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BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 1 UNIDAD TEMÁTICA N° 1 Versión 2007 INTRODUCCIÓN Introducción a la Biotecnología. Concepto y breve historia. Áreas de aplicación de la Biotecnología. Participación del Ingeniero en el diseño y conducción de industrias que utilicen procesos bioquímicos. INTRODUCCIÓN Y ASPECTOS GENERALES DE LA BIOTECNOLOGÍA ¿Qué es la biotecnología? El término “biotecnología” es relativamente nuevo para el común de las personas, sin embargo la biotecnología está presente en la vida cotidiana más de lo que imaginamos. De hecho, la biotecnología es una actividad tan antigua, que comenzó hace miles de años cuando el hombre descubrió que al fermentar las uvas se obtenía un producto como el vino. También es biotecnología la fabricación de cerveza a partir de la fermentación de cereales y la fermentación de jugo de manzanas para la fabricación de sidra. En estos procesos intervienen microorganismos que transforman componentes del jugo de frutas o de cereales en alcohol. Igualmente es biotecnología la fabricación de pan mediante el uso de levaduras, la elaboración de quesos mediante el agregado de bacterias, y también de salames o aceitunas. El yogur es un buen ejemplo de un producto que se obtiene mediante procesos biotecnológicos desde la antigüedad. Definiciones En sentido amplio, la biotecnología se puede definir como la aplicación de organismos, componentes o sistemas biológicos para la obtención de bienes y servicios. La Federación Europea de Biotecnología la definió como...“el uso integrado de la ingeniería, la bioquímica y la microbiología para conseguir la aplicación tecnológica (industrial) de las capacidades de los microorganismos, células de tejido cultivado y sus partes”. En resumen, la biotecnología es la aplicación de agentes biológicos ya sea en la industria manufacturera o en operaciones de servicio. La humanidad ha venido realizando biotecnología desde hace miles de años hasta la época moderna, si bien de un modo empírico, sin base científica: no entendía cómo ocurrían estos procesos, ni conocía la existencia de microorganismos, pero podían utilizarlos para su beneficio: La domesticación de plantas y animales ya comenzó en el período Neolítico. Las civilizaciones Sumeria y Babilónica en los años 6000 a.C. conocían cómo elaborar cerveza. Los egipcios ya sabían fabricar pan a partir del trigo hacia el 4000 a.C. Antes de la escritura del libro del Génesis, se disfrutaba del vino en el Cercano Oriente: recuérdese que, según la Biblia, Noé "sufrió" (o disfrutó…) accidentalmente los efectos de la fermentación espontánea del mosto de la uva (primera borrachera con vino). Otros procesos biotecnológicos conocidos de modo empírico desde la antigüedad: fabricación de queso; cultivo de champiñones; alimentos y bebidas fermentadas: salsa de soja, yogur, etc.; tratamiento de aguas residuales. BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 2 La biotecnología es intrínsecamente interdisciplinar La actual biotecnología es una empresa intensamente interdisciplinaria, caracterizada por la reunión de conceptos y metodologías procedentes de numerosas ciencias para aplicarlas tanto a la investigación básica como a la resolución de problemas prácticos y la obtención de bienes y servicios. Algunas de las ramas de conocimiento implicadas en la biotecnología: Microbiología. Bioquímica. Genética. Biología celular. Química. Ingeniería química. Ingeniería mecánica. Ciencia y Tecnología de alimentos. Electrónica. Informática. El avance de la biotecnología dependerá cada vez más de esta colaboración entre disciplinas, y en el uso de lenguajes y paradigmas comunes, así como en que cada especialista comprenda los logros y limitaciones de las otras ramas biotecnológicas. Se ilustra en la Figura 1.1. Figura 1.1. La Biotecnología como ciencia disciplinaria. BIOTECNOLOGÍA Biología Molecular Bioquímica Genética Molecular Microbiología Biología Celular Ingeniería de Procesos Diagnósticos Médicos Industria Química Industria Farmacéutica Industria Alimentaría y Forrajera Industria de las Fermentaciones Ambiente y Energía BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 3 BIOTECNOLOGÍA TRADICIONAL Y MODERNA Las aplicaciones mencionadas constituyen lo que se conoce como biotecnología tradicional y se basa en la obtención y utilización de los productos del metabolismo de ciertos microorganismos. Se puede definir la biotecnología tradicional como “la utilización de organismos vivos para la obtención de un bien o servicio útil para el hombre”. Biotecnología tradicional aplicada a la industria La biotecnología se aplica a diferentes ramas de la industria: alimenticia, textil, detergentes, combustibles, plásticos, papel, farmacéutica. En general lo que se usa son productos del metabolismo de los microorganismos. Por ejemplo, algunas de las aplicaciones de la biotecnología tradicional a la industria son: El alcohol usado por la industria alimenticia o farmacéutica, y también como combustible (en Brasil se produce alconafta a partir de la caña de azúcar). Producción de yogures probióticos en los que se usa el microorganismo entero que está presente en el producto final. A partir de microorganismos se pueden fabricar ácidos orgánicos para diferentes aplicaciones, como el ácido cítrico para acidificar gaseosas y golosinas. Muchos antibióticos son fabricados por microorganismos, como la penicilina por el hongo Penicillium. Los plásticos son polímeros de diferentes estructuras químicas, la mayoría de los cuales se producen a partir de derivados de petróleo. Sin embargo hay microorganismos que fabrican polímeros biodegradables. Las enzimas, proteínas cuya función es de ser de catalizadores biológicos. Se utilizan habitualmente en los detergentes o polvos para lavar la ropa. Por ejemplo, lipasas para sacar manchas de grasas, proteasas para sacar manchas de proteínas, etc. En la industria alimenticia también se usan enzimas: para clarificar jugos, en la elaboración de quesos, entre otros. En la industria textil para ablandar los jeans se usa celulasa, que degrada la celulosa, principal componente de las células vegetales (entre ellas, las células del algodón que es el principal componente de la tela de jean). Mediante un proceso controlado (temperatura, tiempo, cantidad y tipo de celulasa) se logran diferentes texturas de jeans. También se usa la enzima celulasa en la industria del papel (formado por celulosa) para lograr diferentes texturas. La biotecnología moderna Actualmente los científicos comprenden mucho más cómo ocurren los procesos biológicos que permiten la fabricación de productos biotecnológicos. Esto les ha permitido desarrollar nuevas técnicas a fin de modificar o imitar algunos de esos procesos y lograr una variedad