Descarga la aplicación para disfrutar aún más
Vista previa del material en texto
Facultad de Ciencias Veterinarias -UNCPBA- Resistencia a antimicrobianos en bacterias aisladas de aves y subproductos López, Victoria; Recavarren, Mariana; Colello, Rocío; Krüger, Alejandra Noviembre, 2020 Tandil Resistencia a antimicrobianos en bacterias aisladas de aves y subproductos Tesina de la Orientación de Tecnología de los Alimentos, presentada como par- te de los requisitos para optar al grado de Veterinario del estudiante: López Vic- toria. Tutor: Dr. Recavarren Mariana Directora: Dr. Krüger Alejandra Codirectora: Dr. Colello Rocío Evaluador: Dr. Sergio Sánchez Bruni Agradecimientos A mi mamá, Claudia Fumagalli y mi papá del corazón, Luis A. Bellezzuoli por apoyarme en todo el trayecto de esta hermosa profesión. A la Dr. Mariana Recavarren por ser mi tutora de residencia y por proponerme el tema de tesina; y a mi directora Alejandra Krüger y co-directora Rocio Colello por guiarme. Al laboratorio Fares Taie, en sucursal Puerto, a Sandra Medici y Mónica Espinoza; y en sucursal Centro a Lorena Keller, Leonor Guerriero y Victoria Elorza por abrirme las puertas y brindarme el espacio necesario para llevar a cabo este proyecto. En especial, formando este equipo de trabajo, a Paula Casado y Verónica Gómez por aportar sus conocimientos y colaboración, que fueron imprescindibles para comenzar este proyecto. Resumen La resistencia a los antimicrobianos por parte de las bacterias es un problema grave, que representa una preocupación a nivel mundial. Se considera que una de las causas de la aceleración en la emergencia y en la diseminación de bacterias resistentes es el uso de antimicrobianos como promotores de crecimiento en sistemas de crianza intensivos, como el de las aves. Estas resistencias pueden dar lugar a fallos terapéuticos en tratamientos veterinarios y podría incrementar el riesgo de transmisión de bacterias resistentes al hombre. En el presente trabajo se propuso determinar la sensibilidad a antimicrobianos en bacterias aisladas de productos cárnicos (aves) destinados a consumo humano. Se recolectaron 60 muestras provenientes de las distintas etapas del ciclo productivo de las aves (granja, frigorífico y supermercado). El estudio se realizó en dos etapas: la primera fue el aislamiento de Escherichia coli, Salmonella spp. y Enterococcus spp.; y la segunda fue la detección y caracterización de la resistencia individual de estas últimas frente a ciertos antimicrobianos. Como resultado de la etapa de aislamiento se observó que un 80% de las muestras de la granja presentaron cultivos positivos con recuentos > 1000 UFC/g para E. coli y un 95% para Enterococcus spp.; un 70% de las muestras de frigorífico tuvo recuentos >1000 UFC/g de E. coli mientras que un 85% de las muestras de supermercado estaban contaminadas con recuentos > 1000 UFC/g de Enterococcus spp., el 15% con E. coli; y una muestra (5%) presentó desarrollo de Salmonella. De los 60 aislamientos analizados, 11 fueron resistentes uno de los antimicrobianos estudiados y 19 fueron resistentes a 2 clases de antimicrobianos. Los resultados de este estudio revelan la necesidad de intensificar los controles higiénico-sanitarios en la cadena de manipulación de las aves, e implementar mejoras para la reducción de patógenos en carne de pollo. Palabras claves: Aves y subproductos, Patógenos bacterianos, Resistencia a antimicrobianos Índice General 1. Introducción 1 1.1 Objetivos 2 2. Antecedentes del Tema 3 2.1 Antimicrobianos y sus mecanismos de acción 3 2.2 Resistencia a antimicrobianos 4 - Mecanismo de resistencia a antimicrobianos 4 - Betalactamasas de espectro extendido (BLEE) 5 - Antecedentes del uso de antimicrobianos en animales y su asociación con la resistencia bacteriana a los antimicrobianos 5 2.3 Enfermedades Transmitidas por los Alimentos (ETA) 8 - Bacterias productoras de ETA 8 - Escherichia coli 8 - Salmonella spp. 9 - Enterococcus spp. 9 3. Diseño Experimental 11 3.1 Detección de Escherichia coli 11 3.2 Detección de Salmonella spp. 11 3.3 Detección de Enterococcus spp. 12 3.4 Conservación de los aislamientos 13 3.5 Interpretación de los resultados 13 3.6 Evaluación de la resistencia a los Antimicrobianos 14 4. Resultados 16 5. Discusión 26 6. Conclusiones 30 7. Referencias Bibliográficas 31 Índice de tablas Tabla 1. Acontecimientos relevantes asociados al uso de antimicrobianos en animales y a la resistencia bacteriana 6 Tabla 2. Diámetro de la zona de inhibición de los antimicrobianos utilizados 15 Tabla 3. Resultados de crecimientos microbianos de las distintas muestras en los distintos medios de cultivos utilizados 16 Tabla 4. Contaminación microbiana según origen de las muestras 23 Tabla 5. Resultados de análisis de resistencia a antimicrobianos de los aislamientos obtenidos a partir de las muestras de aves y subproductos 24 1 1. Introducción El uso inadecuado de agentes antimicrobianos en los seres humanos y en los animales de producción tiene consecuencias importantes para la salud humana y animal (Aidara-Kane, 2012). El riesgo más grande para la salud de los consumidores de productos de origen animal no está dado solamente por los residuos farmacológicos, sino también por el desarrollo de bacterias resistentes a antimicrobianos. Esta resistencia es un problema de dimensiones mundiales, que requiere el esfuerzo y el trabajo en conjunto de todas las naciones y de entes reguladores que involucren a los animales y a los humanos (WHO, 2018). Se encuentran microorganismos resistentes a antimicrobianos en humanos, animales, alimentos y el medio ambiente, por este motivo es importante la colaboración de todos los sectores; que no se prescriban antibióticos sin necesidad, que las personas no compartan sus medicamentos ni se automediquen y que no se empleen antibióticos en forma innecesaria en la producción agroalimentaria. De esta forma se puede evitar que se aceleren los procesos que incrementan la resistencia antimicrobiana (CoNaCRA, 2019). Se considera que bacterias como Escherichia coli y Salmonella spp. multirresistentes y Enterococcus vancomicina resistentes habrían emergido, en parte, de explotaciones agropecuarias. Como consecuencia de esto, se ha generado una permanente discusión sobre el tema de la transferencia de bacterias resistentes de los animales al hombre y, particularmente, sobre la utilización de antibióticos a dosis subterapéuticas para la prevención de enfermedades o simplemente para el aprovechamiento de los efectos “productivos” de los antimicrobianos (Errecalde, 2004). 2 1.1 Objetivos El objetivo general de este proyecto fue aislar bacterias provenientes de alimentos de origen animal para consumo humano en granja, frigorífico y en supermercado; y estudiar sus perfiles de resistencia a los antimicrobianos. Los objetivos específicos fueron: 1) Determinar la presencia de las bacterias frecuentemente aisladas de muestras de origen avícola. 2) Caracterizar la resistencia a los antimicrobianos de los aislamientos obtenidos. 