BBM2_U2_EA_JEMP

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Universidad Abierta y a Distancia 
de México 
División de Ciencias de la Salud, 
Biológicas y Ambientales 
Ingeniería en Biotecnología 
 
 
Biología Molecular II 
 
 
Unidad 2 
Evidencia de aprendizaje 
Cuantificación de proteínas 
 
Jessica Verónica Mendoza Prado 
ES202104539 
 Grupo BI-BBM2-2203-B1-002 
 
29 de marzo de 2023 
 
Método BCA para cuantificación proteica 
El test BCA Pierce hace uso de la reducción del cobre de Cu2+ a Cu+ ya aprovechada en otros 
métodos de cuantificación, con la diferencia de ser más sensible y tener la capacidad de actuar 
con otros reactivos como detergentes. 
El Cu2+ se ve reducido en presencia de un enlace peptídico en un medio alcalino, sobre todo en 
presencia de cisteína, tirosina, cistina y triptófano. También el esqueleto peptídico contribuye a 
la reducción de Cu2+. El ion cuproso Cu+ reacciona entonces con el ácido bicinconinico, 
formando un complejo de coloración azulada que se lee a 562 nm, con un rango de detección de 
.2 a 50 ug. 
La velocidad de la reacción depende de diversas variables, siendo el tiempo, la temperatura y el 
pH las principales. 
Metodología 
1) Se colocan tres muestras de una concentración conocida en la placa de 96 pozos. Se 
realiza lo mismo a diversas concentraciones para la formación de la curva patrón. 
2) Se colocan tres muestras iguales de la concentración a determinar de proteínas 
3) Se añade el reactivo BCA: Por cada parte de la solución B se añaden 50 partes de la 
solución A. Se integran bien y se añaden 200 uL a cada pozo con muestra. 
4) Se incuba a 37°C por lo menos media hora. 
5) Se lee la absorbancia a 562 nm en el espectrofotómetro. Las muestras de concentración 
serán consideradas para la realizar la curva patrón. 
6) Se hace la comparación de la absorbancia promedio de cada una de las tres repeticiones 
de cada muestra con la absorbancia de las concentraciones conocidas usando la 
ecuación de la recta. 
Propuesta de curva patrón 
 
y = 0.0094x + 0.0784
R² = 0.9714
0
0.5
1
1.5
2
2.5
0 50 100 150 200 250
A
b
so
rb
an
ci
a
Concentración proteínas uG
Curva patrón
Linear (Curva estándar)
 
Volúmenes usados en la preparación de las muestras 
Concentración 
proteínas 
uG/uL 
Volumen 
concentrado 
proteínas 
uG/uL 
Volumen 
reactivo A 
uL 
Volumen 
reactivo 
B uL 
Volumen 
agua uL 
Volumen 
total Absorbancia 
200 4 200 4 42 46 uL 1.919 
150 3 200 4 43 46 uL 1.425 
100 2 200 4 44 46 uL 1.107 
75 1.5 200 4 44.5 46 uL 0.892 
50 1 200 4 45 46 uL 0.65 
25 0.5 200 4 45.5 46 uL 0.1088 
0 0 200 4 46 46 uL 0.084 
 
Referencias 
Chang-Hui, S. (2019) Quantification and Analysis of proteins. Diagnostic Molecular Biology. 
Primera edición. Paginas 187-214. 
ThermoFisher (2023) BCA Assay. Thermo Fisher. Recuperado de 
https://www.thermofisher.com/mx/es/home/life-science/protein-biology/protein-assays-
analysis/protein-assays/bca-protein-assays.html 
Thermo Scientific Pierce (2014) BCA PROTEIN Assay Reagent. YouTube. Recuperado de 
https://www.youtube.com/watch?v=xBQXQW_Vfoo 
https://www.thermofisher.com/mx/es/home/life-science/protein-biology/protein-assays-analysis/protein-assays/bca-protein-assays.html
https://www.thermofisher.com/mx/es/home/life-science/protein-biology/protein-assays-analysis/protein-assays/bca-protein-assays.html