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Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 1 Tema Nº 2 Características comunes a todos los sistemas biológicos La primera impresión que da el mundo de los seres vivos es el de una extraordinaria diversidad. El examen superficial de un mamífero, de una planta o de una bacteria, no sugiere que tengan mucho en común. Sólo cuando se examina el mundo viviente en términos de su organización química y microscópica, se observa que existe una unidad fundamental y común: LA CÉLULA VIVA, posiblemente con un origen común. Todos los seres vivos presentan tres características comunes, a saber: 1. Poseen una misma unidad física: se hallan compuestos de una unidad microscópica: LA CÉLULA. • Una: reciben el nombre de unicelulares. • Muchas: se llaman pluricelulares. El crecimiento no es más que una consecuencia de la división celular y del aumento del número de células. 2. Presentan la misma composición química: En todas las células es invariable la presencia de tres clases de moléculas complejas formadas a partir de una treintena de moléculas sencillas. Estas moléculas complejas son: • El ácido desoxirribonucleico (ADN): que es el portador en forma de código de la información genética requerida para determinar las características específicas del organismo en cuestión. El ADN es el constituyente de los genes. • El ácido ribonucleico (ARN): que es el intermediario en la transmisión de la información contenida en el código genético para la síntesis de las proteínas. • Las proteínas: que son el material plástico que constituye las células e integran a las enzimas, catalizadores de las reacciones bioquímicas que se realizan en la célula. Por esto último, las proteínas son quienes determinan las características de un organismo (“a cada gen una enzima, a cada enzima un gen”). Estudios recientes sobre la composición química de las moléculas más sencillas sugieren que las primeras células que aparecieron sobre la Tierra pueden haber sido constituidas a partir de tan sólo 30 moléculas distintas. Este conjunto de biomoléculas fundamentales comprende: • 5 bases nitrogenadas aromáticas: adenina (A), timina (T), citosina (C), guanina (G) y uracilo (U). que son los constituyentes de unos 1.000 ácidos nucleicos en la Escherichia coli. • 20 aminoácidos: los que forman infinidad de proteínas. Por ejemplo en la Escherichia coli forman unas 3.000 proteínas diferentes. Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 2 • 1 ácido graso: el palmítico. • 2 azúcares: glucosa y ribosa. http://es.wikibooks.org/wiki/Archivo:%C3%81cido_palm%C3%ADtico_zigzag.PNG Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 3 • 1 alcohol nitrogenado: la colina. CH2OH – CH2 – N(CH3)3. • Glicerina: es un alcohol con tres grupos hidroxilos. En la Escherichia coli, se han identificado unos 5.000 compuestos. Aunque no parezcan relacionados entre sí, estos compuestos sí lo están a través de las reacciones enzimáticas del metabolismo. Esto demuestra que la organización molecular de la célula está basada en una simplicidad fundamental: los millares de macromoléculas que la constituyen están hechas de unas pocas moléculas sencillas. Como éstas son las mismas para todas las especies conocidas, podríamos decir que todos los organismos vivos proceden de un solo antepasado común. 3. Realizan ciertas actividades químicas comunes. Éstas reciben en conjunto el nombre de metabolismo. El metabolismo es la utilización de los elementos mediante una compleja pero controlada serie de reacciones químicas con las cuales los seres vivos obtienen energía y sintetizan sus constituyentes. Las células son maquinas isotérmicas, no pueden absorber energía en forma de calor. Por ello la toman del entorno en forma de nutrientes que el metabolismo transforma en constituyentes y en energía en forma de trabajo químico de síntesis de material celular, de trabajo osmótico (transporte de nutrientes a través de membranas celulares) o de calor para mantener la isotermia. * Constituyentes celulares de síntesis AMBIENTE Nutrientes * Trabajo mecánico osmótico calórica (isotermia) * Energía química (compuestos de alta energía) Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 4 METABOLISMO CATABOLISMO ANABOLISMO • Degradador • Oxidante • Generador de energía • Variedad de materias iniciales pero productos finales bien definidos • Sintetizador • Reductor • Consumidor de energía • Materiales iniciales definidos pero gran variedad de productos finales Estas tres propiedades son comunes a las plantas, a los animales y a los microorganismos, dejando de lado sus diferencias de talla, forma y estructura interna. Y es esto lo que confiere a la BIOLOGÍA su unidad como disciplina científica. Existe, sin embargo, una clase de objetos biológicos que no se ajustan a estas propiedades: los virus. Los virus no son organismos sino entidades biológicas con propiedades fundamentalmente distintas, tal como veremos más adelante. La Célula Propiedades fundamentales de la célula Toda célula está formada de dos partes: el núcleo y el citoplasma. El núcleo, rodeado de citoplasma contiene la totalidad del ADN celular o cromosómico y constituye el soporte del código genético, es el centro de información para las síntesis celulares. El citoplasma, contiene lo esencial del ARN, ADN extracromosómico y de las proteínas celulares, es el principal sitio de síntesis y el centro de las principales actividades funcionales. El citoplasma está separado del ambiente por medio de una delicada membrana: la membrana celular. Ésta es un mosaico de lípidos y proteínas que constituye la barrera que deben atravesar los materiales del exterior para penetrar a la célula estando dotada de la propiedad de la semipermeabilidad (deja pasar unas pero otras no). Al mismo tiempo, permite la salida de los productos de desecho del metabolismo conservando en el interior las moléculas esenciales al funcionamiento de la célula. Cuando una célula muere, el carácter semipermeable de la membrana desaparece y los constituyentes celulares pasan al medio exterior; la aparición de este fenómeno es el criterio de lisis (muerte de la célula). El protoplasma es el conjunto formado por el núcleo y el citoplasma. En las plantas y algunos microorganismos, la membrana citoplasmática está rodeada de una membrana más espesa y más rígida y de composición química diferente: la pared celular. Sólo tiene funciones de protecciones mecánica y osmótica, está desprovista de funciones enzimáticas y no desempeña ningún papel en el transporte selectivo de materiales en uno u otro sentido. Las células con pared celular se denominan protoplastos. Origen de las células Toda célula nace de la división de una célula preexistente (reproducción asexual), o en el caso de la reproducción sexual, de la fusión de dos células preexistentes. Tipos de organización celular • El tipo más simple de ser vivo es aquel constituido por una sola célula: organismo unicelular. Como las células son casi siempre microscópicas, estos seres pertenecen a la categoría general de MICROORGANISMOS. Existen, por supuesto, notables diferencias entre los microorganismos unicelulares. Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 5 Éstas están basadas en diferencias de talla, forma y estructura interna. Ejemplos de organismos unicelulares típicos son por ejemplo, los bacilos, las amebas, las levaduras y las algas ciliadas. Figura Nº1: Bacilos Figura Nº2: Ameba Figura Nº3: Levaduras Tema Nº2 Introducción almundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 6 Figura Nº4: Alga ciliada (Phacotus) • El segundo tipo posible es el estado pluricelular originado a partir de una célula. Al estado adulto están formados de numerosas células ligadas entre sí de una forma fija y permanente que hace a la apariencia exterior específica. Si las células son pocas pueden aún guardar un tamaño microscópico (ejemplos, algunas algas y ciertas bacterias) y en este caso se trata de células idénticas dispuestas en filamento unidimensional o de “red” bi o tridimensional. Un ejemplo de organismo pluricelular simple: el alga “Dictyosiphon” (alga marrón). Parece una planta superior pero un corte muestra que no posee ninguna diferenciación celular. Figura Nº5: Dictyosiphon (alga marrón) Las plantas superiores y los animales están en cambio constituidos de regiones tisulares distintas, que difieren entre sí por el tipo de células que las componen. Estos tejidos pueden asociarse en órganos (hígado u hoja por ejemplo) constituidos de tejidos diferentes. Como los organismos pluricelulares superiores también se desarrollan a partir de una célula (el ovulo fecundado) es evidente que el desarrollo va acompañado de diferenciación de los tipos de células. • La organización cenocítica es el tercer tipo posible de organización. Habitualmente decimos que