mucho más amplia de productos. La ciencia sabe hoy, además, que los microorganismos sintetizan compuestos químicos y enzimas que pueden emplearse eficientemente en procesos industriales. Estos conocimientos dieron lugar al desarrollo de la biotecnología moderna. A diferencia de la biotecnología tradicional, la biotecnología moderna surge en la década de los ’80, y utiliza técnicas, denominadas en su conjunto ingeniería genética, para modificar y transferir genes de un organismo a otro. El siguiente esquema resume la definición actual del término biotecnología: BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 4 A través de la biotecnología moderna es posible producir insulina humana en bacterias y, consecuentemente, mejorar el tratamiento de la diabetes. Por ingeniería genética también se fabricala quimosina, enzima clave para la fabricación del queso y que evita el empleo del cuajo en este proceso. La ingeniería genética también es hoy una herramienta fundamental para el mejoramiento de los cultivos vegetales. Por ejemplo, es posible transferir un gen proveniente de una bacteria a una planta, tal es el ejemplo del maíz Bt. En este caso, los bacilos del suelo fabrican una proteína que mata a las larvas de un insecto que normalmente destruyen los cultivos de maíz. Al transferirle el gen correspondiente, ahora el maíz fabrica esta proteína y por lo tanto resulta refractaria al ataque del insecto. La biotecnología moderna avanza y, en la actualidad, son muchos los países que utilizan las técnicas de ingeniería genética para la obtención de diferentes productos que tienen aplicación en la producción de alimentos, de medicamentos, y de productos industriales. UN POCO DE HISTORIA… Por supuesto, hasta la llegada de la moderna biología, y en muchos casos hasta el siglo XIX, la base de muchos de estos procesos era desconocida. De hecho, solamente en el siglo XVIII cobra cuerpo la idea de que la materia viva puede ser estudiada de igual forma que la materia inanimada, es decir, usando el método experimental, con lo que se inicia el lento declive de las ideas vitalistas (creencias erróneas de que "la vida depende de un principio vital irreducible a otras ramas de la ciencia"), que aún darían sus últimos estertores casi al final del siglo XIX. Algunos hitos científicos que sentarían la base de la biotecnología contemporánea: Los primeros microscopistas, como van Leeuwenhoek y Hooke (siglo XVII) describen los "animálculos" que están fuera del alcance del ojo, si bien se tarda aún un par de siglos en captar la importancia de estas minúsculas criaturas. El descubrimiento de que las fermentaciones se debían a microorganismos se debe a la gigantesca figura de Louis Pasteur, en sus estudios realizados entre 1857 y 1876. En la última parte del siglo XIX ya existían instalaciones industriales para obtener etanol, ácido acético, butanol y acetona, aprovechando fermentaciones al aire libre en condiciones no estériles. A finales del siglo XIX, la "edad de oro de la bacteriología" permite: mejoras importantes en las técnicas microscópicas; Biotecnología tradicional Empleo de organismos para la obtención de un producto útil para la industria. Biotecnología moderna Es la que emplea las técnicas de ingeniería genética. La biotecnología es el empleo de organismos vivos para la obtención de un bien o servicio útil para el hombre, e incluye la producción de proteínas recombinantes, el mejoramiento de cultivos vegetales y del ganado y el empleo de organismos para limpiar el medio ambiente. + BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 5 el desarrollo de técnicas asépticas, la esterilización y la pasteurización; la posibilidad de cultivar cada cepa microbiana sin mezclas con otras: cultivos puros en medios de cultivo de laboratorio. A comienzos del siglo XX la bioquímica y la microbiología convergen, estableciendo las bases enzimáticas y metabólicas de muchos procesos de fermentación. Se desarrollan procedimientos industriales para producir enzimas (invertasa, proteasas, amilasas, etc.). Desde la década de 1940, las técnicas de ingeniería química, aliadas a la microbiología y a la bioquímica, permiten la producción de antibióticos, ácidos orgánicos, esteroides, polisacáridos y vacunas. La penicilina comenzó a fabricarse en plena II Guerra Mundial, como resultado de avances importantes en técnicas de esterilización a gran escala, mejora de las instalaciones de fermentación (incluyendo la cuestión de la aireación), cultivo del hongo, etc. A partir de entonces se diseñaron estrategias para mejorar genéticamente las cepas microbianas industriales. Las décadas siguientes fueron de eclosión de producción de antibióticos así como de transformaciones de esteroides y de cultivo de células animales para la producción de vacunas antivirales. Las décadas de los 60 y 70 vieron la mejora de procesos de obtención de pequeños metabolitos como aminoácidos y vitaminas. Los procesos de fermentación experimentaron mejoras con las técnicas de inmovilización de células y enzimas en soportes, y con la fermentación continua para obtener proteína de células sencillas (biomasa microbiana). Polímeros microbianos como xantanos y dextranos se obtuvieron industrialmente, con aplicaciones en el campo de la alimentación (como aditivos). Pero incluso bien avanzado el siglo XX, cuando la Genética había resuelto el misterio de la naturaleza del material de la herencia, las posibilidades que había para actuar sobre dicho material eran limitadas: cruces entre plantas y animales de la misma especie (o de especies similares), selección de los individuos con rasgos deseados, mutaciones con agentes físicos (rayos UV, rayos X) o químicos, con ulterior búsqueda (selección o rastreo -screening) de alguna variante de interés (algo tedioso y frecuentemente infructuoso), etc. Debemos esperar a la década de los 70 para que surja un conjunto de técnicas de laboratorio revolucionarias que por primera vez permiten "tocar" de modo racional el sancta sanctorum de la vida. Son técnicas y herramientas con las que se puede modificar el ADN de acuerdo a diseños previos y objetivos concretos (de ahí el nombre popular de Ingeniería Genética). La Ingeniería Genética (I.G.), mejor llamada “Tecnología del ADN recombinante in Vitro”, se caracteriza por su capacidad de cortar y empalmar genes o fragmentos de ADN de organismos distintos, creando nuevas combinaciones no existentes en la Naturaleza, que se ponen a trabajar en el interior de una variedad de organismos hospederos, para nuestro provecho. Clasificación de la Biotecnología en ERAS. La evolución de la biotecnología en la escala del tiempo se ilustra bien en la Tabla 1.1. BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 6 Tabla 1.1. Biotecnología – calendario de eventos (según Houwink, 1894) La era pre, Pasteur, antes de 1861 Bebidas alcohólicas (cerveza, vino). Productos lácteos (quesos, yogur). Otros alimentos fermentados. La era Pasteur, 1861 .