3 2. Antecedentes del tema 2.1 Antimicrobianos y sus mecanismos de acción Los antimicrobianos son sustancias químicas producidas por microorganismos de diversas especies (bacterias, hongos) capaces de detener el crecimiento o destruir una población bacteriana (Quintana, 2013). Tienen dos tipos de acción (Navarro, 2007): - Bactericida: produce la destrucción o muertede los microorganismos (por ejemplo: penicilinas, cefalosporinas, aminoglucósidos, polimixinas). - Bacteriostático: inhibe el crecimiento y la multiplicación de los microorganismos (por ejemplo: cloranfenicol, tetraciclinas, macrólidos, lincomicina, sulfamidas). Los antimicrobianos poseen sitios de acción muy diferentes entre sí. Estos pueden ser (Errecalde, 2004): - Pared bacteriana: es atacada a través del bloqueo de la síntesis de peptidoglicanos, y así se produce la lisis bacteriana. En este grupo se encuentran: betalactámicos (amoxicilina, ácido clavulánico, cefalotina, cefotaxima, ceftazidima e imipenem), glucopéptidos (vancomicina, teicoplanina y avoparcina), bacitracina y estreptograminas. - Membrana bacteriana: es atacada por péptidos catiónicos que disrumpen la porción fosfolipídica de bacterias gram negativas, como las polimixinas (polimixina B y colistina). - Síntesis de proteínas: es interferida en diferentes zonas del ribosoma por diversos agentes, como aminoglucósidos, aminociclitoles y tetraciclinas (porción 30 S del ribosoma); cloranfenicol, tianfenicol y florfenicol (porción 50 S del ribosoma, inhibición de la transpeptidasa) 4 y lincosamidas y macrólidos (porción 50 S, inhibición de la traslocación). - Síntesis de ácidos nucleicos: es inhibida por distintos agentes como sulfamidas, trimetoprima, quinolonas (ácido nalidíxico y ciprofloxacina), novobiocina, nitroimidazoles y nitrofuranos. 2.2 Resistencia a antimicrobianos Las infecciones causadas por bacterias resistentes a antimicrobianos son más difíciles de tratar. A su vez, se produce un incremento en los costos médicos, se prolongan las estancias hospitalarias y aumenta la mortalidad (WHO, 2018). Ciertas concentraciones de antimicrobianos seleccionan cepas resistentes. Es decir, no inducen la resistencia, sino que interfieren en el proceso de selección natural (Errecalde, 2004). Mecanismo de resistencia a antimicrobianos La resistencia de un microorganismo frente a determinado fármaco puede ser de dos tipos (Baires Várguez, 2012): A. Resistencia intrínseca: es una propiedad natural de cada grupo bacteriano. Un ejemplo, es la resistencia propia de todas las bacterias gram negativas frente a la vancomicina. Otro ejemplo son los micoplasmas, que carecen de pared celular y por lo tanto, no son sensibles a la acción de los β-lactámicos. B. Resistencia adquirida: es variable y puede estar presente en una cepa bacteriana de una especie determinada. Por ejemplo, algunas cepas de Staphylococcus spp. frente a la meticilina. La resistencia bacteriana a antimicrobianos se puede originar por mutaciones o mecanismos de transferencia horizontal. Las mutaciones en las bacterias son espontáneas y aleatorias y pueden afectar cualquier gen, ya sea de origen cromosómico como plasmídico. Los mecanismos de transferencia se originan cuando el microorganismo recibe información genética de otro microorganismo; 5 esta información genética puede transferirse por conjugación, transformación, transducción y transposición (Baires Várguez, 2012). Betalactamasas de espectro extendido (BLEE) Uno de los mecanismos más importante en las bacterias gram negativas es la producción de betalactamasas, enzimas capaces de hidrolizar el anillo betalactámico e inactivar a antimicrobianos betalactámicos. Dentro de este grupo, las betalactamasas de espectro extendido (BLEE) tienen capacidad de hidrolizar y causar resistencia a penicilinas, oximino-cefalosporinas (cefotaxima, ceftriaxona, ceftazidima, cefepima) y monobactámicos (aztreonam), entre otros. Pueden ser inhibidas por el ácido clavulánico u otros inhibidores de β-lactamasas como el tazobactam y el sulbactam (Oliver y Cantón, 2004; Navarro et al., 2011). Antecedentes del uso de antimicrobianos en animales y su asociación con la resistencia bacteriana a los antimicrobianos En la década del 50, se comenzaron a utilizar los antimicrobianos en tratamientos profilácticos en grupos de animales. Al alimentar a cerdos con desechos de fermentación de tetraciclinas, se descubrió que estos animales crecían más que los que recibían otros alimentos. Así, se inició el uso de antimicrobianos como promotores del crecimiento adicionados a los alimentos en cantidades subterapéuticas (Errecalde, 2004). A fines de los años 60, se empezó a relacionar el aumento de la resistencia a antimicrobianos con su utilización como promotores de crecimiento, poniendo en alerta la existencia de un posible riesgo de transmisión de bacterias resistentes de animales al humano (Torres y Zarazaga, 2002). Un fenómeno particular fue el uso de avoparcina (molécula glucopeptídica usada como promotor de crecimiento en granjas de pollos y cerdos) en Europa. Debido a su vinculación estructural con la vancomicina, su uso fue prohibido en 6 animales ante la emergencia de Enterococcus resistentes a vancomicina (Errecalde, 2004). Actualmente, si bien aún es tema de discusión, se considera que la utilización de grandes cantidades de agentes antimicrobianos en la producción animal proporciona condiciones favorables para la emergencia, el desarrollo, la propagación y la persistencia de bacterias resistentes a los antimicrobianos que pueden causar infecciones en animales y humanos (Aidara-Kane, 2012). En nuestro país, se creó en el año 2015 el Programa Nacional de Vigilancia de Resistencia a los Antimicrobianos en animales de consumo humano, atendiendo a lo dispuesto en la Resolución Conjunta 834 del Ministerio de Salud y 391 del Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca, en la cual se establece la Estrategia Argentina para el Control de la Resistencia a los Antimicrobianos (Ardoino et al., 2017). El SENASA prohibió, a partir del 2019, la comercialización de alimentos para animales con antibióticos, antiparasitarios y cocciodiostaticos, siguiendo lo planteado por la Unión Europea (UE) y posteriormente por Estados Unidos hace más de una década (SENASA, 2018). Tabla 1. Acontecimientos relevantes asociados al uso de antimicrobianos en animales y a la resistencia bacteriana, extraído de Gutiérrez Ramírez et al. 2013. AÑO ACONTECIMIENTO 1945-1960 La UE advierte del riesgo de resistencia bacteriana a antimicrobianos y demuestra su transmisión vertical y horizontal. 1960 Se empiezan a incluir penicilina, estreptomicina y tetraciclinas en piensos. 1969 Informe Swann. Propuesta de emplear como terapéuticos en piensos sólo los antibióticos no empleados en medicina humana y veterinaria. 1970 Reino Unido instaura las recomendaciones del Informe Swann. 7 1975 Se permite el uso de tilosina y espiramicina, a pesar de tener análogos en medicina humana. 1984 Los granjeros suecos piden que se prohíban los antibióticos como promotores del crecimiento animal por preocupación de los consumidores. 1986 Prohibición del uso de los antibióticos promotores del crecimiento en Suecia. 1993 Diversos estudios revelan la asociación entre la avoparcina y el desarrollo de resistencias a vancomicina en Enterococcus. 