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y se pone en contacto con la membrana donde van a transfe-
rirse los fragmentos. Seguidamente, la membrana se sumer-
ge en una disolución de la sonda radiactiva desnaturalizada,
en condiciones que permitan su hibridación con fragmentos
de secuencia complementaria. Los fragmentos hibridados se
detectan por autorradiografía (exposición de una película de
rayos X a la membrana durante el tiempo adecuado y su
revelado posterior).
Esta técnica también permite detectar cuáles de las dife-
rentes colonias recombinantes que crecen en una placa de
agar poseen un inserto determinado. Para ello, se presiona
suavemente un filtro de nitrocelulosa sobre la placa de agar,
de modo que algunas células de cada colonia se peguen al fil-
tro, formando una réplica de la placa. La réplica se trata con
álcali para romper las células y desnaturalizar el ADN, que
queda unido al filtro, y se incuba después con la sonda
radiactiva. Por autorradiografía, se obtiene una imagen que
permite detectar la posición en la placa de agar de la colonia
o colonias de interés (Fig. 23-4).
Las sondas de ADN también pueden utilizarse para
detectar un ARN mensajero específico, de secuencia com-
plementaria a la de la sonda, dentro de una población de
moléculas de ARNm separadas por electrofóresis. El pro-
ceso, denominado transferencia Northern, es similar a la
transferencia de Southern y resulta muy útil para detectar
cualitativamente la expresión de un gen en una célula o teji-
do determinados, o comparar cuantitativamente los niveles
de ARNm en distintas muestras. Es, por tanto, una herra-
mienta esencial para estudiar el control de la transcripción
de muchos genes. 
De todo ello se desprende que las sondas génicas son
imprescindibles para detectar genes o fragmentos de genes
específicos. Una sonda génica puede consistir en un frag-
mento parcial de un gen, y utilizarse para identificar el gen
completo. También puede tratarse de una molécula de ADN
similar, pero no idéntica, al gen de interés, como un frag-
mento del gen procedente de otra especie filogenéticamente
relacionada. Cuando no se dispone de una sonda génica, pue-
den sintetizarse químicamente pequeñas cadenas de oligonu-
cleótidos cuya secuencia sea complementaria de una parte
concreta del gen. Ello es posible si se conoce la secuencia de
un fragmento peptídico de la proteína codificada por el gen.
De acuerdo con el código genético y su degeneración, se sin-
tetiza el conjunto de secuencias degeneradas, una de las cua-
les corresponde exactamente a la del gen, por lo que hibrida-
rá con el mismo.
Anális is molecular del genoma | 405
Figura 23-2. Separación de fragmentos de ADN mediante electrofóresis en geles de agarosa. En un campo eléctrico, las moléculas de
ADN que portan carga negativa se desplazan hacia el polo positivo en orden inverso a su tamaño molecular. La visualización de los
fragmentos se puede realizar mediante tinción con bromuro de etidio. En el esquema, a la izquierda, se representa la separación de frag-
mentos de tamaños conocidos (marcadores o patrones) que da lugar a una «escalera» con tantos peldaños como fragmentos de tamaño
diferente hay. La separación de un número limitado de fragmentos de una muestra procedente, por ejemplo, de la degradación de un plás-
mido por una enzima de restricción da lugar a una serie de bandas cuyo tamaño se puede calcular mediante comparación con los
patrones. A la derecha se representa el resultado de la separación de los fragmentos generados a partir de una mezcla compleja de
ADN, como el ADN genómico. No se aprecian bandas de fragmentos nítidos debido a la existencia de solapamientos entre miles de
fragmentos de tamaño variable que dan un aspecto de mancha continua o «smear».
origen
Marcadores
de ADN
Fragmentos de ADN
de plásmido
ADN
genómico 1
ADN
genómico 2
Ta
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Gel de agarosa
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