BBM2_U3_A2_JEMP

Vista previa del material en texto

Universidad Abierta y a Distancia 
de México 
División de Ciencias de la Salud, 
Biológicas y Ambientales 
Ingeniería en Biotecnología 
 
 
Biología Molecular II 
 
 
Unidad 3 
Actividad 2 
Enzimas de restricción y vectores de clonación 
 
Jessica Verónica Mendoza Prado 
ES202104539 
 Grupo BI-BBM2-2203-B1-002 
 
15 de marzo de 2023 
 
Enzimas de restricción 
N
o
m
b
re
 d
e 
la
 
en
zi
m
a 
 
Secuencia de 
reconocimiento 
Microorganismo 
de origen 
Tipo de 
corte 
Condiciones de buffer PH Temperatura Tiempo de 
incubación 
Presentación 
comercial 
H
h
a1
 
GCG/C 
 
Cepa de E. coli 
que porta el gen 
Hha1l de 
Haemophilus 
haemolyticus 
Cohesivo 
Buffer rCutSmart 
Buffer que incluye 100 
UG/ML albumina 
recombinante. 
10.Mm Acetato de 
magnesio 
20 Mm Tris-acetato 
50 Mm Acetato de 
potasio 
pH 
7.9 a 
25°C 
-20°C de 
almacenamiento 
37°C de reacción 
65°C por 20 
minutos para 
inactivación 
1 hora por 
unidad para 
digerir un 
ug de DNA a 
37°C en un 
volumen 
toral de 
reacción de 
50 Ul 
0.1 ml 
20000 
unidades / 
ml 
H
in
d
II
I 
En
zi
m
a 
d
e
 a
lt
a 
fi
d
e
lid
ad
 
A/AGCTT 
 
Cepa de E. coli 
que porta el gen 
HindIII de 
Haemophilus 
influenzae 
Cohesivo 
Buffer NEBuffer r2.1 
Buffer que contiene 
código de color que 
asegura la actividad 
de la enzima. 
50 mm NaCl 
10 Mm Tris-HCl 
10 mm MgCl2 
100 ug/ ml albumina 
recombinante 
pH 
7.4 a 
25°C 
-20°C de 
almacenamiento 
37°C de reacción 
80°C por 20 
minutos para 
inactivación 
1 hora por 
unidad para 
digerir un 
ug de DNA a 
37°C en un 
volumen 
toral de 
reacción de 
50 Ul 
0.2 ml 
20000 
unidades / 
ml 
N
o
tI
 
GC/GGCCGC 
 
Cepa de E. coli 
que contiene el 
gen NotI de 
Nocardia otitidis 
caviarum 
Cohesivo 
Buffer NEBuffer r3.1 
Buffer que contiene 
código de color que 
asegura la actividad 
de la enzima. 
100 mm NaCl 
50 Mm Tris-HCl 
10 mm MgCl2 
100 ug/ ml albumina 
recombinante 
pH 
7.9 a 
25°C 
-20°C de 
almacenamiento 
37°C de reacción 
65°C por 20 
minutos para 
inactivación 
1 hora por 
unidad para 
digerir un 
ug de DNA 
pBC4 a 37°C 
en un 
volumen 
toral de 
reacción de 
50 Ul 
0.5 ml 
10000 
unidades / 
ml 
Fo
kl
 
GGATG(9/13
 
Cepa de E. coli 
que contiene el 
gen 
Flavobacterium 
okeanokoites 
Romo 
Buffer rCutSmart 
Buffer que incluye 100 
UG/ML albumina 
recombinante. 
10.Mm Acetato de 
magnesio 
20 Mm Tris-acetato 
50 Mm Acetato de 
potasio 
pH 
7.9 a 
25°C 
-20°C de 
almacenamiento 
37°C de reacción 
65°C por 20 
minutos para 
inactivación 
1 hora por 
unidad para 
digerir un 
ug de DNA 
pBC4 a 37°C 
en un 
volumen 
toral de 
reacción de 
50 Ul 
0.2 ml 
5000 
unidades / 
ml 
A
cu
l 
CTGAAG 16/14 
 
Cepa de E. coli 
que porta el gen 
Acul de 
acinetobacter 
calcoaceticus 
Romo 
Buffer rCutSmart 
Buffer que incluye 100 
UG/ML albumina 
recombinante. 
 