1995 Se prohíbe el uso de la avoparcina en Dinamarca. 1996 Se prohíbe el uso de la avoparcina en Alemania y virginiamicina en Dinamarca 1997 Se prohíbe el uso de la avoparcina en la UE. La OMS notifica que los antibióticos promotores del crecimiento deben ser prohibidos. 1998 Dinamarca prohíbe el uso de los todos antibióticos promotores del crecimiento. 1999 La UE recomienda no utilizar antibióticos que se empleen en medicina o veterinaria en las dietas de animales, y que puedan generar resistencia cruzada. 2000 Los laboratorios farmacéuticos se oponen sin éxito a la propuesta de la UE 2001-2004 Se retiran 6 anticoccidiostáticos. 2006 Se prohíben los antibióticos que aún se podían utilizar: avilamicina, flavofosfolipol, monensina y salinomicina.Salinomicina y monensina se pueden utilizar como coccidiostáticos en pollos. 2012 La FDA-CVM aprueba un antimicrobiano nuevo para uso en aves y cerdos llamado tilvalosina (macrólido) que se utiliza tanto en agua de bebida como en alimento. 8 2.3. Enfermedades Transmitidas por los Alimentos Las Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA) son causadas por bacterias, virus, sustancias químicas y/o parásitos que contaminan los alimentos en distintos puntos de la producción de éstos y afectan la salud de una persona o grupo de personas en forma aguda o crónica. Las manifestaciones clínicas más comunes son síntomas gastrointestinales, neurológicos, inmunológicos, insuficiencia multiorgánica y hasta la muerte (WHO, 2015). Bacterias productoras de ETA La contaminación de la carne de aves de corral con bacterias, principalmente de origen fecal, a través del procesamiento, manejo, comercialización y almacenamiento, puede conducir a enfermedades en humanos. Entre los principales agentes bacterianos causantes de infecciones intestinales humanas asociadas a productos avícolas se encuentran Salmonella spp. y Escherichia coli (Uddin et al., 2019; Adeyanju et al., 2014). En esta tesina, por su asociación con ETA y/o su uso como indicador de contaminación fecal, se estudiaron los siguientes organismos: Escherichia coli Son bacilos gram negativos. No esporulan, producen indol a partir de triptófano y no utilizan citrato como fuente de carbono. Fermentan glucosa y lactosa con producción de gas. Poseen una cubierta compuesta por: la membrana citoplasmática, la membrana externa y, entre ambas, un espacio periplásmico constituido por péptidoglicano. Esta última estructura les confiere su forma y rigidez (Canet, 2016). Sus características de crecimiento (temperatura óptima: 37 ºC, pH óptimo: 7 y actividad acuosa: 0,99) destacan la importancia del control de la cadena de frío en las industrias alimentarias, pasteurización de ciertos productos, etc. 9 La mayoría de las cepas de Escherichia coli no son patógenas, aunque hay distintos cepas de E. coli que han adquirido factores de virulencia específicos que le confieren la habilidad de adaptarse a nuevos nichos ecológicos y que causan un amplio espectro de enfermedades. Se ha propuesto un esquema de clasificación basado en la presencia de factores de virulencia de acuerdo con la enfermedad clínica que producen. Se han identificado al menos seis patotipos asociados con infecciones gastrointestinales: E. coli enteropatogénica (EPEC), E. coli enterotoxigénica (ETEC), E. coli verocitotoxigénica (VTEC), E. coli enteroinvasiva (EIEC), E. coli enteroagregativa (EAggEC) y E. coli de adherencia difusa (DAEC) (Nataro y Kaper, 1998). Salmonella spp. Son bacterias gram negativas, no esporulan y son mesófilas (35-37 ºC). El género Salmonella está constituido por dos especies: S. enterica y S. bongori. A su vez, Salmonella spp. se puede clasificar epidemiológicamente en tres grupos: a) aquellas que no tienen preferencia por un huésped en especial, b) las que infectan sólo al hombre: Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi A y Salmonella Paratyphi C y c) las que están adaptadas a distintos animales: S. Abortusovis, a los ovinos; S. Abortusequi, a los equinos y S. Gallinarum, a las aves (ISP, 2016). Las aves y sus derivados son las fuentes más comunes de infección de las serovariedades zoonóticas. Estas infecciones de origen alimentario producen gastroenteritis. Los síntomas (fiebre, diarrea acuosa, dolor abdominal, náuseas, cefalea, etc.) dependen de la dosis infectiva, de la sensibilidad de las personas afectadas y del serovar. Los cuadros más severos se dan en ancianos, niños, inmunodeprimidos y personas hospitalizadas (Rey y Silvestre, 2005). Enterococcus spp. Son cocos gram positivos; se presentan en forma de pares o de cadenas cortas. Son no móviles, con excepción de las especies E. gallinarum y E. casseliflavus. Fermentan varios carbohidratos con producción principalmente 10 de L (+) ácido láctico, pero no de gas. El crecimiento óptimo es a 37 °C, pH 9,6, con 6,5 % de NaCl y 40 % de bilis (Pérez et al., 2010). Son indicadores de inocuidad de los alimentos porque mueren más lentamente que los coliformes, debido a que son muy resistentes a condiciones adversas como congelación, desecación, entre otros. A pesar de ser considerados de baja virulencia, este género ha cobrado una gran importancia en los últimos años por su elevada incidencia en las enfermedades nosocomiales y por su resistencia natural a agentes antimicrobianos convencionales, así como su habilidad de adquirir resistencia de otros microorganismos (Pérez et al., 2010; Sparo et al., 2011). 11 3. Diseño experimental Se recolectaron 60 muestras en 3 etapas diferentes de la cadena productiva de una misma empresa (granja, frigorífico y supermercado) de la provincia de Buenos Aires en el año 2018: 20 muestras en granja (pollos), 20 muestras en frigorífico (filet de pechuga, muslo, pata, pechuga con carcaza, carcaza y ala) y 20 muestras en supermercado (ala, pechuga, muslo, pata y patamuslo). Las muestras se recolectaron con guantes y bolsas de cortes. Se transportaron rotuladas y refrigeradas hasta el laboratorio para su procesamiento. Los análisis microbiológicos se realizaron en Fares Taie de la ciudad de Mar del Plata. 3.1 Detección de E. coli Se siguió la metodología de acuerdo con la norma ISO 16649-1:2018 (ISO, 2018). Procedimiento: 1) Inoculación: se colocaron 25 g de muestra con 225 ml de agua peptonada bufferada en una bolsa de cierre hermético desechable y se homogeneizó en Stomacher. Esta dilución (10-1) se denominó “-1”. 2) Se realizaron 5 diluciones sucesivas en base 10 en agua peptonada y se dejó reposar durante 15 minutos. Estas diluciones se denominaron “-2” a “-6”. 3) Se transfirió 1 ml de las respectivas diluciones a placas de Petri vacías y estériles. Luego se añadió, a cada placa, 15 ml (aprox.) de medio Triptona Bilis X Glucurónido (TBX) previamente enfriado en baño de agua a 42-47 ºC. Se incubaron las placas a 44 ºC durante 18-24 h y se contaron las unidades formadoras de colonias (UFC) típicas de E. coli. 3.2 Detección de Salmonella spp. El procesamiento de la muestra y el aislamiento de Salmonella spp. se realizó según la Norma ISO 6579-1:2017 (ISO, 2017). 