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ESPECTROSCOPIA UV-VIS. Introducción. Transiciones. Especies absorbentes. Ley de Lambert-Beer. Auxocromos. Hidrocarburos Aromaticos. Dienos Conjugados. Efectos Batocrómico. ESPECTROSCOPIA INFRARROJA.- Introducción.- Tipos de vibraciones.- Frecuencias características de grupos funcionales.- Interpretación de espectros. ESPECTROSCOPIA DE RMN.- Introducción.- Principios básicos de la RMN.- Desplazamiento químico.- Acoplamiento spin-spin.- Constante de acoplamiento.- Intercambio químico. ESPECTROMETRIA DE MASAS. –Introducción. – Esquema de espectrometro. – n- pentano. – 4,2 metilbutano. 5. Patrones de Fragmentación. 5.1 Alcanos. 5.2 Alquenos y aromaticos. 5.3 Halogenuros de Alquilo. 5.4 Alcoholes. 5.5 Aldehidos y cetonas. 5.6 Eteres. 5.7 Esteres. 5.8 Acidos carboxilicos. 5.9 Aminas. ESPECTROSCOPIA ESPECTROSCOPIA DE RMN 1. Introducción 2. Principios básicos de la espectroscopia RMN 2.1. Momento nuclear y momento magnético 2.2. Niveles poblacionales 2.3. El proceso de la resonancia 3. Espectrómetros de RMN 4. Apantallamiento nuclear. Desplazamiento químico (δ). Factores de los que depende 5. Núcleos equivalentes. Integral 6. Acoplamiento spin-spin. Constante de acoplamiento (J). Sistemas de spin 7. Intercambio químico 8. Interpretación de espectros. Ejemplos LONGITUD DE ONDA (λ) 10 −13 10 −11 10 −9 10 −7 10 −5 10 −3 10 −2 10 −1 10 0 10 2 10 3 metros (m) FRECUENCIA (ν) 10 21 10 19 10 17 10 15 10 13 10 11 10 10 10 9 10 8 10 6 10 5 Hertz (Hz) RAYOS GAMMA RAYOS X UV VISIBLE INFRARROJO MICROONDAS ONDAS DE RADIO RMN Grupos funcionales Núcleos individuales IRUV 1. Introducción El fenómeno de la RMN fue descubierto por Purcell y Bloch (Premio Nobel de Física 1952) I = Número cuántico de espín nuclear (0, 1/2, 1, 3/2, 2, 5/2, ...) 0 12C, 16O, 1/2 1H, 13C, 15N, 19F, 31P 1 2H, 14N, 3/2 11B, 23Na, 35Cl, 37Cl 5/2 17O, 27Al, P (momento angular) Principios básicos de la RMN Número cuántico de espín nuclear (I) de algunos núcleos comunes I Núcleo Un núcleo con un número atómico impar tiene un espín nuclear. Se dice que estos núcleos tienen I (número cuántico de espín nuclear) distinto de cero. Este tipo de núcleos son magnéticamente activos, es decir poseen espín, y poseen un movimiento de rotación sobre un eje que hace que se comporten como si fueran pequeños imanes. Los núcleos con número de spin nuclear I = 0, como el núcleo de 12C, o el 16O no tienen momento angular y por tanto no son observables por RMN. → Número cuántico de espín (I) de algunos núclidos comunes I Núclido 0 12C, 16O, 1/2 1H, 13C, 15N, 19F, 31P 1 2H, 14N, 3/2 11B, 23Na, 35Cl, 37Cl 5/2 17O, 27Al, Principios básicos de la RMN Para I = ½, m = +1/2, -1/2 Para I = 1, m = +1, 0, -1 µz µz B m = +1/2 m = -1/2 µz µz B m = +1 m = -1 µ (momento magnético) m = número cuántico magnético (+I,...-I) Número de orientaciones posibles de µ = 2I + 1 µ + µ = γ P γ = cte magnetogírica (ó giromagnética) Núcleo Constante Frecuencia Abundancia giromagnética de resonancia natural (%) γ (10 7T-1s-1) ν (MHz) 1H 26,76 400,0 99,985 13C 6,73 100,6 1,108 → → → → Debido a la carga nuclear, los núcleos llevan asociado un momento magnético (m), que es un vector de igual dirección y sentido que el vector momento angular y es proporcional a éste. En presencia de un campo magnético externo, el momento magnético nuclear se orienta en un número discreto de posiciones, determinadas por el número cuántico magnético (m) Polo magnético Polo magnético B0 α (m=+1/2) β (m=-1/2) ∆E = hν α α α β β β E INFLUENCIA DE UN CAMPO MAGNÉTICO EXTERNO