACIÓN
CAPÍTULO XI
ESTRATEGIA OPERATIVA
DURACIÓN DE LA EJECUCIÓN DEL PROYECTO
CAPÍTULO XII
CRONOGRAMA
	
ACTIVIDADES
	MESES – 2021/2022
	
	
	Agosto
	Setiembre
	Octubre
	Noviembre
	Diciembre
	Enero
	Febrero
	Marzo
	Abril
	mayo
	Elaboración del proyecto
	X
	X
	X
	X
	
	
	
	
	
	
	Presentación del proyecto en un 25%
	
	X
	
	
	
	
	
	
	
	
	Presentación del proyecto en 50%
	
	X
	
	
	
	
	
	
	
	
	Presentación del proyecto en 75%
	
	
	X
	
	
	
	
	
	
	
	Presentación del proyecto en 100%
	
	
	X
	
	
	
	
	
	
	
	Sustentación del proyecto
	
	
	
	X
	
	
	
	
	
	
	Ejecución del proyecto
	
	
	
	
	X
	X
	X
	X
	X
	X
	Sustentación de la tesis
	
	
	
	
	
	
	
	
	
	X
CAPÍTULO XIII
PRESUPUESTO
	DESCRIPCIÓN
	COSTO UNITARIO 
 S/.
	CANTIDAD 
	TOTAL S/.
	Adquisición de SNAP
	60,00
	50
	3000,00
	Personal
	300,00
	4
	1200,00
	Adquisición de materiales 
	1000.00
	
	1000,00
	Transporte
	400,00
	
	400,00
	SUBTOTAL
	5600,00
	IMPREVISTOS 10% 
	560,00
	TOTAL
	6160,00
Financiamiento: Este trabajo será financiado estrictamente por los sustentantes del proyecto.
ANEXOS
APÉNDICES