12 Procedimiento: 1) Pre-enriquecimiento no selectivo: se colocaron 25 g de muestra y 225 ml de agua peptonada bufferada y se homogeneizó en Stomacher. Se incubó por 24 h a 37 ºC. 2) Enriquecimiento en medio líquido selectivo: - se inoculó 0,1 ml de la muestra pre-enriquecida en 10 ml de Caldo Rappaport Vassiliadis con Soja (RVS) y se incubó a 42 ºC durante 24 ± 3 h. - se inoculó 1 ml de la muestra pre-enriquecida en 10 ml Caldo Muller- Kauffmann tetrationato/ novobiocina (MKTTn) y se incubó a 37 ºC durante 24 ± 3 h. 3) Aislamiento en medio selectivo y diferencial: se tomaron alícuotas de los cultivos obtenidos en la etapa anterior y se sembraron con ansa en aro en placas conteniendo los respectivos medios sólidos selectivos: - Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD) -Agar Salmonella/Shigella (SS) Se incubó a 37 ºC durante 24 ± 3 h. 4) Confirmación: las colonias presuntivas se resembraron en Agar Tripticasa Soya (ATS) y se realizó su confirmación por pruebas bioquímicas (TSI, LIA, urea, triptofano y Simmons). 3.3 Detección de Enterococcus spp. El procesamiento de la muestra y el aislamiento de Enterococcus spp. se realizó según la Norma ISO 7899-2: 2000 (ISO, 2000). Procedimiento: 1) Inoculación: se colocaron 25 g de muestra y 225 ml de agua peptona bufferada en una bolsa de cierre hermético desechable y se homogeneizó en Stomacher. 2) Se realizaron diluciones sucesivas en base 10 en agua peptonaday se dejó reposar durante 15 min. 3) Se colocó 0,1 ml de cada dilución en las respetivas placas conteniendo el medio selectivo Agar Azida Bilis Esculina (AABE) y también en placas con 13 AABE más Vancomicina. Se esparció por la superficie de la placa con una espátula en forma de “L”. Las placas se incubaron a 37 ºC durante 24 h. 3.4 Conservación de los aislamientos En los casos que hubo crecimiento, se levantaron con ansa las colonias individuales de la dilución máxima positiva y se colocaron en crioviales conteniendo caldo nutritivo con 10 % de glicerol. Todos los aislamientos se conservaron en freezer a -70 ºC, rotulados con el microorganismo correspondiente, la fecha, la dilución y el número de muestra para su posterior caracterización. 3.5 Interpretación de resultados E. coli Teniendo en cuenta los criterios microbiológicos nacionales e internacionales recomendados para distintos tipos de muestras de establecimientos procesado- res y faenadores de aves (SENASA, 1995, USDA, 1996), se estableció como criterio de inaceptable todo tipo de muestra con recuentos >1000UFC/g. Salmonella spp. Se consideró inaceptable la presencia de Salmonella en 25 g de muestra si- guiendo el criterio obligatorio de la Resolución N° 198/95 de SENASA (SENA- SA, 1995). Enterococcus spp. Considerando que no existen criterios microbiológicos para pollos, se utilizó el mismo valor de punto de corte que para E. coli. 14 3.6 Evaluación de resistencia a antimicrobianos Los estudios de susceptibilidad a los antimicrobianos se realizaron en forma manual utilizando la técnica de difusión con discos en medio sólido según normas estandarizadas del CLSI-M100 (CLSI, 2014). Procedimiento: 1) Se descongelaron progresivamente los crioviales, de -70 ºC a -20 ºC por 24 h y luego se colocaron -4 ºC. Se dejaron a temperatura ambiente por 2 h aproximadamente previo a su utilización. 2) Se repicó una cepa de cada criovial en placas de Agar Sangre y se colocaron en una estufa a 37 ºC por 24 a 48 h. 3) Se tomaron colonias con ansa en punta y se suspendieron en solución fisiológica para obtener una turbidez equivalente al estándar 0,5 de la escala de McFarland. 4) Se embebió un hisopo estéril y se escurrió sobre las paredes del tubo. Se realizó un estriado en placas que contenían Agar Müller-Hinton y se les depositó un disco del antibiótico correspondiente: - Cefalotina (30 µg), ciprofloxacina (5 µg), ac. nalidíxico (30 µg), imipenem (10 µg) y colistina (10 µg) para E. coli y Salmonella spp. - Vancomicina (30 µg) para Enterococcus spp. Luego se incubó en una estufa de 37 ºC por 24 h. Transcurrido este tiempo se midieron los halos de inhibición y las lecturas se interpretaron como sensible (S), intermedia (I) o resistente (R) según las categorías establecidas por CLSI- M100. Tabla 2 (CLSI, 2014). En las cepas que presentaron resistencia a cefalotina (halo ≤ 14 mm) se realizó una prueba fenotípica para detección de BLEE: técnica de difusión con los discos de ceftazidima (30 µg), amoxicilina + acido clavulánico (AMC 30 µg) y cefotaxima (30 µg) que evalúa el efecto sinérgico llamado “efecto huevo” entre el AMC y las cefalosporinas de tercera generación. 15 Tabla 2. Diámetro de la zona de inhibición de los antimicrobianos utilizados Antimicrobiano Contenido del disco Diámetro (mm) de la zona de inhibición R I S Cefalotina 30 g ≤14 15 a 17 ≥18 Ciprofloxacina (Enterobacteriaceae excepto Salmonella) 5 g ≤15 16-20 ≥21 Ciprofloxacina (Salmonella) 5 g ≤20 21 a 30 ≥31 Ac. Nalidíxico 30 g ≤13 14 a 18 ≥19 Imipenem 10 g ≤19 20 a 22 ≥23 Colistina 10 g ≤10 - ≥11 Vancomicina 30 g ≤14 15 a 16 ≥17 Ceftazidima 30 g ≤17 18 a 20 ≥21 Amoxicilina + ácido Clavulanico 30 g ≤13 14 a 17 ≥18 Cefotaxima 30 g ≤22 23 a 25 ≥26 16 4. Resultados Se analizaron 60 muestras de pollos obtenidas de granja, frigorífico o super- mercado. En la tabla 3 se indica la procedencia de cada muestra y los aisla- mientos obtenidos. Tabla 3. Resultados de crecimientos microbianos de las distintas muestras en los distintos medios de cultivos utilizados Nº de muestra Procedencia Medio de cultivo† Tipificación Dil. máx pos# Crecimiento¥ 163168 Granja TBX E. coli -10 AABE Enterococcus -9 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163169 Granja TBX E. coli ND AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163170 Granja TBX E. coli -10 AABE Enterococcus -9 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163171 Granja TBX E. coli -9 AABE Enterococcus -4 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163172 Granja TBX E. coli -7 AABE Enterococcus -7 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163173 Granja TBX E. coli -5 AABE Enterococcus -10 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 17 163174 Granja TBX E. coli -6 AABE Enterococcus -4 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163175 Granja TBX E. coli -10 AABE Enterococcus -5 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163176 Granja TBX E. coli -6 AABE Enterococcus -6 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163177 Granja TBX E. coli ND AABE Enterococcus -6 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163178 Granja TBX E. coli -6 AABE Enterococcus -6 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163179 Granja TBX E. coli -6 AABE Enterococcus -6 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163180 Granja TBX E. coli -6 AABE Enterococcus -6 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163181 Granja TBX E. coli -6 AABE Enterococcus -6 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163182 Granja TBX E. coli -6 AABE Enterococcus -6 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 18 163183 Granja TBX E. coli ND AABE Enterococcus -5 AABE + Vancomicina Enterococcus -1 SS y XLD Salmonella Ausencia 163184 Granja TBX E. coli ND AABE Enterococcus -6 