Núcleos con I = 1/2 Campo Magnético (B0) En er gí a α β INFLUENCIA DE UN CAMPO MAGNÉTICO EXTERNO γ hBo 2π ∆Ε = hν = ν = Frecuencia de Larmor γ Bo 2π ν = Frecuencia de Larmor La frecuencia requerida para pasar del estado α al β (que en realidad es simplemente un cambio en la orientación del spin nuclear), se denomina frecuencia de resonancia (n) y es proporcional a Bo y a g. Núcleo Constante Frecuencia Abundancia giromagnética de resonancia natural (%) γ (107T-1s-1) ν(MHz) Para un campo magnetico Bo = 9.4 T 1H 26,76 400,0 99,985 2H 4,11 61,4 0,015 13C 6,73 100,6 1,108 14N 1,93 28,9 99,63 15N -2,71 40,5 0,37 17O -3,63 54,3 0,037 19F 25,18 376,5 100,0 31P 10,84 162,1 100,0 Principios básicos de la RMN Cada núcleo tiene su frecuencia de resonancia característica, que depende de su constante giromagnética y del campo magnético externo aplicado. 2.2. Niveles poblacionales, 1 ∆E kTNα Nβ = e Ej.: Para Bo = 4,7 Teslas y T = 300 K kT ∆E = 6,4 x 10−5 Nβ Nα = 1.00006 ∆E << kT Nα ≈ NβEn RMN ∆E >> kT Nα >> NβEn otras espectroscopias En RMN es como si detectáramos sólo 1 de cada 100.000 núcleos presentes PROBLEMAS DE SENSIBILIDAD α β ∆E = hν Ley de distribución de Boltzmann 2.2. Niveles poblacionales, 2 UV IR RMN ∆E ∆E ∆E Se muestra aquí la diferencia de energía entre los distintos estados energéticos que dan lugar a las distintas espectrocopias. Irradiación con absorción de hν Irradiación con absorción de hν α β ∆E A favor del campo Contra el campo Estado αα Polo magnético Polo magnético B0 α α Polo magnético Polo magnético B0 βα α β Estado αβ 2.3. El proceso de la resonancia, 1 RELAJACIÓN DE ESPÍN α β α β α β El retorno al equilibrio se denomina RELAJACIÓN 2.3. El proceso de la resonancia, 2 Pulso de radiofre- cuencia relajación Cuando se deja de aplicar el pulso, el vector magnetización tiende a recuperar su posición de equilibrio mediante un proceso de relajación (emite la energía absorbida). Este proceso de relajación da lugar a la FID, que es una onda sinusoidal exponencialmente amortiguada. Esto es lo que se denomina caída libre de inducción (FID, free induction decay). Tres requerimientos esenciales: Un campo magnético (Bo) homogéneo e intenso Una fuente de radiación de radiofrecuencia (B1) para excitar los núcleos de la muestra Un método para detectar la señal de RMN El campo magnético es suministrado por: • Imán permanente • Electroimán • Bobina superconductora 60-90 MHz 100-850 MHzBobina superconductora Espectrómetro de RMN, 1 Antiguamente (1950-70) ONDA CONTINUA Actualmente (desde 1970) TECNICA DE PULSOS (FT) Espectrómetro de RMN, 2 Espectrómetro de RMN, 3 El solenoide es superconductor sólo a muy bajas temperaturas, por eso se encuentra rodeado de He líquido (T = 4 K), para evitar que el He se evapore rápidamente, está protegido por alrededor por N2 líquido (T = -196 oC) Espectrómetro de RMN, 4 Diagrama de la adquisición de un espectro de RMN: Nube electrónica circulante bajo la influencia de Bo Campo magnético externo, Bo Núcleo Campo local inducido, B’ opuesto a Bo en el núcleo Apantallamiento nuclear, 1 Reproducido de Volhardt, “Organic Chemistry”, 3ª Ed, 1999 Los núcleos están rodeados de nubes de electrones que circulan en el campo magnético alrededor del núcleo. Estos electrones, al moverse en sus órbitas, son equivalentes a pequeños circuitos eléctricos que, en presencia de Bo originan pequeños campos magnéticos que se orientan a favor o en contra del campo magnético externo Bo. Dependiendo de la posición relativa del núcleo respecto al campo magnético generado por los electrones, puede