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Universidad Abierta y a Distancia de México División de Ciencias de la Salud, Biológicas y Ambientales Ingeniería en Biotecnología Genética Molecular Bacteriana Unidad 1 Evidencia de aprendizaje Transferencia de material genético Jessica Verónica Mendoza Prado ES202104539 Grupo BI-BGMB-2301-B2-002 7 de mayo de 2023 Captura de pantalla ¿Qué es la recombinación como proceso de material genético? La recombinación es la producción de una molécula de material genético a partir de dos moléculas padres o segmentos diferentes de la misma molécula de material. Es un proceso muy importante, causante de la diversidad genética que existe entre los organismos de una misma especie. En las células eucariotas generalmente ocurre durante la meiosis, como en la gametogénesis. Existen cuatro tipos de recombinación: homologa que se da entre moléculas de ADN de secuencia similar y se da en organismos diploides; recombinación no homóloga que se da en secuencias que no son similares a gran escala; de sitio específico que ocurre entre secuencias cortas de 12-24 pb que requiere maquinaria muy específica y finalmente recombinación replicativa, que genera una nueva copia de un segmento de ADN, muy usada en transposones. ¿Cuáles son los dos modelos de recombinación homóloga en bacterias? Se han descrito modelos muy diversos pero los más reconocidos son el modelo de Holliday propuesto en 1964 y el modelo de Meselson Radding propuesto en 1975, ambos con el propósito de explicar la recombinación en E. coli. Explica como se lleva a cabo el modelo Hollyday Fue propuesto por Robin Holliday y es el modelo más sencillo. Se basa en tres características: • Debe haber rompimiento de dos cadenas homologas • El intercambio es simétrico, lo que genera una región heterodúplex. • La unión Holliday es resuelta por una de las vías posibles para la resolución. Se propone que las hélices se alinean de forma específica, para rotarse permitiendo orientar hacia la misma dirección la polaridad de las cadenas. Una nucleasa corta las cadenas, dejando las cadenas complementarias libres para que se produzca una unión entre ellos por enlaces de hidrógeno. Esta unión transitoria es la conocida como unión de Holliday. Se rompe esta unión por acción de nucleasas y ligasas quedando las cadenas intercambiadas en una región que es heterodúplex no recombinante o que queden las que no han sido intercambiadas para producir dos cadenas recombinantes con una región heterodúplex. En resumen: Pasos de las uniones de Holliday • 1.Corte endonucleolitico • 2.Generacion de cadena sencilla de ADN por MRN • 3.Invasion de cadena sencilla a doble hélice homologa • 4. Se sintetiza el DNA • 5.Se ligan y se generan 2 uniones Holliday • 6. Tenemos 2 resoluciones: combinante y no combinante Explica como se lleva a cabo el modelo Meselson Randing Propuesto por Mathew Meselson y Charles Radding es una modificación del modelo de Holliday que incluye eventos precios al intercambio de las cadenas del ADN. • Iniciación del mecanismo de recombinación en rompimientos de cadena sencilla el ADN, acoplado al proceso de replicación. • invasión de cadenas. • Degradación de la cadena retrasada. Hay en primer lugar rompimiento de cadena sencilla, que será el lugar de desplazamiento preferido por la ADN polimerasa. Por ello, la cadena sencilla se une a una secuencia complementaria de otra molécula de ADN e introduce un rompimiento en la secuencia, que aumenta la transferencia e intercambio de material entre ellas. Al salir la polimerasa del sitio, las cadenas rotan para formar las uniones Holliday, donde puede haber migración de las cadenas y resultar en moléculas heterodúplex simétricas. El modelo propone que cualquier error producido durante el proceso es posible repararlo. ¿Qué es un transposón conjugativo? Ilustración 1Uniones Holliday Ilustración 2 Modelo Meselson Randing Es una molécula descrita como una forma quimérica, pues cuenta con propiedades de transposones, plásmidos y bacteriófagos. Su importancia radica en su papel esencial en la resistencia a los antibióticos, incluyendo cocos Gram positivos y Bacteriodes spp. Son elementos de ADN que se integran normalmente al genoma bacteriano. A diferencia de los transposones, no