una célula posee un solo núcleo. Los organismos cenocíticos son plurinucleados. Al examen microscópico aparecen constituidos de una gran masa citoplasmática que contiene numerosos núcleos. Esto puede ocurrir de dos formas: o Caso de algunas algas marinas, de los hongos verdaderos (Eumycetes) y de los hongos Myxomycetes: comienzan su vida en estado de célula única que aumenta de talla a medida que se producen numerosas divisiones nucleares. o Caso de ciertos invertebrados, los rotíferos que comienzan con una célula que se divide luego para dar un ser pluricelular banal; cuando se alcanza el estado adulto, desaparecen las membranas celulares limitantes entre las células constitutivas. Ejemplo de organismo cenocítico: Algas verdes Bryopsis Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 7 Bryopsis hypnoides Bryopsis plumosa Figura Nº6: Algas verdes Modos de división celular En todos los organismos, salvo en los cenocíticos, el crecimiento se acompaña de divisiones nucleares seguidas de divisiones celulares. Esto produce un aumento del número de individuos (formas unicelulares) o un número mayor de células de un mismo organismo (formas pluricelulares). Los principales métodos de división celular son: • Escisión binaria: una célula madre se divide en dos células hijas de talla idéntica y con sus mismos elementos (ejemplo: bacterias). • Brotación: sobre la superficie de la célula se produce un brote que aumenta de tamaño progresivamente, luego se divide el núcleo y el núcleo hijo migra al brote; éste se desprende cuando tiene el tamaño de la célula madre (levadura). • Escisión múltiple: una célula madre puede dar cuatro o más células hijas (Ciertas Algas). • Amputación de pequeños fragmentos de citoplasma con uno o varios núcleos: se da en los organismos cenocíticos, es el proceso empleado para formas células de reproducción. Distintos tipos de organismos según sus fuentes de energía Heterótrofos, autótrofos y auxótrofos La energía que produjeron las primeras moléculas orgánicas provino de una variedad de fuentes existentes en la Tierra primitiva y en su atmósfera: calor, radiaciones ultravioletas y perturbaciones eléctricas. Cuando aparecieron las primeras células primitivas, o estructuras semejantes a células, requirieron un aporte continuo de energía para mantenerse, crecer y reproducirse. Los organismos modernos y las células de las cuales están compuestos pueden satisfacer sus requerimientos energéticos en una de dos formas. Los heterótrofos son organismos que dependen de fuentes externas de moléculas orgánicas para obtener su energía y sus moléculas estructurales. Todos los animales y los hongos, así como muchos organismos unicelulares, son heterótrofos. Los autótrofos, por contraste, se "autoalimentan". No requieren moléculas orgánicas procedentes de fuentes externas para obtener su energía o para usarlas como pequeñas moléculas de tipo estructural; en cambio, son capaces de sintetizar sus propias moléculas orgánicas ricas en energía a partir de sustancias inorgánicas simples. La mayoría de los autótrofos, incluyendo las plantas y varios tipos diferentes de organismos unicelulares, realizan fotosíntesis, lo que significa que la fuente de energía para sus reacciones de síntesis es el Sol. Ciertos grupos de bacterias, sin embargo, son Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 8 quimiosintéticas; estos organismos capturan la energía liberada por reacciones inorgánicas específicas para impulsar sus procesos vitales, incluyendo la síntesis de las moléculas orgánicas necesarias. Los seres vivos basan su composición en compuestos en los que el elemento químico definitorio es el carbono (compuestos orgánicos), y los autótrofos obtienen todo el carbono a través de un proceso metabólico de fijación del carbono llamado ciclo de Calvin. Sin embargo se distinguen unos de otros por la fuente de energía que emplean para realizar el trabajo de sintetizar sustancias orgánicas; hay dos clases principales, los fotoautótrofos, que emplean la luz para realizar la fotosíntesis, y los quimioautótrofos, que extraen la energía de reacciones químicas entre sustancias inorgánicas, minerales, en el interior de la tierra o en el fondo del océano. El término autótrofo procede del griego y significa que se alimenta por sí mismo. Los organismos autótrofos producen su masa celular y materia orgánica, a partir del dióxido de carbono, que es inorgánico, como única fuente de carbono, usando la luz o sustancias químicas como fuente de energía. Las plantas y otros organismos que usan la fotosíntesis son fotolitoautotrofos; las bacterias que utilizan la oxidación de compuestos inorgánicos como el anhídrido sulfuroso o compuestos ferrosos como producción de energía se llaman quimiolitotroficos. Los seres autótrofos son una parte esencial en la cadena alimenticia, ya que absorben la energía solar o de fuentes inorgánicas y las convierten en moléculas orgánicas que son utilizadas para desarrollar funciones biológicas como su propio crecimiento celular y la de otros seres vivos llamados heterótrofos que los utilizan como alimento. Los seres heterótrofos como los animales, los hongos, y la mayoría de bacterias y protozoos, dependen de los autótrofos ya que aprovechan su energía y la de la materia que contienen para fabricar moléculas orgánicas complejas. Se llama auxótrofos a aquellos organismos —imperfectamente autótrofos— que sintetizan casi todas sus moléculas a partir de sustancias inorgánicas, pero que necesitan tomar alguna ya hecha de otros seres vivos. Los organismos heterótrofos, en contraste con los organismos autótrofos, son aquellos que deben alimentarse con las sustancias orgánicas sintetizadas por otros organismos, bien autótrofos o bien heterótrofos como ellos. Entre los organismos heterótrofos se encuentra multitud de bacterias y los animales. Según el origen de la energía que utilizan los organismos heterótrofos, pueden dividirse en: -Fotoorganotrofos: estos organismos fijan la energía de la luz. Constituyen un grupo muy reducido de organismos que comprenden la bacterias purpureas y familia de seudomonadales. Sólo realizan la síntesis de energía en presencia de luz y en medios carentes de oxigeno. -Quimioorganotrofos: utilizan la energía química extraída directamente de la materia orgánica. A este grupo pertenecen todos los integrantes del reino animal, todosdel reino de los hongos, gran parte de las móneras (procariotas) y de las arqueobacterias. Los heterótrofos pueden ser de dos tipos fundamentalmente: Consumidores, o bien saprofitos y descomponedores. Los autótrofos y los heterótrofos se necesitan mutuamente para poder existir. Tanto los heterótrofos como los autótrofos parecen estar representados entre los microfósiles más antiguos. Se ha postulado durante largo tiempo que la primera célula viva fue un heterótrofo extremo. Sin embargo, descubrimientos recientes han planteado la posibilidad de que las primeras células hayan sido autótrofas, quimiosintéticas o fotosintéticas antes que heterótrofas. Se han descubierto varios grupos diferentes de bacterias quimiosintéticas que hubieran sido muy adecuadas para las condiciones que prevalecían en la joven Tierra. Algunas de estas bacterias son habitantes de los pantanos, mientras que otras se han encontrado en profundas trincheras oceánicas, en áreas donde los gases escapan por las fisuras de la corteza terrestre. Hay evidencia de que estas bacterias representan los sobrevivientes de grupos muy antiguos de organismos unicelulares. Aunque los biólogos aún no han podido resolver el problema acerca de si las primeras células fueron heterótrofas o autótrofas, es seguro que sin la evolución de los autótrofos la vida en la Tierra pronto habría llegado a su fin. Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 9 En los más de 3.500 millones de años transcurridos desde que apareció la vida, los autótrofos más exitosos (o sea, aquellos que han dejado la mayor cantidad de descendencia y se han diversificado en la mayor variedad de formas) han sido los que desarrollaron un sistema para hacer uso directo de la energía solar en el proceso de fotosíntesis. Con el advenimiento de la fotosíntesis, el flujo de energía en la biosfera asumió su forma dominante moderna: la energía radiante del Sol, canalizada por medio de los autótrofos fotosintéticos pasa a todas las otras formas de vida. Fotolitoautotrofos Autótrofos Quimiolitoautotrofos Seres vivos Auxótrofos Fotoorganotrofos Heterótrofos Quimioorganotrofos Distintos tipos de organismos según sus características Procariotas y eucariotas Todas las células comparten dos características esenciales. La primera es una membrana externa, la membrana celular -o membrana plasmática- que separa el citoplasma de la célula de su ambiente externo. La otra es el material genético -la información hereditaria- que dirige las actividades de una célula y le permite reproducirse y transmitir sus características a la progenie. Existen dos tipos fundamentalmente distintos de células, las procariotas y las eucariotas. En las células procarióticas, el material genético se encuentra en forma de una molécula grande y circular de ADN a la que están débilmente asociadas diversas proteínas. En las células eucarióticas, por el contrario, el ADN es lineal y está fuertemente unido a proteínas especiales. Dentro de la célula eucariótica, el material genético está rodeado por una doble membrana, la envoltura nuclear, que lo separa de los otros contenidos celulares en un núcleo bien definido. En las procariotas, el material genético no está contenido dentro de un núcleo rodeado por una membrana, aunque está ubicado en una región definida llamada nucleoide. En el citoplasma se encuentra una gran variedad de moléculas y complejos moleculares. Por ejemplo, tanto los procariotas como los eucariotas contienen complejos proteicos y de ARN llamados ribosomas que desempeñan una función clave en la unión de los aminoácidos individuales durante la síntesis de proteínas. Las moléculas y complejos moleculares están especializados en determinadas funciones celulares. En las células eucarióticas, estas funciones se llevan a cabo en una gran variedad de estructuras rodeadas por membranas -llamadas organelas- que constituyen distintos compartimientos internos dentro del citoplasma. Entre las organelas se destacan los peroxisomas que realizan diversas funciones metabólicas; las mitocondrias, centrales energéticas de las células y, en las algas y células vegetales, los plástidos como los cloroplastos, donde acontece la fotosíntesis. La membrana celular de los procariotas está rodeada por una pared celular externa que es elaborada por la propia célula. Ciertas células eucarióticas, incluyendo las de las plantas y hongos, tienen una pared celular, aunque su estructura es diferente de la de las paredes celulares procarióticas. Otras células eucarióticas, incluyendo las de nuestros propios cuerpos y las de otros animales, no tienen paredes celulares. Otro rasgo que distingue a los eucariotas de los procariotas es el tamaño: las células eucarióticas habitualmente son de mayor tamaño que las procarióticas. Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 10 En las células eucarióticas, ciertas proteínas se organizan formando intrincadas estructuras que dan lugar a una especie de esqueleto interno, el citoesqueleto, que aporta sostén estructural y posibilita el movimiento celular. Algunos ejemplos de células procariotas son la bacteria Escherichia coli y las cianobacterias, grupo de procariotas fotosintéticos llamadas antes algas azules. Un eucariota fotosintético unicelular es el alga Chlamydomonas. Figura Nº7: Esquema de Escherichia coli. (Procariota) La Escherichia coli es un procariota heterotrófico que resulta ser el más estudiado de todos los organismos vivos. El material genético (ADN) se encuentra en la zona más clara, en el centro de cada célula. Esta región no delimitada por membrana se llama nucleoide. Los pequeños granos del citoplasma son los ribosomas. Las dos células del centro se acaban de dividir y todavía no se han separado completamente. Figura Nº8: Esquema de Chlamydomonas. (Eucariota) La Chlamydomonas, célula eucariótica fotosintética que contiene un núcleo ("verdadero") rodeado por una membrana nuclear doble y otras organelas abundantes. La organela más destacable es el cloroplasto, de forma irregular, que llena casi toda la célula. Está formado por doble membrana y es el lugar donde se realiza la Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 11 fotosíntesis. Otras organelas membranosas son las mitocondrias, que proporcionan energía para el movimiento batiente de los dos flagelos. Estos movimientos propulsan la célula por el agua. Las reservas energéticas de la célula están en forma de granos de almidón, alrededor y dentro de una estructura llamada pirenoide. La membrana plasmática envuelve todo el citoplasma y por fuera hay una pared celular formada por polisacáridos. La comparación entre los dos tipos de células pone de manifiesto la mayor complejidad de las células eucarióticas frente a las procarióticas. Sin embargo, ambas comparten muchas semejanzas en su funcionamiento, lo que no deja dudas acerca de su parentesco. Los científicos han podido establecer que, en algún momento de la historia de la Tierra, diversos tipos de eucariotas se escindieron de un tronco procariótico, formando ramas que evolucionaron de manera independiente. El paso de los procariotas a los primeros eucariotas (los protistas) fue una de las transiciones evolutivas principales sólo precedida en orden de importancia por el origen de la vida. La cuestión de cómo ocurrió esta transición es actualmente objeto de viva discusión. Una hipótesis interesante, que gana creciente aceptación, es que se originaron células de mayor tamaño, y más complejas, cuando ciertos procariotas comenzaron a alojarse en el interior de otras células. La investigadora Lynn Margulis propuso el primer mecanismo para explicar cómo pudo haber ocurrido esta asociación. La llamada"teoría endosimbiótica" (endo significa interno y simbionte se refiere a la relación de beneficio mutuo entre dos organismos) intenta explicar el origen de algunas organelas eucarióticas. Hace aproximadamente 2.500 millones de años, cuando la atmósfera era ya rica en oxígeno como consecuencia de la actividad fotosintética de las cianobacterias, ciertas células procarióticas habrían adquirido la capacidad de utilizar este gas para obtener energía de sus procesos metabólicos. La capacidad de utilizar el oxígeno habría conferido una gran ventaja a estas células aeróbicas, que habrían prosperado y aumentado en número. En algún momento, estos procariotas aeróbicos habrían sido fagocitados por células de mayor tamaño, sin que se produjera una digestión posterior. Algunas de estas asociaciones simbióticas habrían sido favorecidas por la presión selectiva: los pequeños simbiontes aeróbicos habrían hallado nutrientes y protección en las células hospedadoras a la vez que éstas obtenían los beneficios energéticos que el simbionte les confería. Estas nuevas asociaciones pudieron conquistar nuevos ambientes. Así, las células procarióticas, originalmente independientes, se habrían transformado en las actuales mitocondrias, pasando a formar parte de las flamantes células eucarióticas. Investigaciones recientes sugieren que la relación metabólica entre los miembros del par simbiótico podría haber sido diferente de lo postulado por Margulis. En la actualidad, varias líneas de evidencia sustentan la teoría de la endosimbiosis. De forma análoga, se cree que los procariotas fotosintéticos ingeridos por células no fotosintéticas de mayor tamaño fueron los precursores de los cloroplastos. Por medio de la hipótesis endosimbiótica, Margulis también explica el origen de cilias y flagelos por la simbiosis de ciertas células con espiroquetas de vida libre. La mayor complejidad de la célula eucariótica la dotó de un número de ventajas que finalmente posibilitaron la evolución de organismos multicelulares. Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 12 Figura Nº9: Esquema que representa la posible secuencia de eventos que dieron origen a diversas células eucarióticas (Endosimbiosis). Resumiendo las principales características que diferencian a las células Procariotas de las Eucariotas, podemos describirlas en el siguiente cuadro comparativo: PROCARIOTAS EUCARIOTAS ADN localizado en una región: Nucleoide, no rodeada por una membrana. Núcleo rodeado por una membrana. Material genético fragmentado en cromosomas formados por ADN y proteínas. Células pequeñas 1-10 µm Por lo general células grandes, (10-100 µm), Algunos son microbios, la mayoría son organismos grandes. División celular directa, principalmente por fisión binaria. No hay centriolos, huso mitótico ni microtúbulos. División celular por mitosis, presenta huso mitótico, o alguna forma de ordenación de microtúbulos. Sistemas sexuales frecuentes. Alternancia de fases haploides y diploides mediante Meiosis y Fecundación Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 13 Sistemas sexuales escasos, si existe intercambio sexual se da por transferencia de un donador a un receptor. Escasas formas multicelulares. Ausencia de desarrollo de tejidos Los organismos multicelulares muestran desarrollo de tejidos Formas anaerobias estrictas, facultativas, microaerofílicas y aerobias Casi exclusivamente aerobias Ausencia de mitocondrias: las enzimas para la oxidación de moléculas orgánicas están ligadas a las membranas Las enzimas están en las mitocondrias Flagelos simples formados por la proteína flagelina Flagelos compuestos, (9+2) formados por tubulina y otras