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163185 Granja TBX E. coli -6 AABE Enterococcus -6 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163186 Granja TBX E. coli -6 AABE Enterococcus -6 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163187 Granja TBX E. coli -6 AABE Enterococcus -6 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163905 Frigorífico (filet pechuga) TBX E. coli ND AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163906 Frigorífico (muslo) TBX E. coli -4 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163907 Frigorífico (filet pechuga) TBX E. coli -3 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163908 Frigorífico (pata) TBX E. coli -5 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 19 163909 Frigorífico (pechuga c/carcaza) TBX E. coli -5 AABE Enterococcus ND AABE + VancomicinaEnterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163910 Frigorífico (muslo) TBX E. coli -3 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163911 Frigorífico (filet pechuga) TBX E. coli -2 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163912 Frigorífico (filet pechuga) TBX E. coli -4 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163913 Frigorífico (carcaza) TBX E. coli -4 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163914 Frigorífico (ala) TBX E. coli -3 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163915 Frigorífico (pata) TBX E. coli -5 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163916 Frigorífico (filet pechuga) TBX E. coli -4 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163917 Frigorífico (pechuga c/carcaza) TBX E. coli -3 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 20 163918 Frigorífico (filet pechuga) TBX E. coli -2 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163919 Frigorífico (pata) TBX E. coli ND AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163920 Frigorífico (pata) TBX E. coli -3 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163921 Frigorífico (filet pechuga) TBX E. coli -4 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163922 Frigorífico (ala) TBX E. coli -2 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163923 Frigorífico (filet pechuga) TBX E. coli -3 AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163924 Frigorífico (pechuga c/carcaza) TBX E. coli ND AABE Enterococcus ND AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 162315 Supermercado (Alas) TBX E. coli ND AABE Enterococcus -4 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 162316 Supermercado (Pechuga) TBX E. coli ND AABE Enterococcus -4 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 21 162317 Supermercado (Alas) TBX E. coli ND AABE Enterococcus -6 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 162318 Supermercado (Pata) TBX E. coli -2 AABE Enterococcus -4 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 162319 Supermercado (Muslo) TBX E. coli -1 AABE Enterococcus -4 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 162592 Supermercado (Muslo) TBX E. coli -1 AABE Enterococcus -5 AABE + Vancomicina Enterococcus -2 SS y XLD Salmonella Ausencia 162593 Supermercado (Alas) TBX E. coli -1 AABE Enterococcus -4 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 162594 Supermercado (Patas) TBX E. coli -1 AABE Enterococcus -5 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 162595 Supermercado (Pechuga) TBX E. coli -1 AABE Enterococcus -4 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 162596 Supermercado (Muslo) TBX E. coli ND AABE Enterococcus -4 AABE + Vancomicina Enterococcus -2 SS y XLD Salmonella Ausencia 162597 Supermercado (Patas) TBX E. coli ND AABE Enterococcus -4 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 22 162598 Supermercado (Pechuga) TBX E. coli -2 AABE Enterococcus -5 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 162599 Supermercado (Patamuslo) TBX E. coli -3 AABE Enterococcus -5 AABE + Vancomicina Enterococcus -1 SS y XLD Salmonella Ausencia 163005 Supermercado (Muslo) TBX E. coli -2 AABE Enterococcus -4 AABE + Vanco Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163006 Supermercado (Patas) TBX E. coli -1 AABE Enterococcus -2 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163007 Supermercado (Pechuga) TBX E. coli -1 AABE Enterococcus -4 AABE + Vancomicina Enterococcus -2 SS y XLD Salmonella Ausencia 163008 Supermercado (Pata) TBX E. coli -3 AABE Enterococcus -3 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Presencia 163009 Supermercado (Muslo) TBX E. coli -3 AABE Enterococcus -4 AABE + Vancomicina Enterococcus -2 SS y XLD Salmonella Ausencia 163010 Supermercado (Pechuga) TBX E. coli -1 AABE Enterococcus -2 AABE + Vancomicina Enterococcus ND SS y XLD Salmonella Ausencia 163011 Supermercado (Patamuslo) TBX E. coli -1 AABE Enterococcus -2 AABE + Vancomicina Enterococcus -1 SS y XLD Salmonella Ausencia 23 †Los medios de cultivo utilizados fueron: TBX (Triptona Bilis X Glucurónido), AABE (Agar Azida Bilis Esculina), AABE + Vancomicina, SS (Agar Salmonella/Shigella) y XLD (Agar xilosa lisina desoxicolato). # Dil. máx pos: indica la máxima dilución en la que se observó crecimiento. * ND: no determinada, indica ausencia de crecimiento en dil -1. ¥ Presencia o Ausencia de Sal- monella spp. A partir del análisis de los resultados por origen (Tabla 4), se observó que un 80% de las muestras obtenidas en granja presentaron cultivos positivos para E. coli y un 95% para Enterococcus spp. con recuentos > 1000 UFC/g. De las muestras obtenidas en frigorífico, 17 (85%) tuvo crecimiento de E. coli, pero de esas fueron inaceptables 14 (70%) (recuentos >1000 UFC/g). En nin- guna muestra se aisló Enterococcus spp. ni Salmonella spp. De las muestras tomadas en supermercado, el 100 % dieron cultivos positivos al menos a uno de los microorganismos buscados. La mayoría de las muestras (85%) estaban contaminadas con recuentos inaceptables de Enterococcus spp. Tres muestras (15%) presentaron recuentos inaceptables (> 1000 UFC/g) de E. coli. Una muestra (5%) presentó desarrollo de Salmonella spp. mostró también recuentos inaceptables de E. coli y Enterococcus spp. Tabla 4. Contaminación microbiana según origen de las muestras Procedencia Muestras Cultivos positivos* E. coli (> 1000 UFC/g) Enterococcus spp. (> 1000 UFC/g) Salmonella spp. (presencia) N N % N % N % N % GRANJA Pollos (Total granja) 20 19 95 16 80 19 95 0 0 FRIGORÍFICO Ala 2 2 100 1 50 0 0 0 0 Carcaza 1 1 100 1 100 0 0 0 0 Filet pechuga 8 7 87 5 62 0 0 0 0 Muslo 2 2 100 2 100 0 0 0 0 Pata 4 3 75 3 75 0 0 0 0 Pechuga con carcaza 3 2 67 2 67 0 0 0 0 Total 20 17 85 14 70 0 0 0 0 24 SUPERMER- CADO Ala 3 3 100 0 0 3 100 0 0 Muslo 5 5 100 1 20 5 100 0 0 Pata 5 5 100 1 20 4 80 1 20 Patamuslo 2 2 100 1 50 1 50 0 0 Pechuga 5 5 100 0 0 4 80 0 0 Total 20 20 100 3 15 17 85 1 5 *Cultivos positivos a alguno de los microorganismos buscados N: número de muestras Los aislamientos obtenidos de las distintas muestras fueron analizados frente a distintos antimicrobianos. De un total de 60 aislamientos, 30 mostraron resis- tencia al menos a uno de los antimicrobianos analizados (Tabla 5). Tabla 5. Resultados de análisis de resistencia a