Actividad 1 práctica 3 Biofarmacia

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Tabla 1. Comparación entre la actividad desarrollada en el documento y la práctica de 
laboratorio. 
 Determinación de 
paracetamol (HPLC). 
Determinación de cafeína, 
paracetamol y/o ácido 
acetilsalicílico por HPLC. 
Metodología Se busca construir una curva 
patrón que contenga las 
siguientes concentraciones 
de paracetamol: 25, 50 y 100 
mg/L. Esto mediante la 
colocación de 0.2 ml de 
plasma de la muestra 
problema en un tubo de 
ensayo de fondo cónico. 
Posteriormente agregar 0.2 
ml de acetonitrilo al objeto de 
precipitar las proteínas. 
Agitar en vortex durante al 
menos 2 minutos. 
Centrifugar a 3000 rpm 
durante 3 minutos. Decantar 
el sobrenadante en un tubo 
limpio y finalmente inyectar 
10 µl del sobrenadante en el 
HPLC. 
Se busca realizar el análisis 
del contenido de 
paracetamol, cafeína y ácido 
acetilsalicílico en 
comprimidos con estos 
principios activos. 
Se debe realizar una curva 
de calibración y un análisis 
de las muestras. 
Por otro lado, se debe 
obtener la masa del 
componente por tableta y la 
masa del componente / 
masa del comprimido. 
Finalmente, se debe 
identificar si la dispersión de 
la composición del lote 
difiere de la precisión del 
análisis. 
Reactivos - Acetonitrilo 
- Metanol 
- Buffer perclorato-
perclórico pH 2.5. 
- Agua milli-Q system 
- 1L ácido acético 
- 1L metanol grado HPLC 
- Muestra desconocida 
(Proporcionada por el 
profesor). 
- Agua destilada 
Materiales - Pipeta automática de 
200-1000 μL. 
- Tubos de cristal de 
fondo cónico. 
- Agitador o vortex. 
- Centrífuga. 
- Pipeta Hamilton 25 μL. 
- HPLC Perkin Elmer 
mod. Series 200 
- HPLC. 
- Detector UV/VIS 
- Jeringa tipo 
Hamilton, 
apreciación 2 μL. 
- Columna de acero 
inoxidable para 
HPLC. 
- Micropipeta 
automática de 1000 
μL. 
- Micropipeta 
automática de 200 
μL. 
Objetivos - En los 
procedimientos de 
HPLC se valorará el 
cromatograma. En él 
se tendrá en cuenta 
- Determinar el 
contenido de las 
sustancias: cafeína, 
paracetamol y ácido 
acetilsalicílico en 
tanto el tiempo de 
retención (expresado 
en minutos) como el 
área y se comparará 
con los obtenidos 
para los patrones de 
concentraciones 
conocidas (25, 50 y 
100 mg/L en nuestro 
caso). 
 
- Se realizará un 
espectro, 
comprobando la 
longitud de onda 
característica de la 
sustancia a 
investigar. En el caso 
particular del 
paracetamol, se 
valorará el espectro 
UV obteniendo una 
longitud de onda 
máxima a 245 nm. 
medicamentos 
mediante 
cromatografía de 
líquidos de alta 
eficiencia (HPLC). 
- Optimizar las 
condiciones de 
análisis para la 
mezcla de 
componentes en el 
medicamento. 
- Determinar 
cuantitativamente los 
componentes del 
medicamento 
mediante una curva 
de calibración 
externa. 
- Comparar la 
precisión del análisis 
y la precisión del lote 
de los comprimidos. 
 
 
Referencia 
 
GIl, F., et. al. (s.f). Determinación de paracetamol (HPLC o Cromatografía Líquida de Alta 
Resolución). Consultado el 21 de agosto de 2021. Recuperado de: 
https://www.ugr.es/~fgil/proyecto/paracetamol/index.html 
https://www.ugr.es/~fgil/proyecto/paracetamol/index.html