- 1940. Etanol, butanol, acetona, glicerol. Ácidos orgánicos (ácido cítrico). Tratamiento aerobio de aguas residuales. La era de los antibióticos, 1940 – 1960. Penicilinas: tecnología de fermentación sumergida. Gran variedad de antibióticos. Tecnología de la estructura de la célula animal; vacunas contra virus. Transformaciones microbiológicas de esteroides. La era post - antibióticos, 1960 – 1975. Aminoácidos. Proteína celular (SCP). Enzimas (detergentes). Tecnología de células y enzimas inmovilizadas (glucosa isomerasa). Tratamiento anaerobio de aguas de desecho (biogas). Polisacáridos bacterianos (goma de xantano). Gasohol. La era de la nueva biotecnología, 1975 ……. Tecnología de los hibridomas: anticuerpos monoclonales. Pruebas diagnósticas con anticuerpos monoclonales (1980). Ingeniería genética (1977). Vacunas de origen animal contra la diarrera (1982). Insulina humana (1982). La era anterior a Pasteur Se basaba en que la elaboración de los alimentos y bebidas fermentadas tradicionales se realizaba sin ningún conocimiento de biología. Mucho antes de que el hombre conociera la existencia de microorganismos, éstos afectaban su vida: abonando los suelos, destruyendo sus cosechas, fermentando sus bebidas, afectando su salud. No conocía la existencia de una célula, pero su anatomía y la de los animales y vegetales que la rodeaban evolucionaban en forma constante. Por milenos, estos procesos se sucedieron sin la intervención del ser humano, o fueron descubiertos por obra de la casualidad. Algunos autores fijan el origen de estas ciencias en tiempos muy remotos.Ya el filósofo griego Aristóteles (s. IV a.C.) había realizado un intento de división de los animales, sobre todo marinos, donde incluía los insectos. Fueron necesarios más de 20 siglos para mejorar esta clasificación. BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 7 Animales con sangre roja Animales de sangre roja (Nacen vivos) (Nacen de huevos) Mamíferos Crustáceos, moscas, piojos, chinches etc. (Decía que nacían espontáneamente: se decía que por alteración de una sustancia espontáneamente se engendraba un ser vivo) actuales vertebrados actuales invertebrados Siendo la microbiología la ciencia que estudia seres muy pequeños, es lógico suponer que no hubo una verdadera ciencia de los microbios hasta que no se inventó una manera de observarlo. Con el desarrollo de los microscopios, la biología experimentó una revolución, ya que hasta entonces los organismos más pequeños descriptos eran los insectos diminutos. A partir de entonces, el desarrollo y complejización de los microscopios (palabra que en griego significa “para ver lo pequeño”) fue constante. No fue sino hasta el siglo XVII que Antonio van Leeuwenhoek (1674), demostró por primera vez la presencia de microorganismos con la invención del microscopio simple, con lo cual se describen los primeros microorganismos y células superiores. Este siglo fue llamado “siglo de los microscopistas”. 0,1µ 1µ 5µ 10µ 100µ Virus Bacterias Levaduras Glóbulos Rojos Óvulo humano Ya en 1590 Sacharias Janssen había inventado el microscopio compuesto (Figura 1.2), usado por Robert Hooke en la segunda mitad del siglo, quien publicó el libro llamado Micrographia; en el que pueden encontrarse algunos de los mejores dibujos que se hallan hecho de observaciones microscópicas. Una de sus observaciones simples pero más importantes fue la de un delgado trozo de corcho, constituido por una fina trama de pequeñas celdas a las que él llamó “células”, un término habitual para designar pequeñas habitaciones en los monasterios. Figura 1.2. Microscopio usado por Hooke y el dibujo de las “células” del tejido de corcho BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 8 Sin embargo Leeuwenhoek, con un microscopio de una sola lente (hábilmente construyó mas de 400 microscopios), describió bacterias y células superiores (Figura 1.3). a) b) c) d) Figura 1.3 (a) Fotografía de una copia del microscopio de Leeuwenhoek. (b) Anthony van Leeuwenhoek. (c) Detallesd del microscopio. (d) Dibujos de bacterias por Leeuwenhoek, publicados en 1864. Dibujos sencillos donde se pueden reconocer varios tipos morfológicos de bacterias comunes. A, C, F y G son formas bacilares; E, formas esféricas o cocos; H, grupos de cocos. El hecho resulta sorprendente, puesto que el principio del microscopio compuesto es aplicado en los aparatos modernos, mientras que el microscopio simple no solo logra aumentos menores, sino que las imágenes adolecen de defectos muy marcados si el ojo o el objeto se alejan del eje óptico de la lente. No obstante, las lentes que Leewenhoek fabricó, tenían menos defectos que las del microscopio de Hooke. Mediante cuidadosas manipulaciones y un buen enfoque, fue capaz de ver organismos tan pequeños como las bacterias, de las que realizó numerosas descripciones, llamándolas “animálculos” (little animals), aunque no hubo ningún intento de continuar o repetir sus experiencias hasta mucho después. Ello parece ser debido a que Leeuwenhoek guardó para sí el secreto de la fabricación de sus microscopios. El redescubrimiento de sus descripciones ha colocado a estas entre las conquistas más fundamentales de la ciencia de todos los tiempos. BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 9 En este siglo se realizaron numerosos experimentos relacionados con el origen de la vida. Van Helmont había hallado la receta para obtener ratones por generación espontánea. Redi, un médico italiano, realizó trabajos para corroborar la generación espontánea: Colocó una serie de frascos con la misma mezcla de diversas carnes (cabra, oveja, vaca, etc.). A la mitad de los frascos los tapó. Al cabo de un día o más todos entraron en putrefacción. En los destapados aparecieron gusanos de los huevos inoculados con moscas. Decía que no habían gusanos porque faltaba el “fluido vital”.Joblot, 50 años mas tarde, probó que hirviendo infusiones de heno se podía prevenir la putrefacción, siempre que el líquido hervido no fuera expuesto al aire. S. XVIII: Las cuidadosas experiencias de Needham (clérigo inglés-1784) sin embargo, aunque similares a las de Robot, dieron resultados opuestos. Vio luego a lo 30’ de ebullición, los caldos igual se alteraba; puede que halla encontrado organismos resistentes al calor bacterias esporuladas. Hoy se conoce que los esporos de pasto seco a veces siguen vivos hasta con 51/2 hs de ebullición (B. subtilis). Tiempo después, un clérigo italiano de apellido Spallanzani (1776) trató de rebatir a Needham con experimentos en los cuales el líquido (caldo) era hervido durante un tiempo más prolongado, para posteriormente impedir el acceso del aire con cierre hermético del