ocurrir que: Apantallamiento nuclear, 2 Bnúcleo = Bo + B’electrones Nube electrónica circulante bajo la influencia de Bo Campo magnético externo, Bo Núcleo Campo local inducido, B’ opuesto a Bo en el núcleo Efecto Núcleo Bnúcleo < Bo Diamagnético Apantallado Bnúcleo > Bo Paramagnético Desapantallado BoB’e BoB’e 480 Hz 320 Hz Apantallamiento nuclear, 3 Reproducido de Volhardt, “Organic Chemistry”, 3ª Ed, 1999 B Bo = 2.1 Tesla Para Bo = 2.1 T νo = 90.000.000 Hz (1H resuena a 90 MHz) TMS (Ref) En un espectro de RMN no se representan frecuencias absolutas de resonancia, porquedarían lugar a números demasiado altos. Para evitarlo, se elige una señal como referencia y lo que se determina es la separación entre la frecuencia de resonancia de un núcleo y una frecuencia de referencia. Esta magnitud se mide en Hz. Apantallamiento nuclear, 4 Se trabaja con la diferencia respecto a una referencia (νseñal – νref) Problema: dependencia de ν de Bo Solución: dividir por νo (ν aparato) (νseñal – νref) νo Para Bo = 2.1 T νo = 90.000.000 Hz 480 / 90.000.000 = 5.33 x 10-6 Para Bo = 4.2 T νo = 180.000.000 Hz 960 /180.000.000 = 5.33 x 10-6 Problema: números muy pequeños Solución: multiplicar por 106 (ppm) (νseñal – νref) νo × 106 δ = ClCH2OCH3 480 Hz 320 Hz Bo (T) 2.1 4.2 960 Hz 640 Hz Si CH3 CH3 CH3 H3C Tetrametilsilano (TMS) REFERENCIA INTERNA: Desplazamiento químico, 1 (νseñal – νref) νo × 106 δ = Desplazamiento químico (δ) : Posición de una señal en el espectro Se expresa en función de la de una sustancia de referencia ν depende de la envoltura electrónica ν depende de la estructura Como patrón se utiliza TETRAMETILSILANO (TMS) Ventajas del TMS : 1) Señal única 2) Líquido volátil 3) Aparece a ν < ν señales (ν TMS = 0 ppm) 4) No interacciona con la muestra Partes por millón (ppm) 480 Hz 320 Hz B Bo = 2.1 Tesla Para Bo = 2.1 T νo = 90.000.000 Hz (1H resuena a 90 MHz) TMS (Ref) 5.33 ppm 3.55 ppm ¡ Observa: 1 ppm = 90 Hz ! Desplazamiento químico, 2 012345678 δ (1H) ppm TMS MeCN Me2CO Me2SO C6H6 (ν) (δ) APANTALLAMIENTO Desapantallado apantallado A medida que el núcleo está más apantallado (como consecuencia de su entorno electónico) el campo magnético efectivo que percibe es menor y por tanto resuena a menor frecuencia, es decir, aparece a menor desplazamiento químico en el espectro. Desplazamiento químico, 3 El desplazamiento químico de un protón depende de su entorno, y aquí se muestran los desplazamientos químicos aproximados para distintos tipos de compuestos. El desplazamiento químico depende, entre otros factores, del grado de sustitución y de la electronegatividad de los sustituyentes. Así, hay diferencias entre protones de grupos alquilo primarios, secundarios o terciarios. Afecta también la electronegatividad del sustituyente al que está unido el protón y la distancia al sustituyente electronegativo. Hay casos muy interesantes como los de los protones aromáticos, vinílicos y aldehídicos, en los que el desplazamiento químico tiene valores anormalmente altos… Desplazamiento químico, 4 Desplazamiento químico, 5 Campo externo, B0 Blocal Blocal BlocalBlocal ALQUENOS Desplazamiento químico, 6 La circulación de los electrones π origina un campo inducido que se suma al campo externo Bo en la zona ocupada por los protones y éstos resuenan a frecuencias más altas, mostrando valores de desplazamiento químico, entre 5 y 6 ppm. La distribución de la densidad electrónica alrededor de los enlaces no es simétrica y el desplazamiento químico de los núcleos vecinos dependerá de su posición relativa con respecto a ella. Este