proteínas En especies fotosintéticas, las enzimas necesarias están ligadas a las membranas. Existencia de fotosíntesis aerobia y anaerobia, con productos finales como azufre, sulfato y Oxígeno Las enzimas para la fotosíntesis se empaquetan en los cloroplastos. Principales divisiones del mundo viviente Cuando se trata de organismos superiores, la diferenciación en dos reinos (Animal y Vegetal) es evidente como lo muestra el siguiente cuadro: Principales diferencias entre plantas y animales superiores PLANTAS ANIMALES Diferencias fisiológicas • Fuente de energía • Clorofila • Reservas nutritivas • Movimiento activo • Fotosíntesis • Presente • Almidón • Ausente • Materiales orgánicos • Ausente • Glicógeno y grasas • Presente Diferencias estructurales • Paredes celulares • Tipo de crecimiento • Presentes • Abierto • Ausentes • Cerrado Los microorganismos no pueden encuadrarse en ninguno de los dos reinos tradicionales. En general, tienen propiedades intermedias (ejemplo: clorofila y movimiento) esto hace pensar que los mismos se han formado antes que surgiesen las plantas y los animales, de acuerdo a la teoría general de la Evolución de Darwin. En 1886, un discípulo de Darwin, el zoologista alemán Haeckel propuso la creación de un tercer reino, el de los PROTISTAS para incluir a los hongos, protozoarios, algas y bacterias. Los protistas son organismos fotosintéticos o no, que se parecen netamente a las plantas o a los animales o bien comparten las propiedades de ambos reinos. Lo que los distingue de todas las plantas y animales superiores es su organización biológica relativamente simple. La mayor parte son unicelulares o cenocíticos y los que son pluricelulares no poseen diferenciación tisular. Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 14 Grupos constituyentes de los tres Reinos Con granos (semillas) Plantas Helechos Musgos, líquenes Pluricelulares con Vertebrados diferenciación tisular Animales Invertebrados Bacterias Inferiores Algas azules y verde- Unicelulares, cenocíticos azules o pluricelulares sin Protistas diferenciación tisular Algas verdes, rojas y pardas Superiores Hongos y levaduras Protozoarios La posición de los microorganismos en el proceso de la evolución Haremos una reseña del proceso evolutivo de los sistemas biológicos para poder comprender la posición de los microorganismos en relación a otros grupos del mundo vivo contemporáneo. La aparición de vida en nuestro planeta admite dos hipótesis: 1. Por infección con organismos o formas orgánicas sencillas procedentes de otros lugares del Cosmos y transportados por meteoritos (recientemente quedó demostrada la presencia de materia orgánica extraterrestre en algunos meteoritos, aunque barreras de radiación y condiciones térmicas extremas induzcan a pensar lo contrario) 2. La vida se originó a partir de materiales no vivientes propios del planeta (evolución química) seguida de una evolución biológica. Esta hipótesis es la más aceptada. Según esta teoría, en los albores de la evolución (hace unos 3.500 millones de años) se produjo una síntesis masiva de materia orgánica a partir de elementos minerales componentes de la atmosfera primitiva que era distinta a la actual (hipótesis formulada en los años 30 por Haldane y el soviético Oparin), de gases como CO2, CH4, NH3, H2O e H2 y por medio de la energía suministrada por los rayos ultravioleta (alta energía y pequeña longitud de onda). Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 15 Posteriormente, 30 años después, Miller colocó estos gases en un tubo de ensayo y haciendo incidir luz ultravioleta durante una semana pudo aislar aminoácidos. Luego, en la década del 70, esta teoría de evolución química fue corroborada: otros investigadores repitieron el ensayo y al someter una mezcla de aminoácidos a descargas de alto voltaje se obtuvieron proteínas.Según la misma teoría (Haldane y Oparin) estos compuestos se habrían acumulado en los océanos para seguir combinándose y formar moléculas cada vez más complejas, algunas de ellas con la capacidad de reproducción. Posteriormente, en los años ochenta L. Coney y G. C. Smith, científicos de la NASA, sostuvieron que la vida no puede haberse originado en los océanos sino en la arcilla debido a que las reacciones orgánicas en cadena necesarias liberan agua y es difícil eliminar agua en medio acuoso. Ya sea en el agua o en la tierra, los primeros seres vivientes se formaron hace unos 3.500 millones de años, eran unicelulares, heterótrofos y anaerobios, es decir, se reproducían a expensas del material orgánico de origen fotoquímico y en ausencia de oxígeno. A medida que esos compuestos orgánicos se consumían, cambiaron las condiciones y la composición de la atmosfera de manera que no fue posible continuar produciéndolos así. Figura Nº10: Experimento de Miller Pero mientras tanto, los organismos vivos habrían desarrollado su propia forma de aprovechar la energía solar: LA FOTOSÍNTESIS que es aún la fuente de vida sobre la Tierra. La aparición de OXÍGENO LIBRE en la atmósfera terrestre da origen a los organismos AEROBIOS. Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 16 Al aparecer los primeros seres unicelulares comienza el proceso de EVOLUCIÓN BIOLÓGICA. De seres unicelulares se forman los pluricelulares, primero simples y luego con diferenciación tisular. Evolución química Luz UV descargas 1 semana eléctricas Haldane Oparin Miller Corroboración Década del 30 Década del 60 posterior al 70: se corrobora teoría de Oparin Cronología de la vida Los primeros organismos fotosintéticos dan origen a los vegetales, primero sin semillas (helechos) y luego con semillas. De animales invertebrados se originan los primeros vertebrados (peces). De los peces a los anfibios, de estos a los reptiles y de ellos por dos líneas distintas a las aves y los mamíferos. Pero las formas de vida primitiva no desaparecieron sino que evolucionaron en otras líneas. Esto explica la complejidad biológica. El conjunto de las acciones vitales de todos los seres vivos sirve para mantener el equilibrio y la armonía mientras continúa una lenta evolución. Es previsible que el ser humano del futuro sea distinto del actual, siempre y cuando sepa preservar el medio ambiente para subsistir: se consumen rápidamente las reservas en oxigeno y combustibles del planeta y se contaminan los ríos y océanos. Cousteau determinó que la actividad biológica en los océanos disminuyo un 30% en 25 años. CO2 CH4 NH3 H2O H2 AMINOÁCIDOS PROTEÍNAS Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 17 Figura Nº11: Cronología de la vida 0 Hombre EVOLUCIÓN BIOLÓGICA 2 Mamíferos 170 Aves 250 Reptiles 350 Peces 500 Primeros animales y plantas terrestres 1.000 Bacterias Aerobias 2.000 Células fotosintéticas 2.500 Primeros seres vivientes: • Unicelulares • Heterótrofos • Anaerobios M ill o n es d e añ o s Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 18 3.500 Síntesis de Materia Orgánica EVOLUCIÓN QUÍMICA 4.500 Formación del planeta Tierra FORMACIÓN DE CAPA ESTABLE Evolución de la Tierra Figura Nº12: Representación del tiempo biológico en horas La figura anterior muestra, condensados en un día, los sucesos más importantes de la historia biológica durante los 4.600 millones de años de la Tierra. La vida aparece relativamente temprano, antes de las 6 de la mañana, en una escala de tiempo de 24 horas. Los primeros seres pluricelulares no surgen hasta bien entrada la tarde, y Homo, el género al cual pertenecemos los humanos, hace su aparición casi al acabar el día, a sólo 30 segundos de medianoche. Los primeros organismos multicelulares hicieron su aparición hace apenas 750 millones de años y se cree que los principales grupos (hongos, plantas y animales) evolucionaron a partir de diferentes tipos de eucariotas unicelulares. Las células de los organismos multicelulares están especializadas para llevar a cabo una función bastante limitada en la vida del organismo. Sin embargo, cada una sigue siendo notablemente una unidad con mantenimiento autónomo. Participación de los microorganismos en los ciclos vitales de la Biosfera La biosfera es la región del planeta donde hay vida y comprende los océanos, hasta 1 ó 2 m de espesor continental y hasta unos 10.000 m de atmósfera. La materia viva es la causante de los mayores cambios geoquímicos. La mayor fuente de energía de estos cambios es el Sol. La energía solar es captada y convertida en energía química por los organismos fotosintéticos. De esta forma estos organismos sintetizan sus componentes orgánicos a partir de compuestos inorgánicos, CO2 y agua (Autótrofos) que participan en el ciclo de MINERALIZACIÓN-DESMINERALIZACIÓN. Sol Minerales muerte muerte Plantas Microorganismos muerte Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 19 Animales Los vegetales son consumidos por microorganismos y animales para construir sus células. El