antimicrobianos de los aisla-mientos obtenidos a partir de las muestras de aves y subproductos. Muestra Microorganismo Aislado Resistencia Fenotípica* Mecanismo de resistencia R I GRANJA POLLO E. coli COL-CTN - - POLLO E. coli NAL - - POLLO E. coli CTN-NAL - - POLLO E. coli NAL-COL - - POLLO E. coli CTN-NAL - - POLLO E. coli NAL - - POLLO E. coli CTN-NAL - - POLLO E. coli NAL - - POLLO E. coli NAL - - FRIGORÍFICO FILET PECHUGA E. coli CTN-NAL - - FILET PECHUGA E. coli CTN- NAL - - PATA E. coli CTN - - FILET PECHUGA E. coli CTN - - MUSLO E. coli CTN - - MUSLO E. coli CTN-NAL - BLEE ALA E. coli CTN-NAL - - PATA E. coli CTN - FILET PECHUGA E. coli CTN-NAL - BLEE FILET PECHUGA E. coli CTN-NAL - - PATA E. coli CTN-NAL - BLEE FILET PECHUGA E. coli CTN-NAL - BLEE FILET PECHUGA E. coli CTN-NAL - - SUPERMERCADO ALA E. coli NAL - - 25 PATA E. coli NAL - - PATA E. coli CTN - - PECHUGA E. coli CTN-NAL - BLEE PECHUGA E. coli CIP-NAL - - CUARTO Enterococcus spp. CIP-NAL - - CUARTO E. coli CIP-NAL - - PATA Salmonella spp. CIP-NAL - - * R indica Resistencia, I indica susceptibilidad Intermedia a los antimicrobianos según se indica: cefalotina (CTN), colistina (COL), ácido nalidíxico (NAL), ciprofloxacina (CIP) * BLEE indica detección de Beta-Lactamasas de espectro extendido por efecto sinérgico (“efec- to huevo”) entre amoxicilina+ácido clavulánico y cefalosporinas de tercera generación 26 5. Discusión El sector avícola continúa creciendo e industrializándose en muchas partes del mundo (FAO, 2020). Sin embargo, algunas prácticas de la producción de carne de aves en gran escala han generado problemas sanitarios, entre ellos la transmisión de bacterias patógenas al hombre y la selección de bacterias resistentes a antimicrobianos (Audisio, 2007). En este trabajo nos propusimos evaluar la presencia de Escherichia coli, Salmonella spp. y Enterococcus spp. en muestras de las distintas etapas de la cadena productiva de carne avícola y caracterizar la resistencia a los antimicrobianos de los aislamientos obtenidos. En el análisis de las muestras de granja, se aislaron cepas de E. coli y Enterococcus spp. en altos porcentajes (80% y 95%, respectivamente), comparables a los detectados en un estudio realizado en Chile en muestras cloacales (89 y 87%, respectivamente) (Campos Aguirre, 2005). Por otro lado, y a pesar de que estudios en nuestro país estiman una prevalencia en granjas del 43-45% (Genta y Bueno, 2013), no se detectó Salmonella spp. en esta etapa. Un alto porcentaje (70%) de muestras de carne obtenidas en frigorífico resultaron inaceptables por altos recuentos de E. coli. Se ha sugerido que la contaminación cruzada entre aves vivas y canales, temperaturas incorrectas en los distintos procesos, entre otros factores, contribuirían a la propagación bacteriana en mataderos (Audisio, 2007). También en las muestras de supermercado se observó alta contaminación fecal a través de la detección de un alto porcentaje (85%) de muestras con altos recuentos de Enterococcus spp. y un 15% con recuentos inaceptables de E. coli. Fallas en la cadena de manipulación debido a malas prácticas higiénicas de los operarios; en el traslado debido a la contaminación de los elementos y variaciones de temperatura y también, y en la comercialización podrían ser algunos de los factores que contribuyen a la contaminación observada en los productos en 27 góndola (Huertas Moreno, A. 2018). Se detectó Salmonella spp. en una muestra de pata, representando el 5% de aislamiento en las muestras de supermercado, cifra menor a la reportada en otros países (López, 2018). Sin embargo, la presencia de Salmonella spp. en altos recuentos son indicadores de contaminación fecal en dicha muestra implicando un alto riesgo de consumo. Esta bacteria causa intoxicación alimentaria con síntomas como fiebre, diarrea y dolor abdominal y en el caso que ingrese al torrente sanguíneo, puede ser mortal (Mercado et al., 2012). El desarrollo y utilización de antimicrobianos ha sido de importancia para la resolución de muchas infecciones. La presión de selección que estos antimicrobianos ejercen sobre las bacterias favorece la aparición y diseminación de distintos mecanismos de resistencia a nivel mundial. El fenómeno de la resistencia a los antibióticos se ve impulsado por el uso de estas drogas en medicina veterinaria y humana y también en la producción de alimentos (Sánchez Bruni, 2015). Estas resistencias pueden dar lugar a fallos terapéuticos en tratamientos veterinarios y podría incrementar el riesgo de transmisión de bacterias resistentes al hombre (WHO, 2018). Diversos estudios demuestran que la situación de resistencia a antimicrobianos es alarmante en todo el mundo. En China, Yang et al. (2004), realizaron un estudio para caracterizar cepas de E. coli multirresistentes aisladas en pollos. En las pruebas de susceptibilidad se observó un 100% de resistencia al ácido nalidíxico, 98% a tetraciclina, 84% a sulfametoxazol, 79% a ampicilina, 77% a estreptomicina y el 76% a trimetropin con sulfametoxazol. También se detectó resistencia a las fluoroquinolonas, tales como levofloxacina, ciprofloxacina, y difloxacina. Así mismo, Camacho et al. (2010) realizaron un estudio en México para detectar Salmonella spp. en muestras de pollo, y evaluar la resistencia a 18 antimicrobianos diferentes. Aquellos frente a los cuales se presentó mayor número de aislamientos resistentes fueron cefalotina, amoxicilina, ácido clavulánico, cefoxitina, y ampicilina, todos ellos pertenecientes al grupo de los betalactámicos. En Venezuela, Briceño et al. (2007) evaluaron la resistencia a 28 las fluoroquinolonas en Salmonella spp. aisladas en el procesamiento de pollo entero. Evidenciaron un alto porcentaje de resistencia para ácido nalidíxico (73%) y de baja resistencia (3%) para ciprofloxacina. En nuestro estudio, la única cepa de Salmonella spp. fue resistente a CIP-NAL. De los 60 aislamientos analizados en nuestro trabajo, 11 fueron resistentes a uno de los antimicrobianos estudiados y 19 fueron resistentes a 2 clases de antimicrobianos. Los perfiles de resistencia más prevalentes fueron CIP- NAL y CTN-NAL. Cinco aislamientos, a su vez, fueron resistentes amoxicilina+ácido clavulánico y a cefalosporinas de tercera generación, lo que indicaría detección de Betalactamasas de espectro extendido (BLEE). Esto es de gran importancia ya que las BLEE son enzimas producidas por bacilos gram negativos y le confieren resistencia a la mayoría de los antibióticos betalactámicos (Abreu et al., 2013). Los aislamientos E. coli con resistencia posiblemente asociada a BLEE se encontraron en una prevalencia del 8,3 %. Se aislaron principalmente de muestras de frigorífico y no se detectaron en muestras de granjas. Estos resultados difieren de otros estudios en granjas en otros países que evidenciaron alta prevalencia de E. coli BLEE en pollos (Abreu et al., 2013, Li et al., 2010). Por otro lado, la resistencia a colistina se observó en 2 aislamientos obtenidos en granja. Es importante destacar que los muestreos de este trabajo se realizaron en el 2018, año previo a la prohibición del uso de productos veterinarios conteniendo colistina (SENASA, 2019). Si bien no se pueden asociar los resultados obtenidos en este estudio a prácticas particulares de este establecimiento (ya que no fueron incluidas en el análisis), se considera que la exposición prolongada a dosis bajas de antimicrobianos (por ej. contenido en alimentos) tiene mayor probabilidad de dar origen a la aparición de resistencia a dichos antimicrobianos que el tratamiento o la prevención de infecciones en animales productores de alimentos (WHO, 2008). En este sentido, y en el marco de la lucha contra la resistencia antimicrobiana, nuestro país ha dado de baja los registrosy certificados de uso y comercialización de alimentos para animales con antibióticos desde principios del 2019 (SENASA, 2019). 