recipiente (estirando el borde). Los líquidos que hirvieron 30 minutos permanecían inalterables durante meses, pero los que hirvieron 5 minutos se alteraban rápidamente. Esto demuestra que calentando durante un período de tiempo de 30 minutos una sustancia orgánica, tapada, sin contacto con el aire, puede permanecer mucho tiempo inalterable. Los resultados no fueron convincente, porque los sostenedores de la teoría de la generación espontánea todavía se refugiaban en la posibilidad de la existencia de una misteriosa “fuerza vital” en el aire, que podía ser destruida por el calor. Los trabajos de Spallanzani fueron los que posteriormente darían origen al conocido “método Appert” (1881). Más de medio siglo después, en 1836, Schultze retomó la cuestión con experiencias en las cuales el recipiente con el caldo de carne era conectado inmediatamente luego de la ebullición a dos frascos lavadores conteniendo soluciones de SO4H2 uno y de KOH el otro. El caldo permanecía inalterado indefinidamente. Estos hechos no convencieron del todo, porque aún se pensaba que el “fluido vital” no resistía el tratamiento. Tampoco están exentas de esta crítica las experiencias de Schwann, en el año siguiente, en las cuales el aire que entraba al frasco una vez hervido el contenido del mismo, se hacía pasar por un tubo espiral y se calentaba. A mediados del siglo XIX, sin embargo, resultaba difícil pensar en términos de “fluido” o “fuerza vital” para explicar las experiencias realizadas por Schroeder y von Dush, quienes filtraron el aire a través de algodón, con lo cual consiguieron los mismos resultados que sus antecesores. En este siglo la investigación de dos cuestionamientos importantes, que ya se venían realizando en los siglos anteriores, dio lugar al desarrollo de técnicas básicas para el estudio de microorganismos y dejó sentadas las bases para la fundación de la ciencia microbiológica: 1) ¿Existe la generación espontánea?* 2) ¿Cuál es la naturaleza de las enfermedades contagiosas? * La generación espontánea se refiere a que la vida puede originarse de algo inanimado, sin embargo mucha gente no podía imaginarse como algo tan complejo como una célula viva podía originarse espontáneamente de sustancias inertes. El estudio de estas dos preguntas fue paralelo y, en ocasiones, las mismas personas trabajaban en ambos problemas. A fines de este siglo el dilema quedó solucionado y se establecieron firmemente las bases de la microbiología como una ciencia independiente y endesarrollo. BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 10 La era Pasteur Fue en este siglo XIX el trabajo de Pasteur (científico francés, 1822-1895) el que mostró por primera vez que eran los microorganismos los agentes activos en procesos como las fermentaciones (producción de cerveza y vino), y la descomposición de los alimentos, con lo que la teoría de la generación espontánea recibió su “golpe de gracia”. Pasteur es hoy reconocido como el Padre de la Microbiología PASTEUR aseguraba que los microorganismos causantes de la fermentación y putrefacción procedían del aire y que no se generaban espontáneamente en el caldo. Trabajos de Pasteur (Químico) Tesis doctoral sobre isometría en cristales de tartrato, con la que contribuyó al estudio del fenómeno observado por Biot de la actividad óptica de sustancias orgánicas en solución, al descubrir que el fenómeno estaba relacionado con la estructura de los cristales. Luego de publicada su tesis, volcó su atención a las fermentaciones. Sus experiencias decidieron definitivamente la cuestión de la generación espontánea: Pasteur empleó el calor para eliminar los contaminantes pues ya sabía que el mismo destruía a los organismos vivos. Como los que apoyaban la generación espontánea criticaban los experimentos anteriores, declarando que el aire fresco era necesario para la generación, Pasteur resolvió la cuestión de manera muy simple y brillante, construyendo balones con cuello estirado formando curvas: “balón cuello de cisne”, también llamado “matraz de Pasteur” (Figura 1. 4). Figura 1.4. Experimento de Pasteur con el matráz de cuello de cisne. Luego de hervido, si permanece en forma vertical no hay crecimiento microbiano. Si los microorganismos atrapados en el cuello llegan al líquido estéril, crecen rápidamente. En estos recipientes podían calentarse los caldos hasta ebullición y después que se enfriaban, el aire podía entrar nuevamente, aunque las curvas del cuello evitaban la entrada de partículas como polvo del ambiente, y por ende, microbios. Las “gotitas” de agua de condensación depositadas a lo largo del tubo estrecho servían para detener las partículas. Los frascos así tratados se BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 11 mantuvieron inalterados, y los que eran abiertos por un corte del cuello mostraban fermentación al poco tiempo. Con este matráz la infusión permanecía en contacto con el fluido vital (por medio del cuello de cisne), por lo que no se pudo objetar que los gérmenes no se generaban por su falta. Este experimento tan simple es el aporte de Pasteur para “terminar” con la controversia que rodeaba la teoría de la generación espontánea, demostrando que los microbios, como otros seres vivos, proceden de otros seres vivos similares preexistentes. Los procedimientos que Pasteur y otros investigadores emplearon fueron, en un momento dado, aplicados a la investigación microbiológica. El refutar la teoría de la generación espontánea permitió el desarrollo de procedimientos eficaces de esterilización, sin los cuales la microbiología como ciencia nunca se hubiera desarrollado. Posteriormente se demostró que los frascos y otros envases podían ser protegidos de la contaminación por medio de tapones de algodón, que permitían el intercambio de gases e impedía el ingreso de gérmenes. Los principios de la técnica aséptica, desarrollados tan efectivamente por Pasteur, son los primeros procedimientos que aprende el microbiólogo principiante. También la ciencia de los alimentos está en deuda con Pasteur, pues sus principios se aplican a su conservación. Aunque Pasteur tuvo éxito en la esterilización de sustancias simplemente por medio de la ebullición algunos investigadores encontraron que esto era insuficiente. En la actualidad sabemos que este fracaso se debió a que en las sustancias estaban presentes bacterias que forman estructuras excepcionalmente termorresistentes las endosporas. Fue John Tyndall (Inglaterra, 1820-1893), quien trató de relacionar lo descubierto por Pasteur con sus propios descubrimientos (el llamado fenómeno de Tyndall). Hizo una cámara de madera con dos ventanas por las que hacía pasar un haz de luz, con frascos en el interior. Dejó reposar varias horas la cámara para asentar las partículas de polvo (estado óptimamente vacío). En los tubos colocó infusiones