pH 
7.9 a 
25°C 
-20°C de 
almacenamiento 
37°C de reacción 
65°C por 20 
minutos para 
inactivación 
1 hora por 
unidad para 
digerir un 
ug de DNA a 
37°C en un 
volumen 
toral de 
reacción de 
50 Ul 
0.6 ml 
5000 
unidades / 
ml 
. 
Vectores de clonación y expresión 
Vector Tamaño kb Genes marcadores Sitio o mapa de restricción Sistema de 
clonación 
Vector de 
clonación o de 
expresión 
p-MONO-
hygro-mcs 
4.03 kb 
Hph gen de E. coli 
que codifica para 
una 
fosfotransferasa, 
otorgándole 
resistencia a 
Higromicina B 
 
Plásmido 
Vector de 
expresión 
Pmono-blasti-
mcs 
3.4 kb 
Bsr confiere 
resistencia a 
blasticidina, 
obtenido de 
Bacillus cereus. Es 
dirigido por el 
promotor CMV en 
tándem, 
permitiendo 
selección en 
células mamarias y 
en E. coli 
 
Plásmido 
Vector de 
expresión 
Psp73 Vector 
GenBank 
2.4 kb 
Genes de beta 
lactamasa 
 
Plásmido 
Vector de 
clonación 
Pselect-NGFP-
zeo 
3.8 kb 
Sh ble gen, que le 
confiere 
resistencia a la 
zeocina. 
 
Plásmido 
Vector de 
clonación 
Fadl-2blue 
7.8 kb 
Gen Amp que le 
confiere 
resistencia a la 
ampicilina por B 
lactamasa 
 
Fago 
Vector de 
clonación 
 
Referencias 
New England Biolabs (2023) AcuI. New England Biolabs. Recuperado de https://international.neb.com/products/r0641-
acui#Product%20Information_Reagents%20Supplied 
New England Biolabs (2023) FokI. New England Biolabs. Recuperado de https://international.neb.com/products/r0109-
foki#Product%20Information_Reagents%20Supplied 
New England Biolabs (2023) HindIII. New England Biolabs. Recuperado de https://international.neb.com/products/r0104-
hindiii#Product%20Information_Reagents%20Supplied 
New England Biolabs (2023) NotI. New England Biolabs. Recuperado de https://international.neb.com/products/r0189-
noti#Product%20Information_Reagents%20Supplied 
InvivoGen (s.f.) Pmono-blasti-mcs. InvivoGen. Recuperado de https://www.invivogen.com/sites/default/files/invivogen/products/files/pmono-
blasti-mcs_tds.pdf 
InvivoGen (s.f.) Pselect-ngfp-zeo. InvivoGen. Recuperado de https://www.invivogen.com/sites/default/files/invivogen/products/files/pselect-
ngfp-zeo_tds.pdf 
Promega (2023) Psp73 vector. Promega. Recuperado de https://worldwide.promega.com/products/cloning-and-dna-markers/cloning-vectors-
and-kits/psp73-vector/?catNum=P2221 
Antibody Design Laboratories (2021) Fadl-2blue Trypsin Sensitive Phage Vector. Antibody Design Laboratories. Recuperado de 
https://www.abdesignlabs.com/content/manuals/fADL-2blue%20manual.pdf 
https://international.neb.com/products/r0641-acui#Product%20Information_Reagents%20Supplied
https://international.neb.com/products/r0641-acui#Product%20Information_Reagents%20Supplied
https://www.invivogen.com/sites/default/files/invivogen/products/files/pmono-blasti-mcs_tds.pdf
https://www.invivogen.com/sites/default/files/invivogen/products/files/pmono-blasti-mcs_tds.pdf
https://www.invivogen.com/sites/default/files/invivogen/products/files/pselect-ngfp-zeo_tds.pdf
https://www.invivogen.com/sites/default/files/invivogen/products/files/pselect-ngfp-zeo_tds.pdf
https://worldwide.promega.com/products/cloning-and-dna-markers/cloning-vectors-and-kits/psp73-vector/?catNum=P2221
https://worldwide.promega.com/products/cloning-and-dna-markers/cloning-vectors-and-kits/psp73-vector/?catNum=P2221