25 Conf 25 Análisis Químico HPLC II (1)

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Análisis Químico
Cromatografía de Líquidos de Alta Eficacia (HPLC) (Parte 2)
1. Instrumentación básica para HPLC (continuación). 
1.1. Detectores generales
1.2. Detector de espectrómetro de masas (HPLC-MS)
Detectores generales:
UV-VISIBLE:
a)  Fija (210, 254 y 280 nm).
b)  Variable (190 -600 nm).
Ventaja: son muy específicos y sensibles.
MULTIESPECTRAL (DAD):
Mide y almacena los espectros UV (A vs  ) de cada pico o sustancia detectada y los cromatogramas (A vs t).
Ventajas: 
- Se obtiene información estructural.
- Se puede chequear pureza (el DAD analiza tres segmentos del pico y le hace el espectro a cada uno, si los tres espectros obtenidos son similares la sustancia esta pura).
ÍNDICE DE REFRACCIÓN:
Mide cambios del índice de refracción de la fase móvil cuando contiene un soluto eluido. 
Ventaja: 
- Muy generales.
Desventajas: 
- Muy inestable a los cambios de T y P.
- Menos sensible.
FLUORESCENCIA:
Aplicación: Sustancias fluorescentes (Ej. algunas vitaminas) y sustancias con fluorescencia inducida (derivatización pre- o post- columna).
Ventaja: 
- Muy sensibles y específicos.
Desventajas: 
- Se limita a sustancias fluorescentes.
Detector de espectrómetro de masas
Espectro de masas
Espectro de masas
Cromatograma - Espectros de masas
Ventajas de HPLC-MS:
 Mejora de la selectividad 
 Mejora de la sensibilidad
 Multidimensionalidad de los datos
 Mejora la calidad del espectro de masas
 Se evitan pasos on-line:
- Pérdida mínima de muestra
 Reducción del tiempo de análisis
 Se requiere menos cantidad de muestra
¡¡Identificación y determinación de solutos solapados!!
Conclusiones
Muestra
Sistema de
entrada
Sistema de
entrada
Fuente de iones
Fuente de iones
Analizador 
de masas
Analizador 
de masas
Detector
Detector
Procesador 
de la señal
Procesador 
de la señal
Dispositivo 
de lectura
Dispositivo 
de lectura
Sistema 
de vacío
Sistema 
de vacío
10
-5 
-10
-8
torr
Muestra
Sistema de
entrada
Fuente de iones
Analizador 
de masas
Detector
Procesador 
de la señal
Dispositivo 
de lectura
Sistema 
de vacío
10-5 - 10-8 torr