29 En este trabajo, si bien hubo crecimiento de Enterococcus spp. en algunas placas con Vancomicina, no se detectó resistencia por la técnica de difusión con discos en medio sólido. Por otro lado, Novais et al. (2005), llevaron cabo un estudio prospectivo en pollos entre los años 1999 a 2001 en Portugal determinando la presencia de Enterococcus spp. resistentes a diferentes antibióticos. Entre ellos hallaron Enterococcus resistentes a vancomicina en un 48%, y resistencia a otros antimicrobianos tales como gentamicina, estreptomicina y kanamicina. Independientemente de los antimicrobianos utilizados en los estudios mencionados anteriormente y en éste, la resistencia a antimicrobianos que están generando las bacterias es una preocupación a nivel mundial en la salud humana y animal. Es por este motivo que la acción coordinada entre ambos sectores es fundamental si queremos preservar la eficacia de los tratamientos vitales, y de la misma manera, nuestro futuro (OIE, 2016). 30 6. Conclusiones Se detectaron altos porcentajes de muestras con contaminación bacteriana en frigorífico (altos recuentos de E. coli) y de supermercado (principalmente altos recuentos de Enterococcus spp.). Cerca del 50% de los aislamientos de E. coli fueron resistentes a algunos de los antimicrobianos estudiados. A su vez, 5 aislamientos presentaron resistencia posiblemente asociada a BLEE. No se detectó resistencia de Enterococcus spp. a vancomicina por la técnica de difusión con discos en medio sólido. La única cepa de Salmonella spp. aislada fue resistente a ciprofloxacina y ácido nalidíxico. La entrada de patógenos en la cadena alimentaria representa un riesgo para los consumidores y, desde el punto de vista de la salud pública, esta situación se ve agravada por la presencia de cepas resistentes a antimicrobianos. Los resultados de este estudio revelan la necesidad de intensificar los controles higiénico-sanitarios en la cadena de manipulación de las aves, e implementar mejoras para la reducción de patógenos en carne de pollo. 31 7. Referencias bibliográficas Abreu, R.; Castro-Hernández, B.; Madueño, A.; Espigares-Rodríguez, E.; Moreno-Roldán, E.; Moreno, P.; Sánchez-Tudela, JM.; Arias, A. (2013). Prevalencia de cepas de Escherichia coli productoras de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) aisladas en pollos de granjas avícolas de la isla de Tenerife (España). Higiene y Sanidad Ambiental, 13 (4): 1091-1096. Adeyanju, G. T.; Ishola, O. (2014). Salmonella and Escherichia coli contamination of poultry meat from a processing plant and retail markets in Ibadan, Oyo State, Nigeria. Springer plus, 3, 139. Aidara-Kane, A. (2012). Containment of antimicrobial resistance due to use of antimicrobial agents in animals intended for food: WHO perspective. Revue Scientifique et Technique (International Office of Epizootics) 31, 277-287. Ardoino, S. M.; Toso, R. E.; Toribio M. S.; Álvarez, H. L.; Mariani, E. L.; Cachau, P. D.; Mancilla, M. V.; Oriani D. S. (2017). Antimicrobianos como promotores de crecimiento (AGP) en alimentos balanceados para aves: uso, resistencia bacteriana, nuevas alternativas y opciones de reemplazo. Ciencia Veterinaria 19, 50-66. Disponible en el URL: http://dx.doi.org/10.19137/cienvet-20171914 (Fecha de consulta octubre de 2019). Audisio, MC. (2007). Aves. pp 117-124. En: Carrillo (ed). Manual de Microbiología de los Alimentos. Facultad de Ciencias Agrarias, UNJU, SS Jujuy. Baires Várguez, A. (2012). Resistencia antibiótica, pp 159-163. En: Farmacología y Terapéutica en Odontología. Medica Panamericana (Ed). Briceño-Torres L.; Narváez-Bravo, C. A.; Rodas-González A.: Wittum, T. H.; Hoet, A. E. (2007). Resistencia a las fluoroquinolonas y otros antimicrobianos en cepas de Salmonella spp. aisladas en el procesamiento de pollo entero. Revista Científica 17, 521-528. Camacho, O.; Acedo, L.; Moreno, G.; Sánchez, R.; Castillón, L.; Navarro, M. (2010). Detección de Salmonella resistente a los antibióticos en vísceras de pollo. Biotecnia, 12, 3-11. Campos Aguirre, L. (2005). Utilización de bacterias indicadoras para el estudio de la resistencia bacteriana en aves de consumo humano. Tesis de Grado. Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias. Universidad de Chile. Canet, J. Escherichia coli: características, patogenicidad y prevención (I). Betelgeux. Enero, 2016. Disponible en el URL: http://www.betelgeux.es/blog/2016/01/19/escherichia-coli-caracteristicas- patogenicidad-y-prevencion-i/ (Fecha de consulta enero de 2020). CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute. (2014). Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; 24th Informational Supplement; CLSI Supplement M100-S24; Wayne, PA, USA. 32 CoNaCRA, Comisión Nacional para el Control de Resistencia Antimicrobiana. Resistencia Antimicrobiana, estado actual República Argentina, 2019. Disponible en el URL: https://www.paho.org/arg/index.php?option=com_docman&view=download&alia s=415-resistencia-antimicrobiana&category_slug=epidemiologia-prevencion-y- control-de-enfermedades&Itemid=624 (Fecha de consulta Agosto de 2020) Errecalde, J. O. (2004). Uso de antimicrobianos en animales de consumo. Incidencia del Desarrollo de Resistencia en la salud pública. Ed: FAO 2004. Roma, Italia. FAO, Food and Agriculture Organization of the United Nations. Gateway to poultry production and products, 2020. Disponible en el URL: http://www.fao.org/poultry-production-products/production/en/ (Fecha de consulta 28/4/2020). Genta, G.; Bueno D. J. 2013. Salmonella en granjas de pollos parrilleros de la provincia de Entre Ríos. Presentación en el XIII Congreso Argentino de Microbiología 2013. Revista Argentina de Microbiología 45, 84. Huertas Moreno, A. 2018. Evaluación cualitativa de riesgos en una cadena productiva de pollo y sus relaciones con el eje de inocuidad de la Seguridad Alimentaria y Nutricional. Trabajo Final de Maestría. Facultad de Medicina. Colombia. ISO, International Organization for Standardization. 2000. Water quality - Detection and enumeration of intestinal enterococci- Part 2: Membrane filtration method. URL: https://www.iso.org/standard/14854.html (Fecha de consulta mayo de 2020). ISO, International Organization for Standardization. 2017. Microbiology of the food chain. Horizontal method for the detection, enumeration, and serotyping of Salmonella. Part 1: Salmonella spp detection. Disponible en URL: https://www.iso.org/standard/56712.html (Fecha de consulta mayo de 2020). ISO, International Organization for Standardization. 