efecto anisótropo generado por la circulación de electrones en átomos vecinos se da fundamentalmente en moléculas con electrones π. Factores de los que depende δ 1. Grado de sustitución 2. Electronegatividad del sustituyente (desprotección magnética local) 3. Distancia del sustituyente 4. Presencia de dobles y/o triples enlaces (anisotropía magnética local) 5. Interacciones intermoleculares: puentes de hidrógeno, disolvente, etc. CH3X EN (X) δ (ppm) CH3F 4.0 4.26 CH3OH 3.4 3.40 CH3Cl 3.2 3.05 CH3Br 3.0 2.68 CH3I 2.7 2.16 CH3H 2.2 0.23 δ aumenta con la EN del sustituyente Desprotección magnética local Desplazamiento químico, 7 Un efecto - I producirá un desapantalla- miento y un aumento del valor de desplazamiento químico alcanosalquinosalquenos δ 1. Grado de sustitución 2. Electronegatividad del sustituyente ALQUENOS ALDEHIDOS Desplazamiento químico, 8 Hidrógenos olefínicos: desplazamiento químico (δ): 5 - 6 ppm Hidrógeno de aldehído: desplazamiento químico (δ): 9 - 10 ppm El hidrógeno de aldehído está aún más desapantallado que los olefínicos y aromáticos. La razón es que el H aldehídico está desprotegido tanto por la circulación de los electrones en el doble enlace, como por el efecto atractor de electrones del oxígeno. AROMÁTICOS Campo externo, B0 Blocal Blocal Corriente de anillo Blocal Blocal Desplazamiento químico, 9 El campo magnético Bo induce una corriente circular a través de los orbitales π del anillo aromático. Dicha corriente (corriente de anillo) induce un campo magnético que se opone al campo externo Bo en el centro del anillo. Los átomos de hidrógeno unidos directamente al anillo aromático se encuentran en la zona donde el campo magnético generado por los electrones se suma al externo, por lo que éstos resultan desapantallados. H del benceno: desplazamiento químico (δ): 7.3 ppm aprox. ALQUINOS Desplazamiento químico, 10 El acetileno es una molécula lineal, la nube de electrones π que constituye el triple enlace tiene una simetría axial alrededor del eje de la molécula y en presencia de un campo magnético externo,orientado en la dirección del eje de la molécula, la circulación de electrones π origina un campo magnético que se opone al exterior en la posición que ocupan los protones, por lo que éstos resultan apantallados (efecto diamagnético, resuenan a menor frecuencia). 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 COOH Ar–OH R–OH R–NH R–CHO Ar–H C=CH C≡CH C=CH–CHn CO–CHn Ar–CHn Hal–CHn O–CHn N–CHn C–CHn TMS Aromático Olefínico Alifático Desplazamiento químico, 11 PROTONES EQUIVALENTES Protones equivalentes son los que están en el mismo entorno químico y originan una única señal en el espectro de 1H-RMN. En este caso los protones del Me del metanol originan los tres la misma señal, el protón unido al átomo de oxígeno sale a mayor δ. La integral de una señal es proporcional al número de núcleos equivalentes que la originan Integral = área total del pico Protones equivalentes. Integral, 1 La integral de una señal es proporcional al número de núcleos equivalentes que la originan Integral = área total del pico Protones equivalentes. Integral, 2 EL ESPECTRO DEL ETANOL Reproducido de P.J. Hore, “Nuclear Magnetic Resonance”, OCP, 199530 MHz 400 MHz Reproducido de D. Canet, “Nuclear Magnetic Resonance”, Wiley, 1996 6. Acoplamiento spin-spin El campo magnético que rodea a los núcleos está influído por el resto de los momentos magnéticos de la molécula, como son los de otros núcleos vecinos. Así, si un protón debería dar una señal a una frecuencia correspondiente a su δ, esta