o sustancias nutritivas (“caldos”), hervidas 30 minutos para esterilizar y observó que el contenido quedaba límpido aparentemente en forma indefinida. En la parte superior de la caja había una especie de cuello de cisne para asegurar el ingreso de aire. Esto prueba que hay alteración, infección o generación de microorganismos en materia orgánica cuando hay partículas en suspensión, esto es, los microorganismos están en suspensión en el aire. Observó que algunas preparaciones, como las soluciones de jugo de frutas usadas por Pasteur, eran relativamente fáciles de esterilizar requiriendo tan solo 5 minutos de ebullición, mientras que otras no se esterilizaban aún ante un calentamiento prolongado, algunas veces de varias horas. Notablemente difíciles para su esterilización eran las infusiones de heno, ya que en ellas se encontraban bacterias esporuladas. Las endosporas bacterianas son las estructuras vivas más resistentes al calor que se conocen y la mayoría de los métodos de esterilización están diseñados para destruir estas esporas. Para eliminarlas, Tyndall realizó un experimento calentando el caldo a tratar el primer día durante 30 minutos a una temperatura de 100º C, dejando en reposo en la cámara por 24 horas y repitiendo el mismo procedimiento al segundo y tercer día. Este procedimiento dio origen al método de esterilización hoy conocido como Tindalización: el primer día se eliminan todas las células vegetativas (células vivas) y no las esporuladas. Durante el reposo las formas esporuladas germinan dando origen a nuevas células, las que se eliminan con el calentamiento del segundo día, repitiendo el procedimiento el tercer día para mayor seguridad. Continuación de trabajos de Pasteur. Pasteur siguió trabajando con las fermentaciones, llevado más que nada por los problemas que tenían los industriales, por ejemplo en fermentaciones de remolachas. En las vasijas aparecían alteraciones a las que llamó “enfermedades”. La contribución de Pasteur que más significación tiene en el campo biológico es la de que fermentaciones y putrefacciones son producidas por la BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 12 acción microbiana, aunque se aferró un poco desmedidamente a la idea de que la fermentación requiere la presencia de células vivas, y no admitió que ella pudiera consistir en una serie de reacciones puramente químicas (teoría impulsada por Liebig). El fin del siglo XIX vio corroboradas ambas ideas con las experiencias de Buchner, las que fueron acertadas en distintos aspectos de una misma cuestión. Buchner obtuvo jugo de levadura rompiendo o triturando las células en forma apropiada, al que agregó azúcar como medio de conservación. Al día siguiente encontró todo fermentado. Hoy sabemos que las responsables de las fermentaciones son las enzimas provenientes de las células; es decir que aquel proceso podía y puede ser producido, en ausencia de vida, por agentes de acción catalítica contenidos en las células de levaduras, a los que Buchner llamó “enzimáticos” (del griego “de levadura”). Pasteur estudió luego la fermentación láctica que “enfermaba” la alcohólica: aparecían como “aglomeraciones”, con producción de ácido láctico partiendo de un medio neutro. De la fermentación alcohólica hizo estudios bastante acabados. Es el autor de la ecuación de la fermentación alcohólica. C6H12O6 → 2 CO2 + 2 CH3 CH2OH Estudió la fermentación butílica; hizo preparados en vasijasy vio que los microbios (bacterias butílicas móviles) estaban inmóviles en la periferia y móviles en el centro. Relacionó esto con la vida: decía que las de la periferia estaban muertas porque el aire las inmovilizaba, entonces las llamó anaerobias. Observó que en la fermentación alcohólica los microorganismos podían vivir en presencia de aire o en ausencia (en profundidad). Son anaerobias facultativas: cuando la levadura se desarrolla en aerobiosis crece con mucha mayor energía; en cambio en profundidad se produce fermentación (menor energía). Realizó trabajos sobre enfermedades como el cólera aviar, llegando a conocer la naturaleza científica de la vacuna (usada desde fines del siglo XVII por Jenner) al realizar distintos experimentos con animales enfermos e inoculando con gérmenes viejos a animales sanos. Así llegó a la conclusión de que los gérmenes viejos atenúan su virulencia. Los individuos inoculados con gérmenes viejos adquirieron cierta inmunidad (crearon anticuerpos). Trabajó además con enfermedades de animales transmitidas al hombre como el ántrax y la rabia, cuyos trabajos y experiencias contribuyeron a salvar muchas vidas humanas. La teoría de la enfermedad por gérmenes. La demostración de que los microorganismos podían producir enfermedades proporcionó un gran impulso al desarrollo de la ciencia de la microbiología. En realidad, ya en el siglo XVI se pensaba que “algo” podía transmitirse de una persona enferma a una sana para inducir en ésta la enfermedad de la primera. Muchas enfermedades parecía que se diseminaban a través de las poblaciones, por lo que se las llamó “contagiosas”. Cuando el descubrimiento de los microorganismos fue más o menos aceptado, se pensó que eran los responsables de estas enfermedades. Ya en esa época diversos científicos aportaban pruebas que lo corroboraban, pero fue gracias al trabajo efectuado por Robert Koch (médico alemán, 1843 – 1910), que la teoría de los gérmenes como responsable de las enfermedades adquirió bases sólidas. La importancia del cultivo puro. Para poder identificar exitosamente un microorganismo como responsable de una enfermedad, debemos estar seguros de que en el cultivo está presente sólo ese microorganismo, esto es, que BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 13 el cultivo debe ser puro. Koch puntualizó la importancia de los cultivos puros, desarrollando métodos ingeniosos para obtenerlos; el más útil ha sido el que emplea la separación de colonias aisladas. Koch observó que cuando la superficie de un nutriente sólido (como una rebanada de papa) era expuesta al aire, al cabo de un tiempo se desarrollaban colonias, con forma y color característicos. Infirió que cada colonia se había originado de una célula bacteriana única al caer sobre la superficie y encontrar nutrientes adecuados. Debido a que la superficie sólida evita que la bacteria se movilice, toda la descendencia de la célula inicial permanece junta, haciéndose visible a simple vista cuando la masa de células es lo suficientemente numerosa. Koch supuso que las colonias con diferentes formas y colores derivan de diferentes tipos de organismos. Cuando las células de una colonia aislada eran nuevamente diseminadas en una superficie fresca, se desarrollaban colonias, cada una con igual forma y color que la original. Encontró que si los cultivos mezclados eran extendidos en forma de rayas