2018. Microbiology of the food chain. Horizontal method for enumeration of Escherichia coli beta- glucuronidase positive. Part 1: Colony counting technique at 44 degrees C using membranes and 5-bromine-4-chloro-3-indolele beta-D-glucuronide. Disponible en URL: https://www.iso.org/standard/64951.html (Fecha de consulta mayo de 2020). ISP, Instituto de Salud Pública de Chile. (2016). Boletín de Vigilancia de Laboratorio. Salmonella spp. 2012-2016, septiembre 2016. Disponible en el URL:http://www.ispch.cl/sites/default/files/BoletinSalmonella-23012017A.pdf (Fecha de consulta mayo de 2020). Li, J., Ma, Y., Hu, C., Jin, S., Zhang, Q., Ding, H., Ran, L., Cui, S. (2010). Dissemination of cefotaxime-M-producing Escherichia coli isolates in poultry farms, but not swine farms, in China. Foodborne Pathogens and Disease 7, 1387-1392. 33 López, A.; Burgos, T.; Díaz, M.; Mejía, R; Quinteros, E. (2018). Contaminación microbiológica de carne de pollo en 43 supermercados de El Salvador. ALERTA: Revista Científica del Instituto Nacional de Salud de El Salvador 1(2, 45-53. URL: https://doi.org/10.5377/alerta.v1i2.7134 . (Fecha de consulta Junio de 2020).Mercado, M., Avila, J., Rey, M., Montoya, M., Gamboa, A., Carrascal, A. K., & Correa, D. X. (2012). Brotes por Salmonella spp., Staphylococcus aureus y Listeria monocytogenes asociados al consumo de pollo. Revisión sistemática de la literatura. Biomédica, 32(3), 375–385. Disponible en el URL: https://doi.org/10.7705/biomedica.v32i3.697 (Fecha de consulta febrero de 2020). Nataro, J.; Kaper, J. (1998). Diarrheagenic Escherichia coli. Clinical Microbiology Reviews 11, 142-201. Navarro, A. R. A. (2007). Antibióticos de uso veterinario y su relación con la seguridad alimentaria y salud pública. Discurso de Ingreso. Real Academia de Ciencias Veterinarias, Instituto de España. Disponible en el URL: http://www.racve.es/files/2013/03/contenido_racve_11584208032013.pdf. (Fecha de consulta noviembre 2019). Navarro, F.; Calvo, J.; Cantón, R.; Fernández-Cuenca, F.; Mirelis, B. (2011). Detección fenotípica de mecanismos de resistencia en microorganismos gramnegativos. Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica 29, 524-534. Novais, C.; Coque, T.; Costa, M.; Baquero, F.; Peiye, L. (2005). High occurrence and persistence of antibiotic-resistant enteroccocci in poultry food samples in Portugal. Journal of Antimicrobial Chemotherapy 56, 1139-1143. OIE, Organización Mundial de la Salud Animal. Estrategia de la OIE sobre la resistencia a los agentes antimicrobianos y su uso prudente. Noviembre 2016; [12 pantallas]. Disponible en el URL: https://www.oie.int/fileadmin/Home/esp/Media_Center/docs/pdf/PortalAMR/ES_ OIE-AMRstrategy.pdf (Fecha de consulta en Agosto de 2018). Oliver, A; Cantón, R. (2004). Enterobacterias productoras de β-lactamasas plasmídicas de espectro extendido. Control calidad SEIMC, p. 1-2. Pérez Diaz, M.; Martínez Rodriguez, C.; Zhurbenko, R. (2010). Revista Cubana de Higiene y Epidemiología 48, 147-161. Quintana, A. (2013). Bases microbiológicas del uso de antimicrobianos. Journal of Chemical Information and Modeling, 53(9), 1689-1699. Rey, A. M.; Silvestre, A. A. (2005). Comer Sin Riesgos 2. Las Enfermedades Transmitidas por los Alimentos. Hemisferio Sur (Ed). Sanchez Bruni, S. F. (2015). Caracterización y control de resistencia antimicrobiana: un desafío interdisciplinario integrado. Ciencia e Investigación, 65 Nº 4 (Fecha de consulta agosto de 2020). 34 SENASA, Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. (2016). Resolución 336/16. Disponible en el URL: http://www.senasa.gob.ar/sites/default/files/normativas/archivos/r_senasa_336- 2016.pdf. (Fecha de consulta noviembre de 2019). SENASA, Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. Resolución 22/2019. Boletín Oficial de la República Argentina. Enero 2019. Disponible en URL: https://www.boletinoficial.gob.ar/detalleAviso/primera/200151/20190115 (Fecha de consulta 9 de Junio de 2020). SENASA, Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. Resolución 1119/2018. Boletín Oficial de la República Argentina. Diciembre 2018. Disponible en URL: https://www.boletinoficial.gob.ar/detalleAviso/primera/199463/20190103 (Fecha de consulta enero de 2019). SENASA, Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria. (1995). Resolución 198/95. Art 14, Anexo II. 1995. Disponible en URL: http://www.loa.org.ar/leg/Anexo%20RE-198-1995-SENASA.pdf (Fecha de consulta enero de 2019). Sparo, M., Urbizu, L., Solana, M. V., Pourcel, G., Delpech, G., Confalonieri, A., Ceci, M, Sanchez Bruni, S. F. (2012). High‐level resistance to gentamicin: genetic transfer between Enterococcus faecalis isolated from food of animal origin and human microbiota. Letters in Applied Microbiology, 54, 119-125. Torres, C; Zarazaga, M. (2002). Antibióticos como promotores de crecimiento en animales ¿Vamos por el buen camino? Gaceta Sanitaria 16, 109-12. Disponible en el URL: https://www.researchgate.net/publication/26377514_Antibioticos_como_promot ores_del_crecimiento_en_animales_Vamos_por_el_buen_camino (fecha de consulta agosto de 2018). Uddin, J.; Hossain, K.; Hossain, S.; Saha, K.; Jubyda, F. T.; Haque, R.; Billah, B.; Ali Azam Talukder A .A.; Parvez, A. A.; Dey, S. K. (2019). Bacteriological assessments of foodborne pathogens in poultry meat at different super shops in Dhaka, Bangladesh. Italian Journal of Food Safety 8, 1. USDA, United Stated Department of Agriculture (1996). Guidelines for Escherichia coli Testing for. Process Control Verification in Poultry Slaughter Establishments. Disponible en el URL: https://www.fsis.usda.gov/wps/wcm/connect/3efc7f8e-e6a2-4997-91ba- 9c579c2a1f14/Guideline_for_Ecoli_Testing_Slaughter_Estab.pdf?MOD=AJPER ES (fecha de consulta agosto de 2020). Vega Ramírez. 2017. Uso de Antibióticos y Coadyuvantes del crecimiento animal y su repercusión en el ser humano: Trabajo de Fin de Grado. Facultad de Farmacia. Universidad Complutense. WHO, World Health Organization. (2015) Enfermedades de transmisión alimentaria,. Disponible en el URL: 35 https://www.who.int/topics/foodborne_diseases/es/ (Fecha de consulta en enero de 2019). WHO, World Health Organization. (2018) Resistencia a los Antibióticos. Disponible en el URL: https://www.who.int/es/news-room/fact- sheets/detail/resistencia-a-los-antibi%C3%B3ticos. (Fecha de consulta en enero de 2019). WHO, World Health Organization. (2008) Resistencia a los antimicrobianos transferida por animales productores de alimentos. Disponible en el URL: https://www.who.int/foodsafety/fs_management/No_02_Antimicrobial_Mar08_E S.pdf (Fecha de consulta en Enero de 2019). WHO, World Health Organization (2004). Joint FAO/OIE/WHO Expert Workshop on Non-Human Antimicrobial Usage and Antimicrobial Resistance: scientific assessment: Geneva, December 1-5, 2003 (No. WHO/CDS/CPE/ZFK/2004.7). Yang. H.; Che,n S.; While, D.; Zhao, S.; Mc Dermantt, P.; Walker, R.; Merig, J. (2004). Characterization of multipleantimicrobial- resistant Escherichia coli isolates from diseased chicken and swine in China. Journal of Clinical Microbiology 42, 3483-3489.
Compartir