señal puede aparecer desdoblada en varias dependiendo de la orientación magnética de los núcleos vecinos. δXδA R1 C HA R2 C R4 HX R3 ν (frecuencia) JAX JXA JAX = JXA J = constante de acoplamiento. Se mide en (Hz) J no depende del campo magnético aplicado Bo, sino de la relación entre los núcleos (mismo valor en cualquier aparato) Doblete Doblete 6. Acoplamiento spin-spin. Constante de acoplamiento (J) Cuando el protón Ha cercano está alineado y en el mismo sentido del campo magnético externo, desapantalla a Hb. Cuando Ha está alineado en contra del campo, apantalla a Hb. La señal para los protones Hb se acoplará en picos de la misma altura (doblete). La absorción Ha está afectada por tres combinaciones de espines Hb: Si los protones Hb refuerzan el campo externo, esto desapantallará a Ha. Si un Hb está alineados en contra del campo y el otro Hb refuerza el campo, el efecto se cancelará. Si los protones Hb están en contra del campo externo, esto apantallará a Ha . La señal de Ha será un triplete (relación 1:2:1). 6. Acoplamiento spin-spin. Constante de acoplamiento (J) DOBLETE TRIPLETE JA,X JA,X νA νx ∆νA,X Origina espectros de PRIMER ORDEN ∆νA,X >>JA,X JA,B νA νB ∆νA,B JA,B Origina espectros COMPLEJOS ∆νA,B ≈ JA,B 1) ACOPLAMIENTO DÉBIL 2) ACOPLAMIENTO FUERTE Acoplamiento spin-spin. Espectros de PRIMER ORDEN 6. ACOPLAMIENTO SPIN-SPIN. CONSTANTES DE ACOPLAMIENTO (J) Dos enlaces entre protones 2J1,2 C H1 1 2 3 4 1 2 La constante de acoplamiento es observada (si son H no equivalentes) C 1 2 C H2H1 3 Tres enlaces entre protones 3J1,2 La constante de acoplamiento es observada (si son H no equivalentes) C C H1 C H2 La constante de acoplamientogeneralmente no es observada. Si existe acoplamiento 4J1,2 = 1 - 3 Hz Cuatro enlaces entre protones 4J1,2 Acoplamiento a larga distancia Los acoplamientos a larga distancia son raros. H2 El valor de J, que depende de distintos factores en especial del tipo de hibridación de los átomos implicados, disminuye con el número de enlaces: 2J = 12-15 Hz 3J = 6-8 Hz CONSTANTES DE ACOPLAMIENTO Reglas de desdoblamiento Válidas para espectros de primer orden ∆δ (Hz) >10 JA,X 1. Los núcleos equivalentes no se acoplan entre sí. 2. El acoplamiento con n núcleos equivalentes origina un desdoblamiento en (2nI+1) líneas. En el caso del protón, I = 1/2 por tanto el acoplamiento con n núcleos equivalentes origina un desdoblamiento en (n +1) líneas. 3. Todas las líneas de un multiplete están igualmente separadas. La separación corresponde al valor de la constante de acoplamiento. 4. La intensidad relativa de las líneas de un multiplete viene dada por el triangulo de Pascal. Patrones de acoplamiento, 1 Espectros de primer orden Acoplamiento a n núcleos equivalentes (sistema AXn) En general A se desdobla en n + 1 líneas, separadas cada una por una distancia = JAX 1 1 1 1 2 1 1 3 3 1 1 4 6 4 1 1 5 10 10 5 1 1 6 15 20 15 6 1 A singulete (s) AX doblete (d) AX2 triplete (t) AX3 cuartete (c) AX4 quintuplete (q) AX5 sextete (m) AX6 septete (m) Triangulo de Pascal Ej.: Acoplamiento a tres núcleos equivalentes (sistema AX3) 1 1 δA JAX CUARTETE JAX JAX 3 JAX JAX JAX 3 C C HA HX HX HX CH CH2 A X Sistema AX2 CH CH3 A X Sistema AX3 FRAGMENTOS MOLECULARES TÍPICOS A X A X CH (CH3)2 A XSistema AX6 A X Patrones de acoplamiento, 2 CH2 CH3 A X Sistema A2X3 A X 1 2 1 3 2 3 1 6 Espectros de primer orden. Acoplamiento con núcleos con distinta J Acoplamiento a dos núcleos no equivalentes (sistema AMX) 1 1 δA JAM DOBLE DOBLETE JAX JAX 1 1 Ej.: C C HA HX C HM JAM ≠ JAXJAM ≠ JAX JAM > JAX Acoplamiento a tres núcleos no equivalentes (sistema AMPX) DOBLE DOBLE DOBLETE Ej.: C C HA HP C HX HM δA JAM JAP JAP JAX JAX JAM > JAP > JAX Patrones de acoplamiento, 3 7. Intercambio químico, 1 1. En muchas ocasiones no se observe el acoplamiento con los H unidos a heteroátomos 2. Sólo se observa en protones unidos a heteroátomos (OH, NH, SH). 