sobre la superficie de nutrientes sólidos, los distintos organismos se diseminaban y quedaban lo suficientemente separados como para producir colonias aisladas. Ideó otros medios semisólidos en los que agregaba gelatina a los líquidos nutritivos para solidificarlos; luego los colocaba sobre placas de vidrio y cubría con campana de vidrio estéril. Formó la célebre Escuela de Koch, a la que se deben numerosos descubrimientos, que dieron lugar al desarrollo de tratamientos exitosos para la prevención y cura de enfermedades, contribuyendo al desarrollo de la práctica médica moderna. La gelatina usada por Koch tuvo el inconvenientes que a 25-30ºC deja de ser sólida. El agar usado en la actualidad en su reemplazo en los medios de cultivo fue introducido por Hesse (su esposa lo descubrió en la preparación de dulces), el cual funde a 100ºC y mantiene su temperatura de fusión a 45-46ºC. En lugar de la campana utilizada por Koch, propensa a contaminaciones, Petri ideó una caja o placa con tapa llamada en la actualidad “placas de Petri”. Al trabajo de Pasteur y de estos investigadores lo secundaron escasos progresos en el estudio de los microorganismos hasta comienzos del siglo XX, cuando se introdujeron los procesos microbiológicos para la producción de acetona, butanol, glicerol y ácido cítrico. Quizá fue el descubrimiento de un proceso microbiológico para la producción de acetona y butanol por Clostridium acetobutylicum, realizado por Weizmann en 1913/1915 en Manchester, el que anunció el comienzo real de la biotecnología. Este proceso solamente se optimizó en los años 50. Otro proceso importante creado en Manchester fue el uso de lodos activados para tratar aguas negras, el cual comenzó en 1914. La última Guerra Mundial impulsó la producción microbiológica del glicerol (para obtener nitroglicerina) a partir de glucosa en Alemania. La era de los antibióticos Desde el conocimiento de la anatomía externa e interna de las células hasta el conocimiento de los procesos fisiológicos transcurrieron varias centurias. El conocimiento de la Biología molecular recién empieza en el siglo XX. La investigación entre 1920 y 1940 gradualmente dio como resultado una mejor comprensión de la biología, y se reconoció que las enzimas catalizan los procesos biológicos. En 1940 se descubrió dentro de los cromosomas de la célula la presencia de una molécula química gigante, el ácido desoxirribonucleico o ADN y se descubrió que dentro de ella estaba contenida toda la información hereditaria. Estos estudios en genética introdujeron el concepto de que genes individuales llevan información para elaborar enzimas particulares. Aunque Flemming descubrió la penicilina en 1928, no fue sino hasta 1940 que los avances en su aislamiento permitieron su producción en masa. Al principio la penicilina se produjo en botellas, BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 14 pero luego se aplicaron nuevos procesos químicos, los cuales permitieron por primera vez el cultivo del hongo productor Penicillium a gran escala en fermentadores o biorreactores. En la actualidad, cada año se producen 12.000 toneladas de penicilina. A esta producción le siguieron una amplia variedad de antibióticos como la estreptomicina y la eritromicina. La obtención de antibióticos por fermentación (1940) dio lugar a la especialidad “Ingeniería Bioquímica”. Recién en 1953. Watson y Crick, descubren la estructura espacial helicoidal del ADN. En 1961, Monod y colaboradores, descubren la forma en que la molécula de ADN transmite la instrucción para la fabricación de proteínas necesarias para construir un ser vivo, o sea el código genético. La era post antibióticos Durante este período el conocimiento del metabolismo microbiano permitió una explotación mucho más amplia de las capacidades de una variedad de microorganismos. Estos se usaron para producir las vitaminas B1 y B12 y los aminoácidos lisina y ácido glutámico (glutamato monosódico), los últimos en volúmenes de 40.000 y 30.000 toneladas, respectivamente. Esta era también presenció la producción masiva de enzimas para el uso industrial, con la adición de proteasas a los detergentes domésticos y la transformación enzimática de glucosa en fructuosa para producir high-fructose syrup, HFS, jarabe rico en fructuosa. En los inicios de los años ´70 hubo acuerdo respecto de la escasez de proteínas como alimento, en particular en los países del tercer mundo. Entonces se buscaron nuevas fuentes,las que incluyeron microorganismos como algas, bacterias y levaduras. En 1964, el profesor Wilson del Instituto de Tecnología de Massachussets (MIT) acuñó las palabras single-cell protein, SCP, proteína celular para denominar las proteínas microbianas. Sabemos que los microorganismos tienen la capacidad de crecer en una vasta combinación de compuestos; estas fuentes se dividen en grupos principales, renovables y no renovables. Los recursos renovales son muchos de los productos de desechos agrícolas como el bagazo (residuo de la caña de azúcar), el almidón y la celulosa. Muchas compañías grandes, entre las que se halla la industria petroquímica, participaron en la creación de estos procesos. La mayoría de la investigación se enfocó en el mejoramiento de estos desechos agrícolas para producir alimento para animales. Una de ellas procedió a cultivar un moho para producir un alimento para humanos. Tuvieron que transcurrir 20 años para asegurarse que el producto conocido como microproteína fuese apto para el consumo humano. Las fuentes no renovables investigadas para usarlas en la producción de una proteína celular fueron, principalmente, subproductos de la industria petroquímica, como los alcanos, el metano o el metanol. De nuevo fueron las compañías petroquímicas quienes participaron en la investigación. La British Petroleum (BP) investigó el uso de los alcanos en la obtención de proteína celular a partir de levaduras, en tanto que Shell y la Imperial Chemical Industries Ltd (ICI), utilizaron metano y metanol, respectivamente. Solo el proceso ICI alcanzó una escala comercial con el cultivo de la bacteria Methylophilus methylotrophus en metano, en un proceso continuo con un volumen de 1,5 millones de litros. El mejoramiento de éste y otros procesos, condujeron a avances considerables en la tecnología de las fermentaciones. Sin embargo, la disponibilidad de proteína de soja barata ha hecho que el proceso SCP sea incosteable y, según parece, el mundo actual no tiene déficit de proteínas. La era post antibióticos también presenció el mejoramiento de la fermentación en la producción de etanol para ser usado como combustible (gasohol), provocado por la crisis del petróleo en 1974. Otros productos formados por microorganismos son los polisacáridos extracelulares, como la goma de xantano, usada para reemplazar la goma natural en