ciclo se cierra cuando el material celular se vuelve a mineralizar. Esta mineralización se puede realizar de tres formas: combustión, actividad respiratoria de los organismos superiores y acción de los microorganismos. Los microorganismos son los de acción más importante debido a su distribución, velocidad de crecimiento y especificidad de acción. El 90% del CO2 y el 80% del O2 de la biosfera provienen de la actividad de ellos. Distribución de los microorganismos y capacidad metabólica Las aguas superficiales y las capas superiores están habitadas por un gran número de microorganismos. A la población propia del agua debe sumarse la que proviene de la contaminación provocada por las actividades del hombre. En una hectárea de tierra fértil de 15 cm de espesor puede haber más de 4 toneladas de microorganismos cuyo potencial metabólico equivale al de unas 50.000 personas. Estos microorganismos pueden ser dispersados por el agua o el viento. Así, la composición de la tierra fértil está sujeta a cambios que dependen del tipo de microorganismos que contenga y de las condiciones ambientales (humedad, temperatura, vientos). La capacidad metabólica por gramo de peso de una bacteria aerobia es varios centenares de veces superior a la del hombre. Esto se debe a dos razones fundamentales: la primera de ellas es la relación superficie-peso. Sea una bacteria cilíndrica de un micrómetro de diámetro, dos micrómetros de longitud y una densidad igual a 1 g/cm3. 2 µm S = 7,85 x 10-7 mm2 V = 1,57 x 10-9 mm3 1 µm 7,8 x 10-7 mm2 1000 g 1 m2 RSP = x x = 496,81 m2/kg 1,57 x 10-9 mm3 x 1 x 10-3 g/mm3 1 kg 1 x 106 mm2 Para un hombre de 80 kg de peso y 2,4 m2 de superficie: RSP = 2,4 m2 / 80 kg = 0,03 m2/kg O sea, para la bacteria la relación es unas 16.560 veces superior y además toda la superficie de la bacteria es activa. La segunda razón es la velocidad de crecimiento, observando los datos del siguiente cuadro: Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 20 Bacterias y levaduras 10 á 120 min Bacterias anaerobias 1 á 5 días Hongos y algas 2 á 6 h Pasturas 1 á 2 semanas Pollos 2 á 4 semanas Ganado 1 á 2 meses Hombre 0,2 á 0,5 años Tiempos de generación o duplicación de masa (θ) Con un tiempo de generación de veinteminutos una bacteria tardaría 24 h en alcanzar una masa equivalente a la de la Tierra, supuesto que las condiciones ambientales fuesen las adecuadas y que el alimento estuviese disponible. Relación de nutrientes Los nutrientes principales que necesitan los microorganismos para llevar a cabo sus actividades metabólicas son, entre otros, C; N y P existiendo entre ellos una relación ideal que es variable según el tipo de microorganismo y el ambiente en que se desarrollan. A modo de ejemplo podemos decir que la relación teórica de nutrientes para la mayoría de microorganismos es: C:N:P = 100:5:1. Para efluentes cloacales: C:N:P = 100:7:5. Para tratamientos anaeróbicos: C:N:P = 100:1,75:0,25. Para lodos activados de mezcla completa: C:N:P = 100:3:0,7 y para aguas residuales domésticas: 100:17:5. Los distintos tipos de tratamientos biológicos los podemos resumir de la siguiente manera: Tratamientos biológicos Anaerobicos Aeróbicos Digestión C6H12O6 = 3CH4 + 3CO2 + e Lodos activados Lagunas de estabilización Ciclos de la materia Los microorganismos intervienen en las transformaciones de los elementos esenciales de la vida C, O, N y S. estos elementos son asimilables sólo en determinado estado químico, por ejemplo, el nitrógeno es el elemento que se halla de mayor proporción en la atmósfera (un 79%) en forma de gas N2 pero la mayor parte de las plantas no lo pueden utilizar si no es como NO3- o sales de NH4+. Ciclos del Carbono y del Oxígeno La fotosíntesis es la actividad biológica más importante de las plantas verdes. Por ella las formas inorgánicas oxidadas del carbono (CO2, CO3-2 y CO3H-) de baja energía se transforman en compuestos orgánicos reducidos de alta energía utilizando la energía solar del espectro visible (entre 400 y 700 nm). Las reacciones generales son: Energía solar 2H2O 4H+ + 4e- + O2 Fotones CO2 + 4H+ + 4e- CH2O + H2O Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 21 CO2 + H2O CH2O + O2 Fotones De esta forma la fotosíntesis de las plantas verdes produce el oxigeno molecular. La posterior oxidación de los compuestos orgánicos producidos por la fotosíntesis va acoplada a la reducción del oxígeno molecular que vuelve a agua. Los medios más directos de realizarlo son la combustión y la respiración. Las mismas plantas verdes y los animales participan de la actividad respiratoria: CH2O + O2 CO2 + H2O + energía Combustión - respiración Pero son los microorganismos quienes oxidan la mayor parte de la materia orgánica ya que estos descomponen no sólo las plantas y animales muertos sino también los excrementos de estos últimos. Así por la fotosíntesis y la respiración las transformaciones cíclicas del carbono y del oxígeno están obligatoriamente ligadas entre sí: RESPIRACIÓN (Combustión) FOTOSÍNTESIS Figura Nº13: Ciclo del carbono y del oxígeno Microorganismos Animales Compuestos orgánicos H2O CO2 CO3-2, CO3H- Sales SOL O2 Plantas Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 22 Para darse cuenta de la importancia del ciclo del carbono basta citar que al ritmo actual de la fotosíntesis bastarían veinte años para agotar completamente el CO2 si no fuese repuesto. El carbono oxidado disponible existe como CO2 atmosférico y como CO3-2 y CO3H- disueltos en el agua superficial. El aire contiene un 3% de CO2 que permanece constante debido al equilibrio entre la actividad fotosintética y la mineralización. En los océanos su concentración permanece en 0,002 M por un equilibrio entre el CO2 de la atmosfera y el CO3H- disuelto: CO2 + 2H2O CO3H- + H3O+ Por la fotosíntesis los océanos captan el CO2 de la atmósfera, la longitud de onda eficaz para lograrlo no supera los 15 m de penetración por lo que las algas activas no proliferan en aguas más profundas. Sobre la superficie las algas microscópicas del mar (fitoplancton) tienen un crecimiento limitado a la disponibilidad de N y P. Estos elementos se lixivian de los continentes como PO4-3 y NO3-. Se calcula en 1,2 x 1010 ton/año el C fijado en los océanos y en 1,6 x 1010 ton/año el que se fija en la tierra. En la tierra la conversión del carbono biológico en CO2 está ligado sobre todo a la actividad microbiana. Es necesario recordar que parte del C biológico que degradan pasa a integrar los compuestos celulares. En aerobiosis esta actividad la realizan las bacterias (Pseudomonas, Bacillus, Actinomycetes y hongos). En anaerobiosis las bacterias metanígenas transforman los compuestos orgánicos en CO2 y CH4. También debe mencionarse que hay retención del carbono: • Inorgánico: en condiciones ligeramente alcalinas el CO3-2 con el Ca+2 forma CO3Ca (origen geológico de las rocas calcáreas) • Orgánico: o Depósitos de protozoarios, corales y moluscos, muertos o fósiles. o Humus o partes de las plantas resistentes a la acción microbiana (lignina, soporte de los tejidos vegetales, compuesto con abundantes radicales “metóxilo”: -CH2OH, CH3O-). o Carbón, petróleo y gas. Ciclo del Carbono El carbono es uno de los principales componentes de la materia viva. Una de las hipótesis para explicar el origen de la vida sobre el planeta, como dijimos anteriormente, está basada en la presencia primitiva de CH4, NH3, H2O e H2. La presencia de CO2 en las aguas superficiales está afectada por la existencia simbiótica de ALGAS y BACTERIAS. Durante el periodo de luz solar brillante (6AM – 6PM), las reacciones fotosintéticas ocurren a la mayor velocidad: el agua se satura de O2 más allá de la capacidad bacteriana para utilizarlo. A su vez, las algas requieren más CO2 que el producido por la respiración bacteriana y emplean el CO3-2 con lo cual se disuelve más CO2, aumentando la alcalinidad bicarbonato. 