BBM2_ACDL_JEMP

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Universidad Abierta y a Distancia 
de México 
División de Ciencias de la Salud, 
Biológicas y Ambientales 
Ingeniería en Biotecnología 
 
 
Biología Molecular II 
 
 
Asignación a cargo 
Del docente en línea 
 
 
Jessica Verónica Mendoza Prado 
ES202104539 
 Grupo BI-BBM2-2203-B1-002 
 
28 de marzo de 2023 
 
Explica brevemente cuales son las etapas de extracción de ácidos nucleicos y su finalidad 
La extracción de ácidos nucleicos es un proceso importante en la biología molecular y se puede 
dividir en varias etapas principales: 
1. Lisis celular: esta etapa tiene como objetivo romper las células y liberar el material 
genético que se encuentra dentro de ellas. Esto se logra mediante la utilización de 
diferentes agentes químicos y físicos, como detergentes, enzimas, ultrasonido y calor. 
2. Purificación: en esta etapa se eliminan las proteínas, lípidos y otros contaminantes que 
puedan interferir con la posterior amplificación y análisis de los ácidos nucleicos. Se 
pueden utilizar diferentes métodos de purificación, como la precipitación con alcohol, la 
cromatografía de afinidad o la centrifugación en gradientes de densidad. 
3. Concentración: una vez purificado el ácido nucleico, se puede concentrar para aumentar 
su concentración y facilitar su manipulación y almacenamiento. Esto se puede lograr 
mediante la eliminación de solventes, la centrifugación o la utilización de columnas de 
concentración. 
4. Cuantificación: en esta etapa se determina la cantidad y calidad del ácido nucleico 
extraído. Se pueden utilizar diferentes métodos de cuantificación, como la 
espectrofotometría UV, la electroforesis y la PCR cuantitativa. 
Cada una de estas etapas es importante para obtener ácidos nucleicos de alta calidad y pureza, 
que puedan ser utilizados en una amplia variedad de aplicaciones en biología molecular, como 
la secuenciación de ADN, la PCR, la clonación, la expresión génica y la detección de 
enfermedades genéticas. 
Realiza el cálculo para completar el siguiente cuadro de una reacción de PCR y un master 
mix de 6 reacciones 
Reactivo Concentración 
inicial 
Concentración 
final 
Volumen para 
agregar 1RX 
Volumen para 
agregar 6 RX 
Buffer para Taq 
polimerasa 
10X 1X 5 µL 30 µL 
MgCl2 25mM 1.75 mM 3.5 µL 21 µL 
DNTP’s mix 10 mM 0.8 mM 4 µL 24 µL 
Oligonucleótido 
forward 
10 µM 0.10 µM .5 µL 3 µL 
Oligonucleótido 
reverse 
10 µM 0.10 µM .5 µL 3 µL 
Taq PoL 50 U/µL 0.4 U/µL .4 µL 2.4 µL 
Agua libre de 
nucleasas 
- 35.1 µL 210.6 
Volumen final 50 µL 300 µL 
 
Realiza el calculo de la TM de los siguientes oligonucleótidos 
La temperatura de fusión es la temperatura a la que la mitad de las moléculas de ADN de doble 
cadena se separan. Depende de la composición de la cadena y se puede estimar según los 
oligonucleótidos que la compongan usando la formula de Wallace. 
Formula de Wallace: Tm = (nA + nT) x 2°C + (nG + nC) x 4°C 
 
5’-CATTCATAAACCCTCTG-3’ 
a: 5 T: 5 G: 1 C: 6 
𝑇𝑚 = ((5 + 5)2) + ((1 + 6)4) = 20 + 28 = 𝟒𝟖°𝑪 
5’-TGATATTGATTCAGAGG-3’ 
𝑎: 5 𝑇: 6 𝐺: 5 𝐶: 1 
𝑇𝑚 = ((5 + 6)2) + ((5 + 1)4) = 22 + 24 = 𝟒𝟔°𝑪 
 