los alimentos y en los lodos de perforación. Al mismo tiempo se han creado cultivos de células vegetales y animales para la producción de compuestos especiales. Los microorganismos se han usado también como auxiliares en la lixiviación de minerales como el zinc y el cobre a partir de mineral de grado menor. La nueva Biotecnología BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 15 La nueva biotecnología se considera a menudo como la biotecnología misma. Sus principales avances han sido los anticuerpos monoclonales y la ingeniería genética. Los anticuerpos monoclonales son los productos de la tecnología del hibridoma, la que se basa en la fusión de células animales del sistema inmune que, por lo general, no pueden ser cultivadas in vitro, con células cancerosas que sí pueden hacerlo. Las líneas de células híbridas que se forman tienen capacidad de crecer y producir anticuerpos altamente específicos, los cuales se conocen como anticuerpos monoclonales. La producción de los anticuerpos monoclonales ha sido muy rápida desde su descubrimiento en 1975, existiendo más de 50 en el mercado actual. Se han utilizado en pruebas de diagnóstico rápido, fármacos de acción específica y su comercialización es cada vez mayor. En 1977Cohen y Boyer, descubren por primera vez una forma de “alterar el código genético en forma premeditada. Comienza la era de la “Ingeniería Genética", la que puede significar a la biología, lo que el transmisor significó para la electrónica. La Ingeniería Genética se puede definir en forma simple como la capacidad para transferir genes de un organismo a otro, para cruzar las barreras que no se podrían cruzar mediante los métodos genéticos ordinarios. El avance de esta técnica dependió de tres descubrimientos independientes: 1. El primero fue el descubrimiento de las enzimas de restricción, las cuales pueden cortar el DNA en sitios específicos para producir fragmentos discretos. 2. El segundo fue la presencia en bacterias, de ciertas moléculas de DNA circular con reproducción independiente (plásmidos o plasmidios), las que se pueden cortar con enzimas de restricción y posteriormente repararse (reunirse) para incluir otros fragmentos de DNA. 3. El tercer descubrimiento fue el método de tratar las bacterias para que puedan captar el DNA de un plasmidio y, por lo tanto, contener nuevos genes (transformados). Estos tres descubrimientos han permitido la evolución de la Ingeniería Genética, la cual ha mostrado un crecimiento tan rápido que ha formado la base de muchas compañías nuevas. La técnica ha encontrado aplicación en el campo de la medicina en la generación de muchos sistemas diagnósticos, la producción de insulina humana y de la hormona de crecimiento por bacterias y la producción de diversas vacunas (Colibacilosis, primera vacuna de origen animal producida con rDNA). La Ingeniería genética también ha tenido influencia en la agricultura y en la industria alimentaria. En la Tabla 1.2 se muestran otras técnicas que se están investigando en áreas importantes de la biotecnología. Tabla 1.2. Nuevas técnicas en el avance de la biotecnología Cultivo de tejidos y células vegetales y animales. Fusión de protoplastos. Modificación estructural de proteínas (Ingeniería de proteínas). Células y enzimas inmovilizadas. Biosensores (censores que detectan material biológico o sonda que contiene material biológico). Uso de computadoras en las fermentaciones. Nuevos biorreactores. Lo que hoy llamamos BIOTECNOLOGIA se comienza a definir en el último decenio como la explotación de las potencialidades de los microorganismos, de las células vegetales y animales y de fracciones celulares, para la biosíntesis, biotransformación, concentración, degradación, aislamiento y purificación de determinadas sustancias. La optimización y explotación a escala industrial de estas potencialidades está dando lugar al nacimiento de una nueva era industrial comparable a los avances tecnológicos de la electrónica. Sus aplicaciones se aceleran a un ritmo vertiginoso y están solamente limitadas por la BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 16 imaginación. Este curso intenta presentar las características principales de la biología y cómo se relaciona con la biotecnología. No se debe esperar que cubra la biotecnología en su totalidad, pero debe servir como una introducción a un área fascinante como lo es la biotecnología. ÁREAS DE APLICACIÓN DE LA BIOTECNOLOGÍA Desde el punto de vista de su aplicación comercial e industrial, podemos decir que el campo de utilidad es inmenso: Aplicaciones terapéuticas productos farmacéuticos (antibióticos, vacunas); hormonas; terapias génicas. Diagnósticos diagnósticos para salud humana; diagnósticos para agricultura y ganadería; ensayos para calidad de alimentos; ensayos para calidad ambiental. Alimentación mejora de procesos tradicionales de obtención de alimentos y bebidas; nuevos alimentos y bebidas; nutracéuticos: alimentos con perfiles determinados de nutrientes, para la mejora de la salud; aditivos alimentarios. Medio ambiente tratamiento de residuos urbanos, agrícolas e industriales; biorremediación y biorreparación; producción de energía a partir de biomasa. No podemos olvidar que muchas de las biotecnologías de las que nos beneficiamos son muy antiguas, y que en ellas se está logrando una fase de madurez auspiciada por los nuevos adelantos técnicos (p. ej., la tecnología de las fermentaciones).De hecho, muchas de las innovaciones que se están produciendo no son tanto de nuevos productos sino de mejoras en los procesos. De cualquier manera, ya estamos viendo la entrada de nuevos productos, en forma de nuevos fármacos y de plantas transgénicas con características novedosas. Dejando aparte las tecnologías de fabricación de vacunas, la mayor parte de las otras áreas biotecnológicas requieren producir grandes cantidades de sustancias, del orden de kilogramos a toneladas, por lo que uno de los principales aspectos es el del "escalado" a esas grandes cantidades. Esto supone un gran reto a los ingenieros, ya que deben diseñar fermentadores de gran tamaño, donde hay que controlar diversos parámetros, como pH, temperatura, oxígeno y otros gases, etc. La tecnología de fermentación cobró ímpetu a partir de los años ´40 del siglo XX, cuando se comenzaron a fabricar antibióticos y otras moléculas (ácidos orgánicos, hormonas, enzimas, polisacáridos, etc.) por medio de microorganismos. BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 17 Por lo tanto, aunque la atención pública se ha centrado en la moderna biotecnología que usa técnicas de ADN recombinante, no podemos olvidar que ya antes existía otra biotecnología, que hoy sigue pujante, y que se puede beneficiar de los nuevos enfoques. Los tres núcleos de la biotecnología Según John Smith (1996), muchos procesos