12 CONCENTRACIÓN DE O2 Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 23 10 8 6 4 2 CONCENTRACIÓN DE CO2 0 N 6AM M 6PM N Figura Nº14: Ciclo del carbono en una laguna de estabilización Durante la noche, tanto bacterias como algas respiran aumentando la concentración de CO2 y la acidez, CO3H2. Esto se esquematiza en el: Ciclo del Oxígeno Intercambio en el agua O2 CO2 O2 CO2 CO2 Disolución en el agua O2 Figura Nº15: Ciclo del oxígeno El tejido algáceo construido por fotosíntesis es metabolizado por organismos mayores que a su vez producen desechos también carbonados. La muerte y descomposición tanto de plantas como animales superiores los transforma en alimento de bacterias que reciclan el carbono como metano (las anaeróbicas) o como dióxido de carbono (las aeróbicas). Las lagunas facultativas son un ejemplo de lo antedicho: Fotosíntesis algácea Atmósfera O2, CO2 Respiración bacteriana O2 Luz Solar Materia orgánica Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 24 Figura Nº16: Simbiosis en una laguna de estabilización Como estudiaremos luego, la solubilidad del oxígeno es una función no sólo de la temperatura sino de la presión atmosférica del lugar. Prácticamente todas las aguas naturales tienen un pH entre 6 y 8,2, caracterizado por el siguiente equilibrio: CO3H- CO3-2. Si el pH excede de 8,2 y la alcalinidad carbonato aparece, se restablece el equilibrio mediante la adición de CO2 procedente de la atmósfera o de la respiración de los organismos acuáticos, este efecto tampón puede alterarse por la descarga de desechos industriales. Ciclo del Carbono Productos de desecho y muerte digestión anaerobiaDigestión Descomposición y muerte digestión aerobia oxidación respiración Respiración combustión completa oxidación Fotosíntesis vegetal directa alcalina Metabolismo animal Metabolismo vegetal Hidratos de Carbono, (CH2O)n Dominio iónico CO3H- CO3-2 Carbono C0 Dióxido de Carbono, CO2, C+4 Monóxido de Carbono CO, C+2 Metano CH4 Compuestos orgánicos de C+4 Fase anaeróbica Algas Simbiosis Fase aeróbica Bacterias aerobias Algas muertas Bacterias muertas CO2 Microorganismos anaerobios Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 25 neutralización Fotosíntesis indirecta ácida Figura Nº17: Ciclo del carbono Ciclo del Nitrógeno El N es el constituyente principal de la atmósfera pero la molécula N2 es extremadamente inerte y no constituye una fuente de N para la mayor parte de los seres vivos. Casi todas las plantas superiores, los animales y los microorganismos dependen de N combinado para su nutrición. El N combinado como NH3, NO3- o compuestos orgánicos es raro en el suelo y en el agua y su concentración es un factor limitante para el desarrollo de los seres vivos. El ciclo del nitrógeno es de gran importancia sobre la biosfera y comprende las siguientes etapas: • Asimilación del N combinado por las plantas: las plantas verdes asimilan el nitrógeno en forma de nitrato y de amoníaco. No hay excreción de compuestos nitrogenados: la asimilación de NO3- y NH3 se realiza en la medida en que sea necesario. • Transformación de N orgánico y formación de amoníaco: los compuestos orgánicos del N sintetizados por las plantas sirven de alimento a los animales. Una parte de este nitrógeno permanece como constituyente animal y parte es excretada: los invertebrados en forma de amoníaco, reptiles y aves como ácido úrico y mamíferos como urea. La urea y el ácido úrico son rápidamente mineralizados por grupos especializados de microorganismos. Urea Ácido úrico + H2O 2NH3 + CO2 Cuando una planta o un animal muere sus constituyentes son inmediatamente atacados por los microorganismos: parte del N es asimilado y parte liberado en forma de NH3. En anaerobiosis las proteínas se pudren y parte del N se convierte en compuestos de olor nauseabundo. • Nitrificación: las plantas corrientemente asimilan el N no en la forma reducida NH3 sino en la forma más oxidada, es decir, como NO3-. La conversión de NH3 a NO3- se realiza en dos etapas merced a dos grupos de microorganismos altamente especializados: a) de NH3 a NO2- mediante Nitrosomonas sp. b) de NO2- a NO3- mediante Nitrobacter sp. • Desnitrificación y fijación de nitrógeno: hay numerosas bacterias que pueden utilizar el NO3- como aceptor final de H2 en lugar de O2 entre otros el Micrococcus denitrificans (también con el NO2-) y el Thiobacillus denitrificans: 2NO3- + 12H+ + 10 e- N2 + 6H2O Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 26 A causa de la denitrificación el suelo es despojado de nitrógeno. Algunos hombres de ciencia piensan que este es el origen del nitrógeno atmosférico. Si no hubiese forma de recuperar este N las bacterias denitrificantes lo habrían eliminado completamente y no sería posible la vida. Aunque el N es químicamente inerte para la mayor parte de los microorganismos hay microorganismos fijadores de nitrógeno que con su crecimiento compensan aquellas pérdidas. Hay dos tipos de fijación de N: o Fijación simbiótica: es el resultado de la asociación entre las leguminosas (poroto, haba, arveja, trébol, soja, alfalfa, etc.) y un género especial, RHIZOBIUM. Los Rhizobium forman nódulos en las raíces que presentan un color rosado debido a la presencia de hemoglobina. El mecanismo bioquímico de la simbiosis es desconocido. Existe un grado considerable de especificidad anfitrión- huésped. La simbiosis (del griego “simbiosis”, vida en común, ejemplo: el liquen es la simbiosis entre algas y hongos) es una situación de convivencia de la cual tanto uno como el otro simbionte sacan provecho de la situación. En este caso, la bacteria suministra nitrógeno a la planta en forma de sales solubles en tanto que ésta le proporciona energía en forma de otros compuestos nutritivos y un entorno favorable para su crecimiento. Adelantándonos, diremos que los genes responsables de la síntesis de enzimas necesarias a la fijación de nitrógeno atmosférico por el Rhizobium son diecisiete. Las nuevas técnicas de la Biotecnología estudian las formas de poder transferir estos genes a otros vegetales que no los poseen, en particular al trigo, al maíz y al arroz. A la fecha, se ha conseguido insertar estos genes en cromosomas de levadura Saccharomyces capaz de vivir en ausencia de oxígeno pues los investigadores han determinado que el microclima favorable creado por la planta para atraer a las bacterias consiste fundamentalmente en sintetizar una enzima que elimina el oxigeno. La ausencia de oxigeno favorece la fijación del nitrógeno. Aunque no se haya logrado la expresión de estos genes en la levadura, si de ésta se vuelven a transferir a células bacterianas de las que se han extraído, las mismas recuperan la aptitud perdida. Sin embargo, estos estudios posibilitarán que en un futuro no lejano, los diecisiete genes puedan incorporarse al genoma de la planta. o Fijación de N no simbiótica: hay ciertos microorganismos capaces de utilizar el N2 molecular como fuente de N: algunas algas azules, los del género Azotobacter, algunos de los Clostridium, algunas bacterias reductoras de SO4-2 del genero Desulfovibrio e inclusive el Enterobacter. El descubrimiento más importante relativo a la fertilidad del suelo es que Azotobacter exige la presencia de Molibdeno en concentraciones de 10-9 Molar (PM: 96). Así, suelos pobres de Australia han sido fertilizados agregando algunas decenas de gramos de Mo por hectárea. Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 27 Figura Nº18: Ciclo del Nitrógeno En el cuadro siguiente se presentan los organismos fijadores de nitrógeno. Éstos incluyen bacterias y el alga verde-azulada Anabaena azollae que vive en las hojas verdes de la azolla, vegetal acuático como el arroz, fertilizando este tipo de cultivo. Organismos con vida libre Fijadores de Nitrógeno Clostridium pasterianum Klebisella pneumoniae Azotobacter vinelandii Rhodospirillum rubrum Algas azules (fotosintéticas) Organismos asociados Ninguno Libre en el suelo, asociada al hombre y a las plantas Ninguno Ninguno Ninguno Hábitat Suelos anaeróbicos Suelos en condiciones casi anaeróbicas Suelos aeróbicos Aguas estancadas con escaso oxígeno Lagunas de estabilización Organismos en simbiosis Fijadores de Nitrógeno Anabaena azollae Nostoc muscorum Actinomycetes Azospirillum lipoferum Rhizobium trifolii japonicum phaseoli Organismo asociado Azolla (vegetal) Gunnera macrophylla (vegetal) Casuarina Digitaria. Cereales Trébol Soja Haba Hábitat En los huecos de sus hojas En los tallos raíces En asociación en las raíces En los nódulos radiculares Organismos fijadores de Nitrógeno Ciclo del Azufre En la materia viva el azufre está siempre en forma reducida. El azufre reducido a SH2 aparece en la biosfera como consecuencia de la actividad volcánica. El SH2 es rápida y espontáneamente oxidado. Las plantas aprovechan directamente SO4-2. - Asimilación del Sulfato: microorganismos y plantas verdes asimilan SO4-2 reduciéndolo para incorporarlo a la materia celular, como tiol (SH-) por ejemplo. Sólo se asimila lo justo y ningún producto reducido de azufre es excretado. Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo vivienteBiotecnología 28 - Transformación de compuestos orgánicos azufrados y formación de SH2: los compuestos de azufre reducido sintetizados por las plantas sirven de alimento a los animales y a los microorganismos. Cuando estos mueren el azufre se libera como SH2 por acción de los microorganismos. - Formación directa de SH2 a partir de SO4-2: el SH2 puede ser directamente producido a partir de SO4-2 por bacterias de los géneros Desulfovibrio y Clostridium (bacterias sulforreductoras) en anaerobiosis estricta. Los barros donde se produce esta actividad tienen un olor fétido a SH2 y color negro por acumulación de SFe. Algunas zonas costeras contaminadas se encuentran en condiciones de anaerobiosis y esta actividad con formación de SH2, muy toxico, es sumamente perjudicial a la vida acuática. - Oxidación de SH2 y del azufre: la oxidación de SH2 a S0 o SO4-2 es realizado por las sulfobacterias fotosintéticas de SH2 a S0 por acción, entre otras, de los géneros Thiocystis, Thiodycton, Thiopedia, Lamprocystis, Chromatium, Beggiatoa y Thiothrix: CO2 + 2SH2 CH2O + H2O + 2S - Oxidacion de SH2 y sulfuros a SO4-2: es efectuada por bacterias del género Thiobacillus y la inversa por las del género Desulfovibrio. Sulfobacterias fotosintéticas: Thiocystis, Thiodycton, Thiopedia, Lamprocystis, Chromatium, Beggiatoa, Thiothrix, etc. CO2 + 2SH2 CH2O + H2O + 2S Thiobacillus: 3CO2 + 2S0 + 5H2O 3CH2O + 4H+ + 2SO4-2 Desulfovibrio y bacterias sulfurreductoras (BSR): SO4-2 S-2 SH2 El compuesto DMS es disulfuro de metilo y se forma por la descomposición enzimática de dimetilsulfoniopropionato (DMSP), un compuesto orgánico muy abundante en los océanos que funciona como una especie de regulador osmótico de las algas unicelulares, generalmente individuos de la División Haptophyta, como ocurre con Emiliania husleyi. Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 29 Figura Nº19: Ciclo del Azufre Ciclo del Fósforo El P se encuentra como PO4-3 en algunos minerales como la apatita. Su presencia en el agua se debe a la descarga de detergentes, fertilizantes y materia fecal. El aporte de P favorece el crecimiento de las algas y termina produciendo el fenómeno de EUTROFICACIÓN. 100 10 1 0,1 1 10 100 1000 Figura Nº20: Eutroficación de un cuerpo de agua MESOTRÓFICA OLIGOTRÓFICA EUTRÓFICA P [g/m3 año] Profundidad media (m)/ tiempo de retención hidráulica (años) Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 30 El término eutroficación, designa el enriquecimiento en nutrientes de un ecosistema. El uso más extendido se refiere específicamente al aporte más o menos masivo de nutrientes inorgánicos en un ecosistema acuático. Eutrofo se llama a un ecosistema o un ambiente caracterizado por una abundancia anormalmente alta de nutrientes (ver gráfico de la página anterior). La causa de la eutroficación es siempre una aportación de elementos nutritivos de muy diversa procedencia (residuos urbanos, industriales, agrícolas,…). De estos nutrientes, los más efectivos son aquellos para los que existe una limitación natural, principalmente, el nitrógeno y el fósforo. El primer elemento puede ser extraído de la atmósfera por determinados microorganismos quedando en último término el fósforo como principal elemento limitante del proceso. Por norma general, suele encontrarse en las masas de agua unas proporciones estables entre los nutrientes. De esta manera, suele aceptarse que la relación entre el carbono, el nitrógeno y el fósforo en estos sistemas cumple estas proporciones: 100:15:1 (C:N:P). Esto quiere decir, que por cada unidad de fósforo en las masas de agua, existen quince unidades de nitrógeno disponibles, y son cien las unidades de carbono que están presentes en el medio. De este razonamiento encontramos que el fósforo se constituye como el elemento limitante en los procesos de producción primaria. Cuando se agota todo el fósforo de la masa de agua, los demás elementos se encuentran en exceso. Todo nuevo aporte de fósforo al medio va a permitir un nuevo crecimiento vegetal. En los últimos años las concentraciones de nitrógeno y fósforo en muchos lagos y mares casi se han duplicado. La mayor parte les llega por los ríos. En el caso del nitrógeno, una elevada proporción (alrededor del 30%) llega a través de la contaminación atmosférica. El nitrógeno es más móvil que el fósforo y puede ser lavado a través del suelo o saltar al aire por evaporación del amoníaco o desnitrificación. El fósforo es absorbido con más facilidad por las partículas del suelo y es arrastrado por la erosión o disuelto por las aguas de escorrentía superficiales. Cuando el aporte de fósforo es alarmante se produce la acumulación de este elemento dentro de las algas que lo utilizarán posteriormente para multiplicarse, produciéndose una proliferación vegetal excesiva. Este efecto condiciona, además, que el fósforo deje de ser el factor limitante pasando a serlo el nitrógeno, lo que provoca la aparición de algas cianofíceas en superficie capaces de fijar dicho elemento a partir del aire atmosférico. Cuando se da la proliferación de algas, llega un momento en el que el sistema se colapsa y no quedan nutrientes disponibles para que las algas sigan desarrollándose. A este hecho hay que unir la proliferación en superficie de las cianofíceas, creando una capa superficial que impide la penetración natural de luz y el intercambio de oxígeno con la atmósfera. De esta forma, estos organismos no pueden seguir viviendo y mueren. El agua se vuelve turbia y verdosa, y aparecen bacterias aerobias que consumen el oxígeno de las aguas para oxidar la materia orgánica, la materia vegetal. Esto conlleva una disminución alarmante de los niveles de oxígeno disuelto en el sistema acuático y por lo tanto, la muerte de otros seres vivos, como los peces, por asfixia. Se llega, por tanto, a condiciones anaerobias y se desarrollan procesos fermentativos de los cuales se origina SH2 (sulfhídrico) y NH3 (amoníaco), responsables de mal olor en estos sistemas acuáticos. Los principales efectos que pueden evidenciarse en las masas de agua que se ven afectadas por el fenómeno de la eutroficación son: • Aumento de la producción y biomasa de los productores primarios (fitoplancton y macrófitas). • Modificación de las características de la masa de agua conllevando una pérdida de calidad de la misma, al no poderse destinar para el uso normal al que estaba destinada. • Sustitución de especies piscícolas deseables por otras menos cotizadas. • Producción de toxinas por determinadas algas (dinoflagelados-mareas rojas). • Desoxigenación del agua, ocasionando normalmente mortandad de peces. • Aumento de los gastos de operación de los sistemas públicos de abastecimiento de agua por problemas de sabor y olor. Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 31 • Colmatación y obstrucción de los canales de riego por las malas hierbas acuáticas. • Reducción de la posibilidad de utilización del agua para fines recreativos debido a los olores producidos por la descomposición de las algas. • Impedimentos a la navegación debido al crecimiento de densas masas de algas. • Pérdidas económicas debidas a la modificación de las especies piscícolas. Figura Nº21: Ciclo del Fósforo El ciclo del fósforo es un ciclo biogeoquímico, describe el movimiento de este elemento en su circulación en el ecosistema. Los seres vivos toman el fósforo, P, en forma de fosfatos a partir de las rocas fosfatadas, que mediante meteorización se descomponen y liberan los fosfatos. Éstos pasan a los vegetales por el suelo y, seguidamente, pasan a los animales. Cuando éstos excretan, los descomponedoresactúan volviendo a producir fosfatos. Una parte de estos fosfatos son arrastrados por las aguas al mar, en el cual lo toman las algas, peces y aves marinas, las cuales producen guano, el cual se usa como abono en la agricultura ya que libera grandes cantidades de fosfatos; los restos de las algas, peces y los esqueletos de los animales marinos dan lugar en el fondo del mar a rocas fosfatadas, que afloran por movimientos orogénicos. De las rocas se libera fósforo y en el suelo, donde es utilizado por las plantas para realizar sus funciones vitales. Los animales obtienen fósforo al alimentarse de las plantas o de otros animales que hayan ingerido. En la descomposición bacteriana de los cadáveres, el fósforo se libera en forma de ortofosfatos (PO4 H3) que pueden ser utilizados directamente por los vegetales verdes, formando fosfato orgánico (biomasa vegetal), la lluvia puede transportar este fosfato a los mantos acuíferos o a los océanos. El ciclo del fósforo difiere con respecto al del carbono, nitrógeno y azufre en un aspecto principal. El fósforo no forma compuestos volátiles que le permitan Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 32 pasar de los océanos a la atmósfera y desde allí retornar a tierra firme. Una vez en el mar, solo existen dos mecanismos para el reciclaje del fósforo desde el océano hacia los ecosistemas terrestres. Uno es mediante las aves marinas que recogen el fósforo que pasa a través de las cadenas alimentarias marinas y que pueden devolverlo a la tierra firme en sus excrementos. Además de la actividad de estos animales, hay la posibilidad del levantamiento geológico de los sedimentos del océano hacia tierra firme, un proceso medido en miles de años. El hombre también moviliza el fósforo cuando explota rocas que contienen fosfato. La proporción de fósforo en la materia viva es relativamente pequeña, pero el papel que desempeña es vital. Es componente de los ácidos nucleicos como el ADN. Muchas sustancias intermedias en la fotosíntesis y en la respiración celular están combinadas con el fósforo, y los átomos de fósforo proporcionan la base para la formación de los enlaces de alto contenido de energía del ATP, se encuentra también en los huesos y los dientes de animales, incluyendo al ser humano. La mayor reserva de fósforo está en la corteza terrestre y en los depósitos de rocas marinas. La disponibilidad de P, como formas solubles es función del pH del agua: 100 80 60 40 20 0 5 6 7 8 9 10 11 Figura Nº22: Fracción molar de compuestos fosforados en función del pH Algunas aplicaciones de los ciclos de la materia 1- Viajes interplanetarios: En estas naves se plantea el problema de hacer un ciclo completo de la materia ya que es necesario evacuar permanentemente el CO2 y por otra parte asegurar la alimentación. El CO2 y el H2O junto a la luz proveniente del Sol o las estrellas sirven a las algas fotosintéticas, éstas, a su vez, de alimento. Los excrementos y residuos van al medio de cultivo para algas. La energía necesaria a partir de pilas solares. 