3. La explicación de este fenómeno se basa en la existencia de un intercambio químico rápido catalizado por ácidos y bases Este proceso de intercambio se puede dar tan rápidamente que el tiempo requerido por el aparato para observar la resonancia sea mayor, y la señal que aprecia el detector es una señal promediada debido al enlace del protón con distintas moléculas de ROH. Por ejemplo, a temperatura ambiente un protón hidroxílico permanece en una misma molécula aproximadamente 10-5 s que es un tiempo menor que el que tarda el aparato en tomar la información. Por ello, en los alcoholes, ácidos, tioalcoholes, tioácidos y aminas se observa este fenómeno. • Si el intercambio es muy rápido se ve una señal aguda y promediada. • Si es muy lento se ve algún desdoblamiento y si es moderadamente lento se puede ver una señal ancha. El desplamiento químico (δ) de este tipo de protones depende de la concentración de la muestra y del disolvente. Aplicación: en D2O desaparecen las señales de H-X (apreciable en RMN de alcoholes, tioles y aminas). ROH + D2O ROD + DOH 7. Intercambio químico, 2 El grupo etilo aparece como un triplete a δ 1.2 ppm (-CH3) y un cuadruplete a δ 2.6 ppm (-CH2-). Los protones aromáticos aparecen como un multiplete próximos a δ = 7.2 ppm. El acoplamiento del grupo etilo es muy frecuente 8. Interpretación de espectros. EjemplosEjemplo 1 Ejemplo 2 El grupo isopropilo aparece como un doblete intenso a desplazamiento químico más bajo y como un multiplete débil (un septuplete) adesplazamiento químico más alto. El grupo metilo aparece como un singulete a δ = 2.1 ppm. El protón c tiene 6 hidrógenos en el átomo de carbono adyacente, por lo que su señal será un septeto (6 + 1 = 7). Los hidrógenos de los grupos metilo tienen un hidrógeno en el átomo de carbono adyacente por lo que su señal será un doblete (1 + 1 = 2) . Hay dos protones vinílicos en la 4,4-dimetilciclohex-2-en-1-ona y son cis. La constante de acoplamiento para el acoplamiento cis es aproximadamente 10 Hz, de manera que los picos deberían estar separados por esta medida. Ejemplo 3 El p-nitrotolueno tiene dos pares de protones aromáticos equivalentes a y b. Dado que la constante de acoplamiento para los hidrógenos orto es aproximadamente 8 Hz, los picos de la señal estarán separados aproximadamente por 8 Hz. Ejemplo 4 Ejemplo 5 52 Ejemplo 6 Slide Number 1 ESPECTROSCOPIA DE RMN Slide Number 3 Slide Number 4 Slide Number 5 Slide Number 6 Slide Number 7 Slide Number 8 Slide Number 9 Slide Number 10 Slide Number 11 Slide Number 12 Slide Number 13 Slide Number 14 Slide Number 15 Slide Number 16 Slide Number 17 Slide Number 18 Slide Number 19 Slide Number 20 Slide Number 21 Slide Number 22 Slide Number 23 Slide Number 24 Slide Number 25 Slide Number 26 Slide Number 27 Slide Number 28 Slide Number 29 Slide Number 30 Slide Number 31 Protones equivalentes Slide Number 33 Slide Number 34 Slide Number 35 Slide Number 36 Slide Number 37 Slide Number 38 6. Acoplamiento spin-spin. Constantes de acoplamiento (J)� Constantes de acoplamiento Slide Number 41 Slide Number 42 Slide Number 43 Slide Number 44 Slide Number 45 Slide Number 46 Slide Number 47 Slide Number 48 Slide Number 49 Slide Number 50 Slide Number 51 Slide Number 52