biotecnológicos, especialmente los que se realizan en entornos cerrados industriales, tienen un triple núcleo: obtener el mejor catalizador biológico para una función o proceso específico obtener el mejor ambiente para la función de ese catalizador biológico, mediante una serie de diseños técnicos en los que es fundamental la ingeniería química procesamiento del material, consistente en separar y eventualmente purificar el material biológico producido Veamos cada uno de estos tres componentes: 1. En la mayoría de los casos, el catalizador biológico son células vivas, sobre todo microorganismos. Por ello, uno de los pilares de la biotecnología es precisamente la microbiología (entendiéndola en sentido amplio de biología microbiana). Parte de lo que hemos aprendido sobre el manejo de microorganismos se puede aplicar, con modificaciones, al manejo de células de animales y plantas, que cada vez son más importantes en la biotecnología. Varias son las características que hacen atractivos a los microorganismos: La biodiversidad microbiana es gigantesca; de hecho, solo hemos investigado una pequeña parte de ella. A medida que los biólogos aprendan a recuperar más biodiversidad y a conocerla, habrá más cepas disponibles con propiedades potencialmente útiles para los humanos. Las capacidades metabólicas de los microorganismos, como conjunto, son las más amplias de todos los seres vivos. Los genomas microbianos esconden tesoros aún ocultos, pero que se van revelando poco a poco, y ahora de modo más rápido, una vez que se van completando sus mapas y secuencias (actualmente existen varias decenas de genomas secuenciados). Las actividades biosintéticas y degradativas de estos microorganismos presentan oportunidades extraordinarias para numerosas aplicaciones. Los microorganismos crecen rápidamente, y en muchos casos son fáciles de manipular desde el punto de vista genético. Esto hace que sea relativamente fácil usarlos como factorías microscópicas para obtener productos útiles en tiempos relativamente cortos. Una parte esencial del aprovechamiento de los microorganismos reposa en nuestra capacidad para conservarlos viables durantes largos periodos de tiempo, y para que sus características útiles sean estables. En muchos casos, en lugar del microorganismo, se puede recurrir a aislar alguna o algunas de sus enzimas, y se las pueden poner a trabajar en condiciones ventajosas y rentables. 2. El segundo componente o núcleo de las biotecnologías estriba en el entorno industrial en que se ponen a funcionar las células o las enzimas. Esto nos lleva al concepto de biorreactor, un entorno cerrado y controlado para que los catalizadores biológicos hagan lo que queremos con la máxima eficiencia. En esta parte de la biotecnología se requiere la colaboración estrecha entre los biólogos y los ingenieros de bioprocesos, incluyendo los ingenieros químicos. Se trata de diseñar biorreactores o fermentadores para controlar diversos parámetros que condicionan la buena producción: temperatura, aireación, pH, etc. BBIIOOTTEECCNNOOLLOOGGÍÍAA UUNNIIDDAADD 11.. IINNTTRROODDUUCCCCIIÓÓNN.. 18 3. Finalmente, queda el área quizá más desconocida y compleja, el procesamiento de la biomasa o de las sustancias producidas: separación de las células respecto del medio acuoso en que han funcionado, recuperación eficiente del producto buscado, purificación, etc. A todo esto tenemos que agregar que un factor importantísimo en el desarrollo de la biotecnología es la evaluación de la seguridad del producto, sometida a controles rigurosos según normativas nacionales e internacionales. De hecho este factor es tan importante que se puede convertir en limitante, de modo que las regulaciones estrictas desincentivan ciertos desarrollos biotecnológicos. Por todo ello, es importante que tales regulaciones sean realistas, y no exijan más de lo que la evidencia científica sugiere, manteniendo en todo momento la preservación de la salud y el medio ambiente. A su vez, las regulaciones reflejan la percepción pública de los riesgos y promesas de la biotecnología. Por ejemplo, hoy en Europa la percepción pública ha logrado prácticamente una parada en las plantas transgénicas, a pesar de los informes científicos que dicen que en la mayor parte de los casos, sus riesgos son similares a las plantas convencionales. Habrá que llegar a un diálogo racional entre los diversos actores (científicos, empresas, consumidores, ecologistas, etc.), para asegurar el correcto empleo de estas tecnologías, que por un lado no impida aplicaciones benéficas sin riesgos, y por otro regule adecuadamente aquellos ámbitos donde las dudas razonables hagan recomendables más restricciones. El ideal sería permitir todo aquello que aporte beneficios sin aumentar riesgos, pero no caer en el error de prohibir usos positivos solo bajo vagas ideas de riesgos no sustanciados, en buena parte imaginaciones y argucias de grupos de presión que pueden esconder agendas políticas ocultas. PARTICIPACIÓN DEL INGENIERO EN EL DISEÑO Y CONDUCCIÓN DE INDUSTRIAS QUE UTILICEN PROCESOS BIOQUÍMICOS. Como hemos dicho anteriormente, la fabricación de antibióticos a escala industrial estimuló la aparición de una nueva disciplina, la Biotecnología en la cual se suman conocimientos de microbiología, bioquímica, ingeniería y química. El papel del ingeniero en esta especialización es el de llevar a escala industrial el trabajo de las anteriores disciplinas. Si bien en nuestro país están comenzando a desarrollarse cursos universitarios de la disciplina, el Ingeniero Químico con conocimientos adecuados, técnicos y prácticos de las reacciones biológicas y microbiológicas, estará en condiciones de participar en un equipo interdisciplinario que trabaje en Biotecnología. Se pretende en este curso dar solamente las bases de estas otras materias afines: Procesos unitarios específicos (esterilización, transferencia de O2, etc.) Características y tipos de reacciones del material biológico (microorganismos, células superiores, transferencia de masa y energía, etc.) Aislamiento, purificación y uso de enzimas (Ingeniería Enzimática) Metodología para la resolución de temas afines y perspectivas de futuro. BIBLIOGRAFÍA - Brock, T.; Madigan, M. "Microbiología". 6° Ed. Editorial Prentice Hall. Hispanoamericana S.A. México. 1 993. - El Cuaderno de por qué Biotecnología. http://www.porquebiotecnologia.com.ar/. Sitio destinado a la capacitación docente en temas de biotecnología.- Iáñez Pareja, E. “Biotecnología y Sociedad”. Instituto de Biotecnología. Universidad de Granada. http://www.ugr.es/~eianez/Biotecnologia/biotecno.htm - Jay, J.M. "Microbiología moderna de los alimentos". Editorial Acribia, Zaragoza, España. 1.973. - Scragg, A.; "Biotecnología para Ingenieros. Sistemas biológicos en procesos tecnológicos”. Editorial Limusa. México,1997.