2- Uso industrial de la fotosíntesis; producción de algas como fuente de proteínas: La utilización de algas como fuente de proteínas directa para el hombre (contienen hasta 50% de materia seca) no es aún aconsejable (por cuestiones culturales, sabor y aspecto y costo económico para cambiarlos). Son poco digeribles debido a la existencia de paredes celulares (celulosa y hemicelulosa) resistentes a la acción de las enzimas. Trabajos posteriores han demostrado la conveniencia de emplearlos en la alimentación de rumiantes como los bovinos ya que los microorganismos de sus rúmenes pueden degradar las paredes celulares. En estas condiciones el costo de producción es pequeño y la productividad elevada (como se observa en el cuadro siguiente). Puede utilizarse CO2 ex−combustión pH alcalino (8,5 – 11) para que el CO3H- asegure el tenor en CO2 independientemente de la presión parcial. 1 g/l de materia celular seca requiere: 0,4 g de Carbono, 0,1 g de Nitrógeno y 0,01 g de Fósforo. El rendimiento de conversión de la energía luminosa: 4% (débil). Por ello la profundidad no debe ser mayor de 20 cm (el crecimiento produce turbidez). Fracción molar PO4H-2 PO4H2- PO4-3 pH Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 33 Fuente de proteínas Rendimiento en proteínas [kg/ha año] Temperatura de crecimiento [ºC] Proteína bovina obtenida [kg/ha año] Pastura natural 670 60 Spirulina platensis 24.300 27 2.180 Chlorella pyrenoidosa 44.700 30 4.030 3- Fertilización de suelos: Si por acción de Azotobacter la incorporación de N atmosférico puede llegar a los 170 kg/ha/año por acción de Rhizobium se llega, para el caso de la alfalfa, hasta 500 kg/ha/año y para la soja hasta 200 kg/ha/año. (100 kg de SO4(NH4)2 21 kg de N). 1 kg de inoculante para soja alcanza para 220 kg de semilla. Este inoculante está constituido de un material de soporte (por ejemplo aserrín) y contiene 1,5 x 109 bacterias/g. su producción industrial en tanque agitado es promisoria en nuestro país. Medio y condiciones de cultivo son objeto de patentes de invención. Un medio apropiado para el aislamiento y cultivo en cajas de Petri es el siguiente: ClNa 0,2 g PO4H(NH4)2 0,5 g SO4Mg 0,3 g SO4Ca 0,1 g CO3Ca 0,1 g Manitol 10 g Agua de levaduras 100 ml * Agar 20 g Agua destilada 900 ml *10 g de pan de levadura en 90 ml de agua destilada se autoclavan 30 min a 120ºC y se filtra. 4- USOS Y PERJUICIOS: BACTERIAS DEL AZUFRE: Lixiviación bacteriana: En los Estados Unidos de América hay al menos dos minas que se sirven de estas bacterias: una se halla en Nuevo México (Santa Rita) y otra en Utah (Bingham Canyon). Figura Nº23: Biolixiviación de minerales Se hace una lixiviación bacteriana de minerales pobres de Cobre y Uranio como por ejemplo las piritas. Este procedimiento, al parecer se remontaría a la época de los romanos. Las bacterias pertenecientes a los géneros Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 34 Thiobacillus thiooxidans (resiste hasta 1 N de SO4H2) y Thiobacillus ferooxidans (resiste elevadas concentraciones de Cu y de Fe), en primer lugar realizan la reacción: 8Fe+2 – 8 e- 8Fe+3 Y oxidan la pirita: S-2 + 4H2O + 8 e- SO4-2 + 8H+ Se mantiene una elevada acidez. El SCu insoluble pasa a SO4Cu soluble y de éste, el Cu u otros minerales como el Uranio, se separan por electrólisis. Participan hasta 106 bacterias por gramo de mena. Los genetistas trabajan para aumentar la resistencia de las bacterias a la alta acidez y alta toxicidad de los metales. Los principales mecanismos involucrados en el proceso de lixiviación bacteriana son: directa e indirecta. a.- Lixiviación Indirecta: Dos reacciones importantes mediadas por Thiobacillus ferrooxidans son: Pirita S2Fe + 3,5 O2 + H2O SO4Fe + SO4H2 (1) 2SO4Fe + 0,5 O2 + SO4 H2 (SO4)3 Fe2 + H2O (2) El sulfato férrico es un oxidante fuerte capaz de disolver una amplia variedad de minerales sulfurados. La lixiviación con (SO4)3 Fe2 recibe el nombre de lixiviación indirecta porque se realiza en ausencia de oxígeno o de bacterias y, es responsable de la disolución o lixiviación de varios minerales sulfurados de cobre de importancia económica: Calcopirita S2CuFe+ 2(SO4)3 Fe2 SO4Cu + 5SO4Fe + 2 Sº (3) Calcocita SCu2 + 2(SO4)3Fe2 2SO4Cu + 4 SO4Fe + 2 Sº (4) El mecanismo de lixiviación indirecta depende de la regeneración biológica del sulfato férrico (reacción 2). El azufre (Sº) generado en las reacciones 3 y 4 puede ser convertido en ácido sulfúrico (SO4H2) por Thiobacillus ferrooxidans según: 2 Sº + 3O2 + 2 H2O 2 SO4H2 (5) Este ácidosulfúrico, así generado, mantiene el pH del sistema a niveles favorables para el desarrollo de la bacteria. b.- Lixiviación Directa: Las bacterias ferrooxidantes también pueden lixiviar sulfuros metálicos directamente sin la participación del sulfato férrico producido biológicamente. El proceso se describe en la siguiente reacción: SM + 2 O2 SO4M (6) donde M representa un metal bivalente. bacteria Pirita 2S2Fe + H2O + 7,5 O2 (SO4)3Fe2 + SO4H2 (7) bacteria Calcopirita 2 S2CuFe + 8,5 O2 + SO4H2 2SO4Cu + (SO4)3Fe2+ H2O (8) Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 35 Figura Nº24: Mecanismos directo e indirecto de la acción bacteriana Corrosión microbiológica: Consiste en el ataque microbiano sobre un conducto con líquido que contiene partículas que sedimentan. Si se trata de un conducto de asbesto-cemento como los desagües cloacales antiguos, los iones SO4-2 pueden provenir del barro que se deposita en el fondo del conducto o bien del material mismo de la conducción. Las bacterias sulforreductoras como por ejemplo desulfovibrio, transforman estos sulfatos en SH2, que al pasar a estado gaseoso se desprende y atraviesa el líquido. En los puntos indicados en el esquema se forman condensaciones, es decir, en la parte superior y en las interfases líquido-aire. El SH2 aquí depositado por medio de bacterias como desulfovibrio es oxidado a SO4H2, produciendo puntos de corrosión que atacan el material, debilitándolo al extremo de producir su rotura en esos puntos, asimismo, en la base del conducto el SO4H2 lo corroe produciendo en muchas ocasiones su colapso. El siguiente esquema describe esta situación: Figura Nº25: Corrosión de tubos cloacales de fibrocemento Los microorganismos tienen la capacidad de modificar por diferentes acciones bioquímicas la estructura fisicoquímica de la materia. Las aleaciones fueron diseñadas para tolerar la acción microbiológica de transformación fisicoquímica. Sin embargo, los microorganismos estimulados por el ambiente pueden desestabilizar la aleación debido a los diversos mecanismos bioquímicos que poseen para ello. En un conducto de la industria petrolera generalmente circulan los fluidos a alta presión, lo que haría imposible el desarrollo de los microorganismos, sin embargo, al formarse depósitos de sedimentos éstos sirven como protección ante las difíciles condiciones de vida. Las bacterias se desarrollan entre el metal y los sedimentos y comienzan a crecer, actúan anaerobias como las del género Desulfovibrio que transforman los sulfatos en SH2, luego actúan las bacterias del género Thiobacillus que transforman el SH2 en SO4H2, que es el principal responsable Desulfovibrio Tema Nº2 Introducción al mundo de los seres vivos – Divisiones del mundo viviente Biotecnología 36 de la corrosión del conducto (proceso llamado pitting). Actualmente este problema puede solucionarse inyectando en la tubería productos llamados biocidas que impiden el desarrollo de estos molestos microorganismos, el inconveniente es que aumenta el costo de la explotación y el agua sobrante de este uso (generalmente para la recuperación secundaria de petróleo), al ser volcada al terreno destruye los microorganismos del suelo que sirven para degradar los contaminantes que arrastra, como por ejemplo los restos de petróleo.