Explica brevemente el fundamento de dos métodos de separación de proteínas 
Electroforesis en gel 
Es un método muy utilizado por su facilidad. Se vale de variables fisicoquímicas como el tamaño 
y la carga eléctrica de la proteína. Se utiliza un gel de poliacrilamida que actúa como tamiz 
molecular. 
Se colocan las proteínas en un pozo en un extremo del gel y se induce una corriente eléctrica a 
través de este, colocándose el gel en una solución amortiguadora con alto numero de electrolitos 
que permite el paso de la corriente. Todo esto se ubica dentro de una cámara de electroforesis 
que puede ser vertical u horizontal. En el caso de las verticales, el polo positivo se encuentra en 
la parte inferior de la cámara y en las horizontales en cualquier extremo. 
Las proteínas más pequeñas pueden viajar más rápido a través del gel que las de mayor tamaño, 
mientras que las de carga neta positiva migran hacia el cátodo y las de carga negativa hacia el 
ánodo. Posterior a la migración de las proteínas, puede añadirse alguna tinción para una mejor 
visualización. 
Cromatografía de afinidad 
Se fundamenta en la interacción de las proteínas con un ligando específico. La cromatografía se 
compone de una fase sólida que es una matriz empaquetada en una columna y una fase móvil 
que es el medio que contiene a las proteínas. 
Las proteínas de interés en la fase móvil interactuaran con las moléculas específicas en la fase 
solida formando complejos, quedando atrapadas en la matriz, mientras que el resto de moléculas 
será lavado de la matriz. 
Es un método con aplicación a nivel industrial y permite el aislado de proteínas de alto valor como 
inmunoglobulinas, siendo el que ofrece la mayor selectividad y especificidad. 
Realiza el cálculo de los volúmenes necesarios para una curva patrón de acuerdo con 
como se muestra en la siguiente tabla. El volumen final de la reacción es de 25 µL 
Formulas 
• Volumen de proteína (µL) = Concentración solución patrón x volumen final de la reacción) 
/ Concentración de la dilución 
• Volumen de agua (µL) = Volumen final de la reacción- Volumen de proteína 
Concentración patrón 
(µg/µL) 
Volumen de proteína Volumen de agua 
5 5 µL 20 µL 
10 2.5 µL 22.5µL 
15 1.67 µL 23.33 µL 
Volumen final 25 µL 
 
Describe los componentes de un vector de clonación 
Los vectores de clonación son moléculas de ADN circular llamadas plásmidos diseñados para la 
clonación de otra molécula ADN de interés o de un gen en particular. Se introducen y expresan 
en una célula hospedera. Se componen de los siguientes elementos. 
1. Origen de replicación: es una secuencia de ADN que indica a la célula huésped cuándo y 
cómo replicar el vector. De esta manera, el vector puede ser copiado junto con el ADN de 
la célula huésped. 
2. Marcador de selección: es una secuencia de ADN que permite la selección de células que 
han tomado el vector de clonación. Los marcadores de selección pueden ser resistencia a 
antibióticos, como la ampicilina, kanamicina o estreptomicina, o genes que permiten el 
crecimiento de células en un medio específico. 
3. Sitio de clonación: es una secuencia de ADN que permite la inserción de un fragmento de 
ADN deseado en el vector. Los sitios de clonación se encuentran generalmente en 
secuencias de restricción, que son secuencias de ADN reconocidas por enzimas de 
restricción específicas. 
4. Gen promotor: es una secuencia de ADN que indica a la célula huésped cuándo y dónde 
se debe transcribir el fragmento de ADN insertado en el vector. 
5. Secuencia poliadenilación: es una secuencia de ADN que indica a la célula huésped dónde 
se debe terminar la transcripción del fragmento de ADN insertado en el vector. 
 
Explica el fundamento de un método de introducción de ADN 
La transfección es un método popular utilizado para la traducción de ADN exógeno en células 
eucariotas. Existen distintas variantes, siendo las mas importantes las que utilizan un agente 
químico o un vector viral. 
La transfección química se basa en la utilización de agentes de transfección que forman 
complejos con el ADN exógeno y facilitan su entrada en las células. El ADN se mezcla con un 
agente de transfección, que puede ser una molécula catiónica, un liposoma o una nanopartícula, 
y luego se añade a las células. Una vez dentro de las células, el complejo de ADN y agente de 
transfección se descompone y el ADN se integra en el genoma de la célula. 
Por otro lado, la transfección viral implica el uso de vectores virales modificados para transferir 
el ADN exógeno en las células. Estos vectores virales se han diseñado para tener partes del 
virus eliminadas o inactivas, de manera que el virus no pueda causar una infección. Los vectores 
virales se unen al ADN exógeno y luego se introducen en las células, donde el ADN se integra 
en el genomade la célula. 
La transfección se puede realizar en cultivos celulares, en células in vivo mediante inyección 
directa o a través de técnicas de delivery en organismos enteros o tejidos. Sin embargo, la 
transfección puede tener limitaciones en cuanto a la eficiencia, la toxicidad y la estabilidad del 
transgen que se introduce. 
 
Referencias 
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