replican el sitio diana cuando se integran al ADN. Son similares a los plásmidos por que tienen un intermediario circular y son transferidos por conjugación, pero a diferencia de estos su intermediario circular no se replica. Finalmente, son similares a los fagos porque tienen la capacidad de seccionarse e integrarse, pero son diferentes porque no forman partículas virales y no son transferidos por transducción. ¿Qué relación tienen los transposones conjugativos con la resistencia a los antibióticos? Los transposones portan genes de resistencia a antibióticos, siendo de los principales medios de transmisión de la resistencia a los mismos. Se le atribuyen la multi resistencia de patógenos oportunistas como Enterococcus vancomicina resistente, meticilin resistente Staphylococcus aureus y Enterobateriaceae beta lactamasa resistente de amplio espectro, convirtiéndolos en una amenaza para la salud. La mayor parte de los transposones conjugativos en patógenos Gram positivo pertenecen a la familia Tn916, que confieren resistencia a todas las clases de antibióticos usadas en este grupo. A pesar de su relevancia para la salud, los transposones conjugativos son las moléculas de ADN móviles menos entendidas. ¿A qué transposón corresponde el alineamiento? Corresponde al transposón Tn1545 xis-Tn & int-Tn que codifica genes de esciocionasa e integrasa, otorgando resistencia a kanamicina, eritromicina y tetraciclina. ¿Qué otras especies de bacteria poseen este transposón? Originalmente S. pneumoniae, pero se ha encontrado en organismos Gram positivos cono E. faecalis y S. aureus. ¿A qué tipo de antibióticos da resistencia este transposón? Ilustración 3 Transposones conjugativos Ilustración 4 Transferencia de resistencia a antibioticos por transposones conjugativos Este transposón tet(M) da resistencia contra las tetraciclinas (tetraciclina, doxiciclina, tigeciclina), protegiendo la subunidad 30s del ribosoma contra la acción del antibiótico. Se encuentra en la bacteria S. pneumoniae, causante de neumonía, otitis media y meningitis. ¿Qué proteínas se expresan con este transposón y cuáles son sus funciones? Codifica las llamadas proteínas de protección ribosómica. Cataliza la liberación de la tetraciclina del ribosoma en una forma mediada por GTP. Son proteínas citoplasmaticas solubles de aproximadamente 72 kDa, sus similar con los factores de elongación ribosomal EF-G y EF-Tu le permiten mantener a la subunidad su actividad, funcionando como factores de elongación. Pueden además desalojar al ribosoma de la tetraciclina en presencia de GTP, permitiendo que continue la síntesis de proteínas. ¿Qué es la segregación cromosómica? Es un evento que ocurre durante la mitosis o meiosis, donde los cromosomas homólogos se separan y se distribuyen de forma aleatoria en los gametos en el caso de la meiosis, o de la separación de los alelos de un locus y su distribución en las células hijas en la mitosis. ¿Qué beneficios le otorga a la bacteria la curación? 1. Ahorro de energía: Los plásmidos son elementos genéticos extracromosómicos que se replican de manera independiente dentro de las bacterias. Al curar plásmidos no esenciales, las bacterias liberan la carga metabólica y energética asociada con el mantenimiento y replicación de esos plásmidos. 2. Estabilidad genética. Al curar plásmidos no esenciales, las bacterias pueden mantener una carga genética más estable y reducir el riesgo de perder información genética importante debido a eventos de transferenciahorizontal o mutaciones. 3. Prevención de inestabilidades genéticas: Algunos plásmidos pueden sufrir inestabilidades genéticas, como reordenamientos cromosómicos, mutaciones o pérdidas parciales o totales de su contenido genético. Estas inestabilidades pueden afectar negativamente la capacidad de supervivencia y adaptación de las bacterias Referencias Benitez, J. (2023) Segregación. Instituto Roche. Recuperado de https://www.institutoroche.es/recursos/glosario/Segregaci%C3%B3n Ilustración 5Estructura tridimensional de tet(m) Ilustración 6 Segregación cromosómica Connell, S. R., Tracz, D. M., Nierhaus, K. H., & Taylor, D. E. (2003). Ribosomal protection proteins and their mechanism of tetracycline resistance. 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